MAKALAH

ABSTRAK
Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 2

ABSTRACT

KATA PENGANTAR

DAFTAR ISI
ABSTRAK.....................................................................................................................
ABSTRACT...................................................................................................................
KATA PENGANTAR....................................................................................................
DAFTAR ISI..................................................................................................................
DAFTAR GAMBAR.....................................................................................................
DAFTAR TABEL..........................................................................................................
DAFTAR LAMPIRAN.................................................................................................
BAB I PENDAHULUAN..............................................................................................
1.1. Latar Belakang...........................................................................................
1.2. Rumusan Masalah......................................................................................
1.3. Tujuan Percobaan......................................................................................
1.4. Manfaat percobaan.....................................................................................
BAB II TINJAUAN PUSTAKA...................................................................................

1. Muntingia calabura L.........................................................................................
2. Komponen Bioaktif Tanaman....................................................................
3. Penapisan Fitokimia...................................................................................
4. Analisa Total Komponen Bioaktif.............................................................
5. Antioksidan................................................................................................
6. Uji Aktivitas Antioksidan..........................................................................
7. Uji Toksisitas.............................................................................................
8. Metode Ekstraksi.......................................................................................
9. Kromatografi..............................................................................................
10. Spektrofotometer UV-Vis..........................................................................
BAB III METODOLOGI PERCOBAAN...................................................................

1. Tempat dan Waktu Percobaan.............................................................................
2. Alat dan Bahan...................................................................................................
3. Cara Kerja..........................................................................................................
3.1.1.Penyiapan Bahan...................................................................................
3.1.2.Pembuatan Ekstrak Daun Kersen...........................................................
3.1.3.Penapisan Fitokimia...............................................................................
3.1.4.Analisis Komponen Bioaktif dalam Ekstrak Daun Kersen.....................
3.1.5.Pemisahan Ekstrak Daun Kersen...........................................................
3.1.6.Uji Aktivitas Antioksidan.......................................................................
3.1.7.Uji Toksisitas.........................................................................................

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN.......................................................................
1. Hasil Percobaan..................................................................................................
1. Hasil Ekstraksi dan Partisi.....................................................................
2. Hsil Uji Penapisan Fitokimia.................................................................
3. Hasil Kandungan Total Fenolik..............................................................
4. Hasil Kandungan Total Flavonoid..........................................................
5. Hasil Uji Antioksidan.............................................................................
6. Hasil Uji Toksisitas................................................................................
2. Pembahasan........................................................................................................
BAB V PENUTUP........................................................................................................
1. Kesimpulan.........................................................................................................
2. Saran...................................................................................................................
DAFTAR PUSTAKA....................................................................................................

DAFTAR GAMB
Gambar 1. Tanaman Kersen............................................................11

Gambar 2. Struktur Senyawa Alkaloid.............................................15
Gambar 3. Kerangka Dasar Flavonoid.............................................18
Gambar 4. Struktur Kimia Flavonol.................................................19
Gambar 5. Struktur Kimia Flavon....................................................19
Gambar 6. Struktur Kimia Isoflavon................................................20
Gambar 7. Struktur Kimia Flavonon................................................20
Gambar 8. Struktur Kimia Flavanonol..............................................21
Gambar 9. Struktur Kimia Saponin..................................................23
Gambar 10. Struktur Kimia Tanin....................................................24
Gambar 11. Struktur Kimia DPPH....................................................27
Gambar 12. Bagian Tubuh Larva Artemia salina Leach...................30
Gambar 13. Kromatografi Kolom.....................................................37
Gambar 14. Instrumentasi Spektrofotometer UV-Vis.......................41

DAFTAR TABEL Y
Tabel 1. Beberapa Pelarut Organik dan Sifatnya.........................................................35

Tabel 2. Penggolongan Kromatografi Berdasarkan Fasa Diam dan Fasa Gerak.........39

BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang

Tumbuhan merupakan gudang dari berbagai jenis senyawa kimia khususnya
metabolit sekunder yang berkorelasi dengan khasiat dan manfaat yang dimilikinya.
Dapat dikatakan bahwa tumbuhan dapat dijadikan sumber obat-obatan herbal yang
lebih disukai oleh masyarakat. Masyarakat lebih banyak menggunakan tumbuhan
obat sebagai pertolongan pertama dalam mengatasi suatu penyakit karena lebih
mudah untuk didapatkan dan tidak terlalu beresiko. WHO telah merekomendasikan
penggunaan tumbuhan obat dalam pemeliharaan kesehatan masyarakat, pencegahan
dan pengobatan penyakit. Salah satu tumbuhan yang dapat dimanfaatkan sebagai
tumbuhan obat adalah tumbuhan kersen (Muntingia calabura L.). Kersen (Muntinga
calabura L.) banyak dijumpai di pinggir jalan, tumbuh di tengah retakan rumah, di
tepi saluran pembuangan air dan tempat-tempat yang kurang kondusif untuk hidup
karena kersen mempunyai kemampuan beradaptasi yang baik. Berdasarkan beberapa
penelitian daun kersen bisa dimanfaatkan sebagai obat. Karena daun kersen
mengandung senyawa flavonoid, saponin, polifenol dan tanin. Sehingga dapat
digunakan sebagai antioksidan, antibakteri dan antiinflamasi (Mintowati, Setya dan
Maria, 2013).
Pada percobaan ini, dilakukan proses fraksinasi dan identifikasi senyawa
antioksidan dengan menggunakan ekstrak metanol dari daun kersen dan hasil
fraksinasi dari ektrak n-heksan dan ekstrak etil asetat dari daun kersen. Metode
pemisahan yang dilakukan adalah kromatografi kolom. Metode ini memiliki
keuntungan yaitu ketajaman pemisahan yang lebih besar dan kepekaannya lebih
tinggi. Fraksi-fraksi yang terkumpul dari proses fraksinasi, masing-masing akan diuji
daya antioksidannya secara kualitatif dan kuantitatif dengan metode KLT DPPH.
Fraksi-fraksi yang memiliki daya antioksidan yang sama akan digabungkan dan akan
diidentifikasikan golongan senyawanya berdasarkan pada pengamatan skrining ,
fitokimia, spektrofotometer UV-Vis, FTIR, GCMS dan KLT. (M. Antolovich,dkk,

2002).
Pengujian aktivitas antioksidan dan toksisitas, dilakukan secara kualitatif dan
kuantitatif dari ekstrak dan hasil fraksinasi dilakukan dengan menggunakan metode
1,1-diphenyl-2-picrylhidrazyl (DPPH). DPPH merupakan salah satu uji aktivitas
biologis secara in vitro untuk menentukan potensi suatu zat uji sebagai antioksidan
(Pokorny et al, 2001).
Penggunaan metode DPPH didasarkan pada keuntungan yang dimiliki yaitu
sederhana, cepat, murah serta reagen yang dipergunakan mudah untuk dipreparasi
(Antolovich et al., 2001). Pada metode DPPH, parameter yang digunakan adalah nilai
IC50. Definisi nilai IC50 adalah konsentrasi ekstrak yang dapat menurunkan 50%
intensitas serapan (Mulja dan Suharman, 1995).
1.2. Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan di atas maka didapat rumusan
masalah sebagai berikut :
1. Kandungan metabolit sekunder dan komponen bioaktif apa sajakah yang terdapat
pada ekstrak daun kersen (Muntingia calabura L.)?
2. Fraksi apa sajakah yang terdapat pada ekstrak daun kersen (Muntingia calabura
L.)
3. Bagaimanakah aktivitas antioksidan, dan toksisitas pada golongan senyawa
metabolit sekunder hasil fraksinasi tersebut dibandingkan dengan daya
antioksidan pada ekstrak metanolnya?
1.3. Tujuan Percobaan

Adapun tujuan dari percobaan isolasi dan identifikasi ekstrak daun kersen
(Muntingia calabura L.) adalah :
1. Untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder dan komponen bioaktif dari
ekstrak daun kersen (Muntingia calabura L.)
2. Untuk mengetahui fraksi yang terdapat dalam ekstrak daun kersen (Muntingia
calabura L.)
3. Untuk mengetahui aktivitas antioksidand dan efek toksisitas dari ekstrak daun
kersen (Muntingia calabura L.)

1.4. Manfaat Percobaan
Dari percobaan ini diharapkan dapat dibuktikan secara ilmiah tentang
golongan senyawa metabolit sekunder dari daun kersen (Muntingia calabura L.) yang
memiliki daya antioksidan, dan toksisitas dimana senyawa ini nantinya dapat
digunakan dalam pengobatan berbagai macam penyakit degeneratif.
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Muntingia calabura L.
Kersen atau talok atau yang biasa disebut ceri ini adalah nama sejenis pohon
yang memiliki buah kecil yang manis. Kersen atau talok (Muntingia calabura) adalah
tanaman yang berasal dari Meksiko bagian selatan, kepulauan Karibia, Amerika
Tengah, serta Amerika Selatan bagian barat. Pohon kersen termasuk pohon yang tidak
terlalu tinggi, yakni sekitar 7-12 meter, dan memiliki beberapa cabang. Bunganya
kecil, berwarna putih, dan sedikit beraroma. Buah kersen muda berwarna hijau,
kemudian berubah menjadi merah tua bila sudah masak, rasanya manis dan memiliki
biji-biji kecil yang tersebar pada daging buahnya. Pohon yang termasuk tanaman
perintis ini dapat hidup pada kondisi tanah yang asam atau basa, miskin unsur hara,
serta tahan terhadap kekeringan. Biji kersen disebarkan oleh burung dan kelelawar
buah, dan juga oleh manusia karena buahnya bisa dimakan dan memiliki banyak
manfaat. Kini pohon yang bisa bermanfaat sebagai tanaman peneduh ini telah
dinaturalisasi di daerah-daerah tropik seperti Asia Tenggara. Sebagai tanaman
perintis, kersen dapat membantu mengkondisikan tanah agar dapat ditanami tanaman
lainnya. Akan tetapi ia juga dianggap tanaman invasif, karena dapat mendesak dan
berkompetisi dengan tanaman asli daerah tersebut. (Mahmood, 2014)
Gambar 1. Tanaman Kersen
(Sumber: http://TopTropicals.com)
Keterangan :

A. Pohon Muntingia Calabura
B. Bunga Muntingia Calabura
C. Daun dan buah Muntingia Calabura
2.1.1 Taksonomi Muntingia Calabura L

Disebutkan oleh Tjitrosoepomo (1991), tanaman kersen memiliki kedudukan
taksonomi sebagai berikut :
Kerajaan : Plantae (Tumbuhan)
Divisi : Spermatophyta (Tumbuhan biji)
Anak Divisi : Angiospermae (Tumbuhan biji tertutup)
Kelas : Dicotyledoneae (Tumbuhan biji belah/ dikotil)
Anak Kelas : Dialypetalae
Bangsa : Malvales / Columniferae
Suku : Elaeocarpaceae
Genus : Muntingia
Spesies : Muntingia calabura L.
2.1.2 Habitat Muntingia Calabura L

Kersen atau talok (Muntingia calabura) adalah tanaman yang berasal dari
Meksiko bagian selatan, kepulauan Karibia, Amerika Tengah, serta Amerika Selatan
bagian barat (Mahmood, 2014).
Nama-nama lainnya di beberapa negara adalah: datiles, aratiles, manzanitas
(Filipina), khoom smz, takhb (Laos), krkhb barang (Kamboja); dan kerukup siam
(Malaysia). Juga dikenal sebagai capulin blanco, cacaniqua, niguito (bahasa
Spanyol), Jamaican cherry, Panama berry, Singapore cherry (Inggris) dan Japanse
kers (Belanda), yang lalu nama tersebut diambil menjadi kersen dalam bahasa
Indonesia. Ditambahkan oleh Rahman dkk (2010), nama latin buah kersen adalah
Muntingia calabura L (Mahmood, 2014).
2.1.3 Karakteristik Morfologi

Tumbuhan Seri merupakan perdu atau pohon kecil yang tingginya sampai 12

m, meski umumnya hanya sekitar 3-6 m saja. Selalu hijau dan terus menerus
berbunga dan berbuah sepanjang tahun. Cabang-cabang mendatar , menggantung di
ujungnya membentuk naungan yang rindang. Ranting-ranting berambut halus
bercampur dengan rambut kelenjar, demikian pula daunnya. Daun-daun terletak
mendatar, berseling ,helaian daun tidak simetris , bundar telur lanset , tepinya
bergerigi dan berujung runcing, 1-4 x 4-14 cm sisi bawah berambut kelabu rapat ,
bertangkai pendek. Daun penumpu yang sebelah meruncing berbentuk benang lk 0,5
cm , agak lama lalu mongering dan rontok , sementara sebelah lagi rudimeter . Bunga
dalam berkas berisi 1-3(-5) kuntum, terletak di ketiak agak di sebelah atas tumbuhnya
daun bertangkai panjang, berkelamin dua dan berbilangan lima, kelopak berbagi
dalam, taju meruncing bentuk benang, berambut halus, mahkota bertepi rata, bundar
telur terbalik, putih tipis gundul lk 1 cm. Benang sari berjumlah banyak, 10 sampai
lebih dari 100 helai. Bunga yang mekar menonjol keluar, ke atas helai-helai daun,
namun setelah menjadi buah menggantung ke bawah , tersembunyi di bawah helai
daun. Umumnya hanya satu-dua bunga yang menjadi buah dalam tiap berkasnya.
Bertangkai panjang, bulat hampir sempurna, diameter 1-1,5 cm, hijau kuning dan
akhirnya merah apabila masak, bermahkota sisa tangkai putik yang tidak rontok
serupa bintang hitam bersudut lima. Berisi beberapa ribu biji yang kecil-kecil, halus,
putih dan kekuningan, terbenam dalam daging dan sari buah yang manis sekali
(Purwonegoro, 1997).
2.1.4 Manfaat Muntingia Calabura L

a. Penyembuh asam Urat (anti urid acid)
Di Indonesia secara tradisional buah kersen digunakan untuk mengobati asam
urat dengan cara mengkonsumsi buah kersen sebayak 9 butir 3 kali sehari hal ini
terbukti dapat mengurangi rasa nyeri yang ditimbulkan dari penyakit asam urat.
b. Antiseptik
Kandungan dan rebusan daun kersen ternyata dapat berkasiat sebagai
pembunuh microba berbahaya dan dapat digunakan sebagai anti septik. dari
penelitian yang dilakukan oleh penelitian herbal dari Malaysia didapat hasil bahwa

rebusan daun kersen dapat digunakan untuk membunuh bakteri C.Diptheriea, S.
Aureus, P Vulgaris, S Epidemidis dan K Rizhophil pada percobaan yang dilakukan
secara invitro.
c. Antiflamasi
Rebusan daun kersen juga memiliki kasiat anti radang atau mengurangi
radang (antiflamasi) dan menurunkan panas.
d. Antitumor
Kandungan senyawa flavonoid yang dikandung daun kersen ternyata memiliki
kasiat dapat menghambat perkembangan sel kanker (mouse hapatoma) secara
laboratoris yang dilakukan para ilmuwan dari peru (Mahmood, 2014).
2.2 Komponen Bioaktif Tanaman

2.2.1 Alkaloid
Alkaloid adalah suatu golongan senyawa organik yang terbanyak ditemukan
dialam. Hampir seluruh senyawa alkaloida berasal dari tumbuh-tumbuhan dan
tersebar luas dalam berbagai jenis tumbuhan. Semua alkaloida mengandung paling
sedikit satu atom nitrogen yang biasanya bersifat basa dan dalam sebagian besar
atom nitrogen ini merupakan bagian dari cincin heterosiklik (Mahmood, 2014).
Hampir semua alkaloida yang ditemukan dialam mempunyai keaktifan

biologis tertentu, ada yang sangat beracun tetapi ada pula yang sangat berguna
dalam pengobatan. Misalnya kuinin, morfin dan stiknin adalah alkaloida yang
terkenal dan mempunyai efek sifiologis dan psikologis. Alakaloida dapat ditemukan
dalam berbagai bagian tumbuhan seperti biji, daun, ranting dan kulit batang.
Alakloida umumnya ditemukan dalam kadar yang kecil dan harus dipisahkan dari
campuran senyawa yang rumit yang berasal dari jaringan tumbuhan (Mahmood,
2014).
2.2.1.1 Klasifikasi Alkaloid
Pada bagian yang memaparkan sejarah alkaloid, jelas kiranya bahwa alkaloid

sebagai kelompok senyawa, tidak diperoleh definisi tunggal tentang alkaloid.
Banyak usaha untuk mengklasifikasikan alkaloid. menurut Hegnaur, Klasifikasi
alkaloida dapat dilakukan berdasarkan beberapa cara, yaitu :
1. Berdasarkan jenis cincin heterosiklik nitrogen yang merupakan bagian dari
struktur molekul. Berdasarkan hal tersebut, maka alkaloida dapat dibedakan
atas beberapa jenis seperti alkaloida pirolidin, alkaloida piperidin, alkaloida
isokuinolin, alkaloida kuinolin dan alkaloida indol. Struktur masing-masing
alkaloida tersebut adalah sebagai berikut:
Gambar 2. Struktur Senyawa Alkaloid
(Sumber: Hegnaur)
2. Berdasarkan jenis tumbuhan darimana alkaloida ditemukan. Cara ini
digunakan untuk menyatakan jenis alkaloida yang pertama-tama ditemukan
pada suatu jenis tumbuhan. Berdasarkan cara ini, alkaloida dapat dibedakan
atas beberapa jenis yaitu alkaloida tembakau, alkaloida amaryllidaceae,
alkaloida erythrine dan sebagainya.
3. Cara ini mempunyai kelemahan yaitu : beberapa alkaloida yang berasal dari
suatu tumbuhan tertentu dapat mempunyai struktur yang berbeda-beda.
Berdasarkan asal-usul biogenetik. Cara ini sangat berguna untuk menjelaskan
hubungan antara berbagai alkaloida yang diklasifikasikan berdasarkan berbegai
jenis cincin heterosiklik. Dari biosintesa alkaloida, menunjukkan bahwa
alkaloida berasal dari hanya beberapa asam amino tertentu saja.
Berdasarkan hal tersebut maka alkaloid dapat dibedakan atas tiga jenis utama yaitu :
a. Alkaloida alisiklik yang berasal dari asam-asam amino ornitin dan lisin

b. Alkaloida aromatik jenis fenilalanin yang berasal dari fenil alanin, tirosin dan 3,4
dihidrofenilalanin
c. alkaloida aromatik jenis indol yang berasal dari triptopan.
Pada alkaloida aromatik terdapat suatu pola oksigenasi tertentu. Pada

senyawa-senyawa ini gugus fungsi oksigen ditemukan dalam posisi para atau posisi
para dan meta dari cincin aromatik.
2.2.1.2 Sifat-Sifat Alkaloid

