UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI ETIL ASETAT DAUN

PAGODA (Clerodendrumpaniculatum L) TERHADAP BAKTERI

Staphylococcusaureus, Staphylococcusepidermidis,
danPropionibacteriumacne

PROPOSAL

Disusun oleh:

MUHAMMAD FAUZAN LUBIS

1601011131

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI DAN KESEHATAN
INSTITUT KESEHATAN HELVETIA
MEDAN
2020
 KATA PENGANTAR

Dengan mengucapkan puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas
berkat dan karunia-Nya yang telah memberikan kesehatan kepada penulis,
sehingga dapat menyelesaikan proposal yang berjudul “Uji Aktivitas
Antibakteri Fraksi Etil Asetat Daun Pagoda
(Clerodendrumpaniculatum L.)Terhadap Bakteri
Staphylococcusaureus,Staphylococcusepidermidis,
danPropionibacteriumacne” yang disusun sebagai salah satu syarat untuk
menyelesaikan pendidikan program S1 Farmasi di Institut Kesehatan Helvetia
Medan.
Selama Proses penyusunan proposal ini penulis banyak mendapatkan
bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak. Oleh karena itu pada kesempatan ini
penulis menyampaikan ucapan terimakasih kepada:
1. Dr. dr. Hj. Razia Begum Suroyo, M.kes., M.sc., selaku Pembina Yayasan
Helvetia.
2. Iman Muhammad, S.E., S.Kom., M.M., M.Kes., selaku Ketua Yayasan
Helvetia.
3. Drs. Dr. Ismail Effendi, M.Si., selaku rektor Institut Kesehatan Helvetia
Medan.
4. H. Darwin Syamsul, S.Si., M.Si., Apt., Selaku Dekan Falkultas Farmasi dan
Kesehatan Institut Kesehatan Helvetia Medan.
5. Adek Chan, S.Si., M.Si., Apt., selaku Ketua Prodi S1 Farmasi Institut
Kesehatan Helvetia Medan.
6. Ihsanul Hafiz, S.Farm., M.Si., Apt., selaku Dosen Pembimbing I yang telah
menyediakan waktu dan tenaga untuk membimbing dan memberikan arahan
kepada penulis selama penyusunan proposal.
7. Loura Novilia, S.Farm.,M.Si.,Apt., selaku Dosen Pembimbing II yang
memberikan masukan yang bermanfaat untuk perbaikan proposal ini.
8. Yulis Kartika, S.Farm., M.Si.,Apt., selaku Dosen Penguji yang memberikan
masukan yang bermanfaat untuk perbaikan propsal ini.
9. Seluruh Staf Dosen Institut Kesehatan Helvetia Medan yang telah
memberikan Ilmu dan pengetahuan dan bimbingan kepada penulis selama
pendidikan.
10. Teristimewa buat orang tua, Ayahanda dan Ibunda yang telah memberikan
dukungan baik dari segi moril, material dan Doa sehingga dapat
menyelesaikan proposal ini.
11. Bagi teman-teman seperjuangan Program Studi S1 Farmasi yang telah
membantu dan mendukung penyelesain skripsi ini.
Penulis menyadari baik dari segi penggunaan bahasa, cara menyusun
proposal ini masih jauh dari kata sempurna, oleh karena itu dengan segala
kerendahan hati, penulis sangat mengharapkan kritik dan saran yang membangun
dari semua pihak untuk kesempurnaan proposal ini.
Medan, Februari 2020
Penulis

i
Muhammad Fauzan Lubis
 DAFTAR ISI

Halaman
LEMBAR PENGESAHAN
KATA PENGANTAR ...................................................................................
.........................................................................................................................i
DAFTAR ISI ..................................................................................................
........................................................................................................................ii
DAFTAR GAMBAR .....................................................................................
.......................................................................................................................iv

BAB I PENDAHULUAN .......................................................................

1
1.1. Latar Belakang ....................................................................
............................................................................................1
1.2. Rumusan Masalah ...............................................................
............................................................................................4
1.3. Hipotesis ..............................................................................
............................................................................................4
1.4. Tujuan Penelitian .................................................................
............................................................................................5
1.5. Manfaat Penelitian ...............................................................
............................................................................................5
1.6. Kerang Pikir Penelitian .......................................................
............................................................................................6

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ..............................................................

7
2.1. Uraian Tanaman Pagoda (Clerodendrumpaniculatum L)....
............................................................................................7
2.1.1. Klasifikasi Tanaman Pagoda
(Clerodendrumpaniculatum L) ................................
................................................................................8
2.1.2. Nama .......................................................................
................................................................................8
2.1.3. Khasiat Tanaman .....................................................
................................................................................8
2.1.4. Kandungan Kimia Pagoda .......................................
................................................................................9
2.2. .................................................................................Bakteri
............................................................................................9
2.2.1. Propionibacteriumacnes..........................................
..............................................................................11
2.2.2. Staphylococcusaureus..............................................
..............................................................................12

ii
 2.2.3. Staphylococcusepidermidis......................................
..............................................................................13
2.3. Antibakteri ...........................................................................
..........................................................................................14
2.3.1. Mekanisme Kerja Antibakteri .................................
..............................................................................14
2.3.2. Metode Pengujian Antibakteri .................................
..............................................................................15
2.3.2.1...........................................................Metode Difusi
..................................................................................
..............................................................................16
2.3.2.2............................................................Metode Dilusi
..................................................................................
..............................................................................17
2.4. Antibiotik .............................................................................
..........................................................................................18
2.4.1. Bakterisidal...............................................................
..............................................................................18
2.4.2. Bakteriostatik ...........................................................
..............................................................................19
2.5. Klindamisin..........................................................................
..........................................................................................19
2.6. Simplisia ..............................................................................
..........................................................................................19
2.7. Ekstrak .................................................................................
..........................................................................................20
2.8. Ekstraksi ..............................................................................
..........................................................................................20
2.8.1. Metode Ekstraksi .....................................................
..............................................................................21
2.8.1.1..............................................................Cara Dingin
..................................................................................
..............................................................................21
2.8.1.2................................................................Cara Panas
..................................................................................
..............................................................................21
2.9. Pelarut ..................................................................................
..........................................................................................23
 2.9.1. Macam – macam Pelarut .........................................
..............................................................................23
2.9.2. Pengelompokan Pelarut Berdasarkan Kepolaran.....
..............................................................................23

BAB III METODE PENELITIAN .................................................

26
3.1. Jenis Penelitian ....................................................................
..........................................................................................26
3.2. Tempat dan Waktu Penelitian .............................................
..........................................................................................26
3.2.1. Tempat Penelitian ....................................................
..............................................................................26
3.2.2. Waktu ......................................................................
..............................................................................26
3.3. Sampel Penelitian ................................................................
..........................................................................................26
3.4. Instrumen Penelitian ............................................................
..........................................................................................26
3.4.1. Alat ..........................................................................
..............................................................................26
3.4.2. Bahan .......................................................................
..............................................................................27
3.4.3. Bakteri Yang Digunakan .........................................
..............................................................................27
3.5. Prosedur Penelitian ..............................................................
..........................................................................................28
3.5.1. Pengambilan Sampel ...............................................
..............................................................................28
3.5.2. Proses Ekstraksi dan Fraksinasi ..............................
..............................................................................28
3.5.3. Pembuatan Larutan Pereaksi ...................................
..............................................................................29
3.5.4. Skrining Fitokimia Fraksi ........................................
..............................................................................31
3.5.5. Sterilisasi Alat .........................................................
..............................................................................33
3.5.6. Pembuatan Media MHA...........................................
..............................................................................34
3.5.7. Pembuatan Standar Kekeruhan Larutan (Larutan
Mc. Farland) ............................................................
..............................................................................34
3.5.8. Pembuatan Suspensi Bakteri ...................................
..............................................................................34

iii
 3.5.8.1...............Suspensi Bakteri Propionibacteriumances
..................................................................................
..............................................................................34
3.5.8.2...................Suspensi Bakteri Staphylococcusaureus
..................................................................................
..............................................................................34
3.5.8.3...........Suspensi Bakteri Staphylococcusepidermidis
..................................................................................
..............................................................................35
3.5.9. Pengenceran Fraksi Etil Asetat Daun Pagoda .........
..............................................................................35
3.5.10. Uji Daya Hambat Fraksi Etil Asetat Daun Pagoda .
..............................................................................35
3.6. Pengolahan Data ..................................................................
..........................................................................................36

DAFTAR PUSTAKA .........................................................................

