ANALISIS KADAR KUERSETIN DALAM EKSTRAK DAUN SIRSAK

(Annona muricata L.)DENGAN MENGGUNAKAN METODE HIGH

PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC)
LAPORAN PRAKTIKUM METODE FISIKOKIMIA

Dosen Pengampu:
Zaldy Rusli, M.Farm

Oleh:
Mia Zami’atul Latifah
066117057

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS PAKUAN
BOGOR
2019
 DAFTAR ISI

DAFTAR ISI .................................................................................................. i

DAFTAR GAMBAR ...................................................................................... ii
DAFTAR TABEL .......................................................................................... iii
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................. iv
BAB I PENDAHULUAN .............................................................................. 1
1.1 Latar Belakang .......................................................................................... 1
1.2 Tujuan ... .................................................................................................... 2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ................................................................... 3
2.1 Daun sirsak (Annona muricata L.) ............................................................. 3
2.1.1 Definisi ............................................................................................. 3
2.1.2 Kladifikasi Tanaman ........................................................................ 3
2.1.3 Morfologi ......................................................................................... 4
2.1.4 Kuersetin .......................................................................................... 4
2.2 High Performance Liquid Chromatography (HPLC) ................................ 5
BAB III METODE KERJA .......................................................................... 7
3.1 Alat dan bahan ........................................................................................... 7
3.2 Metode kerja............................................................................................... 7
3.2.1 Pembuatan ekstrak daun sirsak ........................................................ 7
3.2.2 Pembuatan eluen sebagi fase gerak .................................................. 7
3.2.3 Pembuatan larutan standar dan deret standar ................................... 8
3.2.4 Preparasi sampel .............................................................................. 8
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................... 9
4.1 Data Pengamatan ........................................................................................ 9
4.1.1Deret standar kuersetin ..................................................................... 9
4.1.2 Sampel.............................................................................................. 9
4.2 Grfik ...... .................................................................................................... 10
4.3 Pembahasan ................................................................................................ 10

i
BAB V KESIMPULAN ................................................................................. 14
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 15
LAMPIRAN .................................................................................................... 16

ii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Daun sirsak .................................................................................... 3

Gambar 2.Struktur kuersetin ............................................................................ 5
Gambar 3. Instrumen HPLC ............................................................................ 5
Gambar 4. Grafik linear deret standar .............................................................. 10
Gambar 5. Standar 21 PPM ............................................................................. 20
Gambar 6. Standar 48 PPM.............................................................................. 21
Gambar 7. Standar 168 PPM............................................................................ 21
Gambar 8. Sampel 1 ......................................................................................... 22
Gambar 9. Sampel 2 ......................................................................................... 22
Gambar 10. Sampel 3 ....................................................................................... 23
Gambar 11. Eluen (Fase gerak) ........................................................................ 24
Gambar 12. Pembuatan eluen (Fase gerak)...................................................... 24
Gambar 13. Pembuatan larutan induk dan deret standar.................................. 25
Gambar 14. Preparasi sampel........................................................................... 25
Gambar 15. Degas ............................................................................................ 26

iii
 DAFTAR TABEL

Tabel 1. Larutan deret standar ......................................................................... 9

Tabel 2. Sampel ................................................................................................ 9
Tabel 3. Peak standar 21 PPM ......................................................................... 20
Tabel 4. Peak standar 48 PPM ......................................................................... 20
Tabel 5. Peak standar 168 PPM ....................................................................... 21
Tabel 6. Peak sampel 1..................................................................................... 22
Tabel 7. Peak sampel 2..................................................................................... 22
Tabel 8. Peak sampel 3..................................................................................... 23

iv
 DAFTAR LAMPIRAN
1. Perhitungan .......................................................................................... 17
1.1 Eluen (Fase gerak).......................................................................... 17
1.2 Standar induk ................................................................................. 18
1.3 Deret standar .................................................................................. 18
1.4 Sampel ............................................................................................ 19
1.5 % Kadar kuersetin dalam sampel ................................................... 19
2. Data hasil kromatogram ....................................................................... 20
2.1 Standar 21 PPM ............................................................................. 20
2.2 Standar 48 PPM ............................................................................. 21
2.3 Standar 168 PPM ........................................................................... 21
2.4 Sampel 1 ......................................................................................... 22
2.5 Sampel 2 ......................................................................................... 22
2.6 Sampel 3 ......................................................................................... 23
3. Proses penetapan kadar kuersetin ........................................................ 24

