HALAMAN PERSETUJUAN

Judul Penelitian : Uji Toksisitas Akut Fraksi Etanol Bunga

Telang (Clitoria ternatea L.) Terhadap Mencit
Putih (Mus musculus).
Nama Mahasiswa : Rodhi Restino
Nomor Pokok Mahasiswa : 193110056
Program Studi : Farmasi
Fakultas : Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

MENYETUJUI
Komisi Pembimbing

Pembimbing I Pembimbing II

Yuli Wahyu Tri M., S.Pd., M.Si apt. Novita Sari., M.Farm

Ketua Program Studi

apt. Novita Sari., M.Farm

i
 DAFTAR ISI

HALAMAN PERSETUJUAN............................................................................... i
DAFTAR ISI .......................................................................................................... ii
DAFTAR TABEL.................................................................................................. v
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ vi
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................... vii
DAFTAR ISTILAH DAN SINGKATAN........................................................ viii
BAB I PENDAHULUAN ...................................................................................... 1
A. Latar Belakang........................................................................................ 1
B. Rumus Permasalahan.............................................................................. 2
C. Tujuan Penelitian .................................................................................... 3
D. Manfaat Penelitian .................................................................................. 3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ........................................................................... 4
A. Tinjauan Botani Tanaman Bunga Telang telang (Clitoria ternatea L.). 4
1. Klasifikasi ........................................................................................ 4
2. Morfologi ......................................................................................... 4
3. Sinonim............................................................................................ 5
4. Ekologi ............................................................................................ 5
5. Kandungan Fitokimia ...................................................................... 6
6. Makroskopis Bunga Telang (Clitoria ternatea L.).......................... 6
7. Mikroskopik .................................................................................... 6
B. Simplisia ................................................................................................. 7
1. Klasifikasi Simplisia ........................................................................ 7
2. Tahapan Pembuatan Simplisia ........................................................ 7
C. Ekstrak .................................................................................................... 9
1. Jenis Ekstrak .................................................................................. 10
D. Ekstraksi ............................................................................................... 10
1. Pengertian Ekstraksi ...................................................................... 10
2. Mekanisme Ekstraksi..................................................................... 10
3. Cara Ekstraksi................................................................................ 11

ii
 4. Parameter Non Spesifik Ekstrak .................................................... 12
5. Parameter Spesifik Ekstrak............................................................ 13
E. Definisi dan Prinsip Fraksinasi ............................................................. 14
F. Mencit Putih (Mus musculus) .............................................................. 14
1. Klasifikasi mencit .......................................................................... 15
2. Pertumbuhan dan Perkembangan .................................................. 15
3. Anatomi dan Fisiologi Mencit ....................................................... 15
4. Nilai Normal Fisiologi Mencit ...................................................... 17
5. Penggunaan Mencit Sebagai Hewan Uji ....................................... 17
G. Uji Toksisitas ........................................................................................ 18
1. Definisi Uji Toksisitsas ................................................................. 18
2. Toksisitas Akut .............................................................................. 20
H. LD50 ...................................................................................................... 20
1. Metode Penetapan LD50 ................................................................ 21
I. Rencana Penelitian ............................................................................... 23
1. Kerangka Teori .............................................................................. 23
2. Kerangka Konsep .......................................................................... 24
3. Prinsip Penelitian ........................................................................... 24
4. Sampel Penelitian .......................................................................... 25
5. Definisi Operasional ...................................................................... 25
6. Rancangan Percobaan .................................................................... 25
BAB III METODE PENELITIAN .................................................................... 27
A. Tempat dan Waktu Penelitian............................................................... 27
B. Alat dan Bahan Penelitian .................................................................... 27
1. Alat ................................................................................................ 27
2. Bahan Penelitian ............................................................................ 27
C. Prosedur Penelitian ............................................................................... 27
1. Pengambilan Bahan Uji ................................................................. 27
2. Determinasi Tanaman .................................................................... 27
3. Pembuatan Simplisia ..................................................................... 28
4. Pembuatan Ekstrak Bunga Telang (Clitoria ternatae L.) ............. 28
5. Pembuatan Fraksi Etanol Bunga Telang ....................................... 29

iii
 6. Perhitungan Hewan Uji ................................................................. 29
7. Perencanaan Dosis ......................................................................... 30
8. Pembuatan Larutan CMC (Carboxy Methyl Cellulose) 0,5% ....... 30
9. Persiapan Hewan Uji ..................................................................... 30
10. Uji Pendahuluan ............................................................................ 31
11. Pengujian Toksisitas Akut ............................................................. 31
12. Analisis Data ................................................................................. 32
DAFTAR PUSRTAKA ....................................................................................... 33
LAMPIRAN ......................................................................................................... 36

iv
 DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Klasifikasi Toksik Menurut T.A Loomis ........................................ 21

Tabel 3. 1 Uji Pendahuluan ................................................................................ 31

v
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Bunga Telang (Clitoria ternatea L.)............................................... 4

Gambar 2.2 Mencit Putih (Mus musculus) ....................................................... 14

vi
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Skema Pembuatan Ekstrak Bunga Telang .................................. 37

Lampiran 2 Skema Proses Fraksinasi Bunga Telang Menggunakan Etanol 38
Lampiran 3 Skema Uji Toksisitas Akut Fraksi Etanol Bunga Telang Pada
Mencit Putih ........................................................................................................ 39
Lampiran 4 Tabel Konversi Perhitungan Dosis . ............................................. 40
Lampiran 5 Daftar Volume Maksimal Larutan Sediaan Uji yang Dapat
Diberikan Pada Berbagai hewan ....................................................................... 41
Lampiran 6 Rancangan Perhitungan Dosis dan Pembuatan Larutan Dosis 42

vii
 DAFTAR ISTILAH DAN SINGKATAN

% = Persen
≥ = Lebih dari
BB = Berat badan
Bpm = Beat per minute
℃ = Derajat Celcius
cm = Centimeter
g = gram
gm = Gigameter
HDL = Hig Density Lipoprotein
Kg = Kilogram
LD50 = Lethal Dose-50
LDL = Low Density Lipoprotein
mg = Miligram
ml = Mililiter
mm = Milimeter
O2 =Oksigen

viii
 1

BAB I
PENDAHULUAN

A. Latar Belakang
Bunga telang (Clitoria terntea L.) merupakan salah satu tanaman hebal
yang banyak ditemui di Indonesia. Tanaman ini dipercaya masyarakat
memilliki banyak manfaat bagi kesehatan dan belakangan ini semakin
populer di Indonesia. Bunga telang merupakan tanaman herbal yang dapat
dikatakan istimewa dalam pengobatan tradisional dikarenakan seluruh bagian
tanaman ini mulai dari akar hingga bunga dipercaya dapat digunakan untuk
mengobati penyakit tertentu dan memperkuat kinerja organ (1). Manfaat yang
diberikan dari bunga telang tidak terlepas dari senyawa bioaktif yang
terkandung didalam seperti fenol (asam fenolat, tannin, flavonoid dan
antrakuinon), terpenoid (saponin tokoferol, fitosterol, triterpenoid) dan
alkaloid (2).
Senyawa bioaktif yang terkandung didalamnya bersifat asing bagi tubuh
dan tentu dapat menimbulkan efek toksik. Toksisitas
didefinisikan sebagai sesuatu yang memilki efek berbahaya yang ditimbulkan
dari senyawa kimia atau obat terhadap organ makhluk hidup. Maka dari itu
setiap senyawa yang digunakan baik senyawa kimia sintetis maupun yang
berasal dari tumbuhan harus dilakukan uji toksisitas (3). Uji toksisitas
merupakan suatu tahapan uji praklinik yang bertujuan untuk mengetahui serta
menetapkan tingkat keamanan dari suatu bahan atau zat uji yang diduga
memiliki khasiat obat. (4). Ada dua jenis uji toksisitas yaitu toksisitas umum
(akut, subakut/subkronis dan kronis) dan toksisitas khusus (teratogenik,
mutagenic dan karsinogenik). Sedangkan jika berdasarkan lama paparan dan
dosis terbagi menjadi 3 tingkatan uji ketoksikan yaitu akut, sub kronik, dan
kronik (3). Uji toksisitas akut merupakan tahapan dari uji pra klinis yang
bertujuan untuk mengukur nilai toksisitas dalam dosis pemberian. Nilai yang
digunakan dalam tolak ukur uji toksisitas akut adalah nilai LD50 (3).
 2

LD50 merupakan suatu takaran dosis tunggal yang dapat menyebabkan

kematian sebanyak 50% pada hewan uji coba. Nilai LD50 di dapatkan dari
hasil uji toksisitas akut dengan menggunakan perhitungan secara statistik.
Penetapan nilai LD50 pada suatu zat sangatlah penting karena pada dasarnya
semua zat atau bahan yang berkhasiat dan dapat digunakan sebagai obat
adalah racun, dan dapat dirubah sifatnya menjadi tidak racun dengan adanya
suatu takaran yaitu disebut dosis (4). Termasuk tumbuhan yang dipercaya
memiliki khasiat herbal maka perlu di tetapkan nilai LD 50 untuk memastikan
keamanan dalam penggunaan.
Pada hasil penelitian sebelumnya menunjukan hasil dari pemberian fraksi
etanol bunga telang pada mencit putih mampu menurunkan diabetes sampai
63,92% dengan dosis fraksi sebanyak 8,9 mg/20gBB pada mencit putih yang
telah di induksi dengan aloksan (5). Namun sampai judul penelitian ini
dibuat, belum ada informasi terkait keamanan batasan dosis fraksi bunga
telang. Maka perlu dilakukan uji toksitas akut bunga telang untuk
mendapatkan informasi tekait nilai LD50 agar dosis yang digunakan tepat. Hal
ini sesuai dengan PERMENKES RI Nomor 760/menkes/per/IX/1992 bahwa
obat yang berasal dari tumbuhan harus dapat dibuktikan khasiat serta
keamanannya. Sebab semua senyawa atau zat yang digunakan dalam
pengobatan memiliki efek racun atau toksik (4).
Penelitian uji toksisitas akut fraksi etanol bunga telang ini perlu dilakukan
agar dapat memberikan informasi keamanan berupa batasan dosis fraksi
etanol bunga telang kepada peneliti yang akan melakukan uji pembuktian
khasiat maupun pengembangan terhadap fraksi etanol bunga telang (Clitoria
ternatea L.). Maka dari itu peneliti tertarik untuk melakukan penelitian uji
toksisitas akut fraksi etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.) terhadap
mencit putih.