Kebanyakan alkaloida berupa padatan kristal dengan titik lebur yang tertentu
atau mempunyai kisaran dekomposisi. Dapat juga berbentuk amorf dan beberapa
seperti nikotin dan koniin berupa cairan. Kebanyakan alkaloida tak berwarna, tetapi
beberapa senyawa kompleks spesies aromatik berwarna. Pada umumnya basa bebas
alkaloida hanya larut dalam pelarut organik meskipun beberapa pseudoalakaloida
dan protoalkaloida larut dalam air. Garam alkaloida dan alkaloida quaterner sangat
larut dalam air.
Alkaloida bersifat basa yang tergantung pada pasangan elektron pada

nitrogen. Jika gugus fungsional yang berdekatan dengan nitrogen bersifat
melepaskan elektron maka ketersediaan eelektron pada nitrogen naik dan senyawa
lebih bersifat basa. Jika gugus fungsional yang berdekatan bersifat menarik
electron maka ketersediaan pasanga elektron berkurang dan pengaruh yang
ditimbulkan alkaloida dapat bersifat netral atau bahkan bersifat sedikit asam.
Kebasaan alkaloida menyebabkan senyawa tersbut sangat mudah mengalmi
dekomposisi terutama oleh panas dan sinar dengan adanya oksigen. Hasil reaksi ini
sering berupa N-oksida. Dekomposisi alakloida selama atau setelah is0olasi dapat
menimbulkan berbagai persoalan jika penyimpanan berlangsung dalam waktu lama.
Pembentukan garam dengan senyawa organik atau anorganik sering mencegah
dekomposisi.
2.2.2 Senyawa Flavonoid

Senyawa flavonoida sebenarnya terdapat pada semua bagian tumbuhan termasuk

daun, akar, kayu, kulit, tepung sari, bunga, buah, dan biji. Kebanyakan flavonoida ini
berada di dalam tumbuh tumbuhan kecuali alga. Namun ada juga flavonoida yang
terdapat dalam hewan, misalnya dalam kelenjar bau berang berang dan sekresi
lebah. Dalam sayap kupu kupu dengan anggapan bahwa flavonoida berasal dari
tumbuh tumbuhan yang menjadi makanan hewan tersebut dan tidak dibiosintesis di
dalam tubuh mereka. Penyebaran jenis flavonoida pada golongan tumbuhan yang
tersebar yaitu angiospermae, klorofita, fungi, briofita (Markham, 1988)
2.2.2.1 Struktur Dasar Senyawa Flavonoid

Senyawa flavonoida adalah senyawa yang mengandung C15 terdiri atas dua inti
fenolat yang dihubungkan dengan tiga satuan karbon. Struktur dasar flavonoida dapat
digambarkan sebagai berikut :
Gambar 3. Kerangka Dasar Flavonoid
(Sumber: Sastrohamidjojo, 1996)
2.2.2.2 Klasifikasi Senyawa Flavonoid

Flavonoida mengandung sistem aromatik yang terkonjugasi sehingga
menunjukkan pita serapan kuat pada daerah spektrum sinar ultraviolet dan spektrum
sinar tampak, umumnya dalam tumbuhan terikat pada gula yang disebut dengan
glikosida (Harbone, 1996). Menurut Robinson (1995), flavonoida dapat
dikelompokkan berdasarkan keragaman, beberapa diantaranya paling banyak diisolasi
adalah flavonol, flavon, flavanonol, isoflavon.
Flavonol
Flavonol paling sering terdapat sebagai glikosida, biasanya 3-glikosida, dan
aglikon flavonol yang umum yaitu kamferol, kuersetin, dan mirisetin yang berkhasiat
sebagai antioksidan dan antiflamasi. Flavonol lain yang terdapat di alam bebas

kebanyakan merupakan variasi struktur sederhana dari flavonol. Larutan flavonol
dalam suasana basa dioksidasi oleh udara tetapi tidak begitu cepat sehingga
penggunaan basa pada pengerjaannya masih dapat dilakukan (Robinson,1991).
Gambar 4. Struktur Kimia Flavonol

(Sumber: Robinson,1991)
Flavon
Flavon berbeda dengan flavonol dimana pada flavon tidak terdapat gugusan 3-
hidroksi. Hal ini mempunyai serapan UV-nya, gerakan kromatografi, serta reaksi
warnanya. Flavon terdapat juga sebagai glikosidanya lebih sedikit daripada jenis
glikosida pada flavonol. Flavon yang paling umum dijumpai adalah apigenin dan
luteolin. Luteolin merupakan zat warna yang pertama kali dipakai di Eropa. Jenis
yang paling umum adalah 7-glukosida dan terdapat juga flavon yang terikat pada gula
melalui ikatan karbon-karbon. Contohnya luteolin 8-C-glikosida. Flavon dianggap
sebagai induk dalam nomenklatur kelompok senyawa flavonoida (Robinson,1991).
Gambar 5. Struktur Kimia Flavon

(Sumber: Robinson, 1991)

Isoflavon
Isoflavon merupakan isomer flavon, tetapi jumlahnya sangat sedikit dan
sebagai fitoaleksin yaitu senyawa pelindung yang terbentuk dalam tumbuhan sebagai
pertahanan terhadap serangan penyakit. Beberapa isoflavon (misalnya daidzein)
memberikan warna biru muda cemerlang dengan sinar UV bila diuapi amonia, tetapi
kebanyakan yang lain tampak sebagai bercak lembayung yang pudar dengan amonia
berubah menjadi coklat (Robinson,1991).
Gambar 6. Struktur Kimia Isoflavon
(Sumber: Robinson, 1991)

Flavanon
Flavanon terdistribusi luas di alam. Flavanon terdapat di dalam kayu, daun
dan bunga. Flavanon glikosida merupakan konstituen utama dari tanaman genus
prenus dan buah jeruk ; dua glikosida yang paling lazim adalah neringenin dan
hesperidin, terdapat dalam buah anggur dan jeruk (Robinson,1991).
Gambar 7. Struktur Kimia Flavonon
(Sumber; Robinson, 1991)
Flavanonol
Senyawa ini berkhasiat sebagai antioksidan dan hanya terdapat sedikit sekali
jika dibandingkan dengan flavonoida lain. Sebagian besar senyawa ini diabaikan

karena konsentrasinya rendah dan tidak berwarna (Robinson,1991).
Gambar 8. Struktur Kimia Flavanonol
(Sumber: Robinson,1991)
2.2.2.3 Kelarutan Senyawa Flavonoid

Aglikon flavonoida adalah polifenol dan karena itu mempunyai sifat kimia
senyawa fenol, yaitu bersifat agak asam sehingga dapat larut dalam basa. Tetapi harus
diingat, bila dibiarkan dalam larutan basa, dan di samping itu terdapat oksigen,
banyak yang akan terurai. Karena mempunyai sejumlah gugus hidroksi, atau suatu
gula, flavonoida merupakan senyawa polar, maka umumnya flavonoida cukup larut
dalam pelarut polar seperti Etanol (EtOH), Metanol (MeOH), Butanol (BuOH),
Aseton, Dimetilsulfoksida (DMSO), Dimetilformamida (DMF), Air dan lain-lain.
Adanya gula yang terikat pada flavonoida (bentuk yang umum ditemukan) cenderung
menyebabkan flavonoida lebih mudah larut dalam air dan dengan demikian campuran
pelarut yang disebut diatas dengan air merupakan pelarut yang lebih baik untuk
glikosida. Sebaliknya, aglikon yang kurang polar seperti isoflavon, flavanon dan
flavon serta flavonol yang termetoksilasa cenderung lebih mudah larut dalam pelarut
seperti Eter dan Kloroform (Markham, 1988).
2.3 Penapisan Fitokimia

Tujuan utama dari penapisan fitokimia adalah menganalisis tumbuhan untuk
mengetahui kandungan bioakti yang berguna untuk pengobatan. Uji fitokimia
meliputi analisa kualitatif kandungan alam tumbuhan atau bagian tumbuhan (akar,
batang, daun, bunga, buah dan biji) terutama kandungan metabolit sekunder yang
merupakan senyawa bioaktif seperti alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, antrakuinon
dan glikosida

a. Alkaloid
Alkaloid adalah senyawa nitrogen (N) yang merupakan hasil metabolit sekunder
pada tumbuh-tumbuhan. Umumnya alkaloid menunjukkan efek fisiologik yang
menarik, sehingga banyak digunakan sebagai obat-obatan (Guevera, 1985).
Hasil positif alkaloid pada uji Meyer ditandai dengan terbentuknya endapan
putih. Diperkirakan endapan tersebut adalah kompleks kalium alkaloid. Pada uji
alkaloid dengan perksi Mayer, diperkirakan nitrogen pada alkaloid akan bereaksi
dengan ion logam K+ dari kalium tetraidomerkurat (II) memebentuk kompleks
kalium-alkaloid yang mengendap. Perkiraan yang terjadi pada uji Mayer
Hasil positif pada uji Degendroff juga ditandai dengan terbenuknya endapan
coklat muda sampai kuning. Endapan tersebut adalah kalium alkaloid.
b. Flavonoid
Flavonoid adalah senyawa folifenol yang mengandung C15 tediri atas dua inti
fenolat yang dihubungkan dengan tiga satuan karbon. Struktur umum flavonoid juga
digambarkan sebagai deretan senyawa C6-C3-C6 (Guevera, 1985).Pendeteksian
adanya flavonoid dapat dilakukan dengan metode wilstater sianidin. Uji Wilstater
sanidin biasa digunakan untuk mendeteksi senyawa yang mempunyai alfa-
benzopiron. Warna merah yang terbentuk pada uji Wilstater disebabkan karena
terbentuknya garam flaviilium (Achmad, 1986).
c. Saponin
Saponin adalah senyawa aktif permukaan yang kuat, dapat menimbulkan busa
jika dikocok dengan air dan pada konsentrasi rendah dapat menyebabkan hemolisis
sel darah merah pada tikus. Identifikasi saponin dapat dilakukan dengan mengocok
ekstrak bersama air hangant di dalam tabung reaksi dan akan timbul busa yang
bertahan lama, setelah penambahan HCl 2 N busa tidak hilang. Timbulnya busa pada

uji Forth menunjukan adanya glikosida yang mempunyai kemampuan membentuk
buih dalam air yang terhidrolisis menjadi glukosa dan senyawa lainnya (Guevera,
1985).
Gambar 9. Struktur Kimia Saponin

(Sumber: Guevera, 1985)
d. Tanin/polifenol
Istilah tanin pertama kalinya digunakan untuk bahan dari tumbuhan yang
mempunyai kemampuan untuk menggumpalkan protein hewan pada proses
penyamaan kulit. Saat ini taninmempunyai nilai penting sebagai sitotoksik,
antikanker dan antitumor. Tanin terdiri dari 2 kelompok berdasarkan hasil
hidrolisisnya. Tipe pertama dikenal sebagai pirogalol tanin yaitu, senyawa-senyawa
fenolik yang mempunyai ikatan ester dengan gula. Tipe kedua adalah tannin
terkondensasi yang kadang-kadang disebut katekol tanin dan merupkan polimer dari
senyawa-senyawa fenolik dengan berhubungan dengan pigmen flavonoid.
Penambahan asam, kondensasi tanin akan mengalami dekomposisi menjadi senyawa-
senyawa berwarna merah yang tidak larut disebut dengan phobaphene atau merah
tanin (Guevera, 1985)
Tanin pada ekstrak tumbuh-tumbuhan diidentifikasi dengan uji gelatin dengan
prinsip pengendap protein dari gelatin oleh tanin (Franswoth, 1996). Dan hasil posotif
juga diberikan oleh pereaksi ferri klorida (FeCl3), dimana tanin terhidrolisa
memberikan warna biru atau hitam, sedangkan kondensasi tanin memberikan warna
biru-hijau. Senyawa-senyawa polifenol juga memberikan reaksi warna spesifik

dengan FeCl3, tetapi tidak memberikan endapan dengan gelatin.
Gambar 10. Struktur Kimia Tanin

(Sumber: Guevera, 1985)
e. Antrakuinon
Antrakuinon mungkin dijumpai baik dalam bentuk glikosida dengan ikatan O-

atau C- glikosida maupun aglikonnya. Biasanya digunakan sebagai zat warna dan
katartiks (purgatives). Turunan antrakuinon biasanya merupakan senyawa berwarna
merah jingga yang larut dakam air panas dan alkohol encer. Identifikasinya dilakukan
dengan cara uji Bontagers, tetapi kadang-kadang uji ini memberikan hasil negatif
pada antrakuinon yang sangat stabil atau turunan antranol, untuk itu ientifikasi
dilakukan modifikasi uji Borntragers. Antrakuinon memberikan warna yang spesifik
dengan basa seperti, merah, violet dan hijau. Secara spekrofotometri antrakuinon
memberikn pita resapan yang berbeda dengan senyawa kuinon lainnya, dimana
memberikan 4 atau 5 pita resapannya pada daerah UV dan sinar tampak. Paling tidak
3 dari pita serapan berkisar antara 215 nm, dan laiinya diatas 430 nm (Guevera,
1985).
f. Glikosida
Glikosida merupakan senyawa alami yang terdapat pada berbagai jnis tumbuh-
tumbuhan tinggi dan memberikan pengaruh fisiologis, senyawa ini terbentuk dari
gugus non-gula (aglikon) dan gugus gula (glikon). Gugus aglikonnya sangat
bervariasi tergantung dari jenis tumbuhan penghasil antara lain, alkaloida, flavonoida,
stereoida, triterpenoida dan lain sebagainya (Guevera, 1985).
Untuk pemeriksaan atau uji glikosida dapat dilakukan selain berdasarkan

aglikonnya, juga dapat dilakukan terhadap gugus gulanya karena gugus aglikon
sangat bervariasi, maka dapat dilakukan terhadap gugus gulanya dengan pereaksi
Keller-Killiani (Chairul, 2003).
2.4 Analisa Total Komponen Bioaktif

Komponen bioaktif merupakan hal yang paling penting yang terkandung
dalam ekstrak tanaman berkaitan dengan aktivitas fisiologisnya baik sebagai
antioksidan, antibakteri, antidiabet, anti kanker, antiinflamasi, dan lainnya. Pada
umumnya tingginya komponen bioaktif suatu ekstrak tanaman berkorelasi positif
dengan tingginya aktivitas fisiologis yang dimiliki tanaman tersebut. Beberapa
komponen bioaktif yang dimiliki tanaman tersebut. Beberapa komponen yang
dianalisis total diantaranya total fenolik, total flavonoid dan total karoenoid.
Total fenolik ditentukan dengan metode folin-Ciocalteu. Prinsip dasar metode
Folin-ciocalteu adalah reaksi oksidasi dan reduksi kolometrik untuk mengukur semua
senyawa fenolik dalam sampel uji. Pereaksi Folin-Ciocalteu merupakan larutan
kompleks ion polimerik yang dimuat dari asam fosfomolibdat dan asam
hetereofosfotungstat yang terdiri dari air, natrium tungstat, natrium molibdat, an asam
fosfat, asam klorida, litium sulfat, dan bromin (Folin dan Ciocalteu, 1994).
Senyawa fenolik bereaksi dengan oksidator fosfomolibdat dibawah kondisi
alkalis menghasilkan senyawa fenolat dan kompleks molibdenum-tungsten berwarna
biru. Tingginya intensitas warna biru yang terbentuk setara dengan banyaknya
kandungan senyawa fenolik dalam bahan. Total fenolik dalam sampel diperoleh
dengan memasukkan nilai absorbansi sampel pada persamaan kurva kalibrasi standar
asam galat memiliki gugus hidrosil dan ikatan rangkap terkonjugasi pada masing-
masing cincin benzena sehingga senyawa ini mudah beraksi membentuk kompleks
dengan reagent Follin-Ciocalteu serta merupakan unit penyusun senyawa fenolik
(Rorong dan Suryanto, 2010).
Flavonoid berperan dalam memberikan rasa dan warna pada berbagai buah
dan sayur. Di dalam tubuh flavonoid berfungsi sebagai antioksidan, antiinflamasi,
menghambat pertumbuhan mikroba dan mencegah kanker (Prior, 2003). Analisis

kandungan flavonoid dilakukan dengan mengguanakan reagen alumunium klorida
( AlCl3). Gugus orto hidroksi keton dari senyawa flavonoid akan bereaksi dengan
klorida membentuk kompleks alumunium-flavonoid yang absorbansinya diukur
dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 430 nm ( Prior, 2003).
2.5 Antioksidan
Antioksidan didefinisikan sebagai senyawa yang dapat menunda,
memperlambat, dan mencegah proses oksidasi lipid. Dalam arti khusus, antioksidan
adalah zat yang dapat menunda atau mencegah terjadinya reaksi antioksidasi radikal
bebas dalam oksidasi lipid (Kochhar dan Rossell, 1990).
Antioksidan alami di dalam makanan dapat berasal dari (a) senyawa
antioksidan yang sudah ada dari satu atau dua komponen makanan, (b) senyawa
antioksidan yang terbentuk dari reaksi-reaksi selama proses pengolahan, (c) senyawa
antioksidan yang diisolasi dari sumber alami dan ditambahkan ke makanan sebagai
bahan tambahan pangan (Pratt, 1992).
Senyawa antioksidan yang diisolasi dari sumber alami adalah yang berasal dari
tumbuhan. Kingdom tumbuhan, Angiosperm memiliki kira-kira 250.000 sampai
300.000 spesies dan dari jumlah ini kurang lebih 400 spesies yang telah dikenal dapat
menjadi bahan pangan manusia. Isolasi antioksidan alami telah dilakukan dari
tumbuhan yang dapat dimakan, tetapi tidak selalu dari bagian yang dapat dimakan.
Antioksidan alami tersebar di beberapa bagian tanaman, seperti pada kayu, kulit
kayu, akar, daun, buah, bunga, biji dan serbuk sari (Pratt, 1992).
Fungsi utama anti oksidan digunakan untuk memperkecil terjadinya proses
oksidasi lemak dan minyak, memperkecil terjadinya proses kerusakan dalam
makanan, memperpanjang masa pemakaian dalam industri makanan, meningkatkan
stabilitas lemak yang terkandung dalam makanan. Antioksidan tidak hanya digunakan
dalam industri farmasi, tetapi juga digunakan secara luas dalam industri makanan,
industri petroleum, industri karet dan sebagainya (Tahir,Wijaya, dan Widyaningsih,
2003).
.