v
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar belakang

Banyak berbagai jenis tanaman yang ada di Indonesia yang dapat
digunakan dan bermanfaat untuk pengobatan. Akan tetapi banyakan
tanaman yang dianggap berkhasiat sebagai obat belum diketahui
kandungan kimia dan khasiat obat sehingga diperlukan penelitian lebih
lanjut terhadap tanaman-tanaman tersebut. (Hariana,2006)
Tanaman sirsak (Annona muricata L.) termasuk salah satu tanaman
yang hidupdi daerah tropis. Banyak khasiat dari tanaman ini dari mulai
daun sampai batang dapat dimanfaatkan untuk pengobatan. Akan tetapi,
khasiat pengobatan yang paling banyak terletak pada bagian daun sirsak
tersebut. (Biba V.S et al., 2014)
Flavonoid merupakan senyawa polifenol yang banyak terdapat di
alam. Sebagian besar tumbuhan obat mengandung flavonoid. Berdasarkan
struktur kimianya, flavonoid dibedakan menjadi flavanol, flavon, flavanon,
isoflavon, antosianidin, dan khalkon.Fungsi sebagian besar flavonoid yaitu
sebagai antioksidan sehingga sehingga sangat baik apabila digunakan
untuk pencegahan kanker. (Patil et.al., 2009)
Menurut (Cupritabu. 2010) Kegunaan umum HPLC yaitu untuk
pemisahan senyawa organik, anorganik maupun senyawa biologis; analisis
ketidakmurnian (impurities); analisis senyawa-senyawa mudah menguap
(volatile); penentuan molekul-molekul netral, ionic, maupun zuiter ion;
isolasi dan pemurnian senyawa; pemisahan senyawa-senyawa yang
strukturnya hampir sama; pemisahan senyawa-senyawa dengan jumlah
sekelumit(trace elements), dalam jumlah yang banyak dan dalam skala
proses industry, HPLC merupakan metode yang tidak destruktif dan dapat
digunakan baik untuk analysis kualitatif maupun kuantitatif.

1
1.2 Tujuan
1. Mengetahui prinsip kerja dan mengetahui pengopersian alat HIGH
PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC)
2. Menetapkan kadar kuersetin pada tanaman daun sirsak (Annona
muricata L.)

2
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Daun Sirsak (Annona muricata L.)

2.1.1 Definisi
Daun sirsak merupakan jenis tanaman annona yang paling
mudah didapatkan, biasanya dapat tumbuh pada ketinggian
1200 m dari permukaan laut. Tumbuh pada iklim dengan suhu
22-28⁰c dan kelembabannya berkisar antara 1500-2500mm
pertahun. (Arief,2012)
Daun sirsak merupakan salah satu tanaman yang
mengandung senyawa flavonoid, triterpenoid, saponin,
polifenol, dan metabolit sekunder lain yangbdiduga dapat
menyembuhkan kanker. (Bilqis,2013)
2.1.2 Klasifikasi Tanaman

Gambar 1. Daun Sirsak

Klasifikais dari tumbuhan sirsak adalah:
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Sub divisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Ordo : Policarpiceae
Familia : Annonaceae
Genus : Annona
Spesies : Annona muricata L. (Sunarjo,2005)