B. Rumus Permasalahan
Berapa nilai LD50 fraksi etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.) ?
 3

C. Tujuan Penelitian

1. Tujuan Umum
Melakukan uji toksisitas akut fraksi etanol bunga telang (Citoria ternatea
L.) pada mencit putih (Mus musculus) .
2. Tujuan Khusus
Menetapkan nilai LD50 pada fraksi etanol bunga telang (Citoria ternatea
L.) dengan melakukan uji toksisitas akut pada mencit putih (Mus
musculus).

D. Manfaat Penelitian
1. Manfaat Teoritis
Untuk menambah pengetahuan serta wawasan bagi yang membaca dan
dapat sebagai acuan kedepannya dalam pengembangan ilmu toksikologi
terkait uji toksisitas dari fraksi etanol bung telang.
2. Manfaat Praktis
a. Untuk Peneliti
Dapat menambah pengetahuan serta wawasan dalam melakukan
penelitian, sehingga dapat diharapkan mampu memberikan informasi
kepada kalangan umum mulai dari masyarakat hingga para peneliti.
b. Untuk Universitas Tulang Bawang
Sebagai acuan Pustaka terhadap peneliti berikutnya terkhusus pada
bidang farmasi bahan alam.
c. Untuk Masyarakat
Sebagai informasi terkait efek toksisitas akut dari fraksi etanol bunga
telang.
 4

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

A. Tinjauan Botani Tanaman Bunga Telang telang (Clitoria ternatea L.).

1. Klasifikasi
Klasifikasi tanaman bunga telang sebagai belikut (6) :
Kingdom : Plantae
Subkingdom : Tracheobionta
Super Divisi : Spermatophyta
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Sub Kelas : Rosidae
Ordo : Fabales
Famili : Fabaceae
Genus : Clitoria
Spesies : Clitoria ternatea L.

Gambar 2.1 Bunga Telang (Clitoria ternatea L.).

2. Morfologi
Tanaman bunga telang (Clitoria ternatea L.). atau dalam bahasa inggris
disebut Butterfly Pea adalah tanaman dengan berbatang kecil berbentuk
bulat dan terdapat rambut di permukaannya dengan panjang batang sekitar
 5

0.5-3m hidup merambat melilit kearah kiri dan karenanya membutuhkan

penyangga. Tanaman ini mempunyai jenis akar tunggang dan memiliki
akar lateral yang cukup banyak. Daunnya berbentuk majemuk sirip
berpasangan, serta bentuk daunnya yang jorong dan pada daun terdapat
bulu di bawah permukaan daunnya yang berwarna hijau, tangkai daun ini
memiliki panjang mencapai 2,5 cm. Warna bunga tanaman ini biru, ungu
muda dan putih, benang sari dan putik tersembunyi. Ciri khas anggota
Fabaceae adalah buahnya yang mirip kacang-kacangan atau polong dengan
panjang sampai 14cm yang di dalamnya ada biji dengan jumlah 8-10.
Tanaman bunga telang masuk ke dalam jenis bunga setangkup tunggal
(Monosimetris) yang mempunyai lima kelopak dan 3 mahkota yang saling
berlekatan. Biasanya masyarakat menggunakan tanaman bunga telang ini
sebagai pewarna alami pada makanan. Banyak masyarakat menggunakan
tanaman ini sebagai pemberi warna ungu pada kue, kue dadar gulung,
klepon. dan lain lain. Selain dalam bahan tambahan makanan, tanaman ini
juga di anggap istimewa karena seluruh bagian tanaman ini mulai dari akar
hingga bunga dapat digunakan sebagai pengobatan tradisional (7).

3. Sinonim
Bunga telang (Clitoria ternatea L..) mempunyai nama lain bermacam
macam tiap daerah dan negara terdapat penyebutan sendiri.
Luar Negeri : bunga telang(Malaysia),dok anchan (Thailand). Di India,
kembang telang dikenal dengan berbagai nama lokal, seperti
aparajita (Hindi), gokarna (Marathi), nagar hedi (Kannada),
dan sankhupushpam (Malayalam).
Sumatera : bunga biru, bunga kelentit, bunga telang
Jawa : Kembang teleng, menteleng
Sulawesi : Bunga talang, bunga temen raleng
Maluku : Bisi

4. Ekologi
Tanaman bunga telang (Clitoria ternatea L.) hidup lingkungan tropis
dan subtropis di seluruh dunia. Suhu paling baik pada suhu antara
24–32℃ , dan saat benih ditanam di tanah lembab dengan kedalaman
 6

2,5–5 cm dan jarak 20–30 cm. Meskipun bunga telang (Clitoria

ternatea L.) dapat bertahan pada kondisi gersang, tanaman ini lebih
tumbuh baik dengan kelembaban dan curah hujan yang cukup (650–
1250 mm) dan ketika suhu mencapai 27 ℃ atau lebih tinggi. Bunga
telang (Clitoria ternatea L..) menghasilkan sistem akar dalam yang
luas, yang memungkinkan tanaman bertahan hingga 7-8 bulan
kekeringan (8).

5. Kandungan Fitokimia
Penelitian sebelumnya menjelaskan hasil skrining fitokimia
menunjukan adanya metabolit sekunder aktif pada bunga telang
(Clitoria ternatea L.). Seluruh bagian tubuh tumbuhan telah
menghasilkan banyak komponen bioaktif mulai dari bunga, akar,
batang, biji, kulit batang dan daun. Pada bagian bunganya mengandung
senyawa flavonoid, antosianin, glikosida flavonol, asam fenolik dan
prosianidin (9).

6. Makroskopis Bunga Telang (Clitoria ternatea L.).

Makroskopik adalah pernyataan bentuk dan ukuran yang bisa dilihat
dengan mata telanjang tanpa alat bantu kaca pembesar maupun dengan
menggunakan kaca pembesar. Bunga telang (Clitoria ternatea L.)
berbentuk bunga majemuk, dengan panjang tangkai sekitar 1,5 cm
berbentuk silindris. Bentuk kelopaknya seperti corong pada bagian
mahkota memiliki bentuk seperti kupu kupu berwarna biru, biru muda,
putih, berwarna ungu dan pink. tangkai benang sari berbentuk tabung yang
berlekatan, kepala putik bulat, tangkai putik silindris, kepala sari berbentuk
bulat (10).

7. Mikroskopik
Berbeda dengan makroskopik yang dilihat dengan mata telanjang tanpa
alat bantu, mikroskopik merupakan pernyataan bentuk atau sifat yang
dilihat dengan menggunakan alat bantu pembesar yaitu mikroskopis.
Bentuk rambut penutup panjang, terdapat epidermis bawah dengan mata,
 7

sludang kristal, terdapat hablur kalsium oksala, serta terdapat serabut

kristal dengan berkas pembuluh (10).

B. Simplisia
Simplisia merupakan penyebutan untuk bahan yang berasal dari alam yang
sudah dikeringkan termasuk tumbuh tumbuhan yang belum dilakukan
pengolahan pengubahan bentuk dan dapat digunakan sebagai obat tradisional
(11).

1. Klasifikasi Simplisia
Menurut Departemen Kesehatan Republik Indonesia melalui buku yang
berjudul “Cara Pembuatan Simplisia”, simplisia terdiri dari simplisia
nabati, simplisia hewani dan simplisia pelikan atau mineral (12).

a. Simplisia Nabati
Simplisia nabati merupakan simplisia yang berupa tanaman utuh,
bagian dari tanaman seperti akar bunga daun buah, dan eksudat atau
bisa dari gabungan keti ganya. Yang dimaksud dengan eksudat adalah
isi sel yang dikeluaran dari dalam tanaman dengan cara tertentu yang
berupa zat kimia murni dari tanaman tersebut.
b. Simplisia Hewani
Simplisia hewani adalah simplisia yang berupa hewan utuh, bagian
dari hewan atau zat zat yang dapat digunakan yang dihasilkan dari
hewan dan belum berupa zat kimia murni.

c. Simplisia Pelikan atau Mineral

Simplisia pelican atau mineral adalah simplisia yang berupa bahan
mineral yang belum di lakukan pengolahan atau bisa berupa olahan
dengan cara sederhana yang berupa zat kimia yang belum murni.

