PROPOSAL PENELITIAN

EFEK PENCEGAHAN EKSTRAK ETANOL DAUN SELEDRI (Apium

graveolens L.) TERHADAP KADAR TRIGLISERIDA (TG) TIKUS
WISTAR (Rattus norvegicus) YANG DIINDUKSI DIET TINGGI LEMAK

HIVANKATIC HIDEKI

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SURABAYA
2023

i
 PROPOSAL PENELITIAN

EFEK PENCEGAHAN EKSTRAK ETANOL DAUN SELEDRI (Apium

graveolens L.) TERHADAP KADAR TRIGISERIDA (TG) TIKUS WISTAR
(Rattus norvegicus) YANG DIINDUKSI DIET TINGGI LEMAK

HIVANKATIC HIDEKI
190118035

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SURABAYA
2023

ii
 LEMBAR PERSETUJUAN

MATERI PROPOSAL TELAH DISETUJUI

UNTUK DILAKSANAKAN SEMINAR PROPOSAL

Oleh:

Dosen Pembimbing I Dosen Pembimbing II

dr. Dita Sukmaya Prawitasari, M.Si. dr. Devitya Angielevi Sukarno, M.Si.
NPK 216048 NPK 216047

etahui,

kan I

dr. Risma Ikawaty, Ph.D.

NPK 218015

iii
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas

berkat dan anugerahNya, penulis dapat menyelesaikan penyusunan Proposal

Skripsi yang berjudul “Efek Pencegahan Ekstrak Etanol Daun Seledri (Apium

graveolens L.) terhadap Trigliserida (TG) Tikus Wistar (Rattus norvegicus) yang

Diinduksi Diet Tinggi Lemak”.

Penulis dapat menyelesaikan penyusuan Proposal Skripsi ini juga berkat

dari bantuan, bimbingan, dan dukungan dari dr. Dita Sukmaya Prawitasari, M.Si.

dan dr. Devitya Angielevi, M.Si. selaku pembimbing penulis serta semua pihak di

kehidupan penulis yang memberikan dukungan tanpa henti. Oleh karena itu,

penulis ingin mengucapkan terimakasih sebesar-besarnya kepada:

1. Dr. Ir. Benny Lianto, M.M.B.A.T, selaku Rektor Universitas Surabaya.

2. Prof. Dr. dr. Rochmad Romdoni, Sp.PD., Sp.JP(K)., FIHA., FAsCC., FACC

selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Surabaya, dr. Risma Ikawaty,

Ph.D. selaku Wakil Dekan 1 Fakultas Kedokteran Universitas Surabaya dan dr.

Sawitri Boengas, Sp.M. selaku Wakil Dekan 2 Fakultas Kedokteran

Universitas Surabaya.

3. dr. Dita Sukmaya Prawitasari, M.Si. selaku dosen Pembimbing I yang

memberikan bimbingan, ilmu, saran, dan arahan dalam penyusunan proposal.

4. dr. Devitya Angielevi Sukarno, M.Si. selaku dosen Pembimbing II yang

memberikan bimbingan, ilmu, saran, dan arahan dalam penyusunan proposal.

5. dr. Jefman Efendi Marzuki HY, Sp.F.K. selaku penanggung jawab tugas akhir

yang membantu penulis dalam pengurusan tugas akhir.

iv
6. Seluruh dosen dan staff Fakultas Kedokteran Universitas Surabaya yang terlah

berbagi ilmu dan membantu penulis sehingga dapat menyelesaikann proposal.

7. Kedua orang tua dan adik penulis yang memberikan semangat, bantuan, dan

mendoakan selama proses perkuliahan dan penyusunan proposal

8. Teman-teman Fakultas Kedokteran yang selalu memberi dukungan dalam

proses perkuliahan dan penyusnan proposal

9. Diri saya sendiri yang selalu berusaha dan tidak menyerah dalam proses

perkuliahan dan penyusunan proposal.

Penulis menyadari bahwa proposal penelitian ini tidak sempurna. Oleh

karena itu penulis menerima kritik dan saran membangun untuk membuat proposal

menjadi lebih baik. Akhir kata penulis berharap proposal ini dapat berguna dan

bermanfaat bagi pembaca.

Surabaya, 7 September 2023

Penulis

v
 DAFTAR ISI

LEMBAR PERSETUJUAN ................................................................................ iii

KATA PENGANTAR .......................................................................................... iv
DAFTAR ISI ......................................................................................................... vi
DAFTAR TABEL ................................................................................................ ix
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. x
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xi
DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH ......................................................... xii
BAB 1 PENDAHULUAN ..................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ..................................................................................... 1
1.2 Rumusan Masalah ................................................................................ 3
1.3 Tujuan Penelitian.................................................................................. 3
1.3.1 Tujuan Umum ............................................................................. 3
1.3.2 Tujuan Khusus ............................................................................ 4
1.4 Manfaat Penelitian................................................................................ 4
1.4.1 Manfaat Bagi Peneliti ................................................................. 4
1.4.2 Manfaat Umum ........................................................................... 4
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................ 5
2.1 Dislipidemia ......................................................................................... 5
2.1.1 Definisi ....................................................................................... 5
2.1.2 Patofisiologi ................................................................................ 5
2.2 Atherosklerosis ..................................................................................... 6
2.2.1 Definisi ....................................................................................... 6
2.2.2 Patofisiologi ................................................................................ 6
2.2.3 Tatalaksana ................................................................................. 8
2.2.4 Hubungan Dislipidemia Dengan Terjadinya Atherosklerosis .... 9
2.2.5 Hubungan Antara Hipertrigleseridemia Dengan Atherosklerosis
10
2.2.6 Biosintesis Trigliserida ................................................................ 10
2.3.1 Proses Biosintesis Trigliserida .................................................. 10
2.2.7 Seledri .......................................................................................... 11

vi
 2.4.1 Taksonomi ................................................................................ 11
2.4.2 Morfologi .................................................................................. 12
2.4.3 Kandungan Aktif Dan Manfaat Daun Seledri .......................... 13
2.4.4 Hubungan Seledri Dengan Kadar Trigliserida ......................... 14
2.2.8 Hewan Coba Tikus Putih Galur Wistar ....................................... 14
2.5.1 Hewan Coba.............................................................................. 14
2.5.2 Pemeriksaan Trigliserida Pada Tikus ....................................... 16
BAB 3 KERANGKA KONSEPTUAL .............................................................. 17
3.1 Kerangka Konseptual ......................................................................... 17
3.2 Penjelasan Kerangka Konseptual ....................................................... 18
3.3 Hipotesis ............................................................................................. 20
BAB 4 METODE PENELITIAN ....................................................................... 21
4.1 Jenis dan Rancangan Penelitian ......................................................... 21
4.1.1 Jenis Penelitian ......................................................................... 21
4.1.2 Rancangan Penelitian................................................................ 21
4.2 Lokasi dan Waktu Penelitian.............................................................. 22
4.3 Sampel, Besar Sampel dan Teknik Sampling .................................... 23
4.3.1 Sampel ...................................................................................... 23
4.3.2 Besar Sampel ............................................................................ 23
4.3.3 Teknik Pengambilan Sampling ................................................. 25
4.4 Variabel Penelitian dan Definisi Operasional .................................... 25
4.4.1 Variabel Penelitian.................................................................... 25
4.4.2 Definisi Operasional ................................................................. 26
4.5 Intrument Penelitian dan Persiapan Penelitian ................................... 31
4.5.1 Instrument Penelitian ................................................................ 31
4.5.2 Bahan Penelitian ....................................................................... 32
4.5.3 Ekstrak Daun Seledri ................................................................ 32
4.5.4 Persiapan Hewan Coba ............................................................. 34
4.5.5 Pembuatan Pakan Tinggi Lemak Dan Kolesterol ..................... 34
4.5.6 Pembuatan Dosis Statin ............................................................ 35
4.6 Prosedur Pelaksanaan Penelitian ........................................................ 35

vii
 4.6.1 Tahap Pelaksanaan Penelitian................................................... 35
4.6.2 Prosedur Pengambilan Sampel ................................................. 37
4.6.3 Pengukuran Kadar Trygliceride (TG) ....................................... 38
4.7 Etika Penelitian .................................................................................. 38
4.8 Kerangka Oprasional .......................................................................... 39
4.9 Pengolahan dan Analisis Data ............................................................ 40
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 39
LAMPIRAN ......................................................................................................... 39

viii
 DAFTAR TABEL

Nomor Judul Tabel Halaman

Tabel 4.1 Variabel Bebas (Independent Variable)……………………………26
Tabel 4.2 Variabel Terikat (Dependent Variable)…………………………….27
Tabel 4.3 Variabel Terkendali (Control Variable)……………………………28

ix
 DAFTAR GAMBAR

Nomor Judul Gambar Halaman

Gambar 2.1 Daun Seledri……………………………………………………..13
Gambar 2.2 Rattus Norvegicus……………………………………………….15

x
 DAFTAR LAMPIRAN

Nomor Judul Lampiran Halaman

LAMPIRAN 1.....................................................................................................39
LAMPIRAN 2.....................................................................................................41
LAMPIRAN 3.....................................................................................................42
LAMPIRAN 4.....................................................................................................43
LAMPIRAN 5.....................................................................................................46
LAMPIRAN 6.....................................................................................................47
LAMPIRAN 7.....................................................................................................48

xi
 DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH

Apo-B48 = Apolipoprotein B-48

Apo-E = Apolipoprotein

ATP = Adenosin Triphosphate

CM remnant = Chylomicron Remnant

FAS = Fatty Acid Synthase

HDL = High Density Lipoprotein

HMG-CoA = Hydroxy Methylglutaryl Coenzyme A

IL-1 = Interleukin 1

LDL = Low Density Lipoprotein

LDL-OX = Oxidation Low Density Lipoprotein

MCP-1 = Monocyte Chemotactic Protein – 1

PPARs = Peroxisome Proliferator Activated Receptor

SMC = Struktural Maintenance Of Chromosomes

TG = Trigliserida

TGrL = Triglyceride Rich Lipoprotein

TNF α = Tumor Necrosis Factor

VLDL = Very Low Density Lipoprotein

xii
 BAB 1

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Penyakit kardiovaskular merupakan penyebab kematian tertinggi di dunia,

penyakit ini telah membunuh sekitar 17,9 juta orang pada 2019 (WHO,2021). Di

Indonesia, penyakit kardiovaskular menempati peringkat pertama dengan 35%

total kematian (WHO, 2018). Salah satu faktor utama terjadinya penyakit jantung

koroner adalah atherosklerosis, faktor pencetus dari aterosklerosis adalah

dislipidemia.(Pol et al., 2018).