3
2.1.3 Morfologi
Daun sirsak berbentuk bulat dan berukuran panjang, bagian
ujung daunnya meruncing dan bentuk dan menyirip, memiliki
permukaan daun yang mengkilap dan berwarna hijau muda
sampai dengan hijau tua. Termasuk kedalam bunga berpistil
amjemuk karena memiliki putik bunga yang banyak. Susunan
bunganya hemisklik dimana sebagian bunganya terdapat dalam
lingkaran dan sebagian lagi membentuki spiral. Mahkota
bunga berjumlah 6 dimana apabila sudah tua akan lepas dari
dasar bunganya. Pada daun sirsak bunga akan muncul dari
ketiak daunnya, cabang, atau ranting. (Sunarjono, 2005)
2.1.4 Kuersetin
Kuersetin merupakan salah satu senyawa golongan
flavonoid yang amat kuat secara biologis. Memiliki kandungan
anti oksidan yang tinggi dimana apabila vitamin c memiliki
kandungan antioksidan 1 maka kuersetin mengandung
antioksidan sebanyak 4,7. Kuersetin termasuk kedalam
senyawa flavonoid golongan flavonol yang merupakan
sekelompok besar antioksidan bernama polifenol. Yang terdiri
dari antosianidin, biflavon, katekin, flavanon, flavonon, flavon,
dan flavonol.
Berbagai macam penyakit degenerative dipercaya dapat
dicegah dengan adanya kuersetin, kuersetin ini dapat
mencegah terjadinya peroksidasian lemak dengan cara
menangkap radikal bebas dan menghelat ion logam transisi
sehingga dapat mencegah proses oksidasi dari Low Density
Lipoproteins (LDL).

4
 Gambar 2. Struktur Kuersetin
2.1 High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
High Performance Liquid Chromatografi (HPLC) merupakan
suatu metode pemisahan kromatografi yang didasarkan pada perbedaan
distribusi dari campuran komponen tersebut diantara dua fase yaitu
terdiri dari fase diam (stationary) dan fase gerak (mobile). Zat padat
atau zat cair merupakan fase diamnya dan zat cair atau gas berupa fase
geraknya. (Acun,dkk. 2010)
Prinsip dasar dari HPLC yaitu memisahkan suatu komponen
dalam sampel dimana selanjutnya akan diidentifikasi dan dihitung
konsentrasi dari masing-masing komponen tersebut (analisa
kuantitatif). Identifikasi kimia dilakukan untuk analisis kualitatif dari
analit didalam sampel. (Riyadi, 2009).

Gambar 3. Instrumen HPLC

5
Komponen utama HPLC menurut (Adnan,1997):
1. Reservoir pelarut (Solvent)
Zat pelarut yang digunakan dengan variasi polaritas yang
digunakan, variasi polaritasnya tergantung dari senyawa yang akan
dianalisa. Hal penting yang harus diperhatikan yaitu tempat pelarut
harus memungkinkan untuk proses menghilangkan gasyang ada
didalampelarut yang digunakan.
2. Pompa
Dengan kecepatan dan tekanan yang tetap pompa ini digunakan
sebagai alat yang digunakan untuk mengalirkan fase gerak.
3. Injektor
Injeksi yang digunakan berupa syringe. Alat ini digunakan untuk
memasukan sampel ke dalam kolom, pada saat penginjekisian
sampel diharapkan pelarut tidak mengganggu masuknya sampel
kedalam kolom.
4. Kolom kromatografi
Kolom ini terbuat dari logam atau stainlessteel dengan ukuran
panjang sekitar 10-25 cm dan diameter 4,5-5 mm. Kolom ini diisi
dengan fase diam (stasioner) yang memiliki ukuran 5-10
mikrometer.
5. Detektor
Alat ini memiliki sensitivitas yang tinggi, linear untuk jangka
konsentrasi tertentu dan dapat mendeteksi eluen tanpa
mempengaruhi resolusi kromatografi. Alat ini dapat digunakan
untuk mendeteksi sampel yang digunakan pada analisa.
6. Waste
Tempat penampung pembuangan eluen
7. Recorder
Menampilkan data yang diperoleh dari hasil analisis dalam bentuk
kromatogram dalam komputer.

