13 Juli 2021 (FULL)

SKRIPSI
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI KOMBINASI EKSTRAK DARI

EKSTRAK ETANOL DAUN JAMBU BIJI (Psidium guajava L.)
DAN DAUN KERSEN (Muntingia calabura L.) TERHADAP
BAKTERI Escherichia coli
OLEH :
ERLITA MIRANTI
NIM : 201708011
PROGRAM STUDI S1 FARMASI

STIKES BHAKTI HUSADA MULIA MADIUN
2021
SKRIPSI

Diajukan untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam mencapai

gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)
OLEH :
ERLITA MIRANTI
NIM : 201708011
PROGRAM STUDI S1 FARMASI

STIKES BHAKTI HUSADA MULIA MADIUN
2021
PERSETUJUAN
i
Proposal skripsi ini telah disetujui oleh pembimbing dan telah dinyatakan layak
mengikuti Ujian Sidang
PROPOSAL SKRIPSI

Menyetujui, Menyetujui,
Pembimbing I Pembimbing II
apt. Susanti Erikania, M.Farm apt. Vevi Maritha, M.Farm

NIS. 20150116 NIS. 20150128
Mengetahui,
Ketua Program Studi S1 Farmasi
STIKES Bhakti Husada Mulia Madiun
apt. Vevi Maritha, M.Farm

NIS. 20150128
PENGESAHAN
ii
Telah di pertahankan di depan Dewan Penguji Proposal Skripsi dan dinyatakan
telah Menyelesaikan ujian Proposal Skripsi
Pada tanggal 25 Januari 2021
Dewan Penguji
1. Apt. Yetti Hariningsih, M. Farm :

Ketua Dewan Penguji ..........................................
2. Apt. Susanti Erikania, M. Farm :

Ketua Penguji 1 ..........................................
3. Apt. Vevi Maritha, M. Farm :

Ketua Penguji 2 ..........................................
Mengesahkan,
STIKES Bhakti Husada Mulia Madiun
Ketua,
Zaenal Abidin, S.KM., M.Kes (Epid)

NIDN. 0217097601
DAFTAR ISI
iii
Halaman Judul..................................................................................................... i
Lembar Persetujuan............................................................................................. ii
Lembar Pengesahan............................................................................................ iii
Daftar Isi.............................................................................................................. iv
Daftar Tabel........................................................................................................ v
Daftar Gambar..................................................................................................... vi
Kata Pengantar ................................................................................................... vii
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang.......................................................................... 1
1.2 Rumusan Masalah..................................................................... 4
1.3 Tujuan Penelitian...................................................................... 5
1.4 Manfaat Penelitian.................................................................... 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tinjauan Tanaman Jambu Biji (Psidium guajava L.)............... 7
2.2 Tinjauan Tanaman Kersen (Muntingia calabura L.)................ 9
2.3 Ekstraksi.................................................................................... 12
2.4 Standardisasi Ekstrak................................................................ 13
2.5 Escherichia coli......................................................................... 16
2.6 Antibiotik.................................................................................. 18
2.7 Antibakteri................................................................................. 24
2.8 Metode Uji Aktivitas Antibakteri.............................................. 25
BAB III KERANGKA KONSEPTUAL DAN HIPOTESA PENELITIAN

3.1 Kerangka Konseptual................................................................ 27
3.2 Hipotesa Penelitian.................................................................... 28
BAB IV METODE PENELITIAN

4.1 Desain Penelitian....................................................................... 29
4.2 Populasi dan Sampel................................................................. 29
4.3 Teknik Sampling....................................................................... 30
4.4 Kerangka Kerja Penelitian........................................................ 30
4.5 Variabel Penelitian dan Devinisi Operasional.......................... 31
4.6 Instrumen Penelitian.................................................................. 32
4.7 Prosedur Kerja........................................................................... 33
4.8 Uji Aktivitas Antibakteri........................................................... 48
4.9 Lokasi dan Waktu Penelitian.................................................... 48
4.10 Prosedur Pengumpulan Data..................................................... 49
DAFTAR PUSTAKA......................................................................................... 51
DAFTAR TABEL
iv
Nomor Judul Tabel Halaman
Tabel 2.1 Kategori Diameter Zona Hambat Antibakteri...........................
26
Tabel 4.1 Definisi Operasional Penelitian.................................................
32
Tabel 4.2 Perbandingan konsentrasi dan berat ekstrak etanol Daun
Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun Kersen
(Muntingia calabura L.)............................................................
45
v
DAFTAR GAMBAR
Nomor Judul Gambar Halaman

Gambar 2.1 Jambu Biji (Psidium guajava L.).........................................
8
Gambar 2.2 Daun Kersen (Muntingia calabura L.).................................
10
Gambar 2.3 Bakteri Escherichia coli.......................................................
17
Gambar 3.1 Kerangka Konseptual...........................................................
27
Gambar 4.1 Kerangka Kerja Penelitian....................................................
30
vi
KATA PENGANTAR
Puji syukur atas kehadirat allah SWT karena telah melimpahkan kasih
sayang, hidayah dan rahmat-NYA sehingga penyusunan laporan proposal skripsi
dengan judul “Uji Aktivitas Antibakteri Kombinasi Ekstrak Terstandar dari
Ekstrak Etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun Kersen
(Muntingia calabura L.) Terhadap Bakteri Escherichia coli” dapat terselesaikan.
Laporan proposal skripsi ini disusun untuk melengkapi salah satu
persyaratan dalam memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) di perguruan
tinggi Stikes Bhakti Husada Mulia Madiun.
Dalam penulisan laporan proposal skripsi ini, penulis sepenuhnya menyadari
bahwa masih banyak terdapat kekurangan. Oleh karena itu, penulis menerima
kritik dan saran demi sempurnanya penelitian ini. Penulis berharap, semoga
laporan proposal skripsi ini dapat memberikan manfaat untuk kita semua.
Madiun, 8 Januari 2021
ERLITA MIRANTI
NIM : 201708011
vii
viii
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Salah satu penyebab utama morbiditas (kesakitan) dan mortalitas
(kematian) pada anak terutama di negara berkembang adalah penyakit diare. Diare
merupakan masalah kesehatan pada masyarakat terutama anak dibawah usia 5
tahun. Penyakit diare adalah pembunuh utama selain ISPA, Campak dan infeksi
lainnya (Anbhuselvam dkk, 2019). Data yang diperoleh dari World Health
Organization (WHO) menyatakan bahwa sekitar 1.7 miliar kasus diare terjadi
pada anak dan angka kematian mencapai sekitar 252.000 tiap tahunnya (WHO,
2017). Secara nasional, jumlah penderita diare di Indonesia mencapai 1.017.290.
Jumlah penderita diare di Jawa Timur cukup tinggi yaitu mencapai 151.878
(RISKESDAS, 2018). Upaya-upaya yang telah dilakukan untuk mengatasi diare
bertujuan untuk mengurangi kesakitan dan angka kematian (Anbhuselvam dkk,
2019).
Penyakit diare ditandai dengan perubahan bentuk dan konsentrasi tinja
yang lembek sampai mencair dan bertambahnya frekuensi buang air yang lebih
dari biasanya, yaitu dalam sehari bisa mencapai 3 kali atau lebih (WHO, 2016).
Banyak faktor yang dapat menyebabkan penyakit diare, diantaranya adalah faktor
lingkungan (perumahan yang padat, tempat pembuangan kotoran manusia
disembarang tempat, persediaan air bersih yang tidak memadai, membuang
sampah disembarang tempat), kurangnya pengetahuan, perilaku (kebiasaan
mencuci tangan) dan penyajian makanan yang mentah (Utami dan Luthfiana,
1
2
2016). Diantara faktor-faktor tersebut, penyebab diare terbanyak adalah bakteri
Escherichia coli (Halim dkk, 2017).
Escherichia coli merupakan bakteri yang dapat hidup di saluran
pencernaan pada hewan dan manusia. Umumnya Escherichia coli tidak berbahaya
dan merupakan bagian penting dalam saluran usus manusia yang sehat.
Escherichia coli dapat bersifat patogen apabila perkembangannya didalam tubuh
terlalu banyak (Febriana dkk, 2017). Cara yang dapat digunakan untuk mengobati
diare yaitu penggunaan cairan elektrolit, agen antidiare dan antibiotik. Pada
penderita diare yang telah diberikan agen antidiare namun tidak kunjung membaik
maka akan digunakan antibiotik. Namun, penggunaan agen antidiare memiliki
efek samping diantaranya mual, muntah, konstipasi dan perut kembung (Jawi,
2014). Antibiotik yang digunakan secara tidak rasional seperti cara dan lama
pemberian yang keliru dapat menyebabkan bakteri menjadi resisten. Oleh karena
itu, diperlukan alternatif lain yang dapat digunakan untuk mengobati diare dengan
efek samping yang lebih rendah dan mengatasi resistensi antibiotik, salah satunya
yaitu dengan pemanfaatan zat aktif antibakteri dari tanaman herbal (Lestari dkk,
2016).
Pada saat ini sudah banyak dikembangkan pengobatan alternatif dari bahan
alam sebagai obat semi sintetik yang bisa didapatkan dengan mudah dilingkungan
sekitar. Salah satu tumbuhan yang dapat digunakan sebagai obat alternatif untuk
mengatasi diare adalah daun jambu biji (Psidium guajava L.) dan daun kersen
(Muntigia calabura L.). Penelitian yang dilakukan oleh Agustina (2018)
melaporkan bahwa daun jambu biji (Psidium guajava L.) mengandung flavonoid,
3
saponin, tanin, terpenoid dan alkaloid. Sedangkan daun kersen (Muntingia
calabura L.) dilaporkan mengandung alkaloid, flavonoid, saponin, tanin dan
steroid (Ratnasari, 2017). Mekanisme kerja flavonoid sebagai antibakteri yaitu
dengan menyebabkan kerusakan permeabilitas pada dinding sel bakteri, lisosom
dan mikrosom. Mekanisme kerja saponin dapat menyebabkan kerusakan pada
membran sel bakteri akibatnya berbagai komponen penting dari dalam sel bakteri
seperti protein, nukleotid dan asam nukleat keluar (Febriana dkk, 2017).
Mekanisme kerja Steroid sebagai antibakteri berhubungan dengan membran lipid
dan sensitivitas terhadap komponen steroid yang dapat menyebabkan liposom
mengalami kebocoran. Alkaloid memiliki mekanisme kerja sebagai antibakteri
diprediksi dengan melakukan penghambatan sintesis dinding sel yang akan
menyebabkan lisis pada sel akibatnya sel akan mati (Panjaitan, 2017). Terpenoid
memiliki mekanisme kerja sebagai antibakteri karena terpenoid dapat bereaksi
dengan porin (protein transmembrane) akibatnya porin menjadi rusak. Rusaknya
porin dapat menyebabkan sel bakteri kekurangan nutrisi sehingga pertumbuhan
bakteri terhambat atau mati (Hasanah 2018). Mekanisme kerja tanin sebagai
antibakteri adalah dengan menghambat enzim ekstraseluler bakteri atau bekerja
langsung pada metabolism dengan menghambat fosforilasi oksidasi (Handoko
dkk, 2019).
Penelitian sebelumnya telah membuktikan bahwa ekstrak daun jambu biji
(Psidium guajava L.) memiliki khasiat sebagai antibakteri terhadap bakteri
Escherihchia coli pada konentrasi 25%, 50%, 75% dan 100% yang secara
berturut-turut menghasilkan zona hambat sebesar 9.23 mm, 10.42 mm, 11.69 mm,
4
13.63 mm (Girsang dkk, 2019). Daun kersen (Muntigia calabura L.) memiliki
khasiat sebagai antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli pada berbagai
macam konsentrasi yaitu 12.5%, 25%, 50%, 75% yang secara berturut-turut
menghasilkan zona hambat sebesar 12.83 mm, 15.83 mm, 17.74 mm, 19.83mm
(Handoko dkk, 2019). Namun belum ada penelitian yang menunjukkan kombinasi
dari daun jambu biji (Psidium guajava L.) dan daun kersen (Muntigia calabura
L.) terhadap aktivitas antibakteri Escherichia coli.
Berdasarkan uraian diatas, peneliti ingin mengetahui apakah dengan
mengkombinasikan ekstrak etanol daun jambu biji (Psidium guajava L.) dan
daun kersen (Muntigia calabura L.) dapat menghambat pertumbuhan bakteri
Escherichia coli pada konsentrasi 25%:75%; 50%:50%; 75%:25%. Ekstrak etanol
daun jambu biji (Psidium guajava L.) dan daun kersen (Muntigia calabura L.)
diperoleh dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 96% selama 3x24
jam. Pada masing-masing ekstrak dilakukan standardisasi dengan menggunakan
parameter-parameter spesifik dan non spesifik. Selanjutnya dilakukan pengujian
antibakteri secara difusi cakram menggunakan kontrol positif ciprofloksasin dan
kontrol negatif DMSO 10% secara in vitro.
1.2 Rumusan Masalah
1.2.1 Bagaimana aktivitas antibakteri kombinasi dari ekstrak etanol daun
jambu biji (Psidium guajava L.) dan daun kersen (Muntigia
calabura L.) dalam menghambat pertumbuhan Escherichia coli.
1.2.2 Berapakah konsentrasi terbaik dari kombinasi ekstrak etanol daun
jambu biji (Psidium guajava L.) dan daun kersen (Muntigia

5
calabura L.) yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri
Escherichia coli.
1.3 Tujuan Penelitian
1.3.1 Untuk mengetahui aktivitas antibakteri kombinasi dari ekstrak
etanol daun jambu biji (Psidium guajava L.) dan daun kersen
(Muntigia calabura L.) dalam menghambat pertumbuhan
Escherichia coli.
1.3.2 Untuk mengetahui konsentrasi terbaik dari kombinasi ekstrak
(Muntigia calabura L.) yang dapat menghambat pertumbuhan
bakteri Escherichia coli.
1.4 Manfaat Penelitian
1.4.1 Bagi Peneliti
Sebagai sarana penelitian dalam menerapkan ilmu kefarmasian
yang telah didapatkan dibangku kuliah, serta penelitian ini
digunakan sebagai salah satu syarat kelulusan di program studi S1
Farmasi STIKES Bhakti Husada Mulia Madiun.
1.4.2 Bagi Pendidikan
Memberikan informasi berupa data ilmiah secara mikrobiologi
mengenai aktivitas antibakteri kombinasi ekstrak dari ekstrak
6
(Muntigia calabura L.) sehingga dapat dilakukan penelitian lebih
lanjut.
1.4.3 Bagi Masyarakat
Penelitian ini diharapkan dapat menambah ilmu pengetahuan yang
berhubungan dengan adanya daya antibakteri suatu tanaman
khususnya daun jambu biji (Psidium guajava L.) dan daun kersen
(Muntigia calabura L.) yang dapat digunakan sebagai antidiare.

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tinjauan Tanaman Jambu Biji (Psidium guajava L.)
2.1.1 Morfologi Tanaman
Jambu biji (Psidium guajav L.) masuk kedalam family Myrtaceae, berasal
dari Amerika tropis. Tumbuhan ini dapat tumbuh pada tanah yang liat ataupun
gembur, tempat terbuka dan mengandung cukup banyak air. Tanaman ini banyak
ditanam sebagai pohon buah – buahan, namun juga dapat tumbuh dengan liar dan
dapat ditemukan pada ketinggian 1.200 mdpl (Agustina, 2018).
Jambu biji (Psidium guajava L.) adalah tumbuhan yang persebarannya
luas sampai ke Asia Tenggara termasuk Indonesia. Tumbuhan jambu biji
mempunyai ketinggian sekitar 10 – 12 meter, memiliki cabang dan rating yang
banyak, batang pada tumbuhan ini berkayu, kulit batangnya licin, berwarna coklat
kehijauan dan mengelupas. Bunga tunggal dan bertangkai, berkumpul 1 – 3
bunga, keluar dari ketiak daun, dan memiliki warna putih. Bunganya kecil, terdiri
dari dua mahkota masing – masing terdapat 4 – 5 kelopak dengan jumlah mahkota
yang sama. Buah pada tumbuhan ini memiliki bentuk bulat sampai bulat telur,
buah yang masih mentah berwarna hijau sedangkan buah yang telah masak
berwarna hijau kekuningan sampai kuning. Daging buahnya tebal, buah yang
telah masak memiliki tekstur yang lunak, berwarna merah jambu. Memiliki biji
kecil, keras, warnanya kuning kecoklatan, mengumpul ditengah dan berjumlah
banyak (Supriosa, 2017).
7
8
Gambar 2.1 Jambu Biji (Psidium guajava L.)