Dislipidemia merupakan suatu kelainan metabolisme lipid yang dikenal

sebagai salah satu faktor resiko terjadinya penyakit jantung koroner, disamping

faktor resiko lain seperti hipertensi dan diabetes melitus (Mahalle et al., 2014).

Dislipidemia ditandai dengan penurunan atau peningkatan kadar lipid dalam

plasma. Kelainan lipid utamanya adalah kenaikan dari kolesterol total (K-Total),

TG (TG), low density lipoprotein (LDL), dan penurunan dari high density

lipoprotein (HDL). Tingginya kadar trigliserida (TG) dapat disebabkan oleh

konsumsi makanan tinggi lemak (Miller et al., 2011). Makanan berlemak yang

masuk ke lambung akan diemulsifikasi dan dicampur dengan garam empedu

sehingga akan terbentuk badan misel lemak dan akan diserap di usus halus (Guyton,

2016).

Peningkatan kadar TG dapat menggangu jaringan adiposa sebagai tempat

penyimpanan lemak dan pengatur homeostasis metabolik yang selanjutnya dapat

menyebabkan peningkatan infiltrasi makrofag ke dalam jaringan adiposa yang pada

1
 2

akhirnya memicu munculnya resistensi insulin di jaringan. Resistensi insulin

selanjutnya akan mengakibatkan penurunan dari aktivasi LPL yang akan

mengakibatkan tingginya konsentrasi triglyceride-rich lipoprotein di dalam

plasma. TG yang tinggi dalam darah akan dihidrolisis sehingga menghasilkan small

dense LDL yang bersifat lebih aterogenik dibandingkan dengan LDL sehingga

meningkatkan resiko penyakit jantung koroner (Utami et al., 2017)

Terapi farmakologi dislipidemia saat ini adalah obat golongan statin, obat

golongan ini cenderung efektif namun sebagian besar pasien masih mengalami

kejadian penyakit jantung koroner dan terdapat laporan mengenai efek samping

yang kurang baik yaitu miopati. Karena efek samping tersebut, dibutuhkan

senyawa lain untuk terapi dari dislipidemia, yaitu obat-obat herbal telah digunakan

selama beberapa dekade dan efektif dalam terapi dislipidemia serta memiliki efek

samping yang rendah (Anneke,2018). Tanaman herbal yang mudah ditemukan di

Indonesia adalah Seledri (Apium graveolens L.). Penelitian tentang seledri telah

dilakukan oleh beberapa peneliti, salah satunya menuliskan bahwa seledri

mengandung flavonoid, tanin, saponin, dan fitosterol sehingga memiliki banyak

khasiat yang baik untuk tubuh seperti antihipertensi dan obat

diuretik(Sarwindah,2020.).

Seledri memiliki kandungan flavonoid yang akan menghambat Fatty Acid

Synthase (FAS), penghambatan terhadap FAS akan secara langsung menurunkan

pembentukan asam lemak sehingga TG yang terbentuk akan berkurang. Saponin

akan menghambat absorbsi kolesterol dan TG di dalam usus dan meningkatkan

reaksi pembentukan asam empedu sehingga akan diekskresikan melalui feses.

 3

Tanin dapat menghambat adipogenesis dan menghambat absorpsi intertinal, tanin

juga bersifat sebagai anti radikal bebas dan dapat mengaktifkan enzim antioksidan

yang akan mencegah oksidasi dari kolesterol LDL sehingga dapat mengurangi

resiko penyakit kardiovaskuler (Mutia et al, 2018). Fitosterol akan menghambat

absorpsi kolesterol dari makanan dan menghambat reabsorpsi kolesterol asam

empedu dengan memodifikasi asetil Ko-A karboksilase dan 7α-dehidroksilase

sehingga akan meningkatkan ekresi asam empedu melalui feses (Nashriana et al.,

2015). Berdasarkan data tersebut maka peneliti ingin mengetahui efek seledri

(Apium graveolens L.) terhadap pencegahan kenaikan kadar trigiserida (TG) pada

tikus wistar (Rattus norvegicus) yang diberi diet tinggi lemak.

1.2 Rumusan Masalah

Apakah ekstrak etanol seledri (Apium graveolens L) dapat mencegah

kenaikan kadar TG pada tikus wistar (Rattus norvegicus) yang diinduksi diet tinggi

lemak?

1.3 Tujuan Penelitian

1.3.1 Tujuan Umum

Untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanol seledri (Apium

graveolens L) terhadap upaya pencegahan kondisi dislipidemia.

 4

1.3.2 Tujuan Khusus

Untuk mengetahui pengaruh etanol seledri (Apium graveolens L) terhadap

pencegahan peningkatan kadar TG tikus wistar (Rattus norvegicus) yang diinduksi

diet tinggi lemak.

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Manfaat Bagi Peneliti

1. Meningkatkan kemampuan serta memberikan pengalaman dalam

menulis karya ilmiah.

2. Mengetahui pengaruh ekstrak etanol seledri terhadap pencegahan

kondisi dislipidemia.

3. Mengetahui mekanisme senyawa aktif dalam ekstrak etanol seledri

dalam mencegah kenaikan kadar TG.

1.4.2 Manfaat Umum

1. Untuk masyarakat, menambah pengetahuan terkait herbal yang dapat

menurunkan kadar TG.

2. Untuk penelitian selanjutnya, dapat dijadikan acuan penelitian terkait

pemanfaatan seledri dalam bidang kesehatan.

 BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Dislipidemia

2.1.1 Definisi

Dislipidemia merupakan kondisi ketidakseimbangan lemak seperti kolesterol,

LDL, TG, dan HDL. Kondisi ini dapat disebabkan oleh pola makan, paparan
tembakau, atau faktor genetik, dan dapat menyebabkan penyakit kardiovaskular
(Mosca et al., 2022)

2.1.2 Patofisiologi

Konsumsi makanan tinggi lemak akan menyebabkan penumpukan lemak

viseral yang akan berakibat kepada peningkatan masa jaringan adiposa sehingga

jaringan adiposa akan melepaskan chemotactic factor yaitu monocyte

chemoattractant protein-1 (MCP-1) dan tumor – necrosis factor alpha (TNF α)

yang akan memodulasi respon inflamasi pada jaringan adiposa. Makrofag akan

melepaskan banyak TNF-α karena inisiasi dari MCP-1 sehingga berakibat

penurunan jumlah glucose transporter 4 dan terjadi penurunan ransangan insulin

terhadap reseptor yang berakibat resistensi insulin (Ormazabal et al., 2018).

Resistensi insulin akan menurunkan aktivitas dari LPL yang

mengakibatkan peningkatan konsentrasi TGrL plasma. TG plasma yang tinggi akan

meningkatkan transfer TG ke LDL dan HDL kemudian bersamaan dengan itu

terjadi proses transfer kolesterol ester dari LDL dan HDL ke TG plasma dimana

proses-proses ini dimediasi oleh cholesterol ester trenasfer protein. Selanjutnya TG

5
 6

akan dihidrolisis dan menghasilkan LDL yang lebih aterogenik yaitu small danse

LDL (Utami et al., 2017).

2.2 Atherosklerosis

2.2.1 Definisi

Atherosklerosis merupakan penyakit peradangan kronis yang progresif di mana

terjadi penumpukan plak di dalam dinding arteri. Plak-plak ini terdiri dari lemak
yang menyebabkan reaksi peradangan yang menyebabkan aliran darah menjadi
tidak lancar (Aldon J et al, 2000).

2.2.2 Patofisiologi

Pembentukan atherosklerosis terbagi menjadi tiga tahap, yaitu seperti

berikut (Rafieian-Kopaei et al., 2014) :

1. Pembentukan fatty streaks

Pembentukan fatty streaks melewati empat tahap, yaitu:

a. Penangkapan LDL

LDL akan mengalami endositosis kedalam endotel yang mengalami

disfungsi dan akan terperangkap didalam tunika intima. LDL yang

terperangkap akan meningkatkan konsentrasi LDL di tunika intima

dan akan meningkatkan durasi didalam lesi. Dari kedua faktor

tesebut akan berakibat oksidasi spontan dari LDL menjadi LDL-OX

(LDL teroksidasi).

b. Aktivasi Sel Endotel

Sitokin dan lipid teroksidasi akan mengaktifkan sel endotel yang

berakibat monosit dan limfosit T infiltrasi kedalam tunika intima.

 7

c. Aktivasi Leukosit

Molekul adhesi disekresikan oleh sel endotel aktif dan sel otot polos

menghasilkan kemokin dan kemoatraktan yang menginisiasi invasi

limfosit, sel mast, monosit dan neutrofil di intima. Selain itu, sel otot

polos juga mengeluarkan matriks ekstraseluler yaitu proteoglikan,

kolagen, dan jaringan elastis.

d. Pembentukan foam cell

Makrofag akan mengfagosit LDL teroksidasi melalui scavenger

receptor yang akan diubah menjadi foam cell, ekspresi scavenger

receptor meningkat selama diferensiasi monosit menjadi makrofag.

2. Pembentukan atheroma

Kerusakan jaringan vaskular akan mengakibatkan sekresi dari

interleukin 1 (IL-1) dan tumor necrosis factor (TNF), faktor-faktor ini

akan membuat perpindahan sel otot polos berpindah ke lumenal arteri

dan membentuk fibrous cap. Fibrous cap terdiri dari serat kaya

kolagen, SMC, makrofag, dan limfosit T.

Makrofag akan mengeluarkan meta proteinase yang mencegah

terjadinya lisis matrix ekstraseluler. Limfosit T akan menghasilkan

TNF-α yang mencegah sintesis kolagen, proses ini melemahkan fibrous

cap dan saat fibrous cap hancur maka lipid dan kolagen akan terekspos

dan masuk ke dalam aliran darah dan terjadi akumulasi platelet

sehingga terbentuk gumpalan darah.

 8

3. Pembentukan plak atherosklerosis

Ruptur yang berulang pada Fibrous cap akan membentuk

thrombus yang mengakibatkan kekakuan lumen arteri dan terjadi

kalsifikasi.

2.2.3 Tatalaksana

Dislipidemia merupakan penyebab utama terjadinya atherosklerosis,

terapi dislipidemia dapat menggunakan HMG-CoA reductase inhibitor, nicotinic

acid, fibrat, sequestan asam empedu, azetemibe, dan omega-3 fatty acid untuk

mencegah terjadinya atherosklerosis maka dilakukan pengobatan dislipidemia agar

tidak terjadi komplikasi (Lewis, 2009).

