PENGARUH JENIS DAN KONSENTASI PELARUT PADA UJI

AKTIVITAS ANTIOKSIDAN KURKUMINOID PADA EKTRAK KUNYIT

(Curcuma domestica Val.)

Diajukan oleh :
Gita Febriyani 1041811049
Julian Retno Pranasti 1041811058
Luluk Kurnia Pradita 1041811070
Luthfiani Astada 1041811071
Kelompok 11 / B

PROGRAM STUDI S1 FARMASI

SEKOLAH TINGGI ILMU FARMASI YAYASAN PHARMASI
SEMARANG
2021
DAFTAR ISI
SAMPUL ..............................................................................................................
DAFTAR ISI ......................................................................................................... i
DAFTAR TABEL ................................................................................................. ii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ ii
BAB 1 PENDAHULUAN .................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ................................................................................................ 1
1.2 Rumusan Masalah ........................................................................................... 1
1.3 Batasan Masalah.............................................................................................. 2
1.4 Tujuan Penelitian ............................................................................................ 2
1.5 Manfaat Penelitian .......................................................................................... 2
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA DAN HIPOTESIS ............................................ 3
2.1 Tinjauan Pustaka ............................................................................................ 3
2.1.1 Kunyit .................................................................................................... 3
2.1.1.1 Pengertian .................................................................................. 3
2.1.1.2 Klasifikasi .................................................................................. 3
2.1.1.3 Morfologi dan Karakteristik ...................................................... 4
2.1.1.1 Kandungan Kimia ...................................................................... 5
2.1.2 Kurkuminoid .......................................................................................... 6
2.1.3 Metode Ekstraksi .................................................................................. 8
2.1.3.1 Metode Ekstraksi Maserasi ......................................................... 8
2.1.4 Pelarut .................................................................................................... 9
2.1.4.1 Etanol .......................................................................................... 10
2.1.4.1 Aceton ......................................................................................... 11
2.1.5 Antioksidan ............................................................................................ 12
2.1.6 Tahapan Reaksi Antioksidan ................................................................. 13
2.1.7 Sinergisme Antioksidan Kurkumin ........................................................ 13
2.1.8 Metode DPPH ........................................................................................ 14
2.2 Hipotesis ......................................................................................................... 15
BAB 3 METODE PENELITIAN.......................................................................... 16
3.1 Jenis Penelitian ............................................................................................... 16
3.2 Objek Penelitian ............................................................................................. 16
3.3 Sampel dan Teknik Sampling ........................................................................ 16
3.4 Variabel Penelitian ........................................................................................ 16
3.4.1 Variabel Bebas ....................................................................................... 16
3.4.2 Variabel Terikat ..................................................................................... 16
3.4.3 Variabel Control ..................................................................................... 16
3.5 Rancangan Eksperimen ................................................................................. 17
3.6 Teknik Pengumpulan Data ............................................................................ 17
3.6.1 Alat dan Bahan ........................................................................................ 17

i
 3.6.2 Cara Kerja .............................................................................................. 17
3.6.2.1 Persiapan Sampel ....................................................................... 17
3.6.2.2 Ekstraksi Kurkumin ................................................................... 18
3.6.2.3 Skrining Fitokimia ..................................................................... 18
3.6.2.4 Identifikasi Kualitatif Kurkumin dengan KLT ........................... 19
3.6.2.5 Penetapan Kadar Kurkumin dengan KLT densitometri ............. 20
3.6.2.3 Pengujian Antioksidan Metode DPPH ....................................... 20
3.7 Analisis Data ................................................................................................. 21
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 23

DAFTAR TABEL

Tabel 1. Klasifikasi Aktivitas Antioksidan ........................................................... 22

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Tanaman Kunyit (Curcuma domestica Val.) ...................................... 4

Gambar 2. Senyawa Kurkuminoid ........................................................................ 7

ii
 BAB 1

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Kunyit (Curcuma domestica Val.) mengandung senyawa curcumin yang
diketahui memberikan manfaat bagi kesehatan seperti antioksidan, antipikun,
antiradang dan antikanker (Oktavianingsih W. dkk, 2018). Kurkuminoid
merupakan pigmen warna kuning yang ada pada tanaman kunyit. Kurkumin,
demetoksi kurkumin dan bisdemetoksi kurkumin, ketiganya sering disebut
kurkuminoid (Almeida et al., 2005).
Maserasi merupakan metode sederhana yang paling banyak digunakan.
Metode maserasi dapat menghindari rusaknya senyawa-senyawa yang bersifat
termolabil (Mukhriani, 2014). Pemilihan pelarut untuk ekstraksi dibatasi oleh
peraturan perundangan seperti bahan makanan dan sebagainya. Salah satu
pelarut yang digunakan adalah aseton. Variasi pelarut yang digunakan dalam
penelitian ini yaitu etanol 90% dan aseton karena memberikan hasil tertinggi
untuk mendapatkan kurkuminoid (Revathy et al., 2011).
Proses ekstraksi curcumin dipengaruhi oleh konsentrasi pelarut dan jenis
pelarut pada saat ekstrasi. Jenis dan konsentrasi pelarut yang digunakan pada
proses ekstraksi sangat berpengaruh terhadap hasil rendemen senyawa
kurkuminoid yang akan berpengaruh juga terhadap aktivitas antioksidan pada
ekstak kunyit (Curcuma domestica Val.) menggunakan metode maserasi.
Pemilihan jenis pelarut yang sesuai dilakukan untuk dapat mengikat senyawa
aktif lebih banyak sehingga didapatkan rendemen yang tinggi. Penelitian
pengaruh jenis dan konsentrasi pelarut terhadap aktivitas antioksidan pada
ekstrak kunyit (Curcuma domestica Val.) yang menggunakan jenis pelarut
etanol 90% dan aseton ini dapat menjadi upaya untuk mendongkrak
keefektivan yang optimal terhadap antioksidan.
1.2 Rumusan Masalah
Berdasarkan uraian latar belakang, maka rumusan masalahnya adalah:
1. Bagaimana cara mendapatkan ekstrak kurkuminoid dari rimpang kunyit?

