PROPOSAL PENELITIAN

EFEK PENCEGAHAN EKSTRAK ETANOL DAUN SELEDRI (Apium

graveolens L.) TERHADAP KADAR TRIGLYCERIDE (TG) TIKUS WISTAR
(Rattus norvegicus) YANG DIINDUKSI DIET TINGGI LEMAK

HIVANKATIC HIDEKI

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SURABAYA
2023
 PROPOSAL PENELITIAN

EFEK PENCEGAHAN EKSTRAK ETANOL DAUN SELEDRI (Apium

graveolens L.) TERHADAP KADAR TRIGLYCERIDE (TG) TIKUS WISTAR
(Rattus norvegicus) YANG DIINDUKSI DIET TINGGI LEMAK

HIVANKATIC HIDEKI
190118035

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SURABAYA
2023

ii
 LEMBAR PERSETUJUAN

MATERI PROPOSAL TELAH DISETUJUI

UNTUK DILAKSANAKAN SEMINAR PROPOSAL

Oleh:

Dosen Pembimbing I Dosen Pembimbing II

dr. Dita Sukmaya Prawitasari, M.Si. dr. Devitya Angielevi Sukarno, M.Si.
NPK 216048 NPK 216047

Mengetahui,
Wakil Dekan I

dr. Risma Ikawaty, Ph.D.

NPK 218015

iii
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas

berkat dan anugerahNya, penulis dapat menyelesaikan penyusunan Proposal

Skripsi yang berjudul “Efek Pencegahan Ekstrak Etanol Daun Seledri (Apium

graveolens L.) Terhadap Trigliserida (TG) Tikus Wistar (Rattus norvegicus) yang

Diinduksi Diet Tinggi Lemak”.

Penulis dapat menyelesaikan penyusuan Proposal Skripsi ini juga berkat

dari bantuan, bimbingan. dan dukungan dari dr. Dita Sukmaya Prawitasari , M.Si.

dan dr. Devitya Angielevi, M.Si. selaku pembimbing penulis serta semua pihak di

kehidupan penulis yang memberikan dukungan tanpa henti. Oleh karena itu,

penulis ingin mengucapkan terimakasih sebesar-besarnya kepada:

1. Dr. Ir. Benny Lianto, M.M.B.A.T, selaku Rektor Universitas Surabaya.

2. Prof. Dr. dr. Rochmad Romdoni, Sp.PD., Sp.JP(K)., FIHA., FAsCC., FACC

selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Surabaya, dr. Risma Ikawaty,

Ph.D. selaku Wakil Dekan 1 Fakultas Kedokteran Universitas Surabaya dan dr.

Sawitri Boengas, Sp.M. selaku Wakil Dekan 2 Fakultas Kedokteran

Universitas Surabaya.

3. dr. Dita Sukmaya Prawitasari, M.Si. selaku dosen Pembimbing I yang

memberikan bimbingan, ilmu, saran, dan arahan dalam penyusunan proposal.

4. dr. Devitya Angielevi Sukarno, M.Si. selaku dosen Pembimbing II yang

memberikan bimbingan, ilmu, saran, dan arahan dalam penyusunan proposal.

iv
5. dr. Jefman Efendi Marzuki HY, Sp.F.K. selaku penanggung jawab tugas akhir

yang membantu penulis dalam pengurusan tugas akhir.

6. Seluruh dosen dan staff Fakultas Kedokteran Universitas Surabaya yang terlah

berbagi ilmu dan membantu penulis sehingga dapat menyelesaikann proposal.

7. Kedua orang tua dan adik penulis yang memberikan semangat,bantuan, dan

mendoakan selama proses perkuliahan dan penyusunan proposal

8. Teman-teman Fakultas Kedokteran yang selalu memberi dukungan dalam

proses perkuliahan dan penyusnan proposal

9. Diri saya sendiri yang selalu berusaha dan tidak menyerah dalam proses

perkuliahan dan penyusunan proposal.

Penulis menyadari bahwa proposal penelitian ini tidak sempurna. Oleh

karena itu penulis menerima kritik dan saran membangun untuk membuat proposal

menjadi lebih baik. Akhir kata penulis berharap proposal ini dapat berguna dan

bermanfaat bagi pembaca.

Surabaya, 7 September 2023

Penulis

v
 DAFTAR ISI

LEMBAR PERSETUJUAN ................................................................................ iii

KATA PENGANTAR .......................................................................................... iv
DAFTAR ISI ......................................................................................................... vi
BAB 1 PENDAHULUAN ..................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ..................................................................................... 1
1.2 Rumusan Masalah ................................................................................ 3
1.3 Tujuan Penelitian.................................................................................. 3
1.3.1 Tujuan Umum ............................................................................. 3
1.3.2 Tujuan Khusus ............................................................................ 4
1.4 Manfaat Penelitian................................................................................ 4
1.4.1 Manfaat Bagi Peneliti ................................................................. 4
1.4.2 Manfaat Umum ........................................................................... 4
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................ 5
2.1 Dislipidemia ......................................................................................... 5
2.1.1 Patofisiologi ................................................................................ 5
2.2 Atherosklerosis ..................................................................................... 6
2.2.1 Patofisiologi ................................................................................ 6
2.2.2 Tatalaksana ................................................................................. 7
2.2.3 Hubungan Dislipidemia Dengan Terjadinya Atherosklerosis .... 9
2.2.4 Hubungan antara hipertrigleseridemia dengan atherosklerosis .. 9
2.3 Biosintesis Trigliserida....................................................................... 10
2.3.1 Proses biosintesis trigliserida .................................................... 10
2.4 Seledri................................................................................................. 11
2.4.1 Taksonomi ................................................................................ 11
2.4.2 Morfologi .................................................................................. 11
2.4.3 Kandungan Aktif Dan Manfaat Daun Seledri .......................... 13
2.4.4 Hubungan Seledri Dengan Kadar Trigliserida ......................... 13
2.5 Hewan Coba Tikus Putih Galur Wistar .............................................. 14
2.5.1 Hewan Coba.............................................................................. 14
2.5.2 Pemeriksaan Trigliserida Pada Tikus ....................................... 16

vi
BAB 3 KERANGKA KONSEPTUAL .............................................................. 17
3.1 Kerangka Konseptual ......................................................................... 17
3.2 Penjelasan Kerangka Konseptual ....................................................... 18
3.3 Hipotesis ............................................................................................. 20
BAB 4 METODE PENELITIAN ....................................................................... 21
4.1 Jenis dan Rancangan Penelitian ......................................................... 21
4.1.1 Jenis Penelitian ......................................................................... 21
4.1.2 Rancangan Penelitian................................................................ 21
4.2 Lokasi dan Waktu Penelitian.............................................................. 22
4.3 Sampel, Besar Sampel dan Teknik Sampling .................................... 23
4.3.1 Sample ...................................................................................... 23
4.3.2 Besar Sample ............................................................................ 23
4.3.3 Teknik Pengambilan Sampling ................................................. 25
4.4 Variabel Penelitian dan Definisi Operasional .................................... 25
4.4.1 Variabel Penelitian.................................................................... 25
4.4.2 Definisi Operasional ................................................................. 26
4.5 Intrument Penelitian dan Persiapan Penelitian ................................... 29
4.5.1 Instrument Penelitian ................................................................ 29
4.5.2 Bahan Penelitian ....................................................................... 30
4.5.3 Ekstrak Daun Seledri ................................................................ 30
4.5.4 Persiapan Hewan Coba ............................................................. 32
4.5.5 Pembuatan Pakan Tinggi Lemak Dan Kolesterol ..................... 33
4.5.6 Pembuatan Dosis Statin ............................................................ 33
4.6 Prosedur Pelaksanaan Penelitian ........................................................ 34
4.6.1 Tahap Pelaksanaan Penelitian................................................... 34
4.6.2 Prosedur Pengambilan Sampel ................................................. 35
4.6.3 Pengukuran Kadar Trygliceride (TG) ....................................... 36
4.7 Etika Penelitian .................................................................................. 36
4.8 Kerangka Oprasional .......................................................................... 37
4.9 Pengolahan dan Analisis Data ............................................................ 38
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 39

vii
LAMPIRAN ......................................................................................................... 39

viii
 DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH
Apo-B48 = Apolipoprotein B-48

Apo-E = Apolipoprotein

ATP = Adenosin Triphosphate

CM remnant = Chylomicron Remnant

FAS = Fatty Acid Synthase

HDL = High Density Lipoprotein

HMG-CoA = Hydroxy Methylglutaryl Coenzyme A

IL-1 = Interleukin 1

LDL = Low Density Lipoprotein

LDL-OX = Oxidation Low Density Lipoprotein

MCP-1 = Monocyte Chemotactic Protein – 1

PPARs = Peroxisome Proliferator Activated Receptor

SMC = Struktural Maintenance Of Chromosomes

TG = Trigliserida

TGrL = Triglyceride Rich Lipoprotein

TNF α = Tumor Necrosis Factor

VLDL = Very Low Density Lipoprotein

ix
 BAB 1

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Penyakit kardiovaskular merupakan penyebab kematian tertinggi di dunia,

penyakit ini telah membunuh sekitar 17,9 juta orang pada 2019 (WHO,2021). Di

Indonesia, penyakit kardiovaskular menempati peringkat pertama dengan 35%

total kematian (WHO, 2018). Salah satu faktor utama terjadinya penyakit jantung

koroner adalah atherosklerosis, faktor utama terjadinya atherosklerosis adalah

dislipidemia.(Pol et al., 2018).

Dislipidemia merupakan suatu kelainan metabolisme lipid yang dikenal

sebagai salah satu faktor resiko terjadinya penyakit jantung koroner, disamping

faktor resiko lain seperti hipertensi dan diabetes melitus (Mahalle et al., 2014).

Dislipidemia merupakan kelainan metabolisme lipid yang ditandai dengan

penurunan atau peningkatan kadar lipid dalam plasma. Kelainan lipid utamanya

adalah kenaikan dari kolesterol total (K-Total), trigliserida (TG), low density

lipoprotein (LDL), dan penurunan dari high density lipoprotein (HDL). Tingginya

kadar trigliserida (TG) dapat disebabkan oleh konsumsi makanan tinggi lemak

(Miller et al., 2011). Makanan berlemak yang masuk ke lambung akan

diemulsifikasi dan dicampur dengan garam empedu sehingga akan terbentuk badan

misel lemak dan akan diserap di usus halus (Guyton, 2016).

