PROPOSAL SKRIPSI

OPTIMASI FORMULA DAN KARAKTERISASI

NANOPARTIKEL EKSTRAK RIMPANG TEMULAWAK
(Curcuma xanthorrhiza R.) GELASI IONIK DAN UJI IN-
VITRONYA SEBAGAI ANTIDIABETES

Diajukan oleh

Agisha Sheila Bell

NPM 2016210007

UNIVERSITAS PANCASILA
FAKULTAS FARMASI
JAKARTA
November 2019
Lampiran 1.

UNIVERSITAS PANCASILA

FAKULTAS FARMASI

JAKARTA

PERSETUJUAN PROPOSAL SKRIPSI

NAMA : Agisha Sheila Bell

NPM : 2016210007

PEMINATAN : FARMASI SAINS DAN TEKNOLOGI

JUDUL : OPTIMASI FORMULA DAN KARAKTERISASI

NANOPARTIKEL EKSTRAK RIMPANG
TEMULAWAK (Curcuma xanthorrhiza R.) GELASI
IONIK DAN UJI IN-VITRONYA SEBAGAI
ANTIDIABETES

Disetujui Oleh:

Pembimbing

(Drs. Moch. Futuchul Arifin, M. Si., Apt.)

November 2019
 DAFTAR ISI
DAFTAR ISI ................................................................................................................. i
BAB I ( PENDAHULUAN ) ....................................................................................... 1
A. LATAR BELAKANG.............................................................................................. 1
B. PERUMUSAN MASALAH .................................................................................... 3
C. TUJUAN PENELITIAN .......................................................................................... 3
D. MANFAAT PENELITAN....................................................................................... 4
BAB II ( TINJAUAN PUSTAKA ) ............................................................................. 5
A. RIMPANG TEMULAWAK (Curcuma xanthorrhiza Roxb.) ............................ 5
B. SIMPLISIA DAN METODE EKSTRAKSI ....................................................... 11
C. PENGERING SEMPROT ..................................................................................... 16
D. MALTODEKSTRIN .............................................................................................. 19
E. DIABETES MELLITUS ....................................................................................... 20
F. Uji Aktivitas Antidiabetes Dengan Perekasi Nelson Somogyi.......................... 23
G. NANOPARTIKEL ................................................................................................. 24
H. KITOSAN ................................................................................................................ 32
I. NATRIUM TRIPOLIFOSFAT ............................................................................. 33
J. SPEKTROFOTOMETRI UV – VIS .................................................................... 34
K. VALIDASI METODE ........................................................................................... 39
L. RANCANGAN FAKTORIAL ............................................................................. 41
M. LANDASAN TEORI.............................................................................................. 42
N. HIPOTESIS ............................................................................................................. 44
BAB III ( RENCANA PENELITIAN ) ..................................................................... 45
A. PRINSIP PENELITIAN ........................................................................................ 45
B. TEMPAT PENELITIAN ....................................................................................... 45
C. TAHAP PENELITIAN .......................................................................................... 45
BAB IV ( ALAT, BAHAN, DAN METODE PENELITIAN ) ................................. 48
A. ALAT........................................................................................................................ 48
B. BAHAN .................................................................................................................... 48
C. METODE PENELITIAN ....................................................................................... 48
1. Penyiapan Bahan Penelitian .................................................................................. 48

i
 2. Determinasi Rimpang Temulawak ....................................................................... 48
3. Penetapan Bahan Organik Asing .......................................................................... 49
4. Pembuatan Serbuk Simplisia ................................................................................. 49
5. Pembuatan Ekstrak Rimpang Temulawak dengan Etanol 96% ....................... 49
6. Pemeriksaan Ekstrak Kental Rimpang Temulawak ........................................... 50
7. Pengeringan Ekstrak Kental Rimpang Temulawak Menggunakan Metode
Spray Drying............................................................................................................ 51
8. Evaluasi Serbuk Hasil Spray Drying dari Ekstrak Kering Rimpang
Temulawak............................................................................................................... 52
9. Pembuatan nanopartikel ekstrak kering rimpang temulawak dengan
menggunakan metode gelasi ionik dengan rancangan faktorial 2x2 ............... 53
10. Karakterisasi Suspensi Nanopartikel Ekstrak Kering Rimpang
Temulawak............................................................................................................... 53
11. Uji Kelarutan Ekstrak Kental, Ekstrak Kering, dan Nanopartikel Ekstrak
Kering Rimpang Temulawak dalam Berbagai pH ............................................. 55
12. Uji Aktivitas Antidiabetes dari Ekstrak Kental, Ekstrak Kering, dan
Nanopartikel Ekstrak Kering Rimpang Temulawak Menggunakan Metode
Spektrofotomerti UV-Vis Dengan Pereaksi Nelson Somogyi........................... 55
BAB V........................................................................................................................ 60
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................ 61

ii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar II.1 Rimpang temulawak, serbuk simplisia no.mesh 18

rimpang temulawak………………………………...…………..........5
Gambar II.2 Struktur kurkuminoid…………………………..……………….…...8
Gambar II.3 Skema Alat Spray dryer…………………………………………….17
Gambar II.4 Nanotube…………………………...……………………………….26
Gambar II.5 Nanoliposom………………………...……………………………...27
Gambar II.6 Polymeric Misel………………………...……………………………..27
Gambar II.7 Dendrimer……………………………...…………………………...27
Gambar II.8 Nanopartikel Polimer…………………...……………….………….28
Gambar II.9 Metode gelasi ionik…………………………...…………………….30
Gambar II.10 Instrumentasi Spektrofotometer UV-Vis………………...…………37

iii
 DAFTAR TABEL

Tabel II.1 Perbandingan Perbedaan DM tipe satu dan dua ………………………...22

Tabel II.2 Rancangan faktorial 22 ………………………………………………….41
Tabel IV.1 Formula nanopartikel rancangan faktorial 22…………………………...53
Tabel V.1 Jadwal Kegiatan…………………………………………………………60

iv
 BAB I

PENDAHULUAN

A. LATAR BELAKANG
Penderita diabetes mellitus tipe dua di Indonesia menurut survei WHO tahun
2018 sebesar 8,4 juta jiwa. Akibat lebih lanjut dari penyakit tersebut dapat
menyebabkan berbagai gangguan ginjal hingga kebutaan pada usia di bawah 65
tahun (1). Hal ini menjadi ancaman serius jika ditinjau dari aspek penderita dan
perlu penanganan atau perhatian bersama. Pada umumnya, pengobatan penderita
penyakit tersebut di Indonesia menggunakan bahan sintesis seperti golongan
sulfonilurea, biguanida, meglitinida dan tiazolodindion. Selain menggunakan
obat-obat tersebut masyarakat masih banyak menggunakan bahan tanaman
berkhasiat obat seperti sambiloto, salam, dan temulawak (2,3).

Rimpang temulawak (Curcuma xanthorrhiza R.) digunakan oleh

masyarakat untuk pengobatan diabetes melilitus tipe dua dengan cara merebus 5
g rimpang temulawak dengan dua gelas (500mL) air matang. Kurkuminoid
merupakan kandungan utama rimpang temulawak berkhasiat untuk pengobatan
diabetes mellitus tipe dua (3,4). Hasil penelitian yang telah ada seperti yang
dipaparkan pada penelitian sebelumnya, rimpang temulawak dapat digunakan
untuk menurunkan kadar glukosa darah, meningkatkan sensitivitas reseptor
insulin, menurunkan aktivitas enzim glukoneogenesis dan meningkatkan
aktivitas enzim glikolisis (5,6,7).

Terkait dengan rimpang temulawak, tingkat kelarutan dari kurkuminoid

relatif rendah sehingga berpengaruh terhadap daya absorbsinya, akibatnya
ketersediaan hayati di dalam tubuh rendah, serta relatif cepat dimetabolisme
tubuh, sehingga cepat diekskresikan dari dalam tubuh (6). Untuk meningkatkan
kelarutan dan sekaligus bioavaliabilitas kurkuminoid yang rendah, maka

1
diperlukan adanya upaya peningkatan kelarutan melalui teknologi yang dikenal
dengan nanoteknologi (8,9,10,11).

Dalam penelitian ini, rimpang temulawak dimaserasi menggunakan

etanol 96%, karena menghasilkan kadar kurkuminoid yang maksmimum (12).
Untuk meningkatkan stabilitias ekstrak rimpang temulawak, maka dilakukan
pengeringan menggunakan spray drying dengan pengisi maltodekstrin pada suhu
inlet dan outlet optimum (13,14).

Aplikasi nanoteknologi sebagai sistem penghantaran obat telah banyak

diteliti. Dengan nanoteknologi, maka penghantaran obat dapat dioptimalkan
hingga pada sasaran sel target tertentu. Ekstrak rimpang temulawak kering
diformulasikan ke dalam bentuk nanopartikel dengan metode gelasi ionik karena
merupakan metode yang sederhana, memiliki efektivitas penjerapan dalam
rentang 86,6% - 93,21% (15,16). Dalam metode ini digunakan pembawa polimer
kitosan dengan crosslinker natrium tripolifosfat yang menghasilkan suspensi
nanopartikel, yang selanjutnya dilakukan karakterisasi nanopartikel rimpang
temulawak meliputi: morfologi partikel, ukuran dan distribusi ukuran partikel,
potensial zeta, dan efisiensi penjerapan.

Agar dapat ditentukan formulasi optimum nanopartikel ekstrak kering

rimpang temulawak, maka dalam penelitian ini digunakan rancangan faktorial
22 dengan dua faktor atau variabel bebas yaitu konsentrasi ekstrak dan
perbandingan jumlah kitosan dengan natrium tripolifosfat pada masing – masing
level rendah dan tinggi. Guna menentukan aktivitas antidiabetesnya maka
dilakukan uji in-vitro menggunakan metode Nelson Somogyi dengan alat
spektrofotometer UV-Vis yang sebelumnya telah divalidasi.

2
B. PERUMUSAN MASALAH
Rimpang temulawak memiliki kandungan utama yaitu kurkuminoid yang
berkhasiat sebagai antidiabetes, namun kurkuminoid memiliki kelarutan yang
rendah sehingga daya absorbsinya rendah dan menyebabkan ketersediaan
hayatinya rendah, serta relatif cepat dimetabolisme tubuh sehingga cepat
diekskresikan dari tubuh. Untuk meningkatkan kelarutan sekaligus ketersediaan
hayati kurkuminoid, maka diformulasikan ke dalam bentuk nanopartikel metode
gelasi ionik. Guna menentukan aktivitas antidiabetes kurkuminoid, dilakukan uji
secara in-vitro menggunakan metode Nelson Somogyi dengan alat
spektrofotometer UV-Vis yang telah tervalidasi. Maka dalam penelitian ini:
1. Apakah formulasi nanopartikel ekstrak kering rimpang temulawak metode
gelasi ionik dapat meningkatkan aktivitas antidiabetes dibandingkan dengan
ekstrak kental dan ekstrak kering rimpang temulawak melalui uji secara in-
vitro menggunakan metode Nelson Somogyi dengan alat spektrofotometer
UV-Vis yang telah tervalidasi?
2. Apakah diakhir penelitian dapat ditentukan formula optimum dari
nanopartikel ekstrak kering rimpang temulawak metode gelasi ionik dengan
rancangan faktorial 22?

C. TUJUAN PENELITIAN
1. Memperoleh ekstrak kental rimpang temulawak dengan maserasi
menggunakan etanol 96%
2. Melakukan pengeringan ekstrak kental rimpang temulawak menggunakan
metode spray drying dengan pengisi maltodektrin
3. Memformulasikan ekstrak kering rimpang temulawak ke dalam bentuk
nanopartikel menggunakan kitosan dan natrium tripolifosfat dengan metode
gelasi ionik
4. Melakukan karakterisasi suspensi nanopartikel ekstrak kering rimpang
temulawak

3
 5. Menentukan uji kelarutan dari ekstak kental, ekstrak kering, dan nanopartikel
ekstrak kering rimpang temulawak dalam berbagai pH
6. Melakukan validasi metode Nelson Somogyi untuk menentukan aktivitas
antidiabetes secara in-vitro dengan alat Spektrofotometer UV-Vis
7. Menetapkan aktivitas antidiabetes ekstrak kental, ekstrak kering, dan
nanopartikel ekstrak kering rimpang temulawak dengan metode Nelson
Somogyi menggunakan metode Spektrofotometri UV-Vis.
8. Menentukan formula optimum yang memenuhi persyaratan mutu baik secara
fisika maupun kimia berdasarkan persayaratan yang ada.

D. MANFAAT PENELITAN
Dari hasil penelitian ini, diharapkan dapat memberikan pengetahuan dan manfaat
tentang:

1. Metode ekstraksi rimpang temulawak dengan maserasi etanol 96%

2. Metode pengeringan ekstrak kental rimpang temulawak menggunakan Spray
Drying dengan pengisi maltodekstrin
3. Formulasi nanopartikel ekstrak kering rimpang temulawak menggunakan
kitosan dan natrium tripolifosfat dengan metode gelasi ionik
4. Karakterisasi suspensi nanopartikel ekstrak kering rimpang temulawak
5. Kelarutan ekstak kental, ekstrak kering, dan nanopartikel ekstrak kering
rimpang temulawak dalam berbagai pH
6. Validasi metode Nelson Somogyi untuk menentukan aktivitas antidiabetes
secara in-vitro dengan alat Spektrofotometer UV-Vis
7. Uji aktivitas antidiabetes ekstrak kental, ekstrak kering, dan nanopartikel
ekstrak kering rimpang temulawak dengan metode Nelson Somogyi
menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis
8. Formula optimum yang memenuhi persyaratan mutu baik secara fisika
maupun kimia berdasarkan persayaratan yang ada.

4
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. RIMPANG TEMULAWAK (Curcuma xanthorrhiza Roxb.)

(a) (b)
Gambar II.1(a) Rimpang Temulawak ; (b) Serbuk Simplisia No.Mesh 18
Rimpang Temulawak (17)

1. Tinjauan Botani

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta

Sub divisi : Angiospermae

Kelas : Monocotyledonae

Bangsa/ordo : Zingiberales

Suku : Zingiberaceae

Marga : Curcuma

Jenis : Curcuma xanthorrhiza Roxb.

Nama Umum : Temulawak

Nama Daerah : Temulawak (Sumatera), Temulobak (Madura),

Kong gede (Sunda).

5
2. Morfologi Tanaman
a. Batang
Tanaman temulawak adalah tanaman berbatang basah yang merupakan
batang semu, terdiri atas gabungan beberapa pangkal daun yang terpadu
dengan tinggi bisa mencapai 1 m, tetapi tidak akan lebih dari 2 m,
berwarna hijau atau cokelat gelap. Tanaman tahunan ini tumbuh
berumpun. Tanaman ini berbatang semu kering di padang alang-alang,
ditanam, atau tumbuh secara liar di tegalan; tumbuh diketinggian tempat
yang berjarak 5 m sampai dengan 1500 m diatas permukaan laut.
b. Daun
Daun tanaman temulawak berbentuk memanjang kemudian juga sedikit
lebar. Daun berbentuk lanset. Lamina daun, lalu seluruh ibu tulang daun
bergaris hitam. Panjang daun sekitar 50 – 55 cm dan lebar sekitar 15 cm,
warna daun hijau tua dengan garis cokelat keunguan. Setiap tumbuhan
mempunyai dua helai daun, dengan jumlah anakan perumpun berkisar
antara 3 – 9 anak.
c. Bunga
Bunga tanaman temulawak merupakan bunga yang dapat berbunga
secara terus – menerus sepanjang tahun secara bergantian, lalu proses
keluar dari rimpangnya (tipe erantha), atau dapat keluar dari samping
batang semunya setelah tanaman cukup dewasa. Bunganya mempunyai
daun pelindung yang berjumlah banyak dan berukuran besar. Bentuk
bunga tanaman temulawak adalah bulat telur yang warnanya bermacam-
macam. Kelopak bunga temulawak berwarna putih dan berbulu dengan
panjang sekitar 8-13 mm, mahkota berbentuk seperti tabung dengan
panjang keseluruhan 4,5 cm, helaian bunga berbentuk bulat memanjang,
berwarna putih dengan ujungnya berwarna merah, panjangnya sekitar
1,25-2 cm dengan lebar 1 cm.