1
 2. Bagaimana uji aktivitas antioksidan pada proses ekstrasi maserasi?
3. Bagaimana pengaruh pelarut yang digunakan pada proses ekstraksi
kurkuminoid?
4. Bagaimana pengaruh konsentrasi pelarut yang digunakan pada proses
ekstraksi kurkuminoid?
1.3 Batasan Masalah
Pada proses ekstraksi menggunakan metode maserasi terhadap aktivitas
antioksidan pada kurkuminoid rimpang kunyit akan dirumuskan Langkah-
langkah mempersiapkan bahan baku simlisia rimpang kunyit, melakukan
isoalasi dan identifikasi senyawa kurkuminoid pada simplisia rimpang kunyit.
Dapat dikatakan optimal jika waktu pada proses ekstraksi maserasi
menghasilkan rendemen yang tinggi dan efektiv terhadap antioksidan
1.4 Tujuan Penelitian
1. Mengetahui besar rendemen ekstrak yang dihasilkan pada proses ekstraksi
menggunakan metode maserasi.
2. Mengetahui uji aktivitas antioksidan pada proses ekstrasi maserasi.
3. Mengetahui pengaruh jenis pelarut yang digunakan terhadap kadar
kurkuminoid dan aktivitas antioksidan ekstrak kunyit.
4. Mengetahui pengaruh konsentrasi pelarut yang digunakan pada proses
ekstraksi kurkuminoid?
1.5 Manfaat Penelitian
1. Diharapkan dengan adanya penelitian ini dapat memberikan wacana dalam
hal pengolahan secara tradisional yang efisien pada ekstrak kunyit
umumnya, terutama dalam hal proses menggunakan metode ekstraksi dan
penggunaan pelarut pada proses ekstraksi.
2. Diharapkan dengan adanya penelitian ini dapat memberikan informasi
mengenai besar kadar kurkuminoid dan antioksidan menggunakan
ekstraksi maserasi pada eskstrak rimpang kunyit sehingga dapat, menjadi
acuan bagi penelitian berikutnya untuk dapat dikembangkan menjadi
produk yang bermanfaat untuk masyarakat.

2
 BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA DAN HIPOTESIS

2.1 Tinjauan Pustaka

2.1.1 Kunyit

2.1.1.1 Pengertian

Kunyit (Curcuma domestica Val.) memiliki kandungan senyawa

aktif minyak atsiri yang terdiri dari α dan β tumerone yang
menyebabkan bau khas pada kunyit, aril-tumerone, artumerone, α dan
β atlantone, kurkumol, zingiberance. Selain itu ada senyawa
kurkuminoid yang terdiri dari kurkumin, demetoksikurkumin dan
bisdemetoksikurkumin. Kurkumin merupakan senyawa aktif golongan
polifenol yang ditemukan pada kunyit (Curcuma domestica Val.).
Konstituen aktif dalam kunyit (Curcuma domestica Val.), yakni
kurkuminoid sedikit larut dalam pelarut hidrokarbon namun mudah
larut dalam pelarut alkohol seperti etanol dan methanol (Christina et
al., 2018).

Kurkumin merupakan komponen bioaktif utama kunyit.

Kurkumin telah terbukti memiliki spektrum yang luas pada aktivitas
biologis, termasuk anti inflamasi, antioksidan, anti kanker,
antimutagenik, antikoagulan, antifertilitas, antijamur, antiprotozoal,
antivirus, antifibrotik, antivenom, antiulcer, antihipertensi, serta
antibakteri (Kumar et al., 2011).

2.1.1.2 Klasifikasi
Klasifikasi tumbuhan kunyit dalam taksonomi tumbuhan, kunyit
dikelompokkan sebagai berikut (Winarto, 2004)
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Sub-divisi : Angiospermae

3
 Kelas : Monocotyledonae
Ordo : Zingiberales
Family : Zingiberaceae
Genus : Curcuma
Spesies : Curcuma domestica Val
2.1.1.3 Morfologi dan Karakteristik

Gambar 1. Tanaman Kunyit (Curcuma domestica Val.).

a. Batang
Batang Kunyit memiliki batang semu yang tersusun dari kelopak
atau pelepah daun yang saling menutupi. Batang kunyit bersifat basah
karena mampu menyimpan air dengan baik, berbentuk bulat dan
berwarna hijau keunguan. Tinggi batang kunyit mencapai 0,75 –1m.
kunyit tersusun dari pelepah daun, gagang daun dan helai daun.
Panjang helai daun antara 31 –83 cm. lebar daun antara 10 –18 cm.
daun kunyit berbentuk bulat telur memanjang dengan permukaan agak
kasar. Pertulangan daun rata dan ujung meruncing atau melengkung
menyerupai ekor. Permukaan daun berwarna hijau muda. Satu
tanaman mempunyai 6 –10 daun (Winarto, 2004).
b. Bunga
Bunga kunyit berbentuk kerucut runcing berwarna putih atau
kuning muda dengan pangkal berwarna putih. Setiap bunga
mempunyai tiga lembar kelopak bunga, tig lembar tajuk bunga dan
empat helai benang sari. Salah satu dari keempatbenang sari itu

4
berfungsi sebagai alat pembiakan. Sementara itu, ketiga benang sari
lainnya berubah bentuk menjadi heli mahkota bunga (Winarto, 2004).
c. Rimpang
Rimpang kunyit bercabang –cabang sehingga membentuk rimpun.
Rimpang berbentuk bulat panjang dan membentuk cabang rimpang
berupa batang yang berada didalam tanah. Rimpang kunyit terdiri dari
rimpang induk atau umbi kunyit dan tunas atau cabang rimpang.
Rimpang utama ini biasanya ditumbuhi tunas yang tumbuh kearah
samping, mendatar, atau melengkung. Tunas berbuku –buku pendek,
lurus atau melengkung. Jumlah tunas umunya banyak. Tinggi anakan
mencapai 10,85 cm (Winarto, 2004).
Warna kulit rimpang jingga kecoklatan atau berwarna terang agak
kuning kehitaman. Warna daging rimpangnya jingga kekuningan
dilengkapi dengan bau khas yang rasanya agak pahit. Rimpang cabang
tanaman kunyit akan berkembang secara terus menerusmembentuk
cabang –cabang baru dan batang semu, sehingga berbentuk sebuah
rumpun. Lebar rumpun mencapai 24,10 cm. panjang rimpang
biasmencapai 22,5 cm. tebal rimpang yang tua 4,06 cm dan rimpang
muda 1,61 cm. rimpang kunyit yang sudah besar dan tua merupakan
bagian yang dominan sebagai obat (Winarto, 2004).
2.1.1.4 Kandungan Kimia
Kandungan kimia yang terdapat dirimpang kunyit akan lebih tinggi
apabila berasal dari dataran rendah dibandingkan dengan kunyit yang
berasal dari dataran tinggi. Kandungan kimia yang penting dari
rimpang kunyit adalah kurkumin, minyak atsiri, resin,
desmetoksikurkumin, oleoresin, dan bidesmetoksikurkumin, damar,
gom, lemak, protein, kalsium, fosfor dan besi. Kandungan kimia
minyak atsiri kunyit terdiri dari ar-tumeron, α dan β-tumeron, tumerol,
α-atlanton, β-kariofilen, linalool dan 1,8 sineol.
Minyak esensial dihasilkan dengan destilasi uap dari rimpang
kunyit, mengandung a-phellandrene (1%), sabinene (0.6%), cineol