2. Tahapan Pembuatan Simplisia

Tahapan pembuatan simplisia meliputi pengumpulan bahan baku,
sortasi basah, pencucian, perajangan, pengeringan, sortasi kering,
penyimpanan dan pemeriksaan mutu (13) :
 8

a. Pengumpulan bahan baku

Waktu panen tanaman sangat erat hubungannnya dengan senyawa
zat aktif yang terkandung didalam tanaman yang akan dipanen.
Kandungan dan kadar senyawa aktif tanaman tergantung waktu panen,
lingkungan tempat tumbuh dan umur tanaman (13).
b. Sortasi basah
Sortasi basah dilakukan bertujuan untuk menyingkirkan kotoran atau
benda asing dari simplisia. Benda asing yang dimaksud adalah sepeti
tanah, batu kerikil, rumput, batang, daun, akar yang telah rusak dan lain
lain (13).
c. Pencucian
Tujuan dilakukan pencucia adalah untuk menghilangkan tanah dan
kotoran yang ada pada simplisia yang baru dipanen. Pencucian
dilakukan dengan menggunakan air bersih, seperti air dari mata air, air
sumur bisa juga dengan air PAM. Untuk bahan simplisia yang
mengandung zat mudah larut dengan air sebaiknya pencucian dilakukan
dalam waktu singkat (13).
d. Perajangan
Perajangan simplisia diperlukan pada beberapa jenis simplisia.
Tujuannya adalah agar dalam proses pengeringan, pengepakan dan
penggilingan dapat dilakukan dengan mudah. Perajangan bisa
dilakukan menggunakan pisau ataupun dengan mesin khusus perajang.
Ukuran perjangan bervariasi bisa dilakukan irisan tipis atau sesuai
dengan ukuran yang di butuhkan. Dengan catatan semakin tipis bahan
yang dirajang maka semakin cepat penguapan air dan pengeringanpun
semakin cepat. Namun bahan simplisia yang terlalu tipis dapat
menyebabkan kehilangan zat yang mudah menguap dan akan
mempengaruhi kadar kandungan zat, bau dan rasa (13).
e. Pengeringan
Pengeringan bertujuan untuk mendapatkan simplisia yang tidak
mudah rusak dan mampu disimpan dalam waktu yang lebih lama.
Pengeringan dilakukan dengan mengurangi kadar air dan menghentikan
 9

reaksi enzimatik untuk mencegah penurunan mutu atau perusakan

simplisia (13).
Biasanya cara yang digunakan dalam menghentikan proses
enzimatik pada sampel adalah dengan cara merendam bahan simplisia
didalam etanol 70% atau bisa menggunakan uap air panas yang
dialirkan. Proses enzimatik sudah dapat terhentikan bila kadar air sudah
mencapai kurang dari 10% (13).
Proses pengeringan bisa juga dilakukan degan cara penjemuran
dibawah sinar matahari atau menggunakan alat khusus pengering.
Selama proses pengeringan perlu diperhatikan suhu pengeringan,
kelembaban udara, waktu pengeringan dan luas permukaan bahan (13).
f. Penyimpanan
Selama proses penyimpanan dapat terjadi rusak, penurunan atau
berubah mutu kaena banyak faktor luar dan dalam yang mempengaruhi
mutu. Faktornya antara lain : cahaya, oksigen, reaksi kimia intern,
dehidrasi, penyerapan air, pengotoran serangga dan kapang. Kerusakan
yang menyebabkan penurunan mutu tidak lagi memenuhi syarat yang
diperlukan, sehingga perlu diperhatikan cara pengepakan,
pembungkusan atau wadah, persyaratan gudang simplisia, cara sortasi
dan pemeriksaan mutu dan cara pengawetn. Namun faktor utama
kerusakan simplisia adalah air dan kelembaban (14).

C. Ekstrak
Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi
senyawa aktif dari simplisia nabati maupun simplisia hewani dengan
menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua
pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa yang dapat digunakan
sebagaimana mestinya (15). Atau proses pengambilan senyawa aktif dari
tumbuhan disebut juga dengan ekstraksi.
 10

1. Jenis Ekstrak

Ekstrak dibagi menjadi 3 berdasarkan dengan sifatnya yaitu (16) :

a. Ekstrak Kental
Ekstrak kental merupkan sediaan yang dilihat dalam keadaan dingin
dan tidak dapat dituang. Biasanya kandungan airnya berjumlah tidak
lebih dari 30%. Kandungan air yang tinggi menyebabkan ketidak
stabilan sediaan obat karena cemaran bakteri.
b. Ekstrak Kering
Ekstrak kering adalah sediaan yang memiliki konsistensi kering dan
mudah dituang. Ektrak kering yang baik memiliki kelembaban tidak
lebih dari 5%.
c. Ekstrak Cair
Ekstrak cair adalah bentuk sediaan cair nabati yang mengandung
etanol sebagai pelarut sekaligus sebagai pengawet. Jika tidak
dinyatakan lain pada masing masing monografi, tiap ml ekstrak
mengandung bahan aktif 1 gr simplisia yang memenuhi syarat. Ekstrak
cair yang terjadi pengendapan dapat didiamkan lalu dilakukan
penyaringan.

D. Ekstraksi

1. Pengertian Ekstraksi
Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut
sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair.
Simplisia yang diekstrak mengandung senyawa zat aktif yang dapat larut
dengan pelarut cair dan senyawa yang tidak dapat larut seperti serat,
karbohidrat, protein dan lain lain. Kelarutan dan stabilitas senyawa
senyawa terhadap pemanasan, udara, cahaya, logam berat,dan derajat
keasaman dipengaruhi oleh struktur kimia yang berbeda (15).

2. Mekanisme Ekstraksi
Proses ekstraksi zat aktif terjadi dengan masuk atau menembusnya
pelarut ke dalam dinding sel menuju rongga sel yang terdapat zat aktif
yang akan melarutkan zat aktif tersebut, zat aktif yang terlarut
 11

menyebabkan teradinya perubahan konsentrasi antara larutan zat aktif

yang ada didalam sel dengan pelarut yang ada diluar seL. Larutan yang
pekat akan keluar sel berdifusi meninggalkan ruang sel, proes ini akan
terjadi berulang ulang sampai terjadi keseimbangan konsentrasi zat aktif
yang ada di dalam sel dan di luar sel (17).

3. Cara Ekstraksi
Ekstraksi dapat dilakukan dengan berbagai metode yang sesuai dengan
sifat dan tujuan ekstraksi. Ekstraksi dapat dibedakan menjadi dua cara
yaitu dengan cara dingin dan cara panas (17). :

a. Cara Dingin
1) Maserasi
Maserasi adalah cara pengekstrakan yang prosesnya dengan
menggunakan pelarut dan dilakukan dengan pengocokan atau bisa
juga dilakukan pengadukan dengan suhu ruang (kamar). Secara
teknologi termasuk ekstraksi dengan prinsip metode pencapaian
konsentrasi pada keseimbangan. Maserasi kinetik berarti dilakukan
pengadukan kontinu (terus menerus). Remaserasi proses maserasi
yang dilakukan secara berulang-ulang dengan menyaring maserat
pertama dan penambahan pelarut sampai seterusnya (15).
2) Perkolasi
Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru
sampai sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan
pada suhu ruang. Proses terdiri dari tahapan pengembangan bahan,
tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya
(penetasan/penampungan ekstrak), terus menerus sampai diperoleh
ekstrak (perkolat) yang jumlahnya 1-5 kali bahan (15).
b. Cara Panas
1) Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperature titik
didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang
relative konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya
 12

dilakukan pengulangan proses pada residu pertama sampai 3-5 kali

sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna (15).
2) Soxhlet
Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru
atau terus menerus diganti dengan pelarut baru yang umumnya
dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu
dengan jumlah pelarut relative konstan dengan adanya pendingin
balik (15).
3) Digesti
Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu)
pada temperature yang lebih tinggi dari temperature ruangan
(kamar), yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 40-50℃
(15).
4) Infus
Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada tempeatur
penangas air (bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih,
temperature terukur 96-98℃) selama waktu tertentu (15-20 menit)
(15).
5) Dekok
Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama (≥30℃) dan
temperature sampai titik didih air (15).

4. Parameter Non Spesifik Ekstrak

a. Susut Pengeringan
Susut pengeringan merupakan cara untuk mengukur sisa zat yang
telah dilakukan pengeringan dengan temperature 105℃ selama 30
menit atau sampai didapatkan berat yang konstan dengan satuan persen
(%). Pengukuran susut pengeringan ini bertujuan untuk mengetahui
jumlah senyawa yang hilang saat dilakukan proses pengeringan dengan
memberikan batasan maksimal dengan nilai susut pengeringan tidak
kurang dari 10% dengan pengecualian dinyatakan lain (18).
 13

b. Kadar Air
Parameter kadar air adalah pengukuran kandungan air yang berada
di dalam bahan. Tujuannya untuk memberi batas maksimal atau
rentang kandungan air yang terkandung pada bahan. Nilai maksimal
atau rentang yang diperbolehkan mengacu pada monografi (18).
c. Kadar Abu
Parameter kadar abu dilakukan dengan melakukan pemanasan pada
temperatur dimana senyawa organik dan turunannya terdestruksi dan
menguap. Sehingga tersisa unsur mineral dan anorganik. Hal ini
bertujuan menggambarkan kandungan mineral baik internak maupu
eksternal yang berasal dari proses awal sampai terbentuk ekstrak. Nilai
maksimal atau rentang yang diperbolehkan mengacu pada monografi
(18).

5. Parameter Spesifik Ekstrak

a. Identitas
Identifikasi tanaman perlu dilakukan bertujuan untuk memberikan
identitas obyektif dari nama dan senyawa yang terkandung didalamnya.
Tatanama dan senyawa yang terkandung dapat menjadi identitas yang
menjadi petunjuk spesifik dengan metode tertentu (15).
b. Organoleptik
Parameter yang di lakukan pengujiam berupa bentuk, warna, bau,
dan rasa. Pengujian ini bertujuan sebagai pengenalan awal yang
sederhana seobyektif mungkin (15).
c. Senyawa Terlarut Dalam Pelarut Tertentu
Parameter senyawa terlarut dalam pelarut tertentu merupakan
melarutkan ekstrak dengan pelarut alcohol atau air Parameter senyawa
terlarut dalam pelarut tertentumerupakan melarutkan ekstrak dengan
pelarut alcohol atau air untuk menentukan jumlah solute yang terlarut.
Pengukuran ini bertujuan untuk memberikan gambaran awal jumlah
senyawa (15).
 14

E. Definisi dan Prinsip Fraksinasi

Fraksinasi merupakan penarikan senyawa pada ekstrak dengan
menggunakan dua pelarut yang berbeda berdasarkan kepolarannya. Senyawa
akan terpisah berdasarkan sifat kepolaran yang dipisahkan oleh pelarut.
Artinya senyawa yang polar hanya akan larut pada pelarut yang polar
sedangkan pada senyawa non polar akan larut pada pelarut non polar.
Metode yang biasa digunakan dalam proses fraksinasi adalah
kromatografi. Fraksinasi dapat dilakukan dengasn metode ekstraksi cair-cair
atau dengan kromatografi cair vakum (KCV), kromatografi kolom (KK), size-
exclution chromatography (SEC), solid-phase extraction (SPE). Untuk
mengidentifikasi senyawa dapat menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT)
sedangkan untuk melakukan pemisahan senyawa dengan jumlah yang besar
dapat menggunakan kromatografi kolom (19).
Pemisahan dilakukan dengan tingkat kepolarannya, mulai dari non polar,
semi polar, hingga polar. Untuk ekstrak etanol atau methanol sebelum
dilakukan fraksinasi harus di larutkan dahulu menggunakan air lalu di
lakukan pemisahan (20).

