PENETAPAN KADAR FLAVONOID TOTAL EKSTRAK ETANOL KULIT

BUAH ALPUKAT (Persea americana Mill.) DENGAN METODE

SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS

Aminah1, Nurhayati Tomayahu, Zainal Abidin

Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia 1aminah.aminah@umi.ac.id

ABSTRACT
Avocado plant (Persea americana Mill.), belongs to Lauraceae family which have medicinal properties.
Avocado peel contains flavonoid compounds that can be used to protect and reduce the skin damage against UV rays.
This study aimed to determine the total flavonoids content of the ethanol extract of the avocado peel using UV-Vis
spectrophotometry. The ethanol extract of avocado peel was obtained by maceration with ethanol. The qualitative
analysis used FeCl3 by forming green complex. The determination of total flavonoids content is conducted based on
AlCl3 method with total flavonoids expressed in QE (Quercetin equivalent) at the maximum wavelength of 435 nm. The
result showed that the average content of flavonoid total is 4.0122 mgQE/g extract.

Keywords: Flavonoid Total, Caucasian avocado (Persea americana Mill.), UV-Vis spectrophotometry
I. PENDAHULUAN
Indonesia merupakan negara yang memiliki
kekayaan alam dengan berbagai jenis tanaman yang
dapat berkhasiat sebagai obat tradisional. Obat
tradisional semakin banyak diminati oleh masyarakat
karena bahan nabatinya mudah didapat, mudah
diracik dan harganya terjangkau, sehingga bahan yang
digunakan harus ditingkatkan mutu dan kualitasnya
sesuai dengan kebutuhan masyarakat.
Salah satu tumbuhan yang menarik untuk
diteliti adalah buah alpukat dari family Lauraceae
yang merupakan tanaman yang dapat berkhasiat
sebagai obat, tanaman ini dapat tumbuh di daerah
tropis dan subtropis (Katja, Suryanto & Wehantouw
2009, h. 58).
Alpukat secara empiris berkhasiat
mengobati penyakit seperti sariawan, kencing batu,
sakit gigi, muka kering, bengkak karena peradangan
dan juga kencing manis (Katja, Suryanto &
Wehantouw 2009, h. 58). Kulit alpukat mengandung
senyawa flavonoid yang dapat digunakan untuk
melindungi kulit terhadap sinar UV atau mampu
mengurangi kerusakan kulit, karena senyawa ini
bekerja sebagai bahan aktif tabir surya (Mokodompit,
Edy dan Wiyono 2013, h. 85).
Flavonoid merupakan salah satu senyawa
golongan fenol alam terbesar yang terdapat dalam
semua tumbuhan hijau (Markham, K.R 1988).
Menurut (Pourmorad, F 2006, h. 1143) mengemukkan
bahwa salah satu golongan senyawa polifenol ini
diketahui memiliki sifat sebagai penangkap radikal
bebas, penghambat enzim hidrolisis, oksidatif, dan
juga bekerja sebagai antiinflamasi.
Jurnal Fitofarmaka Indonesia, Vol. 4 No.2
Berdasarkan uraian tersebut, maka perlu
dilakukan penelitian yang lebih intensif mengenai
pengujian kadar flavonoid total dari ekstrak etanol
kulit buah alpukat (Persea americana Mill.), sehingga
potensi tumbuhan ini sebagai bahan baku obat untuk
pencegahan maupun pengobatan berbagai penyakit
dapat lebih dikembangkan dengan maksimal.
II. METODE PENELITIAN
A. Pengambilan dan Pengolahan Sampel
Pengambilan Sampel buah alpukat (Persea
americana Mill.) dilakukan pada pagi hari sekitar