5
 (1%), borneol (0.5%), zingiberene (25%) and sesquiterpines (53%).
Kurkumin (diferuloylme-thane) (3–4%) merupakan komponen aktif
dari kunyit yang berperan untuk menghasilkan warna kuning, dan
terdiri dari kurkumin I (94%), kurkumin II (6%) and kurkumin III
(0.3%).
Kunyit memiliki kandungan kimia yang bermanfaat untuk
kesehatan tubuh dan mengandung senyawa yang berkhasiat sebagai
obat, yaitu kurkuminoid yang terdiri dari (kurkuminatau1,7-bis(4-
hidroksi-3-metoksifenil)-1,6-heptadiena-3,6-dion, 10%
desmetoksikumin atau 1-(4-hidroksi-3-metoksifenil)-7-(4-
hidroksifenil)-1,6-heptadiena-3,5-diondan15%bisdesmetoksikurkumin
atau 1,7-bis(4-hidroksifenil)-1,6-heptadiena-3,5-dion) dan zat-zat
manfaat lainnya seperti minyak atsiri yang terdiri dari (ketonsesquit-
erpen, turmeron, tumeon 60%, zingiberene 25%, felandren, sabinen,
borneol dan sineil) (Shan, 2018).
2.1.2 Kurkuminoid
Kurkumin adalah komponen fitokima yang ditemukan dalam
kunyit berupa pigmen kuning derivat dari polifenol hidrofobik. Oleh
karena warnanya, kurkumin telah digunakan juga dalam industri
pakaian dan makanan. Juga telah digunakan sebagai pengawet dan
tambahan dalam bahan makanan. Kurkumin juga digunakan sebagai
obat dan ramuan tradisional untuk mengobati berbagai macam
penyakit di beberapa negara. Fraksi kurkuminoid (C25H32O3)
merupakan komponen yang memberi warna kuning berbentuk serbuk
dengan rasa pahit, larut dalam pelarut polar seperti aseton, alkohol,
asam glasial, alkohol hidroksida, dan etanol. Kandungan kurkuminoid
dalam rimpang temulawak kering berkisar 3,16% sedangkan
kandungan kurkuminoid rimpang kunyit sebesar 6,9% (Fatmawati,
2008).

6
 Gambar 2. Senyawa Kurkuminoid : a) kurkumin, b)
demetoksikurkumin, c) bisdemetoksikurkumin

Hasil penelitian Balai Penelitian Tanaman Rempah dan Obat

(Balittro) bahwa kandungan kurkumin kunyit rata –rata 10,92%.
Berdasarkan penelitan Chearwae et al.,(2004), analisa Kromatografi
Lapis Tipis ekstrak kasar kurkuminoid dengan menggunakan fase
gerak kloroform: etanol: asam asetat dengan perbandingan 94 : 5 : 1
(v/v/v) juga menghasilkan 3 spot utama berwarna oranye. Spot yang
terakhir kali terelusi (paling non polar) yaitu kurkumin (A)
demetoksikurkumin(B) dan bisdemetoksikurkumin(C). Jika dianalisa
berdasarkan kepekatan warna dan luas spot pada plat Kromatografi
Lapis Tipis, kurkumin merupakan pigmen yang paling dominan yang
terdapat pada kunyit. Kunyit berkhasiat sebagai obat –obatan yang
disebabkan oleh kandungan kurkuminnya. Kurkumin juga

7
 dimanfaatkan sebagai zat tambahan untuk memberikan warna dan
aroma pada makanan (Pramono et al., 2009).
2.1.3 Metode Ekstraksi
Komponen bioaktif dari tanaman bisa diekstrak dengan teknik
ekstraksi yang bervariasi. Kebanyakan dari teknik-teknik ekstraksi
bekerja berdasarkan kemampuan mengekstraksi dari pelarut yang
berbeda dengan penggunaan danaplikasi panas dan atau pengadukan.
Ekstraksi merupakan proses pemisahan bahan dari campurannya
dengan menggunakan pelarut yang sesuai. Proses ekstraksi dihentikan
ketika tercapai kesetimbangan antara konsentrasi senyawa dalam
pelarut dengan konsentrasi dalam sel tanaman. Setelah proses
ekstraksi, pelarut dipisahkan dari sampel. Ekstrak awal sulit
dipisahkan melalui teknik pemisahan tunggal untuk mengisolasi
senyawa tunggal. Oleh karena itu, ekstrak awal perlu dipisahkan ke
dalam fraksi yang memiliki polaritas dan ukuran molekul yang sama
(Tetti, 2014).
2.1.3.1 Metode Ekstraksi Maserasi
Maserasi merupakan proses ekstraksi simplisia dengan
menggunakan pelarut. Maserasi bertujuan untuk mendapatkan zat -zat
yang terkandung di dalam bahan. Maserasi dilakukan dengan
beberapa pengadukan pada temperatur ruangan atau kamar (Depkes
RI, 2000). Maserasi berasal dari bahasa latin Maceraceberarti
merendam dan melunakkan. Maserasi merupakan cara ekstraksi yang
paling sederhana yaitu dengan cara merendam bahan nabati
menggunakan pelarut bukan air (pelarut nonpolar) atau setengah air,
misalnya etanol encer, selama periode waktu tertentu sesuai dengan
aturan dalam buku resmi kefarmasian (Depkes RI, 1995). Prinsip
maserasi adalah ekstraksi zat aktif yang dilakukan dengan cara
merendam serbuk dalam pelarut yang sesuai selama beberapa hari
pada temperature kamar dan terlindung dari cahaya. Pelarut akan
masuk kedalam sel tanaman melewati dididing sel. Isi sel akan larut