2.6 Uji Ativitas Antioksidan
2.6.1 Metode DPPH
DPPH merupakan singkatan umum untuk senyawa kimia organik yaitu 1,1-
diphenyl-2-picrylhydrazil. DPPH adalah bubuk kristal berwarna gelap terdiri dari
molekul radikal bebas yang stabil. DPPH mempunyai berat molekul 394.32
dengan rumus molekul C18H12N5O6, larut dalam air. Penyimpanan dalam wadah
tertutup baik pada suhu -20C (Molyneux, 2004).
Gambar 11. Struktur Kimia DPPH

(Sumber:Molyneux, 2004).
DPPH dapat digunakan untuk menguji kemampuan antioksidan yang

terkandung dalam makanan. Prinsipnya dimana elektron ganjil pada molekul
DPPH memberikan serapan maksimum pada panjang gelombang 516 nm yang
berwarna ungu. Warna ini akan berubah dari ungu menjadi kuning lemah apabila
elektron ganjil tersebut berpasangan dengan atom hidrogen yang disumbangkan
senyawa antioksidan.
Uji aktivitas antioksidan dapat dilakukan dengan metode DPPH free radical
scavenger dengan DPPH sebagai senyawa pendeteksi. DPPH (1,1-diphenyil-2
picrylhydrazil) berwarna ungu karena adanya delokalisasi elektron pada tom
nitrogen setelah direaksikan dengan senyawa antioksidan menjadi
Difenilpikrilhidrazin yang berwarna kuning. Hal ini mengakibatkan ikatan
rangkap terkonjugasi menjadi lebih panjang sehingga panjang gelombang DPPH
bergeser ke panjang gelombang yang lebih panjang dengan absorbansi kuat lamda

maks 516 nm. DPPH akan tereduksi dan warnanya akan berubah menjadi kuning
setelah bereaksi dengan senyawa antioksidan. Perubahan tersebut diukur dengan
spektrofotometer dan diplotkan sebagai konsentrasi (Ryneston, 2007)
Prinsip metode DPPH didasarkan pada pengurangan DPPH dengan adanya
donor hidrogen dari antioksidan terbentuk difenil pikril hidrazin ( Blois, 1985).
A 0 A 1
x 100
% aktivitas penghambatan = A0
Keterangan : A0 merupakan absorban DPPH dan A1 merupakan absorban dari

sampel.
2.7 Uji Toksisitas

Toksisitas adalah suatu keadaan yang menandakan adanya efek toksik/racun
yang terdapat pada bahan sebagai sediaan single dose atau campuran. Toksisitas akut
ini diteliti pada hewan percobaan yang menunjukkan evaluasi keamanan dari
kandungan kimia untuk penggunaan produk rumah tangga, bahan tambahan makanan,
kosmetik, obat-obatan (Deisy dkk, 2010).
Uji toksisitas dilakukan untuk mendapatkan informasi atau data tentang
toksisitas suatu bahan (kimia) pada hewan uji. Secara umum uji toksisitas dapat
dikelompokkan menjadi uji toksisitas jangka pendek/akut, dan uji toksisitas jangka
panjang. Uji toksisitas akut dimaksudkan untuk mendapatkan informasi tentang
gejala keracunan, penyebab kematian, urutan proses kematian dan rentang dosis yang
mematikan hewan uji (Lethal dose atau disingkat LD50) suatu bahan. Uji toksisitas
akut merupakan efek yang merugikan yang timbul segera sesudah pemberian suatu
bahan sebagai dosis tunggal, atau berulang yang diberikan dalam 24 jam (Deisy dkk,
2010).
2.7.1 Metode BSLT

BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) merupakan salah satu metode skrining
bahan yang berpotensi sebagai tanaman berkhasiat. Metode penelitian ini
menggunakan larva udang (Artemia salina Leach.) sebagai bioindikator. Larva udang
ini merupakan organism sederhana dari biota laut yang sangat kecil dan mempunyai

kepekaan yang cukup tinggi terhadap toksik (Parwati dan Simanjuntak, 1998).
Telurnya memiliki daya tahan hidup selama beberapa tahun dalam keadaan
kering. Telur udang dalam air laut akan menetas menjadi larva (nauplii) dalam waktu
24 28 jam (Pujiati et al., 2002). Bila bahan yang diuji memberikan efek toksik
terhadap larva udang, maka hal ini merupakan indikasi awal dari efek farmakologi
yang terkandung dalam bahan tersebut. Beberapa penelitian menunjukkan bahwa A.
salina memiliki korelasi positif terhadap ekstrak yang bersifat bioaktif. Metoda ini
juga banyak digunakan dalam berbagai analisis biosistim seperti analisis terhadap
residu pestisida, miko toksin, polusi, senyawa turunan morfin, dan karsinogenik dari
phorbol ester (Meyer et al., 1982).
2.7.2 Larva Artemia salina Leach

Artemia salina Leach merupakan hewan uji brine shrimp (udang laut), sejenis
udang-udangan primitif dan hidup sebagai zooplankton. Artemia pada tahun 1778
diberi nama cancer salinus yang kemudian diubah namanya oleh Leach pada tahun
1819 menjadi Artemia salina. Hewan ini diperdagangkan dalam bentuk telur istirahat
yang disebut kista, berbentuk bulat kecil berwarna kelabu kecoklatan dengan
diameter 200-300 m (Baraja, 2008) Kista Artemia dapat diperoleh dari San
Francisco Bay (California, USA), Great Salt Lake (Utah, USA), Tsingtao (China)
atau Burgas-Pomorije (Bulgaria) (Sorgeloos P, et al., 1978)
Klasifikasi & Morfologi Artemia salina Leach (Panjaitan, 2011)

Kingdom : Animalia
Phylum : Arthropoda
Classis : Crustaceae
Subclassis : Branchiopoda
Ordo : Anostraca
Famili : Artemiidae
Genus : Artemia
Species : Artemia salina Leach

Siklus hidup udang (Artemia salina) secara umum dapat dilihat dalam tiga fase
yaitu bentuk telur, larva (nauplii) dan artemia dewasa. Telur berbentuk bulat dengan
ukuran 0,2-0,3 mm. Selanjutnya telur akan menetas menjadi larva. Telur yang baru
menetas ini berukuran kurang lebih 300 . Sebelum berubah menjadi artemia dewasa,
larva mengalami 15 kali perubahan bentuk dalam satu tingkatan hidup. Waktu yang
dibutuhkan hingga menjadi artemia dewasa umumnya sekitar 2 minggu. Pada fase
artemia dewasa, berbentuk silinder dengan panjang 12-15 mm dan tubuh terbagi atas
bagian kepala, dada dan perut. Hewan ini dapat bertahan hidup dalam air dengan suhu
25o-30oC, perairan yang berkadar garam tinggi (antara 15-30 permil), oksigen terlarut
sekitar 3 mg/L,dan pH sekitar 8-9 (Panjaitan, 2011)
Gambar 12. Bagian Tubuh Larva Artemia salina Leach

( Sumber: http://www.ecotao.co.za/html/artemia.html )
2.8 Metode Ekstraksi

Ekstraksi merupakan proses pemisahan dua zat atau lebih dengan
menggunakan pelarut yang tidak saling campur. Berdasarkan fase yang terlibat,
terdapat dua jenis ekstraksi, yaitu ekstraksi cair-cair dan ekstraksi padat-cair.
Pemindahan komponen dari padatan ke pelarut pada ekstraksi padat-cair melalui tiga
tahapan, yaitu difusi pelarut ke pori-pori padatan atau ke dinding sel, di dalam
dinding sel terjadi pelarutan padatan oleh pelarut, dan tahapan terakhir adalah
pemindahan larutan dari pori-pori menjadi larutan ekstrak. Ekstraksi padat cair
dipengaruhi oleh waktu ekstraksi, suhu yang digunakan, pengadukan, dan banyaknya

pelarut yang digunakan (Harborne, 1987).
Menurut Ketut Ristiasa dalam Parameter standar umum ekstrak tumbuhan
obat (2000) yang dimaksud dengan ekstraksi adalah proses penarikan kandungan
senyawa kimia dari simplisa nabati atau simplisa hewani menggunakan pelarut yang
sesuai, kemudian semua atau hampir pelarut diuapkan dengan menggunakan alat
yang sesuai.
Tingkat ekstraksi bahan ditentukan oleh ukuran partikel bahan tersebut. Bahan
yang diekstrak sebaiknya berukuran seragam untuk mempermudah kontak antara
bahan dan pelarut sehingga ekstraksi berlangsung dengan baik (Sumadji dkk.,1996).
Prosedur ekstraksi bertujuan untuk mendapatkan senyawa yang diinginkan
dan untuk menghilangkan komponen yang tidak diinginkan dari tanaman
menggunakan pelarut yang selektif. Ekstrak yang diperoleh setelah distandarisasi
dapat digunakan sebagai bahan obat-obatan seperti dalam bentuk sediaan seperti
tablet dan kapsul. Tanaman yang diekstraksi mengandung campuran kompleks dari
metabolit seperti alkaloid, glikosida, terpenoid, flavonoid dan lignan (Honda et al,
2008)
Menurut Hostetman et al. (1997), secara umum ekstraksi dilakukan secara
berturut-turut mulai dengan pelarut non-polar (heksana atau kloroform) lalu dengan
pelarut yang semi polar (etil asetat atau dietil eter), kemudian dengan pelarut polar
(metanol atau etanol). Dengan demikian akan diperoleh ekstrak kasar yang
mengandung berturut-turut senyawa non-polar, semi polar dan senyawa polar.
Markham (1988) menyatakan bahwa komponen yang terbawa pada proses ekstraksi
adalah komponen yang berpolaritas sesuai dengan pelarutnya.
Mengalirnya bahan pelarut ke dalam ruang sel menyebabkan protoplasma
membengkak, pecah dan komponen aktif tersebut terlarut, mengikuti sifat difusi
melalui ruang antar sel. Gaya yang bekerja adalah perbedaan konsentrasi antara
larutan dalam sel dengan cairan ekstraksi yang mula-mula tanpa bahan aktif. Bahan
kandungan sel akan mencapai cairan sebelah luar sampai terbentuk suatu
keseimbangan konsentrasi antara larutan dalam dan luar sel (Voigt 1994).

2.8.1 Cara Dingin
Maserasi
Maserasi adalah proses penyarian simplisia dengan cara perendaman
menggunakan pelarut dengan sesekali pengadukan pada temperature kamar. Maserasi
yang dilakukan secara terus menerus disebut maserasi kinetic sedangkan maserasi
yang dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyarian
terhadap maserat pertama, dan seterusnya disebut remaserasi. Maserasi merupakan
metode ekstraksi dengan perendaman sampel menggunakan pelarut organik pada
suhu ruang. Metode ekstraksi ini sangat menguntungkan dalam proses isolasi
senyawa organik bahan alam karena struktur senyawa dari suatu sampel tidak
mudah rusak. Prinsip metode maserasi didasarkan bahwa sampel yang direndam
dengan menggunakan pelarut organik akan terjadi pemecahan dinding dan
membran sel akibat dari perbedaan tekanan yang terdapat di luar dan di dalam sel
sehingga metabolit sekunder yang terkandung di dalam sitoplasma akan terlarut
kedalam pelarut organik (Yeon-Ju et al.,2014).
Metode maserasi digunakan untuk mengekstrak jaringan tanaman yang belum
diketahui kandungan senyawanya yang kemungkinan bersifat tidak tahan panas
sehingga kerusakan komponen tersebut dapat dihindari (Harborne, 1987).
Kelemahan utama dari metode masrasi adalah prosesnya cukup memakan
waktu yang lama, dapat berlangsung beberapa jam sampai beberapa minggu.
Ekstraksi secara menyeluruh juga dapat menghabiskan sejumlah besar volume pelarut
dan dapat berpotensi hilangnya metabolit. Selain itu, beberapa senyawa tidak
terekstraksi secara efisien jika kurang terlarut dalam temperatur kamar. Dilain pihak,
dikarenakan ekstraksi dilakukan pada temperatur kamar, maserasi tidak menyebabkan
degradasi dari metaboli yang tidak tahan panas (Harborne, 1987).
Menurut harbone (1987), selain membutuhkan waktu yang relatif lama
ekstraksi juga membutuhkan banyak pelarut. Ekstraksi dengan metode maserasi
menggunakan prinsip kelarutan. Prinsip kelarutan adalah like disolve like, yaitu (1)
pelarut polar akan melarutkan senyawa polar, demikian juga sebaliknya pelarut
nonpolar akan melarutkan senyawa nonpolar, (2) pelarut organik akan melarutkan

senyawa organik. Ekastraksi senyawa aktif dari suatu jaringan tanaman dengan
berbagai jenis pelarut pada tingkat kepolaran yang berbeda bertujuan untuk
memperoleh hasil yang optimum, baik jumlah ekstrak maupun senyawa aktif yang
terkandung dalam contoh uji.
Partisi
Partisi (ekstraksi cair-cair) merupakan metode pemisahan berdasarkan
sifat kelarutan komponen target dan distribusinya di dalam dua pelarut yang
saling tidak bercampur. Senyawa yang bersifat polar akan tertarik ke pelarut
polar, senyawa semipolar akan tertarik ke pelarut semipolar dan senyawa nonpolar
akan tertarik ke pelarut nonpolar (Khopkar, 2002).
Pemisahan senyawa yang bersifat polar, semipolar dan nonpolar dapat
dilakukan dengan metode partisi menggunakan corong pisah. Pengocokan
bertujuan untuk memperluas area permukaan kontak antara pelarut yang tidak
bercampur. Syarat pelarut untuk metode partisi adalah memiliki kepolaran yang
sesuai dengan bahan yang diekstrak dan harus terpisah setelah pengocokan (Harvey,
2000).
2.8.2 Cara Panas

Sokletasi
Sokletasi merupakan ekstraksi menggunaka pelarut yang selalu baru umumnya
dilakukan alat khusus sehingga terjadi ektraksi kontinu dengan jumlah pelarut relatif
konstan dengan adanya pendingin balik ( Ritiasa, 2000). Ekstraksi soxhlet hanya
diperlukan bila senyawa yang diinginkan memiliki kelarutan terbatas dalam suatu
pelarut. Keuntungan dari metode ini adalah banyaknya bagian tanaman akan terlarut
dengan kondisi pemanasan. Kelemahannya adalah tidak dapat digunakan untk
senyawa yang tidak tahan pemanasan karena pemansan yang berkepanjangan dapat
menyebabkan degradasi senyawa aktif ( Nikhal SB et al, 2010).
Eksraksi sari lengkap
Ekstraksi seri sempurna adalah metode umum yang melibatkan pelarut dengan
peningkatan kepolaran mulai dari non polar seperti heksan hingga pelarut yang lebih

polar seperti metanol untuk memastikan bahwa senyawa dengan berbagai aktivitas
polaritas dapat disekstraksi ( das et al, 2010).
Tabel 1. Beberapa Pelarut Organik dan Sifatnya
2.9 Kromatografi
Kromatografi pertama kali dikembangkan oleh seorang ahli botani
RusiaMichael Tsweet pada tahun 1903 untuk memisahkan pigmen berwarna dalam
tanaman dengan cara perkolasi esktrak petroleum eter dalam kolom gelas yangberisi
kalsium karbonat (CaCO3). Saat ini kromatografi merupakan teknik pemisahan yang
paling umum dan paling sering digunakan dalam bidang kimia analisis dan dapat
dimanfaatkan untuk melakukan analisis, baik analisis kualitatif, kuantitatif, atau
preparative dalam bidang farmasi, lingkungan, industri, dan sebagainya.
Kromatografi suatu teknik pemisahan yang menggunakan fase diam (stationary
phase) dan fase gerak (mobile phase) (Rohman, 2007).
Kromatografi merupakan pemisahan suatu senyawa yang didasarkan atas
perbedaan laju perpindahan dari komponen-komponen dalam campuran. Pemisahan
dengan metode kromatografi dilakukan dengan cara memanfaatkan sifat-sifat fisik
dari sampel, seperti kelarutan, adsorbsi, keatsirian dan kepolaran. Kelarutan
merupakan kecenderungan molekul untuk melarut dalam cairan. Adsorpsi penjerapan
adalah kecenderungan molekul untuk melekat pada permukaan serbuk halus (Johnson
dan Stevenson, 1991).

