UJI ANTIOKSIDAN EKSTRAK METANOL DAUN LEGETAN

(Synedrella nodifloral (L) Gaertn) DENGAN METODE

DPPH DAN ABTS

SKRIPSI

OLEH:

NUR CAHYANTI
1801011270

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI DAN KESEHATAN
INSTITUT KESEHATAN HELVETIA
MEDAN
2022
 ABSTRAK

UJI ANTIOKSIDAN EKSTRAK METANOL DAUN LEGETAN (Synedrella

nodifloral (L) Gaertn) DENGAN METODE
DPPH DAN ABTS

NUR CAHYANTI
1801011270

Antioksidan berperan aktif dalam menanggulangi kelebihan radikal bebas

yang pada umumnya bekerja sebagai penangkap radikal bebas dan mencegah
terjadinya reaksi berantai salah satu tanaman yang memiliki fungsi antioksidan
yaitu daun legetan (Synedrella nodifloral (L) Gaertn). Tujuan penelitian untuk
mengetahui aktivitas antioksidan dari ekstrak metanol daun legetan
Jenis penelitian yang digunakan adalah eksperimental, yang meliputi
pengambilan sampel, determinasi tumbuhan, pegujian aktivitas antioksidan.
pembuatan ekstrak dengan pelarut etil asetat dengan perbandingan 1:10,
pengujian aktivita antioksidan menggunakan metode pemerangkapan radikal
bebas DPPH, pengukuran aktivitas peredaman radikal ebas DPPH secara
spektrofotometri. Analisis data yang digunaan adalah perhitungan nilai IC50.
Hasil uji aktivitas antioksidan terhadap ekstrak metanol daun legetan
dengan menggunakan metode pemerangkapan DPPH memiliki aktivitas
antioksidan dengan nilai IC50 sebesar 68,420 ppm dengan kategori kuat dan
dengan metode ABTS memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 sebesar
29,090 ppm dengan kategori sangat kuat. Uji aktivitas antioksidan baku
pembanding Vitamin C dengan menggunakan metode pemerangkapan DPPH
memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC50 sebesar 70,163 ppm dan ABTS
sebesar 68,336 ppm sama-sama memiliki kategori kuat
Kesimpulan dalam penelitian ini adalah Hasil pengukuran aktivitas
antioksidan dengan metode pemerangkapan radikal bebas DPPH dan ABTS
terhadap ekstrak metanol daun legetan menunjukkan adanya aktivitas
antioksidan.

Kata Kunci : Antioksidan, Daun Legetan, Spektrofotometri UV-Vis

i
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur saya panjatkan kepada Allah SWT atas segala karunia
nikmat serta hidayah-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsiyang
berjudul “Uji Antioksidan Ekstrak Metanol Daun Legetan (Synedrella
nodifloral (L) Gaertn) Dengan Metode DPPH Dan ABTS” yang disusun
sebagai salah satu syarat untuk menyelesaikan pendidikan program S1 Farmasi di
Institut Kesehatan Helvetia Medan.
Selama proses penyusunan skripsiini penulis banyak mendapatkan bantuan
dan bimbingan dari berbagai pihak. Oleh karena itu pada kesempatan ini penulis
menyampaikan ucapan terimakasih kepada:
1. Dr. dr. Hj. Razia Begum Suroyo, M.Sc., M.Kes., selaku Pembina Yayasan
Helvetia Medan.
2. Dr. dr. Arifah Devi Fitriani, M.Kes., selaku Ketua Yayasan Helvetia
Medan.
3. Dr. H. Ismail Efendi, M.si., selaku Rektor Institut Kesehatan Helvetia
Medan.
4. apt. H. Darwin Syamsul, S.Si., M.si., selaku Dekan Falkultas Farmasi dan
Kesehatan Institut Kesehatan Helvetia Medan.
5. apt. Adek Chan, S.Si., M.Si., selaku Ketua Prodi S1 Farmasi Institut
Kesehatan Helvetia Medan.
6. Hendri Faisal S.Si., M.Si., selaku Dosen Pembimbing I yang telah
menyediakan waktu dan tenaga untuk membimbing dan memberikan
arahan serta masukan kepada penulis selama penyusunan skripsi.
7. apt. Ihsanul Hafiz S. Farm., M.Si., selaku Dosen Pembimbing II yang
memberikan masukan yang bermanfaat untuk perbaikan skripsiini.
8. apt. Ririyen Dessy Natalia Siahaan S.Farm., M.Si., selaku Penguji yang
meluangkan waktunya untuk memberikan kritik dan saran yang
membangun dalam penyempurnaan skripsiini.
9. Seluruh Dosen Program Studi S1 Farmasi yang telah mendidik dan
mengajarkan berbagai ilmu yang bermanfaat bagi penulis.
10. Dan tak lupa terima kasih kepada Ayahanda M,Yamin Akman dan Ibunda
Sumiati yang selalu memberikan pandangan, mendukung baik moril
maupun materil, mendoakan dan selalu memotivasi penulis dalam
menyelesaikan skripsiini.
11. Teman–teman seperjuangan yang telah banyak membantu dan
memberikan support dalam mengerjakan Skripsi ini
Penulis menyadari baik dari segi penggunaan bahasa, cara menyusun
skripsiini masih jauh dari kata sempurna, oleh karena itu dengan segala
kerendahan hati, penulis sangat mengharapkan kritik dan saran yang membangun
dari semua pihak untuk kesempurnaan skripsiini.
Medan, April 2022
Penulis

ii
 Nur cahyanti

DAFTAR ISI

Halaman

ABSTRAK.............................................................................................. i
KATA PENGANTAR........................................................................... ii
DAFTAR ISI.......................................................................................... iii
DAFTAR GAMBAR............................................................................. v
DAFTAR TABEL.................................................................................. vi
DAFTAR LAMPIRAN......................................................................... viii
BAB I PENDAHULUAN...................................................................... 1
1.1 Latar Belakang........................................................................ 1
1.2 Rumusan Masalah................................................................... 4
1.3 Hipotesis Penelitian................................................................ 5
1.4 Tujuan Penelitian.................................................................... 5
1.5 Manfaat Penelitian.................................................................. 5
1.6 Kerangka Konsep Penelitian................................................... 6
BAB II TINJAUAN PUSTAKA........................................................... 7
2.1 Tanaman Legetan.................................................................... 7
2.1.1 Klasifikasi Legetan (Synedrella nodiflora L.).................. 8
2.1.2 Morfologi Legetan (Synedrella nodiflora L.)................... 8
2.1.3 Kandungan Senyawa Daun legetan (Synedrella
nodiflora L.).................................................................................... 9
2.1.4 Manfaat Daun Legetan........................................................ 9
2.2 Ekstraksi................................................................................. 10
2.2.1 Pengertian Ekstraksi............................................................ 10
2.2.2 Metode Ekstraksi.................................................................. 11
2.2.3 Pelarut Ekstraksi................................................................... 13
2.3 Radikal Bebas......................................................................... 15
2.4 Antioksidan............................................................................. 16
2.4.1 Pengertian Antioksidan....................................................... 16
2.4.2 Fungsi Zat Antioksidan....................................................... 17
2.4.3 Golongan Antioksidan......................................................... 18
2.4.4 Mekanisme Antioksidan...................................................... 21
2.5 Metode Pengujian Antioksidan............................................... 22
2.5.1 Metode DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil)................ 22
2.5.2 Metode ABTS (2,2-azinobis-3-Ethylbenzothiazoline-6-
Sulfonic Acid).................................................................................. 24

iii
 2.6 Penentuan Nilai IC50.............................................................. 25
2.7 Spektrofotometri UV-Vis....................................................... 26
BAB II METODOLOGI PENELITIAN............................................. 28
3.1 Jenis Penelitian....................................................................... 28
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian................................................. 28
3.2.1 Waktu Penelitian.................................................................. 28
3.2.2 Tempat Penelitian................................................................ 28
3.3 Sampel Penelitian................................................................... 28
3.4 Alat dan Bahan....................................................................... 37
3.4.1 Alat.................................................................................. 37
3.4.2 Bahan............................................................................... 37
3.6 Prosedur Kerja........................................................................ 37
3.6.1 Penyiapan Simplisia............................................................. 37
3.6.2 Pembuatan Ekstrak Metanol Daun Legetan (Synedrella
nodiflora L.).................................................................................... 38
3.7 Uji Aktivitas Antioksidan Dengan Metode DPPH................. 38
3.7.1 Penyiapan Larutan Sampel.................................................. 38
3.7.2 Analisa Kuantitatif............................................................... 39
3.8 Uji Aktivitas Antioksidan Metode ABTS............................... 41
3.8.1 Penyiapan Sampel................................................................ 41
3.8.2 Pengukuran Antioksidan Dengan Metode ABTS............. 41
3.9 Analisis Data........................................................................... 43
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN............................................... 44
4.1 Hasil Penelitian....................................................................... 44
4.1.1 Hasil Determinasi Tanaman................................................ 44
4.2 Hasil Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum
DPPH........................................................................................... 45
4.2.1 Hasil Analisa Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol
Daun Legetan Metode DPPH.......................................... 46
4.2.2 Hasil Analisa Aktivitas Antioksidan Vitamin C Metode
DPPH............................................................................... 47
4.3 Hasil Analisa Nilai IC50 dari Ekstrak Etil Daun Legetan dan
Vitamin C Metode DPPH............................................................ 48
4.4 Hasil Analisa Aktivitas Antioksidan Terhadap ABTS........... 48
4.4.1 Hasil Penentuan Panjang Gelombang Serapan
Maksimum ABTS............................................................ 49
4.4.2 Hasil Analisa Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol
Daun Legetan Metode ABTS.......................................... 50

iv
 4.4.3 Hasil Analisa Aktivitas Antioksidan Vitamin CMetode
ABTS............................................................................... 50
4.5 Hasil Analisa Nilai IC50 dari Ekstrak Daun Legetan dan
Vitamin C metode ABTS............................................................ 51
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN................................................ 52
5.1 Kesimpulan............................................................................ 52
5.2 Saran...................................................................................... 52
DAFTAR PUSTAKA............................................................................ 53

v
 DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

Gambar 1.6 Kerangka Konsep................................................................ 6

Gambar 2.1 Legetan (Synedrella nodiflora L.) 7
Gambar 2.2 Struktur Kimia 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil (DPPH)....... 23
Gambar 2.3 Mekanisme Reaksi DPPH dengan Antioksidan.................. 23
Gambar 2.4 Reaksi ABT.......................................................................... 25
Gambar 4.1 Kurva Panjang Gelombang Serapan Maksimum DPPH..... 45
Gambar 4.2 Kurva Panjang Gelombang Serapan Maksimum ABTS..... 49
.................................................................................................................

vi
 DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

Tabel 2.1 Senyawa Kimia Daun Legetan (Synedrella nodifloral (L)

Gaertn................................................................................... 9
Tabel 2.2 Katagori Aktifitas Antioksidan............................................ 26
Tabel 4.1 Nilai Persen Peredaman DPPH pada Ekstrak Metanol
Daun Legetan........................................................................ 46

Tabel 4.2 Nilai Persen Peredaman DPPH pada Vitamin

(pembanding)........................................................................ 47
Tabel 4.3 Hasil Persamaan Regresi dan Nilai IC50 dari sampel uji
dan pembanding Vit C Metode DPPH................................. 48
Tabel 4.4 Nilai Persen Peredaman ABTS pada Ekstrak Metanol
Daun Legetan....................................................................... 50
Tabel 4.4 Nilai Persen Peredaman ABTS pada Vitamin C
(Pembanding)....................................................................... 50
Tabel 4.6 Hasil Persaman Regresi dan Nilai IC50 dari Sampel Uji dan
Pembanding Vitamin C Metode ABTS................................ 51

vii
 DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Hasil Determinasi Tamanan........................................ 56

Lampiran 2. Surat Pembelian Vitamin C........................................ 57
Lampiran 3. Surat Sertifikat Analisis Asam Askrobat................... 58
Lampiran 4. Sertifikat Analisis........................................................ 59
Lampiran 5. Flowchart Pembuatan Ekstrak daun legetan............... 60
Lampiran 6. Flowchart Uji Antioksidan dengan Metode DPPH.... 61
Lampiran 7. Flowchart Pengukuran Aktivitas Peredaman
Radikal Bebas ABTS.................................................. 63
Lampiran 8. Hasil Pengukuran Panjang Gelombang DPPH........... 64
.....................................................................................
Lampiran 9. Pengukuran Ekstrak Legetan Metode DPPH.............. 65
Lampiran 10. Pengukuran Baku Pembanding Vitamin C................. 68
Lampiran 11. Hasil Pengukuran Panjang Gelombang ABTS........... 71
Lampiran 12. Pengukuran Ekstrak Metode ABTS............................ 72
Lampiran 13. Pengukuran Vitamin C Spektrofotometri UV-Vis
Metode ABTS............................................................. 75
Lampiran 14. Perhitungan nilai IC50 Terhadap Ekstrak Daun
Legetan metode DPPH............................................... 78
Lampiran 15. Perhitungan nilai IC50 Terhadap Vitamin C metode
DPPH.......................................................................... 79
Lampiran 16. Perhitungan nilai IC50 Terhadap Ekstrak Daun
Legetan metode ABTS................................................ 80
Lampiran 17. Perhitungan nilai IC50 Terhadap Vitamin C metode
ABTS.......................................................................... 81
Lampiran 18. Pembuatan Ekstrak Daun Legetan.............................. 82
Lampiran 19. Pengujian Antioksidan Metode DPPH dan ABTS...... 83

viii
ix
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Radikal bebas dalam jumlah normal bermanfaat bagi kesehatan misalnya,

memerangi peradangan, membunuh bakteri dan mengendalikan tonus otot polos

pembuluh darah serta organ-organ dalam tubuh sementara dalam jumlah berlebih

akan mengakibatkan stres oksidatif. Keadaan tersebut dapat menyebabkan

kerusakan oksidatif mulai dari tingkat sel, jaringan, hingga ke organ tubuh yang

mempercepat terjadinya proses penuaan dan munculnya penyakit (1).