6
 BAB III
METODE KERJA

3.1 Alat dan Bahan

Alat yang digunakan dalam percobaan kali ini yaitu alat HPLC,
alat refluks, alumunium foil, beaker glass, bulp, degassing, erlemeyer,
gelas ukur, kaca arloji, kertas saring, labu ukur, mikro pipet, Millipore,
pipet volume 5 ml, pipet tetes, timbangan analitik, syringe, vial.
Bahan yang digunakan pada percobaan kali ini yaitu asam
ortofosfat 0,1%, asetonitril, aquadest, ekstrak daun sirsak, etanol 95%
standar kuersetin.
3.2 Metode kerja
2.1.2 Pembuatan ekstrak daun sirsak
Ditimbang sebanyak 25 gram sampel daun sirsak (Annona
muricata L.) yang telah diserbukkan, kemudian dimasukkan
kedalam alat refluks dan ditambahkan etanol 95% sebanyak
250 ml. Ekstraksi dilakukan selama ± 4 jam.
2.1.3 Pembuatan eluen sebagai fase gerak
Pembuatan pengenceran larutan asam ortofosfat 145%
menajdi larutan 0,1% asam ortofosfat: Dimasukan asam
ortofosfat 145% sebanyak 138 µl menggunakan mikro pipet
kedalam labu ukur 600 ml, kemudian ditambahkan aquadest ad
600 ml.
Pembuatan eluen antara As.Ortofosfat dan asetonitril
dengan perbandingan 20:80. As.ortofosfat digunakan sebanyak
240 ml dan asetonitril 60 ml. Kemudian di add sampai 500 ml
dan didegass selama beberapa menit.

7
2.1.4 Pembuatan Larutan Standar dan Deret Standar Kuersetin
Pembuatan larutan induk standar 200 PPM: Ditimbang
secara tertutup 21 mg kuersetin murni dengan menggunakan
kaca arloji, kemudian dimasukan kedalam labu ukur dan
dilarutkan menggunakan fase gerak ad tanda batas 100 ml, lalu
disaring sebanyak 5 ml dengan millipore dan didegassing.
Pembuatan deret standar (5 PPM, 10 PPM, 20 PPM, 40
PPM, 80 PPM, 160 PPM): Dilakukan pemipetan dari larutan
induk 200 ppm sebanyak 240 µl, 480 µl, 950 µl, 1900 µl, 3810
µl, 7620 µl. Kemudian dimasukkan kedalam labu ukur 10ml
ditambahkan fase gerak ad tanda batas 10 ml kocok ad
homogeny. Kemudian disaring sebanyak 5ml menggunakan
millipore dan didegassing.
2.1.5 Preparasi sampel
Preparasi sampel yang sudah jernih: Dilakukan penyaringan
dengan Millipore kemudian dimasukkan kedalam vial dan
didegassing.

8
 BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

3.1 Data pengamatan

4.1.1 Deret standar kuersetin
Tabel 1. Larutan deret standar
Konsentrasi Area [µV.Sec] tR [min] Height [µV]
20 9959 1.742 1956
40 12619 1.742 2474
160 24764 1.742 4836

4.1.2 Sampel
Tabel 2. Sampel
Sampel Area [µV.Sec] tR [min] Height [µV]
Sampel 1 4767 1.750 906
Sampel 2 5194 1.750 1019
Sampel 3 6398 1.758 1245

x Area 5453

FP 10
Kadar 0,027135%
sebenarnya (%)

9
 4.2 Grafik

Deret standar
30000

25000 y = 99.205x + 8141.8

R² = 0.9986
20000
Luas Area

15000
Series1
10000
Linear (Series1)
5000

0
0 50 100 150 200
Konsentrasi

Gambar 4. Grafik Linear Deret Standar

4.3 Pembahasan
Pada praktikum kali ini dilakukan percobaan mengenai
penetapakan kadar kuersetin dengan menggunakan metode High
Performance Liquid Chromatography (HPLC). Daun sirsak (Annona
muricata L.) merupakan salah satu tanaman yang mengandung senyawa
flavonoid, oleh karena itu daun sirsak dijadiakan sebagai sampel pada
percobaan kali ini. Ekstrak daun sirsak yang digunakan sebagai sampel
diekstraksi dengan menggunakan metode refluks. Metode refluks
prinsipnya yaitu pelarut volatile yang digunakan menguap pada suhu
tinggi kemudin akan didinginkan dengan adanya kondensor sehingga akan
merubah bentuk pelarut yang tadinya dalam bentuk uap akan mengembun
pada kondensor dan turun kedalam wadah reaksi sehingga selama proses
berlangsung pelarut akan tetap ada. Setelah ekstraksi selesai,ekstrak yang
didapat kemudian disaring untuk menghilangkan kotoran yang ada dalam
hasil ekstraksi.