8
 karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan didalam sel
dengan diluar sel. Larutan yang konsentrasinya tinggi akan terdesak
keluar dan diganti oleh pelarut dengan konsentrasi redah (proses
difusi). Peristiwa tersebut akan berulang sampai terjadi keseimbangan
antara larutan didalam sel dan larutan diluar sel (Ansel, 1989).
Menurut Voigh (1994), semakin besar perbandingan bahan dengan
pelarut, maka semakin banyak hasil yang diperoleh.
Maserasi digunakan dengan persiapan tonic yang dapat dibuat
dirumahdalam waktu yang lama. Metode ekstraksi ini menjadi
populer dan murah untukmendapatkan minyak esensial dan komponen
bioaktif. Untuk ekstraksi skala kecil, maserasi umumnya terdiri dari
beberapa langkah. Pertama, haluskan tanamanmenjadi partikel kecil
untuk meningkatkan luas permukaan agar tercampurdengan baik
dengan pelarut. Kedua, dalam proses maserasi, pelarut yang
cocokdisebut dengan menstruum ditambahkan dalam tabung tertutup.
Ketiga, cairandisaring untuk memisahkan padatan residu dari proses
ekstraksi diberi tekananuntuk mendapatkan larutan yang tersaring
dalam jumlah besar. Cairan yang didapat dari penyaringan dan
pemerasan dicampur dan dan dipisahkan daripengotor dengan filtrasi.
Pengguncangan dalam maserasi membantu ekstraksidengan dua cara:
(a) meningkatkan difusi, (b) menghilangkan larutan
yangterkonsentrasi dari permukaan sampel untuk membawa pelarut
baru agar didapatyield ekstraksi yang lebih banyak (Azmiret al.,
2013).
2.1.4 Pelarut
Pelarut adalah benda cair atau gas yang melarutkan benda padat,
cair atau gas, yang menghasilkan sebuah larutan. Pelarut yang
digunakan dalam proses ekstraksi harus memenuhi kriteria sebagai
berikut: melarutkan semua zat pemberi flavor, titik didih cukup
rendah sehingga mudah diuapkan, tidak larut dalam air dan bersifat
inert. Pelarut paling umum digunakan dalam kehidupan sehari-hari

9
adalah air. Disamping itu juga menggunakan bahan kimia organik
(mengandung karbon) yang juga disebut pelarut organik. Pelarut
organik biasanya memiliki titik didih rendah dan lebih mudah
menguap, meninggalkan substansi terlarut yang didapatkan. Untuk
membedakan antara pelarut dengan zat yang dilarutkan, pelarut
biasanya terdapat dalam jumlah lebih besar (Wanto and Romli, 1977).
Farmakope Indonesia menetapkan bahwa pelarut yang cocok untuk
maserasi adalah air, etanol, etanol-air atau eter. Etanol
dipertimbangkan sebagai pelarut maserasi karena lebih selektif,
kapang dan kuman sulit tumbuh dalam etanol 20% keatas, tidak
beracun, netral, absorbsinya baik, etanol dapat bercampur dengan air
pada segala perbandingan, dan panas yang diperlukan untuk
pemekatan lebih sedikit.
Tidak semua pelarut organik dapat digunakan dalam sediaan dan
biaya produksi menjadi lebih mahal. Salah satu upaya yang dilakukan
untuk mendapatkan kandungan kurkuminoid yang tinggi dan
mengurangi besarnya biaya produksi ialah dengan mengoptimalkan
proses ekstraksi yang dilakukan. Kondisi ekstraksi kurkumin
dipengaruhi suhu, waktu, nisbah solut, pelarut (Paulucci, dkk, 2013).
2.1.4.1 Etanol
Etanol disebut juga etil alcohol atau alkohol murni adalah sejenis
cairan yang mudah menguap, mudah terbakar, tak berwarna, dan
merupakan alkohol yang paling sering digunakan dalam kehidupan
sehari-hari. Pelarut etanol mempunyai titik didih yang rendah dan
cenderung aman. Etanol juga tidak beracun dan berbahaya, selain itu
etanol juga mempunyai kepolaran tinggi sehingga mudah untuk
melarutkan senyawa resin, lemak, minyak, asam lemak, karbohidrat
dan senyawa organik lainnya (Munawarah & Handayani 2010).
Etanol merupakan pelarut yang serbaguna, dapat menyatu dengan
air dengan sebagian besar bahan organik yang bersifat cair termasuk
zat cair, termasuk zat cair non-polar seperti hidrokarbon alifatik.

10
Etanol juga digunakan sebagai pelarut dalam melarutkan bahan obat-
obatan. Etanol (etil alkohol) mempunyai rumus kimia C2H5OH,
mudah terbakar, memiliki titik cair -114,30C dan titik didih 78,40C
(Anonim, 2000).
2.1.4.2 Aseton
Aseton merupakan keton yang paling sederhana, digunakan
sebagai pelarut polardalam kebanyakan reaksi organik. Aseton dikenal
juga sebagai dimetil keton, 2-propanon, atau propan-2-on. Aseton
adalah senyawa berbentuk cairan yang tidak berwarna dan mudah
terbakar, digunakan untuk membuat plastik, serat, obat-obatan, dan
senyawa-senyawa kimia lainnya. Selain dimanufaktur secara industri,
aseton juga dapat ditemukan secara alami, termasuk pada tubuh
manusia dalam kandungan kecil. Aseton memiliki gugus karbonil
yang mempunyai ikatan rangkap dua karbon-oksigen terdiri atas satu
ikatan σ dan satu ikatan π. Umumnya atom hidrogen yang terikat pada
atom karbon sangat stabil dan sangat sukar diputuskan. Namun lain
halnya dengan atom hidrogen yang berada pada karbon (C) di
samping gugus karbonil yang disebut atom hidrogen alfa (α). Sebagai
akibat penarikan elektron oleh gugus karbonil, kerapatan elektron
pada atom karbon α semakin berkurang, maka ikatan karbon dan
hidrogen α semakin melemah, sehingga hidrogen α menjadi bersifat
asam dan dapat mengakibatkan terjadinya substitusi α. Substitusi α
melibatkan penggantian atom H pada atom karbon α dengan
elektrofilik (Wade, L.G. 2006:1041-1063).
Aseton adalah ekstraktan yang baik dan rendemennya pun tinggi.
Semakin tinggi konsentrasi pelarut maka semakin banyak kurkumin
yang terekstrak ke dalam etanol. Rendemen pun semakin besar.
(Rezki et al., 2015). Ekstraksi kurkuminoid dengan metode maserasi
dan menggunakan pelarut aseton menghasilkan kadar kurkuminoid
yang tinggi (Jansirani, 2014). Aseton juga dapat digunakan sebagai
pelarut dalam proses pabrikasi. Kurkumin stabil dalam suasana asam,