2.9.1 Kromatografi Kolom
Kromatografi kolom adalah kromatografi yang menggunakan kolom sebagai
alat untuk memisahkan komponen-komponen dalam campuran. Alat tersebut berupa
pipa gelas yang dilengkapi suatu kran dibagian bawah kolom untuk mengendalikan
aliran zat cair, ukuran kolom tergantung dari banyaknya zat yang akan dipindahkan.
Secara umum perbandingan panjang dan diameter kolom sekitar 8:1 sedangkan daya
penyerapnya adlah 25-30 kali berat bahan yang akan dipisahkan. Teknik banyak
digunakan dalam pemisahan senyawa-senyawa organic dan konstituen-konstituen
yang sukar menguap sedangkan untuk pemisahan jenis logan-logam atau senyawa
anorganik jarang dipakai (Yazid, 2005).
Apabila komponen yang akan dipisahkan bergerak bersama fase gerak melalui
sebuah kolom kemudian setiap komponen terpisahkan berupa zona-zona pita. Pada
kromatografi analitik setiap komponen yang keluar dari kolom akan dicatat oleh
rekorder dan disajikan dalam bentuk puncak (peak) yang menunjukkan konsentrasi
eluen sebagai fungsi waktu. Untuk suatu senyawa yang mengandung komponen
tunggal akan ditandai dengan waktu elusi yang tampak pada konsentrasi eluen
maksimum. Tinggi atau luasan puncak sebanding dengan konsentrasi komponen
sampel. Pada kromatografi preparatif, akan diperoleh sejumlah fraksi isolate dari
komponen sampel dalam fase gerak (Ghisalberti, 2008).
Metode pemisahan kromatografi kolom ini memerlukan bahan kimia yang
cukup banyak sebagai fasa diam dan fasa bergerak bergantung pada ukuran kolom
gelas. Untuk melakukan pemisahan campuran dengan metode kromatografi kolom
diperlukan waktu yang cukup lama, bias berjam-jam hanya untuk memisahkan satu
campuran. Selain itu, hasil pemisahan kurang jelas artinya kadang-kadang sukar
mendapatkan pemisahan secara sempurna karena pita komponen yang satu
bertumpang tindih dengan komponen lainnya. Masalah waktu yang lama disebabkan
laju alir fasa gerak hanya dipengaruhi oleh gaya gravitasi bumi, ukuran diameter
partikel yang cukup besar membuat luas permukaan fasa diam relative kecil sehingga
tempat untuk berinteraksi antara komponen-komponen dengan fasa diam menjadi
terbatas. Apabila ukuran diameter partikel diperkecil supaya luas permukaan fasa

diam bertambah menyebabkan semakin lambatnya aliran fasa gerak atau fasa gerak
tidak mengalir sama sekali. Selain itu fasa diam yang sudah terpakai tidak dapat
digunakan lagi untuk pemisahan campuran yang lain karena sukar meregenerasi fasa
diam (Hendayana, 2006).
Untuk memisahkan campuran, kolom yang telah dipilih sesuai campuran diisi
dengan bahan penyerap seperti alumina dalam keadaan kering atau dibuat seperti
bubur dengan pelarut. Pengisian dilakukan dengan bantuan batang pengaduk untuk
memanfaatkan adsorben dan gelas wool pada dasar kolom. Pengisian harus dilakukan
secara hat-hati dan sepadat mungkin agar rata sehingga terhindar dari gelembung-
gelembung udara, untuk membantu homogenitas biasanya kolom setelah diisi
divibrasi diketok-ketok. Sejumlah cuplikan yang dilarutkan dalam sedikit pelarut,
dituangkan melalui sebelah atas kolom dan dibiarkan mengalir ke dalam adsorben.
Komponen-komponen dalam campuran diadsorpsi dari larutan secara kuantitatif oleh
bahan penyerap berupa pita sempit pada permukaan atas kolom. Dengan penambahan
pelarut secara terus-menerus, masing-masing komponen akan bergerak turun melalui
kolom dan pada bagian atas kolom akan terjadi kesetimbangan baru antara bahan
penyerap, komponen campuran dan eluen. Kesetimbangan dikatakan tetap apabila
suatu komponen yang satu dengan yang lainnya bergerak ke bagian bawah kolom
dengan waktu atau kecepatan berbeda-beda sehingga terjadi pemisahan (Yazid, 2005)
Dalam kromatografi partisi cair-cair, suatu pemisahan dipengaruhi oleh
distribusi sampel antara fase cair diam dan fase cair bergerak dengan membatasi
kemampuan pencampuran. Jika suatu zat terlarut dikocok dalam sistem dua pelarut
yang tidak bercampur atau saling melarutkan maka zat terlarut akan terdistribusi di
antara kedua fase (Khopkar, 2008).

Gambar 13 Kromatografi Kolom
(Sumber: Khopkar, 2008)
Kromatografi cair yang dilakukan di dalam kolom besar merupakan metode

kromatografi terbaik untuk pemisahan campuran dalam jumlah besar. Pada
kromatografi kolom, campuran yang akan dipisahkan diletakkan berupa pita bagian
atas kolom penyerap yang berada dalam tabung kaca, tabung logam atau bahkan
tabung plastic. Pelarut (fase gerak) dibiarkan mengalir melalui kolom karena aliran
ini disebabkan oleh gaya berat atau di dorong dengan tekanan (Schwarting, 1991).
Dengan mengalirkan pelarut lebih lanjut, dengan atau tanpa tekanan udara,
masing-masing zat bergerak turun dengan kecepatan khas hingga terjadi pemisahan
dalam kolom yang disebut kromatogram. Kecepatan bergerak zat dipengaruhi oleh
beberapa faktor misalnya daya serap zat penyerap, sifat pelarut dan suhu dari system
kromatografi. Jika dikehendaki pemisahan beberapa zat khasiat dapat dilakukan
dengan mengalirkan selanjutnya pelarut yang sama atau pelarut lain yang mempunya
daya elusi yang kuat (Djasman, 1979).
Berdasarkan jenis fasa gerak yang dipartisi, komatografi dapat digolongkan
menjadi beberapa golongan yang ditabelkan pada tabel berikut.

Tabel 2. Penggolongan Kromatografi Berdasarkan Fasa Diam dan Fasa Gerak
2.9.2 Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Kromatografi Lapis Tipis ialah metode pemisahan fisikokimia yang terdiri
atas bahan berbutir-butir (fase diam), ditempatkan pada penyangga berupa pelat
gelas, logam, atau lapisan yang cocok. Campuran yang akan dipisah, berupa larutan,
ditotolkan berupa bercak atau pita. Setelah pelat atau lapisan diletakkan di dalam
bejana tertutup rapat yang berisi larutan pengembang yang cocok (fase gerak),
pemisahan terjadi selama perambatan kapiler (pengembangan). Selanjutnya, senyawa
yang tidak berwarna harus ditampakkan (dideteksi) (Stahl, 1985).
Teknik kromatografi lapis tipis dikembangkan oleh Ismailoff dan Schraibar
pada tahun 1938. Adsorben dilapiskan pada lempeng kaca yang bertindak sebagai
penunjang fasa diam. Fasa bergerak akan menyerap sepanjang fasa diam dan
terbentuklah kromatogram. Ini dikenal juga sebagai kromatografi kolom terbuka.
Biasanya yang sering digunakan sebagai materi pelapisnya adalah silika gel, bubuk
selulosa, tanah diatome, dan kieselguhr. Pemilihan sistem pelarut dan komposisi
lapisan tipis ditentukan oleh prinsip kromatografi yang akan digunakan. Sampel
diteteskan pada salah satu bagian tepi plat kromatografi (0,01 10 g zat) (Hardjono
Sastrohamidjojo, 1991).
Kromatografi lapis tipis digunakan untuk memisahkan komponen komponen
atas dasar perbedaan adsorpsi atau partisi oleh fase diam dipisah gerakan pelarut
pengembang. Teknik Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dikembangkan oleh Egon Stahl
dengan menghamparkan penyerap pada lempeng gelas, sehingga merupakan lapisan
tipis. KLT merupakan kromatografi serapan, tetapi dapat juga merupakan
kromatografi partisi karena bahan penyerap telah dilapisi air dari udara. Sistem ini
sangat popular karena banyak memberikan keuntungan, yaitu peralatan yang

diperlukan sederhana, murah, waktu analisis yang singkat serta daya pisah cukup
baik. Selain itu sampel yang dibutuhkan sangat sedikit (Sudjadi, 1986).
.Kromatogarafi Lapis Tipis merupakan cara analisis cepat yang memerlukan
bahan yang sedikit. Kromatografi Lapis Tipis digunakan untuk memisahkan senyawa-
senyawa yang sifatnya hidrofob seperti lipida-lipida dan hidrokarbon. Sebagai fase
diam digunakan senyawa yang tak bereaksi seperti silika gel atau alumina. Silika gel
biasa diberi pengikat yang dimaksudkan untuk memberikan kekuatan pada lapisan
dan menambah adesi pada gelas penyokong. Pengikat yang biasa digunakan adalah
kalsium sulfat (Sastrohamidjojo, 2002).
Metode dalam KLT, identitas noda dinyatakan dengan harga Rf (Retordation
Factor) yang didefinisikan sebagai rasio jarak noda terhadap titik awal dibagi jarak
eluen terhadap titik awal dapat dihitung nilai Retention factor(Rf) dengan
persamaan :
Tetapi pada gugus-gugus yang besar dari senyawa-senyawa yang susunannya

mirip,sering kali harga Rf berdekatan satu sama lainnya (Sastrohamidjojo, 2002).
Faktor-faktor yang mempengaruhi gerakan noda dalam KLT yang juga
mempengaruhiharga Rf (Hardjono Sastromidjoyo, 1991) adalah :
a. Struktur senyawa yang sedang dipisahkan.
b. Sifat adsorben dan derajat aktivitasnya. Perbedaan adsorben memberikan
perbedaan yang besar terhadap harga Rf.
c. Tebal dan kerataan lapisan adsorben.
d. Pelarut fasa gerak (dan tingkat kemurnianya).
e. Derajat kejenuhan dan uap dalam bejana pengembangan yang digunakan.
f. Teknik percobaan.
g. Jumlah cuplikan yang digunakan. Penetesan jumlah cuplikan yang
berlebihan memberikan tendensi penyebaran noda-noda dengan
kemungkinan terbentuknya ekor.
h. Suhu, untuk mencegah perubahan-perubahan dalam komposisi pelarut yang
disebabkan oleh penguapan-penguapan atau perubahan-perubahan fasa

2.10 Spektrofotometer UV-Vis
Para kimiawan telah lama menggunakan bantuan warna sebagai bantuan
dalam mengenali zat-zat kimia. Spektrofotometri dapat dianggap sebagai suatu
perluasan pemeriksaan visual yang dengan studi lebih mendalam dari absorpsi energi
radiasi oleh macam-macam zat kimia memperkenankan dilakukannya pengukuran
ciri-ciri serta kuantitatifnya dengan ketelitian lebih besar (Day dan Underwood, 1993)
Spektrofotometer sesuai dengan namanya adalah alat yang terdiri dari
spektrometer dan fotometer. Spektrometer menghasilkan sinar dari spektrum dengan
panjang gelombang tertentu dan fotometer adalah alat pengukur intensitas cahaya
yang ditransmisikan atau yang diabsorpsi. Jadi spektrofotometer digunakan untuk
mengukur energi secara relatif jika energi tersebut ditransmisikan, direfleksikan atau
diemisikan sebagai fungsi dari panjang gelombang. Kelebihan spektrofotometer
dibandingkan fotometer adalah panjang gelombang dari sinar putih lebih dapat
terseleksi dan ini diperoleh dengan alat pengurai seperti prisma, grating ataupun celah
optis. Pada fotometer filter, sinar dengan panjang gelombang yang diinginkan
diperoleh dengan berbagai filter dari berbagai warna yang mempunyai spesifikasi
melewatkan trayek panjang gelombang tertentu. Pada fotometer filter, tidak mungkin
diperoleh panjang gelombang yang benar-benar monokromatis, melainkan suatu
trayek panjang gelombang 30-40 nm. Sedangkan pada spektrofotometer, panjang
gelombang yang benar-benar terseleksi dapat diperoleh dengan bantuan alat pengurai
cahaya seperti prisma. Suatu spektrofotometer tersusun dari sumber spektrum tampak
yang kontinyu, monokromator, sel pengabsorpsi untuk larutan sampel atau blangko
dan suatu alat untuk mengukur perbedaan absorpsi antara sampel dan blangko
ataupun pembanding (Khopkar SM,1990).
Spektrofotometer uv-vis yang terdiri dari dua komponen utama yaitu
spektrometer dan fotometer. Spektrometer menghasilkan spektra penjang gelombang
tertentu, sedangkan fotometer merupakan alat pengukur intensitas cahaya yang
ditransmisikan atau diabsorpsi. Spektrofotometer uv-vis digunakan untuk mengukur
energi secara relatif bila energi tersebut ditransmisikan, direfleksikan, atau diemisikan

sebagai fungsi dari panjang gelombang. Sedangkan spektrofotometri adalah suatu
metode yang didasarkan pada pengukuran energi cahaya tampak (visibel) atau cahaya
ultraviolet (uv) oleh suatu senyawa sebagai fugsi panjang gelombang ( Day &
Underwood, 2002).
Gambar 14. Instrumentasi Spektrofotometer UV-Vis

(Sumber: Day & Underwood, 2002).
Keuntungan dari spektrofotometer adalah yang pertama penggunaannya luas,
dapat digunakan untuk senyawa anorganik, organik dan biokimia yang diabsorpsi di
daerah ultra lembayung atau daerah tampak. Kedua sensitivitasnya tinggi, batas
deteksi untuk mengabsorpsi pada jarak 10-4 sampai 10-5 M. Jarak ini dapat
diperpanjang menjadi 10-6 sampai 10-7 M dengan prosedur modifikasi yang pasti.
Ketiga selektivitasnya sedang sampai tinggi, jika panjang gelombang dapat
ditemukan dimana analit mengabsorpsi sendiri, persiapan pemisahan menjadi tidak
perlu. Keempat, ketelitiannya baik, kesalahan relatif pada konsentrasi yang ditemui
dengan tipe spektrofotometer UV-Vis ada pada jarak dari 1% sampai 5%. Kesalahan
tersebut dapat diperkecil hingga beberapa puluh persen dengan perlakuan yang
khusus. Dan yang terakhir mudah, spektrofotometer mengukur dengan mudah dan
kinerjanya cepat dengan instrumen modern, daerah pembacaannya otomatis (Skoog,
DA, 1996).

BAB III
METODOLOGI PERCOBAAN
3.1 Tempat dan Waktu Percobaan
Percobaan dilakukan di Laboratorium Kimia, Pusat Laboratorium Terpadu,

Jurusan Kimia Fakultas Sains dan Teknologi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Waktu
percobaan dilaksanakan mulai bulan September 2016 hingga bulan Desember 2016.
3.2 Alat dan Bahan
3.2.1 Alat
Alat-alat yang digunakan yaitu peralatan gelas standar, kertas saring whatman
no 1, rotary evaporator, corong pisah, botol reagen ukuran besar, ekstraktor sokhlet,
pipet tetes, pipet ukur 10ml dan 5ml, plat KLT silica gel, chamber, pipa kapiler,
kolom kromatografi, botol vial, vortex, cawan petri, alumuniun foil, kapas, kasa,
plastik tahan panas, kertas, wadah penetasan A. salima, mikropipet, instrument GC-
MS,FTIR,dan UV-VIS.
3.2.2 Bahan
Bahan dasar yang digunakana dalam penelitian ini adalah daun kersen yang
diperoleh dari pohon kersen di Ciputat Tangerang Selatan Bamten. Bahan kimia yang
digunakan yaitu pelarut methanol, n-heksana, etil asetat, kloroform, aseton, petroleum
eter, serbuk silica 200g, crystal disk ukuran sedang, cerium sulfat, reagen Lieberman-
Burchard, larutan FeCl3, larutan DPPH O,05%, reagen Dragendroff, larutan HCl 2%,
reagen Mayer, Aquadest, reagen Wagner, serbuk Mg, larutan NaoH 2N, reagen folin
ciocalteu 50%, larutan Na2CO3 20%, larutan NaNO3 5%, larutan AlCl3 10%, larutan
DPPH 0,002% dalam methanol 100ml, dan larutan NaOH 1N. Kemudian larutan
yang dibuat dengan melarutkan 3,8g campuran garam komersial dalam aquadest yang
komposisinya menyerupai air laut, lalu telur A. Salina Leach 0,4g, larutan DMSO,
larutan buffer fosfat 0,2N dengan PH 6,8; 6,9; 7,0; 7;1, 7;2; dan 7;3, larutan standar

Akarbose, enzim -amilase, larutan amilum 1%, larutan asam denitro [DNS], larutan
kalium natrium tartar, nutrient agar, Biakan Staphilococcus aureus dan Esherichia
coli, Batang ose, dan antibiotic [kloramfenikol, penicillin, amoksilin, streptomycin].
3.3 Cara Kerja
3.3.1 Penyiapan Bahan
Daun kersen yang digunakan dalam penelitian ini dilakukan sortasi untuk
dipisahkan dari kotoran-kotoran sehingga dapat mengurangi jumlah pengotor yang
ikut terbawa dalam bahan uji kemudian dicuci dengan air mengalir lalu diangin-
anginkan hingga tidak terdapat sisa air. Kemudian dihaluskan menggunakan alat
penggiling khusus. Setelah itu dikeringkan dan ditimbang berat sampel lalu
selanjutnya dilakukan ekstraksi
3.3.2 Pembuatan Ekstrak Daun Kersen
3.3.2.1 Ekstraksi dengan cara Maserasi
Sampel tanaman kersen yang sudah kering dan halus, ditimbang sebanyak 90
g. setelah itu dimaserasi dengan metanol. Didiamkan selama x24 jam. Hasil maserasi
sampel kemudian disaring dengan kertas saring dan residu sampel daun kersen
dimaserasi kembali hingga pelarut yang digunakan tidak berwarna.
3.3.2.2 Ekstraksi dengan cara Sokletasi
Sebanyak 20 g serbuk simplisia ditempatkan pada selonsong berupa kertas

saring. Pelarut metanol dimasukkan kedalam 500ml distillation flask. Setelah itu
sampel di ekstraksi selama beberapa jam sampai pelarut tidak berwarna. Kemudian
cairan hasil ekstraksi sokhlet digabung dengan hasil ekstraksi dari maserasi dan
dipekatkan dengan rotary evaporator (pada suhu 500C) hingga diperoleh ekstrak yang
kental.
3.3.2.3 Partisi Cair-cair
Dilarutkan ekstrak metanol hasil maserasi yang sudah pekat, larutkan dengan
50ml methanol:air (1:1). Lalu ditambahkan 50ml n-heksana kemudian kocok sampai

terbentuk 2 lapisan, dimasukkan hasil pengocokan kedalam corong pisah dan
ditampung fraksi n-heksana dalam botol. Kemudian dilanjutkan kembali proses
fraksinasi dengan pelarut n-heksana hingga dihasilkan lapisan n-heksana berwarna
bening. Selanjutnya lakukan hal yang sama untuk pelarut metanol.
3.3.3 Penapisan Fitokimia
3.3.3.1 Preparasi Sampel
10 gram sampel tanaman dimasukkan kedalam Erlenmeyer 250ml dan

ditambahkan 50ml pelarut methanol. Didiamkan rendaman sampel selama 60 menit.
Disaring dan ditampung filtrar sampel dalam erlemeyer 250ml untuk analisi fitokimia
selanjutnya
3.3.3.2 Uji Alkaloid
10ml filtrate sampel dimasukkan kedalam tabung reaksi. Ditambahkan 10ml

kloroform dan 10 tetes ammonia. Fraksi kloroform diambil dan ditambahkan 0.5 ml
HCl 2% kedalam tabung reaksi. Lalu di vortex dan dibagi kedalam 3 tabung reaksi.
Tabung reaksi pertama ditambahkan 2-3 tetes reagen Dragendorff (positif alkaloid
terbentuk endapan jingga-merah). Tabung reaksi kedua ditambahkan 2-3 tetes
pereaksi Mayer (positif alkaloid terbentuk endapan putih-kuning). Tabung reaksi
ketiga ditambahkan 5 tetes pereaksi Wagner (positif terbentuk endapan coklat).
3.3.3.3. Uji Flavanoid
2ml sampel dimasukkan kedalam tabung reaksi, lalu ditambahkan sedikit

serbuk Mg kedalam tabung tersebut dan 10 tetes HCl pekat. Diamati perubahan yang
terjadi (positif flavonoid jika timbul busa dan berwarna bening-orange).
3.3.3.4 Uji Triterpenoid dan steroid
2ml ekstrak simplisia dimasukkan kedalam tabung reaksi. Ditambahkan 10

tetets reagen Liberman-Burchard kedalam tabung. (positif triterpenoid terbentuk
cincin kecoklatan, merah atau violet dan positif steroid jika berwarna hijau).