Stres oksidatif sangat berperan penting dalam patofisiologi terjadinya

proses menua dan berbagai penyakit degeneratif, seperti kanker, diabetes miletus

dan komplikasinya, serta aterosklerosis yang medasari penyakit jantung,

pembuluh darah dan stroke. Untuk mencegah stres oksidatif, antioksidan sangat

diperlukan oleh tubuh untuk mengatasinya. Antioksidan adalah senyawa pemberi

elektron pada senyawa yang memiliki elektron yang tidak berpasangan (radikal

bebas). Antioksidan dapat meredam atau mengurangi dampak negatif dari radikal

bebas dengan cara mengikatnya lalu mengubahnya menjadi tifak berbahaya bagi

tubuh (2).

Antioksidan berperan aktif dalam menanggulangi kelebihan radikal bebas

yang pada umumnya bekerja sebagai penangkap radikal bebas dan mencegah

terjadinya reaksi berantai. Mekanisme kerja senyawa antioksidan salah satunya

yaitu dengan cara mendonorkan atom hidrogen atau proton pada senyawa radikal

bebas sehingga dapat meredam aktivitas radikal dan menghambat terjadinya

1
 2

reaksi berantai dari pembentukan radikal bebas, sehingga senyawa radikal bebas

lebih stabil (3).

Antioksidan berdasarkan sumbernya dapat dibagi menjadi dua yaitu

antiokisdan alami dan antioksidan sintetik. Penggunaan antioksidan sintetik selain

memberikan manfaat, ternyata dalam jangka waktu lama dapat menimbulkan efek

samping yang berbahaya, salah satunya yaitu dapat meningkatkan terjadinya

karsinogenesis. Oleh karena itu, diperlukan sumber antioksidan alami yang mudah

diperoleh dan ketersediaannya di alam dalam jumlah melimpah juga mempunyai

efek samping yang rendah dibanding antioksidan sintetik. Berbagai bahan alam

asli Indonesia banyak mengandung antioksidan dengan berbagai bahan aktifnya.

Pengguanan bahan alam asli indonesia sebagai antioksidan diperlukan untuk

meningkatkan kualitas kesehatan masyarakat dengan biaya yang relatif

terjangkau. Salah satu alternatif antioksidan alami yaitu seperti daun legetan

(Synedrella nodifloral (L) Gaertn)(4).

Daun Legetan (Synedrella nodifloral (L) Gaertn) merupakan tanaman

perdu yang umum dijumpai terutama disekitar sungai-sungai kecil serta

disepanjang jalan dan dibawah pohon yang rindang. Tanaman ini digunakan

sebagai pakan ternak dan pengobatan tradisional untuk mengobati berbagai

masalah kesehatan di Ghana, Nigeria, Malaysia dan Indonesia. Tanaman ini asli

dari Amerika Tropis dan menyebar ke seluruh wilayah yang lebih hangat di dunia.

Ekstrak legetan menunjukkan bahwa senyawa kimia dalam daun legetan

mengandung flavanoid dan fenolat sederhana. Menurut penelitian yang dilakukan

oleh Bidam (2014) “Phytochemical and Antimicrobial Studies On The Aerial

 3

Parts of Synedrella nodiflora Linn” mengatakan bahwa ekstrak metanol daun

legetan positif mengandung senyawa kimia flavanoid. Penelitian lain yang

dilakukan oleh Amoateng (2017) “Extract of Synedrella nodiflora (L) Gaertn

Exhibits Antipsychotic Propeties In Murine Models Of Psychosis” mengatakan

bahwa daun legetan mengandung senyawa flavanoid, antrakinon dan fenolik (5–

7).

Alasan menggunakan daun legetan yaitu karena menurut penelitian

sebelumnya mengatakan bahwa daun legetan memiliki senyawa flavanoid, dimana

flavanoid memiliki sifat antioksidan. Uji aktivitas antioksdian pada penelitian ini

menggunakan pelarut metanol dengan metode DPPH (2,2-diphenyl-1-

picryhydrazil) dan metode ABTS (2,2-azinobis-3-Ethylbenzothiazoline-6-Sulfonic

Acid). Metode DPPH adalah metode yang dapat diguankan untuk menentukan

aktivitas antioksidan dalam sampel yang akan diujikan dengan melihat

kemampuannya dalam menangkal radikal bebas DPPH. Kelebihan metode DPPH

ini yaitu metodenya yang sederhana, mudah, cepat, peka, serta memerlukan

sampel dalam jumlah kecil, mudah diterapkan karena senyawa radikal DPPH yang

digunakan bersifat relatif stabil dibanding metode lainnya. Prinsip dari metode ini

adalah adanya donasi atom hidrogen dari substansi yang diujikan kepada radikal

DPPH menjadi sneyawa non radikal difenilpikrilhidrazin yang akan ditunjukan

dengan perubahan warna dari ungu menjadi juning, dimana intensitas perubahan

warna DPPH berbanding lurus dengan aktivitas antioksidan untuk meredam

radikal bebas tersebut (8).

 4

Metode ABTS (2,2-azinobis-3-Ethylbenzothiazoline-6-Sulfonic Acid)

merupakan salah satu metode penentian aktivitas antioksidan yang diperoleh dari

hasil oksidasi kalium persulfat dengan garam diammonium ABTS. Dibandingkan

dengan metode DPPH, metode ABTS memiliki keunggulan yaitu memberikan

absorbansi spesifik pada panjang gelombang visible dan waktu reaksi yang lebih

cepat. Prinsip dari metode ABTS yaitu mendonorkan proton kepada radikal bebas

yang ditandai dengan pemudaran warna dari warna biru kehijauan menjadi tidak

berwarna seiring tereduksinya kation radikal ABTS. Kelebihan dari metode ini

yaitu waktu reaksi yang dibutuhkan cepat, sederhana, serta dapat bekerja pada

rentang pH yang luas. Namun ada pula kekurangan dalam metode ini yaitu sangat

sensitif terhadap cahaya dan memerlukan waktu inkubasi 12-16 jam dalam kondisi

gelap (9,10).

Berdasarkan uraian diatas, penelitian ini bertujuan untuk melakukan

pengujian antioksidan ekstrak metanol daun legetan (Synedrella nodifloral (L)

Gaertn) dengan metode DPPH dan ABTS

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang di atas, maka rumusan masalah dalam

penelitian ini adalah sebagai berikut:

a. Apakah ekstrak metanol daun legetan (Synedrella nodifloral (L) Gaertn)

memiliki aktivitas antioksidan?

b. Berapakah nilai IC50 yang terdapat dalam ekstrak metanol daun legetan

(Synedrella nodifloral (L) Gaertn) dengan metode DPPH?

 5

c. Berapakah nilai IC50 yang terdapat dalam ekstrak metanol daun legetan

(Synedrella nodifloral (L) Gaertn) dengan metode ABTS?

1.3 Hipotesis Penelitian

Berdasarkan perumusan masalah di atas, maka dibuat hipotesis sebagai

berikut:

a. Ekstrak metanol daun legetan (Synedrella nodifloral (L) Gaertn) memiliki

aktivitas antioksidan.

b. Nilai IC50 yang terdapat dalam ekstrak metanol daun legetan (Synedrella

nodifloral (L) Gaertn) dengan metode DPPH dalam kategori kuat.

c. Nilai IC50 yang terdapat dalam ekstrak metanol daun legetan (Synedrella

nodifloral (L) Gaertn) dengan metode ABTS dalam kategori kuat.

1.4 Tujuan Penelitian

a. Untuk mengetahui apakah ekstrak metanol daun legetan (Synedrella

nodifloral (L) Gaertn) memiliki aktivitas antioksidan.

b. Untuk mengetahui berapa nilai IC50 yang tedapat dalam ekstrak metanol

daun legetan (Synedrella nodifloral (L) Gaertn) dengan metode DPPH.

c. Untuk mengetahui berapa nilai IC50 yang tedapat dalam ekstrak metanol

daun legetan (Synedrella nodifloral (L) Gaertn) dengan metode ABTS.

1.5 Manfaat Penelitian

Manfaat dari penelitian ini yaitu untuk menambah informasi dan

pemahaman kepada pembaca dan masyarakat bahwa daun legetan (Synedrella

nodifloral (L) Gaertn) memiliki aktivitas antioksidan yang baik untuk kesehatan,

dan sebagai acuan untuk penelitian selanjutnya.

 6

1.6 Kerangka Konsep Penelitian

Variabel Bebas Variabel Terikat Parameter

Ekstrak Metanol Uji Antioksidan

Daun legetan Ekstrak metanol daun
(Synedrella legetan (Synedrella
nodifloral (L) Nilai IC50
nodifloral (L) Gaertn)
Gaertn)dengan dengan metode DPPH
konsentrasi 20 ppm, dan ABTS
40 ppm, 60 ppm, 80
ppm, dan 100 ppm

Gambar 1.1 Kerangka Konsep

 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tanaman Legetan

Tanaman Legetan (Synedrella nodifloral (L) Gaertn) merupakan tanaman

genus monotipe dengan hanya satu spesies S. Nodiflora. Nama generiknya berasal

dari kata Yunani “synedros” yang berarti bunga-bunga kecil yang duduk bersama,

sedangkan nama spesies menunjukkan adanya gugusan bunga disekitar simpul di

bagian atas tanaman. Tanaman ini asli dari Amerika Tropis dan menyebar ke

seluruh wilayah yang lebih hangat di dunia. Tanaman ini tersebar di seluruh

wilayah Asia Tenggara, ditemukan di dataran India, di Andaman dan Afrika

Barat. Hal ini juga ditemukan di Bangladesh, Jepang, Spanyol, Cina dan Inggris.

Tanaman ini digunakan sebagai pakan ternak dan pengobatan tradisional untuk

mengobati berbagai masalah kesehatan di Ghana, Nigeria, Malaysia dan

Indonesia. Legetan (Synedrella nodifloral (L) Gaertn) merupakan tanaman perdu

yang umum dijumpai terutama disekitar sungai-sungai kecil serta disepanjang

jalan dan dibawah pohon yang rindang (7,11).

Gambar 2.1 Legetan (Synedrella nodiflora L.)

7
 8

2.1.1 Klasifikasi Legetan (Synedrella nodiflora L.)

Kingdom : Plantae

Divisi : Tacheophyta

Kelas : Magnoliopsida

Ordo : Asteranae

Famili : Asteraceae

Genus : Synedrella

Spesies : Synedrella nodifloral (L) Gaertn.

2.1.2 Morfologi Legetan (Synedrella nodiflora L.)

Legetan (Synedrella nodifloral (L) Gaertn)adalah herba ephemeral

bercabang tegak biasanya setinggi 30-80 cm milik keluarga Asteraceae. Sistem

akar dangkal biasanya bercabang kuat. Batang tegak atau menanjak, terkadang

berkayu, bercabang secara dikotomis dari pangkal tanaman, cenderung memiliki

ruas yang panjang dan simpul yang membengkak, membulat atau sedikit bersudut,

halus, sering berbulu halus, dan biasanya tingginya sekitar 50 cm. Bagian bawah

batang dapat berakar pada buku, terutama dalam kondisi lembab (12).

Daun muncul berpasangan berlawanan dan panjangnya 4-9 cm, elips

sampai bulat telur dengan tiga urat menonjol dan margin bergigi halus, berbulu

halus dengan tangkai daun pendek, dan bergabung dengan punggungan di batang.

Bunganya muncuk dalam tandan kecil yang penuh sesak dengan 2-8 pebungaan

pada buku dan ujung di sepertiga bagian atas tanaman. Setiap perbungaan terdiri

dari beberapa batang tegak dengan panjang 3-5 mm mengelilingi 5-6 kuntum ray
 9

merginal dan 10-20 kuntum cakram tengah, masing-masing sepanjang 3-4 mm

dengan kelopak kuning (12).

Biji berwarna cokelat tua sampai kehitaman (kadang-kadang lebih pucat)

bersifat dimorfik. Biji bunga ray pipih, lonjong, panjang 3-5 mm, dengan gigi

mengarah ke atas di sepanjang sayap marginal yang leboh pucat. Benih floret disc

menebal, memanjang, panjang 3-4 mm, dnegan 2-4 bulu kaku di puncak. Kedua

jenis benih menghasilkan individu yang identik, yang pada gilirannya

menghasilkan kedua jenis benih (12).

2.1.3 Kandungan Senyawa Daun legetan (Synedrella nodiflora L.)

Senyawa kimia dalam daun legetan (Synedrella nodifloral (L) Gaertn)

ditunjukkan pada tabel 2.1 dibawah ini.

Tabel 2.1 Senyawa Kimia Daun legetan (Synedrella nodifloral (L) Gaertn) (13).
Ekstrak Senyawa Kimia
Flavanoid, Alkaloid, Glikosida, Steroid, Tanin,
Metanol
Saponin, Fitosterol.
Etanol Alkaloid, Steroid, Gum, Gula Pereduksi, Tanin.
Alkaloid, Tanin, Saponin, Flavanoid, Steroid,
Air
Triterpenoid.
Flavanoid, Streoid, Triterpenoid, Saponin, Alkaloid,
n-Heksan
Fitosterol.
Kloroform Flavanoid, Steroid, Saponin, Alkaloid, Fitosterol.
Flavanoid, Saponin, Alkaloid, Triterpenoid,
Etil Asetat
Fitosterol.
Flavanoid, Steroid, Saponin, Tanin, Alkaloid,
Butanol
Glikosida, Fitosterol.
2.1.4 Manfaat Daun Legetan

Secara tradisional, daun legetan (Synedrella nodifloral (L) Gaertn)

digunakan sebagai tapal untuk rematik dan jus daunnya digunakan untuk sakit

telinga di India. Di Ghana, gulma ini digunakan untuk pengobatan epilepsi dan

nyeri. Ni Nigeria, tanaman ini digunakan untuk menyembuhkan luka yang

 10

membusuk. Di Malaysia dan Indonesia, tanaman ini diguankan untuk sakit kepala,

sakit telinga, sakit perut dan rematik. Ekstrak daun legetan memiliki sifat

antiinflamasi, analgesik, antinosiseptif, antipiretik, antioksidan dan antimikroba

(14).