Peningkatan kadar trigliserida dapat menggangu jaringan adiposa sebagai

tempat penyimpanan lemak dan pengatur homeostasis metabolik yang selanjutnya

dapat menyebabkan peningkatan infiltrasi makrofag ke dalam jaringan adiposa

1
 2

yang pada akhirnya memicu munculnya resistensi insulin di jaringan. Resistensi

insulin selanjutnya akan mengakibatkan penurunan dari aktivasi lipoprotein lipase

yang akan mengakibatkan tingginya konsentrasi triglyceride-rich lipoprotein di

dalam plasma. Trigliserida yang tinggi dalam darah akan dihidrolisis sehinngga

menghasilkan small dense LDL yang bersifat lebih aterogenik dibandingkan

dengan LDL sehingga meningkatkan resiko penyakit jantung koroner (Utami et al.,

2017)

Pemilihan terapi farmakologi dislipidemia saat ini terdiri dari obat

golongan statin, obat golongan ini cenderung efektif namun sebagian besar pasien

masih mengalami kejadian penyakit jantung koroner dan ada laporan efek samping

yang kurang baik yaitu miopati. Karena efek samping tersebut, dibutuhkan

senyawa lain untuk terapi dari dislipidemia,yaitu obat-obat herbal telah digunakan

selama beberapa dekade dan efektif dalam terapi dislipidemia serta memiliki efek

samping yang rendah (Anneke,2018). Tanaman herbal yang mudah ditemukan di

Indonesia adalah Seledri (Apium graveolens L.), penelitian tentang seledri telah

dilakukan oleh beberapa peneliti, salah satunya menuliskan bahwa seledri

mengandung flavonoid, tanin, saponin,dan fitosterol sehinggai memiliki banyak

khasiat yang baik untuk tubuh seperti antihipertensi dan obat

diuretik(Sarwindah,2020.) belum ada penelitian yang membahas tentang efek

pencegahan peningkatan kadar trigliserida.

Seledri memiliki kandungan Flavonoid yang akan menghambat Fatty Acid

Synthase (FAS), penghambatan terhadap FAS akan secara langsung menurunkan

pembentukan asam lemak sehingga trigliserida yang terbentuk akan berkurang.

 3

Saponin akan menghambat absorbsi kolesterol dan trigliserida di dalam usus dan

meningkatkan reaksi pembentukan asam empedu sehingga akan diekskresikan

melalui feses. Tanin dapat menghambat adipogenesis dan menghambat absorbsi

intertinal, tanin juga bersifat sebagai anti radikal bebas dan dapat mengaktifkan

enzim antioksidan yang akan mencegah oksidasi dari kolesterol LDL sehingga

dapat mengurangi resiko penyakit kardiovaskuler (Mutia et al, 2018). Fitosterol

akan menghambat absorbs kolesterol dari makanan dan menghambat reasobsi

kolesterol asam empedu dengan memodifikasi asetil Ko-A karboksilase dan 7α-

dehidroksilase sehingga akan meningkatkan ekresi asam empedu melalui

feses(Nashriana et al., 2015). Berdasarkan data tersebut maka peneliti ingin

mengetahui efek seledri (Apium graveolens L.) terhadap pencegahan kenaikan

kadar trigiserida (TG) pada tikus wistar (Rattus norvegicus) yang diberi diet tinggi

lemak.

1.2 Rumusan Masalah

Apakah ekstrak etanol seledri (Apium graveolens L) dapat mencegah

kenaikan kadar trigliserida pada tikus wistar (Rattus norvegicus) yang diinduksi

diet tinggi lemak?

1.3 Tujuan Penelitian

1.3.1 Tujuan Umum

Untuk mengetahui pemberian ekstrak etanol seledri (Apium graveolens L)

terhadap upaya pencegahan kondisi dislipidemia.

 4

1.3.2 Tujuan Khusus

Untuk mengetahui pengaruh etanol seledri (Apium graveolens L) terhadap

pencegahan peningkatan kadar trigliserida tikus wistar (Rattus norvegicus) yang

diinduksi diet tinggi lemak.

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Manfaat Bagi Peneliti

1. Meningkatkan kemampuan serta memberikan pengalaman dalam

menulis karya ilmiah.

2. Mengetahui pengaruh ekstrak etanol seledri terhadap pencegahan

kondisi dislipidemia.

3. Mengetahui mekanisme senyawa aktif dalam ekstrak etanol seledri

dalam mencegah kenaikan kadar trigliserida.

1.4.2 Manfaat Umum

1. Untuk masyarakat, menambah pengetahuan terkait herbal yang dapat

menurunkan kadar trigliserida.

2. Untuk penelitian selanjutnya, dapat dijadikan acuan penelitian terkait

pemanfaatan seledri dalam bidang Kesehatan.

 BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Dislipidemia

2.1.1 Patofisiologi

Konsumsi makanan tinggi lemak akan menyebabkan penumpukan lemak

viseral yang akan berakibat kepada peningkatan masa jaringan adiposa sehingga

jaringan adiposa akan melepaskan chemotactic factor yaitu monocyte

chemoattractant protein-1 (MCP-1) dan tumor – necrosis factor alpha (TNF α)

yang akan memodulasi respon inflamasi pada jaringan adipsa. Makrofag akan

melepaskan banyak TNF α karena inisiasi dari MCP-1 sehingga berakibat

penurunan jumlah glucose treansporter 4 dan terjadi penurunan ransangan insulin

terhadap reseptor yang berakibat resistensi insulin (Ormazabal et al., 2018).

Resistensi insulin akan menurunkan aktivitas dari lipoprotein lipase (LPL)

yang mengakibatkan peningkatan konsentrasi triglyceride-rich lipoproteins(TGrL)

plasma. Tingginya trigliserida plasma akan meningkatkan transfer TG ke LDL dan

HDL kemudian bersamaan dengan itu terjadi proses transfer kolesterol ester dari

LDL dan HDL ke TG plasma dimana proses-proses ini dimediasi oleh cholesterol

ester trenasfer protein. Selanjutnya trigliserida akan dihidrolisis dan menghasilkan

LDL yang lebih aterogenik yaitu small danse LDL (Utami et al., 2017).

5
 6

2.2 Atherosklerosis

2.2.1 Patofisiologi

Pembentukan atherosklerosis terbagi menjadi tiga tahap, yaitu seperti

berikut (Rafieian-Kopaei et al., 2014) :

1. Pembentukan fatty streaks

Pembentukan fatty streaks melewati empat tahap, yaitu:

a. Penangkapan LDL

LDL akan mengalami endositosis kedalam endotel yang mengalami

disfungsi dan akan terperangkap didalam tunika intima. LDL yang

terperangkap akan meningkatkan konsentrasi LDL di tunika intima

dan akan meningkatkan durasi didalam lesi. Dari kedua faktor

tesebut akan berakibat oksidasi spontan dari LDL menjadi LDL-OX

(LDL teroksidasi).

b. Aktivasi Sel Endotel

Sitokin dan lipid teroksidasi akan mengaktifkan sel endotel yang

berakibat monosit dan limfosit T infiltrasi kedalam tunika intima.

c. Aktivasi Leukosit

Molekul adhesi disekresikan oleh sel endotel aktif dan sel otot polos

menghasilkan kemokin dan kemoatraktan yang menginisiasi invasi

limfosit, sel mast, monosit dan neutrofil di intima. Selain itu, sel otot

polos juga mengeluarkan matriks ekstraseluler yaitu proteoglikan,

kolagen, dan jaringan elastis.

d. Pembentukan foam cell

 7

Makrofag akan mengfagosit LDL teroksidasi melalui scavenger

receptor yang akan diubah menjadi foam cell, ekspresi scavenger

reseptor meningkat selama diferensiasi monosit menjadi makrofag.

2. Pembentukan atheroma

Kerusakan jaringan vaskular akan mengakibatkan sekresi dari

interleukin 1 (IL-1) dan tumor necrosis factor (TNF), faktor-faktor ini

akan membuat perpindahan sel otot polos berpindah ke lumenal arteri

dan membentuk fibrous cap. Fibrous cap terdiri dari serat kaya

kolagen, SMC, makrofag, dan limfosit T.

Makrofag akan mengeluarkan meta proteinase yang mencegah

terjadinya lisis matrix ekstraseluler. Limfosit T akan menghasilkan

TNF-α yang mencegah sintesis kolagen, proses ini melemahkan fibrous

cap dan saat fibrous cap hancur maka lipid dan kolagen akan terekspos

dan masuk ke dalam aliran darah dan terjadi akumulasi platelet

sehingga terbentuk gumpalan darah.

3. Pembentukan plak atherosklerosis

Rupture yang berulang pada Fibrous cap akan membentuk

thrombus yang mengakibatkan kekakuan lumen arteri dan terjadi

kalsifikasi.

2.2.2 Tatalaksana

Dislipidemia merupakan penyebab utama terjadinya atherosklerosis,

terapi dislipidemia dapat menggunakan HMG-CoA reductase inhibitor,nicotinic

acid, fibrat,sequestan asam empedu,azetemibe, dan omega-3 fatty acid untuk

 8

mencegah terjadinya atherosklerosis maka dilakukan pengobatan dislipidemia agar

tidak terjadi komplikasi (Lewis, 2009).