Sumber : (Nunggut, 2020)
2.1.2 Klasifikasi Tanaman Jambu Biji (Psidium guajava L.)
Hapsoh dan Hasanah (2011) melaporkan bahwa klasifikasi jambu biji
(Psidium guajava L.) adalah sebagai berikut :
Kingdom : Plantae
Devisi : Spermatophyta
Kelas : Dicotyledoneae
Ordo : Myrtales
Family : Myrtaceae
Genus : Psidium
Species : Psidium guajava L.
2.1.3 Kandungan Daun Jambu biji (Psidium guajava L.)
Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) mengandung tanin, alkaloid,
flavonoid dan saponin (Girsang dkk, 2019). Satiyarti (2019) melaporkan bahwa
daun jambu biji positif menggandung flavonoid, alkaloid, terpenoid, tanin dan
saponin. Penelitian yang dilakukan oleh Agustina (2018) melaporkan bahwa daun
jambu biji positif mengandung flavonoid, saponin, tanin, alkaloid dan terpenoid.
9
2.1.4 Khasiat Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.)
Daun jambu biji secara luas digunakan sebagai obat tradisional untuk
mengatasi penyakit diare, disentri, sakit perut, gangguan gastrointestinal
(Aswarita, 2013). Daun jambu biji juga memiliki khasiat sebagai antiradang,
antidiare, astrigen (pengelat) dan penghentian pendarahan (Dewi, 2017). Selain
itu, rebusan daun dan kulit batang dari jambu biji dapat digunakan untuk
pengobatan tradisional seperti diare, mual, pusing dan gangguan mestruasi. Daun
jambu biji segar dapat dikunyah untuk mengobati gusi berdarah, mengatasi bau
mulut (Supriosa, 2017).
2.2 Tinjauan Tanaman Kersen (Muntingia calabura L.)
2.2.1 Morfologi Tanaman
Kersen (Muntingia calabura L.) kadang disebut sebagai ceri atau talok
merupakan salah satu tumbuhan negri tropis. Tanaman kersen berasal dari benua
Amerika akan tetapi banyak dibudidayakan didaerah yang hangat seperti di Asia.
Kersen (Muntingia calabura L.) mempunyai pertumbuhan yang cepat dan
ketinggiannya mampu mencapai 5 meter, memiliki daun yang rindang sehingga
kerap digunakan sebagai pohon peneduh (Shobri, 2018). Tumbuhan ini dapat
tumbuh dengan subur ditanah yang tandus dan toleran terhadap asam dan basa.
Dari kemampuan beradaptasi inilah yang menyebabkan tanaman kersen dapat
dijumpai di pinggir jalan, di tepi saluran pembuangan air, bahkan ditengah retakan
rumah. Buah yang sudah matang dan memiliki rasa yang manis dapat dimakan
langsung dalam kondisi segar (Khasanah, 2014).

10
Tanaman kersen (Muntingia calabura L.) memiliki perawakan yang kecil
dan selalu hijau. Batang pada tanaman ini berwarna coklat memiliki permukaan
yang kasar dan bergaris – garis. Tanaman ini memiliki daun tunggal, berbentuk
bulat telur dengan ukuran panjang 4.5 - 14 cm dan lebar 1.5 – 4 cm, ujung
runcing, tepi daun bergerigi, berbulu, mudah layu, daun bagian bawah berwarna
kelabu dan memiliki bulu (Sariyati, 2016). Bunganya berisi 1-5 kuntum, terletak
diketiak agak atas tumbuhnya daun, berkelamin dua, memiliki tangkai panjang,
berambut halus, mahkotanya bertepi rata, berwarna putih, tipis. Benang sari
berjumlah banyak yaitu mulai dari 10 sampai mencapai lebih dari 100 helai
(Sagala, 2018). Bunga yang sudah mekar akan menonjol keluar keatas helai-helai
daun, namun setelah menjadi buah akan menggantung kebawah dan tersembunyi
dibagian bawah helai daun. Bentuk buah tanaman kersen adalah bulat, berwarna
merah dengan diameter 15 mm, berisi ribuan biji yang kecil dan terkubur dalam
daging buah yang lembut. Biji berbentuk bulat, berukuran kecil dan berwarna
putih kekuning-kuningan. Tanaman kersen memiliki perakaran tunggang (Lathif,
2016).
Gambar 2.2 Daun Kersen (Muntingia calabura L.)

Sumber : (Safitri, 2019)
11
2.2.2 Klasifikasi Tanaman Kersen (Muntingia calabura L.)
Shobri, (2018) melaporkan bahwa klasifikasi tanaman kersen (Muntingia
calabura L.) adalah sebagai berikut :
Kingdom : Plantae
Devisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Ordo : Malvales
Family : Elaeocarpaceace
Genus : Muntingia L.
Species : Muntingia calabura L.
2.2.3 Kandungan Daun Kersen (Muntingia calabura L.)
Daun kersen mengandung alkaloid, flavonoid dan saponin (Syahara dan
siregar, 2019). Sagala, (2018) melaporkan bahwa daun kersen positif mengandung
alkaloid, flavonoid, saponin dan tanin. Penelitian yang dilakukan oleh Ratnasari,
(2017) melaporkan bahwa daun kersen positif mengandung alkaloid, flavonoid,
saponin,tanin dan steroid.
2.2.4 Khasiat Daun Kersen (Muntingia calabura L.)
Daun kersen dapat digunakan sebagai obat penurun panas, menghilangkan
sakit kepala, mengobati penyakit asam urat dan flu. Daun kersen juga dapat
dimanfaatkan sebagai antioksidan, antiseptic, antiinflamasi dan antimikroba
(Siddiqua et al. 2010). Juriah dkk, (2020) melaporkan bahwa daun kersen
memiliki khasiat untuk menurunkan panas, antiradang bahkan sebagai
antimikroba berbahaya dan dapat digunakan sebagai antiseptik alami. Daun

12
kersen memiliki khasiat sebagai antiseptik, antiinflamasi, antiasam urat dan
antitumor (Meiliza dan Hariyatmi, 2013).
2.3 Ekstraksi
Ekstraksi adalah suatu proses penarikan senyawa kimia (zat aktif) dalam
suatu simplisia dengan menggunakan metode dan pelarut yang tepat dan sesuai
(Aswad, 2018). Tujuan ekstraksi adalah untuk memisahkan atau mendapatkan zat
– zat yang memiliki kandungan khasiat sebanyak – banyaknya dari zat –zat yang
tidak memiliki khasiat agar lebih mudah disimpan dan digunakan serta tujuan
pengobatan lebih terjamin. Umumnya ekstraksi dikerjakan pada simplisia yang
memiliki kandungan zat – zat berkhasiat atau zat – zat lain yang digunakan untuk
keperluan tertentu (Fitriantari, 2017).
2.3.1 Metode Ekstraksi Maserasi
Maserasi merupakan suatu proses ekstraksi simplisia bahan alam dengan
menggunakan pelarut yang sesuai dan dengan dilakukan beberapa kali
pengadukan pada suhu ruang. Maserasi kinetik adalah dilakukannya proses
pengadukan secara terus menerus (continue) sedangkan remaserasi adalah proses
pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukannya penyaringan maserat
pertama dan seterusnya. Maserasi dilakukan dengan memasukkan serbuk tanaman
yang akan di ekstraksi dan pelarut yang sesuai kedalam wadah yang tertutup rapat
pada suhu ruang. Setelah proses ekstraksi selesai, pelarut dipisahkan dari sampel
dengan melakukan penyaringan. Keuntungan dari metode maserasi adalah sangat
sederhana, dapat menghindari rusaknya senyawa-senyawa kimia (zat aktif) yang
tidak tahan terhadap pemanasan (Mukhriani, 2014).

13
2.4 Standardisasi Ekstrak
Standardisasi merupakan tahapan yang penting dalam melakukan
pengembangan dan penelitian obat bahan alam di Indonesia yang berguna untuk
menjamin keamanan dan mutu dari sediaan obat yang dibuat (Utami dkk, 2016).
Standardisasi adalah serangkaian parameter, cara pengukuran dan prosedur yang
hasilnya berupa unsur-unsur terkait yang meliputi paradigma mutu yang
menjamin stabilitas obat dan memenuhi standar (Sumiwi dkk, 2013).
Standardisasi simplisia berarti bahwa simplisia yang akan digunakan
sebagai bahan baku obat harus memenuhi syarat-syarat yang tercantum dalam
monografi resmi Materia Medika Indonesia (MMI), sedangkan sebagai produk
yang dapat langsung dikonsumsi harus memenuhi persyaratan produk kefarmasian
sesuai dengan perundang-undangan yang berlaku. Sedangkan standardisasi
ekstrak merupakan penentuan parameter baik terhadap senyawa-senyawa kimia
(zat aktif) ataupun senyawa khas lainnya (Rahmadiah, 2009). Standardisasi
ekstrak meliputi parameter spesifik dan non spesifik.
2.4.1 Parameter Spesifik
1. Identitas Tanaman
Identitas tanaman merupakan deskripsi dari tata nama yang
mencangkup nama latin tumbuhan, bagian tumbuhan yang digunakan
dan nama Indonesia tumbuhan. Uji ini memiliki tujuan yaitu
memberikan identitas objektif dari nama tumbuhan (Depkes RI,
2000).
14
2. Uji Organoleptik
Uji organoleptik yaitu pengenalan ekstrak secara spesifik yang
dilakukan menggunakan panca indera untuk mendeskripsikan warna,
bau, bentuk dan rasa. Tujuan dari parameter ini adalah sebagai
pengenalan awal yang sederhana dan seobjektif mungkin (Depkes RI,
2000).
3. Uji Kandungan Kimia
Uji kandungan kimia adalah uji yang digunakan untuk mengamati
senyawa kimia yang terkandung dalam suatu ekstrak. Uji ini berfungsi
untuk membuktikan ada atau tidaknya senyawa kimia tertentu dalam
tanaman untuk dapat dikaitkan dengan aktivitas biologisnya (Artini,
2013).
4. Uji Kadar Senyawa Terlarut dalam Pelarut Tertentu
Parameter senyawa terlarut yaitu melarutkan sejumlah ekstrak
dengan pelarut (alkohol atau air) untuk ditentukan jumlah solute yang
identik dengan jumlah senyawa kandungan secara gravimetri. Dalam
hal tertentu dapat diukur senyawa - senyawa terlarut dalam pelarut
lain misalnya metanol, diklorometan, heksana. Tujuan dilakukan
pengujian ini adalah untuk memberikan gambaran awal jumlah
senyawa kandungan (Depkes RI, 2000).

15
2.4.2 Parameter Non Spesifik
1. Susut Pengeringan
Susut pengeringan merupakan pengukuran sisa dari zat setelah
dilakukan pengeringan pada temperatur 105ᵒ selama 30 menit atau
sampai berat konstan dan dinyatakan dalam nilai persen. Dalam hal
khusus (jika bahan uji tidak mengandung minyak atsiri/minyak
menguap dan sisa dari pelarut organik menguap) identik dengan kadar
air, yaitu kandungan air karena ada di lingkungan terbuka/atmosfer.
Parameter ini memiliki tujuan untuk memberikan batasan maksiamal
tentang besarnya senyawa yang telah hilang saat dilakukan proses
pengeringan (Depkes RI, 2000).
2. Bobot Jenis
Bobot jenis merupakan massa per satuan volume dilakukan pada
suhu kamar tertentu (25°) yang ditentukan dengan menggunakan alat
khusus yaitu piknometer atau alat lainnya. Parameter ini memiliki
tujuan untuk menentukan bobot jenis ekstrak yaitu untuk memberikan
batasan tentang besarnya massa per satuan volume yang merupakan
parameter khusus dari ekstrak cair sampai ekstrak pekat (kental) yang
masih dapat dituang (Depkes RI, 2000).
3. Kadar Air
Parameter kadar air merupakan pengukuran kandungan air yang
berada didalam ekstrak. Parameter ini bertujuan untuk memberikan

16
batasan minimal atau rentang besarnya kandungan air dalam bahan
(Depkes RI, 2000).
4. Kadar Abu
Dalam parameter ini bahan dipanaskan pada temperatur dimana
senyawa organik dan turunnya menguap dan terdestruksi, sehingga
hanya tertinggal unsur mineral dan anorganiknya saja. Parameter ini
bertujuan untuk memberikan gambaran kandungan mineral eksternal
dan internal yang berasal dari proses awal sampai terbentuknya
ekstrak (Depkes RI, 2000).
2.5 Escherichia Coli
2.5.1 Klasifikasi Escherichia coli
Adriana, (2017) melaporkan bahwa klasifikasi bakteri Escherichia coli
adalah sebagai berikut :
Kingdom : Bacteria
Divisi : Proteobacteria
Class : Gammaproteobacteria
Ordo : Enterobacteriales
Family : Enterobacteriaceae
Genus : Escherichia
Species : Escherichia coli

17
Gambar 2.3 Bakteri Escherichia coli

Sumber : (Sagar, 2016)
2.5.2 Morfologi bakteri Escherichia coli
Bakteri Escherichia coli merupakan anggota dari family
Enterobacteriaceae. Escherichia coli merupakan flora normal yang hidup dalam
saluran pencernaan manusia dan hewan, memiliki sifat oportunistik yaitu infeksi
yang diakibatkan oleh organisme yang tidak menimbulkan penyakit pada orang
dengan sistem kekebalan tubuh yang normal, namun dapat menimbulkan penyakit
pada orang dengan sistem kekebalan tubuh yang buruk (Dhafin, 2017). Bakteri
Escherichia coli umumnya dapat menimbulkan penyakit, diantaranya diare,
infeksi saluran kemih, sepsis, meningitis (Kusuma, 2010).
Escherichia coli termasuk dalam bakteri gram negatif yang berbentuk
batang pendek dengan panjang sekitar 2 µm, berdiameter 0.7 µm dan lebar 0.4-0.7
µm dan memiliki sifat anaerob fakultatif (Kusuma, 2010). Selnya bisa berbentuk
tunggal, berpasangan, berantai pendek dan biasanya tidak berkapsul. Bakteri ini
dapat bertahan didalam air dan pada tanah sampai berbulan-bulan, namun dapat
mati pada pemanasan dengan suhu 60°C selama 20 menit (Dhafin, 2017).
18
2.6 Antibiotik
Antibiotik adalah zat atau obat dihasilkan oleh mikroba terutama fungi
yang dapat menghambat sampai membunuh mikroba lain (bakteri), terutama
mikroba yang merugikan manusia yaitu mikroba yang dapat menyebabkan infeksi
pada manusia (Yuana, 2016). Berdasarkan mekanisme kerjanya antibiotik dibagi
menjadi lima kelompok, yaitu mengganggu metabolisme sel mikroba,
menghambat sintesis dinding sel mikroba, mengganggu permeabilitas membran
sel mikroba, menghambat sintesis protein sel mikroba dan menghambat sintesis
atau merusak asam nukleat mikroba (Ratnasari, 2016). Dibawah ini adalah
penggolongan antibiotik dan mekanisme kerjanya.
1. Penisilin
Antibiotik golongan penisilin meliputi penisilin G, oksasilin,
kloksasilin, diklosasin, karboksipenisilin, ampisilin, amoxicillin.
Antibiotik ini memiliki mekanisme kerja menghambat sintesis dinding
sel bakteri. Mekanisme kerja dari obat golongan penisilin adalah obat
terikat pada reseptor sel. Reseptor tersebut merupakan protein
pengikat penisilin atau PBPs (penicillin-binding proteins) dengan
jumlah 3-6 pada kebanyakan bakteri. Reseptor yang berbeda (PBPs)
dapat memiliki afinitas yang berbeda pula untuk suatu obat, masing-
masing juga dapat menghasilkan mekanisme yang berbeda. Sebagai
contoh, pelekatan penisilin ke satu PBP dapat menimbulkan abnormal
sel, namun pada pelekatan di sel lain dapat menimbulkan dinding sel
rusak senhingga menyebabkan lisis. Selanjutnya enzim transpeptidase