37
 DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1.1. Kerangka Pikir Penelitian ........................................................ 6

Gambar 2.1 Bunga Pagoda (Clerodendrum paniculatum L.)....................... 7
Gambar 2.2. Bentuk Sel Bakteri.................................................................... 10
Gambar 2.3. Propionibacteriumacne............................................................. 12
Gambar 2.4. Staphylococcusaureus............................................................... 13
Gambar 2.5. Staphylococcusepidermidis....................................................... 14

iv
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Negara Indonesia adalah negeri yang kaya akan keanekaragaman hayati

yang dimiliki oleh hewan dan tumbuhannya. Khusus untuk tumbuhan, ada begitu

banyak spesies yang beraneka-ragam di sekitar kita yang bisa kita manfaatkan

untuk menunjang kehidupan kita, baik sebagai bahan makanan, maupun sebagai

bahan untuk obat. Pemanfaatan tanaman sebagai obat akhir-akhir ini semakin

populer di masyarakat. Semakin mahalnya harga obat-obatan membuat

masyarakat mencari alternatif lain untuk pengobatan yakni dengan memanfaatkan

tanaman yang berkhasiat obat(1).

Indonesia merupakan negara kepulauan terbesar di dunia, memiliki lebih

dari 17.000 pulau yang dihuni oleh lebih dari 400 masyarakat adat yang berbeda.

Indonesia memiliki potensi yang tinggi dalam penggunaan tumbuhan

sebagaiobatobatan secara tradisional. Sehubungan dengan kekayaan alam

Indonesia yang cukup tinggi, kemudian dipadukan dengan keragaman suku

bangsa akan terungkap berbagai sistem pengetahuan tentang lingkungan alam.

Pengetahuan ini akan berbeda dari satu etnis dengan etnis lainnya karena

perbedaan tempat tinggal dan dipengaruhi oleh adat, tata cara dan perilaku(2).

Berdasarkan hasil survei diketahui bahwa penduduk pedesaan di

Indonesia khususnya yang bermukim disekitar kawasan hutan, seringkali

menggunakan tanaman atau tumbuhan liar yang terdapat di hutan untuk

pengobatan(3). Namun, Indonesia juga dikenal sebagai salah satu negara yang

1
 2

kaya akan sumber daya alam hayati yang sangat potensial untuk menghasilkan

metabolit sekunder yang dapat digunakan untuk penemuan senyawa pengendali

hama tanaman maupun obat-obatan baru yang lebih potensial. Genus

Clerodendrumadalah salah satu dari suku Verbenacea yang kaya dengan

keragaman kandungan metabolit sekunder. Tumbuhan Clerodendrumpaniculatum

yang dikenal dengan nama bunga pagoda termasuk genus Clerodendrumyang

masih terbatas publikasi ilmiah baik kandungan kimia maupun aktivitas

biologinya. Dalam penelitian kandungan kimia telah ditemukan senyawa

golongan steroid tanpa aktivitas biologinya. Genus Clerodendrumadalah salah

satu dari suku Verbenaceae yang kaya dengan keberagaman kandungan metabolit

sekunder seperti steroid, diterpernoid dan non-diterpenoid, flavonoid dan turunan

denolat lainnya kandungan metabolit sekunder dari genus ini memiliki aktivitas

biologi yang beragam seperti sebagai induksi terhadap virus tanaman, sebagai

repellent, dan insektisida(4).

Obat antibakteri yang banyak beredar di pasaran mengandung antibiotik

sintetik seperti eritromisin dan klindamisin, namun tidak sedikit yang memberikan

efek samping seperti iritasi, penggunaan jangka panjang dapat menyebabkan

resistensi bahkan kerusakan organ dan imuno hipersensitivitas. Dalam beberapa

tahun terakhir, penggunaan antibiotik sebagai terapi jerawat menaikan prevalensi

terjadinya resistensi pada bakteri (5). Oleh karena itu, diperlukan pencarian

senyawa antibakteri alami yang tidak menimbulkan dampak negatif terhadap

manusia, yaitu dengan memanfaatkan zat aktif pembunuh bakteri yang terkandung

dalam tanaman(6).
 3

Tanaman yang berpotensi sebagai antibakteri adalah tanaman bunga

pagoda (ClerodendrumpaniculatumL.). Tanaman bunga pagoda

(ClerodendrumpaniculatumL.) adalah tanaman milik genus Clerodendrumdi

antara 580 spesies yang berbeda dan tersebar luas di Asia, afrika, Amerika, dan

Australia. Beberapa spesies dari genus ini telah digunakan dalam pengobatan

tradisional di Asia dan Afrika. India, Cina, Korea, Thailand dan Jepang adalah

Negara yang telah menggunakan beberapa spesies dari genus ini dalam praktek

medis (7).Bagian terpenting dari tanaman bunga pagoda yang digunakan sebagai

bahan obat yaitu daun, bunga dan akar. Akar rasanya pahit, sifatnya dingin, daun

rasanya asam, agak kelat, sifatnya netral, bunga rasanya manis, sifatnya hangat(8).

Adapun penyakit yang timbul karena adanya infeksi oleh bakteri salah

satunya adalah jerawat.Jerawat biasanya muncul pada permukaan kulit wajah,

leher, dada dan punggung pada saat kelenjar minyak pada kulit terlalu aktif

sehingga pori-pori kulit akan tersumbat oleh timbunan lemak yang berlebihan.

Jika timbunan itu bercampur dengan keringat, debu dan kotoran lain, maka akan

menyebabkan timbunan lemak dan bintik hitam diatasnya yang disebut komedo.

Pada komedo terdapat bakteri, maka terjadilah peradangan yang dikenal dengan

jerawat yang ukurannya bervariasi mulai dari ukuran kecil sampai ukuran besar

serta berwarna merah, kadang-kadang bernanah serta menimbulkan rasa nyeri.

Bakteri yang umumnya menginfeksi jerawat adalah Propionibacteriumacnes,

Staphylococcusaureusdan Staphylococcusepidermidis(9).

Berdasarkan latar belakang diatas maka penulis merasa perlu untuk

melakukan penelitian tentang uji aktivitas antibakteri fraksi etil asetat daun
 4

pagoda (ClerodendrumpaniculatumL.) terhadap pertumbuhan bakteri

Propionibacteriumacnes, Staphylococcusaureus dan Staphylococcusepidermidis.

1.2. Rumusan Masalah

a. Golongan senyawa kimia apa saja yang terdapat dalam fraksi etil asetat

daun pagoda.

b. Apakah fraksi etil asetat daun pagoda memiliki aktivitas antibakteri

terhadap bakteri Propionibacteriumacnes, Staphylococcusaureus, dan

Staphylococcusepidermidis.

c. Apakah fraksi etil asetat daun pagoda memiliki nilai daya hambat.

1.3. Hipotesis

a. Fraksi etil asetat daun pagoda mengandung golongan senyawa

flavonoida, alkaloida, tanin, saponin, steroida/triterpenoida.

b. Fraksi etil asetat daun pagoda memiliki aktivitas antibakteri terhadap

bakteri Propionibacteriumacnes, Staphylococcusaureus, dan

Staphylococcusepidermidis.

c. Terdapat nilai daya hambat pada fraksi etil asetat daun pagoda.
 5

1.4. Tujuan Penelitian

a. Untuk mengetahui golongan senyawa kimia yang terdapat dalam fraksi

etil asetat daun pagoda.

b. Untuk mengetahui aktivitas antibakteri fraksi etil asetat daun pagoda

terhadap Propionibacteriumacnes, Staphylococcusaureus, dan

Staphylococcusepidermidis.

c. Untuk mengetahui nilai daya hambat fraksi etil asetat daun pagoda.

1.5. Manfaat Penelitian

Hasil penelitian ini diharapkan dapat bermanfaat untuk :

a. Untuk mengetahui golongan senyawa kimia yang terdapat dalam bunga

pagoda.

b. Untuk mengetahui aktivitas antibakteri fraksi etil asetat daun pagoda

(ClerodendrumpaniculatumL.) terhadap bakteri

Propionibacteriumacnes, Staphylococcusaureus dan

Staphylococcusepidermidis.

c. Menambah pengetahuan tentang manfaat fraksi etil asetat daun pagoda

(ClerodendrumpaniculatumL.) dalam dunia kesehatan, sebagai

pengganti antibiotik sintesis. Serta dapat menjadi referensi untuk

penelitian-penelitian selanjutnya yang berhubungan dengan

peningkatan pengetahuan dan menjadi bahan kajian lebih lanjut.

 6

1.6. Kerangka Pikir Penelitian

Variabel bebas Variabel Terikat Parameter

Daya Hambat Fraksi Etil

Asetat daun pagoda
Fraksi Etil Asetat
terhadap bakteri
Daun Pagoda Diameter zona
staphylococcusaureus,
(5 ppm, 10 ppm, hambat (mm).
staphylococcus
20 ppm)
epidermidis dan
propionibacteriumacne.

Kontrol positif Klindamisin

Kontrol Negatif DMSO 10%

Gambar 1.1. Kerangka Pikir Penelitian

7
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Uraian Tanaman Pagoda (Clerodendrum paniculatum L.).