6
 d. Rimpang
Rimpang induk temulawak berbentuk bulat seperti telur, ukurannya
besar, sedangkan rimpang cabang terdapat di bagian samping yang
berbentuk memanjang. Tiap tanaman mempunyai rimpang cabang 3-4
buah, warna rimpang cabang umumnya lebih muda dibandingkan dengan
rimpang induk. Warna kulit rimpang induk baik usia muda maupun tua
berwana kuning gelap, atau cokelat kemerahan. Warna daging rimpang
yaitu kuning atau jingga tua dengan cita rasanya yang sangat pahit, atau
cokelat kemerahan yang mempunyai bau menyengat, serta
keharumannya yang sedang. Rimpang terbentuk dalam tanah pada
kedalaman lebih dari 16 cm. Tiap rumpun tanaman temulawak umumnya
memiliki enam buah rimpang tua dan lima buah rimpang muda.
e. Akar
Sistem perakaran pada tanaman temulawak adalah akar serabut. Akar-
akarnya melekat dan keluar dari rimpang induk. Panjang akarnya berkisar
antara 25 cm dan letaknya pun tidak beraturan (18,19).
3. Khasiat Rimpang Temulawak
Rimpang Curcuma xanthorrhiza juga memiliki bioaktivitas yang berkhasiat
sebagai antidiabetes, antimikroba, antioksidan, antiinflamasi, dan
antikolesterol. Rimpang Temulawak juga berkhasiat untuk pelancar air susu
ibu, penyegar badan, pelega perut, dan obat kejang (7,20).

4. Identitas Simplisia Tanaman Temulawak

Pemerian: Bau khas, rasa tajam dan agak pahit. Berupa keping tipis, bentuk
bundar atau jorong, ringan, keras, rapuh, garis tenga hingga 6 cm, tebal 2-5
mm, permukaan luar berkerut, warna cokelat kekuningan hingga cokelat;
bidang irisan berwarna cokelat kuning buram, melengkung tidak beraturan,
tidak rata, sering terdapat tonjolan melingkar pada batas antara silinder pusat
dengan korteks; korteks sempit, tebal 3-4 mm. Bekas patahan berdebu, warna
kuning, jingga hingga cokelat jingga terang.
Mikroskopik: Fragmen pengenal adalah berkas pengangkut, parenkim
korteks, serabut sklerenkim, butir amilum dan jaringan gabus.

7
 Senyawa identitas: Kurkuminoid
Strukur kimia:

Gambar II.2. Struktur Kurkuminoid (Kurkumin, demetoksikurkumin, dan bis-

demetoksikurkumin) (21)
5. Kandungan Rimpang Temulawak
Rimpang Temulawak adalah rimpang dari Curcuma xanthorrhiza Roxb.,
suku Zingiberaceae, mengandung minyak atsiri tidak kurang dari 5,80% v/b
dan kurkuminoid tidak kurang dari 4,0% dihitung sebagai kurkumin (22).
a. Kurkuminoid
Rimpang temulawak mengandung kurkuminoid yaitu suatu zat yang
terdiri dari campuran komponen senyawa yang bernama kurkumin,
demetoksikurkumin, dan bis-demetoksikurkumin yang mempunyai
warna kuning atau jingga. Kurkuminoid mempunyai aroma khas dan
tidak toksik.
b. Minyak Atsiri
Minyak atsiri dalam temulawak terdiri dari senyawa turunan seskuiterpen
keton. Senyawa p-tolilmetilkarbinil memiliki aktivitas farmakologi
sebagai antibakteri yang lebih kuat dibandingkan kurkuminoid. Minyak
atsiri berbentuk cairan kuning atau kuning jingga dengan bau aromatik
khas. Minyak atsiri temulawak mengandung phelandren, kamfer,
borneol, xanthorrhizol, turmerol, dan sineal.

8
 c. Pati
Pati berbentuk serbuk, warna putih kekuningan karena mengandung
spora kurkuminoid, mempunyai bentuk bulat telur sampai lonjong
dengan salah satu ujungnya persegi, ukuran antara 33 – 100 m dengan
ukuran rerata 60 m, letak hilus tidak sentral, terdapat lamela yang tidak
konsentri. Pati merupakan kandungan terbesar dalam temulawak. Pati
temulawak mengandung zat gizi antara lain karbohidrat, lemak, protein
dan serat kasar mineral seperti kalium (K), magnesium (Mg), zat besi
(Fe), natrium (Na), mangan (Mn), dan cadmium (Cd).
Persyaratan Mutu : Susut pengeringan tidak lebih dari 13% <111>
Abu total tidak lebih dari 4,8%
Abu tidak larut asam tidak lebih dari 0,7%
Sari larut air tidak kurang dari 9,1% <91>
Sari larut etanol tidak kurang dari 3,6% <92>
Kandungan kimia: mengandung saponin, flavonoida dan minyak atsiri (22).
6. Kurkumin
Rumus molekul : C21 H20 O6
Bobot molekul : 36,38 g/mol
Pemerian : Serbuk kristal berwarna jingga, rasa pahit, berbau khas
sampai berbau lemah
Kelarutan : Larut dalam etanol, aseton, asam asetat glasial, alkali
hidroksida, dan aseton. Sukar larut dalam air (3,12
mg/L suhu 25c). Tidak larut dalam eter dan heksana.
pH : 4,5 (dalam ekstrak etanol)

Reaksi warna : Dalam suasana basa (pH > 7) berwana merah tua

Dalam suasana asam (pH < 7) berwana kuning terang

Khasiat : Antidiabetik, antiinflamasi, antiviral, antifungial,

Antikarsinogenik, antiprotozoal, dan antikanker
Stabilitas : Peka terhadap cahaya, mudah teroksidasi oleh udara
(23).

9
7. Stabilitas Kurkumin
Pada struktur senyawa kurkumin terdapat dua gugus fenolik, sehingga satu
molekul kurkumin dapat menangkal dua radikal bebas. Sifat kimia kurkumin
yang menarik adalah perubahan warna akibat perubahan pH lingkungan.
Dalam suasana asam, kurkumin berwarna kuning terang atau jingga, sedang
dalam suasana basa berwarna merah, hal tersebut dapat terjadi karena adanya
sistem tautomeri pada molekulnya.
Struktur isometrik trans – trans kurkumin merupakan struktur dalam
bentuk molekul yang tidak terdisosiasi dan paling stabil pada pH 1-7, namun
dalam bentuk ini kelarutan air sangat rendah. Kurkumin dalam larutan berair
akan mengalami degradasi hidrolitik. Untuk mendapatkan stabilitas yang
optimum dari kurkumin, disarankan agar memperthankan larutan kurkumin
pada pH < 7. Pada pH lingkungan > 7 kurkumin sangat tidak stabil dan
mengalami disosiasi dalam tiga tingkat yaitu pada pH 7,78 – 7,8 dan pH 9,5.
Pada suasana basa kurkumin dapat pula mengalami degradasi
membentuk asam ferulat dan feruoilmetan. Degradasi terjadi bila kurkumin
berada dalam lingkungan pH 8,5 – 10, dalam waktu relatif lama. Degradasi
sangat dipengaruhi suhu lingkungan sehingga degradasi terjadi dalam waktu
singkat. Degradasi alkali kurkumin, demetoksikurkumin, bis-
demetoksikurkumin baik berupa komponen murni maupun dari sumber
oleoresin komersial. Akan mengikuti kinetika pseudo orde satu. Konstanta
profil laju konstan sangat dekat berdisosiasi dengan kurva polinomial.
Konstanta laju degradasi meningkat dari pH 7,45 dan mencapai maksimal
pada pH 10,2 serta cenderung menurun pada pH yang lebih tinggi. Laju
degradasi meningkat mulai dari bis-demetoksikurkumin, kurkumin, dan
demetoksikurkumin (23).
8. Ekstrak Kental Rimpang Temulawak
Ekstrak kental rimpang temulawak adalah ekstrak yang dibuat dari rimpang
Curcuma xanthorrhiza Roxb., suku Zingiberaceae, mengandung minyak
atsiri tidak kurang dari 4,60% v/b dan kurkuminoid tidak kurang dari 14,20%
dihitung sebagai kurkumin.

10
 Pemerian: Ekstrak kental; warna kuning kecokelatan; bau khas; rasa pahit
Persyaratan Mutu : Kadar tidak lebih dari 10% <83>
Abu total tidak lebih dari 7,8% <81>
Abu tidak larut asam tidak lebih dari 1,6% <82> (22)

B. SIMPLISIA DAN METODE EKSTRAKSI

1. Simplisia
Simplisia adalah bahan alamiah yang dipergunakan sebagai obat yang belum
mengalami pengolahan apapun kecuali dinyatakan lain, berupa bahan yang
telah dikeringkan. Simplisia dapat dibedakan menjadi simplisia nabati,
hewani, dan pelikan (mineral). Simplisia nabati adalah simplisia yang berupa
tumbuhan utuh, bagian tumbuhan, atau eksudat tumbuhan. Untuk
mengontrol kualitas simplisia yang digunakan, dilakukan karakterisasi
simplisia berupa penentuan kadar bahan organik asing dan pembuatan serbuk
4/18. Karakterisasi simplisia terdiri dari:
a. Bahan Organik Asing
Bahan organik asing merupakan bagian tanaman atau seluruh tanaman
asal simplisia, tertera atau jumlahnya dibatasi dalam uraian atau pemerian
dalam monografi yang bersangkutan, atau hewan asing, utuh, atau
bagiannya, atau zat yang dikeluarkan hewan asing kecuali dinyatakan
lain, yang dimaksud dengan bahan organik asing pada simplisia nabati
adalah bahan organik yang berasal dari tanaman
b. Derajat Kehalusan Simplisia
Derajat halus simplisia merupakan ukuran partikel serbuk simplisia yang
dinyatakan dengan angka. Kecuali dinyatakan lain, derajat halus
simplisia 4/18 memiliki pengertian bahwa semua serbuk dapat melalui
pengayak nomor 4 dan tidak lebih dari 40% serbuk dapat melalui
pengayak nomor 18 (24).

11
2. Ekstrak dan Metode Ekstraksi
Berdasarkan Farmakope Indonesia Edisi V disebutkan bahwa definisi ekstrak
adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif dari
simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai.
Kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk
yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi konsistensi baku
yang telah ditetapkan (25).
Ekstraksi adalah suatu teknik pemisahan secara fisika berdasarkan
perbedaan kepolaran dengan cara menarik kandungan kimia yang dapat larut
pada pelarut cair sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut pada
pelarut cair. Senyawa aktif yang terdapat dalam berbagai simplisia dapat
digolongkan ke dalam metabolit sekunder seperti: alkaloid, flavonoid,
minyak atsiri, dan lain-lain. Struktur kimia yang berbeda-beda akan
mempengaruhi kelarutan serta stabilitas senyawa-senyawa tersebut terhadap
pemanasan, udara, cahaya, logam berat, dan derajat keasaman. Dengan
diketahuinya senyawa aktif yang dikandung dalam simplisia akan
mempermudah pemilihan pelarut dan cara ekstraksi yang tepat. Simplisia
seperti rimpang dan daun mudah diserap oleh pelarut, karena itu pada proses
ekstraksi tidak perlu diserbuk sampai halus, namun simplisia seperti biji,
kulit kayu dan kulit akar susah diserap oleh pelarut, oleh karena itu perlu
diserbuk sampai halus. Standarisasi kadar senyawa aktif merupakan syarat
mutlak mutu ekstrak yang diproduksi. Oleh sebab itu setiap ekstrak harus
distandarisasi. Ada dua metode ekstraksi dengan pelarut yang sesuai, yaitu:
a. Metode Ekstraksi Cara Panas
1) Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik
didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah terbatas yang relatif
konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan
pengulangan proses pada residu pertama 3-5 kali sehingga dapat
termasuk proses ekstraksi sempurna.

12
 2) Soxhlet
Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang
umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi
kontinu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya
pendingin balik.
3) Digesti
Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada
temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan (kamar), yaitu
secara umum dilakukan pada temperatur 40 – 50C.
4) Infus
Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas
air (bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur
terukur 96-98C) selama waktu tertentu (15 – 20 menit).
5) Dekok
Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama (~30C) dan
temperatur sampai titik didih air.
b. Metode Ekstraksi Cara Dingin
1) Maserasi
Merasi adalah proses pemisahan senyawa simplisia dengan
menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau
pengadukan pada temperatur ruangan (kamar). Secara teknologi
termasuk ekstraksi dengan prinsip metode pencapaian konsentrasi
pada keseimbangan. Maserasi kinetik berarti dilakukan pengadukan
kontinu (terus-menerus). Remaserasi berarti dilakukan pengulangan
penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserat pertama,
dan seterusnya sampai diperoleh maserat yang sempurna.
2) Perkolasi
Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai
sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada
temperatur ruangan. Proses terdiri dari tahapan pengembangan
bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya

13
 (penetesan/penampungan ekstrak), terus menerus sampai diperoleh
ekstrak (perkolat) yang jumlah 1 – 5 kali bahan (24,26).
c. Destilasi Uap
Destilasi uap adalah ekstraksi senyawa kandungan yang mudah menguap
(minyak atsiri) dari bahan (segar atau simplisia) dengan uap air
berdasarkan peristiwa tekanan parsial senyawa kandungan menguap
dengan fase uap air dari ketel secara kontinu sampai sempurna dan
diakhiri dengan kondensasi fase uap campuran (senyawa kandungan ikut
terdestilasi) menjadi destilat air bersama senyawa kandungan yang
memisah sempurna atau memisah sebagian. Sebagian besar ekstrak
dibuat dengan mengekstraksi bahan baku obat secara perkolasi. Ekstrak
cair yang cenderung membentuk endapan didiamkan lalu disaring atau
bagian yang bening dituangkan (dekantasi). Beningan yang diperoleh
harus memenuhi persyaratan yang tercantum pada Farmakope. Ekstrak
cair dapat dibuat dengan metode ekstraksi yang sesuai.
d. Proses Pembuatan Ekstrak
1) Pembuatan serbuk simplisia dan klasifikasinya
Proses awal pembuatan ekstrak yaitu dilakukan pembuatan serbuk
simplisia kering (penyerbukan). Dari simplisia kering dibuat serbuk
simplisia dengan menggunakan peralatan tertentu sampai derajat
kehalusan tertentu. Proses ini dapat mempengaruhi mutu ekstrak,
oleh karena itu harus diperhatikan hal dasar sebagai berikut:
a) Makin halus serbuk simplisia, proses ekstraksi makin efektif dan
efisien, namun semakin sulit secara teknologi peralatan untuk
tahapan filtrasi (penyaringan)
b) Selama penggunaan peralatan penyerbukan dimana ada gerakan
dan interaksi antara serbuk simplisia dengan benda keras (logam
dll), maka akan menyebabkan timbulnya panas (kalori) yang
dapat mempengaruhi senyawa kandungan. Namun hal ini dapat
diatasi dengan menggunakan nitrogen cair.

14
2) Cairan Pelarut
Cairan pelarut pada proses pembuatan ekstrak senyawa kandungan
yang berkhasiat (senyawa aktif) harus menggunakan pelarut yang
baik (optimal), dengan demikian senyawa tersebut dapat terpisahkan
dengan sempurna dari bahan atau senyawa kandungan lainnya,
sehingga ekstrak yang dihasilkan hanya mengandung sebagian besar
senyawa kandungan berkhasiat yang diinginkan. Dalam hal ekstrak
total, maka cairan pelarut dipilih yang dapat melarutkan hampir
seluruh metabolit sekunder yang terkandung. Faktor utama
pertimbangan pemilihan cairan pelarut yang baik adalah sebagai
berikut:
a) Selektivitas
b) Keamanan
c) Kemudahan bekerja dan proses dengan cairan tersebut
d) Ekonomis
e) Ramah Lingkungan.
3) Separasi dan pemurnian
Tujuan dari tahapan ini adalah menghilangkan (memisahkan)
senyawa yang tidak dikehendaki semaksimal mungkin tanpa
mempengaruhi senyawa kandungan yang diinginkan, sehingga
diperoleh ekstrak yang lebih murni. Proses-proses pada tahapan ini
yaitu pengendapan, pemisahan dua cairan tak campur, sentrifugasi,
dekantasi, filtrasi, proses adsorbsi dan penukaran ion.
4) Pemekatan/ Penguapan (vaporasi dan evaporasi)
Pemekatan diartikan sebagai peningkatan jumlah parsial solut
(senyawa terlarut) dengan menguapkan pelarut sampai menjadi
ekstrak dengan konsistensi kental dan tidak sampai kondisi ekstrak
kering.
5) Pengeringan Ekstrak
Pengeringan berarti menghilangkan hampir seluruh atau seluruh
pelarut dari bahan, sehingga menghasilkan serbuk. Massa kering-

15
 rapuhnya bahan tergantung dari proses dan peralatan yang digunakan.
Berbagai proses pengeringan ekstrak, yaitu dengan cara:
a) Pengeringan Evaporasi
b) Pengeringan Vaporasi
c) Pengeringan Sublimasi
d) Pengeringan Konveksi
e) Pengeringan Kontak
f) Pengeringan Radiasi
g) Pengeringan Dielektrik
6) Perhitungan Rendemen
Rendemen adalah perbandingan ekstrak yang diperoleh dengan bobot
simplisia awal (26).

