PENGECERAN PRIMER catatan bahwa satuan (uM = pmol/ul)

Membuat Stock Solution

untuk perhitungan pengenceran primer, sbb:

misalkan tabung yang berisi 50 nmoles lyophilized primer ( tertulis dalam COA)

tabung yang berisi 50 nmoles + 500 ul DNAse/RNAse free water atau TE buffer sehingga
tercapai 100 uM. ini disebut Stock Solution.

Membuat work Solution maka:

Cara Pengenceran Primer (uM = pmol/ul)
1. Kebutuhan primer 10uM untuk working solution primer :
a. Misalnya memiliki stok 321 ul primer dengan konsentrasi 100uM
vortek sampai merata
b. Buat working primer (10 uM/ul) dengan cara :
c. 90 ul Ultrapure Water + 10 ul dari konsentrai 100uM vortek sampai
merata, sehingga memiliki 100ul primer dengan konsentrasi 10uM

Gunakan Rumus V1M1 = V2M2 untuk menghitung final concentration primer dalam
satu reaksi PCR , Misalnya final concentration 0,2uM primer forward dengan total volume
reaksi adalah 50ul maka :
10uM(working solution) X ul = 0.2uM X 50ul (final volume rekasi PCR nya)
Ambil 1 ul primer dari 10uM/reaksi working solution primer

2. Kebutuhan primer 20uM untuk working solution primer :

a. Misalnya memiliki stok 321 ul primer dengan konsentrasi 100uM
vortek sampai merata
b. Buat working primer (20 uM/ul) dengan cara :
c. 80 ul Ultrapure Water + 20 ul dari konsentrai 100uM vortek sampai
merata sehingga memiliki 100uM primer dengan konsentrasi 10uM

Gunakan Rumus V1M1 = V2M2 untuk menghitung final concentration primer dalam
satu reaksi PCR , Misalnya final concentration 0,2uM primer forward dengan total volume
reaksi adalah 50ul maka :
20uM(working solution) X ul = 0.2uM X 50ul (final volume rekasi PCR nya)

Ambil 0.5 ul primer dari 10uM/reaksi working solution primer

Ambil 0,5 ul untuk penggunaan primer 20uM/reaksi dari working primer