Tanaman dari genusClerodendrum (Lamiaceae) tersebar luas di

daerah tropis dan subtropis sebagai pohon-pohon kecil, semak atau herba

dan pertama kali dideskripsikan oleh Linnaeus pada tahun 1753 dengan

mengidentifikasi C. infortunatum L. Genus Clerodendrum terbagi atas tiga

kelompok besar berdasarkan distribusi geografi yaitu klade Asia, klade

Afrika dan kladePantropicalCoastal. Di Indonesia terdapat 17 tanaman

dari genus Clerodendrum yang tumbuh, yaitu C. calamitosum, C.

colebrookianum, C. deflexum, C. disparifolium, C. haematolasium, C.

indicum, C. infortunatum, C. intermedium, C. japonicum, C. laevifolium,

C. minahassae, C. myrmecophila, C. nutans, C. paniculatum, C.

umbratile, dan C. Villosum, dan C. Serratum(10).

Gambar 2.1 Bunga pagoda(Clerodendrumpaniculatum L.)

7
 8

2.1.1Klasifikasi Tanaman Pagoda (Clerodendrumpaniculatum L.)

Sistematika tumbuhan pagoda(Clerodendrumpaniculatum L.)

diklasifikasikan sebagai berikut :

Kingdom : Plantae

Division : Spermatophyta

Class : Magnoliophyta

Ordo : Lamiales

Family : Verbenaceae

Genus : Clerodendrum

Species: Clerodendrumpaniculatum L.(11).

2.1.2Nama

a. Nama ilmiah : Clerodendrumpaniculatum L.

b. Nama daerah : Tumbak raja (Bali), Singgugu (Sunda), Srigunggu

(Jawa),Tinjau handak (Lampung), Punggur tosek (Madura).

c. Nama asing : Pagoda flower (Inggris), Bai jekhong (Cina)(12).

2.1.3 Khasiat Tanaman

Akar bunga pagoda berkhasiat sebagai antiradang, peluruh kencing,

menghilangkan bengkak, dan menghancurkan darah beku, sakit pinggang, nyeri

pada rematik, tuberkulosis paru yang disertai batuk berdarah, wasir berdarah,

berak darah, susah tidur, dan bengkak akibat terbentur benda keras.
 9

Daun berkhasiat sebagai antiradang dan mengeluarkan nanah. Bunga

berkhasiat sebagai sedatif, menghentikan perdarahan, penambah darah pada

penderita anemia, keputihan, wasir berdarah dan susah tidur (13).

2.1.4 Kandungan Kimia Pagoda

Hasil skrining fitokimia ekstrak daun pagoda dengan berbagai pelarut

menunjukkan adanya kandungan senyawa metabolit sekunder. Pada pelarut air

ekstrak daun pagoda teridentifikasi senyawa flavonoid, glikosida dan protein.

Pada pelarut petroleum eter teridentifikasi senyawa alkaloid, kumarin, fitosterol,

flavonoid, glikosida, protein, saponin, steroid dan terpenoid. Pada pelarut

kloroform teridentifikasi senyawa karbohidrat, kumarin, flavonoid, glikosida,

fenol, fitosterol, kuinin, protein, saponin, steroid dan terpenoid. Pada larutan

aseton teridentifikasi senyawa alkaloid, flavonoid, fenol, dan terpenoid. Pada

larutan etanol ekstrak daun pagoda teridentifikasi senyawa alkaloid, flavonoid,

fenol, protein, kuinin, steroid dan terpenoid(14).

2.2. Bakteri

Bakteri adalah mikroorganisme bersel tunggal yang tidak terlihat oleh

mata, tetapi dengan bantuan mikroskop, mikroorganisme tersebut akan nampak.

Ukuran bakteri berkisar anatara panjang 0,5 sampai 10 µ dan lebar 0,5 sampai 2,5

µ tergantung dari jenisnya (µ = 1 mikron = 0,001 mm).

Walaupun terdapat beribu jenis bakteri, tetapi hanya beberapa karakteristik

bentuk sel yang dikemukakan yaitu:

a. Bentuk bulat atau cocci (tunggal = coccus ),

b. Bentuk batang atau bacilli (tunggal =bacillus),

 10

c. Bentuk spiral atau spirilli (tunggal = spirillum),

d. Bentuk koma atau vibrios (tunggal = vibrio).

Sel-sel ini dapat dijumpai dalam keadaan tunggal, berpasangan, tetrad,

kelompok kecil, gerombolan atau rantai(15).

Gambar 2.2. Bentuk sel Bakteri

Berdasarkan perbedaan respons terhadap prosedur pewarnaan gram

(klasifikasi ini dilakukan oleh ahli histology Hans Christian gram) dan struktur

dinding bakteri, bakteri diklasifikasikan menjadi bakteri gram positif dan bakteri

gram negatif.

a. Bakteri gram positif memiliki dinding sel mengandung peptidoglikan yang

tebal serta diikuti pula dengan adanya ikatan benang-benang teichoicacid

dan teichoronicacid, pada umumnya berbentuk bulat (coccus), pada

pewarnaan gram bakteri ini berikatan dengan zat warna utama yaitu

Gentian Violet dan tidak luntur bila dicelupkan ke dalam larutan alkohol

dan dibawah mikroskop tampak berwarna ungu.

Bakteri gram negatif mengandung sedikit sekali ikatan

peptidoglikan dan tidak terdapat ikatan benang-benang teichoicaciddan

 11

teichoronicacid, pada umumnya berbentuk batang (basil), pada pewarnaan

gram bakteri.

b. jenis ini tidak mampu berikatan dengan zat warna utama yaitu Gentian

Violet dan luntur bila dicelupkan ke dalam larutan alkohol dan dibawah

mikroskop tampak berwarna merah apabila di beri zat warna safranin(16).

2.2.1. Propionibacteriumacnes

a. Klasifikasi

Domain : Protophyta

Class : Schizomycetes

Ordo : Eubacteriales

family : Propionibacteriaceae

Genus : Propionibacterium

Species : Propionibacteriumacne

b. Sifat dan morfologi

Propionibacteriumacnes adalah termasuk gram-positif berbentuk batang,

tidak berspora. Propionibacteriumacnes pada umumnya tumbuh sebagai anaerob

obligat. Beberapa jenis adalah aerotoleran, tetapi tetap menunjukkan pertumbuhan

lebih baik sebagai anaerob. Bakteri ini mempunyai kemampuan untuk

menghasilkan asam propionat, sebagaimana ia mendapatkan namanya(17).

Bakteri Propionibacteriumacnes menyebabkan akne dengan menghasilkan lipase

yang mengubah asam lemak tak jenuh menjadi asam lemak jenuh yang

menyebabkan sebum menjadi padat. Jika produksi sebum bertambah, bakteri

Propionibacteriumacnesjuga akan bertambah banyak yang keluar dari kelenjar

 12

sebasea, karena bakteri ini merupakan pemakan lemak (18). Bakteri

Propionibacteriumacnesdapat dilihat pada gambar 2.2.

Gambar 2.3.Propionibacteriumacne

2.2.2. Staphylococcusaureus

a. Klasifikasi

Phylum : Firmicutes

Class : Bacilli

Ordo : Bacillales

Family : Streptococccaceae

Genus : Staphylococcus

Species : Staphylococcusaureus

b. Sifat dan morfologi.

Staphylococcusaureus adalah bakteri berbentuk kokus berukuran garis

tengah sekitar 1 µm yang pada pewarnaan bersifat gram-positif, jika

dilihat dibawah mikroskop berbentuk seperti kelompok anggur.

Staphylococcusaureus tidak aktif bergerak dan tidak membentuk spora.

Staphylococcusaureus merupakan flora normal pada tubuh manusia yang

terdapat pada kulit, konjungtiva, hidung, faring, mulut, usus bagian bawah,

uretra anterior dan vagina. Staphylococcusaureus dapat menyebabkan

 13

pneumonia, meningitis, emfisema,infeksi tulang dan sendi maupun

endokarditis. Staphylococcusaureus berperan pada banyak infeksi kulit

misalnya acne dan impetigo(19). Bakteri Staphylococcusaureusdapat

dilihat pada gambar 2.3.

Gambar 2.4.Staphylococcusaureus

2.2.3. Staphylococcusepidermidis

a. Klasifikasi

Phylum : Firmicutes

Class : Bacilli

Ordo : Bacillales

Family : Staphylococcaceae

Genus : Staphylococcus

Species : Staphylococcusepidermidis

b. Sifat dan morfologi

Staphylococcusepidermidis adalah bakteri gram-positif. Sel-sel

berbentuk bola, berdiameter 0,5-1,5 µm, terdapat dalam tunggal dan

berpasangan dan secara khas membelah diri pada lebih dari satu bidang

sehingga membentuk gerombolan yang tak teratur.Anaerob fakultatif,

tumbuh lebih cepat dan lebih banyak dalam keadaan aerobik. Suhu
 14

optimum 35-40 C. Terutama berosiasi dengan kulit,selaput lendir hewan

berdarah panas(20). Bakteri Staphylococcusepidermidisdapat dilihat pada

gambar 2.4.