10
 Proses pertama dilakukan pembuatan eluen atau fase gerak
menggunakan asetonitril dan asam ortofosfat dengan perbandinngan
80:20. Sampel yang digunakan yaitu senyawa kuersetin pada daun sirsak,
kuersetin sendiri memiliki kelarutan yang bersifat polar oleh karena itu,
fase gerak yang digunakan bersifat polar. Eluen pada proses
pembuatannya dilakukan penyaringan dengan menggunakan millipore dan
didegas untuk menghilangkan gas dan membuat larutan lebih homogen.
Eluen berperan penting dalam metode HPLC karena merupakan salah satu
faktor penentu keberhasilan proses pemisahan dimana terjadi difusi pada
analit dalam fase gerak kedalam kolom.
Proses selanjutnya yaitu pembuatan larutan standar dengan
menimbang kuersetin murni sebanyak 20mg, karena terjadi kelebihan
penimbangan 21mg maka konsentrasi larutan induk yang dibuat menjadi
210 PPM dengan melakukan perhitungan balik. Deret standar yang dibuat
yaitu 5 PPM, 10 PPM, 20 PPM, 40 PPM, 80 PPM, 160 PPM, namun
karena adanya perhitungan balik konsentrasi deret standar menjadi 5,25
PPM, 10,5 PPM, 21 PPM, 42 PPM, 84 PPM, 168 PPM. Tujuan dibuatnya
deret standar yaitu agar sampel dapat masuk kedalam range standar.
Setelah itu dilakukan penyaringan dengan menggunakan millipore dan
didegas untuk menghilangkan gas dan membuat larutan lebih homogen.
Sampel yang akan digunakan dibuat sebanyakan 500 PPM
kemudian diencerkan menjadi 50 PPM.Pengenceran ini dilakukan dengan
memipet 10ml lekstrak dari 500 PPM kemudian dimasukan kedalam labu
100ml dan di ad sampai garis batas. Kemudian dilakukan penyaringan
dengan menggunakan millipore dan didegas untuk menghilangkan gas dan
membuat larutan lebih homogen.

11
 Setelah semua preparasi selesai maka dilakukan penentuan kadar
dengan menggunaka metode High Performance Liquid Chromatography
(HPLC). Komponen utama HPLC menurut (Adnan,1997):
1. Reservoir pelarut (Solvent)
Zat pelarut yang digunakan dengan variasi polaritas yang digunakan,
variasi polaritasnya tergantung dari senyawa yang akan dianalisa. Hal
penting yang harus diperhatikan yaitu tempat pelarut harus
memungkinkan untuk proses menghilangkan gasyang ada
didalampelarut yang digunakan.
2. Pompa
Dengan kecepatan dan tekanan yang tetap pompa ini digunakan
sebagai alat yang digunakan untuk mengalirkan fase gerak.
3. Injektor
Injeksi yang digunakan berupa syringe. Alat ini digunakan untuk
memasukan sampel ke dalam kolom, pada saat penginjekisian sampel
diharapkan pelarut tidak mengganggu masuknya sampel kedalam
kolom.
4. Kolom kromatografi
Kolom ini terbuat dari logam atau stainlessteel dengan ukuran panjang
sekitar 10-25 cm dan diameter 4,5-5 mm. Kolom ini diisi dengan fase
diam (stasioner) yang memiliki ukuran 5-10 mikrometer.
5. Detektor
Alat ini memiliki sensitivitas yang tinggi, linear untuk jangka
konsentrasi tertentu dan dapat mendeteksi eluen tanpa mempengaruhi
resolusi kromatografi. Alat ini dapat digunakan untuk mendeteksi
sampel yang digunakan pada analisa.
6. Waste
Tempat penampung pembuangan eluen