Statin bekerja menurunkan jumlah kolesterol yang terbentuk di hepar

melalui inhibisi kompetitif terhadap enzim HMG-CoA reductase yang dapat

menurunkan kadar TG. Statin menghambat pengubahan Asetil koenzim A menjadi

adam lemak sehingga asam lemak tidak dapat berikatan dengan glycerol sehingga

dapat menurunkan sintesis TG (Lewis, 2009). Nicotinic acid akan mencegah

lipolisis dari adiposit yang berakibat pada menurunkan kadar asam lemak bebas dan

menurunkan sekresi VLDL serta sedikit meningkatkan pembentukan HDL dan

menghambat katabolisme HDL. Fibrat akan merangsang aktivasi peroxisome

proliferator activator receptor (PPARs) yang akan meningkatkan produksi enzim

lipoprotein lipase (LPL) sehingga meningkatkan hidrolisis TG dan dapat juga

menurunkan jumlah Apo-CIII yang berperan dalam pembentukan TG. Sequestan

asam empedu merupakan gologan obat yang bekerja di saluran intestinal, obat ini
 9

akan meningkatkan dua komponen asam empedu utama yaitu asam glikokolat dan

asam taurokolik sehingga kelarutan kolestorol akan menurun yang menyebabkan

penurunan absorbsi kolesterol sehingga akan dieksresikan melalui feses. Ezetimibe

akan menghabat penyerapan kolesterol di usus sehingga terjadi penurunan produksi

kolesterol secara eksogen dan berakibat kadar kolesterol di hati menjadi rendah

sehingga memicu peningkatan sistesis LDL reseptor. Omega-3 fatty acid adalah

kelomopok asam lemak tidak jenuh. Omega-3 fatty acid dapat menurunkan

konsentrasi TG, menghambat penggabungan TG dengan VLDL dan mengurangi

sekresi TG dengan menghambat lipogenesis di hati (Kholifah et al,2021 )

2.2.4 Hubungan Dislipidemia Dengan Terjadinya Atherosklerosis

Retensi lipoprotein yang bersifat aterogenik yaitu dapat terjadi dalam

dislipidemia. Lipoprotein tersebut akan bertumpuk dalam lapisan subendotel arteri

sehingga dapat memicu suatu respon inflamasi yang akhirnya berujung pada

aterosklerosis (Garg et al., 2015).

Low density lipoprotein (LDL) akan terakumulasi di subendotel arteri,

LDL akan termodifikasi dan teroksidasi menjadi ox-LDL yang merupakan

komponen utama inflamasi sehingga terjadi pertumbuhan plak aterosklerosis

(Jebari-Benslaiman et al., 2022)

Selain adanya ox-LDL, kadar TG yang tinggi dapat menyebabkan

atherosklerosis. Klimomikron remnant dan VLDL mempunyai kandungan TG yang

sangat banyak serta lipoprotein yang sangat kecil sehingga mudah untuk masuk

kedalam subendotel dengan mudah yang menyebabkan terjadinya atherosklerosis

(Keenam dr et al.,2014)
 10

2.2.5 Hubungan Antara Hipertrigleseridemia Dengan Atherosklerosis

TG tidak bersifat aterogenik secara langsung tetapi mewakili biomarker

penting dari resiko aterogenesis karena hubungannya dengan partikel sisa

aterogenik dan apo C-III, protein proinflamasi, proatherogenik yang ditemukan

pada semua kelas lipoprotein plasma. Beberapa lipoprotein kaya TG (TRL)

termasuk VLDL dan VLDL remnant, serta CM remnant tampaknya

mempromosikan aterogenesis secara independen dari LDL.remnant terbentuk

akibat hidrolisis parsial oleh lipoprotein lipase (LPL) dari TRL yang berasal dari

hati dan usus yang telah mengambil ester kolesterol dari HDL melalui aksi protein

transfer ester kolesterol. Serupa dengan LDL teroksidasi, lemak kaya kolesterol dan

miskin TG ini akan terakumulasi di endotel dan serapan oleh makrofag untuk

membentuk foam cell dan akan diubah menjadi Fibrous cap yang menjadi pencetus

dari atherosklerosis (Talayero et al, 2011).

2.2.6 Biosintesis Trigliserida

2.3.1 Proses Biosintesis Trigliserida

Asam lemak hati memiliki tiga sumber utama yaitu lipid dari makanan,

jaringan adiposa, dan dari proses sintesis de novo. Lemak dalam makanan akan

dihidrolisis di dalam lumen usus yang akan menghasilkan asam lemak dan akan

diserap oleh usus, asam lemak akan diesterifikasi ulang untuk membentuk molekul

TG yang dikemas menjadi kilomikron dan akan dieksresikan ke dalam plasma yang

nantinya akan diserap oleh jaringan otot dan jaringan adiposa. TG yang tersisa akan

diangkut kembali ke hati dan di proses secara intraseluler, menyebabkan pelepasan

asam lemak dalam hepatosit (Alves-Bezerra & Cohen, 2018).

 11

Karbohidrat dan glukosa digunakan untuk proses de novo untuk produksi

asam lemak. Agar dapat dimetabolisme asam lemak akan diaktifkan untuk

membentuk molekul acyl-CoA, yang dapat mengalami oksidasi atau bisa

digabungkan menjadi lipid kompleks. TG yang disintesis secara local akan di

simpan di intracellular lipid droplet (LDs) atau dikemas menjadi VLDL yang

kemudian akan disekresikan ke dalam plasma. Penyimpanan TG saat puasa akan

dimobilisasi dari jaringan adiposit dan hepatosit guna melepaskan asam lemak.

Sintesis lemak de novo dalam hati juga turut berperan dalam pembentukan asil-

KoA dan menghasilkan energi, serta mengalami oksidasi oleh mitokondria

sehingga menghasilkan VLDL-TG. (Cohen et al, 2018).

2.2.7 Seledri

2.4.1 Taksonomi

Divisi : Spermatophyte

Subdivisi : Angiospermae

Kelas : Magnolisa

Subkelas : Rosidace

Ordo : Apiales

Famili : Apicaeca

Genus : Apium

Spesies : Apium Graveolens L.

 12

2.4.2 Morfologi

1. Batang

Batang tidak berkayu, beruas-ruas, bercabang, tegak, berwarna

hijau pucat. Sebatang seledri sangat pendek, sekitar 3-5 cm, sehingga

tidak terlihat.

2. Daun

Daun seledri itu rumit, anehnya daunnya berbulu dan mengerikan

3-7 utas. Tepi daun bergerigi dari batang dan ujungnya runcing. Daunnya

dangkal, panjang 2-7,5 cm dan lebar 2-5 cm. Batang daun tumbuh lurus

ke atas atau ke tepi batang, panjang kira-kira 5 cm, hijau atau keputihan.

3. Kelopak

Putih kehijauan atau putih kekuningan dengan panjang1/2 -3/4

mm. Semuanya 3-8 tangkai bunga dapat tumbuh di ketiak. Di ujung

tangkai bunganya dikelompokkan membentuk lingkaran. Ketika bunga

dibuahi, mereka berbentuk bulat kecil berwarna hijau seperti buah muda.

Saat buah tua berubah warna menjadi coklat muda

4. Bunga

Satu bunga dengan batang menonjol, kelopak tersembunyi,

kelopak putih atau merah muda kehijauan dengan ujung bengkok. Bunga

betina, seringkali ringan, sessile atau pendek tirai bunga berlawanan atau

berbatasan dengan daun. Desensitisasi atau tangkai bunga sepanjang 2

cm.
 13

5. Buah

Buahnya memiliki panjang sekitar 3 mm, batangnya bersudut,

berlekuk, sangat aromatik

6. Akar

Akar tebal, sistem akar menyebar ke segala arah sekitar 5-9 cm, per

kedalaman 30-40 cm.

Sumber: Kusuma & Wiwied, 2016

Gambar 2.1 Daun Seledri

2.4.3 Kandungan Aktif Dan Manfaat Daun Seledri

Seledri memiliki beberapa zat aktif yang bermanfaat bagi Kesehatan

seperti fenol, furanokuramin, apigenin, vitamin c,kalium, dan 3-n-butyl phthalide

yang bekerja untuk merelaksasi otot polos dan menurunkan tekanan darah sebagai

anti hipertensi (Naqiyya,2020). Seledri juga memiliki beberapa zat aktif untuk

menurunkan kadar kolesterol seperto flavonoid, apigenin, saponin tannin, dan

fitosterol.(Sarwindah et al, 2020)

 14

2.4.4 Hubungan Seledri Dengan Kadar Trigliserida

Kandungan dalam seledri memiliki mekanisme yang berbeda dalam

menurunkan kadar TG. Flavonoid dapat menurunkan kadar TG dengan

meningkatkan aktivitas enzim LPL , dengan meningkatnya enzim tersebut maka

VLDL yang membawa TG akan dihidrolisis menjadi asam lemak dan glycerol

untuk diubah menjadi energi, flavonoid juga dapat menghambat enzim fatty acid

synthase (FAS) yang memiliki fungsi dalam metabolisme lemak. Hambatan pada

FAS akan menurunkan pembentukan asam lemak sehingga akan mengurangi

pembentukan TG. saponin akan menghambat absorpsi TG dalam usus dengan cara

membentuk misel yang tidak dapat diserap dan meningkatkan pembentukan asam

empedu yang kemudian diekskresikan melalui feses. Tanin dapat menghambat

adipogenesis dan menghambat absorbsi TG dan kolesterol di intestinal serta

meningkatkan eksresi dari asam empedu (Mutia et al, 2018). Fitosterol dapat

menurunkan kadar TG dengan cara menghambat absrobsi kolesterol dan TG dari

makanan dan menghambat reasobsi koesterol asam empedu dengan memodifikasi

Asetil Ko-A karboksilase dan aktifitas 7α dehidroksilase sehingga terjadi

peningkatan eksresi asam empedu melalui feses yang berakibat pada jumlah asam

empedu berkurang sehingga pembentukan asam empedu baru dari kolesterol yang

ada di dalam darah (Nashriana et al., 2015) .

2.2.8 Hewan Coba Tikus Putih Galur Wistar

2.5.1 Hewan Coba

Hewan coba yang cocok sangat dibutuhkan agar tujuan dapat tercapai

dengan maksimal dan penelitian dapat di kerjakan dengan efesien. Dalam penelitian
 15

ada beberapa pilihan hewan coba seperti tikus,primata, dan kelici. Umumnya tikus

yang digunakan dalam penelitian adalah tikus putih galuh wistar, tikus biobreeding,

mencit, dan tikus putih galur Sprague Dawley. Tikus (rattus norvegicus) memiliki

kesamaan anatomis, fisiologis, dan metabolik seperti manusia(Stevani, 2016). Oleh

karena itu, peneliti ingin menggunakan hewan coba rattus norvegicus karena umum

digunakan untuk penelitian yang berkaitan dengan diet tinggi lemak.