Gambar 2.5.Staphylococcusepidermidis

2.3. Antibakteri

Antibakteri adalah zat yang dapat mengganggu pertumbuhan atau bahkan

mematikan bakteri dengan cara mengganggu metabolisme mikroba yang

merugikan. Faktor-faktor yang berpengaruh pada aktivitas zat antibakteri adalah

pH, suhu stabilitas senyawa tersebut,jumlah bakteri yang ada, lamanya inkubasi

dan aktivitas metabolisme bakteri (21).

2.3.1. Mekanisme Kerja Antibakteri

Mekanisme zat antibakteri dalam membunuh atau menghambat

pertumbuhan bakteri umumnya dapat menyebabkan perubahan pada komponen

makromolekul dari bakteri. Mekanisme kerja antibakteri yaitu dengan cara

sebagai berikut:

a. Merusak struktur dinding sel bakteri dengan cara menghambat

pembentukannya atau mengubah dinding sel setelah terbentuk.

b. Menggangu keutuhan atau fungsi membran sel mikroba yang akan

mengakibatkan terhambatnya pertumbuhan sel atau matinya sel. Membran

sitoplasma berfungsi mempertahankan bahan-bahan tertentu di dalam sel,

 15

mengatur aliran keluar masuknya bahan-bahan lain dan membran

memelihara integritas komponen-komponen selular.

c. Menghambat sintesis protein sel mikroba dengan mendenaturasi protein

dan asam-asam nukleat yang dapat merusak sel tanpa dapat diperbaiki

kembali.

d. Mengganggu metabolisme sel mikroba dengan menghambat enzim

didalam sel yang dapat mengakibatkan terganggunya metabolisme atau

matinya sel.

e. Menghambat sintesis asam nukleat dan protein dengan cara menggangu

pembentukan atau fungsi DNA, RNA dan protein yang memegang

peranan penting dalam kehidupan normal sel, gangguan pada

pembentukan dan fungsi zat-zat tersebut dapat mengakibatkan kerusakan

total pada sel (22).

2.3.2. Metode pengujian antibakteri

Pada pengujian antibakteri ini diukur respon pertumbuhan populasi

mikroorganisme terhadap agen antibakteri. Kegunaan uji antibakteri adalah

diperolehnya suatu sistem pengobatan yang efektif dan efisien. Terdapat dua

metode pokok uji antibakteri terhadap penentuan kepekaan bakteri patogen yaitu

difusi dan dilusi. Adapun macam-macam metode pengujian tersebut sebagai

berikut:

2.3.2.1. Metode difusi

a. Metode discdiffusion(tes Kirby&Bauer)

 16

Metode ini untuk menentukan aktivitas agen antimikroba. Piringan yang berisi

agen antimikroba diletakkan pada media Agar yang telah ditanami

mikroorganisme yang akan berdifusi pada media Agar tersebut. Area jernih

mengindikasikan adanya hambatan pertumbuhan mikrorganisme oleh agen

antimikroba pada permukaan media agar.

b. E-test

Metode ini untuk mengestimasi KHM (kadar hambat minimum) yaitu

konsentrasi minimal suatu agen antimikroba untuk dapat menghambat

pertumbuhan mikroorganisme. Metode ini menggunakan strip plastik yang

mengandung agen antimikroba dari kadar terendah hingga tertinggi dan

diletakkan pada permukaan media Agar yang telah ditanami mikroorganisme.

Pengamatan dilakukan pada area jernih yang ditimbulkannya yang

menunjukkan kadar agen antimikroba yang menghambat pertumbuhan

mikroorganisme pada media Agar.

c. Ditch-platetechnique

Sampel uji berupa agen antimikroba yang diletakkan pada parit yang dibuat

dengan cara memotong media agar dalam cawan petri pada bagian tengah

secara membujur dan mikroba uji (maksimum 6 macam) digoreskan ke arah

parit yang berisi agen antimikroba.

d. Cup-platetechnique

Metode ini serupa dengan discdiffusion, dimana dibuat sumur pada media

Agar yang telah ditanami dengan mikroorganisme dan pada sumur tersebut

diberi agen antimikroba yang akan diuji.

 17

e. Gradient-platetechnique

Konsentrasi agen antimikroba pada media Agar secara teoritis bervariasi dari

0 hingga maksimal. Media Agar dicairkan dan larutan uji ditambahkan.

Campuran kemudian dituang kedalam cawan petri dan diletakkan dalam posisi

miring. Nutrisi kedua selanjutnya dituang diatasnya. Plate diinkubasi selama

24 jam untuk memungkinkan agen antimikroba berdifusi dan permukaan

media mengering. Mikroba uji (maksimal 6 macam) digoreskan pada arah

mulai dari konsentrasi tinggi ke rendah. Hasil diperhitungkan sebagai panjang

total pertumbuhan mikroorganismemaksimum yang mungkin dibandingkan

dengan pembandingpertumbuhan hasil goresan(23).

2.3.2.2. Metode dilusi

a. Metode dilusi cair/brothdilutiontest (serial dilution)

Metode ini mengukur MIC (minimum inhibitoryconcentration) atau

KHM (kadar hambat minimum) dan MBC (minimum

bactericidalconcentration) atau KBM (kadar bunuh minimum). Cara yang

dilakukan adalah dengan membuat seri pengenceran agen antimiroba pada

medium cair yang ditambahkan dengan mikroba uji. Larutan uji agen

antimikroba pada kadar terkecil yang terlihat jernih tanpa adanya

pertumbuhan mikroba uji ditetapkan sebagai KHM. Larutan yang

ditetapkan sebagai KHM tersebut selanjutnya dikultur ulang pada media

cair tanpa penambahan mikroba uji ataupun agen antimikroba dan

diinkubasi selama 18-24 jam. Media cair yang ditetapkan terlihat jernih

setelah diinkubasi ditetapkan sebagai KBM.

 18

b. Metode dilusi padat/solid dilutiontest

Metode ini serupa dengan metode dilusi cair namun menggunakan media

padat (solit). Keuntungan metode ini adalah satu konsentrasi agen

antimikroba yang diuji dapat digunakan untuk menguji beberapa mikroba

uji(23).

2.4. Antibiotik

Antibiotik adalah segolongan zat yang dihasilkan oleh cendawan

atau bakteri yang dapat menentang atau mematikan cendawan atau bakteri

lain(24).Antibiotik merupakan golongan obat yang paling banyak

digunakan di dunia terkait dengan banyaknya kejadian infeksi bakteri.

Penggunaan antibiotik yang tidak rasional dapat menyebabkan resistensi

terhadap antibiotik. Resistensi merupakan dampak negatif dari pemakaian

antibiotik yang irasional, penggunaan antibiotik dengan indikasi yang

tidak jelas, dosis atau lama pemakaian tidak sesuai, cara pemakaian yang

kurang tepat status obat yang tidak jelas, serta pemakaian antibiotik secara

berlebihan(25).

2.4.1. Bakterisidal

Bakterisidal merupakan aktivitas antibiotik yang dapat membunuh

mikroba. Contoh antibiotik yang bersifat bakterisidal antara lain

aminoglycoside, beta-lactam, metronidazole, kuinolon, rifampicin,

pirazinamide, vancomycin, isoniazidedanbacitracin(26).

2.4.2. Bakteriostatik
 19

Bakteriostatik merupakan aktivitas antibiotik yang bersifat

menghambat pertumbuhan mikroba. Contoh antibiotik yang memiliki sifat

bakteriostatik antara lain chloramphenicol, clindamycin, ethambutol,

macrolide, sulfonamide, tetracyclinedantrimethoprim(26).

2.5. Klindamisin

Klindamisin bekerja dengan menghambat sintesis protein subunit

50s pada ribosom bakteri, sehingga mengganggu proses pembentukan

rantai peptidoglikan bakteri. Klindamisin dapat menghambat protein

bakteri, racun, enzim dan sitokinindidalam jaringan.

Klindamisin memiliki aktivitas yang tinggi terhadap berbagai

bakteri fakultatif anaerob. Organisme gram positif yang rentan terhadap

klindamisin adalah Actinomyces, Eubacterium, Lactobacillus,

Peptostreptococcus, propionibacterium dan spesiesStaphylococcus,

termasuk strain yang resisten terhadap penisilin. Obat ini memiliki

aktivitas yang lemah terhadap organisme gram negatif (27).

2.6. Simplisia

Dalam buku “Materia Medika Indonesia” ditetapkan definisi

bahwa simplisia adalah bahan alamiah yang dipergunakan sebagai obat

yang belum mangalami pengolahan apapun juga dan kecuali dinyatakan

lain, berupa bahan yang telah dikeringkan. Simplisia dibedakan simplisia

nabati, simplisia hewani dan simplisia pelikan (mineral). Simplisia nabati

adalah simplisia yang berupatumbuhan utuh, bagian tumbuhan atau

 20

eksudat tumbuhan. Eksudat tumbuhan ialah isi sel yang secara spontan

keluar dari tumbuhan atau isi sel yang dengan cara tertentu dikeluarkan isi

selnya, atau senyawa tumbuhannya belum berupa senyawa kimia

murni(28).