19
terhambat akibat dari struktur obat tertentu yang serupa dengan asil-
D-alanil-D-alanin. Reaksi transpeptidase tersebut melibatkan suatu D-
alanin hilang dari pentapeptida. Perbedaan kepekaan jenis bakteri
antara gram positif dengan gram negative adalah perbedaan struktur
dinding selnya, misalkan jumlah peptidoglikannya (Yuana, 2016).
Aktifitas penisilin dalam membunuh kuman gram negatif lebih kecil
dan penisilin dapat dihidrolisis oleh β-laktamase (Ratnasari, 2016).
2. Sefalosporin
Antibiotik golongan sefalosporin memiliki mekanisme kerja
menghambat sintesis dinding sel bakteri. Mekanisme kerja dari obat
golongan ini mirip dengan penisilin, namun sefalosporin lebih tahan
terhadap β-laktamase. Antibiotik golongan sefalosporin dibagi
menjadi empat generasi.
a. Sefalosporin Generasi Pertama
Sefalosporin generasi pertama meliputi sefadroxil, sefradin,
sefalexin, sefazolin, sefalotin dan sefafirin. Sefalosporin generasi
pertama sangat aktif dalam membunuh bakteri gram positif,
misalnya Streptococcus dan Staphilococcus (Ratnasari, 2016).
b. Sefalosporin Generasi Kedua
Sefalosporin generasi kedua meliputi sefamandole, sefaclor,
sefuroksim, sefonicid, loracarbef, seforanid, sefprozile, sefoxitin
dan sefotetan. Sefalosporin generasi kedua aktif pada bakteri yang
sensitif terhadap sefalosporin generasi pertama, namun

20
aktivitasnya lebih baik terhadap gram negatif (Ciptaningtyas,
2014).
c. Sefalosporin Generasi Ketiga
Sefalosporin generasi ketiga meliputi sefotaxime,
sefoperazone, seftizoxime, seftazidime, sefixime, seftriaxone,
sefdinir, sefpodoksime proksetil, seftibuten, moxalactam dan
seftidoren pivoksil. Sefalosporin generasi ketiga memiliki
aktivitas yang diperluas dalam membunuh bakteri gram negatif
(Ciptaningtyas, 2014).
d. Sefalosporin Generasi Keempat
Sefalosporin generasi keempat adalah cefepime. Sefalosporin
generasi keempat memiliki spektrum aktivitas yang lebih luas
dibandingkaan dengan generasi ketiga. Sefalosporin pada
generasi ini tahan terhadap hidrolisis dari β-laktamase (Yuana,
2016).
2. Aminoglikosida
Antibiotik golongan aminoglikosida meliputi gentamycin,
tobramisin, amikasin, streptomisin, neomisin, kanamysin, sisomisin,
netilmisin. Antibiotik golongan ini memiliki mekanisme kerja
menghambat sintesis protein sel bakteri. Mekanisme kerjanya adalah
aminoglikosida melekat pada protein reseptor spesifik pada subunit
30S dan pada ribosom 70S mikroba. Kemudian aminoglikosida
menghambat aktivitas normal pembentukan kompleks peptide yaitu

21
mRNA dengan formil metionin dan tRNA. Kemudian pesan dari
mRNA tersebut salah dibaca pada daerah pengenalan ribosom
sehingga asam amino yang salah dimasukkan kedalam peptid hasilnya
berupa protein yang tidak fungsional. Selanjutnya pelekatan
aminoglikosida yang berefek polisom (beberapa ribosom yang
memanjang sepanjang pita mRNA untuk membaca pesan dari mRNA
secara bersamaan) kemudian pecahnya menjadi monosom dan tidak
dapat melakukan sintesis protein, sehingga mengakibatkan
pembunuhan sel tersebut (Yuana, 2016).
3. Tetrasiklin
Antibiotik golongan tetrasiklin meliputi sansiklin, tetrasiklin,
klortetrasiklin, oksitetrasiklin, demeklosiklin, metasiklin, doksisiklin,
minosiklin. Antibiotik golongan ini memiliki mekanisme kerja
menghambat sintesis protein sel bakteri. Mekanisme kerjanya adalah
penghambatan sintesis protein dengan menghambat pelekatan
aminosal-tRNA yang bermuatan. Sehingga dapat mencegah muatan
asam amino baru ke dalam rantai peptid yang baru. Mekanisme kerja
ini bersifat bakteriostatik dan reversible bila obat yang diberikan
dihentikan. Resistensi terhadap antibiotik golongan tetrasiklin
diakibatkan oleh perubahan permeabilitas selubung sel mikroba. Pada
sel yang peka obat ini akan dikonsentrasikan dari lingkungan oleh
suatu transport aktif yang bergantung pada energi dan tidak langsung
meninggalkan sel. Sedangkan pada sel yang resisten, obat ini tidak
22
ditransfer aktif kedalam sel dan dapat meninggalkan sel dengan cepat
sehingga konsentrasi penghambatan petumbuhan bakteri tidak dapat
dipertahankan (Yuana, 2016).
4. Kloramfenikol
Antibiotik golongan kloramfenikol meliputi kloramfenikol,
tiamfenikol, azidamfenikol. Antibiotik golongan ini memiliki
mekanisme kerja menghambat sintesis protein sel bakteri. Mekanisme
kerjanya adalah menghambat dengan cara mengganggu pengikatan
asam amino baru pada rantai peptid yang mulai muncul, hal ini
disebabkan karena sebagian besar kloramfenikol bekerja dengan
menghambat peptidil transferase. Antibiotik golongan kloramfenikol
memiliki mekanisme kerja yang bersifat bakteriostatik (Yuana, 2016).
5. Makrolida
Antibiotik golongan makrolida meliputi oleandomisin fosfat,
spiramisin, roksitromisin, eritromisin, azithromycin, klaritromisin.
Antibiotik golongan ini memiliki mekanisme kerja menghambat
sintesis protein sel bakteri. Mekanisme kerjanya adalah mengganggu
pembentukan kompleks pemula yang digunakan untuk sintesis rantai
peptide atau dengan mengganggu reaksi translokasi aminosil. Selain
itu, antibiotik golongan makrolida juga dapat mengikat subunit
ribosom 50S secara irreversible sehingga akan memblok ikatan tRNA
(Ratnasari, 2016).
23
6. Polipeptida
Antibiotik golongan polipeptida meliputi polimiksin B,
polimiksin E, basitrasin dan gramisidin. Antibiotik golongan ini
memiliki aktivitas bakterisid. Mekanisme karjanya adalah melekatkan
diri pada membran sel bakteri, sehingga menyebabkan permeabilitas
sel meningkat akibatnya sel menjadi meletus (Obat-obat penting edisi
7, 2015).
7. Rifampisin
Rifampisin memiliki mekanisme kerja menghambat sintesis atau
merusak asam nukleat sel mikroba. Rifampisin bekerja dengan cara
menghambat pertumbuhan bakteri dengan mengikat kuat pada RNA
polymerase yang bergantung pada DNA bakteri. Dengan kata lain
rifampisin bekerja dengan cara menghambat sintesis RNA bakteri
(Yuana, 2016).
8. Quinolone
Antibiotik golongan quinolone meliputi siprofloksasin,
levofloksasin, enoksasin, lomefloksasin, norfloksasin, moksifloksasin,
ofloksasin, trovafloksasin. Antibiotik golongan ini memiliki
mekanisme kerja menghambat sintesis asam nukleat sel mikroba.
Mekanisme kerjanya adalah dengan menghambat kerja dari DNA
gyrase (topoisomerase II) enzim ini berfungsi untuk membuka dan
menutup lilitan DNA. Mayoritas mikroorganisme, asam para-
aminobenzoat (PABA) adalah metabolit paling penting yang

24
digunakan oleh mikroorganisme yang digunakan mikroorganisme
sebagai suatu perkusor dalam melakukan sintesis asam folat dalam
jalur yang digunakan pada sintesis asam nukleat. Mekanisme kerja
PABA tergantung pada adenosine trifosfat (ATP) untuk menghasilkan
asam dehidropteroat, selanjutnya diubah menjadi asam folat (Yuana,
2016).
2.7 Antibakteri
Antibakteri adalah zat atau senyawa kimia yang dapat mengganggu
pertumbuhkan atau bahkan dapat membunuh bakteri dengan cara mengganggu
permeabilitas mikroba yang merugikan khususnya bagi manusia (Dampuk, 2017).
Antibakteri dalam penggolongannya dikenal dengan antibiotik dan antiseptik.
Antibiotik adalah zat-zat kimia yang berasal dari fungi dan bakteri yang
dilemahkan. Antibiotik tidak merugikan sel-sel jaringan manusia, hal ini berbeda
dengan daya kerja antiseptik yang tidak membedakan antara jaringan tubuh dan
mikroorganisme (Odianti, 2010).
Berdasarkan toksisitasnya terdapat dua sifat antibakteri, yaitu
bakteriostatik dan bakterisid. Bakteriostatik adalah suatu obat atau zat yang
mampu menghentikan atau menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Dalam
keadaan ini jumlah mikroorganisme tidak dapt bermutiplikasi dan berkembang
biak. Bakterisid adalah suatu obat atau zat yang mampu membunuh
mikroorganisme atau bakteri. Dalam keadaan ini mikroorganisme jumlahnya akan
berkurang bahkan sampai habis karena sudah tidak mampu lagi melakukan
pembelahan atau tidak mampu lagi berkembang biak (Aswad, 2018).

25
2.8 Metode Uji Aktivitas Antibakteri
2.8.1 Metode Dilusi
Metode dilusi menggunakan antimikroba yang memiliki kadar yang
menurun secara bertahap, baik pada media padat maupun media cair. Metode ini
dilakukan dengan cara mencampurkan zat antimikroba dengan media, kemudian
diinokulasi dengan bakteri uji dan diinkubasi. Hasil pengamatan antimikroba yang
diperoleh berupa tumbuh atau tidaknya mikroba dalam media. Metode ini
memiliki beberapa keuntungan, diantaranya memberikan hasil secara kuantitatif
dengan menunjukkan jumlah antimikroba yang dibutuhkan untuk membunuh
bakteri, Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum
(KBM) dapat ditentukan. Sedangkan kekurangan dari metode ini adalah sampel
yang dibutuhkan dalam percobaan harus jernih, karena jika sampel keruh akan
mempersulit pengamatan dan memerlukan alat yang lebih banyak (Sofya, 2018).
2.8.2 Metode difusi
Prinsip dari metode ini adalah untuk mengukur zona hambat dari
pertumbuhan bakteri yang diakibatkan oleh aktivitas antibakteri pada media padat.
Zona hambat dari pertumbuhan bakteri adalah daerah yang jernih, semakin luas
zona hambatnya artinya semakin kuat aktivitas antibakterinya (Fitriantari, 2017)
1. Metode Difusi Cakram (Disc Diffusion)
Metode ini juga disebut sebagai tes Kirby dan Bauer merupakan
salah satu cara yang digunakan untuk mengetahui aktivitas dari suatu
agen antimikroba. Cakram disc yang telah mengandung agen
antimikroba diletakkan di permukaan media padat yang telah ditanami

26
mikroorganisme. Zona hambat terhadap pertumbuhan mikroorganisme
ditunjukkan dengan adanya daerah yang jernih pada permukaan media
(Aswad, 2018).
2. Metode Sumuran (hole/cup)
Pada media yang telah diinokulasi dengan bakteri dibuat suatu
lubang/sumur sesuai dengan jumlah agen antimikroba yang akan
diujikan, kemudian pada lubang/sumur tersebut diisi dengan agen
antimikroba yang akan diujikan, kemudian diinkubasi. Setelah
diinkubasi, dilakukan pengamatan dengan melihat ada atau tidaknya
zona hambat disekeliling lubang (Aswad, 2018).
Susanto dan Rega (2012) melaporkan bahwa kategori diameter zona
hambat adalah sebagai berikut:
Tabel 2.1 Kategori Diameter Zona Hambat Antibakteri
Diameter (mm) Kekuatan Daya Hambat

≤5 Lemah
6 – 10 Sedang
11 – 20 Kuat
≥ 20 Sangat Kuat
Berdasarkan pada table 2.1 dapat diketahui bahwa zona hambat antibakteri
memiliki klasifikasi pada masing-masing rentang sesuai dengan diameter zona
hambat yang terbentuk. Diameter zona hambat diukur menggunakan jangka
sorong dengan satuan mili meter (mm). Zona hambat yang terbentuk ditunjukkan
dengan adanya daerah bening disekitar media yang diberikan agen antibakteri atau
antibiotik.
BAB III
KERANGKA KONSEPTUAL DAN HIPOTESA PENELITIAN
3.1 Kerangka Konseptual
Daun Jambu Biji (Psidium guajava Daun kersen (Muntingia

L.) calabura L. ) Escherichia coli
Diare, infeksi saluran

Ekstraksi daun jambu biji (Psidium guajava L.) kemih, sepsis
dan daun kersen (Muntingia calabura L.) menggunakan metode
maserasi dengan pelarut etanol 96%
Ekstrak kental daun jambu biji (Psidium guajava L.) dan daun kersen Peremajaan bakteri
(Muntingia calabura L.)
Standardisasi ekstrak dengan parameter spesifik dan non spesifik
Uji Bebas Etanol
Variasi konsentrasi kombinasi ekstrak
Uji aktivitas antibakteri
Diameter zona hambat
Analisis data
Gambar 3.1 Kerangka Konseptual

Keterangan :
: Diteliti
: Tidak Diteliti
27
28
3.2 Hipotesa Penelitian
Hipotesa pada penelitian ini meliputi :
1. Kombinasi ekstrak dari ekstrak etanol daun jambu biji (Psidium
guajava L.) dan ekstrak etanol daun kersen (Muntingia calabura L.)
memiliki aktivitas antibakteri dalam menghambat pertumbuhan
Escherichia coli
2. Konsentrasi terbaik dari kombinasi ekstrak etanol daun jambu biji
(Psidium guajava L.) dan daun kersen (Muntingia calabura L.) yang
dapat menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli adalah
25%:75%
BAB IV
METODE PENELITIAN
4.1 Desain Penelitian
Penelitian yang dilakukan merupakan penelitian berjenis Eksperimental
Laboratorium, yaitu untuk mengetahui suatu gejala atau pengaruh yang
ditimbulkan sebagai akibat dari adanya perlakuan tertentu (Notoatmojo, 2010).
Dengan melakukan percobaan antivitas antibakteri kombinasi ekstrak etanol daun
jambu biji (Psidium guajava L.) dan ekstrak etanol daun kersen (Muntingia
calabura L.) terhadap penghambatan pertumbuhan bakteri Escherichia coli.
4.2 Populasi dan Sampel
4.2.1 Populasi
Populasi merupakan wilayah generalisasi terdiri atas objek atau subjek
yang memiliki karakteristik dan kualitas tertentu untuk dipelajari dan kemudian
disimpulkan (Sugiyono, 2011). Populasi yang digunakan pada penelitian ini
adalah daun jambu biji (Psidium guajava L.) dan daun kersen (Muntingia
calabura L.) yang diperoleh dari desa bringinan, kecamatan jambon, kabupaten
ponorogo.
4.2.2 Sampel
Sampel merupakan sebagian kecil dari populasi yang digunakan dalam
penelitian (Sagala, 2018). Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah daun
jambu biji (Psidium guajava L.) dan daun kersen (Muntigia calabura L.)
29
30
4.3 Teknik Sampling
Teknik sampling yang digunakan untuk pengambilan sampel pada
penelitian ini adalah Simple Random Sampling. Simple Random Sampling adalah
suatu cara pengambilan sampel dimana setiap anggota populasi diberi kesempatan
yang sama untuk terpilih menjadi sampel (Arieska dkk, 2018).
4.4 Kerangka Kerja Penelitian
Daun jambu biji (Psidium Daun kersen (Muntigia Bakteri Escherichia

guajava L.) calabura L.) coli
Uji Determinasi
Peremajaan bakteri
Ekstraksi menggunakan metode maserasi
Pengecatan gram
Ekstrak kental daun jambu biji (Psidium guajava L.) dan daun
kersen (Muntingia calabura L.)
Penanaman bakteri
Uji standardisasi Uji bebas etanol
ekstrak
Konsentrasi kombinasi ekstrak 25%:75%; 50%:50%; 75%:25%
Perendaman cakram disk pada masing-masing konsentrasi
Penempelan cakram disk Media EMB
Pengukuran zona hambat
Analisis data
Gambar 4.1 Kerangka Kerja Penelitian