3.3.3.5 Uji Fenolik Hidrokuinon
2ml filtrate tanaman dimasukkan kedalam tabung reaksi. Ditambahkan NaOH

2N kedalam tabung reaksi lalu dikocok (positif kuinon jika berwarna merah).
3.3.3.6 Uji Tanin/polifenol
2ml esksrak methanol tanaman dimasukkan kedalam tabung reaksi, lalu

ditambahkan 5 tetes FeCl3 1% lalu dikocok (positif tannin jika berwarna hijau
kehitaman dan polifenol jika berwarna kebiruan).
3.3.3.7 Uji Saponin
Sampel tanaman yang telah kering dan halus ditimbang sebanyak 1 gram dan
dimasukkan kedalam tabung reaksi. Lalu ditambahkan aquadest sebanyak 5ml
kedalam tabung reaksi. Kemudian dipanaskan dalam penangas air selama 5menit.
Filtrate yang diperoleh disaring dan didiamkan sampai agak dingin. Lalu dikocok
kuat sampai timbul busa (positif saponin jika busa tersebut stabil selama 10 menit).
3.3.4 Analisis Komponen Bioaktif dalam Ekstrak Daun Kersen
3.3.4.1 Pembuatan Larutan Sampel
Sebanyak 10 mg sampel dilarutkan dalam 10 ml metanol
3.3.4.2 Uji Total Fenolik
0,5 ml sampel ditambahkan dengan 2,5ml air destilasi, lalu ditambahkan 0,5
ml reagen Folin-Ciocelteu (1:1) dan diinkubasi selama 3 menit. Ditambahkan 2 ml
larutan NaCO3 20% dan dibiarkan pada water bath yang mendidih selama 1 menit.
Setelah didingin dengan ice bath dan di ukur nilai absorbansinya pada panjang
gelombang 750nm. Larutan standar yang digunakan adalah larutan asam galat 0; 20;
40; 60; 80; 100 ppm. Jumlah kandungan Fenolik sebanding dengan jumlah mg
ekuivalen asam galat dalam 100 ml sampel
3.3.4.3 Uji Total Flavanoid
1 ml sampel ditambahkan 3ml air destilasi dan 0.3 ml larutan NaNO 3 5%. Lalu

diinkubasi selama 5 menit. Ditambahkan 0,3 ml larutan alumunium klorida (AlCl 3)
10%. Larutan yang dihasilkan disentrifuge dan di inkubasi selama 5 menit dan
ditambahkan aquadest hingga volume 10 ml, diukur nilai absorbansi pada panjang
gelombang 430 nm. Larutan standar yang digunakan adalah kuersetin dengan
konsentrasi 0; 2; 4; 8; 16; 32. Kandungan flavonoid dianggap sebagai jumlah
ekuivalen mg kuersetin dalam 100 ml sampel.
3.3.4 Pemisahan Ekstrak Daun Kersen
3.3.4.1 Metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Plat KLT setinggi 1 cm diberi batas bawah dan atas. Sampel ekstrak dilarutkan
dalam aseton hingga cair kemudian ditotolkan pada garis batas bawah plat KLT silica
gel GF254 dengan pipa kapiler, lalu spot dikeringkan diudara. 10 ml eluen dengan
perbandingan pelarut dimasukkan kedalam chamber. Setelah itu, dimasukkan plat
TLC yang telah diberi spot dan dikering udarakan kedalam chamber berisi eluen yang
telah dijenuhkan, kemudian wadah ditutup. Biarkan sampai eluen naik hingga garis
batas atas plat KLT. Plat KLT diambil, dikering udarakan dan di amati spot pada plat
TLC dibawah sinar UV. Untuk mengetahui senyawa yang terdapat pada masing-
masing spot diplat TLC, disemprotkan pereaksi warna cerium sulfat, Lieberman-
Burchard, amoniak, FeCl3, dan Dragendroff.
3.3.4.2 Metode Kromatografi Kolom
Dimasukkan kapas pada bagian bawah kolom kromatografi sebagai penahan

penyerap. Serbuk silica dilarutkan dengan eluen hingga diperoleh bubur. Bubur silica
dimasukkan kedalam kolom setinggi 2/3 dari panjang kolom. Sampel diimpregnasi
dengan silica gel dan dimasukkan kedalam kolom penyerap sambil ditambahkan
pelarut. Ditunggu beberapa saat hingga pita-pita berwarna dihasilkan pada bubur
silica. Ditampung analit per 10ml dalam botol vial. Ditentukan fraksi senyawa yang
dihasilkan berdasarkan jumlah spot yang dihasilkan pada pengujian analit dengan
KLT. Analit yang memiliki ukuran dan jumlah spot yang sama dimasukkan kedalam
satu fraksi.

3.3.5 Uji Aktivitas Antioksidan
3.3.5.1 Metode Bioautografi Menggunakan DPPH 0.05%
Ekstrak sampel yang pekat ditotolkan pada plat KLT dan dielusi dengan eluen
hingga eluen mencapai tanda batas. Lalu plat KLT dikering anginkan dan disemprot
dengan pereaksi DPPH. Jika bercak noda menghasilkan warna kuning maka positif
aktif antioksidan.
3.3.5.2 Metode DPPH Free Radical Scavenger
Penentuan Absorbansi Kontrol Positif Vitamin C
Sebanyak 0,2 mg vitamin C dilarutkan dalam 2ml aquadest. Dibuat

konsentrasi standar vitamin C 1,25; 2,5; 5; 10 ppm. Kedalam masing-masing larutan
standar ditambahkan 2 ml DPPH 0,002%. Larutan vitamin C divorteks sampai
homogenya dan di inkubasi pada suhu 370C selama 30 menit dalam ruang gelap.
Diukur nilai absorbansi larutan sampel dengan spektrofotometer UV-Vis pada
panjang gelombag 512-520 nm
Penentuan Range Konsentrasi
Sebanyak 0,3448 g fraksi metanol A dilarutkan dengan 37 ml metanol (10000

ppm) dan 0,0138 g fraksi metanol B dilarutkan dengan 10 ml (1000 ppm) sebagai
larutan induk. Dari masing-masing larutan induk (Fraksi dan B) 10000 ppm dan
1000 ppm dibuat larutan sampel dengan konsentrasi 100, 50, 25, dan 10 ppm. Larutan
sampel masing-masing konsetrasi dimasukkan kedalam tabung reaksi dan
ditambahkan 2 ml DPPH 0.002%. Larutan sampel divorteks sampai homogenya dan
di inkubasi pada suhu 370C selama 30 menit dalam ruang gelap. Diukur nilai
absorbansi larutan sampel dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombag
512-520 nm.dilakukan pengujian sebanyak dua kali (duplo). Digunakan 2 ml
methanol dan 2 ml DPPH 0.002% sebagai larutan blanko. Ditentukan nilai presentase
inhibisi yang dihitung dengan rumus:

Ablanko Asampel
% Inhibisi= Asampel x 100
Persen inhibisi sebagai x dan konsetrasi ekstrak sebagai y dalam persamaan

regresi linier. Ditentukan nilai IC50 menggunakan persamaan regresi linier y=ax+b,
dimana y adalah absorbansi dan X adalah konsentrasi.
3.3.6 Uji Toksisitas

3.3.6.1 Penetesan Telur A.Salina Leach
Disiapkan air lau atau larutan campuran garam komersial yang pH nya diatur
menjadi 8,5 dengan penambahan NaOH 1N. Kemudian dimasukkan kedalam wadah
penetesan. Selanjutnya, ditambahkan telur udang pada bagian 1 kemudian lubangnya
ditutup dengan alumunium foil. Ditempatkan wadah penetasan dibawah sinar lampu
neon. Setelah 48 jam, larva siap digunakan untuk uji toksisitas
3.3.6.2 Penentuan Range Konsentrasi
Sebanyak 25 mg ekstrak dilarutkan dalam 1 mL DMSO dan diencerkan
dengan air laut pada labu ukur 25 mL. Dari larutan induk 1000 ppm dibuat
konsnetrasi 100 dan 10 ppm. Dimasukkan larutan sampel konsentrasi 1000, 100, 10
ppm kedalam botol vial. Selanjutntya, ditambahkan 5 mL air laut dan 10-20 ekor
larva udang A. Salina Leach. Larutan dibiarkan selama 24 jam dibawah cahaya
lampu. Setelah 24 jam, larva udang yang mati dari masing-masing botol vial dihitung
dan dicari nilai LC50.
3.3.8.3 Penentuan Fixed Concentration
Pembuatan fixed concentration dilakukan dengan membuat deret konsentrasi
sampel yang diperoleh dari penentuan range konsentrasi. Mortalitas dihitung dengan
cara: akumulasi mati dibagi jumlah akumulasi hidup dan mati (total) dikali 100%.
Grafik dibuat dengan log konsentrasi sebagai sumbu x terhadap mortalitas sebagai
sumbu y. Nilai LC50 merupakan konsentrasi dimana zat menyebabkan kematian 50%
yang diperoleh dengan memakai persamaan regresi linier y = a + bx.

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Hasil Percobaan

4.1.3 Hasil Kandungan Total Fenolik
Penentuan kandungan total fenolik dilakukan dengan metode

Follin-Ciocalteau. Untuk menentukan kandungan total fenolik dalam
daun kersen digunakan asam galat sebagai larutan standar.
Tabel . Nilai Absorbansi Standar Asam Galat
Sampel Konsentrasi
Absorbansi Persamaan
(mg/L)
(y) Regresi
(x)
0 0
20 0,4217 y = 0.0081x +
40 0.5069 0.132
Asam Galat
60 0,6563 R = 0.9143
80 0,7064
100 0,9357
1
f(x) = 0.01x + 0.13
0.8
R = 0.91
0.6
Absorbansi 0.4
absorbansi
0.2 Linear (absorbansi)
0
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)
Gambar . Kurva Standar Asam Galat
Nilai absorbansi dari fraksi metanol diplotkan terhadap kurva

standar asam galat dan dihitung kandungan senyawa fenoliknya.
Kandungan total fenolik dalam tumbuhan dinyatakan dalam GAE
(Gallic Acid Equivalent), yaitu jumlah kesetaraan milligram asam
galat dalam 1 gram sampel.
Tabel . Kandungan Total Fenolik dari fraksi metanol
Kandungan
Konsentrasi
Absorbansi Total Fenolik
Sampel (mg/L)
(y) (mg GAE/g
(x)
ekstrak)
Fraksi
1000 0,7888 810,864
metanol
4.1.4. Hasil Kandungan Total Flavonoid
Penentuan kandungan total flavonoid dilakukan dengan reagen

AlCl3. Untuk menentukan kandungan total flavonoid digunakan
kuersetin sebagai standar.
Tabel 3.Nilai Absorbansi Larutan Standar Kuersetin
Sampel Konsentrasi
Absorbansi Persamaan
(mg/L)
(y) Regresi
(x)
0 0
2 0,067 y = 0.0393x -
4 0.142 0.0025
Kuersetin
8 0,323 R = 0.9993
16 0,644
32 1,246

1.4
1.2 f(x) = 0.04x - 0
1 R = 1
0.8
Absorbansi 0.6
absrbansi
0.4 Linear (absrbansi)
0.2
0
0 5 10 15 20 25 30 35
Konsentrasi (ppm)
Gambar . Kurva Standar Kuersetin
Nilai absorbansi dari fraksi metanol diplotkan terhadap kurva

standar kuersetin dan dihitung kandungan total flavonoidnya.
Kandungan total flavonoid dalam tumbuhan dinyatakan dalam KE
(kuersetin equivalent) yaitu jumlah kesetaraan milligram kuersetin
dalam 1 gram sampel.
Tabel . Kandungan Total Flavonoid dari Fraksi Metanol
Kandungan
Konsentrasi
Absorbansi Total Fenolik
Sampel (mg/L)
(y) (mg KE/g
(x)
ekstrak)
Fraksi
1000 0,136 3,5242
metanol
4.1.5 Hasil Uji Antioksidan

4.1.5.1. Uji Aktivitas Antioksidan secara Kualitatif
Setelah dilakukan uji coba dengan berbagai komposisi eluen,
maka diperoleh komposisi eluen yang optimal untuk mengelusi
fraksi metanol A dan B dari ekstrak daun kersen (Muntingia calabura),
yaitu pelarut n-heksan dan etil asetat dengan perbandingan 1:9 (fraksi A) dan 3:7
(fraksi B), didapat bercak kuning dan latar belakang ungu.

4.1.5.2.Uji Aktivitas Antioksidan secara Kuantitatif
Uji antioksidan dilakukan dengan menggunakan metode
radical scavenger dengan DPPH sebagai pendeteksi dan aktivitas
antioksidan dinyatakan dengan nilai IC 50. Kontrol positif yang
digunakan dalam percobaan ini adalah vitamin C.
Tabel . Aktivitas antioksidan dari vitamin C
Konsentrasi IC50
% Inhibisi
Sampel (mg/L) Absorbansi ( g/m
(y)
(x) L)
1,25 0,342 -6,87
2,5 0.179 44,06
Vitamin C 4,9
5 0,092 71,25
10 0,051 84,06
Absorbansi blangko = 0,32
100
f(x) = 8.82x + 6.8
80
R = 0.72
60
% Inhibisi 40
% Inhibisi
20 Linear (% Inhibisi)
0
0 2 4 6 8 10 12
-20
Konsentrasi (ppm)
Gambar . Kurva Aktivitas Antioksidan Vitamin C
Fraksi metanol diuji aktivitas antioksidan yang diperoleh dari

nilai absorbansi. Nilai absorbansi tersebut dihitung aktivitas
penghambatannya (%inhibisi) dibandingkan dengan nilai absorbansi
kontrol negatif sehingga diperoleh nilai IC 50 dari masing-masing
sampel. Sampel yang digunakan pada uji ini yaitu fraksi yang

diperoleh dari hasil kolom berupa fraksi metanol A dan B. Dimana
fraksi A dan B dielusi dengan menggunakan n-heksana:etil asetat
berturut-turut dengan rasio 1:9 dan 3:7.
Tabel . Aktivitas antioksidan dari Fraksi Metanol A dan B
Konsentr IC50
%
asi Absorba Persamaa
Sampel Inhibisi ( g/
(ppm) nsi n Regresi
(y) mL)
(x)
Fraksi 10 0,279 12,81
y = 0.1637x
Metano 25 0,283 11,56
+ 14.535 216,64
l 50 0,194 39,37
R = 0.249
(A) 100 0,241 24,68
Fraksi 10 0,303 5,31
y = 0.8773x
Metano 25 0,215 32,81
- 0.7357 57,83
l 50 0,222 30,62
R = 0.9201
(B) 100 0,030 90,62
Absorbansi blangko = 0,32
100
80
60
% Inhibisi 40 Fraksi Metanol A
20 Fraksi Metanol B
0
10 25 50 100
Konsentrasi (ppm)
Gambar . Kurva Aktivitas Antioksidan Fraksi Metanol A dan Fraksi

Metanol B

250 216.64
200
g/mL 150 Vitamin C

Fraksi Metanol A
100 57.83
Fraksi Metanol (B)
50 4.9
0
Category 1
IC50
Gambar . Nilai IC50 dari Vitamin C, Fraksi Metanol A, dan Fraksi

Metanol B
4.1.6. Hasil Uji Toksisitas

Uji toksisitas ini menggunakan metode Brine Shrimp Lethality
Test (BSLT) dengan prinsip menghitung mortalitas larva Artemia
salina Leach pada fraksi metanol. Perhitungan mortalitas dilakukan
secara duplo.
Tabel . Data Pengamatan Kematian Larva Artemia salina Leach