Statin bekerja menurunkan jumlah kolesterol yang terbentuk di hepar

melalui inhibisi kompetitif terhadap enzim HMG-CoA reductase yang dapat

menurunkan kadar trigliseroida. Statin menghambat pengubahan Asetil koenzim A

menjadi adam lemak sehingga asam lemak tidak dapat berikatan dengan gliserol

sehingga dapat menurunkan sintesis trigliserida (Lewis, 2009). Nicotinic acid akan

mencegah lipolisis dari adiposit yang berakibat pada menurunkan kadar asam

lemak bebas dan menurunkan sekresi VLDL serta sedikit meningkatkan

pembentukan HDL dan menghambat katabolisme HDL. Fibrat akan merangsang

aktivasi peroxisome proliferator activator receptor (PPARs) yang akan

meningkatkan produksi enzim lipoprotein lipase (LPL) sehingga meningkatkan

hidrolisis trigliserida dan dapat juga menurunkan jumlah Apo-CIII yang berperan

dalam pembentukan trigliserida. Sequestan asam empedu merupakan gologan obat

yang bekerja di saluran intestinal, obat ini akan meningkatkan dua komponen asam

empedu utama yaitu asam glikokolat dan asam taurokolik sehingga kelarutan

kolestorol akan menurun yang menyebabkan penurunan absorbsi kolesterol

sehingga akan dieksresikan melalui feses. Ezetimibe akan menghabat penyerapan

kolesterol di usus sehingga terjadi penurunan produksi kolesterol secara eksogen

dan berakibat kadar kolesterol di hati menjadi rendah sehingga memicu

peningkatan sistesis LDL reseptor. Omega-3 fatty acid adalah kelomopok asam

lemak tidak jenuh. Omega-3 fatty acid dapat menurunkan konsentrasi

 9

trigliserida,menghambat penggabungan trigliserida dengan VLDL dan mengurangi

sekresi trigliserida dengan menghambat lipogenesis di hati (Kholifah et al,2021 )

2.2.3 Hubungan Dislipidemia Dengan Terjadinya Atherosklerosis

Retensi lipoprotein yang bersifat aterogenik yaitu dapat terjadi dalam

dislipidemia. Lipoprotein tersebut akan bertumpuk dalam lapisan subendotel arteri.

sehingga dapat memicu suatu respon inflamasi yang akhirnya berujung pada

aterosklerosis (Garg et al., 2015).

Low density lipoprotein (LDL) akan terakumulasi di subendotel arteri,

LDL akan termodifikasi dan teroksidasi menjadi ox-LDL yang merupakan

komponen utama inflamasi sehingga terjadi pertumbuhan plak aterosklerosis

(Jebari-Benslaiman et al., 2022)

Selain adanya ox-LDL, kadar trigliserida yang tinggi dapat menyebabkan

atherosclerosis. Klimomikron remnant dan VLDL mempunyai kandungan

trigliserida yang sangat banyak serta lipoprotein yang sangat kecil sehingga mudah

untuk masuk kedalam subendotel dengan mudah yang menyebabkan terjadinya

atherosclerosis (Keenam dr et al.,2014)

2.2.4 Hubungan antara hipertrigleseridemia dengan atherosklerosis

Trigliserida tidak bersifat aterogenik secara langsung tetapi mewakili

biomarker penting dari resiko aterogenesis karena hubungannya dengan partikel

sisa aterogenik dan apo C-III, protein proinflamasi, proatherogenik yang ditemukan

pada semua kelas lipoprotein plasma. Beberapa lipoprotein kaya trigliserida (TRL)

termasuk VLDL dan VLDL remnant , serta CM remnant tampaknya

mempromosikan aterogenesis secara independen dari LDL.remnant terbentuk

 10

akibat hidrolisis parsial oleh lipoprotein lipase (LPL) dari TRL yang berasal dari

hati dan usus yang telah mengambil ester kolesterol dari HDL melalui aksi protein

transfer ester kolesterol. Serupa dengan LDL teroksidasi, lemak kaya kolesterol dan

miskin TG ini akan terakumulasi di endotel dan serapan oleh makrofag untuk

membentuk foam cell dan akan diubah menjadi Fibrous cap yang menjadi pencetus

dari atherosklerosis (Talayero et al, 2011).

2.3 Biosintesis Trigliserida

2.3.1 Proses biosintesis trigliserida

Asam lemak hati memiliki tiga sumber utama yaitu lipid dari makanan,

jaringan adiposa, dan dari proses sintesis de novo. Lemak dalam makanan akan

dihidrolisis di dalam lumen usus yang akan menghasilkan asam lemak dan akan

diserap oleh usus, asam lemak akan diesterifikasi ulang untuk membentuk molekul

trigliserida yang dikemas menjadi kilomikron dan akan dieksresikan ke dalam

plasma yang nantinya akan diserap oleh jaringan otot dan jaringan adiposa.

Trigliserida yang tersisan akan diangkut Kembali ke hati dan di proses secara

intraseluler, menyebabkan pelepasan asam lemak dalam hepatosit (Alves-Bezerra

& Cohen, 2018).

Karbohidrat dan glukosa digunakan untuk proses de novo untuk produksi

asam lemak. Agar dapat dimetabolisme asam lemak akan diaktifkan untuk

membentuk molekul acyl-CoA, yang dapat mengalami oksidasi atau bisa

digabungkan menjadi lipid kompleks. Trigliserida yang disintesis secara local akan
 11

di simpan di intracellular lipid droplet (LDs) atau dikemas menjadi VLDL dan di

sekresi ke dalam plasma. Penyimpanan trigliserida intraseluler saat puasa

dimobilisasi dari jaringan adiposit dan hepatosit untuk melepaskan asam lemak. De

novo lipogenesis hati juga berkontribusi untuk membentuk acyl-CoA untuk

produksi energi dan mengalami oksidasi oleh mitokondira atau untuk produksi

VLDL-TG (Cohen et al, 2018).

2.4 Seledri

2.4.1 Taksonomi

Divisi : Spermatophyte

Subdivisi : Angiospermae

Kelas : Magnolisa

Subkelas : Rosidace

Ordo : Apiales

Famili : Apicaeca

Genus : Apium

Spesies : Apium Graveolens L.

2.4.2 Morfologi

1. Batang

Batang tidak berkayu, beruas-ruas, bercabang, tegak, berwarna

hijau pucat. Sebatang seledri sangat pendek, sekitar 3-5 cm, sehingga

tidak terlihat.
 12

2. Daun

Daun seledri itu rumit, anehnya daunnya berbulu dan mengerikan

3-7 utas. Tepi daun bergerigi dari batang dan ujungnya runcing. Daunnya

dangkal, panjang 2-7,5 cm dan lebar 2-5 cm. Batang daun tumbuh lurus

ke atas atau ke tepi batang, panjang kira-kira 5 cm, hijau atau keputihan.

3. Kelopak

Putih kehijauan atau putih kekuningan dengan panjang ½-3/4 mm.

Semuanya 3-8 tangkai bunga dapat tumbuh di ketiak. Di ujung tangkai

bunganya dikelompokkan membentuk lingkaran. Ketika bunga dibuahi,

mereka berbentuk bulat kecil berwarna hijau seperti buah muda. Saat

buah tua berubah warna menjadi coklat muda

4. Bunga

Satu bunga dengan batang menonjol, kelopak tersembunyi,

kelopak putih atau merah muda kehijauan dengan ujung bengkok. Bunga

betina, seringkali ringan, sessile atau pendek tirai bunga berlawanan atau

berbatasan dengan daun. Desensitisasi atau tangkai bunga sepanjang 2

cm.

5. Buah

Buahnya memiliki panjang sekitar 3 mm, batangnya bersudut,

berlekuk, sangat aromatik

 13

6. Akar

Akar tebal, sistem akar menyebar ke segala arah sekitar 5-9 cm, per

kedalaman 30-40 cm.

Sumber: Kusuma & Wiwied, 2016

Gambar 2.2 Daun Seledri

2.4.3 Kandungan Aktif Dan Manfaat Daun Seledri

Seledri memiliki beberapa zat aktif yang bermanfaat bagu Kesehatan

seperti fenol,furanokuramin, apigenin, vitamin c,kalium, dan 3-n-butyl phthalide

yang bekerja untuk merelaksasi otot polos dan menurunkan tekanan darah sebagai

anti hipertensi (Naqiyya,2020). flavonoid, apigenin, apiin, alkaloid, kolin, lipase,

saponin, tannin, asparagine, fitosterol, kolin, minyak atsiri, pthlides, dan vitamin A,

B, dan C. Kandungan yang terdapat dalam daun seledri memiliki mekanisme yang

berbede-beda dalam menurunkan kadar kolesterol (Sarwindah et al, 2020)

2.4.4 Hubungan Seledri Dengan Kadar Trigliserida

Kandungan dalam seledri memiliki mekanisme yang berbeda dalam

menurunkan kadar trigliserida. flavonoid dapat menurunkan kadar trigliserida

dengan meningkatkan aktivitas enzim LPL (lipoprotein lipase), dengan

meningkatnya enzim tersebut maka VLDL yang membawa trigliserida akan

 14

dihidrolisis menjadi asam lemak dan gliserol untuk diubah menjadi energi,

flavonoid juga dapat menghambat enzim fatty acid synthase (FAS) yang berfungsi

dalam metabolisme lemak. Hambatan pada FAS akan menurunkan pembentukan

asam lemak sehingga akan mengurangu pembentukan trigliserida. saponin akan

menghambat absorbs trigliserida dalam usus dengan cara membentuk misel yang

tidak dapat diserap dan meningkatkan pembentukan asam empedu dan kemudian

diekskresikan melalui feses. Tannin dapat mengdambat adipogenesis dan

menghambat absorbsi trigliserida dan kolesterol di intestinal serta meningkatkan

eksresi dari asam empedu (Mutia et al, 2018). Fitosterol dapat menurunkan kadar

trigliserida dengan cara menghambat absrobsi kolesterol dan trigliserida dari

makanan dan menghambat reasobsi koesterol asam empedu dengan memodifikasi

Asetil Ko-A karboksilase dan aktifitas 7α dehidroksilase sehingga terjadi

peningkatan eksresi asam empedu melalui feses yang berakibat pada jumlah asam

empedu berkurang sehingga pembentukan asam empedu baru dari kolesterol yang

ada di dalam darah (Nashriana et al., 2015) .

2.5 Hewan Coba Tikus Putih Galur Wistar

2.5.1 Hewan Coba

Dibutuhkan hewan coba yang cocok agar tujuan dapat tercapai dengan

maksimal dan penelitian dapat di kerjakan dengan efesien. Dalam penelitian ada

beberapa pilihan hewan coba seperti tikus,primata, dan kelici. Umumnya tikus yang

digunakan dalam penelitian adalah tikus putih galuh wistar, tikus biobreeding,

mencit, dan tikus putih galur Sprague Dawley. Tikus (rattus norvegicus) memiliki
 15

kesamaan anatomis, fisiologis, dan metabolik seperti manusia(Stevani, 2016).