31
4.5 Variabel Penelitian Dan Devinisi Operasional
4.5.1 Variabel Penelitian
1. Variabel Bebas (Independent)
Variabel bebas adalah variabel yang dapat mempengaruhi hasil
akhir (Sugiyono, 2011). Variabel bebas dalam penelitian ini yaitu
kombinasi dari ekstrak daun jambu biji (Psidium guajava L.) dan daun
kersen (Muntingia calabura L.) dengan perbandingan kombinasi
25%:75%; 50%:50%; 75%:25%.
2. Variabel Terikat (Dependent)
Variabel terikat adalah variabel yang dipengaruhi atau menjadi
akibat karena adanya variabel bebas (Sugiyono, 2011). Variabel
terikat pada penelitian ini adalah terbentuknya zona hambat terhadap
pertumbuhan bakteri Escherichia coli.
3. Variabel Kontrol
Variabel kontrol adalah variabel yang tidak dapat dimanipulasi
dan digunakan sebagai salah satu cara untuk mengontrol (Sugiyono,
2011). Variabel kontrol dalam penelitian ini adalah waktu inkubasi
bakteri dan media pertumbuhan bakteri.
4.5.2 Definisi Operasional
Definisi operasional adalah suatu atribut atau sifat atau nilai dari objek
atau kegiatan yang mempunyai variasi tertentu yang telah ditetapkan oleh peneliti
untuk dipelajari kemudian ditarik kesimpulannya. Definisi variabel penelitian

32
harus dirumuskan untuk menghindari kesalahan dalam pengumpulan data
(Sugiyono, 2015).
Tabel 4.1 Definisi Operasional Penelitian

Variabel Definisi Jenis data
Determinasi Dilakukan dengan tujuan untuk Kualitatif
mendapatkan suatu spesies tanaman
spesifik mungkin dan tepat sasaran
untuk proses pemanfaatannya,
sehingga tidak tertukar dengan spesies
tanaman lain.
Ekstrak daun jambu biji Sediaan pekat yang diperoleh dari Nominal
(Psidium guajava L.) proses maserasi dengan menggunakan
pelarut etanol 96%
Ekstrak daun kersen Sediaan pekat yang diperoleh dari Nominal
(Muntingia calabura L.) proses maserasi dengan menggunakan
pelarut etanol 96%
Kombinasi ekstrak etanol Pengkombinasian antara ekstrak etanol Nominal
daun jambu biji (Psidium daun jambu biji (Psidium guajava L.)
guajava L.) dan daun dan daun kersen (Muntingia calabura
kersen (Muntingia L.) yang dibuat perbandingan
calabura L.) 25%:75%; 50%:50%; 75%:25%
Aktivitas antibakteri Aktivitas zat yang mampu Nominal
menghambat, menekan atau
membunuh bakteri
Standarisasi ekstrak Meliputi standarisasi spesifik dan non Nominal
spesifik baik terhadap senyawa aktif
maupun senyawa khas lainnya dan
sifat kimiawinya sehingga memenuhi
persyaratan
Difusi Metode menggunakan cakram disk. Nominal
Parameter yang digunakan adalah zona
hambat disekitar cakram yang
terbentuk pada media dengan satuan
millimeter (mm)
4.6 Instrumen Penelitian
4.6.1 Alat dan Bahan yang Digunakan
1. Alat-alat yang digunakan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi: timbangan
analitik (Ohaus), ayakan no.80 (ABM), blender (Fomac), inkas

33
(lokal), cawan petri (lokal), jarum ose (lokal), cawan porselin (lokal),
Erlenmeyer (Iwaki), tabung reaksi (Iwaki), gelas ukur (Iwaki), pipet
tetes (lokal), pipet volume (Iwaki), corong (Herma), kain flannel,
kertas saring (lokal), water batch (Faithful), lampu spiritus (lokal),
autoclave (Listed), rotary evaporator (IKA), incubator (Bod
incubator), objek glas (Ground edges), mikroskop (Optika), rak
tabung reaksi (lokal), penggaris, botol coklat (lokal), labu takar
(Iwaki), pinset (one med), batang pengaduk (lokal), alluminium foil,
penjepit kayu (lokal).
2. Bahan-bahan yang digunakan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini meliputi: etanol 96%
(teknis), DMSO 10%, media Eosin Methylene Blue (EMB) agar,
cakram disk ciprofloxacin sebagai kontrol positif, aquadest steril,
sampel ekstrak etanol daun jambu biji (Psidium guajava L.) dan
ekstrak etanol daun kersen (Muntigia calabura L.), bakteri
Escherichia coli.
4.7 Prosedur Kerja
4.7.1 Determinasi Tanaman
Pengujian ini dilakukan sebelum pembuatan simplisia, untuk memastikan
bahwa tanaman yang akan digunakan dalam penelitian ini merupakan daun jambu
biji (Psidium guajava L.) dan daun kersen (Muntingia calabura L.). Determinasi
dilakukan di Laboratorium Materia Medika, Kota Batu, Malang.

34
4.7.2 Pembuatan Simplisia Daun Jambu Biji dan Daun Kersen
Sampel daun jambu biji (Psidium guajava L.) sebanyak 2 kg dan daun
kersen (Muntigia calabura L.) sebanyak 2.25 kg dipilih dengan sortir basah dan
sortir kering, selanjutnya dikeringkan dengan cara diangin-anginkan. Setelah
kering daun jambu biji (Psidium guajava L.) dan daun kersen (Muntigia calabura
L.) segera diserbuk dengan mesin penyerbuk atau blender kemudian diayak
dengan mesh no.80 sehingga diperoleh serbuk daun jambu biji (Psidium guajava
L.) dan daun kersen (Muntigia calabura L.) dengan derajat kehalusan yang
homogen. Penyerbukkan yang dilakukan bertujuan agar luas partikel bahan yang
kontak dengan larutan penyari dapat diperluas sehingga penyarian berlangsung
secara efektif. Pembuatan serbuk daun jambu biji (Psidium guajava L.) dan daun
kersen (Muntigia calabura L.) dilakukan secara terpisah.
4.7.3 Pembuatan Ektrak
1. Ekstrak Etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.)
Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi dengan
memasukkan serbuk daun jambu biji (Psidium guajava L.) sebanyak
500 gram dalam bejana, kemudian ditambahkan pelarut etanol 96%.
Selanjutnya bejana ditutup, daun jambu biji (Psidium guajava L.)
direndam selama 3 hari dan sesekali dilakukan pengadukan. Setelah 3
hari, rendaman di saring dan didapatkan ekstrak cair. Selanjutnya
filtrat diuapkan dengan rotary evaporator pada suhu 450C hingga
diperoleh ekstrak kental.

35
2. Ekstrak Etanol Daun Kersen (Muntigia calabura L.)
Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi dengan
memasukkan serbuk daun kersen (Muntigia calabura L.) sebanyak
450 gram dalam bejana, kemudian ditambahkan pelarut etanol 96%.
Selanjutnya bejana ditutup, daun kersen (Muntigia calabura L.)
direndam selama 3 hari dan sesekali dilakukan pengadukan. Setelah 3
hari, rendaman di saring dan didapatkan ekstrak cair. Selanjutnya
filtrat diuapkan dengan rotary evaporator pada suhu 400C hingga
diperoleh ekstrak kental.
4.7.4 Uji Bebas Etanol
Uji bebas etanol dilakukan dengan menggunakan prinsip esterifikasi yaitu,
ekstrak etanol daun jambu biji (Psidium guajava L.) dan ekstrak etanol daun
kersen (Muntigia calabura L.) ditambah dengan 3 tetes asam asetat (CH 3COOH)
dan asam sulfat (H2SO4) pekat setelah itu dipanaskan. Dikatakan positif bebas
etanol apabila tidak tercium bau khas dari etanol. Dilakukannya uji bebas etanol
bertujuan untuk memastikan bahwa ekstrak yang akan digunakan tidak terdapat
etanol yang memiliki aktivitas antibakteri (Dampuk, 2017).
4.7.5 Uji Standarisasi Ekstrak Parameter Spesifik
1. Organoleptis
Pengujian organoleptis meliputi deskripsi bentuk, warna, bau dan
rasa dari tanaman yang diamati.

36
2. Kandungan Kimia Ekstrak
a. Pengujian kandungan kimia ekstrak etanol Daun Jambu Biji
(Psidium guajava L.) meliputi :
1) Flavonoid
Identifikasi flavonoid dilakukan dengan cara, sebanyak 2
mg ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.)
dimasukkan kedalam tabung reaksi ditambah dengan 4 ml
etanol hingga ekstrak larut. Selanjutnya dipanaskan sampai
mendidih dan disaring kemudian dikocok. Sebanyak 2 ml
filtrat ditambah 0.1 mg serbuk magnesium dan 10 tetes HCl
pekat. Apabila terbentuk warna merah maka menunjukkan
positif flavonoid (Agustina dkk, 2017).
2) Fenol
Identifikasi fenol dilakukan dengan cara, sebanyak 1 mg
ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.)
dimasukkan kedalam tabung reaksi kemudian ditambah FeCl3
1%. Positif mengandung fenol apabila terjadi perubahan
warna menjadi hijau, ungu, biru dan hitam (Agustina dkk,
2017).
3) Saponin
Identifikasi saponin dilaakukan dengan cara, sebanyak 2
dimasukkan kedalam tabung reaksi kemudian ditambahkan

37
10 ml aquadest panas, dinginkan. Selanjutnya kocok dengan
kuat selama 10 detik. Terbentuknya busa setinggi 1 – 10 cm
selama tidak kurang dari 10 menit dan apabila ditambah
dengan 1 tetes HCl 2 N busa tidak hilang menandakan positif
mengandung saponin (Utami dkk, 2016).
4) Tanin
Identifikasi tanin dilakukan dengan cara, sebanyak 2 mg
dimasukkan kedalam tabung reaksi, selanjutnya ditambah
dengan 15 ml aquadest panas kemudian dipanaskan hingga
mendidih selama 5 menit selanjutnya ditambah beberapa
tetes FeCl3 1%. Apabila menghasilkan warna hijau violet
menunjukkan positif tanin Fajriah dan (Megawati, 2015).
5) Alkaloid
Identifikasi alkaloid dilakukan dengan cara, sebanyak 2
dimasukkan kedalam tabung reaksi dan ditambah dengan 5
ml HCl 2N. Selanjutnya campuran ekstrak dan HCl 2N
dibagi dalam beberapa tabung reaksi. Tiap tabung reaksi
ditambah dengan pereaksi yang berbeda yaitu pereaksi
mayer, pereaksi wagner dan pereaksi dragendrof. Pada saat
penambahan pereaksi mayer, apabila terbentuk endapan
berwarna putih atau kuning menandakan positif mengandung

38
alkaloid. Pada penambahan pereaksi wagner, positif
mengandung alkaloid apabila terbentuk endapan berwarna
coklat. Pada penambahan pereaksi dragendrof, positif
mengandung alkaloid apabila terbentuk endapan berwarna
jingga (Utami dkk, 2016).
6) Steroid/terpenoid
Identifikasi steroid dilakukan dengan cara, sebanyak 2
mg ekstrak Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.)
dimasukkan kedalam tabung reaksi tambahkan sedikit eter
kemudian dikocok. Selanjutnya lapisan eter diambil lalu
masukkan dalam plat tetes biarkan sampai mengering.
Setelah kering, masukkan 2 tetes asam asetat anhidrat dan 1
tetes asam sulfat pekat. Positif mengandung steroid apabila
terbentuknya warna hijau. Tetapi bila warna yang terbentuk
adalah orange, kuning atau merah menandakan bahwa positif
terpenoid (Utami dkk, 2016).
b. Pengujian kandungan kimia ekstrak etanol Daun Kersen
(Muntigia calabura L.) meliputi :
1) Flavonoid
Identifikasi flavonoid dilakukan dengan cara, sebanyak 2
mg ekstrak etanol Daun Kersen (Muntigia calabura L.)
dimasukkan kedalam tabung reaksi ditambah dengan 4 ml
etanol hingga ekstrak larut. Selanjutnya dipanaskan sampai

39
mendidih dan disaring kemudian dikocok. Sebanyak 2 ml
filtrat ditambah 0.1 mg serbuk magnesium dan 10 tetes HCl
pekat. Apabila terbentuk warna merah maka menunjukkan
positif flavonoid (Agustina dkk, 2017).
2) Tanin
Identifikasi tanin dilakukan dengan cara, sebanyak 2 mg
ekstrak etanol Daun Kersen (Muntigia calabura L.)
dimasukkan kedalam tabung reaksi, selanjutnya ditambah
dengan 15 ml aquadest panas kemudian dipanaskan hingga
mendidih selama 5 menit selanjutnya ditambah beberapa
tetes FeCl3 1%. Apabila menghasilkan warna hijau violet
menunjukkan positif tanin (Fajriah dan Megawati, 2015).
3) Saponin
Identifikasi saponin dilakukan dengan cara, sebanyak 2
dimasukkan kedalam tabung reaksi kemudian ditambahkan
10 ml aquadest panas, dinginkan. Selanjutnya kocok dengan
kuat selama 10 detik. Terbentuknya busa setinggi 1 – 10 cm
selama tidak kurang dari 10 menit dan apabila ditambah
dengan 1 tetes HCl 2 N busa tidak hilang menandakan positif
mengandung saponin (Utami dkk, 2016).

40
4) Alkaloid
Identifikasi alkaloid dilakukan dengan cara, sebanyak 2
dimasukkan kedalam tabung reaksi dan ditambah dengan 5
ml HCl 2N. selanjutnya campuran ekstrak dan HCl 2N dibagi
dalam beberapa tabung reaksi. Tiap tabung reaksi ditambah
dengan pereaksi yang berbeda yaitu pereaksi mayer, pereaksi
wagner dan pereaksi dragendrof. Pada saat penambahan
pereaksi mayer, apabila terbentuk endapan berwarna putih
atau kuning menandakan positif mengandung alkaloid. Pada
penambahan pereaksi wagner, positif mengandung alkaloid
apabila terbentuk endapan berwarna coklat. Pada
penambahan pereaksi dragendrof, positif mengandung
alkaloid apabila terbentuk endapan berwarna jingga (Utami
dkk, 2016).
5) Steroid
Identifikasi steroid dilakukan dengan cara, sebanyak 2
mg ekstrak Daun Kersen (Muntigia calabura L.) dimasukkan
kedalam tabung reaksi tambahkan sedikit eter kemudian
dikocok. Selanjutnya lapisan eter diambil lalu masukkan
dalam plat tetes biarkan sampai mengering. Setelah kering,
masukkan 2 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat

41
pekat. Positif mengandung steroid apabila terbentuknya
warna hijau (Utami dkk, 2016).
3. Uji Kadar Senyawa Terlarut dalam Pelarut Tertentu
a. Kadar Senyawa Larut dalam Air
Pengujian kadar senyawa larut dalam air dilakukan dengan
cara, menimbang sebanyak 1 gram ekstrak dimaserasi dengan 20
ml air-kloroform (1:1) selama 24 jam, kemudian disaring.
Sebanyak 20 ml filtrat diuapkan hingga kering menggunakan
cawan penguap, kemudian residu yang terbentuk dipanaskan pada
suhu 105°C hingga bobot tetap. Kemudian hitung kadar dalam
persen senyawa yang larut dalam air terhadap berat ekstrak awal
(Irsyad, 2013).
A 1−A 0
% Kadar senyawa larut air= × 100 %
B
Ket : A1 = Bobot cawan + residu setelah pemanasan (g)
A0 = Bobot cawan kosong (g)
B = Bobot sampel awal (g)
b. Kadar Senyawa Larut dalam Etanol
Pengujian kadar senyawa larut dalam etanol dilakukan
dengan cara, menimbang sebanyak 1 gram ekstrak dimaserasi
dengan 20 ml etanol 95% selama 24 jam. Hasil maserasi
kemudian disaring dengan cepat untuk menghindari penguapan
etanol. 20 ml filtrat kemudian diuapkan hingga kering dalam
cawan penguap, residu dipanaskan pada suhu 105°C hingga bobot

42
tetap. Hitung kadar dalam persen senyawa yang larut dalam
etanol terhadap berat ekstrak awal (Irsyad, 2013).
A 1−A 0
% Kadar senyawa larut etanol= ×100 %
B
Ket : A1 = Bobot cawan + residu setelah pemanasan (g)
A0 = Bobot cawan kosong (g)
B = Bobot sampel awal (g)
4.7.6 Uji Standarisasi Ekstrak Parameter Non Spesifik
1. Susut Pengeringan
Pengujian susut pengeringan dilakukan dengan cara, memanaskan
cawan pada suhu 105°C selama 30 menit dan ditimbang. Kemudian,
ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan ekstrak
etanol Daun Kersen (Muntigia calabura L.) masing-masing ditimbang
sebanyak 1 gram, dimasukkan kedalam cawan. Sebelum ditimbang
ekstrak diratakan dengan batang pengaduk, kemudian ditimbang
kembali. Selanjutnya dikeringkan pada suhu 105°C selama 30 menit
masukkan kedalam desikator kemudian ditimbang kembali (Lestari
dkk, 2018).
Berat susut pengeringan

Susut pengeringan ( % )= × 100 %
Berat ekstrak
2. Bobot Jenis
Pengujian bobot jenis dilakukan dengan cara, menimbang
piknometer dalam keadaan kosong. Kemudian piknometer diisi
dengan aquadest sampai penuh dan ditimbang catat hasilnya.