F. Mencit Putih (Mus musculus)

Mencit merupakan hewan yang banyak digunakan dalam percobaan
penelitian ilmiah sebagai hewan uji coba,karena memiliki keserasian dengan
pertumbuhan dan kondisi manusia. Proses metabolisme dalam tubuh mencit
(Mus musculus) berlangsung secara cepat sehingga cocok dijadikan hewan uji
penelitian. Ciri ciri mencit adalah berbentuk kecil berwarna putih dapat
betahan hidup di daerah beriklim dingin, sedang maupun panas (21).

Gambar 2.2 Mencit Putih (Mus musculus)

 15

1. Klasifikasi mencit
Kingdom : Animalia
Filum : Chordata
Kelas : Mamalia
Ordo : Rodentia
Famili : Muridae
Genus : Mus
Spesies : Mus musculus

2. Pertumbuhan dan Perkembangan

Mencit putih (Mus musculus) mampu bertahan hidup hingga 1-2 tahun
dan tidak jarang juga bisa bertahan hingga umur 3 tahun. Masa perkawinan
nb mengalami masa estrus yang siklusnya terjadi selama 4-5 hari dan lama
masa kehamilan mencit adalah 19-21 hari. Mencit memiliki berat badan
yang bervariasi, pada mencit dewasa berjenis kelamin jantan memiliki
berat badan berkisaran 20-40 gram dan pada mencit betina berkisar antara
25-40 gram (22).

3. Anatomi dan Fisiologi Mencit

a. Sistem Respirasi
Mencit normal melakukan respirasi sebanyak 70-150 kali permenit
(22). Pada sistem saluran pernafasan mencit terbagi menajadi tiga
bagian utama yaitu saluran respirasi anterior (nostril, nasal cavity dan
nasopharynx). Saluran respirasi intermediate (larynx, trachea, bronchi).
Saluran respirasi posterior (hanya memiliki lobus tunggal pada paru
paru kiri, sedangkan pada paru kanan lobus dibedakan menjadi 4 yaitu
superior, middle, inferior dan postcavaL. Mencit memiliki saluran udara
yang pendek, kapasitas oksigen serta gula di dalam darah yang tinggi.
Dalam kondisi istirahat mencit menggunakan sekitar 3.5 ml O2/gm/jam
(23).
b. Sistem Pencernaan
Secara umum system pencernaan mencit memiliki fungsi untuk
masuknya makanan kedalam tubuh kemudian untuk dicerna oleh tubuh,
 16

penyerapan sari makanan dan membuang sisa makanan yang terserap.

Organ organ yang terdapat pada system pencernaan mencit adalah gigi,
esofagus, lambung, intestinum kecil, cecum dan kolon. Gigi mencit
normalnya terdiri dari sebuah incisius serta tiga buahmolar pada tiap
kuadratnya. Pertumbuhan gigi incisius terjadi terus menerus dan akan
haus ketika gigi digunakan untuk mengunyah. Pencernaan dimulai dari
digilingnya makanan dengan gigi dibantu oleh saliva kemudian
makanan menuju faring dan esofagus. Selanjutnya makanan masuk ke
lambung dan usus halus dan terjadi absorbs air di usus besar. Sisa
makanan di keluarkan melalui anus yang melalui kolon terlebih dahulu
(23).
c. Sistem Limfatik
Jaringan limfoid dibedakan menjadi dua kategori yaitu limfoid
primer dan sekunder. Organ limfoid primer mempunyai peran dalam
respon imun yang termasuk organnya adalah timus. Sedangkan pada
limfoid sekunder berperan dalam stimulasi agen. System limfatik
mencit tersusun dari limpa, timus, nodus limfatikus dan pembuluh
limfatikus (23).
d. Sistem Urinaria
Ginjal, ureter, kantung urin dan uretra merupakan organ organ yang
masuk dalam system urinaria mencit. Urin yang di keluarkan oleh
mencit hanya satu hingga dua tetes tetapi urinari yang dikeluarkan
sangat pekat (23)
e. Sistem Kardiovaskuler
Sistem kardiovaskuler pada mencit mirip dengan system
kardiovaskular pada manusia yang tersusun atas jantung serta pembuluh
darah aorta, arteri dan vena. Mencit memiliki tekanan darah sistolik rata
rata sekitar 80 sampai 105 mm Hg. Peningkatan suhu tidak
mempengaruhi tekanan darah mencit. Denyut jantung pada mencit
berkisar antara 310 sampai 840 permenit, nilai tersebut bervariasi baik
pada laju darah dan tekanan darah mencit (23). Sumber lain
 17

menyatakan denyut jantung pada mencit berkisar antara 300-500 bpm

(22).
f. Sistem Skeletal
Sistem skeletal tediri dari dua komponen utama yaitu skeleton aksial
yang terdiri dari tengkorak, rusuk, vertebrae dan skeleton appendikuler
yang terdiri dari pectoral, pelvis dan tungkai (23).
g. Sistem Reproduksi
Kematangan organ organ seksual pada mencit pada usia 10-12
minggu,baik pada mencit jantan maupun mencit betina. Organ
reproduksi mencit jantan tersusun dari testis dengan saluran ductus
deferens, ductus ejakulatorius serta kelenjar asesories. Sementara pada
organ reproduksi mencit betina tersusun dari ovarium, oviduct dan
uretrus (23).

4. Nilai Normal Fisiologi Mencit

Dikutip dari buku yang berjudul “Ovariektomi Pada Tikus dan Mencit”
berikut nilai nilai normal fisiologi mencit (22) :
Suhu Tubuh : 95-102 ℃
Denyut Jantung : 320-840 bpm
Respirasi : 784-280-150 kali permenit
Berat lahir : 2-4 gram
Berat Dewasa : 20-40 gram pada mencit jantan
25-45 gram pada mencit bertina
Masa hidup : 1-2 tahun, pada mencit betina dapat
bertahan hidup lebih lama
Maturitas Seksual : 28-49 hari
Target suhu lingkungan : 17,78-26,11℃
Target kelembapan lingkungan : 30-70%
Gestasi : 19-21 hari
Minum : 6-7 ml/hari

5. Penggunaan Mencit Sebagai Hewan Uji

Sekitar 40% studi penelitian menggunakan mencit sebagai hewan uji di
laboratorium (23). Biasanya mencit sebagai hewan uji dalam penelitian di
 18

laboratorium teutama pada studi bidang farmakologi dan toksikologi.

Kelebihan yang dimiliki mencit seperti mudah di tangani, angka kelahirn
cukup tinggi,mudah beradaptasi, anatomi serta kondisi fisiologi yang
menyerupai manusia dan juga harga yang lumayan terjangkau
dibandingkan dengan hewan uji lain seperti kelinci serta mudah
didapatkan, hal menjadikan alasan banyaknya pemilihan mencit pengganti
kelinci untuk digunakan sebagai hewan uji (24).

G. Uji Toksisitas
Melakukan uji toksisitas perlu dilakukan untuk melihat beberapa
kerusakan atau efek yang tidak diinginkan dari penggunaan obat terhadap
makhluk hidup. Tahapan uji toksisitas ini penting dan lazim dilakukan kepda
suatu obat baik tradisional maupun modern sebagai syarat untuk memiliki
izin edar (25).

1. Definisi Uji Toksisitsas

Uji toksisitas dilakukan karena semua zat kimia baik yang sintetis
maupun yang dari bahan alam sekalipun tidak berbahaya masih dapat
berpotensi memiliki sifat toksik dalam jumlah dosis tetentu. Secara umum
uji toksisitas terbagi menjadi 2 bagian yaitu uji toksisitas in vitro
(dilakukan pengujian diluar tubuh hewan percobaan) dan uji toksisitas in
vivo (dilakukan pengujian di dalam tubuh hewan percobaan). Uji toksisitas
in vitro adalah metode untuk mengetahui tingkat ketoksikan dari suatu zat
kimia sintetis atau dari bahan alam dengan menggunakan media biakan
bahan biologi tertentu. Setelah dilakukan uji in vitro perlu dilakukan uji in
vivo. Uji toksisitas in vivo merupakan uji toksisitas yang langsung di
ujikan dihewan coba, untuk menentukan tingkat ketoksikan yang
ditimbulkan terhadap hewan dari suatu zat dan pengaruhnya terhadap
fungsi fisiologis termasuk kerusakan organ dalam waktu tertentu (26).
Toksisitas adalah adalah kemampuan zat yang bisa menimbulkan
kerusakan pada organisme hidup. Semua senyawa kimia yang digunakan
oleh manusia, hewan memiliki potensi berbahaya untuk Kesehatan, maka
dari itu perlu dilakukan pengujian keamanannya berupa uji toksisitas (27).
Uji toksitas merupakan uji pendahuluan yang bertujuan untuk mengetahui
 19

potensial efek toksik yang timbulkan dari penggunaan suatu zat kimia atau
tanaman obat serta untuk mengetahui takaran batas penggunaanya (28).
Toksisitas terbagi menjadi dua yaitu toksisitas umum dan khusus. Uji
toksisitas umum mencakup akut, subkronis dan kronis. Sedangkan
toksisitas khusus mencangkup mutagenic, teratogenic dan karsinogenik
(4). Berikut beberapa uji keamanan obat maupun tanaman herbal sebagai
syarat keamann yang dilakukan pada hewan uji (29):