2.7. Ekstrak

Dalam buku Farmakope Indonesia Edisi IV, disebutkan bahwa:

Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi

senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut

yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau

serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah

ditetapkan(28).

2.8. Ekstraksi

Ekstraksi adalah penarikan zat-zat dari bahan asal dengan mempergunakan

cairan penarik atau pelarut. Tujuan utama ekstraksi ialah mendapatkan atau

memisahkan sebanyak mungkinzat-zat yang memiliki khasiat pengobatan dari zat-

zat yang tidak berfaedah, agar lebih mudah dipergunakan (kemudahan diabsorbsi,

rasa, pemakaian, dan lain-lain) dan disimpan dibandingkan simplisia asal, dan

tujuan pengobatannya lebih terjamin(24).

2.8.1. Metode ekstraksi

2.8.1.1. Cara dingin

a. Maserasi
 21

Maserasi adalah cara ekstraksi simplisia dengan merendam dalam pelarut pada

suhu kamar sehingga kerusakan atau degradasi metabolit dapat di minimalisasi.

Pada maserasi, terjadi peroses keseimbangan konsentrasi antara pelarut di luar dan

di dalam sel sehingga diperlukan penggantian pelarut secara berulang. Kinetik

adalah cara ekstraksi seperti maserasi yang dilakukan dangan pengadukan,

sedangkan digesti adalah cara maserasi yang dilakukan pada suhu yang lebih

tinggi dari suhu kamar, yaitu 40-60°C.

b. Perkolasi

Perkolasi adalah cara ekstraksi simplisia menggunakan pelarut yang selalu

baru, dengan mengalirkan pelarut melalui simplisia hingga senyawa tersari

sempurna. Cara ini merupakan waktu lebih lama dan pelarut yang lebih banyak.

Untuk meyakinkan perkolasi sudah sempurna, perkolat dapat diuji adanya

metabolit dangan pereaksi yang spesifik.

2.8.1.2. Cara panas

a. Refluks

Refluks adalah cara ekstraksi dangan pelarut pada suhu titik didihnya selama

waktu tertentu dan jumlah pelrut terbatas yang relatif konstan dangan adanya

pendingin baik. Agar hasil penyarian lebih baik, refluks umumnya dilakukan

berulang-ulang terhadap residu pertama. Cara ini memungkinkan terjadinya

senyawa yang tidak tahan panas.

b. Soxhletasi

Soxhletasi adalah cara ekstraksi menggunakan pelarut organik pada suhu didih

dengan alat soxhlet. Pada soxhletasi, simplisia dan ekstrak berada pada labu
 22

berbeda pada labu berbeda. Pemanasan mengakibatkan pelarut menguap, dan uap

masuk dalam labu pendingin. Hasil kondensasi jatuh bagian simplisia sehingga

ekstraksi berlangsung terus-menerus dangan jumlah pelarut relatif konstan.

c. Destilasi

Destilasi merupakan cara ekstraksi untuk menarik atau menyari senyawa yang

ikut menguap dangan air sebagai pelarut. Pada proses pendinginan, senyawa dan

uap air akan terkondensasi dan terpisah menjadi destilasi air dan senyawa yang

diekstraksi. Cara ini umum digunakan untuk menyari minyak atsiri dari

tumbuhan.

d. Infusa

Infusa adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperature penangas air

(bejana infuse tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur terukur 96-98°C)

selama waktu tertentu (15-20 menit).

e. Dekok

Dekok adalah cara ekstrasi yang mirip danganinfusa, hanya saja waktu

ekstraksinya lebih lama yaitu 30 yaitu menit dan suhunya mencapai titik didih

air(29).

2.9. Pelarut

Pelarut adalah zat yang berada pada larutan dalam jumlah besar,

sedangkan zat lainnya dianggap sebagai zat terlarut. Pelarut yang digunakan pada

proses ekstraksi haruslah merupakan pelarut terbaik untuk zat aktif yang terdapat

dalam sampel atau simplisia, sehingga zat aktif dapat dipisahkan dari simplisia

dan senyawa lainya yang ada dalam simplisia tersebut.

 23

2.9.1. Macam-macam Pelarut

a. Air

Air merupakan pelarut yang mudah, murah dan dipakai secara luas oleh

masyarakat. Pada suhu kamar, air merupakan pelarut yang baik untuk

melarutkan berbagai macam zat seperti : garam-garam alkaloid, glikosida,

asam tumbuh-tumbuhan, zat warna dan garam-garam mineral lainnya.

Kekurangan dari air sebagai pelarut diantaranya adalah air merupakan

media yang baik untuk pertumbuhan jamur dan bakteri, sehingga zat yang

di ekstrak dangan air tidak dapat bertahan lama.

b. Etanol

Berbeda dangan air yang dapat melarutkan berbagai macam zat aktif,

etanol hanya dapat melarutkan zat-zat tertentu saja seperti alkaloid,

glikosida, damar-damar dan minyak atsiri. Etanol tidak dapat digunakan

untuk mengekstraksi bahan di jenis-jenis gom, gula dan albumin.

Keuntungan dari penggunaan etanol sebagai pelarut adalah ekstrak yang

dihasilkan lebih spesifik, dapat bertahan lama karena di samping sebagai

pelarut, etanol juga berfungsi sabagai pengawet.

c. Gliserin

Gliserin digunakan sebagai pelarut terutama untuk menarik zat aktif dari

simplisia yang mengandung zat samak. Di samping itu, gliserin merupakan

 24

pelarut yang baik untuk golongan tanin dan hasil-hasil oksidasinya,

berbagai jenis gom albumin.

d. Eter

Eter merupakan pelarut yang sangat mudah menguap sehingga tidak

dianjukan untuk pembuatan sediaan obat yang akan disimpan dalam waktu

jangka yang lama.

e. Heksana

Heksana adalah pelarut yang berasal dari hasil penyulingan minyak bumi.

Pelarut yang baik untuk lemak dan minyak. Pelarut ini biasanya

dipergunakan untuk menghasilkan lemak pengotor dari simplisia sebelum

simplisia tersebut dibuat sediaan galenik.

f. Aceton

Aceton memiliki kemampuan hampir sama dengan heksana dimanaaceton

mampu melarutkan dengan baik berbagai macam lemak, minyak atsiri dan

damar. Akan tetapi, aceton tidak dipergunakan untuk sediaan galenik

untuk pemakaian dalam. Selain itu bau dari acetom kurang enak dan sukar

hilang dari sediaan.

g. Kloroform

Kloroform biasanya digunakan untuk menarik bahan-bahan yang

mengandung basa alkaloid, damar, minyak lemak dan minyak atsiri.

2.9.2. Pengelompokan pelarut berdasarkan kepolaran

a. Pelarut Polar
 25

Pelarut polar yaitu pelarut dengan tingkat kepolaran yang tinggi, cocok

untuk semua jenis zat aktif (universal) karena samping menarik senyawa

yang bersifat polar, pelarut polar juga tetep dapat menarik senyawa-

senyawa dengan tingkat kepolaran yang lebih rendah. Contoh pelarut

polar: Air, etanol, metanol dan asam asetat.

b. Pelarut Semipolar

Pelarut semipolar adalah pelarut yang memiliki molekul yang tidak

mangandung ikatan O-H. Pelarut semipolar memiliki tingkat kepolaran

yang lebih rendah dibandingkan dengan pelarut polar. Pelarut ini baik

digunakan untuk melarutkan senyawa-senyawa yang juga bersifat

semipolar dari tumbuhan. Contoh pelarut semiporal adalah : Aseton, etil

asetat, DMSO dan klorometan.

c. Pelarut Nonpolar

Pelarut nonpolar merupakan senyawa yang memiliki konstanta dielektrik

yang rendah dan tidak larut dalam air. Pelarut ini baik digunakan untuk

menarik senyawa yang sama sekali tidak larut dalam pelarut polar seperti

minyak. Contoh pelarut nonpolar : Heksana, klorofom dan eter(30).

 BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian

Jenis penelitian yang dilakukan secara eksperimental yaitu untuk mengetahui

suatu gejala atau pengaruh yang timbul akibat dari adanya perlakuan tertentu.

3.2 Tempat dan Waktu Penelitian

3.2.1 Tempat Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Farmasi

Universitas Sumatera Utara.

3.2.2 Waktu

Penelitian Ini dilakukan selama ± 3 bulan di tahun 2020.

3.3 Sampel Penelitian

Pengambilan sampel dilakukan secara purposive sampling yaitu tanpa

membandingkan dengan tumbuhan lain. Sampel yang digunakan pada penelitian ini

adalah daun pagoda yang diperoleh dari kecamatan Pancur Batu, kabupaten Deli Serdang,

Provinsi Sumatera Utara, Indonesia.