12
7. Recorder
Menampilkan data yang diperoleh dari hasil analisis dalam bentuk
kromatogram dalam computer.
Pertama kali dimasukan eluen sebagai fase gerak kedalam
erlemeyer yang dihubungkan dengan selang yang telah diatur laju alirnya
1ml/menit. Sebelum dilakukannya penginjeksian deret standar dan sampel,
selang dicuci dengan tujuan untuk menghindari udara didalamnya dan
memastikan bahwa alirannya lancer. Kemudian setelah pencucian
diinjeksikan standar dan sampel kedalam lubang injector, standar
diinjeksikan dimulai dari konsentrasi terendah sampai terbesar yaitu
dimulai dari 21 PPM, 42 PPM, dan 168 PPM. Dari data yang diperoleh
didapatkan luar area deret standar yang menghasilkan persamaan regresi
linier y= 99.205x+ 8141.8 dengan nilai R2= 0,9986. Nilai R2 dapat
dikatakan baik apabila nilai R2  0,998.
Dari hasil pengolahan data analisis rata-rata luas area sampel yang
diperoleh yaitu sebesar 5453 dengan % kadar keursetin yang terkandung
didalam tanaman daun sirsak (Annona muricata L.) yaitu sebesar
0,0271%.

13
 BAB V
KESIMPULAN
Dari hasil percobaan diperoleh kesimpulan:
1. Kuersetin merupakan salah satu senyawa golongan flavonoid yang amat
kuat secara biologis. Kuersetin termasuk kedalam senyawa flavonoid
golongan flavonol
2. Eluen berperan penting dalam metode HPLC karena merupakan salah satu
faktor penentu keberhasilan proses pemisahan dimana terjadi difusi pada
analit dalam fase gerak kedalam kolom.
3. Degas dilakukan untuk menghilangkan gas dan membuat larutan lebih
homogen.
4. Tujuan dibuatnya deret standar yaitu agar sampel dapat masuk kedalam
range standar.
5. Dari data yang diperoleh didapatkan luar area deret standar yang
menghasilkan persamaan regresi linier y= 99.205x+ 8141.8 dengan nilai
R2= 0,9986.
6. Dari hasil pengolahan data analisis rata-rata luas area sampel yang
diperoleh yaitu sebesar 5453 dengan % kadar keursetin yang terkandung
didalam tanaman daun sirsak (Annona muricata L.) yaitu sebesar
0,0271%.

14
 DAFTAR PUSTAKA

Acun, dkk. 2010. Kromatografi gas. Jakarta: Universitas Indonesia.

Adnan. 1997. Teknik Kromatografi untuk analisis bahan makanan. Yogyakarta:
Andi offset.
Arief. 2012. Ekstrak daun sirsak (Annona muricata L.). Jakarta: EGC
Biba V.S et al., 2014. Anticancer, Antioxidant, and Antimicrobial Activity of
Annonaceae Family. World journal of pharmacy and pharmaceutical
sciences, 3 (3): 1595-1604
Bilqis. 2013. Kandungan senyawa daun sirsak. Jakarta: Rineka cipta
Cupritabu. 2010. Menghitung kadar obat dengan menggunakan HPLC. Surabaya:
Pustaka karya cipta.
Harina. 2006. Tumbuhan obt dan khasiatnya. Jakarta: Penebar swadaya
Patil et.al. 2014. Efektivitas flavonoid terhadap pencegahan kanker. Jakarta: EGC
Riyadi. 2009. Identifikasi signal kromatogram HPLC. Jakarta: PT.Kalman
Pustaka.
Sunarjo. 2005. Teknik budidaya sirsak dan srikaya. Jkarta: Agromedia pustaka

15
LAMPIRAN

16
1 Perhitungan
1.1 Eluen (600 ml)

Pengenceran As.Ortofosfat 145% 0,1%:

V1.N1 = V2.N2
V1.145 = 00.0,1
V1 = 0,138 ml ~ 138 µl ad 200 ml aquadest

Fase gerak Asetonitril:As.Ortofosfat= (80:20)