Olehkarena itu, peneliti ingin menggunakan hewan coba rattus norvegicus karena

umum digunakan untuk penelitian yang berkaitan dengan diet tinggi lemak.

Tikus putih galur wistar lebih unggul dari tikus putih galur Sprague

Dawley karena terbukti Ketika penelitian pemberian diet tinggi lemak selama tujuh

belas minggu, metabolism tikus putih galur wistas memiliki metabolism yang lebih

tinggi dibandingkan dengan tikus putih galur sprangue Dawley yang lebih lambat

dan tikus putih galur wistar memiliki enzim leptin untuk mengatur asupan makanan

dan pengeluaran energi. Penelitian tersebut melihat kadar trigliserida pada tikus

putih galur wistar lebih tinggi dibandingkan tikus putih galur Sprague

Dawley.(marques). Taksonomi tikus putih galur wistar adalah sebagi berikut

(Stevani, 2016) :

Kingdom : Animalia

Filum : Chordata

Kelas : Mammalia

Ordo : Rodensia

Familia : Muridae

Genus : Rattus

Spesies : Rattus Norvegicus

 16

Sumber: FIU, 2017

Gambar 2.3 Rattus Norvegicus

2.5.2 Pemeriksaan Trigliserida Pada Tikus

Kadar normal trigliserida pada tikus putih galur wistas adalah 26-145

mg/dl (Gani et al., 2013).

 BAB 3

KERANGKA KONSEPTUAL

3.1 Kerangka Konseptual

Diet Tinggi Lemak Ekstrak Daun Seledri

Antioksidan
Trigliserida meningkat

Flavonoid Saponin,Tanin,fitosterol
Peningkatan Free faty acid &
monoacyl glycerol

Absorbsi Free faty acid &

monoacyl glycerol
di usus
Peningkatan pembentukan
Kilomikron

LPL

Kilomikron remnant

Metabolisme endogen di hepar

Pemecahan TG

Hipertrigliseridemi
a

Keterangan
= Diteliti
= Tidak diteliti
= Efek Inhibisi
= memicu

17
 18

3.2 Penjelasan Kerangka Konseptual

Akibat konsumsi diet tinggi lemak maka trigliserida dan kolesterol yang

memasuki intestin akan menstimulasi kemoreseptor yang mengakibatkan

kolesitokinin bekerja sehingga kantong empedu mengeluarkan asam empedu untuk

memecah trigliserida dan kolesterol sehingga dapat larut dalam air.trigliserida dan

kolesterol yang terlapisi oleh asam empedu akan berikatan dengan co-lipase

pankreas dan akan di pecah menjadi asam lemak dan monoacyl glycerol atau

michelle.

Michelle akan diabsorbsi kedalam enterocyte tepatnya di retikulum

endoplasma halus untuk menyatukan asam lemak dan monoacyl glicyrol menjadi

trigliserida jika proses ini telah selesai makan proses di lanjutkan dengan pemberian

Apo-B48 dan kolesterol di retikulum endoplasma kasar maka akan menjadi

kilomikron dan akan masuk ke pembuluh darah untuk menerima Apo-CII dan Apo-

E dari HDL untuk mengaktifkan Lipoprotein lipase untuk memecah trigliserida

menjadi free fatty acid dan glycerol, lalu Free fatty acid dan glycerol akan di

transport kejaringan adiposa dan akan kembali menjadi trigliserida. Pada jaringan

otot free fatty acid hasil pemecahan trigliserida tersebut akan mengalami proses

yang dinamakann beta oksidasi yang akan menghasilkan ATP dan akan

menghasilkan chylomicront remnant.

Cylomicront remnant yang memiliki Apo-E dan trigliserida akan dikirim

ke hepar dan akan diolah dan akan di simpan serta ada yang akan diolah kembal

untuk penambahan trigliserida dan akan di sintesis oleh asam amino dan

glukosa,pada proses ini free fatty acid dan glycerol juga dapan membentuk
 19

trigliserida yang akan berakibat naiknya kadar trigliserida. Lalu retikulum

endoplasma kasar akan menambahkan Apo-B100, dengan kadar trigliserida yang

tinggi dan penambahan Apo-B100 maka kondisi ini disebut dengan VLDL (Very

Low Density Lipoprotein) yang nanti akan dilepaskan ke pembuluh darah dan

mendapat Apo-CII dan Apo-E.

VLDL yang memiliki Apo-CII akan mengaktifkan enzim lipoprotein

lipase yang bertugas untuk memecah trigliserida menjadi Free fatty acid dan

glycerol yang akan menuju jaringan adiposa untuk membetuk trigliserida yang akan

di simpan untuk pembentukan ATP, setelah proses tersebut maka akan

menghasilkan VLDL remnant atau IDL (Intermediate Density Lipoprotein),IDL

yang masih memiliki Apo-E akan kembali ke hepar dan berinteraksi dengan

Hepatic Trigliceride Lipase dimana proses tersebut mengakibatkan kadar

trigliserida pada molekul akan menurun,molekul tersebut akan kembali ke

pembuluh darah dan terbentuk LDL(Low-Density Lipoprotein) yang akan di

mengalami proses katabolisme, jika proses ini berlebihan maka akan

mengakibatkan terjadinya hipertrigliseridemia.

Ekstrak daun seledri memiliki kandungan flavonoid,tanin,saponin dan

fitosterol. Flavonoid dapat menutunkan kadar trigliserida dengan meningkatkan

aktivasi dari Lipoprotein lipase (LPL), dengan meningkatnya LPL maka VLDL

yang membawa trigliserida akan dihidrolisi menjadi free fatty acid dan gliserol

yang akan diserap oleh otot dan dioksidasi untuk menhasilkan energi sehingga

jumlah trigliserida yang ada dalam darah akan berkurang. Tanin dapat menurunkan

kadar trigliserida karena akan mengurangi absorbsi kolesterol dan trigliserida di

 20

usus haslus dan meningkatkan pengeluaran asam empedu. Saponin akan

menghambat absorbsi kolesterol dan trigliserida dengan berikatan dengan asam

empedu dan kolesterol dari makanan sehingga membentuk michelle yang tidak

dapat diserap oleh usus sehingga akan diekresikan melalui feses.

3.3 Hipotesis

Ekstrak daun seledri (Apium graveolens L.) dapat mencegah peningkatan

kadar trigliserida tikus Wistar (Rattus norvegicus) yang diberi diet tinggi lemak.
 BAB 4

METODE PENELITIAN

4.1 Jenis dan Rancangan Penelitian

4.1.1 Jenis Penelitian

Penelitian yang akan dilaksanakan menggunakan metode penelitian

eksperimental Randimized Controlled Trial dengan desain penelitian yaitu Post

Test Only with Control Group Design.

4.1.2 Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental yang akan dilakukan

terhadap hewan coba Rattus norvegicus yang akan dibikan pakan tinggi lemak

beserta pemberian ekstrak etanol daun seledri, ekstrak daun seledri di berikan

minimal satu jam setelah pemberian pakan tinggi lemak selama 28 hari dengan

menggunakan sonde lambung.

Sebelum dilakukan intervensi hewan coba Rattus norvegicus akan

dilakukan adaptasi selama 7 hari, setelah itu akan dibagi menjadi 6 kelompok yang

terbagi menjadi 1 kelompok normal, 1 kelompok negatif, 1 kelompok positif

dengan pemberian statin, dan 3 kelompok yang akan diberikan ekstrak etanol daun

seledri dengan dosis yang berbeda yaitu 125mg/kgBB, 250mg/kgBB, dan

400mg/kgBB. Pada hari ke-36 akan dilakukan euthanasia dan akan di ambil darah

melalui intracardiac untuk menjadi sample penelitian.

21
 22

4.2 Lokasi dan Waktu Penelitian

Penelitian akan diawali dengan penyusunan proposal dan akan dilanjutkan

dengan ujian sidang proposal pada bulan September 2023. Setalah itu akan

mengajukan permohonan kelaikan etik. Penelitian ini akan berlangsung selama 35

hari yang berlangsung pada bulan Oktober – November 2023 di laboratorium

Hewan Fakultas Kedokteran Universitas Surabaya, dan dilanjutkan dengan

pengolahan data di Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas

Surabaya pada bulan November 2023. Selanjutnya akan dilakukan penyusunan

skripsi pada bulan Desember 2023.

Januari – September September 2023: September 2023:

2023
Penyusunan Sidang Proposal Pengurusan layak
proposal
etik

Desember 2023: November 2023: Oktober –

November 2023
Seminar Hasil Penyusunan Skripsi Proses Penelitian
 23

4.3 Sampel, Besar Sampel dan Teknik Sampling

4.3.1 Sample

Sample pada penelitian ini adalah tikus Rattus norvegicus jantan berusia

2-3 bulan dengan berat 150 – 200 gram yang akan di pelihara di Laboratorim

Hewan Fakultas Kedokteran Universitas Surabaya, sample akan dipilih sesuai

dengan kriteria inklusi dan ekslusi pada penelitian ini.

4.3.2 Besar Sample

Hewan coba yang digunakan pada penelitian adalah Rattus norvegicus

yang akan dibagi menjadi 6 kelompok yaitu kelompok 1 normal, kelompok 2

kontrol negatif, kelompok 3 kontrol positif , dan kelompok 4 – 6 adalah

kelompok perlakuan. Besar sample akan dihitung dengan rumus resource

equation dari Charan dan Katherina (2013), nilai E merupakan bebas jumlah

sample metode ANOVA dengan jarak antara 10-20 sehingga mendapatkan

perhitungan sebagai berikut :

E=N–k
E = (n x k) - k

Keterangan:

E : Nilai bebas jumlah sampel ANOVA

N : Jumlah seluruh sampel hewan coba

n : Jumlah sample hewan coba setiap kelompok

 24

k : Jumlah kelompok

20 = (6x) – 6

6x = 20 + 6

X = 4,333

X=5

Berdasarkan perhitungan di atas didapatkan jumlah sampel setiap

kelompok berjumlah 5 dengan total keseluruhan sample penelitian sebesar 30

ekor Rattus norvegicus. Pada penelitian ini akan dilakukan penambahan jumlah

sample hewan untuk mengantisipasi adanya drop out selama berlangsungnya

penelitian dengan rumus sebagai berikut :

Keterangan :

N : Besar jumlah sampel setelah di koreksi

n : Jumlah sampel setiap kelompok sebelum koreksi

f : Periksaan sampel drop out (20%)

5
𝑁=
1 − 20%

5
𝑁=
0.8

N=7

Hasil dari perhitungan diatas akan didapatkan hasil bahwa sample

dipilih untuk meminimalisir adanya drop out sebanyak 7 ekor pada masing-
 25

masing kelompok, sehingga total hewan coba dalam penelitian ini berjumlah

42 ekor hewan coba.