Tikus putih galur wistar lebih unggul dari tikus putih galur Sprague

Dawley karena terbukti Ketika penelitian pemberian diet tinggi lemak selama tujuh

belas minggu, metabolisme tikus putih galur wistas memiliki metabolism yang

lebih tinggi dibandingkan dengan tikus putih galur Sprangue Dawley yang lebih

lambat dan tikus putih galur wistar memiliki enzim leptin untuk mengatur asupan

makanan dan pengeluaran energi. Penelitian tersebut melihat kadar TG pada tikus

putih galur wistar lebih tinggi dibandingkan tikus putih galur Sprague Dawley

(marques). Taksonomi tikus putih galur wistar adalah sebagi berikut (Stevani,

2016) :

Kingdom : Animalia

Filum : Chordata

Kelas : Mammalia

Ordo : Rodensia

Familia : Muridae
Sumber: FIU, 2017
Genus : Rattus

Spesies : Rattus Norvegicus Gambar 2.2 Rattus

Norvegicus
 16

2.5.2 Pemeriksaan Trigliserida Pada Tikus

Kadar normal TG pada tikus putih galur wistas adalah 26-145 mg/dl (Gani

et al., 2013). Pemeriksaan mengunakan metode Glory test dengan Teknik

pembacaan dengan spektofotometer (Lampiran VII)

 BAB 3

KERANGKA KONSEPTUAL

3.1 Kerangka Konseptual

Diet Tinggi Lemak Ekstrak Daun Seledri

Antioksidan
TG meningkat

Flavonoid Saponin,Tanin,fitosterol
Peningkatan Free faty acid &
monoacyl glycerol

Absorbsi Free faty acid &

monoacyl glycerol
di usus
Peningkatan pembentukan
Kilomikron

LPL

Kilomikron remnant

Metabolisme endogen di hepar

Pemecahan TG

Hipertrigliseridemi
a

Keterangan
= Diteliti
= Tidak diteliti
= Efek Inhibisi
= memicu

17
 18

3.2 Penjelasan Kerangka Konseptual

Akibat konsumsi diet tinggi lemak maka TG dan kolesterol yang

memasuki intestin akan menstimulasi kemoreseptor yang mengakibatkan

kolesitokinin bekerja sehingga kantong empedu mengeluarkan asam empedu untuk

memecah TG dan kolesterol sehingga dapat larut dalam air.TG dan kolesterol yang

terlapisi oleh asam empedu akan berikatan dengan co-lipase pankreas dan akan di

pecah menjadi asam lemak dan monoacyl glycerol atau michelle.

Michelle akan diabsorbsi kedalam enterocyte tepatnya di retikulum

endoplasma halus untuk menyatukan asam lemak dan monoacyl glicyrol menjadi

TG jika proses ini telah selesai makan proses di lanjutkan dengan pemberian Apo-

B48 dan kolesterol di retikulum endoplasma kasar maka akan menjadi kilomikron

dan akan masuk ke pembuluh darah untuk menerima Apo-CII dan Apo-E dari HDL

untuk mengaktifkan Lipoprotein lipase untuk memecah TG menjadi free fatty acid

dan glycerol, lalu free fatty acid dan glycerol akan di transport kejaringan adiposa

dan akan kembali menjadi TG. Pada jaringan otot free fatty acid hasil pemecahan

TG tersebut akan mengalami proses yang dinamakann beta oksidasi yang akan

menghasilkan ATP dan akan menghasilkan chylomicront remnant.

Cylomicront remnant yang memiliki Apo-E dan TG akan dikirim ke hepar

dan akan diolah dan akan di simpan serta ada yang akan diolah Kembali untuk

penambahan TG dan akan di sintesis oleh asam amino dan glukosa,pada proses ini

free fatty acid dan glycerol juga dapan membentuk TG yang akan berakibat naiknya

kadar TG. Lalu retikulum endoplasma kasar akan menambahkan Apo-B100,

dengan kadar TG yang tinggi dan penambahan Apo-B100 maka kondisi ini disebut
 19

dengan VLDL (Very Low Density Lipoprotein) yang nanti akan dilepaskan ke

pembuluh darah dan mendapat Apo-CII dan Apo-E.

VLDL yang memiliki Apo-CII akan mengaktifkan enzim lipoprotein

lipase yang bertugas untuk memecah TG menjadi Free fatty acid dan glycerol yang

akan menuju jaringan adiposa untuk membetuk TG yang akan di simpan untuk

pembentukan ATP, setelah proses tersebut maka akan menghasilkan VLDL

remnant atau IDL. IDL yang masih memiliki Apo-E akan kembali ke hepar dan

berinteraksi dengan Hepatic TG Lipase dimana proses tersebut mengakibatkan

kadar TG pada molekul akan menurun, molekul tersebut akan kembali ke pembuluh

darah dan terbentuk LDL yang akan di mengalami proses katabolisme, jika proses

ini berlebihan maka akan mengakibatkan terjadinya hipertrigliseridemia.

Ekstrak daun seledri memiliki kandungan flavonoid, tanin, saponin dan

fitosterol. Flavonoid dapat menutunkan kadar TG dengan meningkatkan aktivasi

dari LPL, dengan meningkatnya LPL maka VLDL yang membawa TG akan

dihidrolisi menjadi free fatty acid dan glycerol yang akan diserap oleh otot dan

dioksidasi untuk menhasilkan energi sehingga jumlah TG yang ada dalam darah

akan berkurang. Tanin dapat menurunkan kadar TG karena akan mengurangi

absorbsi kolesterol dan TG di usus halus dan meningkatkan pengeluaran asam

empedu. Saponin akan menghambat absorpsi kolesterol dan TG dengan berikatan

dengan asam empedu dan kolesterol dari makanan sehingga membentuk micelle

yang tidak dapat diserap oleh usus sehingga akan diekresikan melalui feses.
 20

3.3 Hipotesis

Ekstrak daun seledri (Apium graveolens L.) dapat mencegah peningkatan

kadar TG tikus Wistar (Rattus norvegicus) yang diberi diet tinggi lemak.
 BAB 4

METODE PENELITIAN

4.1 Jenis dan Rancangan Penelitian

4.1.1 Jenis Penelitian

Penelitian yang akan dilaksanakan menggunakan metode penelitian

eksperimental Randomized Controlled Trial dengan desain penelitian yaitu Post

Test Only with Control Group Design.

4.1.2 Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental yang akan dilakukan

terhadap hewan coba Rattus norvegicus yang akan diberikan pakan tinggi lemak

beserta pemberian ekstrak etanol daun seledri, ekstrak daun seledri di berikan

minimal satu jam setelah pemberian pakan tinggi lemak selama 28 hari dengan

menggunakan sonde lambung.

Sebelum dilakukan intervensi hewan coba Rattus norvegicus akan

dilakukan adaptasi selama 7 hari, setelah itu akan dibagi menjadi 6 kelompok yang

terbagi menjadi 1 kelompok normal, 1 kelompok negatif, 1 kelompok positif

dengan pemberian statin, dan 3 kelompok yang akan diberikan ekstrak etanol daun

seledri dengan dosis yang berbeda yaitu 125mg/kgBB, 250mg/kgBB, dan

400mg/kgBB. Pada hari ke-36 akan dilakukan euthanasia dan akan di ambil darah

melalui intracardiac untuk menjadi sampel penelitian.

21
 22

4.2 Lokasi dan Waktu Penelitian

Penelitian akan diawali dengan penyusunan proposal dan akan dilanjutkan

dengan ujian sidang proposal pada bulan September 2023. Setelah itu akan

mengajukan permohonan kelaikan etik. Penelitian ini akan berlangsung selama 35

hari yang berlangsung pada bulan Oktober – November 2023 di laboratorium

Hewan Fakultas Kedokteran Universitas Surabaya, dan dilanjutkan dengan

pengolahan data di Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas

Surabaya pada bulan November 2023. Selanjutnya akan dilakukan penyusunan

skripsi pada bulan Desember 2023.

Januari – September September 2023: September 2023:

2023
Penyusunan Sidang Proposal Pengurusan layak
proposal
etik

Desember 2023: November 2023: Oktober –

November 2023
Seminar Hasil Penyusunan Skripsi Proses Penelitian
 23

4.3 Sampel, Besar Sampel dan Teknik Sampling

4.3.1 Sampel

Sampel pada penelitian ini adalah tikus Rattus norvegicus jantan berusia

2-3 bulan dengan berat 150 – 200 gram yang akan di pelihara di Laboratorim

Hewan Fakultas Kedokteran Universitas Surabaya. Sampel akan dipilih sesuai

dengan kriteria inklusi dan ekslusi pada penelitian ini.

4.3.2 Besar Sampel

Hewan coba yang digunakan pada penelitian adalah Rattus norvegicus

yang akan dibagi menjadi 6 kelompok yaitu kelompok 1 normal, kelompok 2

kontrol negatif, kelompok 3 kontrol positif, dan kelompok 4 – 6 adalah

kelompok perlakuan. Besar sampel akan dihitung dengan rumus resource

equation dari Charan dan Katherina (2013), nilai E merupakan bebas jumlah

sampel metode ANOVA dengan jarak antara 10-20 sehingga mendapatkan

perhitungan sebagai berikut :

E=N–k
E = (n x k) - k

Keterangan:

E : Nilai bebas jumlah sampel ANOVA

N : Jumlah seluruh sampel hewan coba

n : Jumlah sampel hewan coba setiap kelompok

 24

k : Jumlah kelompok

20 = (6x) – 6

6x = 20 + 6

X = 4,333

X=5

Berdasarkan perhitungan di atas didapatkan jumlah sampel setiap

kelompok berjumlah 5 dengan total keseluruhan sampel penelitian sebesar 30

ekor Rattus norvegicus. Pada penelitian ini akan dilakukan penambahan jumlah

sampel hewan untuk mengantisipasi adanya drop out selama berlangsungnya

penelitian dengan rumus sebagai berikut :

Keterangan :

N : Besar jumlah sampel setelah di koreksi

n : Jumlah sampel setiap kelompok sebelum koreksi

f : Periksaan sampel drop out (20%)

5
𝑁=
1 − 20%

5
𝑁=
0.8

N=7

Hasil dari perhitungan diatas akan didapatkan hasil bahwa sampel

dipilih untuk meminimalisir adanya drop out sebanyak 7 ekor pada masing-
 25

masing kelompok, sehingga total hewan coba dalam penelitian ini berjumlah

42 ekor hewan coba.