C. PENGERING SEMPROT
Pengeringan merupakan metode mengeluarkan atau menghilangkan air dari
suatu bahan dengan cara menguapkannya sampai kadar air seimbang dengan
kelembaban relatifnya. Tujuan pengeringan digunakan untuk mengurangi kadar
air, untuk menjamin stabilitas pada masa simpan, mencegah pertumbuhan jamur,
serta mencegah terjadinya proses atau reaksi enzimatika yang dapat menurunkan
mutu bahan tersebut (26). Semakin tinggi suhu udara, maka pengeringan
semakin efektif, namun demikian daya tahan bahan terhadap panas harus
diperhatikan (14).
Pengeringan semprot merupakan perubahan bentuk basah (larutan,
suspensi, pasta) dengan kadar air tinggi menjadi berbagai bentuk dan kualitas
kering segera setelah proses penyemprotan.
Pengeringan semprot diaplikasikan dalam industri farmasi pada 1940-an untuk
mengeringkan bahan kimia berharga seperti: antibiodi, analgesik, antasida, dan
bahan kimia lainnya. Seiring perkembangan teknologi pengeringan semprot

16
digunakan sebagai teknologi mikroenkapsulasi, khususnya untuk komponen
bioaktif dan berbagai komponen fungsional lain.
Dalam proses pengeringan semprot, bahan yang akan dikeringkan
umumnya memiliki kandungan padatan total dengan syarat sebesar 30-50 %
(27).

Gambar II.3. Skema Pengeringan pada Alat Spray Dryer (28)

1. Proses pengeringan semprot memiliki beberapa tahap, yaitu :
a. Pengkabutan bahan (atomisasi bahan) yaitu suatu proses yang akan
mendesak bahan atau umpan melalui nozel atau atomizer (alat
penyemprot), sehingga mengubah cairan menjadi butiran – butiran kecil.
Atomisasi adalah proses pembentukan butiran – butiran lembut seperti
kabut. Atomisasi akan menghasilkan partikel dengan ukuran yang sangat
kecil, sehingga luas permukaan total dari partikel – partikel tersebut akan
menjadi sangat besar
b. Sesaat setelah disemprotkan dari nozel atau atomizer, maka butiran –
butiran halus tersebut seketika terpapar dengan panas pada ruang
pemanas dengan segera hal tersebut terjadi karena ukurannya yang kecil,
sehingga air yang dikandungnya akan mengalami penguapan yang
menghasilkan butiran kering yang akan terkumpul sebagai bubuk kering
c. Sekitar 80% air akan terevaporasi dalam beberapa detik saat partikel
tersebut keluar dari atomizer. Proses pengeringan dapat dianalisis dalam
dua tahap; yaitu laju konstan (constant rate) dimana suhu butiran tetap
berada pada suhu bola basah (wet bulb temperature), dilanjutkan dengan

17
 tahap laju menurun (failing rate) yang ditandai dengan melambatnya
difusi air ke permukaan butiran
d. Terbentuknya lapisan (kerak) di permukaan butiran dan suhu butiran
produk mulai meningkat mendekati suhu udara pemanas. Diperlukan
adanya penyebar udara (air disperser) yang akan mendorong dan
menyebarkan udara panas kedalam pengering dan terjadi interaksi
dengan butiran – butiran kecil bahan sehingga serentak dan seragam.
Umumnya penyebar udara berupa pelat berlubang yang dipasangkan
bagian atas dengan alat pengabut (atomizer)
e. Setelah penyemprotan dan pengeringan, bubuk kering yang diperoleh
dikumpulkan dengan alat pengumpul yang berbentuk corong (cone-
shaped apparatus) di bagian bawah ruang pengering. Secara otomatis,
bubuk terkumpul, kemudian dikeluarkan melalui system “airlock” pada
ujung corong.
2. Keuntungan dan kerugian pengeringan semprot, yaitu:
a. Keuntungan:
1) Waktu pengeringan sangat pendek (evaporasi/penguapan air dalam
jumlah besar dalam waktu pendek (dalam satuan detik) karena
luasnya permukaan penguapan)
2) Dioperasikan secara sinambung dengan produktivitas tinggi
3) Suhu partikel tetap rendah karena cepatnya penguapan
4) Memungkinkan melakukan pengeringan dengan menggunakan
atmosfer lembab (inert)
5) Pengendalian sifat – sifat dan mutu produk cukup efektif
6) Alat dapat dioperasikan secara otomatis
7) Produk yang dihasilkan bisa dalam bentuk serbuk, tepung (bubuk)
dengan ukuran partikel relatif seragam
8) Untuk mengeringkan bahan – bahan yang tahan terhadap pemanasan
9) Dapat mengubah bentuk fisik bahan sehingga digunakan dalam
pembuatan tablet dan kapsul.

18
 b. Kerugian:
1) Perlu investasi awal yang relatif tinggi. Pengering semprot
merupakan teknik pengeringan yang mahal jika dibandingkan dengan
teknik pengeringan yang lain
2) Biaya tinggi ini karena diperlukan pengadaan sistem permanenan
produk (product recovery)
3) Bubuk yang dihasilkan biasanya mempunyai densitas kamba (bulk
density) yang rendah
4) Pada umumnya prosesnya tidak cukup fleksibel, karena hanya dapat
digunakan pada produk cair dengan kekentalan tertentu (29).
3. Penentuan Konsentrasi Padatan Total
Ekstrak kental diletakkan ke dalam cawan dan ditambahkan avicel.
Kemudian, kedua bahan dicampur sampai homogen dan dikeringkan di
dalam oven 150C sampai diperoleh bobot tetap, dengan kandungan padatan
total sebesar 30-50 %. Dilakukan hitungan konsentrasi padatan total dengan
rumus berikut :
[Bobot konstan − (Bobot cawan + Maltodesktrin)]
% Padatan Total = x 100 %
Volume ekstrak rimpang temulawak

D. MALTODEKSTRIN
Bahan yang digunakan dalam pengering semprot yaitu maltodekstrin.
Maltodekstrin adalah produk modifikasi pati, hasil hidrolisis secara kimia
maupun enzimatis dengan DE (dextrose equivalent). Maltodekstrin adalah
polimer glukosa dengan panjang rantai rata – rata berkisar 5 – 10 unit glukosa
per molekulnya. Maltodekstrin digunakan sebagai bahan pengisi, pengganti
lemak dan bahan tambahan pada minuman instan. Konsentrasi yang digunakan
sebagai bahan pengisi yaitu sebesar 40-65%. Semakin tinggi nilai DE, maka daya
larut dalam airnya semakin tinggi pula. Nilai DE yang tinggi menunjukkan
semakin sedikit jumlah polimer rantai panjang dan bercabang, sehingga semakin
mudah terhidrolisis dan larut dalam air (30).

19
E. DIABETES MELLITUS

1. Definisi Diabetes Mellitus (DM)

Menurut WHO (World Health Organization), Diabetes Melitus (DM)
diartikan sebagai penyakit kronis serius yang terjadi didalam tubuh ditandai
dengan meningkatknya kadar glukosa dalam darah karena pankreas tidak
menghasilkan cukup insulin (hormon yang mengatur glukosa darah), atau
ketika tubuh tidak dapat menggunakan insulin yang dihasilkannya secara
efektif. Diabetes adalah masalah kesehatan masyarakat yang penting,
menjadi salah satu dari empat penyakit tidak menular prioritas yang menjadi
target tindak lanjut oleh para pemimpin dunia. Jumlah kasus dan prevalensi
diabetes terus meningkat selama beberapa dekade terakhir (1). Insulin
merupakan hormon yang diproduksi didalam kelenjar pankreas tubuh,
sebagai alat transportasi glukosa dari peredaran darah menuju sel tubuh yang
mengubah glukosa menjadi energi. Oleh karena itu, kekurangan insulin atau
ketidakmampuan sel tubuh untuk memproduksi insulin dapat menyebabkan
peningkatan kadar glukosa dalam darah atau hiperglikemia (31).

2. Klasifikasi Diabetes Mellitus

Pada tahun 1968, ADA (American Diabetes Association) mengajukan
rekomendasi mengenai standarisasi uji toleransi glukosa dan mengajukan
istilah – istilah Pre-diabetes, Suspected Diabetes, Chemical atau Latent
Diabetes dan Overt Diabetes untuk pengklasifikasiannya. Pada tahun 1965,
WHO mengajukan beberapa istilah dalam pengklasifikasian diabetes, antara
lain Childhood Diabetics, Young Diabetics, Adult Diabetics dan Elderly
Diabetics. Pada tahun 1980, WHO mengemukakan klasifikasi baru diabetes
mellitus memperkuat rekomendasi National Diabetes Data Group pada tahun
1979 yang mengajukan 2 tipe utama diabetes mellitus, yaitu dan “Insulin-
Dependent Diabetes Mellitus” (IDDM) disebut juga Diabetes Mellitus Tipe
1 dan “Non-Insulin-Dependent Diabetes Mellitus” (NIDDM) yang disebut
juga Diabetes Mellitus Tipe 2.
Klasifikasi Diabetes Mellitus Berdasarkan Etiologinya (32):

20
a. Diabetes Mellitus Tipe 1:
Dekstruksi sel  umumnya menjurus kearah defisiensi insulin absolut
1) Melalui proses imunologik (Autoimunologik)
2) Idiopatik
b. Diabetes Mellitus Tipe 2:
Bervariasi, mulai yang resistensi insulin dominan disertai defisiensi
insulin relatif, sampai yang predominan disertai gangguan sekresi insulin
bersama resistensi insulin
c. Diabetes Mellitus Tipe Lain
1) Defek genetik fungsi sel 
2) Defek genetik kerja insulin
3) Penyakit eksokrin pankreas:
a) Pankreatitis
b) Trauma/Pankreatektomi
c) Neoplasma
d) Cistic Fibrosis
e) Hemokromatosis
f) Pankreatopati fibro kalkulus
4) Endokrinopati
a) Akromegali
b) Sindroma Cushing
c) Feokromositoma
d) Hipertiroidisme
5) Diabetes karena obat/zat kimia: Glukokortikoid, hormon tiroid, asam
nikotinat, pentamidin, vacor, tiazid, dilantin, interferon
6) Diabetes karena infeksi G. Diabetes Imunologi (jarang)
7) Sidroma genetik lain: Sindroma Down, Klinefelter, Turner,
Huntington, Chorea, Prader Willi

21
 Tabel II.1 Perbedaan Diabetes Mellitus tipe 1 dan 2

Perbedaan DM Tipe 1 DM Tipe 2

Mula muncul Umumnya masa kanak- kanak Pada usia tua, umumnya >
dan remaja, walaupun ada juga 40 tahun
pada masa dewasa < 40 tahun
Keadaan klinis saat Berat Ringan
diagnosis
Kadar insulin darah Rendah, tak ada Cukup tinggi, normal
Berat badan Biasanya kurus Gemuk atau normal
Pengelolaan yang Terapi insulin, diet, olahraga Diet, olahraga, hipoglikemik
disarankan oral
3. Prinsip Terapi Diabetes Mellitus Tipe II
Berdasarkan mekanisme kerjanya, obat – obat antidiabetes dibagi menjadi
golongan, yaitu:
a. Obat – obat yang meningkatkan sekresi insulin, meliputi obat
antidiabetes oral golongan sulfonilurea dan glinida (meglitinida dan
turunan fenilalanin)
b. Sensitiser insulin (obat – obat yang dapat meningkatkan sensitifitas sel
terhadap insulin), meliputi obat – obat antidiabetes golongan buguanida
dan tiazolidindion, yang dapat membantu tubuh untuk memanfaatkan
insulin secara lebih efektif
c. Inhibitor katabolisme karbohidrat, antara lain inhibitor enzim -
glukosidase yang bekerja menghambat absorpsi glukosa dan umum
digunakan untuk mengendalikan hiperglikemia post-prandial (post-meal
hyperglycemia). Disebut juga “starch-blocker”
Diabetes Mellitus tipe dua merupakan tipe diabetes yang lebih umum,
penderita DM tipe dua mencapai 90 – 95% dari keseluruhan populasi
penderita diabetes. Faktor genetik dan pengaruh lingkungan cukup besar
dalam menyebabkan terjadinya DM tipe dua, antara lain: obesitas, diet tinggi
lemak dan rendah serat, perubahan gaya hidup, serta kurangnya olahraga.
Obesitas atau kegemukan merupakan salah satu faktor predisposisi utama.

22
 Perbedaan penderita DM tipe satu dengan penderita DM tipe dua yaitu
berada pada tahap awal, umumnya dapat dideteksi dengan jumlah insulin
yang cukup di dalam darahnya, disamping kadar glukosa yang juga tinggi.
Oleh karena itu, awal patofisiologis DM tipe dua bukan disebabkan oleh
kurangnya sekresi insulin, tetapi karenal sel – sel sasaran insulin gagal atau
tidak mampu merespon insulin secara normal. Keadaan ini lazim disebut juga
“Resistensi Insulin”.
Disamping resistensi insulin, pada penderita DM tipe dua juga dapat
timbul karena gangguan sekresi insulin atau produksi glukosa hepatik yang
berlebihan. Namun demikian, tidak terjadi pengerusakan sel – sel -
Langerhans secara autoimun sebagaimana yang terjadi pada DM tipe satu.
Dengan demikian, defisiensi fungsi insulin pada penderita DM tipe dua
hanya bersifat relatif, tidak absolut. Oleh sebab itu dalam penanganannya
umumnya tidak memerlukan terapi pemberian insulin.
Berdasarkan uji toleransi glukosa oral, penderita DM tipe dua dapat dibagi
menjadi empat kelompok:
a. Kelompok yang hasil uji toleransi glukosanya normal
b. Kelompok yang hasil uji toleransi glukosanya abnormal, disebut juga
Diabetes Kimia (Chemical Diabetes)
c. Kelompok yang menunjukkan hiperglikemia puasa minimal (kadar
glukosa plasma puasa < 140mg/dl)
d. Kelompok yang menunjukkan hiperglikemia puasa tinggi (kadar glukosa
plasma puasa > 140mg/dl) (33).

F. Uji Aktivitas Antidiabetes Dengan Perekasi Nelson Somogyi

Pengujian aktivitas antidiabetes (penurunan kadar glukosa) dapat dilakukan
secara in-vitro baik dengan metode enzimatis maupun non-enzimatis. Dapat
dilakukan secara non-enzimatis dengan menggunakan pereaksi Nelson Somogyi.
Prinsip metode Nelson Somogyi yaitu mereduksi glukosa dengan reagen Nelson,

23
 kemudian membentuk kompleks dengan molibdenum berwarna biru kehijauan
setelah penambahan reagen arsenmolibdat, sehingga dapat diukur absorbansinya
dengan metode spektrofotometri UV-Vis sebagai indikator penurunan kadar
glukosa. Pada tahap awal pengujian dilakukan validasi terlebih dahulu
mencakup: uji linearitas, akurasi, presisi, LOD, dan LOQ dengan tujuan
memperoleh serapan maksimum dari larutan sampel yang dianalisis dengan
waktu yang tepat. Panjang gelombang diukur pada rentang 400 - 780 nm yang
merupakan daerah serapan pereaksi Nelson Somogyi (34,35,36,37).
1. Peralatan
Spektrofotometri UV- Vis Shimadzu UV Mini 1240, Eppendrof Refrence
200L, Neraca analitik GR-300, peralatan gelas standar, ultrasonic cleaner
WT-600-40, dan waterbath, mikropipet.
2. Bahan dan Reagen
Baku Standar Glukosa Anhidrat, Reagen Cu alkalis (Campuran reagen
Nelson A dan B), Reagen Arsenmolibdat, Etanol 96%, Etil Asteat, dan Aqua
Destilata.