4.3.3 Teknik Pengambilan Sampling

Pengambilan hewan coba akan diambil secara acak berdasarkan kriteria

inklusi dan eksklusi.

Kriteria inklusi :

✓ Tikus putih (Rattus norvegicus) galur wistar jantan

✓ Usia 2-3 bulan

✓ Berat badan 150-200 gram

✓ Sehat (gerak aktif, mau makan,rambut tidak kusam dan rontok,tidak ada

kelainan anatomi yang Nampak)

✓ Belum pernah jadi tikus percobaan

✓ Memiliki kadar TG Normal (26-145mg/dL)

Kriteria eksklusi:

✓ Tikus sakit selama penelitian berlangsung (tidak gerak aktif, tidak mau

makan, rambut kusam dan rontok)

✓ Mati selama penilitian berlangsung

4.4 Variabel Penelitian dan Definisi Operasional

4.4.1 Variabel Penelitian

• Variable bebas (Independent Variable) : Ekstrak etanol dari daun seledri

(apium graveolens L.).

 26

• Variable terikat (Dependent Variable) : kadar low destiny lipoprotein

(LDL) darah.

• Variable terkendali (Control Variable) : Usia, berat badan, jenis kelamin,

cara perlakuan, makanan yang diberikan, waktu penelitian, serta dosis

simvastatin.

4.4.2 Definisi Operasional

4.4.2.1 Variabel Bebas (Independent Variable)

Variable Definisi Oprasional

Ekstrak etanol Jumlah dosis yang akan diberikan kepada Rattus norvegicus
daun seledri hewan coba selama penelitian terdiri dari
(Apium 125mg/kgBB,250mg/kgBB, dan 400 mg/kgBB. Ekstrak etanol
graveolens) daun seledri diberikan setiap hari selama satu kali dalam bentuk
suspensi menggunakan sonde lambung sebanyak 1 ml.
perlakuan akan dilaksanakan selama 28 hari dan akan diberikan
1 jam setelah pemberian pakan diet tinggi lemak.
 27

4.4.2.2 Variabel Terkait (Dependent Variable)

Cara
Variabel Definisi Oprasional Satuan Skala
Pengukuran
Kadar Trigliserida Pengukuran mg/dL Rasio
Trigliserida merupakan senyawa menggunakan
lemak yang terdiri metode
dari asam lemak spektrofotometri
bebas dan monoasil
gliserol yang
memiliki fungsi
sebagai menyediakan
energi.
Trigliserida dalam
darah didapat dari
lipoprotein yang
mengandung
trigliserida. Kadar
normal pada darah
tikus berkisar antara
26-145 mg/dL
 28

4.4.2.3 Variabel Terkendali (Control Variable)

Variabel Definisi Oprasional

Usia, Berat, Usia hewan coba yang akan digunakan adalah Rattus norvegicus
dan jenis jantan berusia 2-3 bulan dengan berat badan 150-200 gram.
kelamin
Cara Hewan coba diberikan waktu untuk adaptasi selama tujuh hari
perlakuan dan setiap kelompok akan mendapatkan perlakuan yang berbeda
dan waktu selama 28 hari. Kelompok 1 (kelompok normal) akan diberikan
penelitian makan dan minum standar. Kelompok II (kelompok kontrol
negatif) akan diberikan pakan tinggi lemak serta makanan dan
minuman standar. Kelompok III (kelompok kontrol positif) akan
diberikan pakan tinggi lemak dan statin dengan dosis
0,36mg/200mgBB serta makanan dan minuman standar selama
28 hari. Kelompok IV (kelompok perlakuan 1) akan diberikan
pakan tinggi lemak dan ekstrak etanol daun seledri dengan dosis
125mg/kgBB serta makanan dan minuman standar selama 28
hari. Kelompok V (kelompok perlakuan 2) akan diberikan pakan
tinggi lemak dan ekstrak etanol daun seledri dengan dosis
250mg/kgBB serta makanan dan minuman standar selama 28
hari. Kelompok VI (kelompok perlakuan 3) akan diberikan pakan
tinggi lemak dan ekstrak etanol daun seledri dengan dosis
400mg/kgBB serta makanan dan minuman standar selama 28
hari.
Makanan Makanan diberikan kepada hewan coba dengan takaran 30-40
gram/ekor setiap hari satu kali.
Pakan tinggi Pakan tinggi lemak akan diberikan berupa komponen dari minyak
lemak / jelantah 1ml/tikus/hari, kuning telur puyuh 1ml/tikus/hari, kuning
kolesterol telur bebek 1ml/tikus/hari (Hal et al., 2021).
 29

Pemeberian Simvastatin diberikan dalam bentuk suspensi dengan dosis

dosis 0,36mg/200grBB tikus. Simvastatin diberikan setiaphari satu
simvastatin jam setelah pemberian pakan tinggi lemak pada pagi hari
sebanyak satukali selama 28 hari dengan menggunakan sonde
lambung.

4.5 Intrument Penelitian dan Persiapan Penelitian

4.5.1 Instrument Penelitian

Instrumen yang akan digunakan dalam penelitian adalah sebagai berikut :

1. Kendang hewan coba berukuran 40x50x20cm beserta label

2. Tempat makan dan minum hewan coba

3. Spektrofotometer

4. Reagen Trigliserida

5. Timbangan digital

6. Capillary rod

7. Sonde lambung

8. Blender

9. Ayakan mesh 60

10. Gelas beaker

11. Gelas ukur

12. Rotary evaporator

13. Maserator
 30

14. Corong buchner

15. Waterbath

16. Kertas saring

17. Mortit dan stamoer

18. Swab alkohol

4.5.2 Bahan Penelitian

Bahan penelitian yang akan digunakan adalah sebagai berikut :

1. 42 ekor tikus utih galur wistar jantan (Rattus norvegicus)

2. Daun seledri

3. Suspensi Na CMC 1%

4. Etanol 96%

5. Makanan dan minuman standar

6. Pakan tinggi lemak

7. Obat simvastatin

4.5.3 Ekstrak Daun Seledri

4.5.3.1 Pembuatan Ekstrak Daun Seledri

Ekstraksi adalah proses pemisahan dan pemindahan dari senyawa aktif

jaringan tumbuhan dengan menggunakan pelarut. Maserasi merupakan metode

ekstraksi, penelitian ini menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol

96% yang dimasukkan kedalam sediaan ekstrak etanol daun seledri.

Berdasarkan metode tersebut peneliti merendam serbuk daun seledri ke dalam

 31

wadah berisi pelarut etanol 96% yang tertutup dan bebas dari cahaya. Proses ini

mengakibatkan dinding sel dan membrane sel akan pecah yang diakibatkan

oleh perbedaan tekanan antara intrasel dan ekstrasel yang mengakibatkan

metabolit sekunder di dalam sitoplasma akan oecah dan larut dalam pelarut

organik atau disebut etanol.

Penggunaan metode maserasi dapat menghemat biaya oprasional

karena relatif hemat fan menggunakan alat yang sederhana yaitu bejana

perendam namun metode ini memiliki kekurangan yaitu waktu yang cukup

lama karena membutuhkan berhari-hari dan proses penyaringan yang tidak

sempurna yaitu mengesktraksi sebesar 50%. Penelitian ini menggunakan etanol

sebagai pelarut karena dapat melarutkan senyawa polar, senyawa aktif dalam

daun seledri bersifat polar. Olehkarenaitu etanol digunakan sebagai pelarut

untuk menghasilkan ekstrak. Proses ekstraksi etanol daun seledri di

Laboratorium Meteria Medika, Batu, Malang.

4.5.3.2 Dosis Ekstrak Daun Seledri

Dalam penelitian ini menggunakan tiga dosis yang berbeda, yaitu

125mg/kgBB, 250mg/kgBB dan 400mg/kgBB. Dosis tersebut ditentukan

berdasarkan acuan jurnal disus penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh

(Firman et al., 2017.)

 32

Ekstrak etanol daun seledri ditimbang sesuai dosis dan serbuk Na CMC

1% yang dilarutkan menggunakan aquadest 1 ml (Lampiran II) yang akan

diberikan kepada hewan coba melalui sonde lambung

4.5.3.3 Pemberian Ekstrak Daun Seledri

Didalam penelitian ini ekstrak etanol daun seledri diberikan melalu

peroral setiap hari sebanyak satukali dengan menggunakan sonde lambung

sebanyak 1 ml dengan volume maksimal 5 ml seduai dengan tata cara perlakuan

tikus yang benar (Lampiran III).

4.5.4 Persiapan Hewan Coba

Penelitian ini menggunakan Rattus norvegicus jantan sebanyak 42 ekor

yang sudah melalui seleksi kriteria inklusi dan eksklusi yang ditetapkan. Hewan

coba akan dibagi menjadi enam kelompok perlakuan yang akan ditempatkan di

kendang yang berukuran 40x50x20cm dengan maksimal tiga ekor tikus dalam

satu kendang untuk menghindari kompetisi untuk makanan dan minuman.

Selama tujuh hari tikus akan dilakukan masa adaptasi sebelum dilakukan diberi

perlakuan agar dapat menyesuaikan cara hidup di dalam kendang. Hewan coba

juga diberi perlakuan dengan prinsip dasar penggunaan hewan coba, yaitu 3R

(Replacement, Reduction, and Refinement) dan 5F (Five Freedom). Peneliti

juga akan memperhatikan lingkungan hidup hewan coba (Lampiran IV).