4.3.3 Teknik Pengambilan Sampling

Pengambilan hewan coba akan diambil secara acak berdasarkan kriteria

inklusi dan eksklusi.

Kriteria inklusi :

✓ Tikus putih (Rattus norvegicus) galur wistar jantan

✓ Usia 2-3 bulan

✓ Berat badan 150-200 gram

✓ Sehat (gerak aktif, mau makan, rambut tidak kusam dan rontok, tidak ada

kelainan anatomi yang tampak)

✓ Belum pernah jadi tikus percobaan

✓ Memiliki kadar TG Normal (26-145mg/dL)

Kriteria eksklusi:

✓ Tikus sakit selama penelitian berlangsung (tidak gerak aktif, tidak mau

makan, rambut kusam dan rontok)

✓ Mati selama penilitian berlangsung

4.4 Variabel Penelitian dan Definisi Operasional

4.4.1 Variabel Penelitian

• Variable bebas (Independent Variable) : Ekstrak etanol dari daun seledri

(apium graveolens L.).

 26

• Variable terikat (Dependent Variable) : kadar trigliserida (TG) darah.

• Variable terkendali (Control Variable) : Usia, berat badan, jenis kelamin,

cara perlakuan, makanan yang diberikan, waktu penelitian, serta dosis

simvastatin.

4.4.2 Definisi Operasional

4.4.2.1 Variabel Bebas (Independent Variable)

Tabel 4. 1 Variabel bebas (Independent Variable)

Variable Definisi Oprasional Cara Hasil Skala

pengukuran pengukuran
Ekstrak Jumlah dosis yang Timbangan mg/kgBB Rasio
etanol daun akan diberikan analitik
seledri kepada Rattus
(Apium norvegicus hewan
graveolens) coba selama
penelitian terdiri dari
125mg/kgBB,
250mg/kgBB, dan
400 mg/kgBB.
Ekstrak etanol daun
seledri diberikan
setiap hari selama satu
kali dalam bentuk
suspensi
menggunakan sonde
lambung sebanyak 1
ml. perlakuan akan
 27

dilaksanakan selama
28 hari dan akan
diberikan 1 jam
setelah pemberian
pakan diet tinggi
lemak.

4.4.2.2 Variabel Terkait (Dependent Variable)

Tabel 4.2 Variabel Terikat (Dependent Variable)

Cara
Variabel Definisi Oprasional Hasil Skala
Pengukuran
Kadar TG TG merupakan Pengukuran mg/dL Rasio
senyawa lemak yang menggunakan
terdiri dari asam metode
lemak bebas dan spektrofotometri
monoasil glycerol
yang memiliki fungsi
sebagai menyediakan
energi.
TG dalam darah
didapat dari
lipoprotein yang
mengandung TG.
Kadar normal pada
darah tikus berkisar
antara 26-145 mg/dL
 28

4.4.2.3 Variabel Terkendali (Control Variable)

Tabel 4.3 Variabel Terkendali (Control Variable)

Variabel Definisi Oprasional Cara Hasil Skala
pengukuran
Usia Usia hewan coba yang Melihat
Hewan akan digunakan adalah gigi molar
coba Rattus norvegicus jantan tikus
berusia 2-3 bulan dengan
Berat badan berat badan 150-200 Timbangan gram rasio
hewan coba gram. digital
Jenis Rattus norvegicus jantan
kelamin
hewan coba
Cara Hewan coba diberikan
perlakuan waktu untuk adaptasi
dan waktu selama tujuh hari dan
penelitian setiap kelompok akan
mendapatkan perlakuan
yang berbeda selama 28
hari. Kelompok 1
(kelompok normal) akan
diberikan makan dan
minum standar.
Kelompok II (kelompok
kontrol negatif) akan
diberikan pakan tinggi
 29

lemak serta makanan dan

minuman standar.
Kelompok III (kelompok
kontrol positif) akan
diberikan pakan tinggi
lemak dan statin dengan
dosis 0,36mg/200mgBB
serta makanan dan
minuman standar selama
28 hari. Kelompok IV
(kelompok perlakuan 1)
akan diberikan pakan
tinggi lemak dan ekstrak
etanol daun seledri
dengan dosis
125mg/kgBB serta
makanan dan minuman
standar selama 28 hari.
Kelompok V (kelompok
perlakuan 2) akan
diberikan pakan tinggi
lemak dan ekstrak etanol
daun seledri dengan dosis
250mg/kgBB serta
makanan dan minuman
standar selama 28 hari.
Kelompok VI (kelompok
perlakuan 3) akan
 30

diberikan pakan tinggi

lemak dan ekstrak etanol
daun seledri dengan dosis
400mg/kgBB serta
makanan dan minuman
standar selama 28 hari.
Makanan Makanan diberikan Gram/ekor
kepada hewan coba Timbangan
dengan takaran 30-40 digital
gram/ekor setiap hari satu
kali.
Pakan Pakan tinggi lemak akan ml/tikus
tinggi diberikan berupa
lemak / komponen dari minyak
kolesterol jelantah 1ml/tikus/hari,
kuning telur puyuh
1ml/tikus/hari, kuning
telur bebek 1ml/tikus/hari
(Hal et al., 2021).
Pemeberian Simvastatin diberikan Mg/kgBB
dosis dalam bentuk suspensi
simvastatin dengan dosis
0,36mg/200grBB tikus.
Simvastatin diberikan
setiap hari satu jam
setelah pemberian pakan
tinggi lemak pada pagi
hari sebanyak satukali
 31

selama 28 hari dengan

menggunakan sonde
lambung.

4.5 Intrument Penelitian dan Persiapan Penelitian

4.5.1 Instrument Penelitian

Instrumen yang akan digunakan dalam penelitian adalah sebagai berikut :

1. Kandang hewan coba berukuran 40x50x20cm beserta label

2. Tempat makan dan minum hewan coba

3. Spektrofotometer

4. Reagen TG

5. Timbangan digital

6. Capillary rod

7. Sonde lambung

8. Blender

9. Ayakan mesh 60

10. Gelas beaker

11. Gelas ukur

12. Rotary evaporator

13. Maserator

14. Corong buchner

15. Waterbath
 32

16. Kertas saring

17. Mortit dan stamoer

18. Swab alkohol

4.5.2 Bahan Penelitian

Bahan penelitian yang akan digunakan adalah sebagai berikut :

1. 42 ekor tikus utih galur wistar jantan (Rattus norvegicus)

2. Daun seledri

3. Suspensi Na CMC 1%

4. Etanol 96%

5. Makanan dan minuman standar

6. Pakan tinggi lemak

7. Obat simvastatin

4.5.3 Ekstrak Daun Seledri

4.5.3.1 Pembuatan Ekstrak Daun Seledri

Ekstraksi adalah proses pemisahan dan pemindahan dari senyawa aktif

jaringan tumbuhan dengan menggunakan pelarut. Maserasi merupakan metode

ekstraksi, penelitian ini menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol

96% yang dimasukkan kedalam sediaan ekstrak etanol daun seledri.

Berdasarkan metode tersebut peneliti merendam serbuk daun seledri ke dalam

wadah berisi pelarut etanol 96% yang tertutup dan bebas dari cahaya. Proses ini

mengakibatkan dinding sel dan membrane sel akan pecah yang diakibatkan
 33

oleh perbedaan tekanan antara intrasel dan ekstrasel yang mengakibatkan

metabolit sekunder di dalam sitoplasma akan pecah dan larut dalam pelarut

organik atau disebut etanol.

Penggunaan metode maserasi dapat menghemat biaya oprasional

karena relatif hemat fan menggunakan alat yang sederhana yaitu bejana

perendam namun metode ini memiliki kekurangan yaitu waktu yang cukup

lama karena membutuhkan berhari-hari dan proses penyaringan yang tidak

sempurna yaitu mengesktraksi sebesar 50%. Penelitian ini menggunakan etanol

sebagai pelarut karena dapat melarutkan senyawa polar, senyawa aktif dalam

daun seledri bersifat polar. Oleh karena itu etanol digunakan sebagai pelarut

untuk menghasilkan ekstrak. Proses ekstraksi etanol daun seledri di

Laboratorium Meteria Medika, Batu, Malang.

4.5.3.2 Dosis Ekstrak Daun Seledri

Dalam penelitian ini menggunakan tiga dosis yang berbeda, yaitu

125mg/kgBB, 250mg/kgBB dan 400mg/kgBB. Dosis tersebut ditentukan

berdasarkan acuan jurnal dosis penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh

(Firman et al., 2017).

Ekstrak etanol daun seledri ditimbang sesuai dosis dan serbuk Na CMC

1% yang dilarutkan menggunakan aquadest 1 ml (Lampiran II) yang akan

diberikan kepada hewan coba melalui sonde lambung.

 34

4.5.3.3 Pemberian Ekstrak Daun Seledri

Proses pemberian ekstrak etanol daun seledri diberikan melalui peroral

setiap hari sebanyak satu kali dengan menggunakan sonde lambung sebanyak

1 ml dengan volume maksimal 5 ml sesuai dengan tata cara perlakuan tikus

yang benar (Lampiran III).

4.5.4 Persiapan Hewan Coba

Penelitian ini menggunakan Rattus norvegicus jantan sebanyak 42 ekor

yang sudah melalui seleksi kriteria inklusi dan eksklusi yang ditetapkan. Hewan

coba akan dibagi menjadi enam kelompok perlakuan yang akan ditempatkan di

kendang yang berukuran 40x50x20cm dengan maksimal tiga ekor tikus dalam

satu kandang untuk menghindari kompetisi untuk makanan dan minuman.

Selama tujuh hari tikus akan dilakukan masa adaptasi sebelum dilakukan diberi

perlakuan agar dapat menyesuaikan cara hidup di dalam kandang. Hewan coba

juga diberi perlakuan dengan prinsip dasar penggunaan hewan coba, yaitu 3R

(Replacement, Reduction, and Refinement) dan 5F (Five Freedom). Peneliti

juga akan memperhatikan lingkungan hidup hewan coba (Lampiran IV).

4.5.5 Pembuatan Pakan Tinggi Lemak Dan Kolesterol

Dalam penelitian ini hewan coba akan diberikan makanan tinggi lemak

yang akan membuat hewan coba memiliki kadar lemak yang tinggi. Pakan

tinggi lemak terdiri dari campuran kuning telur bebek 1ml/tikus/hari, kuning

telur puyuh 1ml/tikus/hari, dan minyak jelantah 1ml/tikus/hari yang akan

 35

diberikan menggunakan sonde. Telur puyuh dan telor bebek digunakan karena

memiliki kadar kolesterol yang tinggi, minyak jelantah mengandung asam

lemak jenuh yang memperburuk kondisi dislipidemia hewan coba.