pukul 10.00 WITA di Malino, Sulawesi selatan.
Kemudian disortasi basah untuk menghilangkan tanah
dan pengotor lainnya yang masih menempel pada
sampel. Kemudian buah alpukat dipisahkan dari
daging buah dan kulit buahnya lalu di bersihkan. Kulit
buah alpukat (Persea americana Mill.) yang telah
dibersihkan dilakukan pengubahan bentuk dengan cara
dipotong-potong kecil, selanjutnya dikeringkan
dengan cara diangin-anginkan selama beberapa hari
pada udara terbuka dengan tidak terkena sinar matahari
langsung. Setelah kering sampel ditimbang dan dicatat
berat keringnya kemudian diserbukkan setelah itu
ditimbang kembali berat sampel serbuk yang di
peroleh (Dahlia & Ahmad 2016, h. 16).
B. Proses ekstraksi kulit alpukat (Persea americana
Mill.)
Sebanyak 50 gram sampel kulit buah alpukat
(Persea americana Mill.) dimasukkan kedalam wadah
maserasi. Kemudian ditambahkan dengan etanol 96%
200 mL sampai seluruh sampel terendam, kemudian
ditutup dan dibiarkan selama 24 jam. Maserat disaring
226
dengan menggunakan kertas saring. Filtrat diperoleh
melalui penyaringan dengan corong, kemudian ampas
dimaserasi kembali dengan etanol 96% 200 mL,
sehingga filtrat hampir tidak berwarna.
Semua filtrat disatukan dan dipekatkan dengan
menggunakan rotavapor sampai tidak ada lagi cairan
yang menetes sehingga diperoleh ekstrak etanol kulit
buah alpukat (Persea americana Mill.). Ekstrak
kental kulit buah alpukat (Persea americana Mill.)
yang didapatkan digunakan untuk dianalisis lebih
lanjut (Gustandy, M dan Soegihardjo, C,J 2016).
C. Analisis Kuantitatif Kandungan Flavonoid
Sebanyak 1 mg ekstrak etanol kulit buah
alpukat (Persea americana Mill.) ditambahkan
dengan 2 tetes FeCl3. Terbentuknya warna hijau atau
hijau biru menunjukkan adanya senyawa flavonoid
dalam bahan (Harborne, J.B 1987).
D. Analisis Kualitatif Kandungan Flavonoid 1.
Penentuan panjang gelombang maksimum
(ƛmaks) kuersetin
Penentuan panjang gelombang maksimum
kuersetin dilakukan dengan running larutan kuersetin
pada range panjang gelombang 400 - 450 nm. Hasil
running menunjukkan panjang gelombang
maksimum standar baku kuarsetin berada pada
panjang gelombang 435 nm. Panjang gelombang
maksimum tersebut yang digunakan untuk mengukur
serapan dari sampel ekstrak etanol kulit buah alpukat
(Persea americana Mill.).
2. Pembuatan kurva standar kuarsetin
Ditimbang sebanyak 25 mg baku standar
kuersetin dan dilarutkan dalam 25 mL etanol. Larutan
stok dipipet sebayak 1 mL dan dicukupkan
volumenya sampai 10 mL dengan etanol sehingga
diperoleh konsentrasi 100 ppm. Dari larutan standar
kuersetin 100 ppm, kemudian dibuat beberapa
konsentrasi yaitu 6 ppm, 8 ppm, 10 ppm, 12 ppm dan
14 ppm. Dari masing-masing konsentrasi larutan
standar kuersetin dipipet 1 mL. Kemudian
ditambahkan 1 mL AlCl3 2% dan 1 mL kalium asetat
120 mM. Sampel diinkubasi selama satu jam pada
suhu kamar. Absorbansi ditentukan menggunakan
metode spektrofotometri UV-Vis pada panjang
gelombang maksimum 435 nm (Stankovic, M.S.,
2011, h. 65).
3. Penetapan kadar flavonoid total ekstrak etanol
kulit buah alpukat (Persea americana Mill.)
Ditimbang 15 mg ekstrak, dilarutkan dalam
10 mL etanol, sehingga diperoleh konsentrasi 1500