2.2 Ekstraksi

2.2.1 Pengertian Ekstraksi

Ekstraksi merupakan proses penarikan zat/senyawa kimia yang dapat larut

terpisah dari zat yang tidak larut dari bagian tanaman, bagian hewan termasuk

biota laut dengan pelarut/penyari cair. Zat/senyawa yang terlarut atau tersari

merupakan zat aktif dari dalam sel (15).

Pada proses ekstraksi dengan pelarut, jumlah dan jenis senyawa yang

termasuk ke dalam cairan pelarut sangat ditentukan oleh jenis pelarut yang

digunakan dan meliputi dua fase, yaitu fase pembilasan dan fase ekstraksi. Pada

fase pembilasan, pelarut membilas komponen-komponen isi sel yang telah pecah

pada proses penghancuran sebelumnya. Pada fase ekstraksi, mula-mula terjadi

pembengkakakn dinding sel dan pelonggaran kerangka selulosa dinding sel

sehingga pori-pori dinding sel menjadi melebar yang menyebabkan pelarut dapat

dengan mudah masuk kedalam sel. Bahan isi sel kemudian terlarut kedalam

pelarut sesuai dengan tingkat kelarutannya lalu berdifusi keluar akibat adanya

gaya yang ditimbulkan karena perbedaan konsentrasi bahan terlarut yang terdapat

di dalam dan di luar (16).

 11

2.2.2 Metode Ekstraksi

Ekstraksi dengan pelarut terdiri dari dua metode, yaitu cara dingin dan cara

panas. Bahan yang akan diekstraksi terlebih dahulu dipotong atau digiling agar

luas permukaan semakin besar. Nama bahan hasil pengolahan tersebut sering

dinamakan simplisia. Berikut merupakan metode ekstraksi dengan pelarut yaitu:

a. Ekstraksi Cara Dingin

(1) Maserasi

Maserasi adalah jenis ekstraksi yang dilakukan dengan merendam

sampel pada suhu ruang menggunakan pelarut yang sesuai sehingga dapat

melarutkan analit dalam sampel. Sampel biasanya direndam sambil diaduk

sesekali selam 3-5 hari agar mempercepat proses pelarutan analit.

Ekstraksi dilakukan hingga beberapa kali supaya analit terekstraksi secara

sempurna dengan melihat pelarut yang digunakan tidak berwarna lagi (17).

Prinsip dari maserasi adalah pelarut akan masuk ke dalam sel

melewati dinding sel dan isi sel. Isi sel akan larut karena adanya perbedaan

konsentrasi antara larutan di dalam sel dengan di luar sel. Larutan yang

konsentrasinya tinggi akan terdesak keluar dan diganti oleh cairan pelarut

yang memiliki konsentrasi rendah begitu terus-menerus sampai terjadi

keseimbangan konsentrasi antar larutan di luar sel dan di dalam sel (18).

Keuntungan metode maserasi adalah peralatan yang digunakan

sederhana, mudah dan ekonomis. Namun ada kelemahan yaitu waktu yang

digunakan untuk ekstraksi lam dan memerlukan pelarut yang banyak

karena biasanya pelarut jumlahnya 3 sampai 5 kali lipat jumlah simplisia

 12

serta hanya simplisia yang zat aktifnya bisa larut, sehingga tidak bisa

untuk senyawa yang teksturnya keras (18).

(2) Perkolasi

Perkolasi adalah ekstraksi dengan cara mengalirkan pelarut secara

perlahan pada sampel dalam suatu alat perkolator. Jenis ekstraksi ini

menggunakan banyak pelarut baru karena selalu diberikan pelarut secara

terus-menerus, proses penambahan pelarut menggunakan pola penetasan

dari bejana terpisah disesuaikan jumlah pelarut yang keluar. Indikasi

bahwa analit telah terekstraksi sempurna dengan melihat pelarut yang

digunakan tidak berwarna atau dapat dilakukan dengan menguji

menggunakan kromatografi lapis tipis dan spektrofotometer UV-Vis

(17).

b. Ekstraksi Cara Panas

(1) Refluks

Refluks merupakan metode ekstraksi dengan menggunakan pelarut

pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut

yang relatif stabil dengan adanya prinsip pendingin balik. Metode ini

hanya digunakan pada bahan yang tahan terhadap panas. Keuntungan

metode refluks adalah dapat melarutkan zat aktif pada bahan yang

teksturnya kasar, namun kerugiannya adalah butuh volume pelarut yang

banyak (18).

(2) Sokletasi
 13

Sokletasi merupakan ekstraksi dengan menggunakan pelarut yang

selalu baru sehingga terjadi ekstraksi secara kontinu dengan jumlah pelarut

yang selalu konsntan dengan prinsip adanya pendingin baik. Keuntungan

metode sokletasi dapat digunakan untuk bahan yang bertekstur lunak dan

tidak tahan panas menggunakan pelarut yang sedikit dan pemanasan selalu

terkontrol, namun kerugiannya adalah kerusakan hasil ekstraksi karena

hasil ekstraksi terus-menerus dipanaskan sehingga dapat menyebabkan

reaksi peruraian oleh panas. Hal ini dikarenakan pelarut didaur ulang

terus-menerus, jumlah total senyawa yang diekstraksi akan melampaui

kelarutannya dalam jumlah pelarut tertentu sehingga dapat mengendap

(18).

2.2.3 Pelarut Ekstraksi

Keberhasilan penentuan senyawa aktif biologis dari bahan tanaman

sebagian besar tergantung pada jenis pelarut yang digunakan dalam prosedur

ekstraksi. Sifat pelarut yang baik dalam ekstraksi tanaman meliputi toksisitas

rendah, kemudahan penguapan pada panas rendah, penyerapan fisiologis yang

cepat dari ekstrak, kemampuan mengawetkan, ketidakmampuan untuk

menyebabkan ekstrak menjadi kompleks atau terpisah. Faktor-faktor yang

mempengaruhi pemilihat pelarut adalah: (19).

a. Jumlah fitokimia yang akan diekstraksi.

b. Tingkat ekstraksi.

c. Keanekaragaman senyawa yang berbeda diekstraksi.

d. Keanekaragaman senyawa penghambat yang diekstraksi.

 14

e. Kemudahan penanganan ekstrak selanjutnya.

f. Toksisitas pelarut dalam proses bioassay.

g. Potensi bahaya kesehatan dari ekstraktan.

Cairan pelarut dalam proses pembuatan ekstrak adalah pelarut yang baik

(optimal) untuk senyawa kandungan yang berkhasiat atau yang aktif, dengan

demikian senyawa tersebut dapat terpisahkan dari bahan dan dari senyawa

kandungan lainnya, serta ekstrak hanya mengandung sebagian besar senyawa

kandungan yang diinginkan. Pelarut ekstraksi dibagi menjadi 3 bagian, antara

lain: (20).

a. Pelarut Polar

Pelarut polar adalah pelarut yang memiliki tingkat kepolaran yang tinggi

serta dapat menyari senyawa-senyawa yang bersifat polar pada suatu

tumbuhan. Pelarut yang bersifat polar antara lain air, metanol, etanol dan

asam asetat (20).

b. Pelarut Semi Polar

Pelarut semi polar adalah pelarut yang memiliki tingkat kepolaran yang

rendah dari pelarut polar tetapi lebih tinggi dari pelarut non polar. Pelarut

yang bersifat semipolar antara lain aseton, etil asetat, dan kloroform (20).

c. Pelarut Non Polar

Pelarut non polar adalah pelarut yang hampir tidak polar, biasa digunakan

untuk menyari senyawa metabolit yang tidak larut dalam pelarut polar.

Pelarut yang bersifat non polar antar lain n-heksan dan eter (20).
 15

2.3 Radikal Bebas

Radikal bebas adalah atom atau molekul tidak stabil dan sangat reaktif

karena mengandung satu atau lebih elektron tidak berpasangan pada orbital

terluarnya. Untuk mencapai kestabilan atom atau molekul, radikal bebas akan

bereaksi dengan molekul di sekitarnya untuk memperoleh pasangan elektron.

Adanya elektron tidak berpasangan ini menyebabkan radikal bebas secara kimiawi

menjadi sangat aktif. Radikal bebas dapat bermuatan positif (kation), negatif

(anion), atau tidak bermuatan (netral) (21).

Sumber radikal bebas bisa berasal dari proses metabolisme dalam tubuh

(endogen) dan dapat berasal dari luar tubuh (eksogen). Dari dalam tubuh

mencakup superoksida (O2), hidroksil (OH), peroksil (ROO), hidrogen peroksida

(H2O2), oksigen singlet (O2), oksida nitrit (NO), dan peroksinitrit (ONOO). Secara

endogen, sebagai respons normal dari rantai peristiwa biokimia dalam tubuh,

radikal bebas terbentuk akan mempengaruhi ekstrasel dan intrasel. Radikal

endogen dapat terbentuk dari sisa proses metabolisme (proses pembakaran)

protein, karbohidrat, dan lemak pada mitokondria; proses peradangan atau

inflamasi; atau reaksi antara besi logam dan transisi dalam tubuh, fagosit, xantin

oksidase, peroksisom, maupun pada kondisi iskemia. Mekanisme timbulnya

radikal endogen yakni autooksidasi, aktivitas oksidasi siklooksigenase,

lipooksigenase, dehidrogenase, dan peroksidase serta pada sistem transpor

elektron. Adapun radikal eksogen antara lain berasal dari asap rokok, polusi,

radiasi, sinar UV, obat, pestisida, limbah industri, dan ozon (21).
 16

Tubuh manusida mengandung molekul oksigen stabil dan tidak stabil.

Molekul oksigen stabil penting untuk memelihara kehidupan sel. Dalam jumlah

tertentu radikal bebas diperlukan untuk kesehatan, tetapi radikal bebas bersifat

merusak dan sangat berbahaya. Fungsi radikal bebas dalam tubuh adalah untuk

melawan radang, membunuh bakteri, dan mengatur tonus otot polos dalam organ

maupun pembuluh darah. Jika reaksi seperti ini berlangsung terus-menerus dalam

tubuh manusia dan tidak berhentu maka akan menimbulkan penyakit seperti

kanker, jantung, penuaan dini dan menurunnya sistem imun tubuh. Reaksi ini

akan terus berlangsung dan akan berhenti jika reaktivitasnya diredam oleh

senyawa bersifat antioksidan (21).

2.4 Antioksidan

2.4.1 Pengertian Antioksidan

Indonesia sebagai negara berkembang mempunyai keterbatasan dalam

penanggulangan masalah kesehatan, dimana penyakit infeksi masih tinggi, tetapi

prevalensi penyakit degeneratif makin meningkat. Penyakit degeneratif seperti

kanker, diabeter mellitus dan komplikasinya, stroke dan aterosklerosis disebabkan

karena stress oksidatif. Antioksidan sangat diperlukan oleh tubuh untuk mengatasi

dan mencegah stress oksidatif (22).

Senyawa antioksidan menurut pengertian kimiawi adalah senyawa donor

elektron. Namun dalam arti biologis, pengertian antioksidan lebih luas yaitu

senyawa yang dapat meredam dampak negatif oksidan, termasuk enzim-enzim

dan protein-protein pengikat logam. Antioksidan bekerja dengan mendonorkan

satu elektronnya kepada senyawa oksidan sehingga ada aktivitas penghambatan

 17

oksidan tersebut. Tubuh memerlukan antioksidan untuk melindungi dari serangan

radikal bebas. Antioksidan adalah suatu senyawa pada konsentrasi rendah secara

signifikan dapat menghambat atau mencegah oksidasi substrat dalam reaksi rantai

(22).

Tubuh manusia tidak mempunyai cadangan antioksidan dala jumlah

berlebih, sehingga apabila terbentuk banyak radikal maka tubuh membutuhkan

antioksidan eksogen. Adanya kekhawatiran kemungkinan efek samping yang

belum diketahui dari antioksidan sintetik menyebabkan antioksidan alami menjadi

alternatif yang sangat dibutuhkan. Bertambahnya pengetahuan tentang aktivitas

radikal bebas mengakibatkan penggunaan senyawa antioksidan semakin

berkembang baik untuk makanan maupun untuk pengobatan. Senyawa

antioksidan merupakan suatu inhibitor yang digunakan untuk menghambat

autooksidasi. Efek antioksidan senyawa fenolik dikarenakan sifat oksidasi yang

berperan dalam menetralisasi radikal bebas (23).

2.4.2 Fungsi Zat Antioksidan

Fungsi utama dari antioksidan adalah untuk memperkecil terjadinya proses

oksidasi baik dalam makanan maupun dalam tubuh. Dalam makanan, antioksidan

diharapkan dapat menghambat oksidasi dari lemak dan minyak, dapat

memperkecil terjadinya proses kerusakan dalam makanan, memperpanjang masa

pemakaian dalam industri makanan, meningkatkan stabilitas lemak yang

terkandung dalam makanan serta mencegah hilangnya kualitas sensori dan nutrisi.

Peroksidasi lipid adalah salah satu faktor yang cukup berperan dalam kerusakan

selama dalam penyimpanan dan pengolahan makanan. Antioksidan selain

 18

digunakan dalam industri farmasi, tetapi antioksidan juga digunakan secara luas

dalam industri makanan, industri petroleum, industri karet dan sebagainya. Dalam

tubuh antioksidan diharapkan juga mampu mengahambat proses oksidasi. Proses

oksidasi yang terjadi secara terus-menerus dapat menimbulkan berbagai penyakit

degeneratif dan penuaan dini (23).