43
Kerapatan air dapat ditentukan. Selanjutnya poknometer dikosongkan,
kemudian diisi dengan ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium
guajava L.) dan ekstrak etanol Daun Kersen (Muntigia calabura L.)
secara bergantian, lalu ditimbang dan catat hasilnya. Kerapatan
ekstrak dapat ditentukan (Depkes RI, 2000). Bobot jenis dapat
ditetapkan dengan menggunakan rumus sebagai berikut :
Kerapatan ekstrak
Bobot jenis ekstrak =
Kerapatan air
3. Kadar Air
Pengujian kadar air dilakukan dengan menggunakan metode
gravimetri. Ditimbang sebanyak 1 gram ekstrak etanol Daun Jambu
Biji (Psidium guajava L.) dan ekstrak etanol Daun Kersen (Muntigia
calabura L.) masing-masing masukkan kedalam cawan yang telah
ditara. Kemudian keringkan pada suhu 105°C selama 5 jam dan
ditimbang. Lanjutkan pengeringan kembali selama 1 jam sampai
didapatkan bobot konstan (Depkes RI, 2000). Kadar air dapat
ditetapkan dengan menggunakan rumus sebagai berikut :
A−B
% Kadar Air = x 100 %
A
Ket : A = Berat sampel sebelum dipanaskan
B = Berat sampel setelah dipanaskan

44
4. Kadar Abu
a. Kadar Abu Total
Pengujian kadar abu total dilakukan dengan cara, menimbang
ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan ekstrak
etanol Daun Kersen (Muntigia calabura L.) masing-masing
sebanyak 2 gram (B). Kemudian masukkan kedalam krus yang
telah ditimbang sebelumnya (A0). Selanjutnya suhu dinaikkan
secara bertahap hingga 600 ± 25°C hingga bebas karbon.
Selanjutnya dinginkan dalam desikator, timbang berat abu (A1)
(Depkes RI, 2000). Kadar abu total dapat ditetapkan dengan
menggunakan rumus sebagai berikut :
A 1−A 0
% Kadar Abu Total= x 100 %
B
Ket : A1 = Bobot krus + ekstrak setelah pemijaran (g)
A0 = Bobot krus kosong (g)
B = bobot sampel awal (g)
b. Kadar Abu Tidak Larut Asam
Pengujian kadar abu tidak larut asam dilakukan dengan cara,
abu yang diperoleh dari penetapan kadar abu total dididihkan
dengan 25 ml asam sulfat encer selama 5 menit, bagian yang tidak
larut asam dikumpulkan selanjutnya disaring dengan kertas saring
bebas abu yang sebelumnya telah ditimbang (C), residu yang
diperoleh disaring dengan kertas saring dan dimasukkan kembali
kedalam kurs yang sama. Kemudian dimasukkan kedalam oven

45
hingga mendapatkan bobot yang tetap dan ditimbang kembali.
(Depkes RI, 2000). Kadar abu total dapat ditetapkan dengan
menggunakan rumus sebagai berikut :
A 1− (Cx 0.0076 )− A 0
% Kadar Abu Larut Asam= x 100 %
B
Ket : A1 = Bobot krus + ekstrak setelah pemijaran
A0 = Bobot krus kosong
B = Bobot awal sampel
C = Bobot kertas saring bebas abu
0.0076 = Kertas saring bebas abu bila menjadi abu
4.7.7 Pembuatan Konsentrasi Larutan Uji
Ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan ekstrak etanol
Daun Kersen (Muntigia calabura L.) masing – masing dibuat konsentrasi dengan
menggunakan DMSO 10%. Konsentrasi dibuat menjadi 3 macam perbanding.
Perbandingan konsentrasi yang digunakan pada kombinasi ekstrak etanol Daun
Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan ekstrak etanol Daun Kersen (Muntingia
calabura L.) yaitu 25%:75%; 50%:50%; 75%:25% selanjutnya masing-masing
konsentrasi dilarutkan dengan DMSO 10% sampai volume 10 ml. kemudian
dilakukan replikasi sebanyak 3 kali pengulangan.
Tabel 4.2 Perbandingan konsentrasi dan berat ekstrak etanol Daun Jambu Biji
(Psidium guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.)
Perbandingan konsentrasi Perbandingan berat Volume pelarut
Replikasi
(%) (gram) DMSO 10%
25 : 75 2.5 : 7.5 ad 10 ml 3 kali
50 : 50 5:5 ad 10 ml 3 kali
75 : 25 7.5 : 2.5 ad 10 ml 3 kali
46
4.7.8 Sterilisasi Alat
Alat-alat yang akan digunakan dicuci hingga bersih menggunakan
aquadestilata, kemudian dikeringkan. Selanjutnya dibungkus dengan kertas, mulut
alat ditutup dengan kapas. Alat-alat dari kaca disterilkan dalam oven dengan suhu
170°-180°C selama 2 jam, alat dari plastik yang tidak tahan pemanasan disterilkan
dalam autoklaf dengan suhu 121°C selama 15 menit (Aswad, 2018). Sedangkan
alat-alat seperti jarum ose disterilkan dengan pemanasan api langsung (Sofya,
2018).
4.7.9 Sterilisasi Inkas
Membersihkan bagian dalam inkas, kemudian semprotkan larutan alkohol
96% pada bagian dalam inkas. Selanjutnya sinari dengan sinar UV, tutup bagian
inkas yang berlubang menggunakan kertas dan biarkan selama 15 menit
(Kussumaningrum, 2019).
4.7.10 Pembuatan Media
Media EMB Agar sebanyak 9 g dilarutkan kedalam 250 ml aquadest,
kemudian dipanaskan sambil diaduk menggunakan batang pengaduk hingga
jernih. Kemudian dituang kedalam erlenmeyer yang telah disterilkan.
4.7.11 Sterilisasi Media
Prosedur sterilisasi media yaitu disiapkan media yang akan digunakan, air
pada autoclave diperiksa, masukkan media pada autoklaf, atur suhu pada 121°C
selama 15 menit, biarkan suhu pada autoklaf turun menjadi 0°C, kemudian buka
autoklaf dan ambil media (Radji, 2010).

47
4.7.12 Peremajaan Bakteri
Biakan murni bakteri diremajakan pada media agar padat. Diambil bakteri
escherichia coli menggunakan jarum ose steril. Kemudian jarum ose yang
mengandung bakteri digoreskan secara aseptis pada media NA. kemudian
diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C dalam inkubator. Selanjutnya bakteri
yang sudah diregenerasi disimpan didalam kulkas. Waktu 24 jam merupakan
waktu panen, yang artinya waktu tersebut telah berada pada fase logaritmik yang
mana bakteri melakukan pembelahan secara konstan dan jumlah sel meningkat
(Hasanah, 2018).
4.7.13 Pengecatan Gram
Mempersiapkan objek glass, gelas objek yang akan digunakan harus bersih
dan bebas lemak. Jarum ose disterilkan dengan cara membakarnya menggunakan
api bunsen hingga berwarna merah, dinginkan. Mengambil sampel bakteri yang
telah dibiakkan menggunakan ose steril, letakkan diatas objek glass. Kemudian
dilakukan fiksasi, dengan cara menyentuhkan permukaan bawah objek glass pada
nyala api bunsen. Selanjutnya tetesi dengan larutan Kristal violet (gram A),
diamkan selama 2 menit, cuci menggunakan aquadest mengalir dan keringkan.
Kemudian tetesi dengan larutan iodium (gram B) diamkan selama 2 menit, cuci
menggunakan aquadest mengalir dan keringkan. Selanjutnya tetesi dengan larutan
etanol 95% (gram C) diamkan selama 30 detik, cuci menggunakan aquadest
mengalir dan keringkan. Setelah itu ditetesi dengan larutan safranin (gram D) atau
zat penutup dan diamkan selama 2 menit, cuci menggunakan aquadest mengalir
48
dan keringkan. Selanjutnya amati menggunakan mikroskop dengan perbesaran
kuat (Nurhidayati, 2015).
4.8 Uji Aktivitas Antibakteri
4.8.1 Uji Aktivitas Antibakteri Kombinasi Ekstrak Etanol Daun Jambu Biji
(Psidium guajava L.) dan Ekstrak Etanol Daun Kersen (Muntigia
calabura L.) Terhadap Bakteri Escherichia Coli
Disiapkan media EMB Agar steril, selanjutnya dituangkan secara aseptis
kedalam cawan petri steril dan dibiarkan hingga memadat. Selanjutnya oleskan
bakteri uji secara zig-zag pada media EMB Agar yang telah padat. Inkubasi pada
suhu 37°C selama 24 jam. Setelah bakteri tumbuh pada media EMB kemudian
tempelkan kertas cakram yang telah direndam dalam kombinasi ekstrak etanol
daun jambu biji (Psidium guajava L.) dan ekstrak etanol daun kersen (Muntigia
calabura L.) dengan variasi konsentrasi kombinasi yaitu 25%:75%; 50%:50%;
75%:25% yang telah diencerkan dengan DMSO 10%. Selanjutnya diinkubasi
pada suhu 37°C selama 24 jam.
4.9 Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilakukan determinasi tanaman di Laboratorium Materia
Medika, Kota Batu, Malang. Kemudian proses ekstraksi, uji bebas etanol dan uji
standardisasi ekstrak dilakukan di Laboratorium Teknologi Farmasi STIKES
Bhakti Husada Mulia Madiun. Selanjutnya untuk uji aktivitas antibakteri
kombinasi dari ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun
Kersen (Muntingia calabura L.) dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi

49
STIKES Bhakti Husada Mulia Madiun. Waktu pengerjaan penelitian dimulai pada
bulan februari – april 2021.
4.10 Prosedur Pengumpulan Data
4.10.1 Pengukuran Zona Hambat
Pengamatan zona hambat antibakteri berdasarkan pada diameter hambat
yang terbentuk, yang ditunjukkan dengan adanya daerah bening disekitar kertas
cakram. Pengukuran diameter zona hambat menggunakan jangka sorong.
Pengamatan dilakukan setelah 24 jam masa inkubasi. Daerah bening merupakan
petunjuk kepekaan bakteri terhadap antibiotik atau bahan antibakteri lainnya yang
digunakan sebagai bahan uji yang dinyatakan dengan lebar diameter zona hambat
(zona bening).
Kategori zona hambat menurut Susanto dkk, (2012) adalah sebagai
berikut: zona hambat ≤ 5 mm merupakan kategori lemah, zona hambat 6-10 mm
merupakan kategori sedang, zona hambat 11-20 mm merupakan kategori kuat dan
≥ 20 mm merupakan kategori sangat kuat.
4.10.2 Teknik Analisa data
Aktivitas antibakteri kombinasi ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium
guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.) dapat diketahui dengan
cara menghitung diameter daya hambat (mm) pada 3 konsentrasi kombinasi
ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun Kersen
(Muntingia calabura L.) (25:75; 50:50; 75:25) kontrol negatif (DMSO 10%) dan
kontrol positif (ciprofloksasin 5 µgram).

50
Analisis data yang digunakan untuk mengetahui aktivitas antibakteri
ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan ekstrak etanol Daun
Kersen (Muntigia calabura L.) terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli
adalah menggunakan uji statistik One Way Anova (Analysis of Variance) dengan
sig < 0.05. Pengujian One Way Anova yang dilakukan adalah dengan
membandingkan diameter daya hambat pada 3 konsentrasi kombinasi ekstrak
etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia
calabura L.) (25:75; 50:50; 75:25) kontrol negatif (DMSO 10%) dan kontrol
positif (ciprofloksasin 5 µgram). Sebelum dianalisis dengan menggunakan metode
One Way Anova dilakukan uji normalitas terlebih dahulu. Uji normalitas yang
digunakan adalah Shapiro-wilk. Uji normalitas berfungsi untuk mengetahui data
yang diperoleh terdistribusi normal atau tidak. Apabila sig > 0.05 maka data
berdistribusi normal. Uji One Way Anova dapat dilakukan jika pada uji normalitas
dan uji homogenitas memiliki nilai hitung yang signifikan. Pada pengujian One
Way Anova dapat dikatakan memiliki perbedaan yang nyata apabila nilai sig <
0.05.
BAB V
HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
5.1 Hasil Penelitian
5.1.1 Determinasi Tanaman
Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia
calabura L.) yang digunakan pada penelitian ini, dilakukan determinasi di
Laboratorium Materia Medika Batu, Malang, Jawa Timur. Hasil
determinasi yang dilakukan menunjukkan bahwa sampel yang digunakan
dalam penelitian ini merupakan Daun dari Tanaman Jambu Biji (Psidium
guajava L.) yang merupakan family dari Myrtaceae dan Daun dari
Tanaman Kersen (Muntingia calabura L.) yang merupakan Family dari
Elaeocarpaceace.
5.1.2 Hasil Pembuatan Simplisia Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan
Daun Kersen (Muntingia calabura L.)
calabura L.) dilakukan sortasi basah, kemudian dikeringkan dan menjadi
simplisia. Simplisia yang telah kering selanjutnya dilakukan sortasi kering,
kemudian dihaluskan menggunakan blender simplisia. Dari hasil
pembuatan simplisia, sebanyak 3 kg Daun Jambu Biji (Psidium guajava
L.) basah diperoleh serbuk sebanyak 500 gram dan Daun Kersen
(Muntingia calabura L.) basah sebanyak 2.5 kg diperoleh sebanyak 450
mg serbuk.
51
52
5.1.3 Hasil Ekstraksi Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun
Kersen (Muntingia calabura L.)
Berdasarkan dari hasil penelitian yang dilakukan, sebanyak 500 gram
serbuk Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) didapatkan ekstrak kental
sebesar 63.8 gram dengan rendemen 12.76%. Hasil penelitian untuk Daun
Kersen (Muntingia calabura L.) yaitu sebanyak 450 gram serbuk
didapatkan ekstrak kental sebesar 85.5 gram dengan rendemen 19%.
5.1.4 Hasil Uji Bebas Etanol Ekstrak
Pengujian bebas etanol pada ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium
guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.) memberikan hasil
positif bebas etanol, hal ini ditandai dengan tidak adanya bau ester yang
khas dari etanol. Uji bebas etanol dilakukan untuk memastikan bahwa
ekstrak yang akan digunakan tidak terdapat etanol yang memiliki aktivitas
antibakteri.
5.1.5 Hasil Uji Standarisasi Ekstrak Parameter Spesifik
1. Organoleptis
Uji organoleptis bertujuan untuk mengevaluasi sifat fisik sediaan
yang meliputi bentuk, warna, bau dan rasa. Hasil pengamatan
organoleptis yang dilakukan pada ekstrak etanol Daun Jambu Biji
(Psidium guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.) dapat
dilihat pada tabel di bawah ini.