11
 tetapi tidak stabil dalam suasana basa dan kondisi terang (Stancovic,
2004).
2.1.5 Antioksidan
Antioksidan adalah senyawa kimia yang dapat menyumbangkan
satu atau lebih elektron kepada radikal bebas, sehingga radikal bebas
tersebut dapat diredam. Berdasarkan sumber perolehannya ada 2
macam antioksidan, yaitu antioksidan alami dan antioksidan buatan
(sintetik) (Dalimartha dan Soedibyo, 1999). Antioksidan alami dapat
diperoleh dari ekstrak bagian tanam an rempah-rempah atau
tanaman obat-obatan seperti akar, batang, daun, bunga dan biji.
Senyawa yang berperan senyawa antioksidan di dalam ekstrak adalah
fenol, amina aromatik, vitamin C, tokoferol, vitamin E, flavonoid dan
lain sebagainya (Sukardi, 2003).
Antioksidan merupakan senyawa yang mampu menunda,
memperlambat atau menghambat reaksi oksidasi pada makanan atau
obat yang dapat mengakibatkan ketengikan (rancidity) pada makanan
maupun kerusakan atau degradasi obat. Mekanisme kerja antioksidan
secara umum menghambat oksidasi lemak atau disebut juga
autooksidan yang terjadi dalam tiga tahap utama, yaitu iniasi,
propagasi, dan terminasi. Pada tahap inisiasi terjadi pembentukan
radikal asam lemak yaitu turunan asam lemak yang bersifat tidak
stabil dan sangat reaktif akibat hilangnya satu atom H. Pada tahap
propagasi, radikal asam lemak akan bereaksi dengan oksigen
membentuk radikal peroksi. Radikal peroksi lebih lanjut akan
menyerang asam lemak menghasilkan hidroperoksida dan radikal
asam lemak baru (tahap propagasi).
Penggunaan antioksidan akhirnya meluas untuk produk-produk
pangan lainnya, sehingga berkembang antioksidan sintetik yang lebih
effektif dan harganya lebih murah. Antioksidanmemiliki dua
mekanisme aksiyaitu sebagai antioksidan preventif, dan antioksidan
pemutus rantai (chain breaking antioxidant). Antioksidan preventif,

12
 bekerja membentuk kelat dengan logam, sehingga membantu
mencegah produksi radikal bebas. Antioksidan pemutus rantaidapat
mengais atau sebagai scavenger radikal bebas, sehingga terjadi
pemutusan rantai yang mempropagasi terbentuknya radikal bebas.
2.1.6 Tahapan Reaksi Antoksidan
Kurkuminoid mempunyai mekanisme reaksi antioksidan hampir
sama dengan antosianin karena kedua senyawa tersebut mempunyai
gugus fenolik yang merupakan gugus penting sebagai zat antioksi dan
tahapan reaksi antioksidan senyawa golongan fenolik mempunyai dua
fungsi. Fungsi utamanya adalah dalam pemberian atom hidrogen.
Senyawa antioksidan (AH) dapat memberikan atom hidrogen secara
cepatke radial lipida (R*, ROD*) pada persamaan reaksi 5. Senyawa
antioksidan juga dapat mengubahnya ke bentuk lebih stabil, sementara
turunan radikal antioksidan (A*) tersebut memiliki keadaan lebih
stabil dibanding radikal lipida (reaksi 6). Fungsi kedua merupakan
fungsi sekunder antioksidan, yaitu memperlambat laju autooksidasi
dengan berbagai mekanisme di luar mekanisme pemutusan rantai
autooksidasi dengan pengubahan radikal ke bentuk lebih stabil
(Limantara dan Rahayu, 2008).
2.1.7 Sinergisme Antioksidan Kurkumin
Sinergisme antioksidan terjadi bila suatu campuran antioksidan
menghasilkan aktivitas yang lebih tinggi daripada jumlah aktivitas
antioksidan-antioksidan yang digunakan sendiri-sendiri secara
terpisah (Santoso, 2016). Pada praktek penggunaan antioksidan, untuk
meningkatkan efektivitasnya dilakukan dengan menggabungkan
antioksidan. Pada sinergisme antioksidan campuran radikal bebas
akan menerima dua antioksidan, yang satu bereaksi dengan radikal
peroksi danantioksidan yang kedua meregenerasi yang pertama,
sehingga menjadi pasangan efektif. Antioksidan fenolik dan asam
askorbat muncul dan bekerja secara sinergis dengan cara ini, dan