2.4.3 Golongan Antioksidan

Secara alami sistem antioksidan tubuh sebagai mekanisme perlindungan

terhadap serangan radikal bebas, telah ada didalam tubuh. Ada beberapa

pengelompokan antioksidan yaitu: (23)

a. Antioksidan Enzimatis dan Antioksidan Non Enzimatis

(1) Antioksidan enzimatis mislanya enzim superoksida dismutase (SOD),

katalase dan glutation peroksidase.

(2) Antioksdian non enzimatis terdiri dari 2 yaitu antioksidan larut lemak

(tokoferol, karotenoid, flavanoid, kuinon, dan bilirubin), dan

antioksidan larut air (asam askorbat, protein pengikat logam).

b. Antioksidan Berdasarkan Fungsi dan Mekanisme Kerjanya

(1) Antioksidan Primer

Antioksidan primer merupakan zat atau senyawa yang dapat

menghentikan reaksi berantai pembentukan radikal bebas yang

melepaskan hidrogen, berfungsi untuk mencegah terbentuknya radikal

baru, yang dapat mengubah radikal bebas yang ada menjadi molekul yang

berkurang dampak negatifnya sebelum radikal bebas ini sempat bereaksi.

Antioksidan primer dapat terjadinya reaksi inisiasi dengan cara bereaksi

 19

radikal bebas dan memutus reaksi berantai oksidasi. Mengubah radikal

bebas menjadi produk baru yang lebih stabil, lebih larut dalam air dan bisa

dibuang dari tubuh. Antioksidan primer dapat berasal dari alam atau

sintetis. Contoh antioksidan primer adalah enzim peroksidase dismutase,

katalase dan glutation peroksidase (24).

(2) Antioksidan Sekunder

Antioksidan sekunder merupakan senyawa yang berfungsi menangkap

radikal bebas dan mencegah reaksi berantai sehingga tidak terjadi

kerusakan yang lebih besar. Antioksidan sekunder disebut juga antioksidan

eksogeneus atau non enzimatis. Antioksidan sekunder ini menghambat

pembentukan senyawa oksigen reaktif dengan cara pengelatan metal, atau

dirusak pembentukannya. Contoh antioksidan sekunder ialah vitamin E,

vitamin C, β-karoten, isoflavon, asam urat, bilirubin dan albumin.

Senyawa-senyawa ini dikenal sebagai penangkap radikal bebas (scavenger

free radical), kemudian mencegah amplifikasi radikal. Antioksidan ini

menghambat pembentukan senyawa oksigen relatif dengan cara

pengelatan metal, atau dirusak pembentukannya (24).

(3) Antioksidan Tersier

Antioksidan tersier merupakan senyawa yang dapat memperbaiki

kerusakan sel-sel dan jaringan sel yang rusak karena serangan radikal

bebas, misalnya enzim reduktase yang dapat memperbaiki DNA akibat

kerja radikal bebas. Kelompok antioksidan tersier meliputi sistem enzim

DNA-repair, metionin sulfoksida reduktase. Enzim-enzim ini berperan

 20

dalam perbaikan biomokuler yang rusak akibat reaktivitas radikal bebas

(24).

c. Antioksidan Berdasarkan Sumbernya

(1) Antioksidan Alami

Secara alami beberapa jenis tumbuhan merupakan sumber

antioksidan, hal ini dapat ditemukan pada beberapa jenis sayuran, buah-

buahan segar, beberapa jenis tumbuhan dan rempah-rampah. Fungsi

antioksidan alami antara lain adalah sebagai reduktor, peredam

pembentukan oksigen singlet, penangkap radikal bebas dan pengkhelat

logam (22).

Antioksidan alami digolongkan menjadi enzim dan vitamin.

Antioksidan berupa enzim yang dihasilkan oleh tubuh berupa superoxide

dismutase (SOD), glutation peroxidase, dan katalase. Sedangkan

antioksidan vitamin umumnya beta karoten (vitamin A), alfatokoferol

(vitamin E) dan asam askorbat (vitamin D). Antioksidan dari tumbuhan

adalah senyawa polifenol atau fenolik, golongan flavanoid, turunan asam

sinamat, kumarin, tokoferol dan asam organik (22).

Antioksidan alami di dalam bahan makan dapat berasal dari senyawa

antioksidan yang sudah ada dari komponen makanan, senyawa antioksidan

yang terbentuk dari reaksi-reaksi selama proses pengolahan, senyawa

antioksidan yang diisolasi dari sumber alami dan ditambahkan ke makanan

 21

sebagai bahan tambahan pangan. Aktivitas antioksidan alami dapat bekerja

melalui mekanisme penghambat pembentukan radikal bebas (25).

(2) Antioksidan Sintetik

Antioksidan sintetik merupakan antioksidan yang secara komersial

sudah banyak digunakan, terutama dalam sistem pangan, memiliki harga

yang relatif murah, sehingga bisa dirpoduksi dalam jumlah besar. Prinsip

kerja antioksidan sintetik merupakan mekanisme antioksidan primer

contohnya butylated hydroxyanisole (BHA), butylated hydroxytoluene

(BHT), propil gallate (PG), tersier-butylhydroquinone (TBHQ), octyl

gallate (OG) dan dodecyl gallate (DG). Antioksidan sintetik banyak

digunakan dalam industri pangan dengan tujuan untuk mengawetkan

produk pangan, biasanya digunakan dengan konsentrasi yang cukup

rendah (25).

2.4.4 Mekanisme Antioksidan

Mekanisme kerja antioksidan secara umum adalah mengahambat oksidasi

lemak. Oksidasi lemak terdiri atas tiga tahapan, yaitu inisiasi, propagasi, dan

terminasi. Pada tahap inisiasi, terjadi pembentukan radikal asam lemak. Pada

tahap propagasi, radikal asam lemak akan bereaksi dengan oksigen membentuk

radikal peroksi. Pada tahap terminasi, radikal peroksi selanjutnya akan menyerang

asam lemak menghasilkan hiperperoksida dan radikal asam lemak baru.

Antioksidan yang baik akan bereaksi dengan radikal asam lemak segera setelah

senyawa tersebut terbentuk. Dari berbagai jenis antioksidan yang ada, mekanisme

kerja dan kemampuannya sebagai antioksidan sangat bervariasi (26).

 22

Kombinasi beberapa jenis antioksidan sering kali memberikan

perlindungan yang lebih baik terhadap oksidasi dibandingkan dengan satu jenis

antioksidan saja. Sebagai contoh, vitamin C sering dicampur dengan antioksidan

yang merupakan senyawa fenolik untuk mencegah reaksi oksidasi lemak. Dalam

menagkal radikal bebas, vitamin E menjadi pelopor diikuti oleh vitamin C.

Dengan bantuan senyawa glutation, betakaroten, Zn, Mn, Se, vitamin E dan

vitamin C akan lebih mudah melumpuhkan radikal bebas (26).

2.5 Metode Pengujian Antioksidan

Metode pengujian aktivitas antioksidan dikelompokkan menjadi 3

golangan. Golongan pertama adalah Hydrogen Atom Transfer Methods (HAD),

misalnya Oxygen Radical Absorbance Capacity Method (ORAC) dan Lipid

Peroxidation Inhibiton Capacity Assay (LPIC). Golongan kedua adalah Electron

Transfer methods (ET), misalnya Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) dan

2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil (DPPH) dan Free Radical Scavenging Assay.

Golongan ketiga adalah metode lain seperti Total Oxidant Scavenging Capacity

(TOSC) dan Chemiliminescence (23).

2.5.1 Metode DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil)

Metode DPPH merupakan radikal nitrogen organik yang stabil di suhu

ruangan. Metode ini pertama kali diperkenalkan oleh Brand-williams. DPPH

menerima elektron atau hidrogen sehingga membentuk molekul stabil. Adanya

serapan warna violet pada panjang gelombang 517 nm ditimbulkan oleh

delokaslisasi elektron. Pengukuran dengan metode DPPH merupakan metode

 23

sederhana, cepat dan tidak membutuhkan banyak reagen seperti metode lain,

selain itu metode ini terbukti akurat, reliable dan prkatis (22).

Gambar 2.2 Struktur Kimia 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil (DPPH)

DPPH sering digunakan untuk menilai aktivitas antioksidan beberapa

ekstrak atau bahan alam sehingga dapat untuk mengevaluasi potensi antioksidan

dalam meredam radikal bebas. Interaksi antioksidan dengan DPPH baik secara

transfer elektron atau radikal hidrogen pada DPPH menetralkan sifat radikal bebas

DPPH. Radikal DPPH adalah radikal bebas stabil yang menerima sebuah elektron

atau hidrogen untuk diubah menjadi molekul diamagnetik. Aktivitas antiradikal

ditandai dengan perubahan warna larutan dari ungu menjadi kuning dengan

penurunan absorbansi pada panjang gelombang 517 nm (27).

 24

Gambar 2.3 Mekanisme Reaksi DPPH dengan Antioksidan

Elektron yang tidak berpasangan pada DPPH memiliki kemampuan

penyerapan yang kuat pada panjang gelombang 517 nm dengan warna ungu.

Perubahan warna ungu menjadi kuning seiring dengan menurunnya absortivitas

molar dari radikal DPPH karena elektron yang tidak berpasangan menjadi

berpasangan dengan adanya pemberian atom hidrogen dari antioksidan

membentuk DPPH-H tereduksi. Penurunan warna secara stoikiometri berdasarkan

jumlah elektron yang tertangkap (27).

2.5.2 Metode ABTS (2,2-azinobis-3-Ethylbenzothiazoline-6-Sulfonic Acid)

Metode ABTS merupakan suatu radikal dengan pusat nitrogen yang

mempunyai karakteristik warna biru-hijau, yang bila tereduksi oleh antioksidan

akan berubah menjadi bentuk nonradikal, dari berwarna menjadi tidak berwarna.

Kemampuan aktivitas antioksidan diukur secara spektrofotometer pada panjang

gelombang 734 nm. Metode ABTS memiliki sensivitas lebih tinggi daripada

metode DPPH dan dapat dipakai untuk menganalisis antioksidan pada makanan.

Kemampuan antioksidan suatu senyawa dalam meredam radikal bebas DPPH

dilihat dari kemampuan senyawa antioksidan untuk mendonorkan hidrogen,

sedangkan senyawa antioksidan dalam merendam radikal bebas ABTS dilihat dari

kemampuan senyawa antioksidan untuk menstabilkan senyawa radikal bebas

berupa proton (28).

 25

Gambar 2.4 Reaksi ABTS

2.6 Penentuan Nilai IC50

Data yang diperoleh pada identifikasi menggunakan spektrofotometer UV-

Vis berupa spektrum dan panjang gelombang maksimum, setelah itu data yang di

dapatkan akan dianalisis. Analisis data pada penelitian ini dilakukan dengan

menghitung % inhibisi yang diperoleh dari data absorbansi dari masing-masing

konsentrasi. Rumus % inhibisi dinyatakan sebagai berikut: (29).

Absorban blanko−absorban sampel

% Inhibisi= ×100 %
Absorban blanko

Setelah didapatkan data % inhibisi pada masing-masing absorbansi

sampel, kemudian dilakukan perhitungan IC50. IC50 merupakan bilangan yang

menunjukkan konsentrasi ekstrak yang mampu menghambat proses oksidasi

sebesar 50%. Perhitungan nilai IC50 menggunakan persamaan regresi dengan cara
 26

substitusi y = ax + b yang menyatakan hubungan antara konsentrasi dengan %

inhibisi. Rumus IC50 dinyatakan sebagai berikut: (30).

50−b
x=
a

Keterangan:

y = 50 (penghambat 50% oksidasi)

x = IC50

a = slope

b = intercept

Semakin kecil nilai IC50 berarti semakin tinggi aktivitas antioksidannya.

Tingkat kekuatan antioksidan dapat dilihat pada tabel berikut ini: (31).

Tabel 2.2 Kategori Aktivitas Antioksidan

Intensitas Antioksidan Nilai IC50 (ppm)
Sangat Kuat < 50
Kuat 50 – 100
Lemah 100 – 150
Sangat Lemah 151 – 200

2.7 Spektrofotometri UV-Vis

Spektrofotometri UV-Vis merupakan salah satu teknik analisis

spektroskopi yang memakai sumber radiasi elektromagnetik ultraviolet dekat

(200-400) dan sinar tampak (400-800) dengan memakai instrumen

spektrofotometer. Spektrofotometri UV-Vis melibatkan energi elektronik yang

cukup besar pada molekul yang dianalisis, sehingga spektrofotometri UV-Vis

lebih banyak dipakai untuk analisis kuantitatif dibandingkan kualitatif (32).

 27

Spektrofotometri terdiri atas spektrofotometer dan fotometer.

Spektrofotometer menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang gelombang

tertentu dan fotometer adalah alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan

atau yang diabsorpsi. Spektrofotometer tersusun atas sumber spektrum tampak

yang kontinyu, monokromator, sel pengabsorbsi untuk larutan sampel atau blanko

dan suatu alat untuk mengukur perbedaan absorbsi antara sampel dan blanko

ataupun pembanding. Keuntungan utama metode spektrofotometri adalah metode

ini memberikan cara sederhana untuk menetapkan kuantitas zat yang sangat kecil.

Selain itu, hasil yang diperoleh cukup akurat, dimana angka yang terbaca

langsung dicatat oleh detektor dan tercetak dalam bentuk angka digital ataupun

grafik regresi linear (32,33).

Pengukuran konsentrasi dari absorban suatu senyawa bisa dilakukan

dengan memakai hukum Lambert-Beer. Hukum Lambert-Beer adalah hunungan

lineritas antara absorban dengan konsentrasi larutan analit. Biasanya hukum

Lambert-Beer ditulis dengan:

A = E.b.c

Keterangan:

A = absorban (serapan)

E = koefisien ekstingsi spesifik

b = tebal kuvet (cm)

c = konsentrasi 9gram/100 ml) (34).

 BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian

Penelitian ini menggunakan metode penelitian kuantitatif yang dilakukan

secara eksperimental dengan cara melakukan uji antioksidan ekstrak metanol daun

legetan (Synedrella nodifloral (L) Gaertn) dengan teknik pengambilan sampling

dan menggunkan metode DPPH dan ABTS.

3.2 Waktu dan Tempat Penelitian

3.2.1 Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan pada bulan Juli-September 2022.

3.2.2 Tempat Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biofarmasi Fakultas Farmasi

Institut Kesehatan Helvetia Medan.

3.3 Sampel Penelitian

Pengambilan sampel dalam penelitian ini dilakukan secara purposive

sampling yaitu tanpa membandingkan dengan tanaman di daerah lain. Sampel

yang digunakan pada penelitian ini adalah daun legetan (Synedrella nodifloral (L)

Gaertn)yang diperoleh dari sekitaran Helvetia.

28
 29

3.4 Alat dan Bahan

3.4.1 Alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain toples kaca,

tabung reaksi. Beaker glas, blender, corong kaca, batang pengaduk, kertas saring,

aluminium foil, lemari pengering, pipet tetes, timbangan analitik, spektrofotometri

UV-Vis, dan vacuum rotary evaporator dan alat gelas praktikum lainnya.

3.4.2 Bahan

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain daun legetan

(Synedrella nodiflora L.), metanol, DPPH, ABTS, dan vitamin C,aquadest.

3.5 Determinasi Tanaman

Determinasi tanaman dilakukan di laboratorium Herbarium Medanense

Departemen Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Sumatera Utara untuk mngetahui kebenaran dari daun legetan

(Synedrella nodifloral (L) Gaertn)yang akan digunakan dalam penelitian.

3.6 Prosedur Kerja

3.6.1 Penyiapan Simplisia

Sampel daun legetan segar digunakan sebanyak 3 kg, dibersihkan dan

dicuci di air mengalir, kemudian dilakukan perajangan kecil-kecil ± 1-2 mm lalu

di masukan kelemari pengering sampai sampel kering seutuhnya yang ditandai

dengan sampel mengalami perubahan warna, mudah dipatahkan atau rapuh.

Simplisia yang telah kering disortasi kembali untuk memisahkan benda-benda

asing yang tertinggal pada simplisia. Sampel ditimbang sebagai berat simplisia
 30

kering. Kemudian dihaluskan dengan blender sampai halus. Disimpan dalam

wadah yang tertutup rapat (35).

3.6.2 Pembuatan Ekstrak Metanol Daun Legetan (Synedrella nodiflora L.)

Ditimbang sebanyak 300 gram serbuk simplisia, dimaserasi menggunakan

pelarut metanol, dengan perbandingan 1:10 sebanyak 3000 ml. Serbuk simplisia

dimasukkan ke dalam toples kaca lalu direndam dengan 75 bagian pelarut metanol

sebanyak 2250 ml selama 5 hari, sambil sesekali diaduk. Setelah 5 hari, filtrat

disaring menggunakan kertas saring dan residu dipisahkan, maka didapatkan

filtrat I. Kemudian residu yang diperoleh dilarutkan kembali dengan 25 bagian

pelarut metanol sebanyak 750 ml selama 2 hari terlindung dari cahaya dan

sesekali diaduk. Kemudian filtrat disaring dan residu dibuang, maka didapatkan

filtrat II. Filtrat I dan II digabungkan, dipekatkan dan diuapkan dengan vacuum

rotary evaporator pada temperatur 60℃ sampai diperoleh ekstrak kental (36).

3.7 Uji Aktivitas Antioksidan Dengan Metode DPPH

3.7.1 Penyiapan Larutan Sampel

a. Pembuatan Larutan Induk Ekstrak Metanol Daun Legetan

Ditimbang 50 mg ekstrak metanol daun legetan dimasukkan dalam labu

ukur 50 ml, kemudian dilarutkan dengan metanol sampai tanda batas,

sehingga diperoleh konsentrasi 1000 ppm (37).

b. Pembuatan Sampel Uji

Dibuat larutan sampel uji dengan konsentrasi masing-masing 20, 40, 60,

80, dan 100 ppm. Dari larutan induk ekstrak metanol daun legetan, dipipet
 31

masing-masing sebanyak 0,2 ml, 0,4 ml, 0,6 ml, 0,8 ml, dan 1 ml, lalu

dimasukkan dalam labu ukur 10 ml, ditambahkan metanol sampai tanda

batas, kemudian kocok hingga homogen (37).

c. Pembuatan Larutan Baku Induk DPPH Konsentrasi 100 ppm

Ditimbang 10 mg serbuk DPPH, dimasukkan dalam labu ukur 100 ml,

kemudian ditambahkan metanol sampai tanda batas, kocok hingga homgen

sehingga didapatkan konsentrasi 100 ppm (37).

d. Pembuatan Larutan Baku Kerja DPPH Konsentrasi 40 ppm

Dipipet sebanyak 40 ml dari larutan baku induk DPPH 100 ppm,

dimasukkan dalam labu ukur 100 ml, ditambahkan metanol sampai tanda

batas, kocok hingga homogen sehingga didapatkan konsentrasi 40 ppm

(37).

3.7.2 Analisa Kuantitatif

a. Penentuan Panjang Gelombang DPPH 40 ppm

Dipipet larutan baku kerja DPPH 40 ppm sebanyak 4 ml, kemudian

dimasukkan ke dalam kuvet dan diukur absorbansinya dengan

spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang yang diperoleh pada

pencarian panjang gelombang maksimum (37).

b. Pengukuran Absorbansi Larutan Blanko

Dipipet 2 ml larutan baku kerja DPPH 40 ppm, dimasukkan ke dalam

tabung reaksi, kemudian ditambahkan metanol sebanyak 2 ml, dikocok

hingga homogen dan didiamkan selama 30 menit di tempat yang

 32

terlindung dari cahaya, lalu diukur absorbansinya dengan spektrofotometer

UV-Vis pada panjang gelombang maksimum (37).

c. Pengukuran Absorbansi Vitamin C

Ditimbang vitamin C sebanyak 50 mg, dimasukkan dalam labu ukur 50

ml, ditambahkan metanol hingga tanda batas, dihomogenkan sehingga

diperoleh larutan induk vitamin C 1000 ppm. Dari larutan induk vitamin C

1000 ppm dibuat variasi konsentrasi 20, 40, 60, 80, dan 100 ppm. Dipipet

masing-masing sebanyak 0,2 ml, 0,4 ml, 0,6 ml, 0,8 ml, dan 1 ml

dimasukkan ke dalam labu ukur 10 ml, lalu ditambahkan metanol sampai

tanda batas. Kemudian tiap konsentrasi diambil 2 ml dan ditambahkan 2

ml larutan DPPH 40 ppm. Lalu dihomogenkan dan didiamkan selama 30

menit ditempat yang terlindung dari cahaya. Diukur absorbansinya

menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang

maksimum. Pengukuran dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan (38).

d. Pengukuran Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Daun Legetan

Larutan sampel uji dengan konsentrasi 20, 40, 60, 80 dan 100 ppm

masing-masing dipipet sebanyak 2 ml, kemudian dimasukkan ke dalam

tabung reaksi. Ditambahkan larutan DPPH 40 ppm masing-masing

sebanyak 2 ml. Dihomogenkan dan didiamkan selama 30 menit ditempat

yang terlindung dari cahaya. Diukur serapannya dengan spektrofotometer

UV-Vis pada panjang gelombang maksimum. Pengukuran dilakukan

sebanyak 3 kali pengulangan (37).

 33

3.8 Uji Aktivitas Antioksidan Metode ABTS

3.8.1 Penyiapan Sampel

a. Pembuatan Larutan Stok ABTS

- Larutan ABTS: Ditimbang 18 mg ABTS (7 mM), dilarutkan dalam 5

mL aqua deionisasi.

- Larutan Kalium Persulfat (K2S2O8) : Ditimbang 14 mg kalium persulfat

(2,45 mM) dilarutkan ke dalam aqua deionisasi dalam botol sampai 20

mL.

- Larutan stok ABTS : 5 mL larutan ABTS (7 mM) ditambahkan dengan

5 mL larutan kalium persulfat, diinkubasi dalam ruang gelap suhu 22-

24oC selama 12-16 jam sebelum digunakan, dihasilkan ABTS dengan

warna biru gelap.

- Pereaksi PBS pH 7,4 (Phosphate Buffer Saline) : Sebanyak 8 g Natrium

Klorida, 0,2 g Kalium Klorida, 1,42 g Natrium Hidrogen Fosfat, 0,24

Kalium Dihidrogen Fosfat dilarutkan dalam aquadest sampai 1 L (28).

3.8.2 Pengukuran Antioksidan Dengan Metode ABTS

Larutan stok ABTS dipipet sebanyak 1 mL dan dicukupkan volumenya

sampai 25 mL dengan PBS pH7,4 dalam labu ukur. Kemudian diukur pada

panjang gelombang 400-800 nm dengan absorbansi 0,7 ± 0,02.

a. Pengukuran Serapan Larutan Blanko

Larutan PBS pH 7,4 dipipet sebanyak 0,1 mL kemudian tambahkan 2 mL

larutan stok ABTS. Selanjunya larutan diinkubasi selama 6 menit dan

 34

diukur serapan dengan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang

731 nm (28).

b. Pembuatan Larutan Uji Ekstrak Metanol Daun Legetan

Larutan induk ekstrak 1000 ppm dipipet ke dalam labu ukur 10 mL

sebanyak 0,2 ml, 0,4 ml, 0,6 ml, 0,8 ml, 1 ml untuk mendapatkan

konsentrasi larutan uji 20 ppm, 40 ppm, 60 ppm, 80 ppm, 100 ppm.

Kemudian tambahkan dengan metanol sampai garis tanda. Dari masing-

masing kensentrasi, dipipet sebanyak 0,1 ml larutan ekstrak ditambah 2

mL larutan stok ABTS. Selanjutnya larutan diinkubasi selama 6 menit dan

diukur serapan dengan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang

731 nm (28).

c. Pengukuran Serapan Larutan Uji Vitamin C

Larutan induk pembanding 1000 ppm dipipet ke dalam labu ukur 10 mL

sebanyak 0,2 ml, 0,4 ml, 0,6 ml, 0,8 ml, 1 ml untuk mendapatkan

konsentrasi larutan uji 20 ppm, 40 ppm, 60 ppm, 80 ppm, 100 ppm.

Kemudian tambahkan dengan metanol sampai garis tanda. Dari masing-

masing kensentrasi, dipipet sebanyak 0,1 mL larutan ekstrak ditambah 2

mL larutan stok ABTS. Selanjutnya larutan diinkubasi selama 6 menit dan

diukur serapan dengan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang

731 nm (28).
 35

3.9 Analisis Data

Aktivitas antioksidan sampel ditentukan oleh besarnya hambatan serapan

radikal DPPH melalui perhitungan persentase (%) inhibisi serapan DPPH dengan

menggunakan rumus: (8).

absorbansi blanko−absorbansi sampel

Aktivitas Peredaman( %)= ×100 %
absorbansi blanko

Berdasarkan nilai persentase inhibisi pada masing-masing konsentrasi,

selanjutnya dibuat kurva regresi, sehingga didapatkan persaman y = ax + b

dimana konsentrasi (ppm) sebagai absis (sumbu x) dan nilai persentase inhibisi

sebagai ordinatnya (sumbu y) (39).

Kemudian dilakukan perhitungan nilai IC50 (Inhibitory Concentration)

yaitu konsentrasi sampel yang memiliki peredaman radikal bebas sebesar 50 %.

Untuk penentuan nilai IC50 dapat dihitung dengan menggunakan rumus:

50−b
IC 50=
a

Keterangan:

y = % inhibisi (50)

a = Intercept (perpotongan garis di sumbu y)

b = Slope (kemiringan) (8).

 36

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Penelitian

4.1.1 Hasil Determinasi Tanaman

Indentifikasi sampel dilakukan di Laboratorium Hebarium Medanese

(MEDA) Departemen Biologi FMIPA. Universitas Sumatera Utara. Hasil

nenunjukkan sampel yang digunakan adalah daun legetan (Synedrella nodifloral

(L) Gaertn) sebagai berikut :

Kingdom : Plantae

Divisi : Tacheophyta

Kelas : Magnoliopsida

Ordo : Asteranae

Famili : Asteraceae

Genus : Synedrella

Spesies : Synedrella nodifloral (L) Gaertn

Naman Lokal : Daun Legetan

4.1.2 Hasil Analisa Aktivitas Antioksidan Terhadap DPPH

Pada ekstrak kental daun legetan yang diperoleh dilakukan pengujian

aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode DPPH secara spektrofotometri

UV-Vis. Kemudian hasilnya dibandingkan dengan pembanding Vit C yang diuji

dengan metode yang sama. Sebelum pengujian, terlebih dahulu diukur panjang

gelombang serapan maksimum dari larutan DPPH yang digunakan.

 37

4.2 Hasil Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum DPPH

Pengukuran serapan maksimum larutan DPPH dalam etanol p.a dengan

menggunakan spektrofotometri UV-Vis, dimana untuk mendapatkan panjang

gelombang maksimum dilakukan pengukuran dari 400 – 800 nm.