3.4 Instrumen Penelitian

3.4.1 Alat

Alat yang digunakan pada penellitian ini adalah timbangan analitik, lumpang,

batang pengaduk, cawan porselin, gelas ukur, blender, pipet tetes, tabung reaksi,rotary

evaporator, corong, mikro pipet, bunsen, kawat ose, korek api, spatula, cawan petri,

jangka sorong, Autoklaf, oven, label, tisu, kasa steril, kain flanel, pinset, kapas,

perkamen, alluminiumfoil, inkubator, kertas cakram, laminar air flow, labu ukur,

erlenmeyer dan kertas saring.

3.4.2 Bahan
 Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah ekstrak etanol daun pagoda,

etanol 96%, dan MHA (Muller HintonAgar), NaCl 0,9%, H2SO4 0,36 N, BaCl22H2O

1,175%, antibiotik klindamisin, dan DMSO.Bahankimia yang

digunakankecualidinyatakan lain adalahberkualitas proanalisayaitu: N-heksan, etilasetat,

kaliumiodida, merkuri (II) klorida, bismuth nitrat, HNO 3, KI, iodium, α-naftol,

asamasetatanhidrat, asamsulfatpekat, kloroform, besi (III) klorida, timbal (III) asetat,

Kristal natriumhidroksida, asamkloridapekat, aluminium (III)

kloridadanmethanolkecualiaquadestdanetanol 96%.

3.4.3 Bakteri yang digunakan

Pada Penelitian ini bakteri penyebab infeksi kulit dan menyebabkan jerawat yang

digunakan adalah Staphylococcusaureus ATCC 25923, Staphylococcusepidermidis

ATCC 12228, dan Propionibacteriumacne ATCC 11827 yang diperoleh dari koleksi

Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

3.5 Prosedur Penelitian

3.5.1 Pengambilan Sampel

Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah daun dari bunga pagoda yang

berasal dari kecamatan Pancur Batu, Kabupaten Deli Serdang, provinsi Sumatera Utara,

Indonesia.

3.5.2 Proses Ekstraksi dan Fraksinasi

Proses ekstraksi bahan yang digunakan dalam penelitian ini menggunakan metode

maserasi dengan pelarut etanol 96% dengan perbandingan (1: 10). Serbuk simplisia

dimaserasi selama 5 hari, yang mana sebanyak 500 g simplisia dimasukkan ke dalam

toples kaca kemudian direndam menggunakan sebanyak 3.750 ml pelarut etanol 96%
ditutup dengan aluminium foil selama 3 hari (sesekali diaduk) lalu disaring menggunakan

kertas saring dan diperoleh filtrat 1 dan ampas. Ampas direndam ulang dengan

menggunakan sebanyak 1.250 ml pelarut etanol 96% selama 2 hari (sesekali diaduk)

kemudian disaring menggunakan kertas saring dan diperoleh filtrat 2 dan ampas.

Selanjutnya satukan filtrat 1 dan 2 pekatkan di rotaryevaporatorsampai diperoleh ekstrak

kental.

Proses fraksinasi kasar yang dilakukan mengacu pada metode Can-Ake etal.

(2004) yaitu proses partisi menggunakan pelarut etanol, heksandan etil asetat. Sebanyak 5

g ekstrak kasar dilarutkan dalam 50 ml pelarut etanol. Larutan selanjutnya dipartisi

dengan menambahkan 150 ml pelarut n-heksan, diaduk/dikocok dalam labu pemisah,

didiamkan selama 30-60 menit dan dipisahkan lapisan yang terbentuk (lapisan etanol

bagian bawah, lapisan n-heksan lapisan atas). Proses penambahan n-heksan dilakukan

beberapa kali sampai lapisan pada n-heksan menjadi bening (menandakan bahwa sudah

tidak ada senyawa yang bisa tertarik) dan lapisan heksan yang diperoleh digabungkan

menjadi satu sebagai fraksi heksan. Lapisan etanol sisa dari proses partisi n-heksan

dipartisi lanjut dengan etil asetat. Sebanyak 150 ml pelarut etil asetat ditambahkan dalam

lapisan metanol air, dikocok dalam labu pemisah, didiamkan selama 30-60 menit dan

dipisahkan lapisan yang terbentuk (lapisan etanol bagian bawah, lapisan etil asetat

lapisan atas). Proses penambahan etil asetat pada lapisan etanol dilakukan sama seperti

fraksi n-heksan yaitu sampai lapisan etil asetat menjadi bening, dan lapisan etil asetat

yang diperoleh digabungkan menjadi satu sebagai fraksi etil asetat. Fraksi yang diperoleh

dipisahkan pelarutnya menggunakan rotary evaporator pada suhu 50°C hingga diperoleh

ekstrak kental dan dikeringkan dengan pengeringan beku selama 24 jam hingga diperoleh

fraksi ekstrak.

3.5.3 Pembuatan Larutan Pereaksi

1. Larutan Pereaksi Mayer

 Pereaksi mayer dapat dibuat dengan cara menambahkan 5 g kalium didalam 10 ml

aquadest, kemudian ditambahkan larutan 1,36 g merkuri (II) kloridadalam 60 ml

air suling.

2. Larutan Pereaksi Dragendorf

Sebanyak 8 g bismuthnitrat dilarutkan dalam 20 ml HNO3, kemudian dicampur

dengan larutan kaliumiodide sebanyak 27,2 g dalam 50 ml air suling. Campuran

dibiarkan sampai memisah secara sempurna. Ambil larutan jernih dan diencerkan

dengan air secukupnya hingga 100 ml.

3. Larutan Pereaksi Bouchardat

KI dilarutkan dengan 20 ml aquadest kemudian ditambah 2 g iodium sambil

diaduk sampai larut. Cukupkan dengan aquades thingga 100 ml.

4. Larutan Pereaksi Molish

Sebanyak3 g α-naftol dilarutkan dalam HNO3 0,5 N secukupnya hingga diperoleh

larutan 100 ml.

5. Larutan Pereaksi Liebarmann-Bourchard

Larutan pereaksi Liebarmann-Bourchard disiapkan dengan cara mencampurkan

20 bagian asam asetatanhidrat dengan 1 bagian asamsulfat pekat dan 50 bagian

kloroform. Larutan pereaksi ini harus dibuat baru.

6. Larutan Pereaksi Besi (III) Klorida 1%

Sebanyak 1 g besi (III) klorida dilarutkan dalam air suling hingga 100 ml

kemudian disaring.

7. Larutan Pereaksi Timbal (II) Asetat

Sebanyak 15,17 g timbal (II) asetat ditimbang, kemudian dilarutkan dalam air

hingga 100 ml.

8. Larutan Pereaksi Natrium Hidroksida 2 N

Sebanyak 8 g Kristal natrium hidroksida dilarutkan dengan aquadest sampai 100

ml.
 9. Larutan Pereaksi HCL 2 N

Sebanyak 17 ml asam klorida pekat diencerkan dengan aquadest hingga 100 ml.

10. Larutan Pereaksi Aluminium (III) Klorida 5%

Sebanyak 5 g aluminium (III) klorida ditimbang, kemudian dilarutkan dalam

methanol hingga 100 ml. Larutan kemudian dikocok dan ditambahkan aquadest

sampai 100 ml.

3.5.4 Skrining Fitokimia Fraksi

Skrining fitokimia fraksi daun pagoda meliputi pemeriksaan senyawa alkaloid,

glikosida, saponin, flavonoid, tannin dan steroid/triterpenoid

1. Pemeriksaan alkaloida.

Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian ditambahkan 1 ml asam

klorida 2 N dan 9 ml air suling,dipanaskan diatas tangas air selama 2

menit,didinginginkan lalu disaring. Fitrat dipakai untuk percobaan berikut:

a. Diambil 3 tetesfitrat, lalu ditambahkan 2 tetes pereaksi mayer menghasilkan

endapan putih / kuning.

b. Diambil 3 tetes fitrat, lalu ditambahkan 2 tetes pereaksi Bouchar dan

menghasilkan endapan merah bata.

c. Diambil 3 tetes filtrat, lalu ditambahkan 2 tetes pereaksi dragendrof

menghasilkan endapan merah bata.

Apabila terdapat endapan putih paling sedikit dengan 2 atau 3 dari pengujian

diatas ,maka simplisia dinyatakan positif mengandung alkaloida.

2. Pemeriksaan Flavonoida

Sebanyak 10 9 fraksi ditambahkan dengan 100 ml air panas. Campuran kemudian

dididihkan selama lebih kurang 5 menit,kemudian disaring ketika panas.

Sebanyak 5 ml filtrate yang ditambahkan 0,1 g serbuk Mg, 1 ml HCl pekatdan 2

ml amilalkohol,dikocok, dan dibiarkan memisahkan. Flavonoida positif jika

terjadi warna merah, kuning, jingga pada pemisahan amilalkohol.