Fraksi Metanol

1000
Konsentrasi 100 ppm 10 ppm Kontrol
ppm
Benur masuk 13 11 15 12 11 10 15 15
Total masuk 24 27 21 30
Ratarata
12 13,5 10,5 15
masuk
Benur hidup 8 7 13 9 10 8 4 8
Total hidup 15 22 18 12
Rata-rata
7,5 11 9 6
hidup
Benur mati 5 4 2 3 1 2 11 7
Total mati 9 5 3 18
Rata-rata mati 4,5 2,5 1,5 9
Efek sitotoksik dilakukan dengan menghitung nilai LC50. LC50
merupakan indikasi ketoksikan suatu bahan atau senyawa yang
dapat menyebabkan kematian 50% pada hewan uji. Penentuan nilai
LC50 dilakukan dengan menggunakan metode analisis probit, dimana
pada metode ini nilai LC50 diperoleh dari persamaan regresi linier
antara nilai probit dan log konsentrasi.
Tabel . Penentuan Nilai LC50 Fraksi Metanol Daun Kersen

Rata-
Nilai LC50
Konsentr Log rata Nilai Nilai
Probi
asi C kemati Terkec Terbes ( g/mL
t
(ppm) (x) an il (Xt) ar (Xb) )
(y)
(100%)
1000 3 37,5 4,642 4,668 4,694
6,26
100 2 18,5 4,046 4,046 4,046 5
10
10 1 14,3 3,874 3,920 3,966

37.5
40
35
30
25
18.5
Rata-rata Kematian 20 14.3
15 Rata-rata Kematian
10
5
0
10 100 1000
Konsentrasi Fraksi Metanol (ppm)
Gambar . Grafik Pengaruh Konsentrasi Fraksi Metanol Daun Kersen

(Muntingia calabura) terhadap Kematian Larva Artemia salina Leach
4.5
f(x) = 0.35x + 3.52
4 R = 0.83
Nilai Probit 3.5

Nilai Probit
Linear (Nilai Probit)
3
2.5
0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Log C
Gambar . Kurva Regresi Linier Penetapan Nilai LC 50 Fraksi Metanol

Daun Kersen (Muntingia calabura)

4.2. Pembahasan
4.2.1. Ekstraksi
4.2.2. Uji Penapisan Fitokimia
4.2.3. Kromatografi Kolom
4.2.4. Uji Total Fenolik
Total fenol adalah komponen bioaktif yang dapat menurunkan

tekanan darah dan lemak darah, disamping tentunya tokotrienol
dan gamma-oryzanol yang sebelumnya telah diketahui sebagai
senyawa antioksidan (Astawan dan Kasih, 2009). Senyawa Fenol
diketahui memiliki aktivitas antioksidan. Senyawa fenol merupakan
metabolit sekunder yang memainkan peranan dalam pemeliharaan
tubuh manusia. Adanya kandungan kimia pada tumbuhan seperti
fenol, flavonoid, dan tannin, mengindikasikan kemungkinan adanya
aktivitas antioksidan dan aktivitas antioksidan ini dapat membantu
mencegah terjadinya penyakit melalui aktivitas penangkalan radikal
bebas (Meenakshi et al., 2012).
Metode analisis total fenolik yang digunakan dalam praktkum ini
ialah metode Follin-ciocalteau. Prinsip metode Folin-Ciocalteu
adalah reaksi oksidasi dan reduksi kolorimetrik untuk mengukur
semua senyawa fenolik dalam sampel uji. Pereaksi Folin-Ciocalteu
merupakan larutan kompleks ion polimerik yang dibentuk dari asam
fosfomolibdat dan asam heteropolifosfotungstat. Pereaksi ini
terbuat dari air, natrium tungstat, natrium molibdat, asam fosfat,
asam klorida, litium sulfat, dan bromin (Folin dan Ciocalteu, 1944).
Pada kenyataannya reagen ini mengandung rangkaian polimerik

yang memiliki bentukan umum dengan pusat unit tetrahedral fosfat
(PO4)3- yang dikelilingi oleh beberapa unit oktahedral asam-oksi
molibdenum. Struktur tungsten dapat dengan bebas bersubstitusi
dengan molibdenum.
Pengujian kandungan senyawa fenolik total merupakan dasar
dilakukan pengujian aktivitas antioksidan, karena diketahui bahwa
senyawa fenolik berperan dalam mencegah terjadinya peristiwa
oksidasi. Fenolik total ekstrak daun kersen (Muntingia calabura) pada
percobaan ini diukur dengan menggunakan prinsip Folin-Ciocalteau yang didasarkan
pada reaksi oksidasi-reduksi. Reagen Folin-Ciocalteau digunakan karena senyawa
fenolik dapat bereaksi dengan Folin membentuk larutan berwarna yang dapat diukur
absorbansinya. Prinsip pengukuran kandungan fenolik dengan reagen
Folin-Ciocalteau adalah terbentuknya kompleks berwarna biru yang
dapat diukur pada panjang gelombang 765 nm. Pereaksi ini
mengoksidasi fenolik (garam alkali) atau gugus fenolik-hidroksil,
mereduksi asam heteropoli menjadi suatu kompleks molibdenum-
tungsten (Mo-W). Senyawa fenolik bereaksi dengan reagen Folin-
Ciocalteau hanya dalam suasana basa agar terjadi disosiasi proton
pada senyawa fenolik menjadi ion fenolik. Untuk menciptakan
kondisi basa digunakan Na2CO3 20%. Warna biru yang terbentuk
akan semakin pekat setara dengan konsentrasi ion fenolik yang
terbentuk, artinya semakin besar konsentrasi senyawa fenolik maka
semakin banyak ion fenolik yang akan mereduksi asam heteropoli
sehingga warna biru yang dihasilkan semakin pekat (Singleton dan
Rossi, 1965). Namun reagen ini tidak hanya mengukur total fenol,
akan tetapi bereaksi dengan zat pereduksi lain. Kemungkinan ada
komponen lain yang dapat bereaksi dengan reagen seperti gula
atau asam askorbat (Saeed et al., 2012). Asam galat digunakan
sebagai standar pengukuran dikarenakan asam galat merupakan

turunan dari asam hidroksibenzoat yang tergolong asam fenol
sederhana. Kandungan fenol asam organic ini bersifat murni dan
stabil (Lee et al., 2003).
Gambar 4. Senyawa Fenolik dalam Suasana Basa
Gambar 5. Reaksi senyawa fenol dengan pereaksi Folin-Ciocalteu

(Sumber: Singleton dan Rossi, 1965)

Pada percobaan ini, ditentukan pengukuran dilakukan dengan
menggunakan absorbansi yang diperoleh dari instrument UV-Vis.
Pertama dilakukan terlebih dahulu penentuan panjang gelombang
maksimum larutan standar asam galat untuk mengetahui panjang
gelombang maksimum serapan dari larutan sampel, dan diperoleh
= 743nm. Setelahnya dilakukan pengukuran absorbansi

max
larutan standar asam galat dengan variasi konsentrasi 0 ppm, 20

ppm, 40 ppm, 60 ppm, 80 ppm, dan 100 ppm untuk memperoleh
kurva kalibrasi standar asam galat. Kurva kalibrasi digunakan untuk
mencapai presisi pengukuran, menentukan kebenaran konvensional
nilai yang ditunjukkan instrumen dan sampel yang diukur. Kurva
kalibrasi diperoleh dengan membuat larutan standar asam galat,
tujuan pembuatan larutan standar adalah untuk mengukur tingkat
ketelitian data. Pengenceran dilakukan dari larutan induk asam
galat dengan teliiti agar kesalahan dalam pengenceran relatif kecil.
Pada panjang gelombang tersebut juga dilakukan pengukuran
terhadap sampel fraksi metanol. Hasil absorbansi sampel fraksi
metanol kemudian diplotkan pada persamaan regresi kurva kalibrasi
standar asam galat, dan didapat konsentrasi fenolik dalam ekstrak
metanol. Kandungan fenolik total dalam tumbuhan dinyatakan
dalam GAE (Gallic Acid Equivalent) yaitu jumlah kesetaraan
milligram asam galat dalam 1 gram sampel (Lee et al., 2003). Hasil
absorbansi yang ditunjukkan oleh fraksi metanol yaitu sebesar
0,788. Hasil dari penentuan kandungan total fenolik diketahui
bahwa fraksi metanol daun kersen (Muntingia calabura) sebesar 810,864
mg GAE/g ekstrak.
4.2.5. Uji Total Flavonoid
Metode kuantifikasi flavonoid klasik yang paling banyak

digunakan adalah kolorimetri atau spektrofotometri, dengan
menggunakan pereaksi AlCl3 (Bruneton, 1999). Aluminium klorida
digunakan sebagai pereaksi pengompleks dengan gugus orto-
hidroksi dan menimbulkan pergeseran khas menuju pita dengan
panjang gelombang tinggi (batokromik) yang berguna pada analisis
beberapa golongan flavonoid (Robinson, 1995), pereaksi AlCl 3 dan
flavonoid akan membentuk kompleks tahan asam antara gugus
hidroksi dan keton yang bertetangga. Sedangkan dengan gugus
hidroksi pada kedudukan orto, kompleks yang terbentuk tidak tahan
asam (Mursyidi, 1990). Tipe kompleks yang dihasilkan antara AlCl 3
dengan beberapa flavon dan flavonol dengan ada atau tidaknya
asam digambarkan sebagai berikut
Gambar Reaksi Flavonoid dengan AlCl3

(Sumber: http://www.tankonyvtar.hu)
Pada penetapan kadar flavonoid terjadi reaksi antara

flavonoid dengan AlCl3 kompleks berwarna kuning dan dengan
penambahan NaOH akan membentuk senyawa kompleks berwarna
merah muda yang kemudian diukur absorbansinya pada panjang
gelombang 510 nm (Rohman et al., 2009). Penentuan jumlah
flavonoid dari ekstak metanol daun kersen dilakukan dengan
kolorimetri komplementer yang mempunyai prinsip pengukuran
berdasarkan pembentukan warna. Prinsip penetapan flavonoid

dengan metode kolorimetri AlCl3 adalah pembentukan kompleks
antara AlCl3 dengan gugus keto pada atom C-4 dan juga dengan
gugus hidroksi pada atom C-3 atau C-4 yang bertetangga dari
flavon dan flavonol. Sehingga metode ini dapat digunakan untuk
menentukan jumlah flavonoid golongan flavon dan flavonol. Pada
pembuatan kurva kalibrasi dengan metode AlCl 3 digunakan
kuersetin sebagai pembanding karena kuersetin merupakan
flavonoid golongan flavonol yang mempunyai gugus keto pada C-4
dan memiliki gugus hidroksi pada atom C-3 atau C-5 yang
bertetangga dari flavon dan flavonol. Selain itu alasan penggunaan
kuersetin sebagai standar, karena Kuersetin merupakan salah satu jenis
flavonoid yang umum digunakan sebagai standar dalam penentuan kadar flavonoid,
yang secara biologis amat kuat, memiliki aktivitas antioksidan yang sangat tinggi
(Sugrani, 2009) dan glikosidanya berada dalam jumlah sekitar 60-70% dari flavonoid
(Kelly, 2011).
Gambar Quercetin-3-O- -glucoside (Kelly, 2011)
Dalam menganalisis kadar flavonoid, pada percobaan ini deret standar senyawa
kuersetin dibuat dengan variasi 0 ppm, 2 ppm, 4 ppm, 8 ppm, 16 ppm, dan 32 ppm.
Data absorbansi larutan standar kuersetin ditunjukkan pada Tabel.
Tolong dibenerin nomor tabelnya ya.
Kurva kalibrasi digunakan untuk mencapai presisi

pengukuran, menentukan kebenaran konvensional nilai yang
ditunjukkan instrumen dan sampel yang diukur. Kurva kalibrasi
diperoleh dengan membuat larutan standar kuersetin, tujuan
pembuatan larutan standar adalah untuk mengukur tingkat
ketelitian data. Kurva kalibrasi dikatakan presisi bila menunjukkan
nilai koefisien korelasi atau R 2= 0,99. Pengenceran dilakukan dari
larutan induk kuersetin dengan teliiti agar kesalahan dalam
pengenceran relatif kecil.
Hasil pengukuran kadar flavonoid total pada fraksi metanol
daun kersen (Muntingia calabura) ditaunjukkan pada Tabel. Kandungan total
flavonoid dapat ditentukan secara spektrofotometri dengan reagen AlCl3 dan
dinyatakan dalam KE (kuersetin equivalent) yaitu jumlah kesetaraan miligram
kuersetin dalam 1 gram sampel. Tabel. Menunjukkan kadar total flavonoid yang
terdapat dalam fraksi metanol daun kersen (Muntingia calabura). Kadar
flavonoid pada fraksi metanol sebesar 3,5242 mg KE/g ekstrak. Kadar ini
dikatakan cukup tinggi dan menunjukkan bahwa senyawa flavonoid
lebih banyak terekstrak pada pelarut semipolar ke polar. Dari hasil
yang didapat menunjukkan fraksi metannol mempunyai kadar
fenolik dan flavonoid yang cukup tinggi.
4.2.6. Uji Antioksidan

Uji aktivitas antioksidan dari fraksi metanol digunakan metode
kualitatif dan kuantitatif. Kedua metode ini menggunakan DPPH
sebagai pereaksi untuk uji antioksidan. Metode yang digunakan
yaitu metode radical scavenger atau penangkal radikal bebas
(DPPH). Metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil) dilakukan
berdasarkan kemampuan antioksidan untuk menghambat radikal
bebas dengan mendonorkan atom hidrogen kepada DPPH, yang
merupakan radikal bebas yang stabil pada suhu kamar (Prakash et

al., 2001).
Reaksi DPPH dengan antioksidan akan menetralkan radikal
bebas dari DPPH dan membentuk DPPH tereduksi. Adapun
reaksinya adalah sebagai berikut.
Gambar. Reaksi antara DPPH dengan antioksidan

(Sumber: Liang, Ningjian et al., 2014)
Uji aktivitas antioksidan fraksi metanol daun kersen (Muntingia
calabura) dilakukan dengan metode penangkapan radikal bebas DPPH. Metode ini
dipilih karena memerlukan sedikit sampel, sederhana, mudah, cepat, dan peka untuk
mengevaluasi aktivitas antioksidan dari senyawa bahan alam (Hanani, Munin, &
Sekarini, 2005). Pada metode ini, DPPH bertindak sebagai model radikal bebas yang
akan berikatan dengan senyawa antioksidan (Simanjuntak et al., 2004).
Pengujian aktivitas antioksidan fraksi metanol daun kersen
(Muntingia calabura) diawali dengan uji pendahuluan dengan metode
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) atau biasa disebut dengan metode
bioautografi. Uji antioksidan secara kualitatif ini dilakukan untuk
mengetahui ada atau tidaknya aktivitas antioksidan dari fraksi
metanol daun kersen (Muntingia calabura). Fraksi metanol A dan B daun
kersen (Muntingia calabura) yang diperoleh dari kromatografi kolom kemudian
ditotolkan pada pelat KLT kemudian dielusi dengan eluen n-heksan:etil asetat (1:9
untuk fraksi A) dan (3:7 untuk fraksi B). Setelah dielusi, pelat tersebut

dikeringanginkan dan disemprot dengan larutan DPPH. Fraksi yang berpotensi
sebagai antioksidan dapat terlihat berupa bercak kuning pada pelat KLT dnegan latar
belakang (pelat KLT) berwarna ungu. Dengan demikian terlihat dengan jelas bercak-
bercak yang memiliki potensi sebagai antioksidan. Berdasarkan hasil uji kualitatif
dapat diketahui bahwa fraksi metanol A dan B memberikan hasil positif berupa
bercak kuning dan dapat diketahui bahwa kedua fraksi tersebut memiliki aktivitas
sebagai antioksidan.
Hasil analisis kuantitatif terhadap sampel uji yang memiliki
aktivitas antioksidan dapat dilihat penurunan intensitas warna DPPH
menjadi pudar. Senyawa DPPH berwarna ungu karena adanya
delokalisasi elektron pada atom nitrogen menjadi kuning setelah
direaksikan dengan senyawa antioksidan. Hal ini dikarenakan ketika
antioksidan mampu mendonorkan hidrogen yang bereaksi dengan
radikal DPPH, reaksi ini akan memberikan peningkatan kompleks
non radikal dan menurunkan radikal DPPH yang ditandai dengan
terbentuknya warna kuning. Penurunan absorbansi diukur
menggunakan spektrofotometer Vis dnegan panjang gelombang
516 nm dengan vitamin C sebagai kontrol positif (Reynetson, 2007).
Vitamin C digunakan sebagai kontrol positif dibuat dengan
konsentrasi 10; 5; 2,5; dan 1,25 ppm. Vitamin C merupakan suatu
antioksidan yang larut dalam air. Memliki rumus molekul C 6H8O6
yang diketahui memiliki aktivitas antioksidan yang besar karena
bersifat sebagai reduktor. Sifat reduktor tersebut disebabkan oleh
mudah terlepasnya atom-atom hidrogen pada gugus hidroksil yang
terkat pada atom C2 dan atom C3 (atom-atom C pada ikatan
rangkap), sehingga radikal bebas dapat dengan mudah
menangkapnya dan membentuk radikal bebas tereduksi yang stabil
(Soewoto, 2001). Vitamin C digunakan karena mewakili antioksidan
sintetik yang dijual di pasaran. Vitamin C digunakan sebagai
pembanding karena berfungsi sebagai antioksidan sekunder yang

menangkap radikal bebas dan mencegah terjadinya reaksi berantai
(Praptiwi, Dewi, & Harapini, 2006, pp. 35). Maslova (2001)
menyatakan bahwa vitamin C termasuk golongan antioksidan
sekunder yang mampu menangkal berbagai radikal bebas
ekstraseluler. Hal itu dikarenakan vitamin C mempunyai gugus
hidroksi bebas yang bertindak sebagai penangkap radikal bebas
dan jika mempunyai gugus polihidroksi akan meningkatkan aktivitas
antioksidan (Isnidar, Wahyuono, & Setyowati, 2011). Vutamin C
dalam percobaan ini digunakan sebagai control positif terhadap
aktivitas antioksidan. Dimana dalam percobaan diukur besar %
inhibisi vitamin C berbagai konsentrasi yang diperoleh dari
absorbansi yang diukur menggunakan instrumen UV-Vis. Hasil
optimasi panjang gelombang menunjukkan daerah serapan
(absorbansi) optimum terdapat pada panjang gelombang
maksimum sebesar 515,8 nm. Setelah dilakukannya pengukuran
absorbansi tiap konsentrasi (1,25; 2,5; 5; dan 10 ppm), dihitung
persentase inhibisi dari masing-masing konsentrasi vitamin C dan
diperoleh persamaan regresi linear y = 8.8168x + 6.7961 dan
koefisien korelasi sebesar 0,7175. Koefisien korelasi yang diperoleh
tidak mendekati 0,99 dan dapat dikatakan bahwa aktivitas
antioksidan dalam vitamin C tidak bisa dijadikan kontrol positif
dalam percobaan karena akan menghasilkan persentase inhibisi dan
nilai IC50 yang tidak akurat. Banyak faktor yang mengakibatkan
kurva aktivitas antioksidan tidak linier, dimana bisa diakibatkan
karena ketidakakuratan dalam melakukan pengenceran karena
keterbatasan alat (pipet mikro), ketidaktelitian dalam perhitungan
sehingga mengakibatkan kesalahan dalam pengenceran, dan lain
sebagainya. Dari persamaan regresi yang diperoleh maka dapat
dihitung nilai IC50 dari vitamin C, yaitu sebesar 4,9 g/mL.