 33

4.5.5 Pembuatan Pakan Tinggi Lemak Dan Kolesterol

Dalam penelitian ini hewan coba akan diberikan makanan tinggi lemak

yang akan membuat hewan coba memiliki kadar lemak yang tinggi. Pakan

tinggi lemak terdiri dari campuran kuning telur bebek 1ml/tikus/hari, kuning

telur puyuh 1ml/tikus/hari, dan minyak jelantah 1ml/tikus/hari yang akan

diberikan menggunakan sonde. Telur puyuh dan telor bebek digunakan karena

memiliki kadar kolesterol yang tinggi, minyak jelantah mengandung asam

lemak jenuh yang memperburuk kondisi dislipidemia hewan coba.

4.5.6 Pembuatan Dosis Statin

obat simvastatin diberikan pada satu kelompok hewan coba. Obat ini

terbukti efektif dalam perbaikan kondisi pasien dislipidemia dan obat ini

merupakan drug of choice yang terdapat di puskesmas. Peneliti menggunakan

dosis sebesar 20mg dengan acuan dari penelitian yang sebelumnya (Iriani et al.,

2021). Pemberian rumus statin terhadap hewan coba menggunakan rumus

sebagai berikut (Stevani, 2016.): dosis tikus 200g: Dosis umum manusia x

faktor konversi tikus dan manusia

: 20mg x 0,018

: 0,36mg/200gr BB

Obat diberikan dalam bentukk suspensi. Suspensi simvastatin dibuat

dengan cara diggerus sediaan tablet simvastatin untuk menjadi halus, setelah
 34

itu campurkan Na CMC 1% dan akuades, pemberian suspense menggunakan

sonde lambung secara peroral (Lampiran V)

4.6 Prosedur Pelaksanaan Penelitian

4.6.1 Tahap Pelaksanaan Penelitian

1. Sample hewan coba akan dipilih berdasarkan kriteria inklusi dan eksklusi.

2. Akan dilakukan adaptasi pada hewan coba selama 7 hari dan diberikan

makanan dan minuman standar.

3. Hewan coba akan dibagi menjadi 6 kelompok yang akan dimasukkan kedalam

kendang yang diberi label.

4. Kelompok I (kelompok kontrol normal) akan diberikan makanan dan minuman

standar.

5. Kelompok II (kelompok kontrol negatif) diberikan makanan dan minuman

standar serta pakan tinggi lemak salama 28 hari.

6. Kelompok III (kelompok kontrol positif) akan diberi pakan tinggi lemak dan

pemberian statin dengan dosis 0,36 mg/200 mgBB selama 28 hari.

7. Kelompok IV (kelompok perlakuan 1) akan diberi pakan tinggi lemak dan

ekstrak etanol daun seledri dengan dosis 125 mg/kgBB selama 28 hari.

8. Kelompok V (kelompok perlakuan 2) akan diberi pakan tinggi lemak dan

ekstrak etanol daun seledri dengan dosis 250 mg/kgBB selama 28 hari.

9. Kelompok IV (kelompok perlakuan 3) akan diberi pakan tinggi lemak dan

ekstrak etanol daun seledri dengan dosis 400 mg/kgBB selama 28 hari.
 35

10. Sampel darah akan diambil 2 kali,pengambilan pertama akan diambil untuk

melihat kondisi hewan coba tidak dalam kondisi dislipidemia dengan metode

pengambilan pemotongan ekor, lalu pengambilan yang kedua akan dilakukan

untuk mengecek kadar trigliserida setelah pemberian pakan tinggi lemak dan

ekstrak etanol daun seledri di hari ke-35 dengan metode intracardiac.

4.6.2 Prosedur Pengambilan Sampel

Pada penelitian ini pengambilan sampel dilaksanakan di Laboratorium

Hewan Fakultas Kedokteran Universitas Surabaya. Pengambilan sample darah

dilaksanakan sebanyak 2 kali yaitu pengambilan awal dengan menggunakan

metode pemotongan ekor hewan coba setelah 7 hari masa adaptasi untuk

melihat apakah ada hewan coba yang mengalami abnormalitas kadar

trigliserida. Jika terdapat kadar trigliserida yang tinggi maka akan dilakukan

adaptasi ulang dengan pemberian pakan rendah lemak sampai kadar trigliserida

hewan coba normal. Pengambilan sample yang ke-dua akan dilakukan pada hari

ke-35 setelah pemberian diet tinggi lemak dan ekstrak etanol daun seledri

dengan metode intracardiac untuk pengambilan data (Lampiran VI).

` pada pengambilan darah yang pertama peneliti akan melakukan

pemotongan di ujung ekor hewan coba menggunakan gunting yang telah di

disinfeksi menggunakan alkohol 70%, pengguntingan dilakukan sepanjang

kurang lebih 0,5 cm untuk mengambil dari vena ekor hewan coba dengan

volume sekitar 64 ml/kgBB dan volume maksimal darah adalah 10% dari
 36

volume total untuk setiap 2-4 minggu yaitu pada penelitian ini menggunakan

berat hewan coba 200 gram maka jumlah maksimal yang boleh diambil adalah

1,28ml setiap satukali pengambilan. Pengambilan sample darah yang ke-dua

akan dilakukan melalu intracardiac dengan metode euthanasia (Lampiran VII)

4.6.3 Pengukuran Kadar Trygliceride (TG)

Kadar trigliserida akan dihitung setelah pengambilan sampel darah

intracardiac tikus putih galur wistar. Sampel darah akan dicentrifuge untuk

memisahkan dengan serum darah. Serum darah tersebut akan dibaca melalui

metode spektofotometer.

4.7 Etika Penelitian

Pada proposal penelitian ini akan dilaksanakan uji kelaikan etik (ethical

review) di Komite Etik Penelitian Universitas Surabaya sebelum dilaksanakan

penelitian.
 37

4.8 Kerangka Oprasional

Sampel penelitian: 36 ekor tikus putih galur wistar jantan, usia 2-3bulan, BB 150-
200gram, tidak dislipidemia

Adaptasi tujuh hari

Kelompok I Kelompok Kelompok Kelompok Kelompok Kelompok

II III IV V VI
6 ekor tikus
wistar 6 ekor tikus 6 ekor tikus 6 ekor tikus 6 ekor tikus 6 ekor tikus
wistar wistar wistar wistar wistar

Pemberian pakan tinggi lemak dan simvastatin dan ekstrak selama 28 hari

Tidak diberi Pakan Pakan Pakan Pakan Pakan

pakan tinggi tinggi tinggi tinggi tinggi
tinggi lemak dan lemak, lemak, lemak, lemak,
lemak, dan makanan makanan minuman minuman minuman
diberi minuman minuman standar dan standar dan standar dan
makanan standar standar dan ekstrak ekstrak ekstrak
minuman selama 28 simvastatin daun seledri daun seledri daun seledri
standar hari selama 28 dengan dengan dengan
hari dosis 125 dosis 250 dosis 400
mg/kgBB mg/kgBB mg/kgBB
selama 28 selama 28 selama 28
hari hari hari

Euthanasia

Pengambilan darah intrakardiak

Penilaian kadar TG

Pengolahan & Analisis data

Uji normalitas & homogenitas
Uji ANOVA atau Uji Kruskal-Wallis
-
 38

4.9 Pengolahan dan Analisis Data

Penelitian ini akan dilakukan pengolahan dan analisis data

menggunakan Statistical Product and service (SPSS) versi 26. Langkah analisis

data akan dilakukan seperti berikut:

1. Sanple yang sudah terkumpul akan dilakukan pengecekan tingkat efektivitas

terhadap pemberian ekstrak etanol daun seledri dalam peningkatan kadar

trigliserida dalam darah

2. Jika didapatkan syarat signifikansi lebih dari 0,05, akan dilakukan uji

normalitas menggunakan uji Shapiro-wilk dan uji homogenitas menggunakan

uji levene. Setelah itu akan dilakukan uji komparasi parametrik.

3. Jika data terdistribusi normal dan homogen akan dilakukan uji ANOVA pada

semua kelompok untuk membandingkan kadar Trigliserida. Setelah itu akan

dilakukan uji post hoc Least Significant Difference (LSD) jika didapatkan

perbedaan bermakna untuk menganalisis hubungan masing-masing kelompok

perlakuan

4. Jika tidak terdistribusi normal dan/atau tidak homogen akan dilakukan uji non

parametrik Kruskal-Walli
 DAFTAR PUSTAKA

Alves-Bezerra, M., & Cohen, D. E. (2018). Triglyceride metabolism in the liver.

Comprehensive Physiology, 8(1), 1–22. https://doi.org/10.1002/cphy.c170012
Anneke, R. (2018). REVIEW: TERAPI HERBAL SEBAGAI ALTERNATIF
PENGOBATAN DISLIPIDEMIA.
BUKU PANDUAN PRAKTIKUM FARMAKOGNOSI FITOKIMIA. (2016).
Firman, A. B., Supiadi, D., Yani, A., Unjani, K., Ilmu, B., & Masyarakat, K. (2017).
Program Studi Fakultas Kedokteran Unjani, 2Bagian Patologi Klinik DOSIS
EKSTRAK DAUN SELEDRI (A. graveolens linn) YANG MENDEKATI
ALLOPURINOL DALAM MENURUNKAN HIPERURISEMIA PADA MENCIT
(Mus musculus).
Gani, N., Momuat, L. I., & Pitoi, M. M. (2013). Profil Lipida Plasma Tikus Wistar
yang Hiperkolesterolemia pada Pemberian Gedi Merah (Abelmoschus manihot
L.).
Garg, R., Aggarwal, S., Kumar, R., & Sharma, G. (2015). Association of
atherosclerosis with dyslipidemia and co-morbid conditions: A descriptive
study. Journal of Natural Science, Biology and Medicine, 6(1), 163–168.
https://doi.org/10.4103/0976-9668.149117
Hall JE. (2016)eena Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. 13th ed.
Philadelphia (PA)
Iriani, Y., Ramona, Y., & Astiti, N. P. A. (2021). Potensi Ekstrak Ethanol Daun
Salam Dan Air Rebusan Daun Salam Untuk Memperbaiki Profil Lipid (Ldl-
Kolesterol) Darah Pada Tikus Wistar. Metamorfosa: Journal of Biological
Sciences, 8(1), 89. https://doi.org/10.24843/metamorfosa.2021.v08.i01.p09
Jebari-Benslaiman, S., Galicia-García, U., Larrea-Sebal, A., Olaetxea, J. R., Alloza,
I., Vandenbroeck, K., Benito-Vicente, A., & Martín, C. (2022). Pathophysiology
of Atherosclerosis. In International Journal of Molecular Sciences (Vol. 23,
Issue 6). MDPI. https://doi.org/10.3390/ijms23063346
Keenam dr, E., U S, nab M., Geriatri Divisi Geriatri, K., Alwi Konsultan Kardiologi
Divisi Kardiologi, I., Sudoyo Konsultan Hematologi-Onkologi Medik Divisi