53
Tabel 5.1 Hasil pengujian organoleptis pada ekstrak etanol Daun

Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun Kersen
(Muntingia calabura L.)
Analisi Daun Jambu Biji Daun Kersen
Ekstrak Hasil Literatur Hasil Literatur
Bentuk Ekstrak Kental Ekstrak Kental Ekstrak Kental Ekstrak Kental
Warna Coklat Coklat Coklat Coklat
Kehitaman Kehitaman Kehitaman Kehitaman
Bau Khas Khas
Khas Khas
Aromatis Aromatis
Rasa Kelat Kelat Pahit Pahit
2. Kandungan Kimia Ekstrak
Uji kandungan kimia ekstrak dilakukan untuk mengetahui
kandungan senyawa metabolit pada ekstrak, pengujian dilakukan
menggunakan metode fitokimia. Data hasil pengujain kandungan
kimia ekstrak pada ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava
L.) dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.) dapat dilihat pada tabel
berikut :
Tabel 5.2 Hasil Pengujian Kandungan Kimia Ekstrak

Hasil Keterangan
Pereaksi
No Uji Daun Daun Daun Daun
Jambu Biji Kersen Jambu Biji Kersen
1. Flavonoid Mg, HCl Merah Merah + +
2. Fenol FeCl3 1% Hitam Hitam + +
Aquadest, Terdapat Terdapat
3. Saponin + +
HCl 2N Busa Busa
Aquadest, Hijau Hijau
4. Tanin + +
FeCl3 1% Violet Violet
Mayer Endapan Endapan
+ +
Kuning Kuning
Wagner Endapan Endapan
5. Alkaloid + +
Coklat Coklat
Dragendorf Endapan Endapan
+ +
Jingga Jingga
Steroid/ CH3COOH, Coklat
6. Merah - +
Terpenoid H2SO4 Kehitaman
Keterangan : (+) Positif
(-) Negatif
54
Hasil pengujian kandungan kimia ekstrak diatas menunjukkan
bahwa ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.)
mengandung flavonoid, fenol, saponin, tanin dan alkaloid. Sedangkan
ekstrak etanol Daun Kersen (Muntingia calabura L.) mengandung
flavonoid, fenol. Saponin, tanin, alkaloid dan steroid.
3. Kadar Senyawa Terlarut dalam Air dan Etanol
Tujuan dari Penetapan kadar senyawa terlarut dalam air dan
etanol sebagai perkisaran kasar jumlah senyawa aktif yang terkandung
dalam ekstrak yang diteliti bersifat polar (memiliki sifat kepolaran
sama dengan air) dan semi polar (memiliki sifat kepolaran sama
dengan etanol) (Utami,2016). Hasil Kadar senyawa terlarut dalam air
dan etanol dari ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.)
dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.) dapat dilihat pada tabel
dibawah ini, sedangkan hasil perhitungan dapat dilihat pada lampiran.
Tabel 5.3 Hasil Pengujian Kadar Senyawa Terlarut dalam Air dan
Etanol
Daun Jambu Biji Daun Kersen
No Parameter
Hasil Literatur Hasil Literatur
1. Kadar Tidak
Senyawa 23.350±0.150 kurang dari 17.360±0.230 13.386±0.244
Larut Air 19%
2. Kadar Tidak
Senyawa 21.166±0.125 kurang dari 14.666±0.577 15.17±0.8
Larut Etanol 18%
5.1.6 Hasil Uji Standarisasi Ekstrak Parameter Non Spesifik
Data dari hasil pengujian standarisasi ekstrak parameter Non Spesifik
dari ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun
55
Kersen (Muntingia calabura L.) dapat dilihat pada tabel dibawah ini,
sedangkan hasil dari perhitungannya dapat dilihat pada lampiran …
Tabel 5.4 Hasil Pengujian Standarisasi Ekstrak Parameter Non Spesifik

Ekstrak Etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan
Daun Kersen (Muntingia calabura L.)
Daun Jambu Biji Daun Kersen
No Parameter
Hasil Literatur Hasil Literatur
Tidak lebih Tidak lebih
1. Susut Pengeringan 5.346±0.244 2.340±0.144
dari 10% dari 10%
2. Bobot Jenis 1.223±0.002 - 1.214±0.009 -
Tidak lebih Tidak lebih
3. Kadar Air 5.740±0.167 3.363±0.265
dari 10% dari 10%
Kadar Abu Tidak lebih
4. 3.280±0.115 1.483±0.110 1.5%
a. Kadar Abu Total dari 6.1%
b. Kadar Abu Tidak Tidak lebih
0.363±0.005 0.943±0.035 1.14%
Larut Asam dari 0.5%
5.1.7 Pengujian Bakteri
1. Peremajaan Bakteri
Bakteri yang digunakan dalam penelitian ini adalah kultur murni
dari bakteri Escherichia coli yang diperoleh dari Laboratorium
Mikrobiologi, STIKES Bhakti Husada Mulia Madiun. Sebelum
melakukan pengujian aktivitas antibakteri kombinasi ektrak etanol
calabura L.), kultur murni bakteri Escherichia coli dilakukan
peremajaan terlebih dahulu.
2. Pengecatan Gram
Bakteri uji yang telah dilakukan peremajaan, selanjutnya
dilakukan pengujian pengecatan gram. Tujuan dilakukannya
pengecatan gram adalah untuk memastikan bahwa bakteri yang
tumbuh adalah bakteri Escherichia coli yang ditandai dengan warna

56
merah yang merupakan ciri khas dari bakteri gram negatif. Dari hasil
uji pengecatan gram yang dilakukan, didapatkan hasil bahwa bakteri
yang tumbuh adalah benar yaitu berupa bakteri gram negatif dengan
ciri-ciri dapat mempertahankan warna merah (safranin). Untuk lebih
jelasnya dapat dilihat pada lampiran
3. Uji Aktivitas Antibakteri
Hasil uji aktivitas antibakteri kombinasi ekstrak etanol Daun
Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia
calabura L.) terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli
menunjukkan terbentuknya zona hambat. Pada pengujian ini
dilakukan terhadap beberapa perlakukan perbandingan konsentrasi
kombinasi ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan
Daun Kersen (Muntingia calabura L.) yaitu 25%:75%, 50%:50% dan
75%:25%, kontrol positif (+) ciprofloksasin 5µg dan kontrol negatif
(-) DMSO 10%.
Tabel 5.5 Data Hasil Pengukuran Zona Hambat Kombinasi Ekstrak

Etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun
Kersen (Muntingia calabura L.) Terhadap Pertumbuhan
Bakteri Escherichia coli
Zona Hambat Kombinasi
Ekstrak Etanol Daun
Konsentrasi Respon
No Jambu Biji dan Daun Rata-rata
Perlakuan Hambatan
Kersen
I II III IV
1. 25%:75% 24.20 24.27 24.36 24.48 24.327± 0.120 Sangat Kuat
2. 50%:50% 22.73 22.65 22.52 22.79 22.672±0.116 Sangat Kuat
3. 75%:25% 20.50 20.59 20.67 20.86 20.655±0.153 Sangat Kuat
4. Kontrol + 32.08 32.16 32.22 32.00 32.115±0.095 Sangat Kuat
5. Kontrol - 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 Tidak Ada
57
Keterangan :
25%:75% = Diberi perlakuan dengan perbandingan konsentrasi
dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.)
(25%:75%)
(50%:50%)
(75%:25%)
Kontrol (+) = Kelompok kontrol positif ciprofloksasin 5µg
Kontrol (-) = Kelompok kontrol negatif DMSO 10%
5.2 Pembahasan
Penelitian ini memiliki tujuan untuk mengetahui potensi kombinasi
(Muntingia calabura L.) terhadap penghambatan pertumbuhan bakteri
Escherichia coli. Dalam penelitian ini, untuk mengetahui potensi
kombinasi ekstrak dalam menghambat pertumbuhan bakteri digunakan
parameter uji aktivitas dengan metode cakram disk berupa diameter zona
hambat (mm) yang dianalis secara statistik.
Sebelum melakukan penelitian, hal pertama yang dilakukan adalah
melakukan determinasi tumbuhan yang akan digunakan dalam penelitian.
Determinasi dilakukan untuk memastikan kebenaran bahwa tanaman yang
akan digunakan dalam penelitian ini merupakan Daun Jambu Biji
(Psidium guajava L) dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.) yang

58
berkaitan dengan ciri-ciri morfologi secara makroskopik terhadap
kepustakaan.
Setelah dideterminasi, penelitian selanjutnya adalah penyiapan
simplisia Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun Kersen
(Muntingia calabura L.). Daun yang diperoleh dari Desa Bringinan,
Kecamatan Jambon, Kabupaten Ponorogo masih berupa daun basah,
sebanyak 3 kg Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan 2.5 kg Daun
Kersen (Muntingia calabura L.). Oleh sebab itu dilakukan pengeringan
dengan cara diangin-anginkan dan terhindar dari sinar matahari secara
langsung. Hal ini dilakukan untuk menjaga senyawa-senyawa kimia yang
terkandung dalam simplisia tidak rusak. Pengeringan sangat penting
dilakukan, tujuannya adalah untuk mendapatkan simplisia yang tidak
mudah rusak, awet dan dapat disimpan dalam jangka waktu yang lama.
Selain itu, pengeringan simplisia juga dapat mengurangi kandungan air
sehingga dapat menghindari pembusukan dan pertumbuhan jamur yang
menyebabkan penurunan kualitas simplisia dapat dicegah.
Selanjutnya adalah pembuatan serbuk Daun Jambu Biji (Psidium
guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.). Sebelum dijadikan
serbuk, simplisia Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun Kersen
(Muntingia calabura L.) dibersihkan terlebih dahulu agar terbebas dari
pengotor. Kemudian simplisia diserbuk menggunakan mesin penyerbuk
atau blender simplisia dan diayak menggunkan ayakan nomor 80.
Dilakukan penyerbukkan bertujuan untuk memperluas permukaan partikel

59
bahan yang nantiya akan kontak dengan pelarut sehingga saat penyarian
berlangsung efektif.
Setelah Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun Kersen
(Muntingia calabura L.) menjadi serbuk, selanjutnya adalah pembuatan
ekstrak. Ekstraksi Daun Jambu Biji (Psidium guajava L) dan Daun Kersen
(Muntingia calabura L.) dilakukan dengan menggunakan metode maserasi
dengan pelarut yang digunakan adalah etanol 96%. Pemilihan etanol 96%
sebagai pelarut dikarenakan etanol tidak bersifat selektif, sehingga
diharapkan senyawa yang terkandung dalam simplisia dapat ditarik lebih
banyak. Selain itu, karena etanol 96% memiliki absorbsi yang baik, mudah
menguap, lebih cepat untuk mendapatkan ekstrak kental jika dibandingkan
dengan etanol 70% dan sulit ditumbuhi kapang dan khamir (Amelia dan
Susilo, 2020). Dari hasil ekstraksi tersebut, diperoleh ekstrak kental Daun
Jambu Biji (Psidium guajava L.) sebanyak 63.8 gram dengan rendemen
ekstrak sebesar 12.76% dan ekstrak kental Daun Kersen (Muntingia
calabura L.) sebanyak 85.5 gram dengan rendemen ekstrak sebesar 19%.
Dalam Farmakope Herbal Indonesia Edisi II, (2017) perolehan rendemen
untuk ekstrak Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) tidak kurang dari
12.3%, hal ini sesuai dengan perolehan rendemen yang dilakukan oleh
peneliti. Dalam penelitian yang dilakukan oleh Puspitasari dan Wulandari,
(2017) perolehan rendemen ekstrak Daun Kersen (Muntingia calabura L.)
adalah sebesar 17.5%, hasil rendemen tersebut tidak jauh berbeda dengan
hasil rendemen yang diperoleh oleh peneliti. Hasil rendemen dapat

60
dipengaruhi oleh beberapa faktor antara lain, jenis pelarut yang digunakan,
proses pengadukan ketika maserasi, waktu maserasi dan suhu.
Setelah diperoleh ekstrak kental, selanjutnya dilakukan pengujian
standarisasi ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan
Daun Kersen (Muntingia calabura L.). Pengujian standarisasi yang
dilakukan meliputi standarisasi parameter spesifik dan parameter non
spesifik. Parameter spesifik yang diujikan meliputi uji organoleptis, uji
kandungan senyawa kimia ekstrak, uji senyawa terlarut dalam pelarut
tertentu yang meliputi senyawa terlarut dalam air dan senyawa terlarut
dalam etanol.
Pada uji organoleptis ekstrak Daun Jambu Biji (Psidium guava L.)
yang meliputi bentuk, bau, warna dan rasa dihasilkan ekstrak berbentuk
ekstrak kental, berwarna coklat kehitaman, berbau khas dan memiliki rasa
kelat. Hasil yang diperoleh ini sesuai dengan Farmakope Herbal Indonesia
Edisi II, (2017). Sedangkan pengujian pada ekstrak etanol Daun Kersen
(Muntingia calabura L.) diperoleh hasil ekstrak berbentuk ekstrak kental,
berwarna coklat kehitaman, berbau khas dan memiliki rasa yang pahit.
Hasil yang diperoleh ini sama dengan hasil yang diperoleh dari penelitian
Setiawan dkk, (2017). Tujuan dilakukannya pengujian organoleptik ini
adalah untuk memberikan pengenalan awal ekstrak yang akan digunakan
dalam penelitian secara sederhana dan objektif dengan menggunakan
panca indra.
61
Uji yang selanjutnya adalah pengujian kandungan senyawa ekstrak.
Metode yang digunakan untuk menguji kandungan senyawa ekstrak dalam
penelitian ini adalah fitokimia. Tujuan dilakukannya uji fitokimia dalah
untuk mengetahui kandungan senyawa metabolit di dalam ekstrak. Dari
hasil penelitian yang dilakukan, diperoleh hasil bahwa ekstrak etanol Daun
Jambu Biji (Psidium guajava L.) positif mengandung flavonoid, fenol,
saponin, tannin dan alkaloid. Sedangkan ekstrak etanol Daun Kersen
(Muntingia calabura L) positif mengandung flavonoid, fenol, saponin,
tannin, alkaloid dan steroid.
Pengujian standarisasi ekstrak parameter spesifik yang terakhir
dilakukan oleh peneliti adalah, kadar senyawa terlarut dalam pelarut
tertentu yang meliputi, kadar senyawa terlarut dalam air dan kadar
senyawa terlarut dalam etanol. Dari hasil penelitian yang dilakukan kadar
senyawa terlarut dalam air untuk ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium
guajava L.) adalah sebesar 23.350±0.150, sedangkan untuk ekstrak etanol
Daun Kersen (Muntingia calabura L.) adalah sebesar 17.360±0.230. Pada
penelitian kadar senyawa terlarut dalam etanol untuk ekstrak etanol Daun
Jambu Biji (Psidium guajava L.) diperoleh hasil sebesar 21.166±0.125,
sedangkan untuk ekstrak etanol Daun Kersen (Muntingia calabura L.)
adalah sebesar 14.666±0.125. Hasil kadar senyawa terlarut dalam air dan
etanol pada daun jambu biji sudah sesuai dengan buku Materia Medika
Indonesia, yaitu kadar senyawa larut air tidak kurang dari 19% dan kadar
senyawa larut etanol tidak kurang dari 18%. Sedangkan hasil kadar
62
senyawa terlarut dalam air dan etanol pada daun kersen hampir sama
dengan hasil penelitian yang dilakukan oleh Nurhasanah, (2012) yakni
kadar senyawa larut air sebesar 13.386±0.244 dan kadar senyawa larut
etanol sebesar 15.17±0.18. Pengujian kadar senyawa terlarut dalam
pelarut tertentu ini bertujuan untuk memberikan perkisaran kasar jumlah
kandungan senyawa kimia ekstrak bersifat polar (memiliki sifat kepolaran
sama dengan air) dan semi polar (memiliki sifat kepolaran sama dengan
etanol). Dari hasil penelitian yang dilakukan menunjukkan bahwa kadar
senyawa dalam ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan
Daun Kersen (Muntingia calabura L.) lebih banyak terlarut dalam air, hal
ini menunjukkan bahwa ekstrak Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.)
dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.) lebih banyak mengandung
senyawa polar. Hal tersebut dapat disebabkan karena pada proses ekstraksi
pelarut yang digunakan adalah etanol yang merupakan pelarut polar.
Tahap standarisasi ekstrak selanjutnya adalah pengujian parameter
non spesifik yang meliputi susut pengeringan, bobot jenis, kadar air dan
kadar abu yang meliputi kadar abu total dan kadar abu tidak larut asam.
Penetapan susut pengeringan bertujuan untuk memberikan batasan
maksimal tentang seberapa besarnya senyawa yang hilang pada proses
pengeringan. Pengujian susut pengeringan ini dilakukan dengan cara
pengukuran sisa zat setelah dilakukan pengeringan pada temperature
1050C selama 30 menit atau sampai diperoleh bobot konstan. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa susut pengeringan yang diperoleh Daun

63
Jambu Biji (Psidium guajava L.) adalah 5.346±0.244. Hasil yang
diperoleh dari penelitian ini sesuai dengan yang tercantum dalam
Farmakope Herbal Indonesia, (2017) yaitu susut pengeringan untuk Daun
Jambu Biji (Psidium guajava L.) tidak lebih dari 10%. Sedangkan hasil
susut pengeringan yang diperoleh Daun Kersen (Muntingia calabura L.)
adalah 2.340±0.144. hasil yang diperoleh dari penelitian ini sesuai dengan
penelitian yang dilakukan oleh Pramiastuti dkk, (2020) yang menyatakan
bahwa nilai susut pengeringan berdasarkan literature secara umum adalah
kurang dari 10%.
Parameter non spesifik selanjutnya adalah bobot jenis. Pengujian
bobot jenis ini dilakukan dengan menggunakan piknometer. Sebelum
digunakan, piknometer harus dibersihkan dan dikeringkan terlebih dahulu.
Hal ini dilakukan untuk mendapatkan bobot kosong dari alat. Ekstrak yang
digunakan untuk pengujian ini diencerkan terlebih dahulu menjadi 5%
dan digunakan aquadest sebagai pelarutnya. Penetapan bobot jenis
bertujuan untuk memberikan gambaran mengenai kandungan kimia yang
terlarut dalam ekstrak. Dari hasil penelitian yang dilakukan bobot jenis
ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) adalah 1.223±0.002.
Sedangkan hasil yang diperoleh ekstrak etanol Daun Kersen (Muntingia
calabura L.) adalah 1.214±0.009. Hingga saat ini belum ada acuan
spesifik tentang syarat berapa kadar bobot jenis pada kedua ekstrak.
Pengujian parameter non spesifik yang selanjutnya adalah kadar air.
Penetapan kadar air bertujuan untuk mengetahui batasan maksimal atau