G. NANOPARTIKEL
Nanopartikel bagian dari nanoteknologi yang merupakan keuntungan besar bagi
produksi bahan kimia obat dkarena perkembangan penelitian yang cepat
melibatkan inovasi terapeutik dan modifikasi berbasis sains, guna meningkatkan
kesejahteraan, karena nanopartikel dapat digunakan untuk mengatasi kelarutan
obat yang rendah, serta memperbaiki bioavailabilitasnya (ketersediaan hayati)
yang buruk. Nano berasal dari kata Yunani yang artinya kecil atau kerdil (38).
Nanoteknologi adalah salah satu teknik yang paling mampu, aman, dan efektif
untuk sistem penghantaran obat yang ditargetkan. Nanopartikel adalah suatu
partikel dengan ukuran antara 1-1000 nm. Partikel dibuat dari polimer sintetis
alam yang ideal untuk mengoptimalkan sistem penghantaran obat. Nanopartikel
berperan sebagai pembawa (carrier) yang memperantarai obat sehingga

24
langsung dapat bekerja pada sel target sasaran. Nanopartikel dapat berupa obat
yang langsung dibuat dengan proses pelarutan, penjebakan, pendispersian, atau
penempelan obat di dalam matriksnya pada sistem penghantaran obat (39).
Sistem penghantaran nanopartikel telah dikembangkan untuk efek terapi lebih
baik dengan toksisitas yang rendah dibandingkan dengan sistem penghantaran
obat konvensional. Tujuan utama dalam merancang nanopartikel sebagai sistem
penghantaran obat yaitu mengontrol ukuran partikel suatu obat, sifat permukaan
dan pelepasan zat aktif agar mencapai aksi obat yang spesifik pada tingkat terapi
yang optimal sehingga dapat meningkatkan bioavailabilitas suatu obat (40).
1. Keuntungan dan Kerugian Nanopartikel
a. Keuntungan
1) Karakteristik ukuran partikel dan luas permukaan memudahkan
nanopartikel dimanipulasi untuk mencapai target obat baik obat
secara aktif maupun pasif setelah pemberian parenteral
2) Kontrol dan pelepasan obat yang diperpanjang selama transportasi ke
sel target, mengubah distribusi obat pada taget organ, dan dapat
meningkatkan efek terapetik dan mengurangi efek samping obat
3) Pelepasan yang dikontrol dan karakteristik degradasi partikel dapat
memudahkan pengaturan konstituen matriks pilihan
4) Target obat spesifik dapat dicapai dengan menempelkan target ligan
ke permukaan partikel
5) Nanopartikel dapat digunakan untuk berbagai rute penghantaran obat
termasuk: oral,nasal, parenteral, dan intra-ocular (41).
6) Nanopartikel memiliki kemampuan menembus dinding sel yang lebih
tinggi baik melalui difusi transeluler maupun paraseluler
7) Nanopartikel dapat menghantarkan obat pada target organ yang lebih
kecil
8) Nanopartikel dapat meningkatkan kelarutan obat sehingga
meningkatkan bioavailabilitas obat (42).

25
 b. Kerugian
1) Ukuran patikel kecil dan luas permukaan besar menyebabkan
agregasi partikel - partikel
2) Nanopartikel dalam bentuk cair dan kering sukar untuk ditangani
3) Kapasitas muat obat buruk
4) Ukuran partikel kecil dan luas permukaan besar menyebabkan
pemuatan obat terbatas dan dapat terjadi pelepasan yang sangat cepat
(eksplosif) (42).
2. Jenis – jenis nanopartikel
Nanopartikel dibagi menjadi nanokristal dan nanocarrier. Terdapat
bermacam – macam nanocarrier seperti
a. Nanokristal
Nanokristal adalah gabungan dari banyak molekul yang membentuk
suatu kristal, merupakan senyawa obat murni dengan penyalutan tipis
menggunakan surfaktan. Nanokristal memungkinkan pengembangan
formulasi melalui rute pemberian dimana ukuran partikel merupakan
faktor kritis, seperti: obat tetes mata, cairan infus, dan obat suntik.
b. Nanocarrier
1) Nanotube

Gambar II.4. Nanotube (43)

Nanotube adalah lembaran atom yang diatur menjadi bentuk tube
dalam skala nanometer, memiliki rongga di tengah dan struktur yang
menyerupai sangkar ber bahan dasar karbon. Nanotube berdinding
tunggal digunakan sebagai sistem penghantaran obat dalam gen
karena bentuknya menyerupai asam nukleat

26
2) Nanoliposom

Gambar II.5. Nanoliposom (44)

Liposom merupakan konsentrat vesikel lapis ganda yang terdapat
cairan di dalamnya dengan dibungkus membran lipid lapis ganda
yang terbuat dari fosfolipid alam umumnya (42). Liposom biasanya
digunakan sebagai pembawa obat sediaan kosmetik untuk
mempertahankan kelembaban kulit
3) Misel

Gambar II.6. Polymeric Misel (45)

Misel merupakan agregat molekul ampifatik dalam air dengan bagian
nonpolar di dalam dan polar di luar pada bagian yang terpapar air.
Dengan struktur itu obat yang bersifat hidrofob terdisposisi di bagian
dalam inti misel sehingga cocok sebagai bahan pembawa obat yang
tidak larut air (42)
4) Dendrimer

Gambar II.7. Dendrimer (46)

Dendrimer merupakan makromolekul yang terdiri atas cabang –
cabang di sekeliling inti pusat yang bentuk dan ukurannya dapat
diubah sesuai yang diinginkan. Dendrimer cocok untuk zat penyalut
untuk perlindungan dan penghantaran obat menuju sel target

27
 5) Nanopartikel Polimerik

Gambar II.8. Nanopartikel Polimer (47)

Nanopartikel polimerik terbagi menjadi nanokapsul dan nanosfer.
Nanokapsul terdiri dari polimer yang membentuk dinding yang
melingkupi inti dalam di mana obat dijerat. Nanosfer terbuat dari
matriks polimer padat dan senyawa obat terdispersi di dalamnya.
Polimer yang biasa digunakan antara lain poli asam laktat (PLA), poli
asam glikolat (PLG), poli alkilsianiakrilat (PACA). Beberapa polimer
alam antara lain kitosan.
3. Metode Pembuatan Nanopartikel
Pemilihan metode pembuatan nanopartikel bergantung pada polimer dan
sifat obat. Secara konvensional, nanopartikel dibuat dengan dua metode
yaitu: polimerisasi monomer sintesis dan dispersi polimersintesis. Pada
dasarnya, monomer yang tidak larut air didispersikan dalam air kemudian
polimerisasi dikendalikan dengan penambahan inisiator kimia. Senyawa obat
akan terjerat dalam dinding polimer ketika ditambahkan dalam medium
polimerisasi atau diabsorpsi di permukaan partikel
a. Proses bottom-up
Pada proses bottom-up, obat dilarutkan dalam pelarut organik dan
kemudian diendapkan pada penambahan non-solvent dalam adanya
stabilizer
b. Proses top – down
Proses top-down terdiri atas pengurangan ukuran partikel dari partikel
obat yang besar menjadi partikel yang lebih kecil dengan menggunakan
teknik penggilingan yang bervariasi seperti penggilingan media,
mikrofluidisasi dan homogenisasi tekanan tinggi. Tidak ada pelarut keras

28
 yang digunakan dalam teknik ini. Walaupun demikian, semua proses
penggilingan media membutuhkan energi yang tinggi dan tidak efisien.
Pertimbangan terhadap banyaknya panas yang dihasilkan dalam metode
ini membuat pengolahan material yang termolabil menjadi sulit.
4. Metode Pembuatan Nanopartikel Sistem Polimer
a. Polimerisasi Monomer Sintesis
Nanopartikel yang terbentuk didapatkan dengan menginduksi reaksi
polimerisasi dari monomer agar menjadi polimer sebagai suatu
pembawa. Prosesnya yaitu dengan mendispersikan suatu monomer yang
tidak larut air ke dalam fase pendispersi air, kemudian diinduksi dan
diberi pengendali reaksi berupa inisiator kimia, variasi pH, dan stabilizer
b. Dispersi Polimer
Pembuatan nanopartikel menggunakan polimer memiliki prinsip
presipitasi. Pada dasarnya proses ini dibuat dengan pembentukan emulsi
dari fase organik yang terlarut polimer di dalamnya dengan fase air,
kemudian untuk pembentukan partikel maka fase organik harus
dihilangkan. Beberapa jenis metode dispersi polimer:
1) Metode Penguapan Pelarut
Polimer dilarutkan dalam pelarut organik seperti etil asetat yang
digunakan sebagai pelarut dalam melarutkan obat yang bersifat
hidrofob. Campuran polimer dan larutan obat lalu diemulsifikasi
dalam larutan yang mengandung surfaktan dan menjadi bentuk
emulsi minyak dalam air (o/w). Setelah terbentuk emulsi yang stabil,
pelarut organik kemudian diuapkan dengan ditekan atau diputar
secara terus menerus menggunakan pengaduk magnetik. Ukuran
partikel dipengaruhi oleh: tipe dan konsentrasi penstabil yang
digunakan, kecepatan homogenizer, dan konsentrasi polimer
2) Emulsifikasi Spontan
Merupakan metode modifikasi dari penguapan pelarut. Dalam
metode ini pelarut yang larut dalam air bersama dengan sejumlah
kecil pelarut organik yang tidak larut air, digunakan sebagai minyak.

29
 Karena difusi spontan dari pelarut menyebabkan turbulensi
antarmuka antara dua fase yang membentuk partikel kecil. Semakin
banyak konsentrasi air yang larut dalam pelarut, maka ukuran partikel
akan semakin kecil.
3) Gelasi Ionik
Metode ini melibatkan proses sambung silang (cross link) antara
polielektrolit dengan pasangan ion multivalent. Terjadinya kompleks
antara polielektrolit dengan polielektrolit yang berlawanan. Proses
sambung silang akan memperkuat kekuatan mekanis dari
nanopartikel yang terbentuk. Pembuatan nanopartikel dengan metode
ini dilakukan dengan pengerasan tetesan cairan yang didispersikan
pada fase minyak atau fase organik. Prosedur ini meliputi
pencampuran dua fase cair, fase satu mengandung kitosan dan fase
satu lain mengandung anion multivalent (48).

Gambar II.9. Metode Gelasi Ionik (49)

5. Karakterisasi Nanopartikel
Penetuan karakteristik nanopartikel diperlukan sebagai tolak ukur dari proses
pembuatan nanopartikel. Seperti sebagai berikut :
a. Sifat Organoleptik
Dilakukan untuk mengenal nanopartikel secara visual dengan
menggunakan panca indera yang akan mempengaruhi sifat pelepasan zat
aktif dari nanopartikel tersebut. Pengamatan dapat dilakukan dengan
menggunakan mikroskop optik dengan perbesaran yang sesuai.
Kejernihan dilakukan untuk melihat morfologi dan ukuran dari
nanocarrier secara visual.

30
b. Morfologi Nanopartikel
Bentuk dan keadaan permukaan nanopartikel dapat memberi informasi
tentang sifat pelepasan obat. Dapat digunakan Scanning Electron
Microscopy (SEM), Transmission Electron Microscopy (TEM), dan
mikroskop daya atom.
c. Ukuran dan Disribusi Ukuran Nanopartikel
Ukuran dan distibusi nanopartikel diukur menggunakan Particle Size
Analyzer (PSA) menggunakan prinsip Photon Correlation Spectroscopy
dan Electrophoretic Light Scattering. Rentang pengukuran dengan alat
ini yaitu 0,6 m – 7 nm. Konsepnya bahwa partikel kecil dalam suspensi
bergerak dengan pola secara acak, kemudian sinar laser menyinarinya.
Semakin besar ukuran partikel, maka semakin lambat gerak brown.
Ukuran dan distribusi partikel merupakan karakteristik yang paling
penting dalam sistem nanopartikel. Hal ini digunakan untuk
memperkirakan distribusi secara in vivo, biologis, dan toksisitas.
Penentuan ukuran dan distribusi ukuran partikel harus dilakukan karena
mempengaruhi secara langsung keunikan sifat nanopartikel. Metode
yang dapat digunakan antara lain NMR, turbidimetri, Dynamic Light
Scattering (DLS), Statis Light Scattering (SLS). Setelah sampel diukur,
dilakukan dengan beberapa jenis perhitungan yang menghasilkan
representasi dari distribusi ukuran partikel. Distribusi uukuran partikel
dihitung sebagai angka atau volume distribusi massa. Analisis
memberikan nilai (value) untuk tiap partikel yang diperiksa
d. Potensial Zeta
Potensial zeta biasanya digunakan untuk mengkarakterisasi sifat muatan
dari permukaan nanopartikel, berkaitan dengan interaksi elektrostatik
nanopartikel yang akan menentukan agregasi dominan dan tolak
menolak. Potensial zeta merupakan ukuran muatan partikel yang
terdispersi dalam medium pendispersi. Potensial zeta harus dikendalikan.
Idealnya, muatan potensial zeta partikel harus lebih tinggi daripada
medium pendispersi untuk menghindari terjadinya agregasi. Sistem

31
 dispersi dengan nilai potensial zeta yang lebih rendah dapat mudah
membentuk agregat karena adanya gaya Van der Waals pada interaksi
antarpartikel. Nanopartikel dengan nilai potensial zeta yang lebih dari -
30mV atau lebih dari +30mV (  30mV) (48).
e. Efisiensi Penjerapan
Efisiensi penjerapan (Entrapment Efficiency) ditentukan dengan
mengukur konsentrasi obat bebas yang tidak terjerap di dalam suatu
medium(pembawa). Nanopartikel ekstrak rimpang temulawak
didapatkan dari formulasi ekstrak dengan kitosan dan Na-TPP dalam
konsentrasi rendah sampai konsentrasi tinggi. Ditambahkan suspensi
nanopartikel setara dengan 10,0 mg ekstrak kental rimpang temulawak
dengan etil asetat 7,5 mL lalu disentrifugasi pada kecepatan 14000 rpm
selama 45 menit, residu dipisahkan dari supernatan. Residu yang
diperoleh ditambahkan etil asetat hingga volume 15 mL, lalu
disentrifugasi kembali pada kecepatan dan waktu yang sama, residu
dipisahkan kembali dari supernatan. Kurkuminoid bebas (tidak terikat
dalam dalam kompleks kitosan – natrium tripolifosfat) dalam supernatan
dihomogenkan dengan alat vortex selama 1 menit, kemudian diukur
absorbansinya dengan spektrofotometer selama waktu stabil dan panjang
gelombang maksimum. Efisiensi penjerapan dihitung dengan rumus :
𝐾𝑜𝑛𝑠𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑘𝑢𝑟𝑘𝑢𝑚𝑖𝑛𝑜𝑖𝑑 𝑡𝑒𝑟𝑗𝑒𝑟𝑎𝑝
Efisiensi penjerapan = 𝐾𝑜𝑛𝑠𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑘𝑢𝑟𝑘𝑢𝑚𝑖𝑛𝑜𝑖𝑑 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑥 100%
𝑑𝑖𝑡𝑎𝑚𝑏𝑎ℎ𝑘𝑎𝑛

(15,16,50,51).

H. KITOSAN
Kitosan merupakan polikationik poly-(-1, 4-D-glukosamin) turunan dari kitin
yang larut dalam asetat encer, asam laktat, asam malat, asam format, dan asam
suksinat. Kitosan telah digunakan secara luas dalam bidang biomedis karena sifat
biokompatibilitasnya. Kitosan merupakan biopolimer alam, berbentuk

32
 polisakarida linear yang tersusun atas -(1-4)-linked D-glucosamine dan N-
acetyl-D-glucoasamine dengan distribusi acak. Kitosan diproduksi melalui
proses deasetilasi senyawa kitin, yakni merupakan komponen utama pada
cangkang binatang crustaceae seperti rajungan dan udang. Dewasa ini kitosan
telah banyak diaplikasikan pada industri kimia, pangan dan farmasi. Karena sifat
– sifat istimewa seperti: mukoadhesif, biokompatibel, biodegradabel, nontoksik
dan tingkat imonogenisitas yang rendah, serta kitosan merupakan biomaterial
yang menjanjikan untuk penggunaannya sebagai pembawa (carrier) pada sistem
penghantaran obat.
Sebagai carrier obat, kitosan telah dikembangkan dalam berbagai bentuk
sediaan farmasi, seperti tablet, bead, microsphere dan nanopartikel. Diantara
berbagai metode pembuatan nanopartikel kitosan, gelasi ionik merupakan
metode yang banyak menarik perhatian peneliti dikarenakan prosesnya yang
sederhana, tidak menggunakan pelarut organik, dan dapat dikontrol dengan
mudah. Prinsip pembuatan partikel pada metode ini adalah terjadinya interaksi
ionik antara gugus amino pada kitosan yang bermuatan positif dengan polianion
yang bermuatan dengan negatif membentuk struktur network inter- dan/atau
intramolekul tiga dimensi. Crosslinker polianon yang paling banyak adalah
natrium tripolifosfat, karena bersifat tidak toksik dan memiiki multivalent.
Proses crosslinking secara fisika ini tidak hanya menghindari penggunaan
pelarut organik, namun juga mencegah kemungkinan rusaknya bahan aktif yang
akan dienkapsulasi dalam nanopartikel kitosan (9,15,16,52,53,54).

I. NATRIUM TRIPOLIFOSFAT
Tripolifosfat atau biasa disebut juga natrium tripolifosfat merupakan suatu
granul atau serbuk berwarna putih dan bersifat sedikit higroskopis. Tripolifosfat
bersifat mudah larut dalam air dan tidak larut dalam etanol. Tripolifosfat bisa
digunakan sebagai bahan tambahan antara lain sebagai senyawa pembentuk
tekstur. Tripolifosfat dalam nanopartikel sambung silang multi ion digunakan

33
 sebagai pasangan ion dari kitosan. Alasan penggunaan tripolifosfat antara lain
karena sifatnya sebagai anion multivalent yang dapat membentuk ikatan
sambung silang dengan kitosan. penelitian Yu shin et al, 2008 menyebutkan
bahwa dengan digunakannya tripolifosfat sebagai salah satu pasangan ion
kitosan dapat menghasilkan nanopartikel yang lebih stabil dan memiliki
kemampuan penembusan membran yang lebih baik (54).