Hasil pengukuran menunjukkan bahwa larutan DPPH dalam etanol p.a

menghasilkan serapan maksimum pada panjang gelombang 516 nm. Panjang

gelombang 516 nm termasuk dalam kisaran panjang gelombang sinar tampak 400-

800 nm, serta termasuk dalam rentang panjang gelombang DPPH yang berkisar

antara 515-520 nm. Kurva pengukuran panjang gelombang serapan maksimum

DPPH dapat dilihat pada gambar 4.1

Gambar 4.1 Kurva Panjang Gelombang Serapan Maksimum DPPH

 38

4.2.1 Hasil Analisa Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Daun Legetan

Metode DPPH
Pengukuran aktivitas antioksidan terhadap sampel uji dilakukan secara

spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 515 nm. Pengukuran aktivitas

antioksidan ekstrak daun legetan dilakukan pada menit ke-30 setelah penambahan

larutan DPPH dengan konsentrasi masing-masing larutan ekstrak 20 ppm; 40

ppm; 60 ppm; 80 ppm; 100 ppm. Nilai persen peredaman DPPH pada ekstrak

daun legetan dapat dilihat pada Tabel 4.1 berikut ini

Tabel 4.1 Nilai Persen Peredaman DPPH pada Ekstrak Metanol Daun Legetan

Rata-Rata
Standar
Kosentrasi Pengukuran % Peredaman %
Deviasi
Larutan Peredaman
Uji (ppm)
1 2 3 1 2 3
Blanko 0,723 0,723 0,723 0 0 0 0 0
20 0,685 0,652 0,687 5,255 9,82 4,979 6,685 2,719
40 0,591 0,585 0,56 18,257 19,087 22,545 19,963 2,274
60 0,483 0,48 0,42 33,195 33,61 41,909 36,238 4,916
80 0,377 0,393 0,348 47,856 45,643 51,865 48,455 3,154
100 0,225 0,253 0,264 68,88 65,007 63,485 65,791 2,782

Dari tabel 4.1 dapat dilihat bahwa terjadi penurunan absorbansi DPPH

dengan semakin meningkatnya konsentrasi larutan ekstrak maka semakin besar

pula aktivitas peredaman radikal bebas DPPH.Hal ini dikarenakan semakin tinggi

konsentrasi ekstrak maka semakin pucat warna DPPH karena semakin banyak

atom hidrogen yang disumbangkan sehingga DPPH menjadi bentuk reduksinya

(40). Maka dapat disimpulakn bahwa ekstrak metanol daun legetan memiliki

aktivitas antioksidan.
 39

4.2.2 Hasil Analisa Aktivitas Antioksidan Vitamin C Metode DPPH

Pengukuran aktivitas antioksidan Vitamin C (sebagai pembanding)

dilakukan pada menit ke-30 setelah penambahan larutan DPPH dengan

konsentrasi masing-masing larutan vitamin C 20 ppm; 40 ppm; 60 ppm; 80 ppm;

100 ppm. Nilai persen peredaman DPPH pada Vitamin C dapat dilihat pada tabel

4.2 berikut ini.

Tabel 4.2 Nilai Persen Peredaman DPPH pada Vitamin C (pembanding)

Rata-Rata
Standa
%
Kosentrasi Pengukuran % Peredaman r
Peredama
Larutan Uji Deviasi
n
(ppm)
1 2 3 1 2 3
0,72 0,72
Blanko 0,723 0 0 0 0 0
3 3
0,67 0,68
20 0,685 6,086 5,118 5,256 5,487
9 6 0,524
0,57 0,53
40 0,674 20,194 26,556 6,777 17,842
7 1 10,097
0,46 0,41 27,38
60 0,525 36,1 42,462 35,316
2 6 6 7,569
0,35 0,31 34,02
80 0,477 51,314 56,846 47,395
2 2 5 11,905
0,27 0,21 55,46
100 0,322 61,441 69,986 62,30
9 7 3 7,299

Dari tabel 4.2 dapat dilihat bahwa terjadi penurunan absorbansi DPPH

pada Vitamin C dengan semakin meningkatnya konsentrasi larutan vitamin C

maka semakin besar pula aktivitas peredaman radikal bebas DPPH. Hasil ini

dikarenakan semakin tinggi konsentrasi Vitamin C maka semakin pucat warna

DPPH karena semakin atom hidrogen yang disumbangkan pada DPPH sehingga

DPPH menjadi bentuk reduksinya (40).

 40

4.3 Hasil Analisa Nilai IC50 dari Ekstrak Etil Daun Legetan dan Vitamin
C Metode DPPH
Hasil absorbansi diinterpretasikan ke dalam nilai Inhibitory Concentration

of 50% dimana IC50 ini menunjukkan konsentrasi substrat yang mampu meredam

50% aktivitas dari radukal bebas DPPH (41). Hasil perhitungan nilai IC50 dari

larutan uji dan pembanding Vitamin C dapat dilihat pada Tabel 4.3

Tabel 4.3 Hasil Persamaan Regresi dan Nilai IC50 dari sampel uji dan
pembanding Vit C Metode DPPH

Larutan Uji Persamaan Regresi Nilai IC50

Ekstrak Daun Legetan Y = 0,5737x+5,5894 68,420 ppm
Pembanding Vit C Y = 0,5244x+3,2344 70,163 ppm

Menurut Molyneux (2004), nilai IC50 berbanding terbalik dengan aktivitas

antioksidan, semakin tinggi aktivitas antioksidan nya maka nilai IC 50 semakin

rendah. Hasil analisis nilai IC50 pada tabel 4.3 menunjukkan bahwa ekstrak

metanol daun legetan dengan nilai IC50 sebesar 68,420 ppm pada metode DPPH

memiliki aktivitas antioksidan dalam kategori kuat dan hasil analisis nilai IC50

pada vitamin C sebagai pembanding sebesar 70,163 ppm pada metode DPPH

memiliki aktivitas antioksidan dalam kategori kuat.

4.4 Hasil Analisa Aktivitas Antioksidan Terhadap ABTS

Pada ekstrak kental daun legetan yang diperoleh dilakukan pengujian

aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode ABTS secara spektrofotometri

UV-Vis. Kemudian hasilnya dibandingkan dengan pembanding Vit C yang diuji

 41

dengan metode yang sama. Sebelum pengujian, terlebih dahulu diukur panjang

gelombang serapan maksimum dari larutan ABTS yang digunakan.

4.4.1 Hasil Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum ABTS

ABTS dilarutkan dalam aqua deionisasi. ABTS yang semula stabil diubah

menjadi ABTS radikal kation (ABTS+) dengan mereaksikan larutan ABTS dengan

larutan kalium persulfat (K2S2O8) yang telah dibuat terlebih dahulu, lalu dibiarkan

campuran tersebut di tempat yang gelap pada suhu kamar (22-24oC) selama 12 –

16 jam. Absorbansi larutan ABTS yang terkonsentrasi terlalu tinggi diencerkan

dengan PBS pH 7,4 sampai absorbansi akhir 0,70 ± 0,02 pada panjang gelombang

732 nm. Hasil penentuan panjang gelombang serapan maksimum ABTS pada

absorbansi 0,829 dengan panjang gelombang 732 nm sesuai dengan panjang

gelombang warna komplementer ABTS yaitu 610-750 nm. Kurva pengukuran

panjang gelombang serapan maksimum ABTS dapat dilihat pada gambar 4.2
 42

Gambar 4.2 Kurva Panjang Gelombang Serapan Maksimum ABTS

4.4.2 Hasil Analisa Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Daun Legetan

Metode ABTS
Tabel 4.4 Nilai Persen Peredaman ABTS pada Ekstrak Metanol Daun Legetan

Rata-Rata
Standar
Kosentrasi Pengukuran % Peredaman %
Deviasi
Larutan Peredaman
Uji (ppm)
1 2 3 1 2 3
Blanko 0,829 0,829 0,829 0 0 0 0 0
20 0,686 0,707 0,673 6,086 5,118 5,256 5,487 0,52
20,19
40 0,531 0,637 0,556 26,556 6,777 17,842
4 10,10
60 0,435 0,565 0,44 36,1 42,462 27,386 35,316 7,57
51,31
80 0,303 0,418 0,383 56,846 34,025 47,395
4 11,90
61,44
100 0,209 0,317 0,215 69,986 55,463 62,297
1 7,30

Dari tabel 4.4 dapat dilihat bahwa terjadi penurunan absorbansi ABTS

dengan semakin meningkatnya konsentrasi larutan ekstrak maka semakin besar

pula aktivitas peredaman radikal bebas ABTS. Maka dapat disimpulkan bahwa

ekstrak metanol daun legetan memiliki aktivitas antioksidan.

4.4.3 Hasil Analisa Aktivitas Antioksidan Vitamin C Metode ABTS

Pengukuran aktivitas antioksidan vitamin C dengan metode ABTS diukur

setelah penambahan larutan uji dengan konsentrasi 20 ppm; 40 ppm; 60 ppm; 80

ppm; 100 ppm. Nilai persen peredaman ABTS pada Vitamin C dapat dilihat pada

tabel 4.5 berikut ini.

Tabel 4.4 Nilai Persen Peredaman ABTS pada Vitamin C (Pembanding)

Kosentrasi Pengukuran % Peredaman Rata-Rata Standar

Larutan Uji 1 2 3 1 2 3 % Deviasi
 43

(ppm) Peredama
Blanko 0,829 0,829 0,829 0 0 0 0 0
20 0,626 0,621 0,621 24,487 25,09 25,09 24,889 0,34814
40 0,557 0,569 0,532 32,81 31,363 35,826 33,333 2,277
60 0,416 0,484 0,435 49,819 41,616 47,527 46,321 4,23246
80 0,348 0,351 0,334 58,021 57,659 59,71 58,463 1,09471
100 0,273 0,268 0,287 67,068 67,671 65,379 66,706 1,18811

Dari tabel 4.5 dapat dilihat bahwa terjadi penurunan absorbansi ABTS

pada Vitamin C dengan semakin meningkatnya konsentrasi larutan Vitamin C

maka semakin besar pula aktivitas peredman radikal bebas ABTS.

4.5 Hasil Analisa Nilai IC50 dari Ekstrak Daun Legetan dan Vitamin C
metode ABTS
Penentuan hasil dari netode pemerangkapan ABTS adalah dengan

menghitung IC50, dimana IC50 ini menunjukkan konsentrasi substrat yang mampu

meredam 50% aktivitas dari radikal bebas ABTS. Hasil perhitungan nilai IC 50

larutan uji dan Vitamin C dapat dilihat pada tabel 4.6

Tabel 4.6 Hasil Persaman Regresi dan Nilai IC50 dari Sampel Uji dan
Pembanding Vitamin C Metode ABTS

Larutan Uji Persamaan Regresi Nilai IC50

Ekstrak Daun Legetan Y = 0.6836x – 1,7423 29,090 ppm
Pembanding Vit C Y = 0,6389x+6,3396 68,336 ppm

Untuk hasil nilai IC50 pada ABTS dapat dilihat pada tabel 4.6 dimana hasil

analisis nilai IC50 ekstrak etil asetat sebesar 29,090 ppm memiliki aktivitas

antioksidan kategori sangat kuat dan pada vitamin C sebagai pembanding

memiliki nilai IC50 sebesar 68,336 ppm memiliki aktivitas antioksidan kategori

kuat.

4.6 Pembahasan Penelitian

4.6.1 Pembahasan Pembuatan Ekstraksi
 44

Pembuatan ekstraksi dalam penelitian dilakukan dengan metode ekstraksi

cara dingin yaitu dengan cara maserasi, ditimbang sebanyak 300 gram serbuk

simplisia, dimaserasi menggunakan pelarut metanol, dengan perbandingan 1:10

sebanyak 3000 ml. Serbuk simplisia dimasukkan ke dalam toples kaca lalu

direndam dengan 75 bagian pelarut metanol sebanyak 2250 ml, ditutup dengan

kertas aluminium foil selama 5 hari dan disaring, diperoleh ampas dan fitrat 1.

Dilakukan perendaman kembali selama 2 hari dan disaring kemudian filtrat

diuapkan dengan menggunakan rotary evaporator dengan suhu ±40oC sampai

terbentuk ekstrak kental bunga krisan sebanyak 30 g. dengan rendemen ekstrak

sebanyak 10%.

4.6.2 Pembahasan Aktivitas Antioksidan Metode DPPH

Uji aktivitas antioksidan dilakukan dengan cara kuantitatif menggunakan

metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazyl). Panjang gelombang diukur untuk

membuat kurva standar yang didasari oleh hukum ”Lambert-beer” dimana grafik

konsentrasi dengan absorbansi membentuk garis lurus. Metode DPPH merupakan

metode yang dapat mengukur aktivitas antioksidan secara cepat, sederhana, dan

tidak membutuhkan biaya yang mahal. DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil)

merupakan uji untuk menentukan aktivitas antioksidan dengan kemampuannya

menangkal radikal bebas (42).

Dalam pengukuran antioksidan menggunakan esktrak metanol daun

legetan konsentrasi yang digunakan 20, 40, 60, 80 dan 100 ppm dengan

menggunakan pembandingan vitamin C. Berdasarkan hasil yang dipengujian

aktivitas antioksidan metode DPPH dari ekstrak metanol daun legetan yaitu
 45

68,420 ppm dan vitamin C dengan nilai 70,163 ppm. Hasil tersebut masuk dalam

kategori “Kuat”

4.6.3 Pembahasan Aktivitas Antioksidan Metode ABTS

Aktivitas antioksidan ekstrak metanol daun legetan dengan menggunakan

metode ABTS (3-Etilbenzotiazolin)-6-Asam Sulfonat) dan vitamin C sebagai

pembanding. Pengujian dilakukan berdasarkan kemampuan dalam mereduksi

atau meredam radikal bebas ABTS yang ditandai dengan berkurangnya intensitas

warna biru dari larutan ABTS yang telah ditambahkan dalam sampel. Aktivitas

penangkapan radikal bebas ABTS dinyatakan dengan nilai IC50. Nilai IC50

merupakan konsentrasi larutan atau sampel yang mampu mereduksi radikal ABTS

sebesar 50% atau merupakan bilangan yang menunjukkan konsentrasi ekstrak

(ppm) yang mampu menghambat suatu proses oksidasi 50%. Semakin kecil nilai

IC50 maka semakin besar aktivitas penangkapan radikal ABTS, sebaliknya nilai

IC50 yang tinggi maka aktivitas penangkapan radikal ABTS semakin kecil (43).