a. Uji toksisitas akut

Uji ini ditujukan untuk mengetahui batas maksimal keamanan
suatu dosis yang masih ditoleransi oleh hewan pecobaan. Pada uji ini
ditetapkan nilai LD50 sebagai tolak ukur uji.
b. Uji toksisitas subkronik
Uji untuk mengetahui efek dari suatu organ yang rentan mengalami
kerusakan pada organ tempat obat bekerja. Uji ini biasanya dilakukan
selama 3-4 minggu pada hewan uji.
c. Uji toksisitas kronik
Pada dasarnya pengujian ini hampir menyerupai dengan uji
toksisitas subkronik dengan tujuan untuk mengetahui efek yang
ditimbulkan dari suatu organ apa bila obat digunakan dalam jangka
waktu yang panjang. Uji ini dilakukan pada hewan uji dengan waktu 6
bulan atau lebih.
d. Uji teratogenik
Merupakan uji untuk mengetahui efek merugikan yang berkaitan
dengan system reproduksi, perkembangan janin, kelainan janin, proses
kelahiran dan perkembangan bayi yang dilahirkan.
e. Uji karsinogenik
Pengujian ini bertujuan untuk mengetahui apakah suatu zat
berpotensi menimbulkan kanker jika digunakan dalam jangka waktu
yang panjang. Pengujian ini dilakukan dengan menggunakan dua
spesies hewan selama dua tahun.
 20

f. Uji mutagenik
Uji ini dilakukan untuk mengetahui apakah jika zat digunakan
dalam waktu yang panjang dapat menyebabkan perubahan genetik.

2. Toksisitas Akut
Uji toksisitas akut adalah pengujian untuk mendeteksi potensi
timbulnya efek toksik dalam waktu singkat setelah pemberian sediaan uji
yang diberikan melalui rute oral dengan dosis tunggal atau dosis berulang
yang diberikan dalam waktu 24 jam. Prinisip uji toksisitas akut adalah
dengan memberikan variasi tingkatan dosis yang berbeda dengan beberapa
jumlah kelompok hewan uji yang masing-masing kelompok diberikan satu
dosis yang sama kemudian dilakukan pengamatan selama 14 hari. Tujuan
dan maksud dari uji toksisitas akut adalah untuk mendeteksi toksisitas
intrinsik suatu zat, menentukan organ sasaran serta kepekaan spesies,
sehingga dapat diperoleh informasi bahaya setelah mengalami paparan
suatu zat. (30).
Uji toksisitas akut juga merupakan bagian dari uji praklinis, yaitu
pengujian suatu senyawa dalam bentuk obat kimia maupun tanaman obat
terhadap hewan percobaan sebelum dilanjutkan dengan percobaan kepada
manusia. Toksisitas akut umumnya dinyatakan dengan tolak ukur suatu
nilai yang disebut dengan LD50. LD50 adalah dosis yang secara statistik
dapat menyebabkan kematian 50% dari seluruh hewan percobaan yang
diberikan dosis tunggal maupun berulang (31).
Pengamatan pada hewan uji dilakukan paling lambat 30menit pertama
setelah pemberiaan dosis, kemudian dilanjutkan pengamatan tiap 4 jam
selama 24 jam pertama dan sekali tiap harinya selama 14 hari. Gejala
toksisitas yang timbul dapat dilihat dari tingkah laku, kondisi fisik seperti
(kulit, bulu, mata, membran mukosa), system pernafasan, system saraf
otonom, system saraf pusat hingga kematian (30).

H. LD50
LD50 adalah dosis tunggal suatu zat yang diturunkn secara statistik dapat
membunuh sebanyak 50 persen pada hewan percobaan dengan pemberian
secara oraL. Satuan nilai LD50 dinyatakan dalam berat bahan yang diujikan
 21

per berat hewan uji (mg/kg). LD50 berguna untuk memperkirakan dosis yang
bisa menyebabkan kematian pada manusia ataupun untuk memprediksi gejala
keracunan yang disebabkan overdosis akut pada manusia (32). Pada
umumnya semakin kecil nilai LD50 maka semakin besar menimbulkan
ketoksikan dan kematian, namun sebaliknya jika semakin besar nilai LD 50
maka semakin reda sifat ketoksikan dari suatu zat. Sebagaimana klasifikasi
nilai LD50 menurut Loomis (1978) (33) :

Tabel 2.1 Klasifikasi Toksik Menurut T.A Loomis

Kategori LD50
Sangat toksik sekali 1 mg/kg atau kurang
Sangat toksik 1-50 mg/kg
Cukup toksik 50-500 mg/kg
Sedikit toksik 0,5-15 g/kg
Praktis tidak toksik 5-15 g/kg
Relatif kurang berbahaya >15 g/kg

1. Metode Penetapan LD50

a. Faramakope Indonesia Edisi III

Dalam menentukan nilai LD50 dengan menggunakan metode dari
Farmakope Indonesia Edisi III ada syarat syarat yang harus terpenuhi
sebelumnya. Syarat yang dimaksudkan antara lain adalah menggunakan
seri dosis dengan pengenceran berkelipatan tetap, jumlah hewan
percobaan pada tiap kelompok perlakukan harus memiliki jumlah yang
sama dengan dosis yang diberikan diatur sedemikian rupa sehingga
menghasilkan efek mulaidari 0% hingga 100%. Perhitungan LD 50
menggunakan rumus :

𝑚 = 𝑎 − 𝑏 ( ∑ 𝑝𝑖 − 0,5)

Keterangan :
m = log LD50
a = logaritma dosis terendah yang masih menyebabkan kematian
100% tiap kelompok
 22

b = beda log dosis yang berurutan

pi = jumlah hewan yang mati setalah menerima dosis i, dibagi dengan
jumlah hewan ui seluruhnya yang menerima dosis i (34).
b. Thomson dan Weil
Metode yang ditemukan oleh Thomson dan Weil telah digunakan
mulai dari tahun 1952. Adapun persyaratan yang harus terpenuhi dalam
menggunakan penelitian ini adalah dosis pada jumlah hewan uji setiap
kelompok perlakuan harus sama, jumlah pengulangan tiap kelompok
dan jumlah kelompok pemberian dosis minimal terdiri 4 kelompok.
Metode Thomson dan Weil sering digunakan dalam penelitian karena
memiliki tingkat kepercayaan yang tinggi serta biaya untuk hewan uji
tidak begitu besar. Dalam menetapkan LD50 tidak memerlukan kertas
probit logaritma dan uji heterogenitas. Hasil yang didapat lebih akurat
karena metode ini dilengkapi dengan daftar perhitungan LD50. Berikut
rumus perhitungan LD50 metode Thomson dan Weil (32). 7

Log 𝑚 = log 𝐷 + 𝑑 (𝑓 + 1)
Keterangan :
M = nilai LD50
D = dosis terkecil yang digunakan
d = log dari kelipatan dosis
f = suatu nilai dalam table Thomson Weil
c. Grafik Miller – Tainer
Metode Miller dan Tainer sudah dikenal sejak tahun 1944 yang
umumnya digunakan untuk menghitung dosis yang efektif. Untuk
menentukan perhitungan nilai LD50 dengan metode grafik Miller dan
Tainer diperlukan kertas probit logaritma yang dilengkapi dengan skala
logaritma dan probit. Skala logaritma merupakan sebagai absis dan
skala probit sebagai ordinat. Skala dibuat dengan satuan persen
selanjutnya dikonversikan menajadi nilai probit dan sesuai dengan nilai
probit yang ada pada table probit. Nilai LD50 ditetapkan dari hasil yang
menunjukan nilai probit 5 (32).
 23

I. Rencana Penelitian
1. Kerangka Teori

Bunga Telang Dimanfaatkan

(Clitoria ternatea L.) masyarakat
sebagai pewarna
alami makanan,
flavonoid, tannin, alkaloid, penggunaan
saponin, terpenoid dan sebagai obat
antosianin (2) tradisional turun
temurun

Kandungan senyawa
metabolit sekunder

Uji Farmakologi Uji Toksisitas

Akut Subkronis Kronis

LD50
 24

2. Kerangka Konsep

Bunga Telang
(Clitoria ternatea L.)

flavonoid, tannin, alkaloid,

saponin, terpenoid dan
antosianin

Toksisitas Akut

Variabel Bebas Variabel Bebas

Konsentrasi fraksi etanol Toksisitas akut dengan

bunga telang nilai LD50

3. Prinsip Penelitian
Penelitian ini merupakan jenis penelitian eksperimental. Pengumpulan
data dilakukan berdasarkan analisa laboratorium meliputi proses fraksi
etanol bunga telang yang diujikan toksisitasnya tehadap mencit putih
kemudian didapatkan nilai LD50.
a. Variabel bebas
Konsentrasi fraksi etanol bunga telang
b. Variabel terikat
Toksisitas akut dengan nilai LD50
c. Variable terkendali :
1) Metode ekstraksi
2) MetodeFraksinasi
3) Persiapan hewan uji
4) Perlakuan hewan uji
 25

4. Sampel Penelitian
Sampel yang digunakan adalah bunga telang (Clitoria ternatea L.) yang
sudah siap di panen yaitu berumur 49-73 dengan kondisi bunga mekar
sempurna. Waktu pemetikan bunga dilakukan pada pagi hari (35).

5. Definisi Operasional
1) Fraksi etanol bunga telang
Merupakan senyawa aktif yang terkandung di dalam tanaman bunga
telang yang dipisahkan berdasarkan kepolarannya.
2) Toksisitas
Merupakan tingkat kadar senyawa atau zat yang mampu merusaknya
suatu organ jika dipaparkan terhadap organisme.
3) LD50
Merupakan dosis atau konsentrasi yang diberikan sekali (tunggal)
atau beberapa kali dalam 24 jam dari suatu hewan yang secara statistik
diharapkan dapat mematikan 50% hewan coba.
4) Dosis
Merupakan banyaknya suatu zat, senyawa, obat yang dapat
mempengaruhi suatu organisme secara biologis.
5) Tremor
Tremor adalah suatu kondisi neurologis yang mencangkup gerakan
gemetar atau gemetar pada satu atau lebih bagian tubuh yang tidak
disengaja.
6) Kejang kejang
Kejang adalah gangguan aktivitas listrik di otak yang terjadi secara
spontan dan tidak sengaja.