80
Asetonitril: 100x 600 ml = 480 ml

Untuk eluen 240 ml

Untuk pelarut 240 ml

20
As.Ortofosfat 0,1%: 100 𝑥 600 ml =120 ml

Untuk eluen 60 ml

Untuk pelarut 60ml

17
 1.2 Standar induk 200 PPM
20 𝑚𝑔 20.000 µg
= = 200 PPM
100 𝑚𝑙 100 𝑚𝑙

Hitung balik:
21 𝑚𝑔
x 200 PPM= 210 PPM
20 𝑚𝑔

1.3 Deret standar

1. Konsentrasi 5 PPM 4. Konsentrasi 40 PPM

V1.N1 = V2.N2 V1.N1 = V2.N2
V1.210 = 10.5 V1.210 = 10.40
V1 = 0,24 ml ~ 250 µl V1 = 1,9 ml ~2000 µl
2. Konsentrasi 10 PPM 5. Konsentrasi 80 PPM
V1.N1 = V2.N2 V1.N1 = V2.N2
V1.210 = 10.10 V1.210 = 10.80
V1 = 0,48 ml ~ 500 µl V1 = 3,81 ml ~ 4000 µl
3. Konsentrasi 20 PPM 6. Konsentrasi 80 PPM
V1.N1 = V2.N2 V1.N1 = V2.N2
V1.210 = 10.20 V1.210 = 10.160
V1 = 0,95 ml ~1000 µl V1 = 7,62 ml ~ 8000 µl

Hitung balik deret 5 PPM, 10 PPM, 20 PPM, 40 PPM, 80 PPM dan 160 PPM

1. Konsentrasi 5 PPM
210 𝑃𝑃𝑀 𝑋 0,25 𝑚𝑙
= 5,25 PPM
10 𝑚𝑙
2. Konsentrasi 10 PPM
210 𝑃𝑃𝑀 𝑋 0,5 𝑚𝑙
= 10, 5 PPM
10 𝑚𝑙
3. Konsentrasi 20 PPM
210 𝑃𝑃𝑀 𝑋 1 𝑚𝑙
= 21 PPM
10 𝑚𝑙
4. Konsentrasi 40 PPM
210 𝑃𝑃𝑀 𝑋 2 𝑚𝑙
= 42 PPM
10 𝑚𝑙
5. Konsentrasi 80 PPM
210 𝑃𝑃𝑀 𝑋 4 𝑚𝑙
= 84 PPM
10 𝑚𝑙
6. Konsentrasi 160 PPM
210 𝑃𝑃𝑀 𝑋 8 𝑚𝑙
= 168 PPM
10 𝑚𝑙

18
1.4 Sampel
Dalam bahan:
0,5 𝑔𝑟𝑎𝑚
0,50%= 100 𝑔𝑟𝑎𝑚

Dalam 25 gram bahan:

0,5 𝑔𝑟𝑎𝑚
x 25 gram= 0,125 gram
100 𝑔𝑟𝑎𝑚

Dalam ekstrak:
0,125 𝑔𝑟𝑎𝑚
= =0,0005 g/ml = 500 µg/ml (PPM)
250 𝑚𝑙

Pengenceran:

V1.N1 = V2.N2

10.500 = 100. N2

N2 = 50 PPM

1.5 % Kadar kuersetin dalam sampel

Kurva regresi linier yang diperoleh:

y= 99,205x+8141,8 Luas area sampel 1= 4767

b= 99,205 Luas area sampel 2= 5194

a= 814,8 Luas area sampel 3= 6398

Luas area sampel x = 5453

𝑦−𝑎 5453−8141,8
Kadar kuersetin = = = -27,1035 PPM x10-4= 0,0027135 %
𝑏 99,205

Kadar sebenarnya = X x FP

= 0,0027135%x10

=0,027135%

=0,027135 gram/100 ml

=27,135 mg/ 100 ml

19
2. Data Hasil kromatogram
2.1 Standar 21 PPM

Gambar 5. Standar 21 PPM

Tabel 3. Peak standar 21 PPM

20
2.2 Standar 48 PPM

Gambar 6. Standar 48 PPM

Tabel 4. Peak standar 48 PPM

2.3 Standar 168 PPM

Gambar 7. Standar 168 PPM

Tabel 5. Peak standar 168 PPM

21
2.4 Sampel 1

Gambar 8. Sampel 1

Tabel 6. Peak sampel 1

2.5 Sampel 2

Gambar 9. Sampel 2

Tabel 7. Peak sampel 2

22
2.6 Sampel 3

Gambar 10. Sampel 3

Tabel 8.Peak sampel 3

23
3. Proses Penentuan Kadar Kuersetin

Gambar 11. Eluen (Fase gerak)

Gambar 12. Pembuatan eluen (fase gerak)

24
Gambar 13. Pembuatan larutan induk dan deret standar

Gambar 14. Preparasi Sampel

25
Gambar 15. Degas

26