Dalam pengukuran antioksidan menggunakan esktrak metanol daun

legetan konsentrasi yang digunakan 20, 40, 60, 80 dan 100 ppm dengan

menggunakan pembandingan vitamin C. Berdasarkan hasil yang diperoleh dari

pengujian aktivtas antioksidan ekstrak metanol daun legetan dengan

menggunakan metode ABTS adalah 29,090 ppm masuk dalam kategori “sangat

kuat” dan dengan hasil pembanding vitamin C adalah 68,336. Hasil tersebut

masuk dalam kategori antioksidan “Kuat”.

46
 47

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil dari penelitian yang dilakukan maka didapat kesimpulan

dari penelitian ini sebagai berikut :

1. Hasil pengukuran aktivitas antioksidan dengan metode pemerangkapan

radikal bebas DPPH dan ABTS terhadap ekstrak methanol daun legetan

menunjukkan adanya aktivitas antioksidan.

2. Uji aktivitas antioksidan terhadap ekstrak metanol daun legetan dengan

menggunakan metode pemerangkapan DPPH memiliki aktivitas

antioksidan dengan nilai IC50 sebesar 68,420 ppm dengan kategori kuat

dan dengan metode ABTS memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC50

sebesar 29,090 ppm dengan kategori sangat kuat.

3. Uji aktivitas antioksidan baku pembanding Vitamin C dengan

menggunakan metode pemerangkapan DPPH memiliki aktivitas

antioksidan dengan nilai IC50 sebesar 70,163 ppm dan ABTS sebesar

68,336 ppm sama-sama memiliki kategori sangat kuat.

5.2 Saran

Berdasarkan hasil dari penelitian yang dilakukan maka saran dari

penelitian ini sebagai berikut :

 48

1. Disarankan kepada peneliti selanjutnya agar dilakukan penelitian lebih

lanjut terhadap ekstrak daun legetan dalam bentuk formulasi untuk

memperoleh bentuk sediaan farmasi.

2. Disarankan untuk penelitian selanjutnya agar melakukan penelitian lanjut

terhadap ekstrak daun legetan uji toksisitas.

5.3
 49

DAFTAR PUSTAKA

1. Yuslianti ER. Pengantar Radikal Bebas dan Antioksidan. Deepublish;

2018. 2–11 p.
2. Wulandari M, Idiawati N, Gusrizal. Aktivitas Antioksidan Ekstrak n -
Heksana, Etil Asetat dan Metanol Kulit Buah Jeruk Sambal ( Citrus
microcarpa Bunge ). Jkk. 2013;2(2):90–4.
3. Faisal H. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Buah Okra
( Abelmoschus esculentus L . Moench ) Dengan Metode DPPH ( 1 , 1-
difenil-2-pikrilhidrazil ) dan Metode ABTS. Reg Dev Ind Heal Sci Technol
Art Life. 2019;2 (1):1–5.
4. Khasanah I, Ulfah M, Sumantri. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanolik
Kulit Buah Jeruk Nipis (Citrus aurantifolia) Dengan Metode DPPH (1,1-
difenil-2- pikrilhidrazil). e-Publikasi Fak Farm. 2014;11(2):9–17.
5. Le HTT, Park J, Ha J, Kusumaningrum S, Paik JH, Cho S. Synedrella
nodiflora (Linn.) Gaertn. inhibits inflammatory responses through the
regulation of Syk in RAW 264.7 macrophages. Exp Ther Med.
2020;20(2):1153–62.
6. Bidam YM, Illeogbulam NG, Gbekeleoluwa AR. Phytochemical and
antimicrobial studies on the aerial parts of Synedrella nodiflora Linn.
2014;5(1):59–63.
7. Amoateng P, Adjei S, Osei-safo D, Kukuia KKE, Bekoe EO, Karikari TK,
et al. Extract of Synedrella nodiflora (L) Gaertn exhibits antipsychotic
properties in murine models of psychosis. BMC Complement Altern Med.
2017;17(1):1–14.
8. Rahmawati, Muflihunna A, Sarif LM. Analisis Aktivitas Antioksdan
Produk Sirup Buah Mengkudu (Morinda citrifolia L.) Dengan Metode
DPPH. J Fitofarmaka Indones. 2016;2(2):97–101.
9. Wulansari AN. ALTERNATIF CANTIGI UNGU (Vaccinium
varingiaefolium) SEBAGAI ANTIOKSIDAN ALAMI : REVIEW.
Farmaka. 2018;16(2):419–29.
10. Aryanti R, Perdana F, Syamsudin RAMR. Telaah Metode Pengujian
Aktivitas Antioksidan pada Teh Hijau (Camellia sinensis (L.) Kuntze). J
Surya Med. 2021;7(1):15–24.
11. Usharani B, Raju AJS. Pollination ecology of Synedrella nodiflora (l.)
Gaertn. (Asteraceae). J Threat Taxa. 2018;10(11):12538–51.
12. Adjibode G, Tougan U, Youssao AKI, Mensah GA, Hanzen C,
Koutinhouin GB. Synedrella nodiflora (L.) Gaertn: a review on its
phytochemical screening and uses in animal husbandry and medicine. Int J
Adv Sci Tech Res. 2015;3(5):436–43.
13. Rajat G, Bimal D, Panchali D. Pharmacognostic, Phytochemical and
Biological Studies of Synedrella nudiflora a review. 2017;(December).
14. Wijaya S, Nee TK, Jin KT, Hon LK, San LH, Wiart C. Antibacterial and
antioxidant activities of synedrella nodiflora(L.) Gaertn. (Asteraceae). J
Complement Integr Med. 2011;8(1).
15. dr. EM Sutrisna MK. Herbal Medicine: Suatu Tujuan Farmakologis.
 50

Muhammadiyah University Press; 2016. 15–17 p.

16. Wewengkang DS, Rotinsulu H. Fitofarmaka. Penerbit Lakeisha; 2021. 23–
24 p.
17. Susanti AM. Ekstrak Daun Pare (Momordica charantia L) sebagai
Antidiabetik. Penerbit NEM; 2021. 28–29 p.
18. Natsir MH, Sjofjan O, Irsyammawati A. Teknologi Pengolahan Bahan
Pakan Ternak. Universitas Brawijaya Press; 2019. 63–64 p.
19. Junaidi L. Teknologi Ekstraksi Bahan Aktif Alami. 2020. 23 p.
20. apt. Supomo SSMS, apt. Hj. Hayatus Sa’adah S. F MS, apt. Eka Siswanto
Syamsul SFMS, apt. Kintoko SFMSPD, apt. Hardi Astuti Witasari SFMS,
Noorcahyati SHMP, et al. Khasiat Tumbuhan Akar Kuning Berbasis Bukti.
Nas Media Pustaka; 2021. 14 p.
21. Irianti TT, Nuranto S. Antioksidan dan Kesehatan. UGM PRESS; 2021. 3–
7 p.
22. Irianti T, Sugiyanto, Nuranto S, Kuswandi. Antioksidan. 2017;(November
2018):29–32, 56–7.
23. Sayuti K, Yenrina R. Antioksidan Alami dan Sintetik. Padang: Andalas
University Press; 2015. 7–76 p.
24. Erlindawati, Safrida, Mukhlis. Potensi Antioksidan Sebagai Antidiabetes.
Syiah Kuala University Press; 2018. 8–19 p.
25. Saragih B, U PAR. Pembangunan Pertanian. Deepublish; 2021. 137–138 p.
26. dr. Adji Suranto SA. Terbukti Pome Tumpas Penyakit. Puspa Swara; 2011.
11–12 p.
27. Saati EA, Wachid M, Nurhakim M, Rohman MLA. Pigmen Sebagai Zat
Pewarna dan Antioksidan Alami Identifikasi Pigmen Bunga, Pembuatan
Produknya serta Penggunaannya. UMMPress; 2019. 25–26 p. (Seri
Pertama).
28. Butarbutar MR. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Bawang Batak
(Allium chinense L.) dengan Metode DPPH dan ABTS. Skripsi. 2019;7–
37.
29. Kamoda APMD, Nindatu M, Kusadhiani I, Astuty E. Uji Aktivitas
Antioksidan Alga Cokelat Saragassum Sp. Dengan Metode 1,1- Difenil-2-
Pikrihidrasil (Dpph). PAMERI Pattimura Med Rev. 2021;3(1):60–2.
30. Yunita E, Kurniati T, Sipriyadi, Melati P, Lestari N. Aktivitas Antioksidan
Ekstrak Jeruk Kalamansi (Citrus microcarpa), Jeruk Gerga (Citrus
Reticulate) dan Buah Mangrove (Sonneratia alba) Dari Provinsi Bengkulu.
Nat Penelit Pengelolaan Sumberd Alam dan Lingkung. 2021;10(1):253–61.
31. Yasni S. Teknologi Pengolahan dan Pemanfaatan Produk Ekstraktif
Rempah. PT Penerbit IPB Press; 2013. 106 p.
32. apt. Fajrin Noviyanto MS. Penetapan Kadar Ketoprofen dengan Metode
Spektrofotometri UV-Vis. Media Sains Indonesia; 2020. 5–8 p.
33. HADI A. Kalibrasi & Uji Kinerja Peralatan Ukur Laboratorium Air. PT
Penerbit IPB Press; 2022. 77–78 p.
34. Dachriyanus. Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektroskopi.
2004. 1–8 p.
35. Putri RM, Diana VE, Fitri K. Perbandingan Uji Aktivitas Antibakteri dari
 51

Ekstrak Etanol Bunga, Daun dan Akar Tumbuhan Rosella (Hibiscus

sabdariffa L.) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus. J Dunia Farm.
2019;3(3):131–43.
36. Dari RW. Uji Efektivitas Gel Ekstrak Daun Binahong ( Anredera cordifolia
(Ten.) Steenis) Terhadap Penyembuhan Luka Sayat Yang Terinfeksi
Bakteri Staphylococcus aureus pada Kelinci ( Oryctolagus cuniculus ).
2019;
37. Suwarni E, Cahyadi KD. Aktivitas Antiradikal Bebas Ekstrak Etanol
Bunga Kecombrang (Etlingera elatior) Dengan Metode DPPH. J Ilm
Medicam. 2016;2(2):39–46.
38. Azizah Z, Zulharmita, Zulfian E. Uji Aktivitas Antioksidan Dan Penetapan
Kadar Vitamin C Ekstrak Buah Naga Merah Keungguan ( Hylocereus
lemairei (Hook.) Britton & Rose) Secara Spektrofotometri UV-Vis.
2017;9(1):43.
39. Cahyaningsih E, Sandhi PE, Santoso P. Skrining Fitokimia Dan Uji
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria ternatea L.)
Dengan Metode Spektrofotometri UV-VIS. 2019;5(1):51–7.
40. Rohman A. Lipid: Sifat Fisika-Kimia dan analisisnya. Cetakan Pe.
Yogyakarta: Pustaka Belajar; 2016. 222–225 p.
41. Lung JP., Destiani D. Uji Aktivitas Antioksidan Vitamin A, C, E dengan
Metode DPPH. Farmaka. 2018;15(1):53–62.
42. Prasetyo E, Zukhruf N, Kharomah W, Rahayu TP. Ekstrak Etanol Kulit
Buah Durian ( Durio zibethinnus L .) dari Desa Alasmalang Kabupaten
Banyumas. 2021;08(01):75–82.
43. Vifta RL, Rahayu RT, Luhurningtyas FP. Uji Aktivitas Antioksidan
Kombinasi Ekstrak Buah Parijoto ( Medinilla speciosa Blume ) dan
Rimpang Jahe Merah ( Zingiber officinalle Roscoe var Rubrum ) dengan.
Indones J Chem Sci. 2019;8(3).
 52

Lampiran 1. Hasil Determinasi Tamanan

 53

Lampiran 2. Surat Pembelian Vitamin C

 54

Lampiran 3. Surat Sertifikat Analisis Asam Askrobat

 55

Lampiran 4. Sertifikat Analisis

 56

Lampiran 5 . FlowchartPembuatan Ekstrak daun legetan

Daun Legetan (Synedrella nodifloral

(L) Gaertn)

Dihaluskan

Daun Legetan (Synedrella nodifloral

(L) Gaertn)

Ditimbang Sebanyak 300 g

Dimaserasi dengan 2.250 ml etanol

direndam selama 3 hari pertama sekali-
sekali diaduk

Disaring

Maserat I Residu

Direndam ulang dengan 750 ml

etil asetat diaduk sesekali

Disaring

Maserat II

Maserat I &II

Diaupkan dengan rotary evaporator

Ekstrak Kental Daun Legetan

18 gram
 57

Lampiran 6. Flowchart Uji Antioksidan dengan Metode DPPH

a. Pengukuran Panjang Gelombang Maksimum DPPH

10 mg serbuk DPPH

Dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL

Dilarutkan dengan etanol p.a sampai

tanda batas labu ukur
Larutan Blanko DPPH
(100 ppm)

dipipet 40 mL

Dihomogenkan dan dibiarkan

selama 30 menit
Diukur serapan dengan spektrofotometri UV-
Vis pada λ 400-800 nm
Larutan DPPH
(40 ppm)

Diukur pada panjang

gelombang 400-800 nm

Panjang gelombang
maksimum (515 nm)
 58

(Lanjutan)
a. Pengukuran Aktivitas Pengikat Radikal Bebas DPPH dengan sampel

Ekstrak Metanol
Daun Legetan

Ditimbang 50 mg dan dilarutkan

dengan etanol p.a hingga 50 mL

Larutan Uji (1000 ppm)

Dipipet sebanyak 0,2 mL; 0,4 mL; 0,6

mL; 0,8 mL; 1 mL untuk mendapatkan
konsentrasi larutan 20 ppm; 40 ppm; 60
ppm; 80 ppm; 100 ppm