Uji aktivitas antioksidan secara kuantitatif dilakukan dengan
menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Pengujian secara kuantitatif
ini dilakukan untuk mengetahui absorbansi DPPH yang tersisa
setelah ditambahkan ekstrak atau fraksi. Jika suatu senyawa
memiliki aktivitas sebagai antioksidan, maka akan terjadi
penurunan nilai absorbansi DPPH pada panjang gelombang
maksimum, dimana pada panjang gelombang tersebut akan terjadi
serapan maksimum dari senyawa. Penurunan absorbansi DPPH
diukur terhadap absorbansi blangko yaitu absorbansi DPPH dalam
metanol tanpa penambahan bahan uji. Penurunan absorbansi DPPH
ditunjukkan dengan terjadinya degradasi warna DPPH dari warna
ungu menjadi warna kuning. Proses degradasi warna DPPH
berbanding lurus dengan konsentrasi fraksi atau ekstrak yang
ditambahkan. Dari nilai absorbansi DPPH yang diperoleh dapat
ditentukan nilai persentase penghambatan radikal DPPH (%inhibisi).
Dari nilai %inhibisi dapat ditentukan nilai IC 50 (inhibitory
concentration). Nilai IC50 merupakan bilangan yang menunjukkan
konsentrasi ekstrak atau fraksi (ppm) yang mampu menghambat
proses oksidasi sebesar 50%. Semakin kecil nilai IC 50 berarti
semakin tinggi aktivitas antioksidan (Zuhra et al., 2008). Nilai IC50
diperoleh dari persamaan regresi linier.
Hasil optimasi panjang gelombang dengan menggunakan
spektrofotometer UV-Vis menunjukkan bahwa serapan maksimum
DPPH berada pada panjang gelombang 515,8 nm. Panjang
gelombang maksimum dinyatakan sebagai analisis larutan DPPH
yang dapat menghasilkan absorbansi DPPH secara maksimum
(Molyneux, 2004). Selanjutnya kemampuan antiokasidan dari fraksi
metanol daun kersen (Muntingia calabura) diukur pada panjang gelombang
maksimum tersebut.

Setelah memeperoleh panjang gelombang maksimum,
dilakukan pengukuran absorbansi sampel. Parameter yang
digunakan untuk menunjukkan aktivitas antioksidan yaitu inhibitory
concentration (IC50). Penentuan IC50 dari masing-masing fraksi
dengan konsentrasi yang berbeda-beda bertujuan untuk
memperoleh jumlah dosis fraksi yang dapat menurunkan intensitas
serapan atau penangkapan radikal bebas DPPH sebesar 50%
dibandingkan dengan larutan kontrol negatif (blangko), dihitung
secara regresi linier berdasarkan 5 titik konsentrasi (100, 50, 35, 10
ppm). Persamaan regresi yang dihasilkan menunjukkan koefisien
korelasi fraksi metanol A dan B berturut-turut yaitu 0.249 dan
0.9201. Hasil ini menunjukkan bahwa keeratan hubungan antara
konsentrasi kedua fraksi tersebut dengan persentase inhibisi untuk
aktivitas antioksidan sangat kecil, walaupun pada penelitian yang
telah banyak dilakukan hubungan konsentrasi dan persen inhibisi
berbanding lurus. Hasil yang tidak presisi ini dapat diakibatkan
karena ketidaktelitian dalam melakukan pengenceran larutan
sampel sehingga memberikan hasil yang tidak maksimal.
Selanjutnya dari hasil interpolasi antara konsnetrasi dan %
inhibisi, maka kemudian diperoleh nilai IC 50 untuk masing-masing
fraksi. Semakin kecil nilai IC50 berarti semakin tinggi aktivitas
antioksidannya. Nilai IC50 masing-masing fraksi disajikan pada
Tabel. Dari tabel tersebut menunjukkan hasil bahwaa fraksi
metanol A dan B berturut-turut memiliki IC50 sebesar 212,64
g/mL dan 57,83 g/mL. Sedangkan untuk vitamin C yang
merupakan kontrol positif memiliki nilai IC50 sebesar 4,9 g/mL.
Menurut Blois (1985), suatu senyawa memiliki antioksidan

sangat kuat apabila nilai IC 50 kurang dari 50 ppm, kuat apabila nilai
IC50 antara 50-100 ppm, sedang apabila nilai IC50 berkisar antara
100-150 ppm, dan lemah bila IC50 berkisar antara 150-200 ppm.
Mengacu pada batasan ini, maka dapat dinyatakan bahwa fraksi
metanol daun kersen (Muntingia calabura) memiliki aktivitas antioksidan yang
kuat untuk fraksi metanol B dan sangat lemah untuk fraksi metanol A.
4.2.8. Uji Toksisitas

Larutan ekstrak metanol daun kersen (Muntingia calabura) dibuat menjadi 3
konsentrasi, yaitu konsentrasi 10 ppm, 100 ppm, dan 1000 ppm. Selain itu, disiapkan
juga kontrol negatif yang hanya berisi larutan NaCl komersiil tanpa penambahan
ekstrak. Tabung kontrol negative digunakan untuk menguji pengaruh lain diluar
eksrak uji seperti kondisi larutan garam yang dapat menyebabkan kematianlarva.
Uji toksisitas ini diteliti sebanyak 2 kali pengulangan atau replikasi (duplo)
untuk mendapatkan keakuratan dan presisi data. Apabila dilakukan hanya satu kali,
mungkin dapat terjadi kesalahan dan tidak ada data lain yang dapat digunakan. Dalam
setiap konsentrasi masing-masing ekstrak, digunakan 10-20 larva udang Artemia
salina Leach yang berumur 48 jam sebagai hewan uji.
Jumlah kematian larva Artemia salina Leach pada setiap botol vial dalam
berbagai konsentrasi ekstrak daun kersen (Muntingia calabura) ditunjukkan pada
Tabel. Dari pengamatan dapat dilihat bahwa larva udang yang berada pada kontrol, tabung
uji 1000 ppm; 100 ppm; dan 10 ppm mulai menunjukkan kematian larva udang. Pada kontrol,
didapatkan hasil larva udang yang masih hidup secara duplo sebesar 4 larva udang dan 8
larva udang. Pada tabung uji 1000 ppm didapatkan hasil larva udang yang masih hidup secara
duplo sebesar 8 larva udang dan 7 larva udang. Dan pada tabung uji 100 ppm didapatkan
hasil larva udang yang masih hidup secara duplo sebesar 13 larva udang dan 9 larva udang.
Sedangkan pada tabung uji 10 ppm didapatkan hasil larva udang yang masih hidup secara
duplo sebesar 10 larva udang dan 8 larva udang. Berdasarkan Tabel dapat diketahui
bahwa adanya pengaruh yang berbeda, berkaitan dengan berbagai konsentrasi ekstrak
terhadap kematian larva Artemia salina Leach. Ekstrak merupakan bahan yang
mengandung campuran komponen kimia dari suatu tumbuhan yang terlarut dalam

pelarut yang digunakan. Jenis ekstrak menunjukkan banyaknya jenis senyawa kimia
yang terlarut di dalamnya dan berkaitan dengan bahan aktif biologic yang terlarut
(Suherman, S. et al., 2006).
Pada perlakuan yang dilakukan, keadaan lingkungan dari setiap botol kontrol
dan botol uji dibuat sama seperti pada waktu penetasan telur larva dengan cara tetap
memberikan aerasi pada setiap tabung agar apabila terjadi kematian larva udang hal
tersebut bukan disebabkan oleh daya tahan larva yang sudah menurun terhadap
faktor-faktor luar akan tetapi kematian larva udang disebabkan oleh sifat toksik dari
ekstrak yang digunakan.
Berdasarkan grafik yang disajikan pada Gambar, didapatkan jumlah
kematian larva terbanyak yaitu pada konsnetrasi 1000 ppm. Hasil yang diperoleh
sesuai dengan teori yaitu semakin tinggi konsentrasi ekstrak menyebabkan semakin
tinggi pula jumlah kematian larva yang menunjukkan semakin tinggi sifat toksiknya
(Aprilia, et al., 2012) serta juga sesuai dengan Lu (1995) yang menyebutkan bahwa
setiap zat kimia bila diberikan dengan dosis yang cukup besar akan menimbulkan
gejala-gejala.
Artemia salina Leach digunakan dalam metode BSLT karena memiliki
kesamaan tanggapan atau respon dengan mamalia, misalnya DNA dependent RNA
polymerase (Panjaitan, 2011). Pada percobaan ini menggunakan fase larva karena
pada saat itu Artemia salina Leach membelah secara mitosis yang identik dengan sel
kanker yang juga membelah secara mitosis. Hal ini menyebabkan uji BSLT sering
digunakan sebagai uji pendahuluan aktivitas antikanker yang bersifat sitotoksik.
Aktivitas sitotoksis adalah aktivitas yang dapat menyebabkan kematian sel
(Kurniawan, 2009).
Berdasarkan morfologinya. Larva rtemia salina Leach yang berumur 48 jam
sudah mulai mempunyai mulut dan saluran pencernaan serta cadangan makanannya
sudah mulai habis sehingga larva mulai mencari makanan. Larva berumur 48 jam
yang belum mempunyai saluran pencernan sehingga ekstrak atau senyawa luar tidak
dapat diabsorbsi oleh larva (Panjaitan, 2011). Oleh karena itu, pada percobaan ini
digunakan hewan coba larva Artemia salina Leach berumur 48 jam.

Untuk memastikan apakah larva tersebut benar-benar mati sat ditambahkan
senyawa atau ekstrak, maka dilakukan uji dengan cara menambahkan volume larutan
garam ke dalam masing-masing botol sehingga konsentrasi ekstrak dalam botol
berkurang dan selanjutnya diamati selama 24 jam untuk memastikan apakah jumlah
larva yang hidup dan mati sama dengan hasil perhitungan sebelumnya yaitu saat 24
jam setelah pemberian ekstrak.
Sebensarnya terdapat uji yang lazim digunakan untuk mengetahui kematian
sel atau larva yaitu dengan pewarnaan menggunakan trypan blue 4% kemudian
diamati di bawah mikroskop. Larva yang mati akan berwarna biru karena membrane
pada larva yang telah rusak sehingga memudahkan trypan blue terserap oleh larva
yang mati. Namun, pada percobaan tidak digunakan uji ini dikarenakan ketersediaan
alat dan bahan yang tidka memadai.
Dengan mengetahui kematian larva, kemudian dicari angka probit melalui
Tabel dan dibuat persamaan garis:
Y = BX + A
Dimana, Y= Log Konsentrasi dan X = Angka Probit.
Dari persamaan tersebut kemudian dihitung LC50 dengan memasukkan nilai
probit (50% kematian).
Berdasarkan hasil yang diperoleh pada tabel menunjukkan bahwa banyaknya
jumlah angka kematian larva udang pada konsentrasi 10; 100 dan 1000 ppm. Pada
konsentrasi 1000 ppm persentasi kematiannya sebesar 37,5%. Dan 100 ppm
persentasi kematiannya sebesar 18,5%. Dan 10 ppm persentasi kematiannya sebesar
14,3%. Grafik hubungan antara persentasi kematian larva dan nilai LC 50 dapat dilihat
pada Gambar.
Pada Gambar terlihat persamaan regresi linear dari grafik di atas digunakan
untuk mencari nilai LC50 dengan memasukkan angka 50% sebagai x, sehingga
diperoleh nilai y = 0.351x + 3.5247, dengan nilai kefisien regresi sebesar 0.8342.
nilai regresi yang tidak mendekati 0,99 ini dapat dinyatakan bahwa
belum cukup kuat data yang menyatakan adanya korelasi positif
antara mortilitas larva dengan ekstrak. Hal ini bisa disebabkan

karena faktor ketidaktelitian saat membuat larutan sampel, dimana
ketidakakuratan dalam melakukan pengenceran.
Uji toksisitas dengan metode BSLT dapat mengetahui efek
toksik dari suatu senyawa yang ditentukan dalam waktu singkat,
yaitu rentang waktu selama 24 jam setelah pemberian ekstrak
sehingga disebut uji toksisitas akut. Efek toksik diketahui dengan
menentukan nilai LC50 dari aktivitas komponen bioaktif tanaman
terhadap larva Artemia salina Leach.
Dalam percobaan ini dilakukan variasi konsentrasi yang
berbeda yaitu 10, 100, dan 1000 ppm untuk membandingkan efek
toksik yang ditimbulkan masing-masing konsentrasi tersebut dan
untuk melihat pada konsentrasi berapakah larva udang mengalami
LC50. Digunakan larutan garam (pengganti air laut) sebagai kontrol
dimaksudkan untuk melihat apakah respon kematian dari sampel,
dan bukan dari larutan gram.larutan garam yang digunakan telah
dilakukan pengukuran pH dan hasilnya sesuai untuk media
pertumbuhan larva yaitu sekitar 8,5. Larva udang digunakan dalam
metode ini karena hewan ini merupakan general bioassay sehingga
semua zat dapat menembus masuk ke dinding sel larva tersebut
dan hewan ini memiliki kkepekaan yang cukup tinggi terhadap zat
toksik (Mutia, 2010)
Nilai yang ditunjukkan pada Gambar menunjukkan nilai y = log konsentrasi
dari ekstrak etanol. Konsentrasi ekstrak metanol adalah antilog dari = 4,2031 yaitu
6,26 10
5
g/mL. Hal ini berarti kemampuan sampel untuk membunuh 50%
5
dari A. salina Leach pada saat konsentrasi ekstrak mencapai 6,26 10 ppm.
Menurut Meyer dalam Astuti (2001) melaporkan bahwa suatu ekstrak

menunjukkan aktivitas ketoksikan dalam uji toksisitas jika ekstrak dapat
menyebabkan kematian 50% hewan uji pada konsentrasi < 1000 ppm. Berdasar dari

pernyataan tersebut maka ekstrak metanol dari tumbuhan kersen bersifat toksik. Hal
5
ini ditunjukkan dari nilai LC50 yang diperoleh yaitu pada konsentrasi 6,26 10
ppm. Hal ini juga didukung dengan data Aras (2013) yang menyatakan bahwa nilai
LC50 yang < 0 ppm dikatakan sangat toksik.
Tabel. Tingkat Nilai Toksisitas LC50
DAFTAR PUSTAKA
Achmad, S.A. 1986. Kimia Organik Bahan Alam. Jakarta : Karnunika.

Aras, TR. 2013. Uji Toksisitas Ekstrak Teripang Holothuria scabra
terhadap Artemia salina [Minithesis]. Makassar: Universitas
Hassanudin.
Astawan, Made dan Andreas Leomitro Kasih. 2009. Khasiat Whole
Grain Makanan Berserat untuk Hidup Sehat. Jakarta:
Gramedia Pustaka Utama.
Astuti, M. D. 2001. Penapisan Metabolit Sekunder Pada Limbah

Ekstrak Air Tubuh Ganoderma lucidum Dengan Uji Toksisitas
Larva Udang (Artemia salina Leach) [skripsi]. FMIPA. IPB,
Bogor.
Adam, John M.F. 2000. Klasifikasi Diagnosis Diabetus Mellitus Yang
Baru. Jakarta : Cermin Dunia Kedokteran.
Aprilia HA, Pringgenie D., Yudiati E. Uji Toksisitas Ekstak Kloroform
Cangkang dan Duri Landak Laut (Diademia setosum)
terhadap Mortalitas naupilus Artemis sp. Journal of Marine
Research. Volume 1, No. 1; 2012: 75-83.