J. SPEKTROFOTOMETRI UV – VIS
1. Teori Dasar
Spektrofotometri serapan merupakan pengukuran suatu interaksi antara
radiasi elektromagnetik dan molekul atau atom dari suatu zat kimia. Teknik
yang sering digunakan dalam analisis farmasi meliputi spektrofotometri
serapan ultraviolet, cahaya tampak, inframerah, dan serapan atom. Spektrum
ultraviolet dan cahaya tampak suatu zat pada umumnya tidak mempunyai
derajat spesifikasi yang tinggi. Walau demikian, spektrum tersebut sesuai
untuk pemeriksaan kuantitatif dan berbagai manfaat sebagai tambahan
identifikasi. Spektrofotometer yang biasa digunakan adalah spektrofotometer
ultraviolet yang mempunyai panjang gelombang 180 – 380 nm dan
spektrofotometer cahaya tampak yang mempunyai panjang gelombang 380
– 780 nm. Analisis kuantitatif secara spektrofotmetri umumnya didasarkan
atas pengukuran serapan dari larutan zat dalam pelarut yang cocok pada
panjang gelombang tertentu (55,56).
Spektrum elektronik yang dihasilkan dikenal dengan spektrum serapan
yang merupakan grafik hubungan serapan terhadap panjang gelombang. Dari
spektrum serapan dihasilkan informasi tentang panjang gelombang serapan
maksimum (𝑚𝑎𝑘𝑠 ) dan besarnya intensitas serapan (A). Panjang gelombang
serapan maksimum adalah panjang gelombang dimana intensitas serapan
tertinggi pada daerah panjang gelombang tertentu.

34
 Zat yang dapat berinteraksi dengan radiasi ultraviolet-cahaya tampak
adalah yang dalam struktur kimianya memiliki gugus kromofor. Gugus
kromofor adalah gugus fungsional dari suatu molekul yang mampu
menyerap cahaya. Gugus kromofor mengandung satu atau lebih ikatan
rangkap atau gugus kovalen tidak jenuh. Contoh gugus kromofor adalah
C=C, C=O, N=N, dan N=O (57).
Hubungan harga serapan dengan konsentrasi larutan dinyatakan dengan
rumus Lamber-Beer yaitu: A = a.b.c
Keterangan: A: serapan; a: daya serap; b: tebal larutan; c: konsentrasi larutan
Hubungan Beer hanya berlaku untuk cahaya monokromatis dan hukum
Beer telah terpenuhi bila hubungan antara serapan dan konsentrasi adalah
linear. Penyimpangan dalam hukum Beer dapat disebabkan oleh beberapa
faktor yaitu:
a. Cahaya tidak monokromatis
b. Cahaya sampingan mengenai detektor
c. Kepekaan detektor berubah
d. Intensitas sumber cahaya dan amplifier dari detektro berubah ubah (55).
Ada beberapa hal yang harus diperhatikan dalam analisis dengan
spektrofotometri UV-Vis terutama untuk senyawa yang semula tidak
berwarna yang akan dianalisis dengan spektrofotometri visibel karena
senyawa tersebut harus diubah terlebih dahulu menjadi senyawa yang
berwarna (58).
Pembentukan molekul yang dapat menyerap sinar UV-Vis. Hal ini
perlu dilakukan jika senyawa yang dianalisis tidak menyerap pada daerah
tersebut. Cara yang digunakan adalah dengan merubah menjadi senyawa lain
atau direaksikan dengan pereaksi tertentu. Pereaksi yang digunakan harus
memenuhi beberapa persyaratan yaitu:
a. Reaksinya selektif dan sensitif
b. Reaksinya cepat, kuantitatif, dan reprodusibel
c. Hasil reaksi stabil dalam jangka waktu yang lama
d. Pereaksi harus diberikan berlebih

35
 e. Sisa pereaksi yang digunakan tidak mengganggu hasil (57).
Keselektifan dapat dinaikkan dengan mengatur pH, pemakaian masking
agent atau penggunaan teknik ekstraksi. Optimasi sistem pengukuran
meliputi:
a. Waktu Operasional
Cara biasa digunakan untuk pengukuran hasil reaksi atau pembentukan
warna. Tujuannya adalah untuk mengetahui waktu pengukuran yang
stabil. Waktu operasional ditentukan dengan mengukur hubungan antara
waktu pengukuran dengan serapan larutan.
b. Pemilihan panjang gelombang seperti serapan maksimum
Panjang gelombang yang digunakan untuk analisis kuantitatif adalah
panjang gelombang yang mempunyai serapan maksimum. Untuk
memilih panjang gelombang serapan maksimum, dilakukan dengan
membuat kurva hubungan antara serapan dengan panjang gelombang dari
suatu larutan baku pada konsentrasi tertentu.
c. Pembuatan kurva baku
Seri larutan baku dibuat dari zat yang akan dianalisis dengan berbagai
konsentrasi. Masing – masing serapan lartan dengan berbagai konsentrasi
diukur, kemudian dibuat kurva yang merupakan hubungan antara
absorbansi dengan konsentrasi. Bila hubungan Lambert-Beer terpenuhi
maka kurva baku berupa garis lurus.
d. Pembacaan absorbansi sampel atau cuplikan
Absorbansi yang terbaca pada spektrofotometer hendaknya antara 0,2 –
0,8 atau 15 – 70% jika dibaca sebagai transmittan. Hal ini berdasarkan
anggapan bahwa kesalahan dalam pembacaan adalah 0,005 atau 0,5%
(kesalahan fotometrik) (58).
2. Instrumentasi
Pada umumnya konfigurasi dasar setiap spektrofotometer UV-Vis berupa
susunan peralatan optik terkonsstruksi sebagai berikut:

36
 Gambar II.10. Instrumentasi Spektrofotometri UV-Vis (59)
Bagian – bagian instrumen spektrofotometer UV-Vis, yaitu:
a. Sumber Cahaya
Beberapa macam sumber radiasi yang dipakai pada spektrofotometer
UV-Vis yaitu:
1) Lampu deuterium
Lampu deuterium dapat dipakai pada daerah panjang gelombang 190
sampai 380 nm. Berdasarkan rentang panjang gelombang tersebut
sumber radiasinya memberikan spektrum energi yang lurus.
Sedangkan pada panjang gelombang 486 nm sampai 651,1 nm
memberikan dua garis spektra yang dipakai untuk mengecek
ketepatan panjang gelombang pada spektrofotometer UV-Vis
2) Lampu tungsten
Merupakan campuran dari filamen tungsten dan gas iodin (halogen),
digunakan sebagai sumber radiasi pada daerah pengukuran sinar
tampak dengan rentangan panjang gelombang 380 nm sampai 800
nm. Pada daerah tersebut sumber radiasi tungsten – iodin
memberikan energi radiasi sebagai garis lengkung.
3) Lampu merkuri
Lampu merkuri adalah sumber radiasi yang mengandung uap merkuri
bertekanan rendah. Biasanya sumber radiasi merkuri ini dipakai
untuk mengecek atau kalibrasi panjang gelombang pada

37
 spektrofotometer UV-Vis pada daerah ultraviolet khususnya disekitar
panjang gelombang 365 nm.
b. Monokromator
Berfungsi untuk mendapatkan radiasi monokromatis dari sumber radiasi
yang memancarkan radiasi polikromatis.
c. Sampel Kompartemen
Kompartemen ini digunakan sebagai tempat diletakanya kuvet. Kuvet
merupakan wadah yang digunakan untuk meletakkan sampel yang akan
dianalisis. Kuvet yang baik harus memenuhi beberapa syarat sebagai
berikut:
1) Permukaannya harus sejajar secara optis
2) Tidak berwarna sehingga semua cahaya dapat ditransmisikan
3) Tidak ikut bereaksi terhadap bahan – bahan kimia
4) Tidak rapuh dan bentuknya sederhana
d. Detektor
Merupakan salah satu bagian dari spektrofotometer UV-Vis yang
berfungsi mengubah sinyal radiasi yang diterima menjadi sinyal
elektronik
e. Amplifier
Amplifier berfungsi untuk memperkuat hasil pembacaan detektor dalam
hal panjang gelombang. Selanjutnya panjang gelombang tersebut
dilanjutkan ke rekorder untuk mengubah bentuk sinyal – sinyal listrik
dalam bentuk spektrum.
f. Rekorder
Merupakan sistem baca yang memperagakan besarnya isyarat listrik yang
dinyatakan dalam bentuk % transmitan maupun absorbansi (60).
3. Derivatisasi
Untuk penetapakan kadar secara spektrofotometri, yang digunakan adalah
absorbsi maksimum kurva absorpsi. Jika panjang gelombang untuk
penetapan kadar adalah sangat rendah atau senyawa mula – mula
mengabsorbsi di bawah 220 nm, maka seringkali senyawa diubah dahulu

38
 menjadi suatu senyawa berwarna melalui reaksi kimia, dan absorpsi
ditentukan dalam daerah sinar tampak (57).

K. VALIDASI METODE
Validasi dalam proses metode analisis merupakan proses yang dilakukan pada
penelitian laboratorium untuk membuktikan bahwa karakteristik kinerja
prosedur tersebut memenuhi syarat dari aplikasi analisis yang diharapkan dan
memastikan bahwa metode tersebut mampu menghasilkan data yang valid dan
sesuai tujuan. Setiap laboratorium direkomendasikan bahwa metode yang baik
harus divalidasi ulang atau memverifikasi untuk memastikan bahwa metode
tersebut bekerja benar dan tepat dalam lingkungan lokal. Validasi merupakan
metode yang sangat diperlukan karena membantu memberikan jaminan bahwa
pengukuran dapat diandalkan, sementara verifikasi melibatkan lebih sedikit
parameter percobaan dibandingkan validasi. Metode kuantitatif untuk pengujian
harus dilakukan verifikasi dengan parameter yang ditentukan adalah:
1. Selektivitas dan LOD jika matriks sampel berbeda dari yang digunakan
dalam pengembangan metode.
2. Akurasi
3. Presisi
Parameter analisis yang umum digunakan dalam validasi metode penetapan
kadar:
1. Linearitas
Linearitas dari suatu prosedur analisis merupakan kemampuan untuk
memberikan respon proporsional terhadap konsentrasi analit dalam sampel.
Linearitas biasanya dinyatakan dalam istilah variansi sekitar arah garis
regresi yang dihitung berdarkan persamaan matematik data yang diperoleh
dari hasil uji analit dalam sampel dengan berbagai konsentrasi analit. Sebagai
parameter adanya hubungan linear digunakan koefisien korelasi (r) pada
analisis regresi lineat Y = a + bX. Hubungan linear yang r = + 1 atau – 1,

39
 sedangkan nilai a menunjukkan kepekaan analisis terutama instrumen yang
digunakan.
2. Akurasi
Akurasi merupakan ukuran yang menunjukkan derajat kedekatan hasil
analisis dengan kadar analit yang sebenarnya. Akurasi dinyatakan sebagai
persen perolehan kembali (recovery) analit yang ditambahkan. Recovery
dinyatakan sebagai rasio antara hasil yang diperoleh dengan hasil yang
sebenarnya. Biasanya persyaratan untuk recovery tidak boleh lebih dari 5%.
kadar yang diperoleh
% 𝑅𝑒𝑐𝑜𝑣𝑒𝑟𝑦 = x 100%
𝑘𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑠𝑒𝑏𝑒𝑛𝑎𝑟𝑛𝑦𝑎
3. Presisi
Presisi merupakan ukuran yang menunjukkan kedekatan antara nilai hasil
pengukuran dari sampel yang homogen pada kondisi normal (sampel yang
sama diuji secara berurutan dengan menggunakan alat yang sama). Presisi
dipengaruhi oleh kesalahan acak (random error). Suatu nilai ketelitian
dinyatakan dalam Relative Standar Deviation (%RSD). Besarnya RSD
menyatakan tingkat ketelitian analisis, semakin kecil % RSD yang dihasilkan
maka semakin tinggi tingkat ketelitiannya.
SD
% RSD = x 100%
rata − rata
Keterangan: SD = Simpangan baku ; SDR = Simpangan baku rata - rata
4. LOD (Batas deteksi) dan LOQ (Batas kuantitasi)
Batas deteksi adalah jumlah terkecil analit dalam sampel yang dapat
dideteksi yang masih memberikan respon signifikan dibandingkan dengan
blangko. Batas deteksi merupakan parameter pada analisis retnik dan
diartikan sebagai kuantitas terkecil analit dalam sampel yang masih dapat
memenuhi kriteria cermat dan seksama. Batas deteksi dan kuantitasi dapat
dihitung secara statistik melalui garis regresi linear dari kurva kalibrasi. Nilai
pengukuran akan sama dengan nilai b pada persamaan garis linear Y = a +bX,
sedangkan simpangan baku blangko sama dengan simpangan baku residual
(Sy/x).

40
 a. Batas deteksi (LOD)
Karena k = 3, Simpangan baku (Sb) = Sy/x, maka:
LOD = (3 Sy/x)/Sl
b. Batas kuantitasi (LOQ)
Karena k = 10, simpangan baku (Sb) = Sy/x, maka
LOQ = (10 Sy/x)/Sl
dimana:
Q = LOD (batas deteksi) atau LOQ (batas kuantitasi)
K = tiga untuk batas deteksi atau sepuluh untuk batas kuantitasi
Sb= simpangan baku respon analitik dari blangko
Sl= arah garis linear (kepekaan arah) dari kurva antara respon terhadap
konsentrasi = slope (b pada persamaan garis Y = a + bX) (61,62).

L. RANCANGAN FAKTORIAL
Rancangan faktorial adalah suatu desain yang perlakuannya terdiri atas semua
kombinasi level dari berbagai faktor. Dalam rancangan faktorial dikenal istilah
“faktor” dan “level” dari berbagai faktor. Faktor merupakan setiap besaran yang
mempengaruhi respon yang merupakan sifat atau hasil percobaan yang diamati.
Level merupakan nilai atau tetapan faktor. Dalam penelitian ini, digunakan
rancangan faktorial 22 dengan dua faktor atau variabel bebas yaitu konsentrasi
ekstrak dan perbandingan jumlah kitosan dengan natrium tripolifosfat pada
masing – masing level rendah dan tinggi sehingga akan didapatkan 4 formula.
Tabel II.2. Rancangan faktorial 22
Faktor Level
Rendah Tinggi
Ekstrak rimpang temulawak 0,1% 0,5%
Perbandingan jumlah larutan 2:1 5:1
kitosan 0,2 %: natrium
tripolifosfat 0,1%

41
M. LANDASAN TEORI
Salah satu tumbuhan obat tradisional yang sering digunakan adalah rimpang
temulawak (6). Sebagai obat tradisional rimpang temulawak dimanfaatkan untuk
pengobatan diabetes mellitus tipe dua dengan cara merebus 5 g rimpang
temulawak dengan dua gelas (500mL) air matang. Kurkuminoid merupakan
kandungan utama rimpang temulawak berkhasiat untuk pengobatan diabetes
mellitus tipe dua (3,4). Telah dilaporkan dari hasil penelitian bahwa rimpang
temulawak digunakan untuk menurunkan kadar glukosa darah, meningkatkan
sensitivitas reseptor insulin, menurunkan aktivitas enzim glukoneogenesis dan
meningkatkan aktivitas enzim glikolisis (5,6,7).

Senyawa kurkuminoid dapat diperoleh dengan cara ekstraksi. Berdasarkan

penelitian yang telah ada, proses ekstraksi yang sering digunakan adalah
maserasi. Maserasi merupakan metode ekstraksi menggunakan pelarut tertentu
dengan pengadukan beberapa kali, dilakukan pada temperatur kamar, metode ini
merupakan metode yang sederhana, efektif, murah, dan menghindari rusaknya
senyawa-senyawa yang bersifat termolabil. Pelarut yang digunakan adalah
etanol 96% yang merupakan pelarut organik universal yang mudah menguap,
aman, tidak beracun, dan dapat menarik senyawa yang bersifat polar seperti
kurkuminoid (63). Ekstrak rimpang temulawak dikentalkan menggunakan alat
vakum rotavapor, kemudian untuk meningkatkan stabilitas masa simpan pada
tahap selanjutnya, ekstrak rimpang temulawak dikeringkan menggunakan
metode pengeringan semprot (Spray Drying) dengan pengisi maltodekstrin
(dengan syarat padatan total sebesar 30-50%) pada suhu inlet dan outlet
optimum. Kelebihan pengering semprot yaitu prosesnya dioperasikan secara
berkesinambungan dengan produktivitas tinggi, efektif dalam mengendalikan
sifat dan mutu kurkuminoid, dan ukuran partikel yang dihasilkan relatif seragam
(27).