Kemudian masukkan kedalam labu

ukur 10 mL dan cukupkan
volumenya sampai batas tanda
dengan etanol p.a

Dari masing-masing konsentrasi pipet

sebanyak 2 mL ditambah larutan stok DPPH
(40 ppm) sebanyak 4 mL

Didiamkan selama 30 menit

Diukur serapan dengan spektrofotometri

UV-Vis pada λ maksimum 515 nm

Absorbansi

Dihitung persen peredaman

dan persamaan regresi

Nilai IC50
 59

Lampiran 7. Flowchart Pengukuran Aktivitas Peredaman Radikal Bebas ABTS

Larutan Induk Baku

Sampel

Dipipet masing masing sesuai

konsentrasi uji

Dari masing-masing konsentrasi pipet

sebanyak 0,1 mL ditambah larutan stok
ABTS sebanyak 2 mL

Larutan Uji

Didiamkan selama 6 menit

Diukur serapan dengan spektrofotometri

UV-Vis pada λ maksimum 516 nm

Dihitung persen peredaman

dan persamaan regresi

Nilai IC50
 60

Lampiran 8. Hasil Pengukuran Panjang Gelombang DPPH

 61

Lampiran 9. Pengukuran Ekstrak Legetan Metode DPPH

Pengulangan 1
 62

Pengulangan 2
 63

Pengulangan 3
 64

Lampiran 10. Pengukuran Baku Pembanding Vitamin C

Pengulangan 1
 65

Pengulangan 2
 66

Pengulangan 3
 67

Lampiran 11. Hasil Pengukuran Panjang Gelombang ABTS

 68

Lampiran 12. Pengukuran Ekstrak Metode ABTS

Pengulangan 1
 69

Pengulangan 2
 70

Pengulangan 3
 71

Lampiran 13. Pengukuran Vitamin C Spektrofotometri UV-Vis Metode ABTS

Pengulangan 1
 72

Pengulangan 2
 73

Pengulangan 3
 74

Lampiran 14. Perhitungan nilai IC50 Terhadap Ekstrak Daun Legetan metode
DPPH

X Y XY X2 Y2
0 0 0 0 0
20 6,685 133,7 400 44,689225
40 19,963 798,52 1600 398,521369
60 36,238 2174,28 3600 1313,192644
80 48,455 3876,4 6400 2347,887025
100 65,791 6579,1 10000 4328,455681
∑x = 300 ∑y = 177,132
∑xy = 13562 ∑x2 = 22000 ∑y2 =8432,7459
x =50 y=¿29,522

absorbansi blanko−absorbansi sampel

Peredaman(% )= ×100 %
absorbansi blanko

1. Konsentrasi 20 ppm
0,723−0,685
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 5,255%
0,723−0,652
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 9,820%
0,723−0,687
III. %Peredaman = ×100 %
0,723

2. Konsentrasi 40 ppm

0,723−0,591
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 18,257%
0,723−0,585
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 19,087%
0,723−0,560
III. %Peredaman = ×100 %
0,723
 75

3. Konsentrasi 60 ppm
0,723−0,483
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 33,195%
0,723−0,480
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 33,610%
0,723−0,420
III. %Peredaman = ×100 %
0,723

4. Konsentrasi 80 ppm
0,723−0,377
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 47,856%
0,723−0,393
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 45,643%
0,723−0,348
III. %Peredaman = ×100 %
0,723

5. Konsentrasi 100 ppm

0,723−0,225
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 68,88%
0,723−0,253
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 65,007%
0,723−0,264
III. %Peredaman = ×100 %
0,723
 76

Keterangan:
X = Konsentras (ppm)
Y = % Peredaman
( ∑ x )( ∑ y )
( ∑ xy ) − n
a= 2
(∑ x )
(∑ x )−
2
n
( 300 )( 177,132 )
( 13562 )−
6
a=
( 300 )2
( 22000 )−
6
4705,4
a=
7000
a = 0,6722
b = y−a x
b = 29,522– (0,6722)(50)
b = 4,088
Jadi, persamaan garis regresi: y=ax+b
50=0,6722x - 4,088
X= 68,420
Nilai IC50 = 68,420 ppm

( ∑ x )( ∑ y )
( ∑ xy ) − n
r 2=

√[ ][( ∑ ]
2 2
(∑ x) (∑ y )
(∑ x )−
2
n
y )−
2
n

( 300 )( 177,132 )
( 13562 )−
2 6
r=

√[ ( 22000 ) −
6 ][
( 300 )2
( 8432,7459 )−
( 177,132 )2
6 ]
7705,4
r2 =
√(7000)(3203,4550)
 77

7705,4
r2 =
√22424185,3
7705,4
r2 =
4735,41817
r2 = 0,9936

Persamaan Regresi
70

60 f(x) = 0.6722 x − 4.08799999999999

R² = 0.987362032713279
50
Peredaman (%)

40

30

20

10

0
0 20 40 60 80 100 120

Konsentrasi

Lampiran 15. Perhitungan nilai IC50 Terhadap Vitamin C metode DPPH

X Y XY X2 Y2
0 0 0 0 0
20 5,487 109,74 400 30,107169
40 17,842 713,68 1600 318,336964
60 35,316 2118,96 3600 1247,219856
80 47,395 3791,6 6400 2246,286025
100 62,3 6230 10000 3881,29
∑x = 300 ∑y = 168,34 ∑xy =
∑x2 = 22000 ∑y2 = 7723,2400
x=¿ 50 y=28,057 12963,98

absorbansi blanko−absorbansi sampel

Peredaman(% )= ×100 %
absorbansi blanko

1. Konsentrasi 20 ppm

0,723−0,679
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 6,086%
0,723−0,686
II. %Peredaman = ×86 %
0,723
= 5,118%
0,723−0,685
 78

2. Konsentrasi 40 ppm

0,723−0,577
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 20,194%
0,723−0,531
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 26,556%
0,723−0,647
III. %Peredaman = ×100 %
0,723

3. Konsentrasi 60 ppm

0,723−0,462
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 36,10%
0,723−0,416
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 42,462%
0,723−0,525
III. %Peredaman = ×100 %
0,723

4. Konsentrasi 80 ppm

0,723−0,352
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 51,314%
0,723−0,312
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 56,846%
0,723−0,477
III. %Peredaman = ×100 %
0,723
 79

5. Konsentrasi 100 ppm

0,723−0,279
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 61,441%
0,723−0,217
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 69,986%
0,723−0,322
III. %Peredaman = ×100 %
0,723

Keterangan:
X = Konsentras (ppm)
Y = % Peredaman
( ∑ x )( ∑ y )
( ∑ xy ) − n
a= 2
(∑ x )
(∑ x )−
2
n
( 300 )( 168,34 )
( 12963,98 )−
6
a=
( 300 )2
( 22000 ) −
6
4546,98
a=
7000
a = 0,6496
b = y−a x
b = 28,057– (0,6496)(50)
b = 4,4218
Jadi, persamaan garis regresi: y=ax+b
 80

50=0,6496x - 4,4218
X= 70,163
Nilai IC50 = 70,163 ppm

( ∑ x )( ∑ y )
( ∑ xy ) − n
r 2=

√[ ][( ∑ ]
2 2
(∑ x) (∑ y )
(∑ x )−
2
n
y )−
2
n

( 300 )( 168,34 )
( 12963,98 )−
6
r 2=

√[ ( 22000 ) −
6 ][
( 300 )2
( 7723,2400 )−
( 168,34 )2
6 ]
4547
r2 =
√(7000)(3000,1807)
4547
r2 =
√21001265,2
4547
r2 =
4582,71374
r2 = 0,9922
 81

Persamaan Regresi
70

60
f(x) = 0.649568571428571 x − 4.4217619047619
R² = 0.984465787782795
50

40
Peredaman (%)

30

20

10

0
0 20 40 60 80 100 120

Konsentrasi
 82

Lampiran 16. Perhitungan nilai IC50 Terhadap Ekstrak Daun Legetan metode
ABTS

X Y XY X2 Y2
0 0 0 0 0
20 16,928 338,56 400 286,557184
40 30,679 1227,16 1600 941,201041
60 42,099 2525,94 3600 1772,325801
80 55,609 4448,72 6400 3092,360881
100 70,205 7020,5 10000 4928,742025
∑x = 300 ∑y = 215,520 ∑xy =
∑x2 = 22000 ∑y2 = 11021,18693
50 35,92 15560,88

absorbansi blanko−absorbansi sampel

Peredaman(% )= ×100 %
absorbansi blanko

1. Konsentrasi 20 ppm

0,723−0,686
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 17,250%
0,723−0,707
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 14,717%
0,723−0,673
III. %Peredaman = ×100 %
0,723

2. Konsentrasi 40 ppm

0,723−0,531
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 35,947%
0,723−0,637
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 23,160%
0,723−0,556
III. %Peredaman = ×100 %
0,723
 83

3. Konsentrasi 60 ppm
0,723−0,435
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 47,527%
0,723−0,565
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 31,846%
0,723−0,440
III. %Peredaman = ×100 %
0,723

4. Konsentrasi 80 ppm
0,723−0,303
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 63,450%
0,723−0,418
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 49,578%
0,723−0,383
III. %Peredaman = ×100 %
0,723

5. Konsentrasi 100 ppm

0,723−0,209
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 74,789%
0,723−0,317
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 61,761%
0,723−0,215
III. %Peredaman = ×100 %
0,723
 84

Keterangan:
X = Konsentras (ppm)
Y = % Peredaman
( ∑ x )( ∑ y )
( ∑ xy ) − n
a= 2
(∑ x )
(∑ x )−
2
n
( 300 )( 215,520 )
( 15560,88 )−
6
a=
( 300 )2
( 22000 )−
6
4784,88
a=
7000
a = 0,6836
b = y−a x
b = 35,92– (0,6836)(50)
b = 1,7423
Jadi, persamaan garis regresi: y=ax+b
50=0.6836x – 1,7423
X= 29,090
Nilai IC50 = 29,090 ppm

( ∑ x )( ∑ y )
( ∑ xy ) − n
r 2=

√[ ][( ∑ ]
2 2
(∑ x) (∑ y )
(∑ x )−
2
n
y )−
2
n

( 300 ) ( 215,520 )
( 15560,88 )−
2 6
r=

√[ ( 22000 ) −
( 300 )2
6 ][
( 11021,18693 )−
( 46448,8704 )2
6 ]
4784,88
r2 =
√(7000)( 3279,7085 )
 85

4784,88
r2 =
√22957959,724
4 784,88
r2 =
4791,447
r2 = 0,998

Persamaan Regresi
8000

7000

6000
f(x) = 100.934273131317 x − 1032.07909087692
5000 R² = 0.909869181232164
Predaman (%)

4000

3000

2000

1000

0
0 10 20 30 40 50 60 70 80

Konsentrasi

Lampiran 17. Perhitungan nilai IC50 Terhadap Vitamin C metode ABTS

X Y XY X2 Y2
0 0 0 0 0
20 24,889 497,78 400 619,462321
40 33,333 1333,32 1600 1111,088889
60 46,321 2779,26 3600 2145,635041
80 58,463 4677,04 6400 3417,922369
100 66,706 6670,6 10000 4449,690436
∑x = 300 ∑y = 229,712
∑xy = 15958 ∑x2 = 22000 ∑y2 = 11743,79906
x =50 y=¿38,2853

1. Konsentrasi 20 ppm

0,723−0,626
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 24,487%
0,723−0,621
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 25,090%
0,723−0,621
III. %Peredaman = ×100 %
0,723
 86

2. Konsentrasi 40 ppm

0,723−0,557
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 32,811%
0,723−0,569
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 31,363%
0,723−0,532
III. %Peredaman = ×100 %
0,723

3. Konsentrasi 60 ppm

0,723−0,416
I. C%Peredaman= ×100 %
0,723
= 49,819%
0,723−0,484
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 41,616%
0,723−0,435
III. %Peredaman = ×100 %
0,723

4. Konsentrasi 80 ppm
0,723−0,348
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 58,021%
0,723−0,351
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 57,659%
0,723−0,334
III. %Peredaman = ×100 %
0,723
 87

5. Konsentrasi 100 ppm

0,723−0,273
I. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 67,068%
0,723−0,268
II. %Peredaman = ×100 %
0,723
= 67,671%
0,723−0,287
III. %Peredaman = ×100 %
0,723

Keterangan:
X = Konsentras (ppm)
Y = % Peredaman
( ∑ x )( ∑ y )
( ∑ xy ) − n
a= 2
(∑ x )
(∑ x )− 2
n
( 300 )( 229,712 )
( 15958 )−
6
a=
( 300 )2
( 22000 )−
6
4472,4
a=
7000
a = 0,6389
b = y−a x
b = 38,2853– (0,6389)(50)
b = 6,3396
Jadi, persamaan garis regresi: y=ax+b
 88

50=0,6389x+6,3396
X= 68,336
Nilai IC50 = 68,336 ppm

( ∑ x )( ∑ y )
( ∑ xy ) − n
2
r=

√[ ][( ∑ ]
2 2
(∑ x) (∑ y )
(∑ x )−
2
n
y )−
2
n

( 300 )( 229,712 )
( 15958 )−
2 6
r=

√[ ( 22000 ) −
( 300 )2
6 ][
( 11743,79906 )−
( 229,712 )2
6 ]
4472,4
r2 = √(7000)(2949,198565)
4 472,4
r2 = √20644389,96
4 472,4
r2 = 4543,609794
r2 = 0,9843

Persamaan Regresi
80
70
f(x) = 0.638914285714286 x + 6.33961904761905
60 R² = 0.968900597273146
Peredaman (%)

50
40
30
20
10
0
0 20 40 60 80 100 120

Konsentrasi
 89

Lampiran 18. Pembuatan Ekstrak Daun Legetan

Sampel Daun Legetan Proses Pengeringan

Proses Penghalusan Proses Maserasi

90
 91

Lampiran 19. Pengujian Antioksidan Metode DPPH dan ABTS

92