3. Pemeriksaan Tanin

Sebanyak 0,5 g sampel diekstrak menggunakan 10 ml aquadest. Hasil ekstraksi

disaring kemudian filtrat yang diperoleh diencerkan dengan aquades tsampai tidak

berwarna. Hasil pengenceran ini diambil sebanyak 2 ml, kemudian ditambahkan

dengan 1-2 tetes besi (III) klorida. Terjadi warna biru atau kehitaman menunjukan

adanya tanin.

4. Pemeriksaan Glikosida

Fraksi ditimbang sebanyak 3 g kemudian disari dengan 30 bagian volume air

suling (7:3) direfluks selama10 menit, didinginkan dan disaring. Pada 20 ml

filtrate ditambahkan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 N, dikocok, didiamkan selama 5

menit lalu disaring. Fitrat disaring sebanyak 3 kali tiap kali dengan 20 ml

campuran 3 bagian volume kloropom P dan 2 bagian volume isopropanolol P.

Padalapisankloroform ditambahkan natrium sulfatanhidrat P secukupnya

disaring ,50oC. Dilarutkan sisanya dengan 2 ml metanol, kemudian diambil 0,1 ml

larutan percobaan dimasukkan kedalam tabung reaksi , diuapkan di atas penangas

air. Pada sisa ditambahkan 2 ml larutan percobaan dimasukkan ke dalam tabung

reaksi, diuapkan diatas penangas air. Pada sisa ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes

pereaksi molish, ditambahkan hati-hati 2 ml asam sulfat terbentuk cincin warna

unggu pada batas kedua cairan menunjukkan adanya ikatan gula.

5. Pemeriksaan Saponin

Sebanyak 0,5 g sampel dimasukkan kedalam tabung reaksi dan ditambahkan 10

ml air suling panas , didinginkan kemudian dikocok kuat-kuat selama panas

didinginkan kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 detik ,terbentuk buih atau

busa yang selama tidak kurangdari 10 menit setinggi 1-10 cm. Pada

penambahkan 1 tetes larutan asam klorida 2 N, apabila buih tidak hilang

menunjukan adanya saponin.

6. Pemeriksaan Streroida/ Tripernoida

 Sebanyak 1 g sampel dimaserasi dengan 20 ml etil asetat selama 2 jam, lalu

disaring. Filtat diuapkan dalam cawan penguap. Pada sisa ditambahkan 2 tetes

asam asetatanhidrat 1 tetes asam pekat. Timbul warna ungu atau kemudian

berubah menjadi hijau biru menunjukkan adanya steroid triterpenoida.

3.5.5 Sterilisasi Alat

Alat-alat non gelas disterilkan dengan menggunakan autoklaf selama 15 menit

pada suhu 121°C. Sedangkan alat-alat gelas disterilisasi dengan oven suhu 160-170°C

selama 2 jam. Kawat ose disterilkan dengan cara flambir di nyala bunsen.

3.5.6 Pembuatan media MHA

Pembuatan media MHA (Muller HintonAgar) ditimbang sebanyak 9,5 g

(38g/1000 ml) dan masukkan ke dalam erlenmayer. Larutkan dengan aquadest sebanyak

250 ml dan dipanaskan diatas penangas air, ditutup dengan kapas. Kemudian disterilkan

ke dalam autoclave selama 15 menit pada suhu 121°C. Kemudian dinginkan sampai suhu

± 40-45°C, media siap digunakan untuk pengujian pertumbuhan dan pembiakan bakteri.

3.5.7 Pembuatan Standar Kekeruhan Larutan (Larutan Mc. Farland)

Larutan H2SO4 0,36 N sebanyak 99,5 ml dicampurkan dengan larutan BaCl2.2H2O

1,175% sebanyak 0,5 ml dalam erlenmeyer. Kemudian dikocok sampai terbentuk larutan

yang keruh.Kekeruhan ini dipakai sebagai standar kekeruhan suspensi bakteri uji.

3.5.8 Pembuatan Suspensi Bakteri

3.5.8.1 Suspensi Bakteri Propionibacteriumacnes

Untuk membuat suspensi bakteri Propionibacteriumacnesyaitu dengan cara

biakan Propionibacteriumacnes diambil dengan kawat ose steril, kemudian disuspensikan

kedalam tabung reaksi yang berisi 10 ml NaCl 0,9% hingga diperoleh kekeruhan sama

dengan standar kekeruhan larutan Mc. Farland.

3.5.8.2 Suspensi Bakteri Staphylococcusaureus

Untuk membuat suspensi bakteri Staphylococcusaureusyaitu dengan cara biakan

Staphylococcusaureus diambil dengan kawat ose steril, kemudian disuspensikan kedalam

tabung reaksi yang berisi 10 ml NaCl 0,9% hingga diperoleh kekeruhan sama dengan

standar kekeruhan larutan Mc. Farland.

3.5.8.3 Suspensi Bakteri Staphylococcusepidermidis

Untuk membuat suspensi bakteri Staphylococcusepidermidisyaitu dengan cara

biakan Staphylococcusepidermidis diambil dengan kawat ose steril, kemudian

disuspensikan kedalam tabung reaksi yang berisi 10 ml NaCl 0,9% hingga diperoleh

kekeruhan sama dengan standar kekeruhan larutan Mc. Farland.

3.5.9 Pengenceran Fraksi Etil Asetat Daun Pagoda

Larutanindukfraksietil asetatdibuatdengancaramelarutkan 1 gram

ekstrakkentaldengan DMSO sebanyak 250 ml hinggalarutkemudianditambahkandengan

DMSO dalamlabutakar 1 liter hinggatandabatassehinggadiperolehlarutanfraksietil asetat

1000 ppm sebanyak 1000 ml. Untuklarutanstandar 100 ppm dilarutkan 5 ml

larutanfraksietil asetat 1000 ml diencerkandengan DMSO menggunakanlabutakar 50 ml

(larutan 100 ppm tersebutdigunakansebagailarutanindukuntukmembuatlarutanstandar

konsentrasi 5 ppm, 10 ppm dan 20 ppm). Untukkonsentrasi 5 ppm dilarutkan 0,25 ml

darilarutaninduk 100 ppm dandiencerkanpadalabutakar 5 ml menggunakan DMSO

sampaitandabatas. Untukkonsentrasi 10 ppm dilarutkan 0,5 ml darilarutaninduk 100 ppm

dandiencerkanpadalabutakar 5 ml menggunakan DMSO sampaitandabatas,

danuntukkonsentrasi20 ppm dilarutkan 1 ml larutaninduk 100 ppm

dandiencerkanpadalabutakar 5 ml menggunakan DMSO sampaitandabatas.

Klindamisinsebagai control positifdan DMSO sebagaicontrolnegatif.

3.5.10 Uji Daya Hambat Fraksi Etil Asetat Daun Pagoda

Uji daya hambat menggunakan metode difusi agar yaitu kertas cakram. Disiapkan

cawan petriyang telah disterilkan dengan autoclave. Masukkan 0,1 ml masing-masing

suspensi bakteri uji. Tuangkan 20 ml media MHA dihomogenkan dan diamkan hingga

agar mengeras. Kemudian diambil 5 buah kertas cakram menggunakan pinset yang

sebelumnya dipanaskan diatas api bunsen. Dipipet sebanyak 250 µL masing-masing

kertas cakram ekstrak yang telah ditentukan konsentrasi yaitu 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm,

DMSO sebagai kontrol negatif dan klindamisin sebagai kontrol positif selama 15 menit.

Setelah itu diletakkan diatas permukaan media agar secara hati-hati menggunakan pinset

dan ditandai setiap letak konsentrasi masing-masing. Lalu media diinkubasi dalam

inkubator dengan suhu 37 °C selama 24 jam. Setelah itu diukur zona hambat yang

terbentuk disekitar cakram menggunakan jangka sorong. Ditandai dengan zona bening

disekitar cakram.

3.6. Pengolahan Data

Data yang diperoleh disajikan dalam bentuk tabel yang merupakan hasil dari

pengukuran zona hambat. Selanjutnya data yang diperileh dari hasil penelitian diolah

dengan statistik yaitu uji Analysisof varian (ANOVA).

 BAB III

METODE PENELITIAN

4.1. Hasil Penelitian

Pada bulan April- Agustus 2019, telah dilakukan penelitian tentang uji aktivitas

antibakteri fraksi etil asetat daun pagoda terhadap bakteri Propionibacterium acnes,

Staphylococcus aureus dan Staphylococcus epidermidis yang bertempat di Laboratorium

Mikrobiologi Universitas Sumatra Utara.

Pada penelitian ini digunakan pelarut etanol 70% dan untuk ekstraksi

menggunakan metode maserasi. Berat simplisia yang basah sebanyak 3 kg dan serbuk

yang ditimbang untuk maserasi yaitu 500 g, rendemen simplisia diperoleh sekitar

16,67% menghasilkan ekstrak kental 153,7 g sehingga diperoleh rendemen ekstrak

kental yaitu 30,74%.