Kelarutan kurkuminoid relatif rendah sehingga mempengaruhi daya

absrobsi di dalam tubuh akibatnya ketersediaan hayati di dalam tubuh rendah.
Selain itu, kurkuminoid cepat dimetabolisme, sehingga cepat dikeluarkan dari

42
tubuh. Keterbatasan tersebut dapat diperbaiki melalui pengembangan teknologi
untuk meningkatkan kelarutan dan bioavailabilitas kurkuminoid yaitu dengan
nanoteknologi (8,9). Ekstrak rimpang temulawak kering diformulasikan ke
dalam bentuk nanopartikel dengan metode gelasi ionik karena merupakan
metode yang sederhana, memiliki efektivitas penjerapan dalam rentang 86,6% -
93,21% (15,16).

Nanoteknologi adalah suatu teknologi yang dilakukan sedemikian rupa

untuk menjadi ukuran nano (nanopartikel). Kelebihan nanopartikel yaitu adanya
peningkatan afinitas dari sistem karena peningkatan kontak luas permukaan pada
jumlah yang sama, dapat meningkatkan kelarutan suatu senyawa sehingga
meningkatkan ketersediaan hayati senyawa tersebut (8,9,10,11).

Metode gelasi ionik melibatkan proses crosslink antara polimer kitosan

dengan bahan crosslinker natrium tripolifosfat. Kitosan merupakan polimer
bermuatan positif (polikationik) dan bahan crosslinker natrium tripolifosfat yang
bermuatan negatif (anionik) yang memiliki sifat istimewa yaitu biokompatibel,
biodegradabel, nontoksik, bersifat inert, non alergenik, non karsinogenik, dan
multivalent terhadap tubuh yang dapat menguntungkan untuk penggunaan bahan
pembawa (carrier) pada sistem penghantaran obat yang dapat meningkatkan
bioavailabilitas kurkuminoid (9,16). Pembuatan nanopartikel metode gelasi
ionik dilakukan dengan mencampurkan ekstrak kering temulawak dengan
kitosan yang telah dilarutkan dalam asam asetat glasial, diaduk menggunakan
magnetic stirrer 300 rpm, ditambahkan natrium tripolifosfat, diaduk hingga
terbentuk suspensi nanopartikel yang homogen, selanjutnya dilakukan
karakterisasi suspensi nanopartikel berupa morfologi nanopartikel
(Transmission electron microscopy), ukuran dan distribusi ukuran nanopartikel,
potensial zeta (Particle size analyzer), dan efisiensi penjerapan. Pada penelitian
ini, terlebih dahulu dilakukan uji kelarutan kurkuminoid dari ekstrak kental,
ekstrak kering, dan nanopartikel rimpang temulawak dalam berbagai pH (HCl,
dapat fosfat, NaOH, dan etanol 96%) untuk mengetahui pengaruh pH terhadap
stabilitas dan aktivitas ekstrak rimpang temulawak sebagai antidiabetes.

43
 Untuk memperoleh formulasi optimum nanopartikel ekstrak kering
rimpang temulawak, maka dalam penelitian ini digunakan rancangan faktorial
22 dengan dua faktor atau variabel bebas yaitu konsentrasi ekstrak (0,1% – 0,5%)
dan perbandingan jumlah kitosan 0,2% dengan natrium tripolifosfat 0,1%
sebesar (2:1 – 5:1) pada masing – masing level rendah dan tinggi (64,65,66,67).
Guna mengetahui aktivitas antidiabetes baik terhadap ekstrak kental, ekstrak
kering, dan nanopartikel ekstrak kering rimpang temulawak secara in-vitro
digunakan metode Nelson Somogyi dengan alat spektrofotometer UV-Vis pada
panjang gelombang maksimum didahului dengan validasi metode meliputi: uji
linearitas, akurasi, presisi, batas deteksi (LOD), dan batas kuantitasi (LOQ)
(16,35,36).

Pada akhir penelitian, dilakukan analisis data berupa ukuran partikel,

potensial zeta, efisiensi penjerapan dan uji aktivitas antidiabetes dari
nanopartikel ekstrak kering rimpang temulawak yang merupakan respon uji
dengan software minitab 19, sehingga masing-masing respon uji memiliki pola
berbentuk contour plot. Untuk mendapatkan formula optimum dilakukan
penumpang tindihan (superimposed) terhadap seluruh respon uji, dengan
demikian akan diperoleh daerah irisan yang menunjukkan formula optimum
yang memenuhi persyaratan mutu baik secara fisika maupun kimia berdasarkan
persyaratan yang ada.

N. HIPOTESIS
1. Formulasi nanopartikel ekstrak kering rimpang temulawak metode gelasi
ionik dapat meningkatkan aktivitas antidiabetes dibandingkan dengan
ekstrak kental dan ekstrak kering rimpang temulawak melalui uji secara in-
vitro menggunakan metode Nelson Somogyi dengan alat spektrofotometer
UV-Vis yang telah tervalidasi.
2. Formula optimum nanopartikel ekstrak kering rimpang temulawak metode
gelasi ionik dapat ditentukan dengan rancangan faktorial 22.

44
 BAB III

RENCANA PENELITIAN

A. PRINSIP PENELITIAN

Penelitian dimulai dari pengumpulan bahan rimpang temulawak (Curcuma

xanthorrhiza R.) yang diperoleh dari BALITRO, dideterminasi, dikeringkan,
diserbukkan dan dimaserasi dengan pelarut etanol 96%, dikentalkan dengan
vakum rotavapor, dikeringkan dengan metode Spray Drying dengan bahan
pengisi maltodekstrin. Diformulasikan ke dalam bentuk nanopartikel dengan
menggunakan metode gelasi ionik hingga membentuk suspensi nanopartikel
yang homogen. Dilakukan karakteristik nanopartikel meliputi morfologi
nanopartikel, distribusi ukuran partikel, potensial zeta, dan efisiensi penjerapan.
Kemudian dilakukan uji aktivitas antidiabetes pada ekstrak kental, kering, dan
nanopartikel ekstrak kering rimpang temulawak menggunakan metode Nelson
Somogyi dengan alat Spektrofotometer UV-Vis yang telah divalidasi.

B. TEMPAT PENELITIAN

Pelaksanaan penelitian dilakukan di Laboratorium Skripsi Fakultas Farmasi,

Universitas Pancasila, Jakarta Selatan, DKI Jakarta, Indonesia.

C. TAHAP PENELITIAN

Tahap – tahap yang dilakukan dalam penelitian ini:

45
1. Pengumpulan, penyediaan bahan, dan determinasi rimpang temulawak
sebagai tanaman asal dan bahan penelitian.
2. Penetapan bahan organik asing dari rimpang temulawak
3. Pembuatan serbuk simplisia serta ekstraksi simplisia rimpang temulawak
dengan etanol 96%.
4. Pemeriksaan ekstrak kental rimpang temulawak meliputi:
a. Pemeriksaan organoleptik ekstrak kental rimpang temulawak
b. Penetapan kurva kalibrasi baku standar kurkuminoid
c. Penetapan kadar kurkuminoid dari rimpang temulawak dengan metode
spektrofotometri UV - Vis dengan panjang gelombang maksimum.
5. Pengeringan ekstrak kental rimpang temulawak menggunakan metode spray
drying
a. Penentuan konsentrasi padatan total
b. Spray drying ekstrak kental rimpang temulawak dengan pengisi
maltodekstrin pada suhu inlet dan outlet optimum.
6. Evaluasi serbuk hasil spray drying dari ekstrak kering rimpang temulawak
a. Pemeriksaan organoleptik serbuk
b. Penetapan kadar air
c. Distribusi ukuran partikel
7. Formulasi nanopartikel ekstrak kering rimpang temulawak dengan metode
gelasi ionik menggunakan polimer kitosan dengan crosslinker natrium
tripolifosfat
8. Karakterisasi suspensi nanopartikel ekstrak kering rimpang temulawak
a. Pemeriksaan organoleptik
b. Pemeriksaan morfologi nanopartikel (Transmission Electron
Microscopy)
c. Pemeriksaan ukuran dan distribusi ukuran partikel, dan potensial zeta
(particle size analyzer)
d. Efisiensi penjerapan

46
9. Uji kelarutan ekstrak kental, ekstrak kering, dan nanopartikel ekstrak kering
rimpang temulawak dalam berbagai pH (HCL 0,1N, NaoH 0,1 N, dapar
fosfat, dan etanol 96%).
10. Uji aktivitas antidiabetes ekstrak kental, ekstrak kering, dan nanopartikel
rimpang temulawak secara in-vitro
a. Persiapan alat dan bahan
b. Pembuatan larutan baku glukosa
c. Optimasi metode Nelson Somogyi
d. Validasi metode Nelson Somogyi meliputi: Uji linearitas, akurasi, presisi,
batas deteksi (LOD) dan batas kuantitasi (LOQ).
e. Penentuan aktivitas antidiabetes secara in-vitro dengan alat
spektrofotometri UV-Vis pada operating time dan panjang gelombang
maksimum.
11. Analisis hasil penelitian dengan rancangan faktorial 22.

47
 BAB IV

ALAT, BAHAN, DAN METODE PENELITIAN

A. ALAT
Alat- alat gelas laboratuorium (Pyrex), alat maserasi kinetik, blender (Miyako),
homogenizer (ultra turax T25 digital), kuvet, lemari pendingin, magnetic stirrer,
mortir, oven suhu 105C, particle size analyzer (PSA), penangas air (Memmert,
W 600), pengayak nomor 4 dan 18, pengering semprot (spray drying), pH meter,
rotary evaporator (Stuart RE 300), Transmission Electron Microscopy (TEM),
Spektrofotometer UV-Vis (Shimadzi UV-1601), timbangan analitik.

B. BAHAN
Ekstrak rimpang temulawak, etanol 96%, baku standar kurkuminoid, air suling
(aqua destilata), metanol pro analisis, maltodekstrin, kitosan, natrium
tripolifosfat, asam asetat glasial, etil asetat, HCl 0,1 N, NaoH 0,1 N, dapar fosfat
pH 6,8, baku standar glukosa anhidrat, reagen cu alkalis (campuran reagen
Nelson A dan B), reagen arsenmolibdat, etanol 96%, dan aqua destilata.

C. METODE PENELITIAN
1. Penyiapan Bahan Penelitian
Bahan penelitian yang digunakan yaitu rimpang temulawak yang diperoleh
dari Balai Penelitian Tanaman Rempah dan Obat (BALITRO), Bogor.
2. Determinasi Rimpang Temulawak
Determinasi Temulawak dilakukan di Lembaga Ilmu Pengetahuan (LIPI),
Bogor.

48
3. Penetapan Bahan Organik Asing

Sejumlah 500 g serbuk simplisia rimpang temulawak disebarkan pada

lempengan datar (di atas kertas yang bersih), dipilih dan dipisahkan bahan
organik asingnya dengan mata biasa atau dengan menggunakan alat kaca
pembesar. Bahan organik yang sudah dipisahkan ditimbang sampai ketelitian
0,05 g dan dihitung kadar BOA nya per 500 g simplisia yang telah
dikeringkan.
4. Pembuatan Serbuk Simplisia

Simplisia yang telah dihilangkan bahan organik asingnya kemudian diserbuk

menggunakan blender. Sejumlah 1 kg serbuk simplisia dilewatkan melalui
pengayak nomor 4. Serbuk yang lolos pada pengayak nomor 4, kemudian
ditimbang dan dilewatkan melalui pengayak nomor 18. Serbuk yang lolos
pada pengayak no 18 ditimbang.
5. Pembuatan Ekstrak Rimpang Temulawak dengan Etanol 96%

a. Rimpang temulawak yang terpilih dicuci dengan air bersih untuk

menghilangkan debu, tanah, atau kontaminan lain yang melekat pada
rimpang temulawak
b. Rimpang temulawak dikeringkan didalam oven suhu 105C selama 3 jam
c. Rimpang temulawak yang telah kering kemudian dihaluskan dengan cara
diblender sehingga diperoleh rimpang temulawak dengan bentuk serbuk
halus.
d. Serbuk halus rimpang temulawak diayak dengan menggunakan pengayak
nomor 4. Serbuk halus yang dapat lolos dari pengayak 4 kemudian
dilakukan pengayakan dengan ayakan nomor 18
e. Serbuk halus rimpang temulawak yang telah diayak melalui pengayak
nomor 4 dan 18 kemudian disimpan dalam wadah kedap udara dan
diletakkan dalam lemari pendingin untuk mencegah terjadinya
penyerapan air
f. Serbuk halus rimpang temulawak dimasukkan ke dalam alat maserasi
yang diisi dengan pelarut etanol 96%. Maserasi dilakukan selama 24 jam

49
 kemudian dilakukan maserasi kinetik selama 6 jam dan didiamkan
selama 24 jam, kemudian dilakukan 4 kali remaserasi dengan masing-
masing selama 3 jam dan didiamkan selama 24 jam.
g. Setelah maserasi selesai, residu rimpang temulawak dipisahkan dengan
cara disaring filtratnya menggunakan penyaringan bertingkat, kemudian
diuapkan dengan menggunakan Rotary Vacum Evaporator pada suhu
dibawah titik didih 35C hingga diperoleh ekstrak kental
h. Residu dikeringan, ditimbang, kemudian dihitung kadar kurkumin
menggunakan Spektrofotometri UV-Vis.
6. Pemeriksaan Ekstrak Kental Rimpang Temulawak

a. Pemeriksaan Organoleptik
Dilakukan evaluasi ekstrak secara visual terhadap bentuk, warna, dan bau
b. Penetapan Kurva Kalibrasi Baku Standar Kurkuminoid
Baku standar kurkuminoid ditimbang saksama +10 mg, kemudian
dilarutkan ke dalam pelarut campur (60% v/v dapar fosfat pH 6,8 dan
40% v/v etanol 96%) dalam labu ukur sampai 10,0 mL hingga diperoleh
larutan dengan konsentrasi 1000 ppm. Larutan tersebut dipipet 1 mL dan
diencerkan dengan pelarut campur sampai 100,0 mL sehingga diperoleh
larutan dengan konsentrasi 10 ppm. Ditentukan operating time dan
panjang gelombang maksmimum kurkuminoid dalam pelarut.
Ditentukan operating time dengan mengukur serapan pada panjang
gelombang maksimum dengan interval tiap 5 menit sehingga diperoleh
waktu yang menunjukkan serapan telah stabil, sedangkan panjang
gelombang maksimum dilakukan dengan melakukan scanning pada
rentang panjang gelombang 380 – 800 nm selama operating time.
Berikutnya, dari larutan 10 ppm, dipipet masing-masing 2 mL, 3 mL, 4
mL, 5 mL, 6 mL, dan 7 mL, kemudian diencerkan dengan pelarut yang
sama masing – masing dalam labu ukur 10,0 mL, sehingga diperoleh
larutan dengan konsentrasi 2, 3, 4, 5, 6, dan 7 ppm. Selanjutnya, masing
– masing larutan tersebut diinkubasi dalam ruangan tertutup dan gelap

50
 selama waktu stabil (operating time) yang telah ditetapkan, dan segera
diukur absorbansinya dengan spektrofotometri UV-Vis pada panjang
gelombang maksimumnya, kemudian dihitung persamaan regresi
linearnya. Selama proses preparasi dan pengukuran serapan, larutan uji
selalu dijaga dari paparan cahaya.
Persamaan regresi linear: Y = a + bX
c. Penetapan Kadar Kurkuminoid dalam Ekstrak Kental Rimpang
Temulawak secara Spektrofotometri UV – Vis
Sejumlah +10 mg ekstrak ditimbang secara saksama kemudian dilarutkan
ke dalam pelarut (60% v/v dapar fosfat pH 6,8 dan 40% v/v etanol 96%)
dalam labu ukur sampai 10,0 mL hingga diperoleh larutan dengan
konsentrasi 1000 ppm. Larutan tersebut dipipet 2 ml dan diencerkan
dengan pelarut campur hingga 100,0 ml. Masing-masing larutan
kemudian diinkubasi dalam ruangan tertutup dan gelap selama operating
time yang telah ditetapkan, dan segera diukur absorbansinya dengan
menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang
maksimum yang telah ditetapkan sebelumnya. Serapan yang diperoleh
kemudian digunakan untuk menghitung nilai x (kadar kurkumin dalam
satuan ppm) yang terkandung dalam ekstrak dengan menggunakan
persamaan regresi linear dari kurva kalibrasi senyawa standar, kemudian
dikonversikan kadar zat aktif yang diperoleh ke dalam satuan persentase
(%). Persamaan dan rumus perhitungan dapat dituliskan sebagai berikut:
Persamaan regresi linear: Y = a + bX

mg
kadar ( ) × vol. awal (ml) × faktor pengenceran
Kadar (%) = ml × 100%
bobot (mg)
7. Pengeringan Ekstrak Kental Rimpang Temulawak Menggunakan
Metode Spray Drying

a. Penentuan Konsentrasi Padatan Total

Ekstrak kental rimpang temulawak ditimbang dalam oven cawan
penguap kemudian dikeringkan dalam oven pada suhu 40C, didinginkan