6. Rancangan Percobaan
Peneliti menggunakan metode Rancangan Acak Kelompok (RAK)
dengan 5 kali pengulangan pada tiap kelompok perlakuan. Dengan rumus
federrer :
(n-1) (t-1) ≥ 15
Keterangan =
n = jumlah pengulangan atau jumlah sampel dalam tiap kelompok.
 26

t = jumlah kelompok perlakuan

Sebelum dilakukan uji toksisitas akut dilakukan uji pendahuluan
terlebih dahulu yang terbagi menjadi 4 kelompok hewan uji dengan
tingkatan dosis 3 kali. Tiap kelompoknya tediri dari 5 ekor mencit. Dosis
terendah yang menimbulkan kematian akan digunakan untuk uji lanjutan
toksisitas akut (18).
 27

BAB III
METODE PENELITIAN

A. Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian uji toksisistas dilakukan di Laboratorium Farmakologi F-MIPA
Universitas Tulang Bawang Lampung. Pada proses evaporasi dilakukan di
Laboratrium Botani FMIPA UNILA. Penelitian ini dilakukan pada bulan
Oktober s/d November 2023.

B. Alat dan Bahan Penelitian

1. Alat
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah corong pisah, gelas
ukur, gelas erlenmeyer, labu ukur, gelas kimia, spuit 1 cc, sonde oral,
timbangan analitik, batang pengaduk, lumpang, stamper, bejana maserasi,
kertas saring, seperangkat rotary evaporator.

2. Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah bunga ( Clitoria
ternatea L.) sebanyak 1 kg, etanol 70% (C2H6O), aquadest (H2O), mencit
putih, makanan dan minum mencit, CMC (Carboxyl Methyl Cellulosei)
0,5% (C6H72OH2OCH2COOHn).

C. Prosedur Penelitian

1. Pengambilan Bahan Uji

Bahan uji yang digunakan adalah bunga telang (Clitoria ternatae L.)
yang diperoleh di Kecamatan Jati Agung saat bunga telang telah mekar
sempurna.

2. Determinasi Tanaman
Bunga Telang dilakukan uji determinasi terlebih dahulu di
Laboratorium Botani Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam Universitas Lampung. Hal ini di lakukan dengan tujuan
 28

memastikan kebenaran tanaman yang digunakan sesuai dengan tanaman

bunga telang (Clitoria ternatea L.), sehingga kesalahan dalam penggunaan
tanaman dapat di hindarkan.

3. Pembuatan Simplisia
Bunga telang diambil sebanyak 1 kg yang masih segar, kemudian
dilakukan sortasi basah dengan menghilangkan kotoran atau benda yang
dapat mengganggu dengan menggunakan air yang mengalir lalu ditiriskan,
selanjutnya dilakukan pencucian menggunakan air sampai kotoran
terutama tanah hilang. Setelah dicuci bersih kemudian bunga telang
dikeringkan dibawah sinar matahari dengan ditutup kain berwarna gelap
sampai kering guna melindungi zat aktif yang terdapat pada tanaman. Lalu
pengeringan dengan melakukan penjemuran dibawah sinar matahari dengan
ditutupi kain berwarna hitam saat penjemuran berlangsung. Simplisia yang
sudah jadi untuk penyimpanan sementara disimpan pada tempat yang
terhindar dari cahaya.

4. Pembuatan Ekstrak Bunga Telang (Clitoria ternatae L.)

Simplisia yang sudah di sortasi diambil sebanyak 500 gram dimasukan
dalam wadah berwarna gelap kemudian dimaserasi dengan menggunakan
cairan penyari etanol 70% sampai simplisia terendam sempurna dalam
pelarut. Setiap 24 jam dilakukan pengadukan dan penggantian pelarut yang
baru dengan melakukan proses penyaringan. Ampas hasil penyaringan
dilakukan perendaman kembali menggunakan pelarut etanol 70% yang
baru proses ini dilakukan berulang ulang sampai diperoleh pelarut jernih.
Untuk mengetahui apakah senyawa aktif pada simplisia sudah tersari
sempurna, maserat terakhir diambil 5ml di letakan pada cawan porselen
kemudian dipanaskan dengan menggunakan Bunsen. Maserasi yang
sempurna ditandai dengan tidak adanya endapan yang tertinggal pada
cawan porselen. Selanjutnya maserat dilakukan penguapan dengan
menggunakan evaporator dan selajutnya dilakukan penguapan di water
bath sampai ekstrak etanol bunga telang menjadi kental yang siap di
lanjutkan untuk proses fraksinasi. Setelah didapat ekstrak dilakukan
perhitungan rendemen menggunakan rumus :
 29

𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑝𝑒𝑟𝑜𝑙𝑒ℎ

% 𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 = 𝑥 100% =
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘𝑠𝑖

5. Pembuatan Fraksi Etanol Bunga Telang

Ekstrak etanol kental bunga telang yang diperoleh dilakukan fraksinasi
dengan metode cair-cair dengan cara 10 gram ekstrak kental bunga telang
dimasukan kedalam corong pisah kemudian dicampur dengan 50ml etanol
70% dan 50ml n-heksan, lalu dikocok selama 5 menit kemudian diamkan
hingga terpisah menjadi dua lapisan fraksi etanol dan fraksi n-heksan,
pisahkan n-neksan kemudian pada fraksi etanol dilakukan fraksinasi
kembali dengan mencampurkan pelarut n-heksan yang baru, dilakukan
berulang-ulang hingga n-heksan tidak berubah warna sehingga siap untuk
dicampur dengan pelarut kloroform. Kemudian etanol dilakukan
pencampuran dengan 50ml kloroform kemudian dikocok selama 5 menit
diamkan hingga terpisah menjadi dua lapisan fraksi etanol dan fraksi
kloroform, pisahkan kloroform kemudian pada fraksi etanol dilakukan
fraksinasi kembali dengan mencampurkan pelarut kloroform yang baru,
dilakukan berulang-ulang hingga kloroform tidak berubah warna. Hasil
fraksi etanol kemudian diuapkan dengan menggunakan waterbath hingga
diperoleh fraksi etanol bunga telang kental (5).
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝐹𝑟𝑎𝑘𝑠𝑖
% 𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 𝑓𝑟𝑎𝑘𝑠𝑖 = 𝑥 100% =
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝐸𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘

6. Perhitungan Hewan Uji

Pada percobaan ini mencit dikelompokan menjadi 5 kelompok yang
setiap kelompok terdiri dari 5 mencit putih jantan. Hal ini sesuai dengan
rumus Federer, yaitu rumus untuk penentuan sampel untuk uji
eksperimental.
(n-1) (t-1) ≥ 15
Keterangan
n = jumlah pengulangan atau jumlah sampel dalam tiap kelompok.
t = jumlah kelompok perlakuan
Maka = (n-1) (t-1) ≥ 15
= (5-1) (t-1) ≥ 15
 30

= (t-1) (4) ≥ 15
= (t-1) ≥ 3,75
= t ≥ 4,75

7. Perencanaan Dosis
Dosis yang digunakan merujuk pada hasil penelitian sebelumnya yang
menguji efek ekstrak etanol bunga telang terhadap kadar kolesterol pada
tikus dengan dosis 400 mg/kgBB (2). Dosis awal yang digunakan untuk uji
pendahuluan adalah 1,68 mg/20g BB. Maka perencanaan penggunaan
dosis yang dikonversikan terhadap mencit dengan perencanaan dosis
dibuat 4 varian dengan dosis peningkatan 5 kali (18):
Dosis 1 = 1,68 mg/20g BB (dosis sementara)
Dosis 2 = 8,4 mg/20g BB (dosis sementara)
Dosis 3 = 42 mg/20g BB (dosis sementara)
Dosis 4 = 210 mg/20g BB (dosis sementara)

8. Pembuatan Larutan CMC (Carboxy Methyl Cellulose) 0,5%

Sebanyak 0,5 gram CMC ditaburkan kedalam mortar yang berisi 10ml
aquadest yang telah dipanaskan terlebih dahulu, kemudian gerus ad
homogen. Selanjutnya masukan kedalam labu ukur dengan corong gelas,
lalu mortir dibilas dengan aquadest, air bilasan kemudian dimasukan lagi
kedalam labu ukur menggunakan corong gelas dan ditambahkan aquadest
sampai 100 ml.

9. Persiapan Hewan Uji

Subjek penelitian ini menggunakan hewan uji mencit jantan dengan
dilakukan penyeragaman berat badan antara 20-30 gram sebanyak 25 ekor
mencit yang dibagi menjadi 5 kelompok percobaan, yaitu 1 kontrol CMC
dan 4 kelompok dosis yang masing masing kelompok perlakuan terdiri
dari 5 ekor mencit. Sebelum penelitian dilaksanakan, seluruh mencit
dipelihara terlebih dahulu selama satu minggu guna menyesuaikan dengan
lingkungan yang baru dan selama pemeliharaan diberi pakan pelet 3 kali
sehari dan minum air putih. Mencit yang digunakan dalam percobaan
adalah mencit yang tidak cacat atau luka dan menunjukan perilaku yang
 31

normaL. Seluruh hewan uji yang digunakan dipuasakan dahulu selama 8-

12 jam sebelum diberikan bahan uji namun tetap diberikan minum.