39
 40

Hernatologi-Onkologi Medik, A. W., lIr, D., Dalarn, P., Simadibrata Konsultan

Gastroenterologi-Hepatologi Divis, M. K., Ilrnu Penyakit Dalarn FKUI, D.,
Bambang Setiyohadi Konsultan Reurnatologi Divisi Reurnatologi, J., & Fahrial
Syam Konsultan Gastroenterologi-Hepatologi Divisi Gastroenterologi, A.
(2013). ILMU PENYAKIT DALAM Jilid I-\NI t t i N A Editor Siti Setiati.
Lewis, S. J. (2009). Prevention and Treatment of Atherosclerosis: A Practitioner’s
Guide for 2008. American Journal of Medicine, 122(1 SUPPL.).
https://doi.org/10.1016/j.amjmed.2008.10.016
Mahalle, N., Garg, M., Naik, S., & Kulkarni, M. (2014). Study of pattern of
dyslipidemia and its correlation with cardiovascular risk factors in patients with
proven coronary artery disease. Indian Journal of Endocrinology and
Metabolism, 18(1), 48–55. https://doi.org/10.4103/2230-8210.126532
Miller, M., Stone, N. J., Ballantyne, C., Bittner, V., Criqui, M. H., Ginsberg, H. N.,
Goldberg, A. C., Howard, W. J., Jacobson, M. S., Kris-Etherton, P. M., Lennie,
T. A., Levi, M., Mazzone, T., & Pennathur, S. (2011). Triglycerides and
cardiovascular disease: A scientific statement from the American Heart
Association. Circulation, 123(20), 2292–2333.
https://doi.org/10.1161/CIR.0b013e3182160726
Mutia, S., & Zairin Thomy, dan. (2018). Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Daun
Andong (Cordyline fruticosa (L.) A. Chev) Terhadap Kadar Kolesterol Total dan
Trigliserida Darah Tikus Putih (Rattus norvegicus) Hiperkolesterolemia The
Effect of Ethanol Extract of Andong (Cordyline fruticosa (L.) A. Chev) Leaves
on Total Cholesterol and Triglycerides Level of The Hypercholesterolemia
White Male Rat (Rattus norvegicus) Blood. In Jurnal Bioleuser (Vol. 2, Issue 2).
http://www.jurnal.unsyiah.ac.id/bioleuser/
Nashriana, N., Wirjatmadi, B., & Adriani, M. (2015). Combined Food (Bekatul dan
Lemak) Menurunkan Kadar Kolesterol Total, Trigliserida, dan LDL pada Tikus
Galur Wistar Combined Food (Rice Bran and Fat) Reduce of the Total
Cholesterol Levels, Triglycerides, and LDL of Wistar Strain Rats. In Jurnal
Kedokteran Brawijaya (Vol. 28, Issue 3).
Nurmiati, N., Nuryanti, S., & Tahril, T. (2020). Antioxidant Activity Test of Ethanol
and Water Extracts of Celery (Apium graveolens L.). Jurnal Akademika Kimia,
9(2), 93–101. https://doi.org/10.22487/j24775185.2020.v9.i2.pp93-101
Ormazabal, V., Nair, S., Elfeky, O., Aguayo, C., Salomon, C., & Zuñiga, F. A.
(2018). Association between insulin resistance and the development of

40
 41

cardiovascular disease. In Cardiovascular Diabetology (Vol. 17, Issue 1).

BioMed Central Ltd. https://doi.org/10.1186/s12933-018-0762-4
Pol, T., Held, C., Westerbergh, J., Lindbäck, J., Alexander, J. H., Alings, M., Erol, C.,
Goto, S., Halvorsen, S., Huber, K., Hanna, M., Lopes, R. D., Ruzyllo, W.,
Granger, C. B., & Hijazi, Z. (2018). Dyslipidemia and risk of cardiovascular
events in patients with atrial fibrillation treated with oral anticoagulation
therapy: Insights from the ARISTOTLE (Apixaban for Reduction in Stroke and
Other Thromboembolic Events in Atrial Fibrillation) trial. Journal of the
American Heart Association, 7(3). https://doi.org/10.1161/JAHA.117.007444
Rafieian-Kopaei, M., Setorki, M., Doudi, M., Baradaran, A., & Nasri, H. (2014).
Atherosclerosis: Process, Indicators, Risk Factors and New Hopes. In
International Journal of Preventive Medicine (Vol. 5, Issue 8). www.ijpm.ir
Risk Of Premature Death Due To Ncds In Indonesia,WHO 2018. (2018).
Sarwindah, D., Penelitian, J., & Profesional, P. (2020). POTENSI SELEDRI
SEBAGAI ANTI KOLESTEROL.
http://jurnal.globalhealthsciencegroup.com/index.php/JPPP
Stevani. (2016). Praktikum Farmakologi komprehensif.
Talayero, B. G., & Sacks, F. M. (2011). The role of triglycerides in atherosclerosis.
Current Cardiology Reports, 13(6), 544–552. https://doi.org/10.1007/s11886-
011-0220-3
Tandi, J. (2017). PENGARUH EKSTRAK ETANOL DAUN JAMBU AIR
(Syzygium aqueum (Burm f.)Alston) TERHADAP GLUKOSA DARAH,
UREUM DAN KREATININ TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus). Journal Of
Tropical Pharmacy And Chemistry, 4(2), 43–51.
https://doi.org/10.25026/jtpc.v4i2.137
Udin, B., & Kholifah, E. (2021). VI (1), hal. In Jurnal Ilmiah Bakti Farmasi (Vol.
2021).
Utami, R. W., Sofia, S. N., & Murbawani, E. A. (2017). HUBUNGAN ANTARA
ASUPAN KARBOHIDRAT DENGAN PROFIL LIPID PADA PASIEN
PENYAKIT JANTUNG KORONER. Etisa Adi Murbawani JKD, 6(2), 1143–
1155.
WHO. (2021). Cardiovascular Diseases (CVDs). (2021).
Wijayanti, R., Rosyid, A., & Izza, I. K. (2017). Pengaruh ekstrak kulit umbi
bawang putih (Allium sativum L.) Terhadap kadar kolesterol total darah

41
 42

tikus jantan galur wistar diabetes mellitus. Pharmaciana, 7(1), 9.

https://doi.org/10.12928/pharmaciana.v7i1.4075

42
 LAMPIRAN

Lampiran I

Teknik Pembuatan Ektrak Daun Seledri

(Tandi,2017) (Nurmiati et al.,2020) (Wijayanti et al.,2017) (Hartini &

Wulandari,2016)

1. Instrumen dan Bahan

a. Instrument
• Maserator
• Gelas Beaker
• Corong Buchner
• Ayakan Mesh 60
• Blender
• Kertas Saring
• Rotary evaporator
• Waterbath
• Timbangan Digital
b. Bahan
• Daun seledri
• Etanol 96% 250ml
2. Pembuatan Simplisia
a. Cuci dan potong kecil-kecil 25gram daun seledri (Apium graveolens)
b. Keringkan menggunakan oven untuk mengurangi kadar air
c. Aduk 30 menit setiap hari dan ganti pelarut yang lama dengan pelarut
yang baru setiap 24 jam agar hasil jernih
d. Saring hasil maserat dengan kain flannel dan dengan kertas saring
sebanyak dua kali.
e. Hasil ekstraksi dipekatkan dengan pelarut yang diuapkan menggunakan
rotary evaporator kemudian dengan waterbath.
3. Proses Maserasi dan Ekstraksi
a. Siapkan serbuk simplisia di dalam wadah yang tertutup
b. Tuangkan etanol 96% sebanyak 250ml Bersama simplisia selama lima
hari
c. Aduk selama 30 menit setiap hari dan ganti pelarut yang lama dengan
pelarut yang baru setiap 24 jam agar hasil jernih

39
 40

d. Saring hasil maserat dengan kain flannel dengan kertas saring sebanyak
dua kali
e. Hasil ekstraksi dipekatkan dengan pelarut yang diuapkan menggunakan
rotatory evaporator kemudian dengan waterbath
 41

Lampiran II

Penentuan Pemberian Dosis Ekstrak Daun Seledri

Hewan diberikan suspensi ekstrak daun seledri sebanyak 1 ml. dalam 1 ml

ekstrak etanol daun seledri terdapat dosis yang sudah ditentukan, yaitu 125mg/kgBB,
250mg/kgBB, dan 400mg/kgBB. Pembuatan larutan suspensi membutuhkan ekstrak
daun seledri, Na CMC 1% dan akuades. Suspensi pada kelompok perlakuan 1
(kelompok IV) yang berdosis 125mg/kgBB dengan Langkah seperti berikut :
1. Berat badan hewan coba akan di timbang terlebih dahulu dan akan di rata-rata,
hasil dari berat rata-rata dalam kilogram dikali dosis 100mg/kgBB
2. Dimisalkan rata-rata berat badan tikus 200g atau 0,2 maka untuk satu ekor tikus
tiap kelompok akan di berikan 20 mg/tikus/hari dengan perhitungan 0,2kg x
100mg.
3. Lalu total dosis ekstrak setiap kelompok perlakuan 1 yaitu 20 mg dikalikan
dengan 8 tikus dengan hasil 160mg ekstrak daun seledri.
4. Suspensi akan dibuat untuk 4 hari sehingga siperlukan total 640mg seledri
dengan rumus 160mg x 4 hari.
5. Akuades sebanyak 32 ml untuk 4 hari dengan rumus 1ml x 8 ekor tikus x 4 hari.
6. Na CMC dihitung dengan rumus: persen CMC dikali dengan total akuades 8
ekor tikus selama 4 hari dengan total 0,36gram Na CMC dengan perhitungan
1% x 32 ml
7. Dosis ekstrak selama 4 hari sebanyak 640mg akan dicampurkan akuades 32ml
dan Na CMC 0,32gram
Langkah diatas akan sama digunakan untuk membuat dosis kelompok perlakuan 2
(250mg/kgBB) dan kelompok perlakuan 3 (400mg/kgBB)
 42