4.5.6 Pembuatan Dosis Statin

Obat simvastatin diberikan pada satu kelompok hewan coba. Obat ini

terbukti efektif dalam perbaikan kondisi pasien dislipidemia dan obat ini

merupakan drug of choice yang terdapat di puskesmas. Peneliti menggunakan

dosis sebesar 20mg dengan acuan dari penelitian yang sebelumnya (Iriani et al.,

2021). Pemberian rumus statin terhadap hewan coba menggunakan rumus

sebagai berikut (Stevani, 2016.): dosis tikus 200g: Dosis umum manusia x

faktor konversi tikus dan manusia

: 20mg x 0,018

: 0,36mg/200gr BB

Obat diberikan dalam bentuk suspensi. Suspensi simvastatin dibuat

dengan cara digerus sediaan tablet simvastatin untuk menjadi halus, setelah itu

campurkan Na CMC 1% dan akuades, pemberian suspensi menggunakan sonde

lambung secara peroral (Lampiran V)

4.6 Prosedur Pelaksanaan Penelitian

4.6.1 Tahap Pelaksanaan Penelitian

1. Sampel hewan coba akan dipilih berdasarkan kriteria inklusi dan eksklusi.
 36

2. Dilakukan adaptasi pada hewan coba selama 7 hari dan diberikan makanan dan

minuman standar.

3. Hewan coba akan dibagi menjadi 6 kelompok yang akan dimasukkan kedalam

kendang yang diberi label.

4. Kelompok I (kelompok kontrol normal) akan diberikan makanan dan minuman

standar.

5. Kelompok II (kelompok kontrol negatif) diberikan makanan dan minuman

standar serta pakan tinggi lemak salama 28 hari.

6. Kelompok III (kelompok kontrol positif) akan diberi pakan tinggi lemak dan

pemberian statin dengan dosis 0,36 mg/200 mgBB selama 28 hari.

7. Kelompok IV (kelompok perlakuan 1) akan diberi pakan tinggi lemak dan

ekstrak etanol daun seledri dengan dosis 125 mg/kgBB selama 28 hari.

8. Kelompok V (kelompok perlakuan 2) akan diberi pakan tinggi lemak dan

ekstrak etanol daun seledri dengan dosis 250 mg/kgBB selama 28 hari.

9. Kelompok IV (kelompok perlakuan 3) akan diberi pakan tinggi lemak dan

ekstrak etanol daun seledri dengan dosis 400 mg/kgBB selama 28 hari.

10. Sampel darah akan diambil 2 kali, pengambilan pertama akan diambil untuk

melihat kondisi hewan coba tidak dalam kondisi dislipidemia dengan metode

pengambilan pemotongan ekor, lalu pengambilan yang kedua akan dilakukan

untuk mengecek kadar TG setelah pemberian pakan tinggi lemak dan ekstrak

etanol daun seledri di hari ke-35 dengan metode intracardiac.

 37

4.6.2 Prosedur Pengambilan Sampel

Pengambilan sampel dilaksanakan di Laboratorium Hewan Fakultas

Kedokteran Universitas Surabaya. Pengambilan sampel darah dilaksanakan

sebanyak 2 kali yaitu pengambilan awal dengan menggunakan metode

pemotongan ekor hewan coba setelah 7 hari masa adaptasi untuk melihat

apakah ada hewan coba yang mengalami abnormalitas kadar TG. Jika terdapat

kadar TG yang tinggi maka akan dilakukan adaptasi ulang dengan pemberian

pakan rendah lemak sampai kadar TG hewan coba normal. Pengambilan sampel

yang ke-dua akan dilakukan pada hari ke-35 setelah pemberian diet tinggi

lemak dan ekstrak etanol daun seledri dengan metode intracardiac untuk

pengambilan data (Lampiran VI).

` Pengambilan darah yang pertama peneliti akan melakukan pemotongan

di ujung ekor hewan coba menggunakan gunting yang telah di disinfeksi

menggunakan alkohol 70%, pengguntingan dilakukan sepanjang kurang lebih

0,5 cm untuk mengambil dari vena ekor hewan coba dengan volume sekitar 64

ml/kgBB dan volume maksimal darah adalah 10% dari volume total untuk

setiap 2-4 minggu yaitu pada penelitian ini menggunakan berat hewan coba 200

gram maka jumlah maksimal yang boleh diambil adalah 1,28 ml setiap satu kali

pengambilan. Pengambilan sampel darah yang ke-dua akan dilakukan melalui

intracardiac dengan metode euthanasia (Lampiran VII)

 38

4.6.3 Pengukuran Kadar Trygliceride (TG)

Kadar TG akan dihitung setelah pengambilan sampel darah intracardiac tikus

putih galur wistar. Sampel darah akan di-centrifuge untuk memisahkan dengan

serum darah. Serum darah tersebut akan dibaca melalui metode spektrofotometer.

4.7 Etika Penelitian

Pada proposal penelitian ini akan dilaksanakan uji kelaikan etik (ethical

review) di Komite Etik Penelitian Universitas Surabaya sebelum dilaksanakan

penelitian.
 39

4.8 Kerangka Oprasional

Sampel penelitian: 42 ekor tikus putih galur wistar jantan, usia 2-3 bulan, BB 150-
200 gram, tidak dislipidemia

Adaptasi tujuh hari dan pada hari ke tujuh dilakukan pengecekan awal kadar TG

Kelompok I Kelompok Kelompok Kelompok Kelompok Kelompok

II III IV V VI
7 ekor tikus
wistar 7 ekor tikus 7 ekor tikus 7 ekor tikus 7 ekor tikus 7 ekor tikus
wistar wistar wistar wistar wistar

Pemberian pakan tinggi lemak dan simvastatin dan ekstrak selama 28 hari

Tidak diberi Pakan Pakan Pakan Pakan Pakan

pakan tinggi tinggi tinggi tinggi tinggi
tinggi lemak dan lemak, lemak, lemak, lemak,
lemak, dan makanan makanan minuman minuman minuman
diberi minuman minuman standar dan standar dan standar dan
makanan standar standar dan ekstrak ekstrak ekstrak
minuman selama 28 simvastatin daun seledri daun seledri daun seledri
standar hari selama 28 dengan dengan dengan
hari dosis 125 dosis 250 dosis 400
mg/kgBB mg/kgBB mg/kgBB
selama 28 selama 28 selama 28
hari hari hari

Euthanasia

Pengambilan darah intrakardiak

Penilaian kadar TG

Pengolahan & Analisis data

Uji normalitas & homogenitas
Uji ANOVA atau Uji Kruskal-Wallis
-
 40

4.9 Pengolahan dan Analisis Data

Penelitian ini akan dilakukan pengolahan dan analisis data

menggunakan Statistical Product and Service (SPSS) versi 26. Langkah

analisis data akan dilakukan seperti berikut:

1. Sampel yang sudah terkumpul akan dilakukan pengecekan tingkat efektivitas

terhadap pemberian ekstrak etanol daun seledri dalam peningkatan kadar TG

dalam darah

2. Jika didapatkan syarat signifikansi lebih dari 0,05, akan dilakukan uji

normalitas menggunakan uji Shapiro-Wilk dan uji homogenitas menggunakan

uji Levene. Setelah itu akan dilakukan uji komparasi parametrik.

3. Jika data terdistribusi normal dan homogen akan dilakukan uji ANOVA pada

semua kelompok untuk membandingkan kadar TG. Setelah itu akan dilakukan

uji Post Hoc Least Significant Difference (LSD) jika didapatkan perbedaan

bermakna untuk menganalisis hubungan masing-masing kelompok perlakuan

4. Jika tidak terdistribusi normal dan/atau tidak homogen akan dilakukan uji non

parametrik Kruskal-Wallis
 DAFTAR PUSTAKA

Alves-Bezerra, M., & Cohen, D. E. (2018). Triglyceride metabolism in the liver.

Comprehensive Physiology, 8(1), 1–22.
https://doi.org/10.1002/cphy.c170012
Anneke, R. (n.d.). REVIEW: TERAPI HERBAL SEBAGAI ALTERNATIF
PENGOBATAN DISLIPIDEMIA.
BUKU PANDUAN PRAKTIKUM FARMAKOGNOSI FITOKIMIA. (n.d.).
Firman, A. B., Supiadi, D., Yani, A., Unjani, K., Ilmu, B., & Masyarakat, K.
(n.d.). Program Studi Fakultas Kedokteran Unjani, 2Bagian Patologi
Klinik DOSIS EKSTRAK DAUN SELEDRI (A. graveolens linn) YANG
MENDEKATI ALLOPURINOL DALAM MENURUNKAN
HIPERURISEMIA PADA MENCIT (Mus musculus).
Gani, N., Momuat, L. I., & Pitoi, M. M. (n.d.). Profil Lipida Plasma Tikus
Wistar yang Hiperkolesterolemia pada Pemberian Gedi Merah
(Abelmoschus manihot L.).
Garg, R., Aggarwal, S., Kumar, R., & Sharma, G. (2015). Association of
atherosclerosis with dyslipidemia and co-morbid conditions: A descriptive
study. Journal of Natural Science, Biology and Medicine, 6(1), 163–168.
https://doi.org/10.4103/0976-9668.149117
Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. (n.d.).
Hak Cipta © dan Hak Penerbitan dilindungi Undang-undang. (n.d.).
insight review articles. (2000). www.nature.com
Iriani, Y., Ramona, Y., & Astiti, N. P. A. (2021). Potensi Ekstrak Ethanol Daun
Salam Dan Air Rebusan Daun Salam Untuk Memperbaiki Profil Lipid
(Ldl-Kolesterol) Darah Pada Tikus Wistar. Metamorfosa: Journal of
Biological Sciences, 8(1), 89.
https://doi.org/10.24843/metamorfosa.2021.v08.i01.p09
Jebari-Benslaiman, S., Galicia-García, U., Larrea-Sebal, A., Olaetxea, J. R.,
Alloza, I., Vandenbroeck, K., Benito-Vicente, A., & Martín, C. (2022).