51
 dalam desikator dan ditimbang ekstrak kental sampai diperoleh bobot
tetap. Dihitung prosentase padatan total dalam ekstrak
[(𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑃𝑎𝑑𝑎𝑡𝑎𝑛 𝐴𝑘ℎ𝑖𝑟 + 𝐴𝑑𝑠𝑜𝑟𝑏𝑒𝑛) − 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑎𝑑𝑠𝑜𝑟𝑏𝑒𝑛]
% Padatan Total = 𝑥100%
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝐸𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝐴𝑤𝑎𝑙
Syarat padatan total: 30 % – 50 %
b. Spray Drying Ekstrak Kental Rimpang Temulawak dengan Pengisi
Maltodekstrin pada Suhu Inlet dan Outlet Optimum
Ekstrak kental rimpang temulawak ditambahkan dengan pengisi
maltodekstrin kemudian dikeringkan dengan metode Spray Drying pada
suhu inlet dan outlet optimum hingga diperoleh ekstrak kering rimpang
temulawak.
8. Evaluasi Serbuk Hasil Spray Drying dari Ekstrak Kering Rimpang
Temulawak

a. Pemeriksaan Organoleptik
Pemeriksaan meliputi warna, bau dan bentuk
b. Penetapan Kadar Air
Ditetapkan dengan metode Karl Fischer. Ditimbang serbuk  3 – 5 mg
dengan timbangan microbalance, dicatat sebagai W1, kemudian
dimasukkan ke dalam alat. Ditimbang kembali sisa serbuka pada wadah
untuk ditimbang, dicatat sebagai W2. Data W1 danW2 dimasukkan
kemudian kadar air dicetak secara otomatis. Syarat kadar serbuk yang
baik adalah 3 – 5%.
c. Distribusi Ukuran Partikel
Dimasukkan 25 – 100 g serbuk granul dalam pengayak bertingkat baku
yang mempunyai panci penampung dan tutup yang sesuai. Digetarkan
pengayak dengan arah putar secara horizontal dan ketukan secara vertikal
pada permukaan selama lebih dari 20 menit. Ditetapkan jumlah
prosentase sisa yang tertinggal pada setiap dasar ayakan melalui
penimbangan. Granul setidaknya memiliki distribusi ukuran partikel
yang sempit dan tidak boleh lebih dari 10% mengandung komponen
berbentuk serbuk halus.

52
9. Pembuatan nanopartikel ekstrak kering rimpang temulawak dengan
menggunakan metode gelasi ionik dengan rancangan faktorial 𝟐𝟐
Tabel IV.1. Formula nanopartikel rancangan faktorial 22
Bahan Konsentrasi (%)
(1) a b ab
0,1 0,5 0,1 0,5
Ekstrak rimpang temulawak

Perbandingan jumlah larutan 2:1 2:1 5:1 5:1

kitosan 0,2% : natrium
tripolifosfat 0,1%
a. Disiapkan alat dan bahan
b. Ditimbang bahan – bahan yang akan digunakan sesuai dengan formula
c. Dilarutkan kitosan sebanyak 0,2 g dalam 100 mL asam asetat glasial 1%
menggunakan magnetic stirer sehingga diperoleh konsentrasi kitosan
0,2%
d. Ditambahkan larutan kitosan 0,2% dengan masing – masing 0,1% - 0,5%
ekstrak kering rimpang temulawak
e. Diaduk campuran tersebut dengan magnetic stirer 300 rpm selama 10
menit
f. Ditambahkan natrium tripolifosfat 0,1% masing-masing dengan
perbandingan jumlah kitosan dan natrium tripolifosfat 2:1 dan 5:1 dengan
kecepatan 1 tetes / 3 detik melalui buret dan dengan alat magnetic stirrer
300 rpm hingga terbentuk suspensi nanopartikel yang homogen
g. Dibiarkan selama 5 hari untuk melihat stabilitas suspensi meliputi warna,
kekeruhan, dan endapan agar didapatkan suspensi nanopartikel ekstrak
rimpang temulawak yang stabil.
10. Karakterisasi Suspensi Nanopartikel Ekstrak Kering Rimpang
Temulawak

a. Pemeriksaan Organoleptik
Mengkarakterisasi nanopartikel secara visual mencakup bentuk, warna,
dan bau

53
b. Pemeriksaan Morfologi Partikel
Karakterisasi morfologi partikel dari salah satu nanopartikel pilihan
dengan menggunakan alat Transmission Electron Mircroscope (TEM).
Prinsip TEM yaitu dengan memancarkan elektron pada permukaan
spesimen.
c. Pemeriksaan Ukuran dan Distribusi Ukuran Partikel
Karakterisasi ukuran partikel dan distribusi ukuran dari suspensi
nanopartikel menggunakan particle size analyzer (PSA)
d. Potensial Zeta
Potensial zeta biasanya digunakan untuk mengkarakterisasi sifat muatan
dari permukaan nanopartikel, berkaitan dengan interaksi elektrostatik
nanopartikel. Interaksi elektrostatik nanopartikel akan menentukan
agregasi dominan dan tolak menolak. Potensial zeta merupakan ukuran
muatan partikel yang terdispersi dalam medium pendispersi, dengan
menggunakan particle size analyzer (PSA) potensial zeta harus
dikendalikan, dengan nilai potensial lebih dari -30mV atau lebih dari
+30mV ( 30mV).
e. Efisiensi Penjerapan
Ditambahkan suspensi nanopartikel setara dengan 10,0 mg ekstrak kental
rimpang temulawak dengan etil asetat 7,5 mL lalu disentrifugasi pada
kecepatan 14000 rpm selama 45 menit, residu dipisahkan dari
supernatan. Residu yang diperoleh ditambahkan etil asetat hingga
volume 15 mL, lalu disentrifugasi kembali pada kecepatan dan waktu
yang sama, residu dipisahkan kembali dari supernatan. Kurkuminoid
bebas (tidak terikat dalam dalam kompleks kitosan – natrium
tripolifosfat) dalam supernatan dihomogenkan dengan alat vortex selama
1 menit, kemudian diukur absorbansinya dengan spektrofotometer
selama waktu stabil dan panjang gelombang maksimum. Serapan yang
diperoleh kemudian digunakan untuk menghitung nilai x (kadar
kurkuminoid bebas dalam suatuan ppm) dengan menggunakan
persamaan regresi linear dari kurva kalibrasi kurkuminoid baku standar,

54
 kemudian dikonversikan kadar zat aktif supernatan tersebut ke dalam
presentase (%). Efisiensi penjerapan dihitung dengan rumus:
𝑘𝑜𝑛𝑠𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑘𝑢𝑟𝑘𝑢𝑚𝑖𝑛𝑜𝑖𝑑 𝑡𝑒𝑟𝑗𝑒𝑟𝑎𝑝
Efisiensi Penjerapan(%) = 𝑥100%
𝑘𝑜𝑛𝑠𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑘𝑢𝑟𝑘𝑢𝑚𝑖𝑛𝑜𝑖𝑑 𝑦𝑎𝑛𝑔
𝑑𝑖𝑡𝑎𝑚𝑏𝑎ℎ𝑘𝑎𝑛
(15,16,48,49).
11. Uji Kelarutan Ekstrak Kental, Ekstrak Kering, dan Nanopartikel
Ekstrak Kering Rimpang Temulawak dalam Berbagai pH

Ditimbang secara saksama 10,0 mg ekstrak kental, ekstrak kering setara

dengan 10,0 mg ekstrak kental, dan nanopartikel ekstrak kering rimpang
temulawak setara dengan 1,0 mg ekstrak kental, kemudian masing – masing
dimasukkan ke dalam 10,0 mL HCL 0,1 N; 10, 0 mL Dapar Fosfat pH 6,8;
10 mL NaoH 0,1 N; dan 10 mL Etanol 96% dan ditambahkan dengan 0,5%
Natrium Lauril Sulfat (surfaktan). Kemudian, diletakkan diatas orbital
shaker pada suhu 37C0,5 selama 6 jam. Setelah itu, disaring lalu filtrat
yang diperoleh dibaca absorbansi selama operating time pada panjang
gelombang maksimum, lalu dihitung kelarutannya dengan persamaan regresi
linear pada kurva kalibrasi baku standar kurkuminoid: Y = a + bX (65).
12. Uji Aktivitas Antidiabetes dari Ekstrak Kental, Ekstrak Kering, dan
Nanopartikel Ekstrak Kering Rimpang Temulawak Menggunakan
Metode Spektrofotomerti UV-Vis Dengan Pereaksi Nelson Somogyi

a. Pembuatan Larutan Baku Glukosa

Larutan baku glukosa dibuat dengan konsentrasi 1000 ppm yaitu dengan
cara melarutkan 250 mg serbuka glukosa anhidrat dalam 250,0 mL
aquadest diaduk hingga larut.
b. Optimasi Metode Nelson Somogyi dengan Cara :
1) Penentuan Waktu Stabil (Operating Time)
Dipipet sebanyak 1 mL dari larutan induk baku glukosa p.a 1000 ppm
kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 1,0 mL
reagen Cu Alkalis (Campuran reagen Nelson A dan B) ditutup dengan
kapas, dipanaskan di atas air mendidih suhu 100C selama 10 menit.
Larutan didinginkan selama 5 menit, dipindahkan ke dalam labu ukur

55
 5,0 mL, ditambahkan 1,0 mL reagen arsenomolibdat ke dalam labu
tersebut lalu diencerkan dengan aquadest sampai batas, dikocok.
Larutan diukur pada panjang gelombang maksimum teoritis 745 nm
selama 60 menit dengan interval setiap lima menit, sehingga
diperoleh waktu serapan yang telah stabil.
2) Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Dilakukan prosedur yang sama dengan penentuan operating time,
lalu larutan diukur serapannya dengan spektrofotometer UV- Vis
dengan melakukan scanning pada rentang panjang gelombang 640 -
840 nm dengan interval setiap 10 nm selama operating time, sehingga
diperoleh panjang gelombang maksimum .
3) Pembuatan Kurva Baku Standar Glukosa
Dibuat seri konsentrasi larutan baku glukosa anhidrat p.a dari larutan
induk 1000 ppm dengan rentang 200, 300, 400, 500, 600, 700, dan
800 ppm, kemudian dipipet 1 mL ke dalam labu ukur, ditambahkan
1,0 mL reagen Cu Alkalis (Campuran reagen Nelson A dan B) ditutup
dengan kapas, dipanaskan di atas air mendidih suhu 100C selama 10
menit. Larutan didinginkan selama 5 menit, dipindahkan ke dalam
labu ukur 5,0 mL, ditambahkan 1,0 mL reagen arsenomolibdat ke
dalam labu tersebut lalu diencerkan dengan aquadest sampai batas,
dikocok, larutan diukur serapannya dengan spektrofotometer UV-
Vis selama waktu operating time dan panjang gelombang maksimum
yang diperoleh. Dibuat kurva hubungan antara konsentrasi dengan
absorbansi, untuk ditentukan persamaan regresi liniearnya.
4) Pembuatan Larutan Kontrol Positif
Dilakukan dengan cara dipipet sebanyak 1,0 mL dari larutan baku
glukosa anhidrat p.a. 100 ppm kemudian ditambah pereaksi sesuai
prosedur operating time selama operating time dengan panjang
gelombang maksimum.
5) Pembuatan larutan blangko

56
 Dibuat dengan 1,0 mL reagen Cu Alkalis (campuran reagen Nelson
A dan B) ditutup dengan kapas, dipanaskan di atas air mendidih
selama 10 menit. Larutan didinginkan selama 5 menit, dipindahkan
ke dalam labu ukur 5,0 mL, ditambahkan 1,0 mL reagen
arsenomolibdat ke dalam labu tersebut lalu diencerkan dengan
aquadest sampai batas, dikocok. Larutan diukur selama operating
time dengan panjang gelombang maksimum (35,36).
c. Validasi Metode Nelson Somogyi :
1) Linearitas
Dilakukan dengan cara menentukan persamaan garis dari hubungan
antara konsentrasi dengan serapan. Dari larutan induk glukosa 1000
ppm dibuat seri konsentrasi 200, 300, 400, 500, 600, 700, dan 800
ppm kemudian ditambahkan pereaksi sesuai prosedur operating time,
diukur selama waktu operating time pada panjang gelombang
maksimum. Dibuat persamaan regresi linear antara konsentrasi vs
absorbansi, tentukan slope, intersep, dan koefisien korelasi (r).
2) Akurasi ( % recovery)
Dilakukan menggunakan 500 ppm konsentrasi sampel dan 500 ppm
konsentrasi baku standar glukosa, serta campuran keduanya ditambah
pereaksi sesuai prosedur penentuan operating time, lalu diukur
selama operating time pada panjang gelombang maksimum.
3) Presisi
Ketelitian suatu metode yang digunakan dapat dilihat dari nilai
presisinya. Nilai SD dan SDR dihitung dari % recovery yang didapat.
4) Penetapan Uji Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ)
Penentuan LOD (batas deteksi) dan LOQ (batas kuantitasi) dapat
dilakukan dengan perhitungan secara statistik melalu regresi linear
dari kurva baku standar yang diperoleh. Nilai pengukuran akan sama
dengan nilai b pada persamaan garis liniear Y = a + bX, sedangkan
simpangan baku blangko sama dengan simpangan baku residual
(Sy/x)

57
 d. Penentuan Aktivitas Antidiabetes secara in-vitro
Ditimbang secara saksama 10,0 mg ekstrak kental, ekstrak kering setara
dengan 10,0 mg ekstrak kental, dan nanopartikel ekstrak kering rimpang
temulawak setara dengan 10,0 mg ekstrak kental, kemudian masing –
masing dimasukkan ke dalam 10,0 mL etil asetat, lalu disentrifugasi pada
kecepatan 14000 rpm selama 45 menit, residu dipisahkan dari
supernatan. Residu yang diperoleh ditambahkan etil asetat hingga
volume 15 mL, lalu disentrifugasi kembali pada kecepatan dan waktu
yang sama, residu dipisahkan kembali dari supernatan, supernatan
dihomogenkan dengan alat vortex selama 1 menit, kemudian masing –
masing dipipet 1 mL, ditambahkan 1,0 mL larutan baku glukosa dari
konsentrasi larutan induk 1000 ppm, ditambahkan dengan pereaksi sesuai
prosedur operating time, lalu larutan diukur serapannya dengan alat
spektrofotometer UV- Vis selama operating time dan panjang gelombang
maksimum yang diperoleh. Dibuat kurva hubungan antara konsentrasi
dengan absorbansi, untuk ditentukan persamaan regresi linearnya,
kemudian dihitung persentase penurunan kadar glukosa.
13. Analisis Data
Dalam penelitian ini digunakan rancangan faktorial 22 yaitu dengan 2
variabel bebas: ekstrak kental dan perbandingan jumlah kitosan dengan
natrium tripolifosfat pada masing-masing konsentrasi rendah dan tinggi.
Variabel tergantung merupakan respon yang diuji berupa data ukuran
partikel, potensial zeta, efisiensi penjerapan dan uji aktivitas antidiabetes dari
nanopartikel rimpang temulawak. Analisis data dilakukan terhadap seluruh
respon uji dengan menggunakan software minitab 19, sehingga masing-
masing respon uji memiliki pola berbentuk contour plot. Dilakukan
penumpang tindihan (superimposed) terhadap seluruh respon uji, dengan
demikian akan diperoleh daerah irisan yang menunjukkan formula optimum
yang memenuhi persyaratan mutu baik secara fisika maupun kimia
berdasarkan persyaratan yang ada.