Lampiran III

Cara Pemberian Obat Hewan Coba

(Stevani, 2016)

1. Cara memegang dan mengekang hewan coba

Jika tikus dipegang dengan baik dan benar maka tikus akan merespon
dengan baik. Jika tikus terancam tikus akan melakukan respon pertahanan diri
dengan menyerang. Saat memegang tikus gunakanlah sarung tangan sebagai
pelindung. Setelah menggunakan sarung tangan, angkat tikus dengan lembut
dan letakan tangan di dada bagian atas lalu letakkan ibu jari di bawah rahang
tikus. Usap lembut bagian perut tikus supaya membuat tikus merasa nyaman,
jangan menggunakan nada yang tinggi atau berbicara dengan keras saat
memegang tikus.
2. Cara pemberian ekstrak / obat peroral

Pemberian ekstrak dan obat menggunakan metode oral dengan bantuan

alat sonde. Sonde akan ditempelkan di langit mulut tikus lalu setelah itu secara
perlahan masukkan sonde ke esofagus dan saat mencapai esofagus ekstrak /
obat dimasukkan dengan volume total pemberian total pemberian 5ml.
 43

Lampiran IV

Pedoman Etika Penggunaan Dan Pemeliharan Hewan Coba

(Stevani, 2016)

Penelitian yang menggunakan hewan coba harus menerapkan prinsip 3R

(Replacment, Reduction, And Refinement). Replacement adalah prinsip yang membuat
hewan coba menjadi hewan coba pilihan terakhir, dan menggunakan metode in vitro
sebagai pilihan utama. Reduction mengacu pada pembatasan jumlah minimal dengan
kualitas yang baik untuk mendapat hasil valid. Refinement merupakan pemberlakuan
dengan sebaik mungkin terhadap hewan coba agar tidak mengalami stress ataupun rasa
sakit. Jika ada prosedur yang menimbulkan rasa sakit maka hewan coba harus
dilakukan anastesi.
Hewan coba memiliki hak yang disebut sebagai Animal Walfare yang terdapat
dalam 5F (Five of Freedom), yang terdiri dari berikut:
1. Freedom from hunger and thirst
Hewan coba wajib diberi makanan dan minuman dengann kadar nutrisi cukup
dan higienis agar terhindar dari kelaparan dan kehausan.
2. Freedom from thermal and physical discomfort
Hewan coba harus bebas dari rasa tidak nyaman akibat hawa panas dan
menempatkan hewan coba ditempat yang layak.
3. Freedom from injury, disease, and pain.
Hewan coba wajib dirawat dengan baik, diberi tindakat untuk mencegah
penyakit, dan mendiagnosis dengan tepat agar mendapat pengobatan yang
tepat.
4. Freedom to express most normal pattern of behavior
Hewan coba dibiarkan mengekspresikan prilaku alami hewan coba serta
memberikan pasangan atau teman untuk berinteraksi dan kawin.
5. Freedom from fear and distress
 44

Peneliti harus menghindari Tindakan dan kondisi yang menimbulkan rasa takut
dan stress ke hewan coba. Salah satu cara adalah menghindari konflik dengan
spesies lain dan tidak memunculkan predator di lingkungan hewan coba.
Hal-hal yang dapat dilakukan oleh peneliti untuk memberi kenyamanan dan
hak hewan coba sebagai berikut :
1. Tempat tinggal dan lingkungan
Hewan coba diletakkan di kendang yang layak secara bentuk, ukuran, suhu,
dan bahan yang baik. Area kendang harus bebas dari nyamuk dan diberi insect
proof screen, udara,suhu dan sirkulasi yang baik serta tidak lembab. Kendang akan
berbentuk segiempat dengan ukuran 40x50x20, yang di dasarnya diberi alas yang
dapat menyerap basah dan bau. Dalam penelitin ini dalam satu kendang akan
diberikan maksimal tiga ekor perkandang agar menghindari kompetisi dan
meminimalisir stress.
2. Sanitasi
Untuk menjaga kendang tetap bersih dan baik maka akan dilakukan
pembersihan dan pemberian disinfektan, peneliti juga wajib memakai jas lab,
masker, dan sarung tangan untuk perlindungan diri.
3. Kesediaan makanan
Makanan yang diberikan kepada hewan coba adalah makanan yang
bernutrisi dan dalam jumlah yang cukup. Makanan juga disimpan ditempat yang
bebas dari serangga dan tidak lembab.
4. Kebutuhan air
Air harus dapat mudah dan lancer untuk diminum hewan coba serta
memiliki kandungan mineral yang tidak terlalu tinggi, air juga harus bersih dari
kotoran dan tidak membasahi kendang
5. Sirkulasi udara
Ventilasi bertujuan agar memberi sirkulasi udara yang baik dan dapat diatur,
exhaust fan akan membantu sirkulasi udara menjadi lebih terkontrol
6. Penerangan
 45

Penerangan yang baik diperlukan untuk hewan berreproduksi. Penerangan

siklus terang gelap harus diperhatikan karena dikhawatirkan akan menggangu
proses reproduksi.

7. Kelembaban dan temperatur ruangan

Kelembaban dan suhu didalam ruangan berpengaruh terhadap kemampuan hewan
untuk mengatur panas tubuhnya. Jika terlalu panas maka akan mengakibatkan
hewan coba pingsan, suhu yang direkomendasikan untuk tikus adalah 30°C.
8. Keamanan
Keamanan disini adalah bertujuan untuk menjaga hewan coba agar terhindar dari
infeksi dengan membatasi orang yang menyentuh dan mengeluarkan hewan coba
tanpa tujuan untuk penelitian ini.
9. Training / kursus bagi personal
Diperlukan pelatihan dari orang yang sudah berpengalaman untuk memberikan
pelatihan kepada orang baru di bidang penelitian hewan coba karena banyaknya
aspek ilmu.
10. Identifikasi hewan
Identifikasikan masing masing hewan coba bisa mengunakan tag
individual,kalung leher ataupun tanda yang lain dan tidak membuat hewan coba
merasa sakit. Selain hewan coba kendang juga diberi penanda label.
11. Penerimaan hewan baru
Jika ada penambahan atau pergantian hewan coba, maka akan ditempatkan di
tempat terpisah untuk dilakukan adaptasi terlebihdahulu di laboratorium.
 46

Lampiran V

Pembuatan Suspensi Simvastatin

(Stevani,2016)

Peneliti menggunakan simvastatin dengan dosis 0,36mg/200gr BB hewan coba

lalu di konversikan ke dosis manusia yaitu 20mg/kgBB. Suspensi akan dibuat dengan
simvastatin yang akan dilarutkan di Na CMC 1% yang bertujuan untuk mengikat dan
menstabilkan suspense. Pemberian suspensi akan dilakukan menggunakan sonde
lambung secara peroral.
1. Pembuatan Natrium CMC 1%
a. Panaskan 200ml air hingga mendidih
b. Ukur berat Na CMC sebanyak 1 gram
c. Masukkan Na CMC ke gelas beaker yang berukuran 300ml lalu tambahkan
50ml air panas
d. Aduk hingga homogen mengunakan hot plate sampai serbuk putih hilang dan
terjadi perubahan konsistensi menjadi seperti gel
e. Tambahkan secara perlahan air panas dengan diaduk hingga volume larutan
menjadi 100ml, lalu dingankan
2. Pembuatan suspensi simvastatin
a. Siapkan empat tablet simvastatin 5mg, dua tablet simvastatin 10mg, dan satu
tablet simvastatin 20mg
b. Gerus tablet simvastatin sampai halus
c. Pindahkan serbuk simvastatin ke dalam Erlenmeyer 100ml
d. Tambahkan Na CMC 1% sebanyak 50ml lalu kocok hingga homogen
e. Cukupkan volume sampai 100ml dengan Na CMC 1%
 47

Lampiran VI

Teknik Euthanasia Hewan Coba

(Stevani, 2016)

Euthanasia merupakan proses terminasi tanpa menimbulkan rasa sakit.

Euthanasia akan dilakukan pada saat akhir penelitian untuk melihat organ dalam,efek
toksisitas obat, atau kesakitas pada hewan coba pada saat proses penelitian.
Euthanasia memiliki dua metode, yaitu secara kimiawi dan fisik. Sebelumitu hewan
coba akan diberi anti nyeri untuk menghilangan nyeri lalu aka nada tahap amnesia dan
tahap imobilisasi. Pemberian anastesi kimiawi bisa diberikan satu per satu untuk
mencapai semua tahap anastesi atau dapat diberikan obat analgesic dan sedatif.
Euthanasia secara fisik dilakukan sebagai berikut:
1. Ekor hewan coba dipegang dan digantung ke tempat yang bisa meregangkan
badannya.
2. Saat hewan coba meregangkan badanya, tempelkanlah suatu penahan yang
dipegang dan tangan kiri di tengkuk hewan coba
3. Tarik ekor hewan coba dengan menggunakan tangan kanan secaraa kuat-kuat
sehingga terjadi dislokasi pada leher hewan coba dan akan terbunuh
 48

Lampiran VII

Pengukuran Profil Lipid dengan Metode Spektrofotomeri

1. . Instrumen dan Bahan

a. Instrumen

• Test tube kecil

• Mikropipet

• Tip mikropipet

• Vortex

• Waterbath

• Spektrofotometer

• Cuvette

2. Bahan

• Serum sampel

• Reagen dan standar TG

• Reagen kolesterol

3. Kolorimetri

a. Sediakan tabung blank, standar, dan tabung sampel

b. Masukkan 1ml reagen kolesterol ke tabung blank, 1ml reagen kolesterol

dan 10 mikroliter standar TG ke tabung standar, 1ml dan 10 mikroliter

sampel ke tabung sampel

 49

c. Kocok perlahan dan letakkan di waterbath dengan suhu 37 derajat

Celcius selama 5 menit

d. Letakkan di spektrofotometri

e. Hitung blank dan standar

f. Tuliskan hasil

4. Kalkulasi hasil

A(Sample) mg
C(standard) = ⋯ T
A(standard) dL
50