10. Uji Pendahuluan

Kelompok hewan uji terdiri dari 4 kelompok pemberian dosis
bertingkat yang masing masing kelompok terdiri dari 5 ekor mencit.
Setelah diberikan bahan uji, dilakukan pengamatan mulai dari 30 menit
kemudian 4 jam sampai 24 jam. (18).
Berikut tabel pengelompokan dosis sementara uji pendahuluan :

Tabel 3.1 Uji Pendahuluan

Kelompok Jumlah Mencit Dosis
1 3 1,68 mg/20g BB

2 3 8,4 mg/20g BB

3 3 42 mg/20g BB

4 3 210 mg/20g BB

Pada uji pendahuluan akan dilihat dari ke 5 dosis mana yang akan
menimbulkan efek dari toksisitas akut berupa gejala fisik hingga kematian.
Setelah didapati jumlah kematian hewan pada kelompok perlakuan, maka
dapat ditentukan dosis untuk selanjutnya digunakan pada uji tosisitas akut.
Dosis awal yang digunakan dalam uji toksisitas akut adalah dosis terbesar
yang tidak menyebabkan kematian pada uji pendahuluan. Dosis terkecil
dalam kelompok merupakan dosis terdapat kematian 0% atau mendekati,
sedangkan pada dosis terbesar pada uji pendahuluan dimana terdapat
kematian 100% atau mendekati.

11. Pengujian Toksisitas Akut

Hewan uji terdiri dari 25 ekor mencit jantan yang dibagi secara acak
dalam 5 kelompok masing masing mencit jantan ditempatkan didalam
kendang dan diperiksa berat badannya serta kondisinya. Kelompok 1
sebagai kontrol dan kelompok 2-5 diberikan dosis uji yang dipeoleh dari
uji pendahuluan. Dosis awal menggunakan dosis 0% kematian yang
mendekati kematian hewan uji dan untuk menentukan dosis selanjutnya
 32

ditingkatkan kelipatan 2 kali. Cara pemberian bahan uji dilakukan

menggunakan cara peroral dengan dosis tunggal.
Proses pengamatan hewan dilakukan pada 30 menit pertama kemudian
tiap 4 jam selama 24 jam dilanjutkan pengamatan satu kali setiap harinya
selama 14 hari. Selama proses pengamatan dicatat berat badan tiap
harinya, gejala gejala yang ditimbulkan akibat paparan senyawa yang
diberikan serta dilakukan pencatatan jumlah hewan yang mati dan
waktunya. Gejala toksisitas yang dapat terlihat diantaranya bulu berdiri,
diare, tremor, kelainan pada mata dan kejang kejang.
Kontrol : Larutan CMC
P1 : Dosis I
P2 : Dosis II
P3 : Dosis III
P4 : Dosis IV

12. Analisis Data

Data diperoleh dari jumlah kematian hewan selam 14 hari dengan seri
konsentrasi dosis yang berbeda. Kemudian semua dosis yang
menyebabkan kematian pada hewan uji dilakukan pencatatan jumlahnya.
Setelah diperoleh jumlah hewan yang mati pada setiap kelompok,
kemudian dilakukan perhitungan LD50 digunakan metode Thomson dan
Weil. Hasil perhitungan tersebut dapat ditetapkan kategori ketoksikan
fraksi etanol bunga telang.
Rumus Thomson dan Weil :
Log 𝑚 = log 𝐷 + 𝑑 (𝑓 + 1)
Keterangan :
M = nilai LD50
D = dosis terkecil yang digunakan
d = log dari kelipatan dosis
f = suatu nilai dalam table Thomson Weil
 33

DAFTAR PUSTAKA

1. Marpaung AM. Tinjauan Manfaat Bunga Telang (Clitoria ternatea L.)

Bagi Kesehatan Manusia. J Funct Food Nutraceutical. 2020;1(2):63–85.
2. Arifah Y, Sunarti S, Prabandari R. Efek Bunga Telang (Clitoria ternatea
L.) Terhadap Kolesterol Total, LDL, HDL Pada Tikus (Rattus Norvegicus
). J Syifa Sci Clin Res. 2022;4(1):18–31.
3. Irawansyah A. Uji Toksisitas Subkronik Eksrak Daun Kumis Kucing
(Orthosiphon aristatus Blume) Terhadap Ginjal Mencit Jantan Secara Oral.
[Skripsi]:Universitas Tulang Bawang Lampung; 2015.
4. Mustapa, Moh A A muis. Uji Toksisitas Akut Yang Diukur Dengan
Penentuan LD50 Ekstrak Etanol Bunga Cengkeh (Syzygium aromaticum
L.) Terhadap Mencit (Mus musculus) Menggunakan Metode Thompson-
Weil. 2015;
5. Suhantoro. Uji Aktivitas Antidiabetes Fraksi Etanol Bunga Telang (Clitoria
ternatea L.) Pada Mencit Putih (Mus musculus) Yang di Induksi Aloksan.
[Skripsi]: Universitas Tulang Bawang Lampung; 2023.
6. Handito D, Basuki E, Saloko S, Dwikasari LG, Triani E. Analisis
Komposisi Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) Sebagai Antioksidan
Alami Pada Produk Pangan. Pros SAINTEK [Internet]. 2022;4(November
2021):64–70. Available from:
https://jurnal.lppm.unram.ac.id/index.php/prosidingsaintek/article/view/481
7. Zahara M. Ulasan singkat: Deskripsi Tunga Telang ( Clitoria ternatea L.)
dan Manfaatnya Brief Review: Description of Clitoria ternatea L. and its
Benefits. J Pendidik Sains dan Biol. 2022;9(2):719–28.
8. Oguis GK, Gilding EK, Jackson MA, Craik DJ. Butterfly pea (Clitoria
ternatea L.), a cyclotide-bearing plant with applications in agriculture and
medicine. Front Plant Sci. 2019;10(May):1–23.
9. Jamil N, Mohd Zairi MN, Mohd Nasim NA, Pa’ee F. Influences of
Environmental Conditions to Phytoconstituents in Clitoria ternatea
(Butterfly Pea Flower) – A Review. J Sci Technol. 2018;10(2):208–28.
10. Depkes RI. materia medika Indonesia. Edisi c & VI. V & VI. Jakarta:
Depkes RI; 1989.
11. P.Suwidijoyo , G.S.Asep D. Farmakope Herbal Indonesia. II. Jakarta:
Kementrian Kesehatan Republik Indonesia; 2017.
12. Depkes RI. Cara Pembuatan Simplisia. Jakarta: Depkes RI; 1985.
13. Lestari R. Penampisan Fitokimia dan Standarisasi Simplisia dan Ekstrak
Umbi Bawang Dayak ( Eleutherine americana Merr .) Asal Gowa Sulawesi
Selatan. [Skripsi]: Universitas Hasanuddin Makassar; 2021.
14. Okta Dwiana Rizqa. Standarisasi Simplisia Daun Justicia gendarusssa
Burm f . Dari BerbagaiTempat Tumbuh. [Skripsi]: Universitas Airlangga;
2010.
 34

15. Depkes RI. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta:
Departemen Kesehatan RI; 2000.
16. Roy Juni Maratur Sihotang. Fraksi Etanol Herba Seledri (Apium graveolens
L.) Sebagai Antibakteri Terhadap Escherichia coli, Staphylococcus aureus
dan Shigella dysentriae. 2018;
17. Rusmiati. Pengaruh Metode Ektraksi Terhadap Aktivitas Antimikroba
Ekstrak Metanol Daun Mimba (Azadirachta indica Juss). [Skripsi]: UIN
Alauddin Makassar; 2010.
18. Wulan Permata Sari. Uji Toksisitas Akut Campuran Ekstrak Etanol Daun
Sirih (Piper betle L.) dan Ekstrak Kering Gambir (Uncaria gambir R.)
Terhadap Mencit Putih Jantan. [Skripsi]: UIN Syarif Hidayatullah; 2010.
19. Tri Puji l M. HF. Aplikasi Pemanfaatan Daun Pepaya (Carica papaya)
Sebagai Biolarvasida Terhadap Larva Aedes aegypti. Gresik: Graniti; 2019.
20. Putri Dwi M.J. Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi Etanol dan N-heksan kulit
Bawang Merah (Allium cepa L.) terhadap bakteri Propionibacterium acnes
penyebab jerawat. Skripsi. [Skripsi]: STIKES Bhakti Husada Mulia
Madiun; 2021.
21. Nugroho HF. Pengaruh Pemberian Ekstrak Daun Sukun (Artocarpus altilis)
Terhadap Fertilitas (Mus musculus) Mencit. [Skripsi]: Universitas Islam
Negeri Raden Intan Lampung; 2020.
22. Purwo Sri Rejeki, Eka Arum REP. Overiektomi pada Tikus dan Mencit.
Surabaya: Universits Airlangga Press; 2018.
23. Rudy Agus Nugroho. Mengenal Mencit Sebagai Hewan Laboratorium.
Samarinda: Mulawarman University Press; 2018.
24. Filu Mawati Santoso putri. Urgensi Etika Medis Dalam Penanganan Mencit
Pada Penelitian Farmakologi. 2018;9(2):51–61.
25. Wiku Agustina dkk. Pengujian Toksisitas Akut Obat Herbal Pada Mencit
Berdasarkan Organization for Economic Co-operation and Development
(OECD). J Sain Vet. 2015;33(2):234–9.
26. Sylvia Anggraeni. Uji Tokisitas Akut Serbuk Cacing Tanah (Pheretima
javanica K.) Melalui Pengukuran Kadar SGOT dan SGPT Tikus Putih
(Rattus norvegicus L.) Sebagai Buku Ilmiah Popoler. [Skripsi]: Universitas
Jember; 2017.
27. Umboro OR, Bimmaharyanto ED, Komang N, Yanti WK. Umboro OR,
Bimmaharyanto ED, Komang N, Yanti WK. Uji Efektivitas Antioksidant
(LC50) dan Toksisitas Akut (LD50) Fraksi Etanol Daun Nangka
(Artocarpus heterophyllus Lam.). JUPE J Pendidik Mandala .
2020;5(6):187–95.
28. Budiman FA, Hidayat F. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Umbi Bit
(Beta Vulgaris L.) Dengan Metode Bslt (Brine Shrimp Lethality Test). J
Heal Sains. 2021;2(3):310–5.
29. Firman Abu Syahral. Uji Toksisitas Subkronik Ekstrak Kulit Kayu Raru
 35