13
 digambarkan pada persamaan reaksi 9 dan 10 (Uri,1961 dalam
Brewer, 2011)
2.1.8 Metode DPPH
Aktifitas antioksidan suatu senyawa diukur dari kemampuan dalam
menangkap radikal bebas. Radikal bebas yang biasanya digunakan
sebagai metode dalam mengukur kemampuan penangkapan radikal
bebas adalah 1,1- difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH). DPPH merupakan
suatu senyawa radikal bebas yang stabil dalam penggunaannya
sebagai pereaksi dalam uji penangkapan radikal bebas cukup dengan
larutan. Bila disimpan dalam keadaan kering dengan kondisi
penyimpanan vaik akan stabil selama bertahun- tahun. (Peaker, 1984)
Prinsipnya pada metode DPPH melihat perubahan warna DPPH
dalam larutan dari ungu pekat menjadi kuning pucat karena aktivitas
sampel yang mengandung antioksidan yang mampu menangkap dan
meredam aktivitas radikal bebas. Semakin banyak DPPH yang
diredam, warna larutan semakin berubah menjadi pucat. Perubahan
warna selain dapat dilihat secara kualitatif juga bisa menggunakan
spektrofotometer dan dinilai absorbansinya. Pada spektrofotometer
akan dilihat perubahan serapan warna (nilai absorbansi). Absorbansi
yang baik untuk larutan DPPH adalah kurang dari 1. Tinggi
rendahnya aktivitas antioksidan pada sampel dilihat dari nilai efficient
concentration (EC50) atau Inhibition Contentration (IC50) yaitu
konsentrasi suatu zat antioksidan yang dapat menyebabkan 50%
DPPH kehilangan sifat radikal bebasnya. Semakin kecil nilai IC50
semakin tinggi aktivitas antioksidan pada sampel. (Molyneux et
all,2004) Pengerjaan menggunakan DPPH harus cepat dan hati-hati
karena molekul DPPH mudah terdegradasi oleh cahaya dan oksigen.
Namun, metode DPPH lebih sederhana, akurat, cepat, dan bisa
dilakukan dengan sedikit sampel (Yuhernita, 2011).

14
 Potensi antioksidan yang berhubungan dengan ROS adalah sebagai
penghambat radikal superoksida, singlet oksigen, hidrogen peroksida,
peroksida lemak, asam hipoklor, radikal alkosil, radikal peroksil,
oksida nitrit, nitrogen dioksida, peroksi nitrit dan radikal hidroksi
(Auromaet al.,1997). Antioksidan dapat melindungi sel dari kerusakan
oksidatif dan meminimalkan kerusakan sel, sehingga dapatmencegah
penyakit degeneratif. Kemampuan atau kekuatan suatu antioksidan
dapat digolongkan berdasarkan nilai IC50-nya. Suatu atioksidan
dinyatakan sangat kuat jika nilai IC50<50 μg/mL, kuat jika IC50: 50-
100 μg/mL; sedang jika IC50: 101-150 μg/mL; lemah jika IC50> 150
μg/mL (Armala, 2009).

2.2 Hipotesis

Adanya pengaruh jenis dan konsentrasi pelarut pada ekstraksi

kurkuminoid dengan metode maserasi terhadap aktivitas antioksidan pada ekstrak
kunyit (Curcuma domestica Val.).

15
 BAB 3

METODE PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian

Penelitian ini merupakan jenis penelitian eksperimental dengan

membandingkan jenis pelarut dan konsentrasi pelarut terhadap kandungan
kurkuminoid dalam ekstrak rimpang kunyit (Curcuma domestica Val.) dengan
metode maserasi.

3.2 Objek Penelitian

Objek penelitian yang digunakan yaitu kandungan senyawa kurkuminoid

dalam ekstrak kunyit (Curcuma domestica Val.).

3.3 Sampel dan Teknik Sampling

Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah rimpang kunyit

(Curcuma domestica Val.) dengan menggunakan rancangan acak dimana
setiap populasi mempunyai kesempatan yang sama untuk diambil sebagai
sampel.

3.4 Variabel Penelitian

3.4.1 Variable Bebas

Jenis dan konsentrasi pelarut yang digunakan.

3.4.2 Variabel Terikat

Kadar kurkuminoid ekstrak kunyit (Curcuma domestica Val.).

3.4.3 Variabel Control

Jenis kunyit (Curcuma domestica Val.) yang digunakan.

16
3.5 Rancangan Eksperimen

Penelitian ini menggunakan rancangan acak dengan perlakuan jenis dan

konsentrasi pelarut yang digunakan dalam ekstraksi. Pelarut yang digunakan
yaitu etanol 90% dengan perbandingan sampel : pelarut (1:5 dan 1:10).
Digunakan konsentrasi yang sama untuk pelarut aseton sampel : pelarut yaitu
1:5 dan 1:10.

3.6 Teknik Pengumpulan Data

3.6.1 Alat dan Bahan

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu rimpang kunyit

(Curcuma domestica Val.), etanol 90%, aseton, larutan DPPH,
methanol.
Alat yang digunakan yaitu, pisau, blender, oven, rotary vacuum
evaporator, ayakan 60 mesh, kertas saring Whatman, cawan porselen,
neraca digital, timbangan analitik, aluminium foil, linomat 5 camag,
vortex, pelat KLT, KLT densitometer, lampu UV 254 dan 366 nm,
dan alat-alat gelas lainnya.
3.6.2 Cara Kerja
3.6.2.1 Persiapan Sampel
Kunyit (Curcuma domestica Val.) yang sudah dibersihkan
kemudian diiris dengan ketebalan ±3-5 mm dan diblanching pada
suhu 70°C selama 15 menit. Kunyit yang sudah diblanching
kemudian dikeringkan dengan oven pada suhu 40-50oCselama 40
jam. Pengeringan dianggap selesai apabila bahan dapat mudah
dipatahkan ketika diremas dengan tangan. Kunyit (Curcuma
domestica Val.) yang telah dikeringkan kemudian dihaluskan dengan
menggunakan blender, selanjutnya diayak menggunakan ayakan 60
mesh. Bubuk yang diperoleh selanjutnya diekstrak (Harini, et al.,
2012).
3.6.2.2 Ekstraksi kurkumin