39
 40

Pathophysiology of Atherosclerosis. In International Journal of Molecular

Sciences (Vol. 23, Issue 6). MDPI. https://doi.org/10.3390/ijms23063346
Keenam dr, E., U S, nab M., Geriatri Divisi Geriatri, K., Alwi Konsultan
Kardiologi Divisi Kardiologi, I., Sudoyo Konsultan Hematologi-Onkologi
Medik Divisi Hernatologi-Onkologi Medik, A. W., lIr, D., Dalarn, P.,
Simadibrata Konsultan Gastroenterologi-Hepatologi Divis, M. K., Ilrnu
Penyakit Dalarn FKUI, D., Bambang Setiyohadi Konsultan Reurnatologi
Divisi Reurnatologi, J., & Fahrial Syam Konsultan Gastroenterologi-
Hepatologi Divisi Gastroenterologi, A. (n.d.). ILMU PENYAKIT DALAM
Jilid I-\NI t t i N A Editor Siti Setiati.
Lewis, S. J. (2009). Prevention and Treatment of Atherosclerosis: A
Practitioner’s Guide for 2008. American Journal of Medicine, 122(1
SUPPL.). https://doi.org/10.1016/j.amjmed.2008.10.016
Mahalle, N., Garg, M., Naik, S., & Kulkarni, M. (2014). Study of pattern of
dyslipidemia and its correlation with cardiovascular risk factors in patients
with proven coronary artery disease. Indian Journal of Endocrinology and
Metabolism, 18(1), 48–55. https://doi.org/10.4103/2230-8210.126532
Miller, M., Stone, N. J., Ballantyne, C., Bittner, V., Criqui, M. H., Ginsberg, H.
N., Goldberg, A. C., Howard, W. J., Jacobson, M. S., Kris-Etherton, P. M.,
Lennie, T. A., Levi, M., Mazzone, T., & Pennathur, S. (2011).
Triglycerides and cardiovascular disease: A scientific statement from the
American Heart Association. Circulation, 123(20), 2292–2333.
https://doi.org/10.1161/CIR.0b013e3182160726
Mosca, S., Araújo, G., Costa, V., Correia, J., Bandeira, A., Martins, E.,
Mansilha, H., Tavares, M., & Coelho, M. P. (2022). Dyslipidemia
Diagnosis and Treatment: Risk Stratification in Children and Adolescents.
In Journal of Nutrition and Metabolism (Vol. 2022). Hindawi Limited.
https://doi.org/10.1155/2022/4782344
Mutia, S., & Zairin Thomy, dan. (2018). Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol
Daun Andong (Cordyline fruticosa (L.) A. Chev) Terhadap Kadar
Kolesterol Total dan Trigliserida Darah Tikus Putih (Rattus norvegicus)
Hiperkolesterolemia The Effect of Ethanol Extract of Andong (Cordyline
fruticosa (L.) A. Chev) Leaves on Total Cholesterol and Triglycerides
Level of The Hypercholesterolemia White Male Rat (Rattus norvegicus)
Blood. In Jurnal Bioleuser (Vol. 2, Issue 2).
http://www.jurnal.unsyiah.ac.id/bioleuser/

40
 41

Nashriana, N., Wirjatmadi, B., & Adriani, M. (2015a). Combined Food (Bekatul
dan Lemak) Menurunkan Kadar Kolesterol Total, Trigliserida, dan LDL
pada Tikus Galur Wistar Combined Food (Rice Bran and Fat) Reduce of
the Total Cholesterol Levels, Triglycerides, and LDL of Wistar Strain Rats.
In Jurnal Kedokteran Brawijaya (Vol. 28, Issue 3).
Nashriana, N., Wirjatmadi, B., & Adriani, M. (2015b). Combined Food (Bekatul
dan Lemak) Menurunkan Kadar Kolesterol Total, Trigliserida, dan LDL
pada Tikus Galur Wistar Combined Food (Rice Bran and Fat) Reduce of
the Total Cholesterol Levels, Triglycerides, and LDL of Wistar Strain Rats.
In Jurnal Kedokteran Brawijaya (Vol. 28, Issue 3).
Nurmiati, N., Nuryanti, S., & Tahril, T. (2020). Antioxidant Activity Test of
Ethanol and Water Extracts of Celery (Apium graveolens L.). Jurnal
Akademika Kimia, 9(2), 93–101.
https://doi.org/10.22487/j24775185.2020.v9.i2.pp93-101
Ormazabal, V., Nair, S., Elfeky, O., Aguayo, C., Salomon, C., & Zuñiga, F. A.
(2018). Association between insulin resistance and the development of
cardiovascular disease. In Cardiovascular Diabetology (Vol. 17, Issue 1).
BioMed Central Ltd. https://doi.org/10.1186/s12933-018-0762-4
Pol, T., Held, C., Westerbergh, J., Lindbäck, J., Alexander, J. H., Alings, M.,
Erol, C., Goto, S., Halvorsen, S., Huber, K., Hanna, M., Lopes, R. D.,
Ruzyllo, W., Granger, C. B., & Hijazi, Z. (2018). Dyslipidemia and risk of
cardiovascular events in patients with atrial fibrillation treated with oral
anticoagulation therapy: Insights from the ARISTOTLE (Apixaban for
Reduction in Stroke and Other Thromboembolic Events in Atrial
Fibrillation) trial. Journal of the American Heart Association, 7(3).
https://doi.org/10.1161/JAHA.117.007444
Rafieian-Kopaei, M., Setorki, M., Doudi, M., Baradaran, A., & Nasri, H. (2014).
Atherosclerosis: Process, Indicators, Risk Factors and New Hopes. In
International Journal of Preventive Medicine (Vol. 5, Issue 8).
www.ijpm.ir
Risk Of Premature Death Due To Ncds In Indonesia,WHO 2018. (n.d.).
Sarwindah, D., Penelitian, J., & Profesional, P. (n.d.). POTENSI SELEDRI
SEBAGAI ANTI KOLESTEROL.
http://jurnal.globalhealthsciencegroup.com/index.php/JPPP
seledri kandungan. (n.d.).

41
 42

seledri kandungan 1. (n.d.).

Stevani. (n.d.). Praktikum Farmakologi komprehensif.
Talayero, B. G., & Sacks, F. M. (2011). The role of triglycerides in
atherosclerosis. Current Cardiology Reports, 13(6), 544–552.
https://doi.org/10.1007/s11886-011-0220-3
Tandi, J. (2017). PENGARUH EKSTRAK ETANOL DAUN JAMBU AIR
(Syzygium aqueum (Burm f.)Alston) TERHADAP GLUKOSA DARAH,
UREUM DAN KREATININ TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus). Journal
Of Tropical Pharmacy And Chemistry, 4(2), 43–51.
https://doi.org/10.25026/jtpc.v4i2.137
Udin, B., & Kholifah, E. (n.d.). VI (1), hal. In Jurnal Ilmiah Bakti Farmasi (Vol.
2021).
Utami, R. W., Sofia, S. N., & Murbawani, E. A. (2017a). HUBUNGAN
ANTARA ASUPAN KARBOHIDRAT DENGAN PROFIL LIPID PADA
PASIEN PENYAKIT JANTUNG KORONER. Etisa Adi Murbawani JKD,
6(2), 1143–1155.
Utami, R. W., Sofia, S. N., & Murbawani, E. A. (2017b). HUBUNGAN
ANTARA ASUPAN KARBOHIDRAT DENGAN PROFIL LIPID PADA
PASIEN PENYAKIT JANTUNG KORONER. Etisa Adi Murbawani JKD,
6(2), 1143–1155.
WHO. (2021). Cardiovascular Diseases (CVDs). (2021).
Wijayanti, R., Rosyid, A., & Izza, I. K. (2017). Pengaruh ekstrak kulit umbi
bawang putih (Allium sativum L.) Terhadap kadar kolesterol total darah
tikus jantan galur wistar diabetes mellitus. Pharmaciana, 7(1), 9.
https://doi.org/10.12928/pharmaciana.v7i1.4075

42
 LAMPIRAN

Lampiran I

Teknik Pembuatan Ektrak Daun Seledri

(Tandi,2017) (Nurmiati et al.,2020) (Wijayanti et al.,2017) (Hartini &

Wulandari,2016)

1. Instrumen dan Bahan

a. Instrument
• Maserator
• Gelas Beaker
• Corong Buchner
• Ayakan Mesh 60
• Blender
• Kertas Saring
• Rotary evaporator
• Waterbath
• Timbangan Digital
b. Bahan
• Daun seledri
• Etanol 96% 250ml
2. Pembuatan Simplisia
a. Cuci dan potong kecil-kecil 25gram daun seledri (Apium graveolens)
b. Keringkan menggunakan oven untuk mengurangi kadar air
c. Aduk 30 menit setiap hari dan ganti pelarut yang lama dengan pelarut
yang baru setiap 24 jam agar hasil jernih
d. Saring hasil maserat dengan kain flannel dan dengan kertas saring
sebanyak dua kali.
e. Hasil ekstraksi dipekatkan dengan pelarut yang diuapkan menggunakan
rotary evaporator kemudian dengan waterbath.
3. Proses Maserasi dan Ekstraksi
a. Siapkan serbuk simplisia di dalam wadah yang tertutup
b. Tuangkan etanol 96% sebanyak 250ml Bersama simplisia selama lima
hari
c. Aduk selama 30 menit setiap hari dan ganti pelarut yang lama dengan
pelarut yang baru setiap 24 jam agar hasil jernih

39
 40

d. Saring hasil maserat dengan kain flannel dengan kertas saring sebanyak
dua kali
e. Hasil ekstraksi dipekatkan dengan pelarut yang diuapkan menggunakan
rotatory evaporator kemudian dengan waterbath
 41

Lampiran II

Penentuan Pemberian Dosis Ekstrak Daun Seledri

Hewan diberikan suspensi ekstrak daun seledri sebanyak 1 ml. dalam 1 ml

ekstrak etanol daun seledri terdapat dosis yang sudah ditentukan, yaitu 125mg/kgBB,
250mg/kgBB, dan 400mg/kgBB. Pembuatan larutan suspensi membutuhkan ekstrak
daun seledri, Na CMC 1% dan akuades. Suspensi pada kelompok perlakuan 1
(kelompok IV) yang berdosis 125mg/kgBB dengan Langkah seperti berikut :
1. Berat badan hewan coba akan di timbang terlebih dahulu dan akan di rata-rata,
hasil dari berat rata-rata dalam kilogram dikali dosis 200mg/kgBB
2. Dimisalkan rata-rata berat badan tikus 200g atau 0,2 maka untuk satu ekor tikus
tiap kelompok akan di berikan 20 mg/tikus/hari dengan perhitungan 0,2kg x
200mg.
3. Lalu total dosis ekstrak setiap kelompok perlakuan 1 yaitu 20 mg dikalikan
dengan 7 tikus dengan hasil 175mg ekstrak daun seledri.
4. Suspensi akan dibuat untuk 7 hari sehingga siperlukan total 1225mg seledri
dengan rumus 175mg x 7 hari.
5. Akuades sebanyak 49 ml untuk 7 hari dengan rumus 1ml x 7 ekor tikus x 7 hari.
6. Na CMC dihitung dengan rumus: persen CMC dikali dengan total akuades 7
ekor tikus selama 7 hari dengan total 0,49 gram Na CMC dengan perhitungan
1% x 49 ml
7. Dosis ekstrak selama 7 hari sebanyak 1225mg dengan rumus 175mg x7 hari
dan akan dicampurkan akuades 49ml dan Na CMC 0,49gram
Langkah diatas akan sama digunakan untuk membuat dosis kelompok perlakuan 2
(250mg/kgBB) dan kelompok perlakuan 3 (400mg/kgBB)
 42