58
a. Hipotesis 1
1) Hipotesis nol (Ho): Diduga aktivitas antidiabetes kurkuminoid dalam
ekstrak kental, ekstrak kering, dan nanopartikel ekstrak kering
rimpang temulawak melalui uji in-vitro menggunakan metode Nelson
Somogyi yang tervalidasi tidak berbeda secara bermakna.
2) Hipotesis alternatif (H1): Diduga aktivitas antidiabetes kurkuminoid
dalam ekstrak kental, ekstrak kering, dan nanopartikel ekstrak kering
rimpang temulawak melalui uji in-vitro menggunakan metode Nelson
Somogyi yang tervalidasi berbeda secara bermakna.
b. Hipotesis 2
1) Hipotesis nol (Ho): Diduga variasi konsentrasi ekstrak dan
perbandingan jumlah kitosan dengan natrium tripolifosfat tidak
memberikan perbedaan bermakna terhadap respon uji.
2) Hipotesis alternatif (H1): Diduga variasi konsentrasi ekstrak dan
perbandingan jumlah kitosan dengan natrium tripolifosfat
memberikan perbedaan bermakna terhadap respon uji.
c. Hipotesis 3
1) Hipotesis nol (Ho): Diduga formula optimum nanopartikel ekstrak
kering rimpang temulawak tidak berpengaruh secara signifikan
terhadap respon uji.
2) Hipotesis alternatif (H1): Diduga formula optimum nanopartikel
ekstrak kering rimpang temulawak setidaknya terdapat salah satu
faktor yang mempengaruhi respon uji.
Langkah berikutnya adalah analisis data berupa ukuran partikel,
potensial zeta, efisiensi penjerapan dan uji aktivitas antidiabetes dari
nanopartikel ekstrak kering rimpang temulawak yang merupakan respon uji
dengan software minitab 19, sehingga masing-masing respon uji memiliki
pola berbentuk contour plot. Untuk mendapatkan formula optimum
dilakukan penumpang tindihan (superimposed) terhadap seluruh respon uji,
dengan demikian akan diperoleh daerah irisan yang menunjukkan formula
optimum.

59
 BAB V
JADWAL KEGIATAN
Minggu Ke- 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17

Kegiatan
1.penelusuran pustaka

2. Penyusunan proposal

3. Ujian proposal

4. pengumpulan rimpang
temulawak
5. pembuatan simplisia

6. ekstraksi simpliia

7. pembuatan ekstrak kental

8. Pemeriksaan ekstrak kental

9. optimasi suhu pengering

semprot
10. pengeringan ekstrak kental

11. evaluasi serbuk hasil spray

drying
12. Formulasi nanopartikel
ekstrak kering rimpang
temulawak
13. karakterisasi suspensi
nanopartikel
14. Uji kelarutan

15. Validasi Metode

16. Uji aktivitas antidiabetes

17. Analisis Data

18. Penyusunan buku skripsi

19. Ujian Sidang Skripsi

60
 DAFTAR PUSTAKA
1. Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. INFODATIN Hari Diabetes
Sedunia. Jakarta: Pusat Data dan Informasi Kementerian Kesehatan Republik
Indonesia; 2018. h.4
2. American Diabetes Association. Standards of Medical Care in Diabetes
Volume 41. American Diabetes Association: 2018. h.68
3. Kristiana L, Suharmiati. Analisis Rasionalisasi Kandungan Ramuan Diabetes
Mellitus di Laboratorium Penelitian dan Pengembangan Pelayanan
Pengobatan Obat Tradisional Volume 9. Surabaya: Peneliti Puslitbang
Sistem dan Kebijakan Kesehatan; 2006. h.5
4. Novianto F, Triyono A. Studi Klinis Formula Jamu Antihiperglikemia
Terhadap Fungsi Hati. Karanganyar: Balai Besar Penelitian dan
Pengembangan Tanaman Obat dan Obat Tradisional; 2015.
5. Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. Uji Klinis Fornula jamu
temulawak, kunyit dan Meniran Terhadap Kebugaran Jasmani. Jakarta:
Kementerian Kesehatan Republik Indonesia Badan Penelitian dan
Pengembangan Kesehatan Balai Besar Penelitian dan Pengembangan
Tanaman Obat dan Obat Tradisional; 2017. h. 4
6. Prakaya, M.R. Aktivitas Antihiperglikemia SNEDDS Kombinasi Ekstrak
Terpurifikasi Andographis paniculata (Burm.F) Nees dan Curcuma
xanthorrhiza Roxb. Pada Tikus Resisten Insulin. Yogyakarta: Universitas
Gajah Mada; 2016. h.1
7. Silalahi M, Nisyawati, Walujo E.B, Supriatna, J. & Mangunowardoyo, W.
The loyal knowledge of medicinal plants sub-ethnic Batak Simalungun of
North Sumatra. Indonesia: Journal Ethnopharmacology; 2015. h.1
8. Singh M, Singh S, Prasad S, Gambhir I.S. Nanotechnology in medicine and
antibacterial effect of silver nanoparticles. India: Digest Jurnal of
Nanoparticles and Biostructures 3; 2008. h. 115 – 122

61
9. Martien R, Adhyatmika, Irianto I.D.K, Farida V, Sari D.P. Perkembangan
Teknologi Nanopartikel dalam Sistem Penghantaran Obat. Indonesia.
Research Gate; 2012.
10. Anonim. Sistem Penghantaran Obat Nanopartikel Kosmetik. 2015. Diakses
dari http://akademikpsf.staff.ub.ac.id/files/2015/01/SPO-nanopartikel-
kosmetik.pdf pada tanggal 6 Agustus 2019.
11. Ochekpe N.A, Olorunfemi P.O, Nguwuluka N.C. Nanotechnology and Drug
Delivery Part 2: Nanostructures for Drug Delivery. University of Benin,
Nigeria. Research Gate; 2009.
12. Anggoro D, Rezki R.S, M.Z Siswarni. Ekstraksi Multi Tahap Kurkumin dari
Temulawak Menggunakan Pelarut Etanol. Sumatera Utara: Jurnal Teknik
Kimia Universitas Sumatera Utara Volume 4; 2015.
13. Septevani A.A, Sondari D, M Ghozali. Pengaruh Teknik Pengeringan
Semprot (Spray Drying) dalam Mikroenkapsulasi Asiaticoside dan Ekstrak
Jahe Volume 14. Tangerang Selatan: Pusat Penelitian Kimia (P2K) – LIPI;
2013.
14. Richana N, Nursyafira F, Pujoyuwono, Herawati H. Optimasi Proses
Produksi Maltodextrin dari Tapioka Menggunakan Spray Dryer. Bandung:
Prosiding Seminar Nasional Teknologi Inovatif Pascapanen untuk
Pengembangan Industri Berbasis Pertanian; 2005.
15. Suryani, Wahyuni, Ariastika D, Rahmanipu. Formulasi Nanopartikel
Kurkumin dengan Teknik Gelasi Ionik menggunakan Kitosan, Tripolifosfat,
dan Natrium Alginat serta Uji Stabilitasnya Secara In-Vitro. Kendari:
Pharmauho Volume 2, No. 1, Hal. 17 – 21; 2016
16. Mardliyati E, Muttaqien S, Setyawati D. Sintesis nanopartikel kitosan-
tripolifosfat dengan Metode Gelasi Ionik Pengaruh Konsentrasi dan Rasio
Volume terhadap Karakteristik Partikel. Prosiding. Pertemuan Ilmiah Ilmu
Pengetahuan dan Teknologi Bahan; 2012; 2(1): 1411-2213.
17. Gambar II.1 rimpang temulawak diakses dari https://hellosehat.com/hidup-
sehat/fakta-unik/manfaat-temulawak/ pada 11 November 2019 pukul 12.00
WIB.

62
18. Anonim. Klasifikasi dan Morfologi Tanaman Temulawak. Diakses dari
https://agroteknologi.id/klasifikasi-dan-morfologi-tanaman-temulawak/
19. Anonim. Klasifikasi dan Ciri-Ciri Morfologi Temulawak. Diakses dari
http://www.materipertanian.com/klasifikasi-dan-ciri-ciri-morfologi-
temulawak/
20. Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan. Inventaris Tanaman Obat
Indonesia I jilid 1. Jakarta: Departemen Kesehatan dan Kesejahteraan Sosial
Republik Indoensia; 2000. h.85
21. Gambar II.2 struktur kurkuminoid. Muffidah. Analisis Kadar Curcuminoid
pada Rimpang Kunyit Menggunakan Spektrofotometer Visible. Semarang:
Universitas Diponegoro; 2015.
22. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Farmakope Herbal Indonesia
Edisi 1. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Direktorat
Jendral POM; 2008. h. 150,151,152,153.
23. Kumavat D.S. Degradation Studies of Curcumin. India: International Journal
of Phamacy Review and Research; 2013. Vol 3.
24. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Parameter Standar Umum
Ekstrak Tumbuhan Obat Cetakan Pertama. Jakarta: Direktorat Jendral
Pengawasan Obat dan Makanan; 2000. h.1 – 12
25. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Farmakope Indonesia edisi V.
Jakarta: Direkotrat Jenderal Pengawas Obat dan Makanan. 2014.
26. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Farmakognosi Jilid 1 Cetakan
Ketiga, Jakarta: Badan Pengembangan dan Pemberdayaan Sumber Daya
Manusia Kesehatan Pusdiknakes; 2004. h.12, 139
27. Purbayanto A.T. Pengaturan Suhu Outlet Pada Pengeringan Semprot
Terhadap Sifat Fisik, Kimia, dan Mikrobiologi Susu Kambing Bubuk. Bogor:
Fakultas Teknologi Pertanian Institut Pertanian Bogor; 2009. h.23
28. Gambar II.3 Skema pengeringan pada Alat Spray Dryer diakses dari
https://tsffarmasiunsoed2012.wordpress.com/2012/05/21/metode-
pengeringan-dengan-menggunakan-spray-dryer-continuous-drying/ pada 6
Agustus 2019

63
29. Hariyadi, P. Pengering Semprot. Aplikasinya untuk Mikroenkapsulasi
Komponen Fungsional. Indonesia; 2017. diakses dari
http://phariyadi.staff.ipb.ac.id/files/2017/05/2017-Pengering-Semport-PHA-
FRI-edisi-Mei-2017.pdf
30. Lachman L, Herbert A.L, Joseph L.K, Teori dan Praktek Industri Farmasi
edisi III. Jakarta: Penerbit Universitas Indonesia; 2008.
31. International Diabetes Federation. Diabetes Atlas Eight Edition.
International Diabetes Federation; 2017
32. American Diabetes Association. Treatment of Hypertension in Adults with
Diabetes: Diabetes Care; 2003
33. Bina Kefarmasian dan Alat Kesehatan Departemen Kesehatan Republik
Indonesia. Pharmaceutical Care untuk Penyakit Diabetes Mellitus. Jakarta:
Direktorat Bina Farmasi Komunitas dan Klinik Direktorat Jendral; 2005
34. Gusakov A.V, Kondratyeva E.G, Sinitsyn A.P. Comparison of Two Methods
for Assaying Reducing Sugars in the Determination of Carbohydrase
Activities. Russia: Creative Commons Attribution License; 2011
35. Al-Kayyis H.K, Susanti. Perbandingan Metode Nelson-Somogyi dan
Anthrone-Sulfat Pada Penetapan Kadar Gula Pereduksi dalam Umbi
Cilembu. Yogyakarta: Universitas Ahmad Dahlan; 2016 h. 81 - 89
36. Anggraini D.I, Damayanti D. Studi Antidiabetes Kombinasi Ekstrak Etanol
Kubis dan Tomat Secara In-Vitro. Surakarta: Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan
Nasional; 2019
37. Vifta R.L, Advistasari Y.L. Analisis Penurunan Kadar Glukosa Fraksi n-
heksana Buah Parijoto (Medinilla speciose B) secara In-Vitro dengan Metode
Spektrofotomerti UV-Vis. Semarang; 2018 diakses dari
http://journal.unnes.ac.id/sju/index.php/ijcs
38. Bangale M.S, Mitkare S.S, Gattani S.G and Sakarkar D.M. Recent
Nanotechonological Aspects in Cosmetics and Dermatological Preparations:
International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences; 2012. 4(2)
: 88-97.

64
39. Kumar R, Majeti N.V. Nano and microparticles as controlled drug delivery
devices. J Pharm Sci ; 2000. h. 234 – 258
40. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Farmakope Indonesia. Edisi V.
Jakarta: Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan; 2014. h.30
41. V.J Mohanraj, Y Chen. Nanoparticles – A Review. Tropical Journal of
Pharmaceutical Research Vol. 5 (1); 2006 p.561 – 573
42. Rawat M, Singh D, Saraf S. Nanocarries: Promising vehicle for bioactive
drugs. Boil Pharm Bull; 2006; 29(9):1790 – 8
43. Gambar nanotube diakses dari https://www.researchgate.net/
44. Gambar nanoliposom diakses dari https://www.researchgate.net/
45. Gambar polymerik misel diakses dari https://www.researchgate.net/
46. Gambar dendrimer diakses dari https://www.researchgate.net/
47. Gambar nanopartikel polimer diakses dari https://www.researchgate.net/
48. Abdassah, M. Nanopartikel dengan Gelasi Ionik. Fakultas Farmasi
Universitas Padjajaran: Farmaka; 2012.
49. Gambar metode gelasi ionik diambil dari Asian Journal of Pharmaceutical
and Clinical Research B.V.N Nagarvarma, K.S. Yadav, Ayaz A, L.S.
Vasudha, H.G Shivakumar. Different Techniques for Preparation of
Polymeric Nanoparticles – A Review. 2012
50. Rahmayani I, Ambarsari L, Safithri M. Antihyperglicemic Activity of
Curcuma xanthorrhiza Roxb. Nanocurcuminoid Emulsion on Streptozotocin
Induced Sprague-Dawley Rat: Bogor; 2015. Current Biochemistry Vol. 3(2):
66 -79,2016.
51. Fitrianda E, Erniwati. Aktivitas Antidiabetes dan Antidislipidemia dari
Kombinasi Ekstrak Buah Rimbang (Solanumtorvum Swartz) dan Rimpang
Temulawak (Curcuma xanthorrhiza R.) pada mencit diabetes yang diinduksi
aloksan: Padang Scienta vol 5, no.2; 2015
52. Bhumkar D.R and Pokharkar V.B. Study on Effect of pH on Cross Linking
of Chitosan with Sodium Tripoliphosphate: A Technical Note. J Pharm Sci
Techno; 2006. p.7(2): 1-6.

65
53. N Donighi M, R Eskandari, M.R Avadi, H Zolfagharian, A Sadeghi M.M, M
Rezayat. Preparation and in-vitro characterization of chitosan nanoparticles
containing Mesobuthus eupeus scorpion venom as an antigen delivery
system. Iran: The Journal of Venomous Animals and Toxins including
Tropical Diseases Volume 18; 2012. p. 44 - 52
54. Kurniawan, E. Preparasi dan Karakterisasi Nanopartikel Sambung Silang
Kitosan – Natrium Tripolifosfat dalam Gel Verapamil Hidroklorida. Depok:
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Program Studi Ekstensi
Farmasi UI; 2012.
55. Underwood A.L, Day R.A. Analisis kimia kuantitatif. Edisi ke-VI.
Diterjemahkan oleh Soendoro R. Jakarta: Penerbit Erlangga; 1986. Hal. 396
-404.
56. Redja, I.W, Aziz Z, Yantih N. Analisis instrumental. Jakarta: Fakultas
Farmasi Universitas Pancasila; 2009. h. 23 – 43.
57. Roth H.J, Blaschke G. Analisis Farmasi. Diterjemahkan oleh Sarjoko K,
Slamet I. Yogyakarta: Gajah Mada University Press. 1998. h.345–374,431 –
2
58. Rohman A, Gandjar. Kimia farmasi analisis, Yogyakarta: Pustaka Pelajar;
2007
59. Instrumentasi Spektrofotometer UV-Vis. Diambil dari
https://www.google.com/search?q=instrumentasi+spektrofotometer+uv-
vis+indopdf pada 16 November 2019
60. Mulja M, Suharman. Analisis instrumental edisi 1. Surabaya: Airlangga
University Press; 1995
61. Riyanto, Ph.D. Validasi dan Verifikasi Metode Uji: sesuai dengan ISO/IEC
17025 Laboratorium Pengujian dan Kalibrasi ed 1. Yogyakarta: Deepublish;
2014.
62. Watson DG. Analisis farmasi: buku ajar untuk mahasiswa farmasi dan
praktisi kimia farmasi. Jakarta: EGC; 2009

66
63. Amelinda E, Widarta I.W.R, Darmayanti L.P.T. Pengaruh Waktu Maserasi
Terhadap Aktivitas Antioksidan Ekstrak Rimpang Temulawak. Bali: Jurnal
Ilmu dan Teknologi Pangan; 2018.
64. Suryani, Martien R, Ismail H. Preparation of Curumin Nanoparticles Cellular
Uptake Study on HeLa Cells. Dubai: International Confrence on Latest
Trends in Food, Biological and Ecological Sciences; 2015.
65. Desmiaty Y, Rahmat D, Maulidina N.M. Pembuatan Nanopartikel Berbasis
Kitosan Dari Infus Daun Sirsak sebagai Antioksidan. Jakarta: Research gate;
2016.
66. Syarmalina, Wirawan D, Rahmat D. Formulasi Nanopartikel Ekstrak
Temulawak Berbasis Kitosan Sebagai Antijerawat. Jakarta: Medical sains
Vol. 3 No.2; 2019.
67. Rahman S.M.H, Telny T.C, Ravi T.K, Kuppusamy. Role of Surfactant and
pH in Dissolution of Curcumin. India: Journal of Pharmaceutical Sciences;
2009.

67
68