17
 Proses pembuatan ekstrak kunyit (Curcuma domestica Val.)
menggunakan metode maserasi. Masing-masing bubuk kunyit
(Curcuma domestica Val.) ditimbang sebanyak 50 g, dilarutkan
dengan pelarut sesuai dengan perlakuan etanol 90% sebanyak 250 ml
untuk konsentrasi 1:5 dan 500 untuk konsentrasi 1:10, kemudian
dimasukkan dalam erlemayer. Campuran serbuk kunyit (Curcuma
domestica Val.) dengan pelarut kemudian dishaker sebanyak 2 kali
selama 5 menit dan dimaserasi selama 2 x 24 jam. Larutan disaring
menggunakan kertas whatman. Kemudian filtrat yang didapat
dievaporasi menggunakan rotary vakum evaporator dengan tujuan
untuk menguapkan pelarut yang bercampur dengan bahan saat
proses ektraksi (Harini, et al., 2012). Dilakukan perlakuan yang sama
menggunakan pelarut aseton.
Proses ekstrasi maserasi simplisia kunyit menghasilkan
kurkumin Sesuai teori senyawa kurkumin berada pada Rf 0,84,
senyawa demetoksikurkumin berada pada Rf 0,69 dan senyawa
Bisdemetoksikurkumin pada Rf 0,57 (Ashraf, 2018). Setelah dielusi
dengan fase gerak kloroform : methanol (9,5:0,5), hasil identifikasi
kurkumin dengan KLT pada percobaan kali ini juga didapatkan 3
noda pada masing-masing penotolan sesuai pada gambar 1.
Selanjutnya peneliti hanya fokus pada senyawa kurkumin yang
memiliki Rf antara 0,718 – 0,738. Berdasarkan tabel 1 hasil skrining
fitokimia bahwa ekstrak rimpang kunyit positif mengandung
flavonoid, fenolik, triterpenoid.
3.6.2.3 Identifikasi Kualitatif Kurkumin dengan KLT
Ekstrak kunyit (Curcuma domestica Val.) hasil ekstraksi maserasi
ditotolkan pada lempeng KLT beserta baku kurkumin dan dielusi
dengan menggunakan fase gerak etil kloroform : methanol (9,5:0,5)
hasil modifikasi (Risthanti, 2019) dan deteksi dengan sinar tampak
dan sinar UV (Suharsanti. dkk., 2020).

18
3.6.2.4 Penetapan Kadar Kurkumin dengan KLT densitometri
Densitometri adalah metode analisi instrumental yang berdasarkan
interaksi radiasi elektromagnetik dengan analit yang merupakan
bercak atau noda pada lempeng KLT. Senyawa kurkumin
merupakan salah satu kelompok senyaea kurkuminoid. Baku dan
sampel kurkumin ditimbang sebanyak 25 mg dan dilarutkan dalam
pelarut etanol sampai 100 ml. Sampel kemudian ditotolkan dengan
linomat 5 camag dengan 3x replikasi sebanyak 20µl pada plat KLT
ukuran 20 cm x 10 cm sedangkan baku kurkumin ditotolkan
sebanyak 1µl, 5µl, 10µl, 15µl, 20µl, 25µl pada plat KLT yang sama
dengan sampel. Plat KLT yang telah ditotolkan sampel maupun
baku dielusi dengan fase gerak kloroform: metanol (9,5:0,5)
(Risthanti, 2019). Setelah dielusi plat KLT diamati noda yang
terbentuk dengan sinar tampak dan sinar UV dan discanning dengan
KLT densitometer pada 254nm. Kadar senyawa kurkumin
ditetapkan berdasarkan baku (Suharsanti. dkk., 2020).
3.6.2.5 Pengujian Kapasitas Antioksidan Metode DPPH (Yun, 2001)
Untuk membuat larutan DPPH, diambil DPPH sebanyak 0,004
g, dan diencerkan dengan metanol hingga volume 100 ml. Sampel
disiapkan dengan menimbang sebanyak + 0,1 g dilarutkan dengan
metanol hingga volume menjadi 5 ml. Sampel diambil 10 µl
dimasukkan dalam tabung reaksi dan ditambahkan 490 µl metanol,
vorteks. Sampel yang telah diencerkan dipipet 200 µl dan
ditambahkan 1,4 ml larutan DPPH. Tabung reaksi divorteks dan
dibiarkan diudara terbuka selama 30 menit, kemudian dibaca
absorbansinya pada panjang gelombang 517 nm. Perhitungan
kapasitas antioksidan ditentukan berdasarkan pembacaan
meggunakan kurva standar asam galat.
Pembuatan kurva standar asam galat, dengan cara ditimbang
0,01 g asam galat dan dilarutkan dalam 50 ml aquades lalu pipet
asam galat (0, 10, 20, 30, 40, 50) µl. Pada 0 ppm ditambahkan 200

19
 µl metanol. Pada tabung yang lain ditambahkan aquades hingga
200 µl, lalu pada semua tabung ditambahkan 1,4 ml larutan DPPH
kemudian divortex dan didiamkan 30 menit. Larutan lalu dibaca
absorbansinya pada panjang gelombang 517 nm, untuk
mendapatkan kurva standar dan persamaan regresinya. Persamaan
regresi y = ax + b., menunjukkan y = absorbansi, x = konsentrasi
asam galat, a= intersep dan b = konstanta. Persentase kapasitas
antioksidan dapat dihitung dengan rumus sebagai berikut:

𝑥 (𝑚𝑔 /𝑚𝑙)
%Antioksidan = 𝑘𝑜𝑛𝑠𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 (𝑚𝑔/𝑚𝑙) 𝑥 𝐹𝑃 𝑋 100%

Keterangan:
• Nilai x dapat dihitung dengan rumus x = (y-b) / a.
Y= nilai absorbansi
a = intersep
b = konstanta
• Konsentrasi sampel dihitung dengan rumus:
𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
Konsentrasi sampel = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑎𝑛

• FP = factor pengenceran
3.7 Analisis Data
Data antioksidan pada radikal DPPH (% penghambatan) ekstrak
daun kunyit dianalisis dan dihitung nilai IC50. Semakin kecil nilai IC50
berarti aktivitas antioksidan semakin kuat. Pada penelitian ini nilai IC50
dianalisis dan dihitung mengunakan persamaan regresi linear (Molyneux
P, 2004).
Data % hambatan dan konsentrasi larutan digunakan untuk mencari
nilai IC50 dengan persamaan regresi linear y= a + bx, dimana y adalah %
hambat 50 (senilai 50) dan x adalah nilai IC50. Nilai konstanta a
menunjukkan besarnya nilai variabel y jika variabel x adalah 0. Sedangkan
nilai b menunjukkan besarnya perubahan variabel y jika variabel x
berubah sebesar satu satuan. Berikut ini tabel mengenai klasifikasi
aktivitas antioksidan menurut Blois:

20
Table 1. Klasifikasi Aktivitas Antioksidan
NO Nilai IC50 Antioksidan
1 < 50 ppm Sangat kuat
2 50 – 100 ppm Kuat
3 100 – 150 ppm Sedang
4 151 – 200 ppm Lemah

21
 DAFTAR PUSTAKA

Anonim, 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, 1, 3,

Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia.