64
rentang tentang besarnya kandungan air dalam ekstrak. Kadar air yang
rendah membuat ekstrak dapat disimpan dalam jangka waktu yang lama,
sehingga kemungkinan rusak akibat jamur sangat kecil. Dari hasil
penelitian yang dilakukan, kadar air pada ekstrak etanol Daun Jambu Biji
(Psidium guajava L.) adalah 5.740±0.167. Hasil yang diperoleh ini sudah
sesuai dengan Farmakope Herbal Indonesia, (2017) yang menyatakan
bahwa kadar air pada daun jambu biji tidak lebih dari 10%. Hasil
penelitian yang dilakukan pada ekstrak etanol Daun Kersen (Muntingia
calabura L.) diperoleh kadar air sebesar 3.363±0.265. hasil yang diperoleh
ini sudah sesuai dengan pesyaratan kadar air ekstrak secara umum, yaitu
tidak lebih dari 10%.
Selanjutnya adalah pengujian kadar abu yang meliputi kadar abu total
dan kadar abu tidak larut asam. Penetapan kadar abu total bertujuan untuk
memberikan gambaran tentang tingkat pengotor oleh kontaminan yang
berupa senyawa anorganik. Sedangkan pengujian kadar abu tidak larut
asam bertujuan untuk memberikan gambaran tingkat pengotor oleh pasir
dan tanah. Prinsipnya yaitu bahan dipanaskan pada temperatur tinggi
dimana senyawa organik dapat menguap sehingga hanya tersisa senyawa
anorganiknya yang tertinggal. Hasil penelitian yang dilakuka, kadar abu
total ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajav L.) adalah
3.280±0.115. hasil yang diperoleh ini sesuai dengan Farmakope Herbal
Indonesia Edisi II, (2017) yakni tidak lebih dari 6.1%. Sedangkan hasil
penelitian kadar abu ekstrak etanol Daun Kersen (Muntingia calabura L.)
65
adalah sebesar 1.483±0.110. Hasil kadar abu total yang didapatkan peneliti
tidak jauh berbeda dengan hasil penelitian yang dilakukan oleh Syahara
dan Siregar, (2019) yakni 1.5%. untuk pengujian kadar abu tidak larut
asam ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) diperoleh hasil
0.360±0.005. Hasil yang diperoleh dari penelitian sesuai dengan
Farmakope Herbal Indonesia Edisi II, (2017) yakni tidak lebih dari 0.5%.
Sedangkan hasil penelitian kadar abu total ekstrak etanol Daun Kersen
(Muntingia calabur L.) yang diperoleh adalah 0.943±0.035. Hasil kadar
abu total yang didapatkan peneliti tidak jauh berbeda dengan hasil
penelitian yang dilakukan oleh Syahara dan Siregar, (2019) yakni 1.14%.
Selanjutnya dilakukan pengujiaan bebas etanol. Dilakukannya uji
bebas etanol ini bertujuan untuk memastikan bahwa ekstrak Daun Jambu
Biji (Psidium guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.)
terbebas dari etanol yang nantinya akan menggangu aktivitas antibakteri
dari ekstrak. Dari hasil uji bebas etanol yang dilakukan pada ekstrak Daun
Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia calabura
L.) diperoleh hasil bahwa ekstrak tersebut positif bebas etanol yang
ditandai dengan tidak tercium bau ester yang khas dari etanol.
Selanjutnya adalah peremajaan bakteri. Bakteri yang digunakan pada
penelitian ini adalah Escherichia coli. Bakteri yang digunakan berasal dari
Laboratorium Mikrobiologi, STIKES Bhakti Husada Mulia Madiun.
Bakteri ini diremajakan pada medium Eosin Methylene Blue Agar
(EMBA) dan diinkubasi pada suhu 370C selama 1x24 Jam.

66
Bakteri Eschericia coli yang sudah diremajakan selanjutnya dilakukan
pengujian pengecatan gram. Pengecatan gram bertujuan untuk memastikan
bahwa bakteri uji adalah Escherichia coli yang merupakan bakteri gram
negatif. Pada saat pengecatan gram gram positif akan terlihat berwarna
ungu sedangkan untuk bakteri gram negatif akan terlihat berwarna merah
muda. Dalam pengujian yang dilakukan setelah dilihat dibawah mikroskop
dengan perbesaran 1000x diperoleh hasil berwarna merah muda yang
mengindikasikan bahwa bakteri merupakan bakteri gram negatif. Warna
merah yang ditimbulkan oleh bakteri gram negative ini diakibatkan karena
bakteri gram negatif mempunyai komposisi dinding sel yang sebagian
besar tersusun dari lapisan lipid yang mudah rusak apabila dicuci dengan
alkohol, sehingga saat dilakukan pewarnaan menggunakan Kristal violet
kurang dapat mempertahankan warna dan ketika diberi warna safranin
akan berubah menjadi warna merah (Ulfah dkk, 2017).
Pengujian aktivitas antibakteri terhadap bakteri Eschericia coli dari
dilakukan secara kombinasi. Karena pada penelitian sebelumnya telah
dilakukan pengujian aktivitas antibakteri dari ekstrak etanol Daun Jambu
Biji (Psidium guajava L.) dan ekstrak etanol Daun Kersen (Muntingia
calabura L.) yang dilakukan secara terpisah.
Pengujian aktivitas antibakteri kombinasi ekstrak etanol Daun Jambu
Biji (Psidium guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.)
dilakukan terhadap bakkteri Escherichia coli. Pada penelitian yang

67
dilakukan oleh Girsang dkk, (2019) menunjukkan bahwa ekstrak etanol
Daun Jambu Biji (Psidium guajva L.) dapat menghambat pertumbuhan
bakteri Escherichia coli pada konsentrasi 25% dengan rata-rata diameter
zona hambatnya adalah 9.23 mm. Pada penelitian Handoko dkk, (2019)
menunjukkan bahwa ekstrak etanol Daun Kersen (Muntingia calabura L.)
pada konsentrasi 12.5% sudah dapat memberikan zona hambat pada
bakteri Escherichia coli dengan rata-rata diameter zona hambat sebesar
12.83 mm. Penelitian yang dilakukan tersebut terpisah, berbeda dengan
penelitian ini yang dilakukan secara kombinasi dengan mengkombinasikan
kedua ekstrak tersebut.
Seri konsentrasi kombinasi ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium
guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.) yang digunakan
pada penelitian ini adalah 25%:75%, 50%:50% dan 75%:25%.
Ciprofloksasin 5µg sebagai kontrol positif dan sebagai kontrol negatif
digunakan DMSO 10%. Hasil yang diperoleh pada pengujian aktivitas
antibakteri tersebut ditandai dengan terbentuknya daya hambat (mm)
disekitar kertas cakram.
Berdasarkan tabel 5.5 dapat diketahui bahwa pada konsentrasi
kombinasi 25%:75%, 50%:50% dan 75%:25% menghasilkan rata-rata
diameter zona hambat secara berturut-turut sebesar 24.327 mm, 22.672
mm dan 20.655 mm. Kontrol positif yang digunakan yaitu ciprofloksasin
menghasilkan rata-rata diameter zona hambat sebesar 32.115 mm,
sedangkan DMSO 10% yang digunakan sebagai kontrol negatif tidak

68
memberikan zona hambat. Menurut susanto dkk, (2012) kategori zona
hambat adalah sebagai berikut : zona hambat ≤ 5 mm merupakan kategori
lemah, zona hambat 6-10 mm merupakan kategori sedang, zona hambat
11-20 mm merupakan kategori kuat dan zona hambat ≥ 20 mm merupakan
kateori sangat kuat. Dari hasil penelitian yang diperoleh, dapat diketahui
bahwa diameter zona hambat kombinasi ekstrak etanol Daun Jambu Biji
(Psidium guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.) pada
pertumbuhan bakteri Escherichia coli baik pada konsentrasi kombinasi
25%:75%, 50%:50% dan 75%:25% memiliki kategori zona hambat sangat
kuat karena diameter zona hambat yang terbentuk adalah ≥ 20 mm.
Dari hasil penelitian yang dilakukan tersebut dapat diketahui bahwa
pada konsentrasi kombinasi ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium
guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.) 25%:75%
menghasilkan diameter zona hambat yang paling besar yaitu sebesar
24.327 mm. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol Daun Kersen
(Muntingia calabura L.) lebih dominan dalam menghambat pertumbuhan
bakteri Escherichia coli, dibuktikan dengan semakin tinggi konsentrasi
Daun Kersen yang terkandung dalam kombinasi maka diameter zona
hambat yang terbentuk semakin luas. Jumlah ekstrak etanol Daun Kersen
(Muntingia calabura L.) yang lebih banyak dapat meningkatkan aktivitas
ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dalam menghambat
pertumbuhan bakteri Escherichia coli karena pada ekstrak tunggal
diameter zona hambat yang dihasilkan oleh ekstrak etanol Daun Kersen
69
(Muntingia calabura L.) lebih besar dibandingkan dengan ekstrak tunggal
Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.). Menurut Dampuk, (2017) bila dua
agen antimikroba bekerja secara bersamaan pada populasi mikroba yang
homogen maka dapat memberikan efek yang sinergis, yang artinya dapat
memberikan efek yang lebih baik. Peningkatan daya hambat ini diduga
akibat dari mekanisme kerja yang saling mendukung dari kandungan-
kandungan yang terdapat dalam ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium
guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.).

70
BAB VI
KESIMPULAN DAN SARAN
6.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian tentang uji aktivitas antibakteri kombinasi
ekstrak dari ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun
Kersen (Muntingia calabura L.) terhadap bakteri Escherichia coli dapat
diambil kesimpulan bahwa :
1. Kombinasi ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan
Daun Kersen (Muntingia calabura L.) memiliki aktivitas antibakteri
terhadap bakteri Escherichia coli yang ditunjukkan dengan
terbentuknya zona hambat pada perbandingan konsentrasi 25%:75%,
50%:50% dan 75%:25% yang menghasilkan rata-rata diameter zona
hambat secara berturut-turut sebesar 24.327 mm, 22.672 mm dan
20.655 mm.
2. Konsentrasi terbaik dari kombinasi ekstrak etanol Daun Jambu Biji
(Psidium guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.) yang
dapat menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli adalah pada
konsentrasi 25%:75% dengan menghasilkan rata-rata diameter zona
hambat sebesar 24.327 mm.
71
72
6.2 Saran
1. Diperlukan penelitian lebih lanjut tentang aktivitas antibakteri dari
Daun Kersen (Muntingia calabura L.) terhadap bakteri pathogen
lainnya.
2. Diperlukan penelitian lebih lanjut tentang uji aktivitas antibakteri dari
Daun Kersen (Muntingia calabura L.) dengan menggunakan metode
penyarian yang lain.
3. Diperlukan penelitian lebih lanjut untuk membuat formulasi dan
sediaan dari kombinasi ekstrak etanol Daun Jambu Biji (Psidium
guajava L.) dan Daun Kersen (Muntingia calabura L.) sebagai
antibakteri.
DAFTAR PUSTAKA
Adriana, Riska., 2017. Keberadaan Bakteri Escherichia coli di Kawasan Wisata

Pantai Tanjung Bayang dan Akkarena Kota Makasar. Skripsi. FKIP
Universitas Hasanudin : Makasar.
Agustina, R., 2018. Efektivitas Ekstrak Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.)
Terhadap Bakteri Aeromonas Hydrophila secara In Vitro. Skripsi.
Universitas Islam Negri Raden Intan : Lampung.
Agustina, W., Nurhamidah., dan Handayani, D., 2017. Skrining Fitokimia dan
Aktivitas Antioksidan Beberapa Fraksi dari Kulit Batang Jarak (Ricinus
communis L.). ALTROP Jurnal Pendidikan dan Ilmu Kimia. Volume 1,
Nomor 2 : 117 – 122.
Anbhuselvam, V. L., Karyana, I. P. G., dan Purniti, N. P. S., 2019. Implementasi

Lintas Diare dan Penggunaan Obat Antidiare pada Anak dengan Diare.
Volume 10, Nomor 3 : 817 – 820.
Arieska, P.K., dan Herdian, N., 2018. Pemilihan Teknik Sampling Berdasarkan
Perhitungan Efisiensi Relatif. Volume 6, Nomor 2 : 166 – 171.
Aswad, H., 2018. Uji Efektivitas Sediaan Gel Ekstrak Etanol Daun Cabai Rawit
(Capsicum frutescens L.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Penyebab
Jerawat Propionibacterium Acnes Secara In Vitro. Skripsi. Universitas
Islam Negri Alauddin : Makasar.
Aswarita, R., 2013. Interaksi Ekstrak Daun Lidah Buaya (Aloe vera L.) dan Daun
Jambu Biji (Psidium guajava L.) Terhadap Daya Hambat Escherichia coli
secara In Vitro. Volume 1, Nomor 2 : 115 – 120.
BPOM, RI., 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia : Jakarta.
Ciptaningtyas., dan Rizke, V., 2014. Antibiotik Untuk Mahasiswa Kedokteran.

Graha Ilmu : Yogyakarta.
Dampuk, B. J., 2017. Uji Aktivitas Antibakteri Kombinasi Ekstrak Etanol Biji
Mahoni (Swietenia mahagoni Jacq.) dan Daun Sirih (Piper betle L.)
Terhadap Staphylococcus aureus dengan Metode Difusi. Skripsi.
Universitas Setia Budi : Surakarta.
73
74
Dewi, I. P., 2017. Perbandingan Daya Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Jambu
Biji (Psidium guajava L.) dan Ekstrak Etanol Daun Sawo (Manilkara
zapota L.) Terhadap Bakteri Escherichia Coli. Jurnal Akademika Farmasi
Prayoga. Volume 2, Nomor 1 : 7 – 13.
Dhafin, A. A., 2017. Analisis Cemaran Bakteri Coliform Escherichia coli pada
Bubur Bayu Home Industry di Kota Malang dengan Metode TPC dan MPN.
Skripsi. Universitas Islam Negri Maulana Malik Ibrahim : Malang.
Fajar, D. S., 2013. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Ubi Jalar Ungu
(Ipomoea batatas var Ayamurasaki) terhadap Bakteri Staphylococcus
aureus dan Pseudomonas aeruginosa dengan Metode Difusi Agar. Skripsi.
Universitas Islam Negri Alauddin : Makasar.
Fajriah, S., dan Megawati., 2015. Penapisan Fitokimia dan Uji Toksisitas dari
Daun Myristica fatua hout. Chemica et Natura Acta. Volume 3, nomor 3 :
116 – 119.
Febriana, L., Riris, I. D., dan Silaban, S., 2017. Uji Aktivitas Antibakteri terhadap
Escherichia coli dan Antioksidan dari Ekstrak Air Tumbuhan Binara
(Artemisia vulgaris L.). Volume 9, Nomor 2 : 311 – 317.
Fitriantani, A. R., 2017. Kajian Aktivitas Kombinasi Ekstrak Etanol Daun

Binahong (Anredera cardifolia (Ten.) Steenis) dan Daun Lidah Buaya
(Aloe barbadensis Miller) terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Skripsi. Universitas Setia Budi : Surakarta.
Girsang, G. E., Rini, D. I., dan Woda, R. R., 2019. Uji Aktivitas Antibakteri
Ekstrak Etanol Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) terhadap
Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli. Cendana Medical Jurnal. Edisi 18,
Nomor 3 : 450 – 455.
Halim, F., dkk. 2017. Hubungan Jumlah Koloni Escherichia coli dengan Derajat
Dehidrasi pada Diare Akut. Volume 19, Nomor 2 : 81 – 85.
Handoko, D.A., Setyawati, T., Asrinawati, N. A., 2019. Uji Efektivitas