Blois, M.S. 1958. Antioxidant Determinations BY the Use of a Stable
Free Radical. Journal Nature 181 (4617) : 1199-1200
Bruneton, J. 1999. Pharmacognosy Phytochemistry Medicinal Plants
2nd Edition. Paris: Intercept Ltd., Londres, NY, Paaris. 309-321.
Chairul. 2003. Identifikasi Secara Cepat Bahan Bioaktif Pada
Tumbuhan di Lapangan. Berita Biologi 6 (4) ; 620-630
Cordell, G. A., 1918. Introduction To Alkaloids. Awiley-Interscience
Publication. N. Y.
Das,K., Tiwari, R.K.S., Shrivastava D.K. 2010. Techniques For
Evoluation Of Medicinal Plant Product as Antimicrobial Agent :
Current Methods and Future Trends. Journal of medicinal Plant
Research, 4 (2), 104-111
Day, R. A., A. L. Underwood., 2002. Analisis Kimia Kuantitatif. Edisi
VI. AB: hal.396. Jakarta: Erlangga
Desissy dkk. 2010. Uji Toksisitas Oli Bekas Terhadap Tanaman
Kacang Hijau. Prodi Biologi Yogyakarta: Universitas Ahmad
Dahlan.
Direktorat Pengawasan Obat Tradisional. 2000. Parameter standar
umum ekstrak tumbuhan cetakan pertama. Jakarta :
Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Folin, Octo, Ciocalteu, Vintila, 1944, On Tyrosine and Tryptophane
Determinations in Proteins, Jour.Bio.Chem., 73 : 627-650,
1927, in. Todd-Sanford, 10, 412.
Ghisalberti, E. L. 2008. Detection and Isolation of Bioactive Natural
Product in Determination. Taylor & Francis Group Inc, U.S.A.
Giani, A. 2007. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kasar Daun Cocor
Bebek ( Kalanchoe gastonis-bonnieri). Skripsi. Bogor: IPB
Gritter, R. J.,J.M, Bobbit, and A. E. Schwarting. 1991. Pengantar
Kromatografi ed.2. Terjemah oleh Kosasih Padmawinata.

Bandung : ITB
Guevera, B. Q., Reico, B.V. 1985. Phytochemical, Microbiological and
pharmacological screening of Medicinal Plants. Manila : UST
Printing Office
Gunawan, H. Nurr, arwati H., widyawaruyanti A., safrudin, Dachln
YP, Zain. NC. 2006. Hambatan Perkembangan Stadium
Palsmodium Faciparum Akibat Pemberian Isolat Sikloheterfilin
dari Kulit batang Arcocarpus Champeden Spreng. Majalah
Kedokteran Tropis Indonesia. 17:30.
Hanani, E., Munin, A & Sekarini, R. 2005. Identifikasi Senyawa
Antioksidan dalam Spons Callyspongia sp. dari Kepulauan
Seribu. Majalah Ilmu Kefarmasian. ISSN: 1693-9883. Vol. II.
No. 3: 127.
Handa, SS., Khnuja, S.P.S., Longo G., Rakes D.D. 2008. Extraction
Technologies For Medicinal And Aromatic Plants. Trieste :
International Centre for Sciences and Technology, 2-25
Harborne.J.B. 1987. Metode Fitokimia, Penuntun Modern
Menganalisa Tumbuhan, terbitan ke-2, Terjemahan Kosasih
Padmawinata dan iwang Soediro. Bandung: ITB
Harvey, David. 2000. Modern Analitycal Chemistry. USA: The
McGraw-Hill Compnies.
Herman F.1993. Penggunaan Obat Hipoglemik Oral Pada Penderita
diabetes Mellitus. Pharos Bulletin No.1
Hostettmann, K. Hostettman M, dan Marston, A. 1995. Cara
Kromatografi Preparatif. diteremahkan oleh Kosasih
Padmawinata. Bandung : ITB.
Isnindar, Wahyuono, S., dan Setyowati, E.P. 2011. Isolasi dan
Identifikasi Senyawa Antioksidan Daun Kesemek (Diospyros
kaki Thumb.) dengan Metode DPPH (2,2-Difenil-1-

Pikrilhidrazil). Majalah Obat Tradisional. 16(3): 157-164.
J. B. Harbone. 1987. Metode Fitokimia : Penuntun Cara Modern
Menganalisis Tumbuhan. Bandung: ITB
Johnson, E. L. dan Stevenson R., 1991. Dasar Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi. Bandung : Penerbit ITB
Jones,D.B. and Gill, G.V. 1998. Insulin-defendent Diabetes Mellitus:
An Overview. Inj. Pickup and G. Williams (EDS): Textbook of
Diabetes.Vol. Second Edition. Blackwell Science. United
Kingdom.
Kadarisman, I. 2004 Isolaisi dan Identifikasi Senyawa Bioaktif dari
Rimpang Bingle (Zinsiber cassamunas Roxb), [ skripsi]. Bogor
(ID) IPB.
Katzung, B. 2002. Farmakologi Dasar dan Klinik edisi 3. Jakarta :
EGC diterjemahkan oleh Agus A, Chaidir, J. Munaf. S, Tamil. S
kemaluddin. M.T, Nattadiputra.,S., dkk
Kee, J.L. and Hayes E.R. 1996. Farmakologi, Pendekatan Proses
Keperawatan. Alih bahasa: Dr. Peter Anugrah. Jakarta:
Gramedia Pustaka.
Kelly, S. G., 2011. Quersetin. Alternative Medicine Review. Journal
Volume 16, number 2.
Khopkar, S.M. 2002. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta : UI Press
Kochar, S.P. dan Rossel, J.B. 1990. Detection, Estimation And
Evaluation Of Antioxidant In Food System. Dalam Food
Antioxidant, B.J.F. Hudson(Ed). Elservier Science Publishers
Ltd. 19-64
Kumalaningsih S. 2006. Antioksidan Alami. Surabaya : Trubus
Agrisna
Kurniawan, H. 2009. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Metanol Daun
Kesum (Polygonum minus Huds) terhadap Larva Artemia

salina Leach dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test
(BSLT). [Tesis]. Pontianak: Program Studi Farmasi Fakultas
Kedokteran dan Ilmu Kesehatan: Universita Tanjungpura.
Lee. K. W., Kim YJ., Lee HJ., Lee CY. 2003. Cocoa Has More Phenolic
Phytochemical and A Higher Antioxidant Capacity Than Teas
and Red Wine. J. Agric. Foof Chem. 51 (25): 7292-7295.
Liang, Ningjian dan David D. Kitts. 2014. Antioxidant Property of
Coffee Components: Assessment of Methods that Define
Mechanisms of Action. Molecules 2014, 19, 19180-19208.
Food, Nutrition and Health, Faculty of Land and Food Systems,
the University of British Columbia.
Lu, F.C. 1995. Toksikologi Dasar. Asas, Organ Sasaran, dan Penilaian
Resiko. Edisi ke-2. Terjemahan Edi Nugroho. UI, Jakarta.
Mahmood, N.D., Nasir, N.L.M., Rofiee, M.S., Tohid, S.F.M., Ching,
S.M., Teh, L.K., dkk., 2014. Muntingia calabura: a review of its
traditional uses, chemical properties, and pharmacological
observations. Pharmaceutical Biology, 52: 15981623.
Markham, K.R, 1988. Cara mengidentifikasi Flavonoid,
diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, 15. Bandung:
Penerbit ITB
Meenakshi,S., Umayaparvath, S., Arumugam, M. And
Balasubramanian, T. 2012. In vitro Antioxidant Properties and
FTIR Analysis of Two Seeweeds of Gulf of Mannar. Asian Pac. J.
Trop. Biomed., 2: 66-70.
Meyer, Laughlin, Fernigini. 1982. Brine Shrimp: Convenient General
Bioassy for Active Constituen Planta Medica 45. 31-34
Mintowati, E., Kuntorini, Setya dan Maria. 2013. Struktur Anatomi
dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Daun Kersen
(Muntingia calabura). Program Studi Biologi FMIPA.

Universitas Lambung Mangkurat. Lampung: Universitas
Lampung FMIPA
M. Antolovich, P.D. Prenzler, E. Patsalides, S. McDonald, K.Robards.

2002. Methods for testing antioxidant activity. DOI
10.1039/B009171P.
Mulja, M & Suharman. 1995. Analisis Instrumental. Airlangga

University Press : Surabaya.
Mursyidi, A., 1990. Analisis Metabolit Sekunder. Yogyakarta: UGM
Press
Mutia, D. Uji Toksisitas kut Ekstrak Etanol Buah Anggur (Vitis
vinifera) terhadap Larva Artemia salina Leach dengan Metode
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Semarang: Universitas
Diponegoro.
Molyneux, Pihilip. 2004. The use of the stable free radical
diphnylpicrylhydraziyl (DPPH) for estimating antioxidant
Activity. J.Science and Technology 26 (2) : 211-219
Nikhal, S.B., Dambe, P.A., Ghongade, D.B., Goupale, D.C. 2010.
Hidroalcoholic Extraction of mangifera indica (leaves) by
Soxhletion. International journal of pharmaceutical science, 2
(1), 30-32
Nurhayati, A., Nurlita, A., Rachmat, F. 2006. Uji Toksisitas Ekstrak
Euchema Alvarezii terhadap Artemia Salina sebagai Studi
Pendahuluan Potensi Anti Kanker. Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan alam Institut Teknologi Sepuluh November,
Surabaya. Akta Kimindo Vol. 2 (1) : 41-46.
Panjaitan, RB. 2011. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Kulit Batang Pulasari
(Alyxiae cortex) dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test.
[Skripsi]. Yogyakarta: Universitas Sanata Dharma.

Parwati, T. Dan P. Simanjuntak. 1998. Daya toksik bebrapa
tumbuhan obat tradisional indonesia asal NTB. Journal Biologi
Indonesia 11(3) : 118-125
Prakash, A., F, Rigelhof, & E. Miller. 2001. Antioxidan Activity.
Medallion Laboratories Analytical Progress 10 (2)
Praptiwi, Dewi P., dan Harapini, M. 2006. Nilai Peroksida dan
Aktivitas Antioksidan Radikal Bebas Diphenyl Picril Hydrazil
Hydrate (DPPH) Ekstrak Metanol Knema laurina. Majalah
Farmasi Indonesia. 17(1): 32-36.
Pratt, D,E., dan Hudson, B.J.F., 1992. NaturalAntioxidant not
Exploited Comercially Lit. B.J.F. Hidson, Food Antioxidants,
Elsevier Applied Science, 171-192
Prior RL. 2003. Fruits and Vegetables in the Prevention of Celluler
Oxidate Damage. AM. J. Clin Nuts, 78 (3)
Pokorny J, N. Yanishlieva, M. Gordon. 2001. Antioxidants in Food.
Boca Raton Boston. New York Washington DC : CRC Press.
Purwonegoro, I 1997. Uji Sitotoksitas dari Ekstrak Heksan , Etil
Asetat dan Etanol 70% dari Akar dan Daun Kersen (Muntingia
Calabura L.) terhadap Artemia Salina dan Skrining
Kandungan Kimianya. Surabaya: Fakultas Farmasi UBAYA
Remington, J.P. Remington: The science and practice of pharmacy
21 th ED, 773-774.
Reuinuer. 2002. Laboratory Diagnosis and Monitoring of Diabetes
mellitus. WHO. Edisi ke-16. Review Journal Experimental
Psycnology: Applied 6 (3) 236
Reynertson, A. L. 2007. Phytohemical analisis of Bioactivity
Constituents from Edible Myrtaceae Fruits Dissertatin.New
York: University New York
Rohman, Abdul dan Sugeng Riyanto. 2007. Daya Antioksidan

Ekstrak Etanol Daun Kemuning (Murayya paniculata (L) Jack)
secara in Vitro. Majalah Farmasi Indonesia 16 (3) : 136-140
Rorong, J.A, & E. Suryanto. 2010. Analisa Fitokimia Eceng Gondok
(Elchlaurnia crassipes) dan Efeknya sebagai Agen
Photoreduksi Fe 3+, Chem. Prog No. 1
Ristiana, Ketut. 2000. Parameter standar umum ekstrak tumbuhan
obat, Hal 10-11. Jakarta : Dirjen BPPOM.
Robinson.T. 1991. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Bandung:
ITB
Saeed, Naima., Muhammad R Khan and Maria Shabbir. 2012.
Antioxidant Activity, Total Phenolic and Total Flavonoid
Contents Of Whole Plant Extracts Torilis leptophylla L. BMC
Complementary and Alternative Medicine Vol. 12 (221); 1-12.
Sastrohamidjojo, H. 1991. Spektroskopi Edisi ke-2. Yogyakarta :
Liberty
________________. 1996. Sintesis Bahan Alam. Yogyakarta; UGM
Press
________________. 2002. Kromatografi. 28, 35-36. Yogyakarta :
Liberty
Skoog, D.A. DM. West, F.J. Honer 1996. Fundamental of Analytical
Chemistry. Ed 7. Saunderss College Publishing. New York.
Simanjuntak, P., Parwati, T., Lenny, L. E., Tamat, S. R., Murwani, R.
2004. Isolasi dan Identifikasi Antioksidan dari Ekstrak Benalu
Teh (Scurrula oortiana (Korth) Danser). Jurnal Ilmu
Kefarmasian Indonesia. ISSN: 1693-1831. 5(1): 19-24.
Singleton, V.L. and Rossi, J.A., 1965, Colorimetry of Total Phenolic
with Phosphomolybdic-Phosphotungstic Acid Reagent, Am. J.
Enol. Vitic, 16, 147.
Soewoto, H. 2001. Antioksidan Eksogen Sebagai Lini Pertahanan

Kedua Dalam Menanggulangi Peran Radikal Bebas. Jakarta:
Bagian Biokimia Fakultas Kedokteran UI.
Sudjadi. 1986. Metode pemisahan. Yogyakarta: Kanisius.
Sugrani, Andis., 2009. Kimia Organik Bahan Alam. Flavonoid
(Quercetin). Program S2. Fakultas MIPA. Universitas
Hasanuddin. Makasar.
Suherman, S., Syukur C. Uji Toksisitas Ekstrak Lempuyang Gjah
(Zingiber zerumbet) terhadap Larva Udang (Artemia salina
Leach.) Bul Littro. Vol. XVII No. 1; 2006; 30-38.
Sukandar, E.Y. 2008. Iso Farmaketorapi. Jakarta : PT.ISFI
Sutisna, I. 2000. Isolasi dan Karakterisasi Senyawa Terpenoid dari
kulit Kayu Danglo ( Malarang javanica mueel). Arg. Skripsi
Jurusan Kimia FMIPA. Bogor: IPB
Stahl, E. 1985. Analisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi
Edisi terjemahan (diterjemahkan oleh Kokasih Padmawinata,
Iwang Soendari Noerono). Bandung: ITB Pres
Tahir, I., Wijaya, K, & Widyaningsih, D. 2003. Terapan Analisis
Hansch Untuk Aktivitas Antioksidan Senyawa Turunan
Flavon/Flavonol. Seminar On Chemometrics. Yogyakarta :
Departemen Kimia Univeritas Gadjah Mada.
Tjokroprawiro A. 1998. Diabetes mellitus Aspek Klinik dan
Epideomologi. Surabaya : Airlangga Universitas Press.
Tjitrosoepomo, G. 1998. Taksonomi Umum: Dasar- Dasar Taksonomi
Tumbuhan. . Yogyakarta: Gadjah Mada University Press
Voight, U, Bircher, J, dkk. 1933. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi
edisi 5. . Yogyakarta: Gadjah Mada University Press
Willard, H. H., Lynne. L., Jhon. A., Frank. A. 1988. Instrumental
Methode of analysis. Edisi VII. Wadsworth publishing
company. California. Hlm. 119-121

Yazid, Estien. 2005. Kimia Fisika Paramedis. Yogyakarta: Andi
Zou, Y., Y., Wei, D. 2004. Antioxidan Activity Of Flavonoid Rich
Extract Of Hypericum Perforatum L In Vitro. J Agric Food
Chem. (52);5032-9
Zuhra, C.F., Tarigan, J. & Sitohang, H. 2008. Aktivitas Antioksidan
Senyawa Flavonoid Dari Daun Katuk (Sauropus androgynus
(L) Merr.). Jurnal Biologi Sumatera. ISSN: 1907-5537; 3(1): 7-
10.

LAMPIRAN
Tolong bikin kaya di skripsi leliana ya makasih banyak niah. Trus
tolong lengkapin gambar sama tabelmya. Sma lampiran foto
ya yang ada di grup masukin. Maaf Cuma bisa bantu sampe
sini.
Eh tapi nanti kalo udah disatuin semua kasih ke gua juga ya.

MAKALAH

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

MAKALAH

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

ABSTRAK

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 2

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 3

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA...................................................................................

BAB III METODOLOGI PERCOBAAN...................................................................

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 5

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 6

Gambar 1. Tanaman Kersen............................................................11

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 7

Tabel 1. Beberapa Pelarut Organik dan Sifatnya.........................................................35

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 8

1.1 Latar Belakang

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 1

1.2. Rumusan Masalah

1.3. Tujuan Percobaan

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 2

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 3

Gambar 1. Tanaman Kersen

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 4

2.1.1 Taksonomi Muntingia Calabura L

2.1.2 Habitat Muntingia Calabura L

2.1.3 Karakteristik Morfologi

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 5

2.1.4 Manfaat Muntingia Calabura L

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 6

2.2 Komponen Bioaktif Tanaman

Hampir semua alkaloida yang ditemukan dialam mempunyai keaktifan

2.2.1.1 Klasifikasi Alkaloid

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 7

Gambar 2. Struktur Senyawa Alkaloid

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 8

Pada alkaloida aromatik terdapat suatu pola oksigenasi tertentu. Pada

2.2.1.2 Sifat-Sifat Alkaloid

Alkaloida bersifat basa yang tergantung pada pasangan elektron pada

2.2.2 Senyawa Flavonoid

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 9

2.2.2.1 Struktur Dasar Senyawa Flavonoid

Gambar 3. Kerangka Dasar Flavonoid

(Sumber: Sastrohamidjojo, 1996)

2.2.2.2 Klasifikasi Senyawa Flavonoid

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 10

Gambar 4. Struktur Kimia Flavonol

Gambar 5. Struktur Kimia Flavon

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 11

Gambar 6. Struktur Kimia Isoflavon

(Sumber: Robinson, 1991)

Gambar 7. Struktur Kimia Flavonon

(Sumber; Robinson, 1991)

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 12

Gambar 8. Struktur Kimia Flavanonol

2.2.2.3 Kelarutan Senyawa Flavonoid

2.3 Penapisan Fitokimia

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 13

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 14

Gambar 9. Struktur Kimia Saponin

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 15

Gambar 10. Struktur Kimia Tanin

Antrakuinon mungkin dijumpai baik dalam bentuk glikosida dengan ikatan O-

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 16

2.4 Analisa Total Komponen Bioaktif

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 17

Laporan Praktikum Kimia Bahan Alam 18