Ansel, H.C., 1989. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi, Edisi IV diterjemahkan

oleh Ibrahim, F. Jakarta: Universitas Indonesia Press.

Azmir, J., I. S. M. Zaidul, M. M. Rahman, K. M. Sharif, A. Mohamed, F. Sahena,

M. H. A. Jahurul., K. Ghafoor., N. A. N. Norulaini, dan A. K. M. Omar.
2013. Techniques for Extraction of Bioactive Compounds from
PlantMaterials: A Review.Journal of Food Engineering, 117: 426-436.

Blois, MS. 1958. Antioxidant determinations by the use of a stable free radical.
Nature, 1(1): 1199-200.

Christina, I. A. M., Kencana, I. N., & Permana, I. D. G. M. 2018. Pengaruh

Metode Pengeringan dan Jenis Pelarut terhadap Rendemen dan Kadar
Kurkumin Ekstrak Kunyit (Curcuma domestica Val). Jurnal Ilmiah
Teknologi Pertanian Agrotechno, 3(2), 319-324.

Chu Yuan Shan, Y. I. 2018. Studi Kandungan Kimia Dan Aktivitas Farmakologi
Tanaman Kunyit (Curcuma longa L.). 16: 547–555.

Dalimartha, S dan Soedibyo, M. 1999. Awet Muda Dengan Tumbuhan Obat dan
Diet Suplemen. Jakarta: Trubus Agriwidya.

Departemen Kesehatan RI. 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Jakarta: Depkes
RI

Departemen Kesehatan RI, 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan

Obat, Cetakan Pertama. Dikjen POM, Direktorat Pengawasan Obat
Tradisional.

22
Fatmawati DA. 2008. Pola protein dan kandungan kurkuminoid
rimpang temulawak (CurcumaxanthorrhizaRoxb). Bogor: FMIPA,
IPB.hlm. 1-43.

Harborne, J. B. 2006. Metode Fitokimia: Penentuan Cara Modern Menganalisis

Tumbuhan, terjemahan K. Padmawinata. Bandung: Penerbit ITB.

Harini, B. W., R. Dwiastuti, L. W. Wijayanti. 2012. Aplikasi Metode

Pektrofotometri Visibel Untuk Mengukur Kadar Curcuminoid Pada
Rimpang Kunyit (Curcuma domestica). Yogyakarta: Prossiding Seminar
Nasional Aplikasi Sains dan Teknologi (SNAST) Periode III.

Katno, Pramono S. 2009. Tingkat Manfaat dan Keamanan Tanaman Obat dan
Obat Tradisional. Balai Penelitian Obat Tawangmangu. Fakultas
Farmasi Universitas Gajah Mada. Yogyakarta: Fakultas Farmasi UGM.

Limantara, L dan Rahayu, P. 2008. Pigmen alami berbasis sumber daya lokal
(dalam kualitas dan ketahanan pangan), Prosiding Seminar
Nasional Pengembangan Agroindustri Berbasis Sumberdaya
Lokal Untuk Mendukung Ketahanan Nasional, ISBN 978-979-1366-28-
1, 37-49.

Munawarah, S. & Handayani, P.A. 2010. Ekstraksi Minyak Daun Jeruk Purut
(Cytrus hydtrik D.C) Dengan Pelarut Etanol dan N-Heksan. Jurnal
Kompetensi Teknik, 2(1): 73-78

Molyneux P. 2004. The use of the stable free radical diphenylpicrylydrazyl

(DPPH) for estimating antioxidant activity. Jurnal Science Technology,
26(2): 212-8.

Mukhriani. 2014. Ekstraksi, pemisahan Senyawa, dan Identifikasi Senyawa Aktif.

Jurnal Kesehatan, 7(12): 361-367
Packer, L. 1984. Oxygen radicals in biological systems. Orlado (Fla): Academic
Press

23
Paulucci, P.V., Couto, O.R., Teixeira, C.C., Freitas, L.A. 2013. Optimization of
the extraction of curcumin from Curcuma longa rhizomes. Revista
Brasileira de Farmacognosia Brazilian Journal of Pharmacognosy 23(1):
94-100
Rezki, R. S., Anggoro, D., & Siswarni, M. Z. 2015. Ekstraksi multi tahap
kurkumin dari kunyit (Curcuma domestica Valet) menggunakan pelarut
etanol. Jurnal Teknik Kimia USU, 4(3), 29-34.

Revathy, S., et al. 2011. Isolation, Purification and Identification of Curcuminoids

from Turmeric (Curcuma longa L.) by Column Chromatography. Journal
of Experimental Sciences, 2(7): 21-25
Suharsanti., Ririn, dkk. 2020. Kadar Kurkumin Ekstrak Rimpang Kunyit
(Curcuma domestica) Secara KLT Densitometri dengan Perbedaan
Metode Ekstraksi. Jurnal Wiyata, 7(2): 86-93.
Sukardi. 2003. Studi Stabilitas Antioksidan ekstrak Daun Dewa
(Gynura procumbenslour Merr) Selama Pemanasan Dalam
Menangkap Radikal Bebas. Malang: LEMLIT UMM.
Stankovic, I. 2004. Curcumin, Chemical and Technical Assessment (CTA). FAO.
61st JECFA. p 1–8.
Voigt, R. 1994. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, diterjemahkan oleh
Soewandi, S. N. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.
Winarto, I.W. 2004. Khasiat dan Manfaat Kunyit. Jakarta: Agro Media Pustaka.
Yuhernita dan Juniarti. 2011. Analisis senyawa metabolit sekunder dari ekstrak
methanol daun durian yang berpotensi sebagai antioksidan. Makara Sains.
15(1): 48-52.
Yun, L. 2001. Free radical scavenging properties of conjugated linoic acids.
Journal of Agricultural and Food Chemistry, 49: 3452-3456.

24