Antibakteri Ekstrak Daun Kersen (Muntingia calabura L.) Terhadap
Bakteri Escherichia coli. Volume 6, Nomor 1 : 9 – 21.
Hapsoh., dan Hasanah Y., 2011. Budidaya Tanaman Obat dan Rempah. USSU
Press : Medan.
Hasanah, U., 2018. Uji Aktivitas Antibakteri Kombinasi Ekstrak Etanol 96%
Rimpang Kunyit Putih (Curcuma longa L.) dan Pare (Momordica charantia
L.) terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Skripsi.
Universitas Islam Negri Maulana Malik Ibrahim : Malang.
75
Ilkafah., 2018. Daun Kersen (Muntingia calabura L.) sebagai Alternatif pada
Penderita Gout Artritis. Pharmacy Medical Journal. Volume 1, Nomor 1 :
33 – 41.
Irawan, A., Nurkhasanah., Sulistyani, N., 2019. Aktivitas Antibakteri Fraksi Etil
Asetat Daun Cabe Rawit terhadap Staphylococcus pyogenes dan Profil
Bioutografi. Volume 5, Nomor 2 : 61 – 68.
Irsyad, M., 2013. Standardisasi Ekstrak Etanol Tanaman Katupang Air

(Piperomia pellucida L. Kunth). Skripsi. Universitas Islam Negri Syarif
Hidayatullah : Jakarta.
Jawi, I. M., 2014. Farmakologi Obat – obat Antidiare. Universitas Udayana :

Bali.
Juriah, S., Yolanda, N., dan Surya, A., 2020. Efektivitas Ekstrak Etanol Daun
Kersen terhadap Staphylococcus aureus dan Salmonella typhi. Kajian
Ilmiah Problema Kesehatan. Volume 5, Nomor 2 : 338 – 344.
Khasanah, I., Sarwiyono., dan Surjowardoyo, P., 2014. Ekstrak Etanol Daun
Kersen (Muntingia calabura L.) sebagai Antibakteri Terhadap
Streptococcus agalactiae Penyebab Mastitis Subklinis pada Sapi Perah.
Fakultas Peternakan. Universitas Brawijaya : Malang.
Kurniawati, L. H., 2019. Hubungan Pengetahuan Masyarakat Terhadap Perilaku

Penggunaan Antibiotik (Studi Kasus pada Konsumen Apotek-apotek di
Kecamatan Glagah Kabupaten Lamongan). Skripsi. Universitas Islam
Negri Maulana Malik Ibrahim : Malang.
Kussumaningrum, A. D., 2019. Uji Aktivitas Antibakteri Kombinasi Elstrak

Cacing Tanah (Lumbricus rubellus) dan Rimpang Kunyit (Curcuma Longa
L.) Terhadap Salmonella Typi. Karya Tulis Ilmiah. Stikes Bhakti Husada
Mulia : Madiun.
Kusuma, S. A. F., 2010. Escherichia coli. Universitas Padjajaran : Bandung.
Lathif, Y., 2016. Pengaruh Lama Fermentasi dan Variasi Konsentrasi Daun
Kersen (Muntingia calabura L.) terhadap Total Asam pH Medium dan
Aktivitas Antioksidan Kefir Air Teh Daun Kersen (Muntingia calabura L.).
Skripsi. Universitas Maulana Malik Ibrahim : Malang.
Lestari, A. P., Rosyid, A., dan Wahyudin, I., 2016. Aktivitas Ekstrak Daun Cabe
Rawit (Capsicum frutescens L.) terhadap Penghambatan Pertumbuhan
Bakteri Escherichia coli secara In Vitro. Volume 1, Nomor 2 : 1 – 6.
76
Lestasri, R. F., Suhaini., dan Wildaniah, W., 2018. Penetapan Parameter Standar
Simplisia dan Ekstrak Etanol daun Kratom (Mitragyna speciosa korth)
yang Tumbuh di Kabupaten Kapuas Hulu dan Kabupaten Melawi. Jurnal
Insan Farmasi Indonesia. Volume 1, Nomor 1 : 72 – 84.
Mukhriani., 2014. Ekstraksi, Pemisahan Senyawa, dan Identifikasi Senyawa Aktif.

Volume 7, Nomor 2 : 361 – 367.
Meiliza, E. R., dan Hariyatmi. 2013. Pengaruh Jus Buah Kersen Terhadap Kadar
Asam Urat.
Nov, D. A., 2014. Tinjauan Pustaka Ekstraksi Dekok. Tersedia dalam

https://id.scribd.com/doc/246224160/Tinjauan-Pustaka-Ekstraksi-Dekok
(diakses 19 November 2020).
Nurhidayati, S., Faturrahman., dan Ghazali, M., 2015. Deteksi Bakteri Patogen
yang Berasosiasi dengan Kappaphycus Alvarezii (doty) Bergejala Penyakit
ICE – ICE. Jurnal Sains Teknologi & Lingkungan. Volume 1, Nomor 2 : 24
– 30.
Nursanty, R., 2017. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Metanol Tanaman Lawsonia

inermis L. dan Capsicum Futescens L. Terhadap Bakteri Staphylococcus
aureus ATCC 29231. FMIPA. Universitas Syah Kuala : Banda Aceh.
Odianti, G. T., 2010. Uji Aktivitas Antibakteri Alfa mangospita Kulit Buah
Manggis. Skripsi. Universitas Muhammadiyah : Surakarta.
Panjaitan, Y., R., 2017. Uji Kombinasi Ekstrak Etanol Daun Putihan
(chromolaena odorata) dengan siprofloksasin Terhadap Pertumbuhan
Bakteri Staphylococcus Aureus dan Pseudomonas Aeruginosa. Skripsi.
Universitas Sumatera Utara : Medan.
Rahim, A., dan Nurmayanti, P. W., 2020. Aktivitas Antibakteri Fraksi Daun Cabe
Rawit (Capsicum futescens L.) terhadap Bakteri Staphylococcus aureus.
Volume 3, Nomor 2 : 134 – 142.
Rahmadiah., 2009. Penetapan Beberapa Parameter Spesifik dan Non Spesifik

Ekstrak Etanol Daun Asam Jawa (Tamarindus indica L.). Skripsi.
Universitas Indonesia : Depok.
Ratnasari, M., 2017. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Kersen (Muntingia
calabura L.) dalam Bentuk Sediaan Gel terhadap Staphylococcus aureus
dan Escherichia coli. Jurnal Skripsi. Universitas Atma Jaya Yogyakarta :
Yogyakarta.
77
Ratnasari, P., 2016. Penggunaan Antibiotik pada Pasien Diabetik Foot Ulcer
(Penelitian di IRJ Poli Bedah RSUD Dr. Soetomo Surabaya. Skripsi.
Universitas Airlangga : Surabaya.
R.I., Kementrian Kesehatan., 2018. Laporan Nasional RISKESDAS 2018.

Jakarta : Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan.
Rungga, F. B., dkk. 2015. Efektivitas Ekstrak Daun Cabe Rawit (Capsicum
frutescens L.) sebagai Hepatoprotektor. Fakultas Kedokteran. Universitas
Islam Sultan Agung : Semarang.
Rusmiati., 2010. Pengaruh Metode Ekstraksi terhadap Aktivitas Antimikroba

Ekstrak Metanol Daun Mimba (Azadirachta indica Juss.). Skripsi.
Universitas Islam Negri Alauddin : Makasar.
Sagala, S., 2018. Uji Teratogenik Ekstrak Etanol Daun Kersen (Muntingia
calabura L.) secara Makroskopis pada Fetus Mencit Putih (Mus musculus).
Sariyati, W., 2016. Uji Aktivitas Ekstrak Etanol Daun Kersen (Muntingia
calabura L.) terhadap Mencit (Mus musculus) sebagai Antiinflamasi.
Skripsi. Universitas Islam Negri Alauddin : Makasar.
Satiyarti, R. B., Yana, Y., dan Fatimatuzzahra. 2019. Penggunaan Ekstrak Daun
Jambu Biji (Psidium guajava L.) sebagai Ovisida Keong Mas (Pomacea
canaliculata L.) Volume 6, Nomor 1 : 32 – 35.
Shobri, S. Z., 2018. Uji Daya Hambat Sari Daun Kersen (Muntingia calabura L.)
pada Pertumbuhan Salmonella thypi. Karya Tulis Ilmiah. Politeknik
Kesehatan Kendari : Kendari.
Siddiqua, A., dkk. 2010. Antioxidant Activity and Estimation of Total Phenolic
Content of Muntingia Calabura by Colorimetry. Volume 2, Nomor 1 : 205 –
208.
Sofya, S. W., 2018. Uji Aktivitas Antibakteri Kombinasi Ekstrak Etanol Daun
Jambu Biji (Psidium guajava L.) dan Daun Binahong (Anredera cardifolia
(Ten.) Steenis) terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 secara Dilusi.
Sugiyono. 2011. Metode Penelitian Kuantitatif, Kualitatif dan R&D. Alfabeta :

Bandung.
Sugiyono. 2015. Metode Penelitian Pendidikan (Pendekatan Kuantitatif,

Kualitatif dan R&D). Alfabeta : Bandung.
78
Sumiwi, S. A., dkk. 2013, 6 – 7 November. Penetapan Parameter Standarisasi

Ekstrak Herba Putrimalu (Mimosa pudica Linn.) dan Uji Toksisitas
Akutnya Pada Mencit. Disampaikan pada Seminar and Workshop The 1st
Indonesia Conference On Clinical Pharmacy. Universitas Padjajaran :
Bandung.
Supriosa, M. C., 2017. Pengaruh Ekstrak Etanol Daun Jambu Biji (Psidium
guajava L.) Terhadap Penurunan Kadar Kolesterol Total Tikus Putih
(Rattus nocvegicus) Jantan. Skripsi. Universitas Sanata Dharma :
Yogyakarta.
Susanto, D., Sudrajat., Ruga, R., 2012. Studi Kandungan Bahan Aktif Tumbuhan
Meranti Merah (Shorea ieprosula Miq.) sebagai Sumber Senyawa
Antibakteri. Mulawarman Scientifie. Volume 11, Nomor 2 : 181 – 190.
Syahara, S., dan Siregar, Y. F., 2019. Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun
Kersen. Jurnal Kesehatan Ilmiah Indonesia. Volume 4, Nomor 2 : 121 –
125.
Syamsiah., 2016. Taksonomi Tumbuhan Tinggi. Buku Ajar. Makasar : FMIPA

UNM.
Tjay, T. H., dan Rahardja, K., 2015. Obat – obat Penting. Ed 7th. PT Alex Media
Komputindo : Jakarta.
Utami, N., dan Luthfiana, N., 2016. Faktor-faktor yang Memengaruhi Kejadia
Diare Pada Anak. Volume 5, Nomor 4 : 101 – 106.
Utami, Y. P., Taebe, B., dan Fatmawati., 2016. Standarisasi Parameter Spesifik
dan Non Spesifik Ekstrak Etanol Daun Murbei (Morus alba L.) Asal
Kabupateng Shopeng Provinsi Sulawesi Selatan. Journal of Pharmaceutical
and Medicinal Sciences. Volume 1, Nomor 2 : 48 – 52.
WHO., 2016. The Treatment of Diarrhea in Preventing Infantile Diarrhea in the

Developing World. Curr Trop Med Rep.1 : 97 – 105.
WHO. 2017. Data and Statistic.
Yuana, D. A., 2016. Gambaran Penggunaan Antibiotik dengan Resep dan Tanpa
Resep Dokter di Beberapa Apotek di Area Jember Kota. Skripsi. Universitas
Jember : Jember.
Yuliana, I., Yuliet., dan Khaerati K., 2018. Efek Antipiretik Ekstrak Daun Cabe
Rawit (Capsicum annum L.) Terhadap Tikus Putih Jantan (Ratus
norvegicus) yang Diinduksi Vaksin Difteri Pertusis Tetanus. Biocelebes.
Volume 12, Nomor 3 : 65 – 70.
79
Yunita., 2012. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak dan Fraksi Ekstrak Daun Cabe
Rawit (Capsicum frutescens L.) dan Identifikasi Golongan Senyawa dari
Fraksi Teraktif. Skripsi. Universitas Indonesia : Depok.

13 Juli 2021 (FULL)

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

13 Juli 2021 (FULL)

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

SKRIPSI

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI KOMBINASI EKSTRAK DARI

PROGRAM STUDI S1 FARMASI

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI KOMBINASI EKSTRAK DARI

Diajukan untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam mencapai

PROGRAM STUDI S1 FARMASI

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI KOMBINASI EKSTRAK DARI

apt. Susanti Erikania, M.Farm apt. Vevi Maritha, M.Farm

apt. Vevi Maritha, M.Farm

1. Apt. Yetti Hariningsih, M. Farm :

2. Apt. Susanti Erikania, M. Farm :

3. Apt. Vevi Maritha, M. Farm :

Zaenal Abidin, S.KM., M.Kes (Epid)

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

BAB III KERANGKA KONSEPTUAL DAN HIPOTESA PENELITIAN

BAB IV METODE PENELITIAN

Nomor Judul Gambar Halaman

sayang, hidayah dan rahmat-NYA sehingga penyusunan laporan proposal skripsi

dengan judul “Uji Aktivitas Antibakteri Kombinasi Ekstrak Terstandar dari

(Muntingia calabura L.) Terhadap Bakteri Escherichia coli” dapat terselesaikan.

Laporan proposal skripsi ini disusun untuk melengkapi salah satu

persyaratan dalam memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) di perguruan

tinggi Stikes Bhakti Husada Mulia Madiun.

Dalam penulisan laporan proposal skripsi ini, penulis sepenuhnya menyadari

Madiun, 8 Januari 2021

1.1 Latar Belakang

Salah satu penyebab utama morbiditas (kesakitan) dan mortalitas

merupakan masalah kesehatan pada masyarakat terutama anak dibawah usia 5

2017). Secara nasional, jumlah penderita diare di Indonesia mencapai 1.017.290.

(RISKESDAS, 2018). Upaya-upaya yang telah dilakukan untuk mengatasi diare

bertujuan untuk mengurangi kesakitan dan angka kematian (Anbhuselvam dkk,

Penyakit diare ditandai dengan perubahan bentuk dan konsentrasi tinja

lingkungan (perumahan yang padat, tempat pembuangan kotoran manusia

disembarang tempat, persediaan air bersih yang tidak memadai, membuang

sampah disembarang tempat), kurangnya pengetahuan, perilaku (kebiasaan

2016). Diantara faktor-faktor tersebut, penyebab diare terbanyak adalah bakteri

Escherichia coli (Halim dkk, 2017).

Escherichia coli merupakan bakteri yang dapat hidup di saluran

Escherichia coli dapat bersifat patogen apabila perkembangannya didalam tubuh

maka akan digunakan antibiotik. Namun, penggunaan agen antidiare memiliki

(Muntigia calabura L.). Penelitian yang dilakukan oleh Agustina (2018)

saponin, tanin, terpenoid dan alkaloid. Sedangkan daun kersen (Muntingia

calabura L.) dilaporkan mengandung alkaloid, flavonoid, saponin, tanin dan

steroid (Ratnasari, 2017). Mekanisme kerja flavonoid sebagai antibakteri yaitu

dengan menyebabkan kerusakan permeabilitas pada dinding sel bakteri, lisosom

dan mikrosom. Mekanisme kerja saponin dapat menyebabkan kerusakan pada

Mekanisme kerja Steroid sebagai antibakteri berhubungan dengan membran lipid

dan sensitivitas terhadap komponen steroid yang dapat menyebabkan liposom

mengalami kebocoran. Alkaloid memiliki mekanisme kerja sebagai antibakteri

diprediksi dengan melakukan penghambatan sintesis dinding sel yang akan

memiliki mekanisme kerja sebagai antibakteri karena terpenoid dapat bereaksi

dengan porin (protein transmembrane) akibatnya porin menjadi rusak. Rusaknya

porin dapat menyebabkan sel bakteri kekurangan nutrisi sehingga pertumbuhan

antibakteri adalah dengan menghambat enzim ekstraseluler bakteri atau bekerja

langsung pada metabolism dengan menghambat fosforilasi oksidasi (Handoko

Penelitian sebelumnya telah membuktikan bahwa ekstrak daun jambu biji

(Psidium guajava L.) memiliki khasiat sebagai antibakteri terhadap bakteri

khasiat sebagai antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli pada berbagai

L.) terhadap aktivitas antibakteri Escherichia coli.

Berdasarkan uraian diatas, peneliti ingin mengetahui apakah dengan

daun kersen (Muntigia calabura L.) dapat menghambat pertumbuhan bakteri

Escherichia coli pada konsentrasi 25%:75%; 50%:50%; 75%:25%. Ekstrak etanol

jam. Pada masing-masing ekstrak dilakukan standardisasi dengan menggunakan