4.2. Hasil Uji Antibakteri

Hasil pengujian pada sampel ekstrak etanol daun pagoda pada bakteri

Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus dan Staphylococcus epidermidis,

menghasilkan rata-rata zona hambat yang berbeda – beda seperti pada tabel 4.1 sebagai

berikut:

Diameter Zona Hambat (mm) Kategori

Kelompok Propionibacterium Staphylococcus Staphylococcus Zona
acnes aureus epidermidis Hambat
Kontrol (-) 0 0 0 0
Kontrol (+)
Ekstrak 1%
Ekstrak 3%
Ekstrak 5%
Ekstrak 10%
Ekstrak 15%
Ekstrak 20%
Tabel 4.1 Hasil Pengujian Ekstrak Etanol Daun Pagoda Terhadap Bakteri
Diameter Zona Hambat (mm) Kategori

Zona
Kelompok Propionibacterium Staphylococcus Staphylococcus
Hambat
acnes aureus epidermidis

Kontrol (-) 0 0 0

* * * Sangat
Kontrol (+) 34,10 ± 0,00 32,00 ± 0,00 28,80 ± 0,00
Kuat
* * *
Ekstrak 5% 12,07 ± 1,32 14,30 ± 2,83 13,23 ± 1,59 Kuat
Ekstrak *
12,33 ± 0,49 12,43 ± 0,49
*
13,03 ± 0,37
*
Kuat
10%

Ekstrak *
10,73 ± 0,63 * * Kuat
20% 11,30 ± 0,69 11,50 ± 1,09

Keterangan: * (Berbeda secara signifikan terhadap kontrol negatif p ≤ 0,05)

29
Zona Hambat

Kon
sent
rasi

Gambar 4.1. Hasil Uji Antibakteri Ekstak Etanol Daun Pagoda

Berdasarkan hasil pengujian pada tabel 4.1 menunjukkan bahwa

ekstrak etanol daun pagoda memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri

penyebab jerawat yaitu Propionibacterium acnes, Staphylococcus

aureus dan Staphylococcus epidermidis ditandai dengan hasil uji statistik

yang menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan terhadap kelompok

kontrol negatif. Hasil pengukuran zona hambat dapat dilihat pada

Lampiran 10.
 DAFTAR PUSTAKA

1. Ngajow M, Abidjulu J, Kamu VS. Pengaruh antibakteri ekstrak kulit

batang matoa (Pometia pinnata) terhadap bakteri Staphylococcus aureus
secara in vitro. J MIPA. 2013;2(2):128–32.
2. Hijrah H, Nugrahani AW, Ramadanil R. STUDI ETNOBOTANI
TUMBUHAN BERKHASIAT OBAT PADA SUKU TAU TAA WANA
DI DESA BULAN JAYA KECAMATAN AMPANA TETE,
KABUPATEN TOJO UNA UNA, PROVINSI SULAWESI TENGAH.
Biocelebes. 13(1).
3. La Usaha Y, Pangemanan EFS, Lasut MT. PEMANFAATAN
TUMBUHAN OBAT OLEH SUKU MANGE DI KECAMATAN
TALIABU UTARA KABUPATEN PULAU TALIABU PROVINSI
MALUKU UTARA. In: COCOS. 2017.
4. Geetha R V, Roy A. Essential oil repellents—a short review. Int J Drug
Dev Res. 2014;6(2):20–7.
5. Sikawin BMB. FORMULASI SEDIAAN GEL ANTIBAKTERI
EKSTRAK ETANOL TANAMAN SEREH (Cymbopogon citratus (DC.)
Stapf) DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI (Staphylococcus aureus)
SECARA in vitro. PHARMACON. 2018;7(3).
6. Marselia S, Wibowo MA, Arreneuz S. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun
Soma ( Ploiarium alternifolium Melch ) Terhadap Propionibacterium acnes.
J Kim Khatulistiwa. 2015;4(4):72–82.
7. Hafiz I, Rosidah, Silalahi J. Antioxidant and anti-inflammatory activity of
pagoda leaves (Clerodendrum paniculatum L.) ethanolic extract in white
male rats (Rattus novergicus). Int J PharmTech Res. 2016;9(5):165–70.
8. MUSA WJA SM. ISOLASI SENYAWA ANTIFEEDANT DARI
TUMBUHAN CLERODENDRUM PANICULATUM. Vol. 2. Yogyakarta:
Zahir Publishing; 2017. 24-28 p.
9. Pelen SH. Formulasi Sediaan Gel Antijerawat Minyak Atsiri Kulit Batang
Kayu Manis (Cinnamomum burmanii) dan Uji Aktivitas Terhadap Bakteri
Staphylococcus aureus. PHARMACON. 2016;5(4).
10. Kalonio DE, Hendriani R, Barung EN. Anticancer Activity Of Plant Genus
Clerodendrum (Lamiaceae): A Review. Maj Obat Tradis. 22(3):182–9.
11. Hafiz I. Uji Aktivitas Antioksidan Dan Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun
Pagoda (Clerodendrum Paniculatum L.) terhadap Tikus Putih Jantan
(Rattus Novergicus). 2016;
12. Hariana HR. 262 Tumbuhan Obat dan Khasiatnya. Nugroho S, editor.
Jakarta: Penebar Swadaya; 2013.
13. ArgoMedia R. Buku Pintar Tanaman Obat. Jakarta: PT Agromedia
Pustaka; 2008. 43 p.
14. Florence AR, Joselin J, Jeeva S. Intra-specific variation of bioactive
principles in select members of the genus Clerodendrum L. J Chem Pharm
Res. 2012;4(11):4908–14.
15. Yani L, Roza RM, Martina A. Isolasi dan seleksi bakteri asam laktat dari
yoghurt produksi industri rumah tangga di Pekanbaru yang bersifat
 antibakteri terhadap Escherichia coli dan Salmonella typhi. J Online Mhs
Fak Mat dan Ilmu Pengetah Alam Univ Riau. 2011;1(1).
16. PERUMNAS PT. Ririn Christine Nainggolan, Nurmaini 2, Indra Chahaya
2 Mahasiswa Departemen Kesehatan Lingkungan FKM USU 2 Dosen
Departemen Kesehatan Lingkungan FKM USU Universitas Sumatera
Utara, Medan, 20155, Indonesia.
17. Hidayah ND. Uji Aktivitas Ekstrak Metanol Klika Anak Dara (Croton
oblangus burn F.) terhadap Bakteri Penyebab Jerawat. Universitas Islam
Negeri Alaudin; 2016.
18. Hafsari AR, Cahyanto T, Lestari RI. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak
Daun Beluntas (Pluchea indica (L.) LESS.) terhadap Propionibacterium
acnes Penyebab Jerawat. ISSN. 2015;IX(1):141–61.
19. Soedarto. Mikrobiologi Kedokteran. Surabaya: Sagung Seto; 2014.
20. Yuliati M. Uji Aktivitas Antibakteri Antimikroba Ekstrak Daun Salam
(Syzygium polyanthum (Wight) Walp.) terhadap Beberapa Mikroba
Patogen Secara Klt-Bioautografi. Universitas Islam Negeri Alaudin; 2012.
21. Apriyani YM, Priani SE, Gadri A. Aktivitas Antibakteri Minyak Batang
Kayu Manis (Cinnamomum burmanni Ness Ex BI.) terhadap Bakteri
Propionibacterium acnes. Pros Penelit Spes Unisba. 2015;348–53.
22. Pelczar MJ, Chan ECS. Dasar Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Universitas
Indonesia (UI-Press); 2008.
23. Pratiwi ST. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta: Erlangga; 2008.
24. Syamsuni A. Ilmu Resep. Jakarta: Buku Kedokteran EGC; 2007.
25. Mahmudah F, Sumiwi SA, Hartini S. Studi Penggunaan Antibiotik
Berdasarkan ATC / DDD dan DU 90 % di Study of the Use of Antibiotics
with ATC / DDD System and DU 90 % in Digestive Surgery in Hospital in
Bandung. Farm Klin Indones. 2016;5(4):293–8.
26. Amin LZ. Pemilihan Antibiotik yang Rasional. Medicinus. 2014;27(3):405.
27. Ramadhan A. Uji Aktivitas Antibakteri Senyawa-senyawa Hasil Modifikasi
Struktur Etil P-Metoksisinamat melalui Reaksi Esterifikasi terhadap
Bakteri Gram Negatif dan Gram Positif. UIN Syarif Hidayatullah; 2015.
28. Ditjen POM. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta:
Departemen Kesehatan Republik Indonesia; 2000.
29. Hanani E. Analisis Fitokimia. Jakarta: PGC; 2014. 11-13 p.
30. Marjoni MR. Dasar-Dasar Fitokimia Untuk Diploma III Farmasi. Jakarta:
Trans Info Media; 2016. 23-24 p.