(Cotylelobium melanoxylon Pierre) Terhadap Ginjal Mencit Jantan Secara

Oral. [Skripsi]: Universitas Tulang Bawang Lampung; 2014.
30. Dwiana Andayani SP dkk. Panduan Penyusunan Protokol Uji Praklinik.
Jakarta: BPOM RI; 2022. 1–23 p.
31. Sulastra CS, Khaerati KKK, Ihwan. Toksisitas Akut Dan Lethal Dosis
(LD50) Ekstrak Uwi Banggai Ungu (Dioscorea alata L.) Pada Ttikus Putih
(Rattus Norvegicus). J Ilm Medicam. 2020;6(1):10–4.
32. Alfathri Yunedi. Uji Toksisitas Akut Daun Sungkai (Peronema canescens
Jack.) serta Penentuan Nilai LD50 pada Mencit Putih Jantan. [Skripsi]:
Universitas Andalas Padang; 2022.
33. Loomis T. Toksikologi Dasar. diterjemah oleh Donatus I., editor.
Semarang: IKIP Semarang Press,; 1978.
34. Departemen Kesehatan RI. Farmakope Indonesia edisi III. III. Jakarta:
Direkorat Jenderal Pengawas Obat dan Makanan; 1979.
35. Angelina R, Syuhada FA. Manfaat Bunga Telang Dan Pembudidayaan di
CV. Faruq Farm (Benefits of Telang Flower And Cultivination CV.
FARUQ FARM). J Agriness. 2023;1(1):1–7.
36. Refmidawati. Uji toksisitas subkronik ekstrak daun sirsak (Annoa mucirata
Linn.) pada hati tikus putih jantan galur wistar secara oral. [Skripsi]:
Universitas Tulang Bawang Lampung; 2015.
 36

LAMPIRAN
 37

Lampiran 1 Skema Pembuatan Ekstrak Bunga Telang

Bunga Telang
• Sortasi basah
• Dtiriskan
• Pengeringan

Simplisia

Serbuk Halus

Dimaserasi Dengan Etanol 70%

Penyaringan

Ampas Maserat

Rotary Evaporator

Etanol Ekstrak Kental

 38

Lampiran 2 Skema Proses Fraksinasi Bunga Telang Menggunakan Etanol

Ekstrak kental bunga telang 10g

• Ditambahkan n-heksan dan

etanol 70% masing masing
50ml. Pisahkan fraksi n-
heksan dan campur kembali
fraksi etanol dengan n-
heksan yang baru.
• Ulangi sampai pelarut n-
heksan bening
Fraksi n-Heksan Fraksi Etanol 70%

• Fraksi etanol 70% ditambahkan

kloroform sebanyak 50 ml. Pisahkan
fraksi kloroform dan campur
kembali fraksi etanol dengan
kloroform yang baru.
• Ulangi sampai pelarut n-heksan
bening

Fraksi Kloroform Fraksi Etanol 70%

Pelarut diuapkan
dengan water batch

Ekstrak Etanol
70% Bunga
Telang Kental
 39

Lampiran 3 Skema Uji Toksisitas Akut Fraksi Etanol Bunga Telang Pada
Mencit Putih

Aklimitasi hewan uji selama 7 hari

25 hewan uji dikelompokan menjadi 5

kelompok sesuai tingkatan dosis
Uji Pendahuluan

Kel I Kel II Kel III Kel IV

Dosis 1 Dosis 2 Dosis 3 Dosis 4

Dilanjutkan uji lanjutan toksitas akut

Kematian Berat Gejala

Hewan Badan Toksisitas

LD50 perubahan Tremor,di

berat are, lemas,
badan bulu
berdiri
dlL.
 40

Lampiran 4 Tabel Konversi Perhitungan Dosis (36).

Mencit Tikus Marmut Kelinci Kucing Kera Anjing Manusia

20g 200g 400g 1,5kg 2kg 4kg 12kg 70kg
Mencit 1.0 7.0 12.25 27.8 29.7 64.1 124.2 378.9
20g
Tikus 0.14 1.0 1.74 3.9 4.2 9.2 17.8 56.0
200g
Marmut 0.08 0.57 1.0 2.25 2.4 5.2 10.2 31.5
400g
Kelinci 0.04 0.25 0.44 1.0 1.08 2.4 4.5 14.2
1,5kg
Kucing 0.03 0.23 0.41 0.92 1.0 2.2 4.1 13.0
2kg
Kera 0.016 0.11 0.19 0.42 0.45 1.0 1.9 6.1
4kg
Anjing 0.008 0.06 0.1 0.22 0.24 0.52 1.0 3.1
12kg
Manusia 0.006 0.018 0.031 0.07 0.076 0.16 0.32 1.0
70kg
 41

Lampiran 5 Daftar Volume Maksimal Larutan Sediaan Uji yang Dapat

Diberikan Pada Berbagai hewan (36).

Jenis Hewan Uji Volume maksimal (ml) sesuai jalur pemberian

i.v i.m i.p s.c p.o
Mencit (20-30g) 0.5 0.05 1.0 0.5-10 1.0
Tikus (100g) 1.0 0.1 2.5 2.5 5.0
Hamster (50g) - 0.1 1-2 2.5 2.5
Marmut (250g) - 0.25 2-5 5.0 10.0
Merpati (300g) 2.0 0.5 2.0 2.0 10.0
Kelinci (2.5kg) 5-10 0.5 10-20 5-10 20.0
Kucing (3kg) 5-10 1. 10-20 5-10 50.0
Anjing (5kg) 10-20 5.0 20-50 10.0 100.0
 42

Lampiran 6 Rancangan Perhitungan Dosis dan Pembuatan Larutan Dosis

Diketahui : Faktor konversi tikus ke mencit = 0,14

Berat badan mencit = 20 g
Berat badan tikus = 200 g
Dosis lazim ekstrak bunga telang = 400 mg/Kg BB (2)
Berat simplisia = 500g
Berat ekstrak kental diperoleh = 200g (perkiraan sementara)
Berat fraksi diperoleh = 30g (perkiraan sementara)
Berat Ekstrak
Rendemen ekstrak = x 100%
Berat Simplisia
200g
= x 100% = 40%
500g
Berat Fraksi
Rendemen Fraksi = Berat Ekstrak x 100%
30 g
= 200 g
x 100% = 15%

1. Perhitungan Dosis dan Bahan

a. Dosis Ekstrak
Dilakukan konversi dosis dari tikus ke mencit dengan faktor dikalikan 0,14
maka untuk tiap satu ekor mencit dengan BB standar 20g adalah :
➢ Dosis 1 =
200g
x 400 mg/kg BB tikus = 80 mg⁄200g BB tikus
1000g
Konversi =
80 mg⁄200g BB tikus x 0,14 = 11,2 mg⁄20g BB mencit
➢ Dosis 2 =
200g
x 2000 mg⁄kg BB tikus = 400 mg⁄200g BB tikus
1000g
Konversi =
400 mg⁄200g BB tikus x 0,14 = 56 mg⁄20g BB mencit
➢ Dosis 3 =
200g
x 10000 mg/kg BB tikus = 2000 mg⁄200g BB tikus
1000g
Konversi =
2000 mg⁄BB 200 g x 0,14 = 280 mg⁄20g BB mencit
 43

➢ Dosis 4 =
200 g
x 50000 mg/kg BB tikus = 10000 mg⁄200g BB tikus
1000g
Konversi =
10000 mg⁄200g BB tikus x 0,14 = 1400 mg⁄20g BB mencit

b. Dosis Fraksi (perkiraan sementara)

dosis ekstrak x Remendemen fraksi

➢ 11,2 mg⁄20g BB x 15% = 1,68 mg/20g BB
➢ 56 mg⁄20g BB x 15% = 8,4 mg/20g BB
➢ 280 mg⁄20g BB x 15% = 42 mg/20g BB
➢ 1400 mg⁄20g BB x 15% = 210 mg/20g BB

c. Perhitungan larutan induk dosis fraksi (perkiraan sementara)

1) Dosis 1
Dosis fraksi x Berat Badan
VAO (ml) = Konsentrasi
1,68 mg⁄20g BB x 20g BB
0,2 ml = Konsentrasi
1,68 𝑚𝑔/20𝑔 𝐵𝐵
Konsentrasi = = 8,4 mg /1ml
0,2

Larutan induk 5ml = 8,4 mg/1ml x 5 ml = 42 mg/5ml

Jadi, timbang 42 mg fraksi etanol bunga telang, kemudian larutkan
dalam cmc 5ml ad homogen.
2) Dosis 2
Dosis fraksi x Berat Badan
VAO (ml) = Konsentrasi
8,4 mg ⁄20g BB x 20g BB
0,2 ml = Konsentrasi
8,4 mg/20g BB
Konsentrasi = = 42 mg /1ml
0,2

Larutan induk 5ml = 42 mg /1ml x 5ml = 210 mg/5ml

Jadi timbang 210 mg fraksi etanol bunga telang, kemudian larutkan
dalam cmc 5ml ad homogen.
 44

3) Dosis 3
Dosis ekstrak x Berat Badan
VAO (ml) = Konsentrasi
42 mg⁄20g BB x 20g BB
0,2 ml = Konsentrasi
42 mg/20g BB
Konsentrasi = = 210 mg/1ml
0,2

Larutan induk 5ml = 210/1ml x 5ml = 1050mg/5ml

Jadi timbang 1050 fraksi etanol bunga telang, kemudian larutkan dalam
cmc 5ml ad homogen.

4) Dosis 4
Dosis ekstrak x Berat Badan
VAO (ml) = Konsentrasi
210 mg⁄20g BB x 20g BB
0,2 ml = Konsentrasi
210 mg/20g BB
Konsentrasi = = 1050/1ml
0,2

Larutan induk 5ml = 1050 mg/1ml x 5ml = 5250 mg/5ml

Jadi, timbang 5250 mg fraksi etanol bunga telang. kemudian larutkan
dalam cmc 5ml ad homogen.