Lampiran III

Cara Pemberian Obat Hewan Coba

(Stevani, 2016)

1. Cara memegang dan mengekang hewan coba

Jika tikus dipegang dengan baik dan benar maka tikus akan merespon
dengan baik. Jika tikus terancam tikus akan melakukan respon pertahanan diri
dengan menyerang. Saat memegang tikus gunakanlah sarung tangan sebagai
pelindung. Setelah menggunakan sarung tangan, angkat tikus dengan lembut
dan letakan tangan di dada bagian atas lalu letakkan ibu jari di bawah rahang
tikus. Usap lembut bagian perut tikus supaya membuat tikus merasa nyaman,
jangan menggunakan nada yang tinggi atau berbicara dengan keras saat
memegang tikus.
2. Cara pemberian ekstrak / obat peroral

Pemberian ekstrak dan obat menggunakan metode oral dengan bantuan

alat sonde. Sonde akan ditempelkan di langit mulut tikus lalu setelah itu secara
perlahan masukkan sonde ke esofagus dan saat mencapai esofagus ekstrak /
obat dimasukkan dengan volume total pemberian total pemberian 5ml.
 43

Lampiran IV

Pedoman Etika Penggunaan Dan Pemeliharan Hewan Coba

(Stevani, 2016)

Penelitian yang menggunakan hewan coba harus menerapkan prinsip 3R

(Replacment, Reduction, And Refinement). Replacement adalah prinsip yang membuat
hewan coba menjadi hewan coba pilihan terakhir, dan menggunakan metode in vitro
sebagai pilihan utama. Reduction mengacu pada pembatasan jumlah minimal dengan
kualitas yang baik untuk mendapat hasil valid. Refinement merupakan pemberlakuan
dengan sebaik mungkin terhadap hewan coba agar tidak mengalami stress ataupun rasa
sakit. Jika ada prosedur yang menimbulkan rasa sakit maka hewan coba harus
dilakukan anastesi.
Hewan coba memiliki hak yang disebut sebagai Animal Walfare yang terdapat
dalam 5F (Five of Freedom), yang terdiri dari berikut:
1. Freedom from hunger and thirst
Hewan coba wajib diberi makanan dan minuman dengann kadar nutrisi cukup
dan higienis agar terhindar dari kelaparan dan kehausan.
2. Freedom from thermal and physical discomfort
Hewan coba harus bebas dari rasa tidak nyaman akibat hawa panas dan
menempatkan hewan coba ditempat yang layak.
3. Freedom from injury, disease, and pain.
Hewan coba wajib dirawat dengan baik, diberi tindakat untuk mencegah
penyakit, dan mendiagnosis dengan tepat agar mendapat pengobatan yang
tepat.
4. Freedom to express most normal pattern of behavior
Hewan coba dibiarkan mengekspresikan prilaku alami hewan coba serta
memberikan pasangan atau teman untuk berinteraksi dan kawin.
5. Freedom from fear and distress
 44

Peneliti harus menghindari Tindakan dan kondisi yang menimbulkan rasa takut
dan stress ke hewan coba. Salah satu cara adalah menghindari konflik dengan
spesies lain dan tidak memunculkan predator di lingkungan hewan coba.
Hal-hal yang dapat dilakukan oleh peneliti untuk memberi kenyamanan dan
hak hewan coba sebagai berikut :
1. Tempat tinggal dan lingkungan
Hewan coba diletakkan di kendang yang layak secara bentuk, ukuran, suhu,
dan bahan yang baik. Area kendang harus bebas dari nyamuk dan diberi insect
proof screen, udara,suhu dan sirkulasi yang baik serta tidak lembab. Kendang akan
berbentuk segiempat dengan ukuran 40x50x20, yang di dasarnya diberi alas yang
dapat menyerap basah dan bau. Dalam penelitin ini dalam satu kendang akan
diberikan maksimal tiga ekor perkandang agar menghindari kompetisi dan
meminimalisir stress.
2. Sanitasi
Untuk menjaga kendang tetap bersih dan baik maka akan dilakukan
pembersihan dan pemberian disinfektan, peneliti juga wajib memakai jas lab,
masker, dan sarung tangan untuk perlindungan diri.
3. Kesediaan makanan
Makanan yang diberikan kepada hewan coba adalah makanan yang
bernutrisi dan dalam jumlah yang cukup. Makanan juga disimpan ditempat yang
bebas dari serangga dan tidak lembab.
4. Kebutuhan air
Air harus dapat mudah dan lancer untuk diminum hewan coba serta
memiliki kandungan mineral yang tidak terlalu tinggi, air juga harus bersih dari
kotoran dan tidak membasahi kendang
5. Sirkulasi udara
Ventilasi bertujuan agar memberi sirkulasi udara yang baik dan dapat diatur,
exhaust fan akan membantu sirkulasi udara menjadi lebih terkontrol
6. Penerangan
 45

Penerangan yang baik diperlukan untuk hewan berreproduksi. Penerangan

siklus terang gelap harus diperhatikan karena dikhawatirkan akan menggangu
proses reproduksi.

7. Kelembaban dan temperatur ruangan

Kelembaban dan suhu didalam ruangan berpengaruh terhadap kemampuan hewan
untuk mengatur panas tubuhnya. Jika terlalu panas maka akan mengakibatkan
hewan coba pingsan, suhu yang direkomendasikan untuk tikus adalah 30°C.
8. Keamanan
Keamanan disini adalah bertujuan untuk menjaga hewan coba agar terhindar dari
infeksi dengan membatasi orang yang menyentuh dan mengeluarkan hewan coba
tanpa tujuan untuk penelitian ini.
9. Training / kursus bagi personal
Diperlukan pelatihan dari orang yang sudah berpengalaman untuk memberikan
pelatihan kepada orang baru di bidang penelitian hewan coba karena banyaknya
aspek ilmu.
10. Identifikasi hewan
Identifikasikan masing masing hewan coba bisa mengunakan tag
individual,kalung leher ataupun tanda yang lain dan tidak membuat hewan coba
merasa sakit. Selain hewan coba kendang juga diberi penanda label.
11. Penerimaan hewan baru
Jika ada penambahan atau pergantian hewan coba, maka akan ditempatkan di
tempat terpisah untuk dilakukan adaptasi terlebihdahulu di laboratorium.
 46

Lampiran V

Pembuatan Suspensi Simvastatin

(Stevani,2016)

Peneliti menggunakan simvastatin dengan dosis 0,36mg/200gr BB hewan coba

lalu di konversikan ke dosis manusia yaitu 20mg/kgBB. Suspensi akan dibuat dengan
simvastatin yang akan dilarutkan di Na CMC 1% yang bertujuan untuk mengikat dan
menstabilkan suspense. Pemberian suspensi akan dilakukan menggunakan sonde
lambung secara peroral.
1. Pembuatan Natrium CMC 1%
a. Panaskan 200ml air hingga mendidih
b. Ukur berat Na CMC sebanyak 1 gram
c. Masukkan Na CMC ke gelas beaker yang berukuran 300ml lalu tambahkan
50ml air panas
d. Aduk hingga homogen mengunakan hot plate sampai serbuk putih hilang dan
terjadi perubahan konsistensi menjadi seperti gel
e. Tambahkan secara perlahan air panas dengan diaduk hingga volume larutan
menjadi 100ml, lalu dingankan
2. Pembuatan suspensi simvastatin
a. Siapkan empat tablet simvastatin 5mg, dua tablet simvastatin 10mg, dan satu
tablet simvastatin 20mg
b. Gerus tablet simvastatin sampai halus
c. Pindahkan serbuk simvastatin ke dalam Erlenmeyer 100ml
d. Tambahkan Na CMC 1% sebanyak 50ml lalu kocok hingga homogen
e. Cukupkan volume sampai 100ml dengan Na CMC 1%
 47

Lampiran VI

Teknik Euthanasia Hewan Coba

(Stevani, 2016)

Euthanasia merupakan proses terminasi tanpa menimbulkan rasa sakit.

Euthanasia akan dilakukan pada saat akhir penelitian untuk melihat organ dalam,efek
toksisitas obat, atau kesakitas pada hewan coba pada saat proses penelitian.
Euthanasia memiliki dua metode, yaitu secara kimiawi dan fisik. Sebelumitu hewan
coba akan diberi anti nyeri untuk menghilangan nyeri lalu aka nada tahap amnesia dan
tahap imobilisasi. Pemberian anastesi kimiawi bisa diberikan satu per satu untuk
mencapai semua tahap anastesi atau dapat diberikan obat analgesic dan sedatif.
Euthanasia secara fisik dilakukan sebagai berikut:
1. Ekor hewan coba dipegang dan digantung ke tempat yang bisa meregangkan
badannya.
2. Saat hewan coba meregangkan badanya, tempelkanlah suatu penahan yang
dipegang dan tangan kiri di tengkuk hewan coba
3. Tarik ekor hewan coba dengan menggunakan tangan kanan secaraa kuat-kuat
sehingga terjadi dislokasi pada leher hewan coba dan akan terbunuh
 48

Lampiran VII

Pengukuran Profil Lipid dengan Metode Spektrofotomeri

1. . Instrumen dan Bahan

a. Instrumen

• Test tube kecil

• Mikropipet

• Tip mikropipet

• Vortex

• Waterbath

• Spektrofotometer

• Cuvette

2. Bahan

• Serum sampel

• Reagen dan standar TG

• Reagen kolesterol

3. Kolorimetri

a. Sediakan tabung blank, standar, dan tabung sampel

b. Masukkan 1ml reagen kolesterol ke tabung blank, 1ml reagen kolesterol

dan 10 mikroliter standar TG ke tabung standar, 1ml dan 10 mikroliter

sampel ke tabung sampel

 49

c. Kocok perlahan dan letakkan di waterbath dengan suhu 37 derajat

Celcius selama 5 menit

d. Letakkan di spektrofotometri

e. Hitung blank dan standar

f. Tuliskan hasil

4. Kalkulasi hasil

A(Sampel) mg
C(standard) = ⋯ T
A(standard) dL
50