Jurnal Fitofarmaka Indonesia, Vol. 4 No.2
ppm. Dari larutan tersebut dipipet 1 mL kemudian
ditambahkan 1 mL larutan AlCl3 2% dan 1 mL kalium
asetat 120 mM. Sampel diinkubasi selama satu jam
pada suhu kamar. Absorbansi ditentukan
menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis pada
panjang gelombang maksimum 435 nm. Sampel
dibuat dalam tiga replikasi untuk setiap analisis dan
diperoleh nilai rata-rata absorbansi (Stankovic, M.S.,
2011, h. 65).
III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Tumbuhan alpukat (Persea americana Mill.)
yang digunakan dalam penelitian ini yaitu hanya pada
bagian kulit buahnya. Kulit buah alpukat (Persea
americana Mill.) dapat digunakan sebagai bahan aktif
tabir surya yaitu untuk melindungi kulit terhadap sinar
UV atau mampu mengurangi kerusakan kulit, karena
mengandung senyawa flavonoid (Mokodompit, Edy
dan Wiyono 2013, h. 85).
Flavonoid hampir terdapat pada semua bagian
tumbuhan termasuk buah, akar, daun, dan kulit luar
batang. Flavonoid merupakan senyawa alam yang
berpotensi sebagai antioksidan yang dapat menangkal
radikal bebas yang berperan pada timbulnya penyakit
degeneratif melalui mekanisme perusakan sistem
imunitas tubuh, oksidasi lipid dan protein (Rais, I.R
2015, h. 103).
Pada penelitian ini buah alpukat yang
digunakan diperoleh dari Malino, Sulawesi selatan.
Kotoran ataupun serangga yang menempel pada buah
alpukat harus dibersihkan karena dapat mengganggu
proses dan hasil ekstraksi. Kulit buah alpukat (Persea
americana Mill.) dilakukan pengubahan bentuk
dengan cara dipotong-potong kecil untuk
mempercepat proses pengeringan. Proses pengeringan
ini dimaksudkan untuk mengurangi kadar air yang
terdapat pada sampel, sehingga dapat mencegah
pembusukan oleh bakteri.
Proses ekstraksi dilakukan bertujuan untuk
mengambil senyawa kimia yang terkandung dalam
sampel. Prinsip ekstraksi didasarkan pada perpindahan
masa komponen zat yang terlarut ke dalam pelarut
sehingga terjadi perpindahan pada lapisan antar muka
dan berdifusi masuk ke dalam pelarut (Harborne, J.B
1987). Pelarut yang digunakan pada penelitian ini
adalah etanol 96% sebagai pelarut polar. Dalam hal
penyarian, etanol memiliki kelebihan dibandingkan
dengan air dan metanol. Senyawa kimia yang mampu
disari dengan etanol lebih banyak dari pada penyari
metanol dan air (Azizah dan Salamah 2013, h. 24).
Untuk mendapatkan senyawa kimia yang
diinginkan digunakan metode ekstraksi
yang merupakan metode penyarian zat berkhasiat atau
227
zat aktif dari bagian tanaman dengan menggunakan
pelarut yang sesuai (Yuliani & Satuhu, 2012).
Metode ekstraksi yang digunakan pada
penelitian ini adalah maserasi, karena metode ini
lebih sederhana, mudah dan tanpa pemanasan.
Karena jika menggunakan pemanasan dapat
membuat kadar flavonoid berkurang. Proses
maserasi menggunakan 3 replikasi dengan etanol
96% 200 mL selama 24 jam. Penambahan pelarut
etanol dilakukan sampai 3 kali proses ekstraksi.
Ekstrak yang diperoleh dipekatkan dengan rotavapor
sampai diperoleh ekstrak kental yang berwarna hijau
tua. Kemudian dilakukan perhitungan rendamen,
sehingga diperoleh rata-rata persen rendamen yaitu
17,28 %. Penentuan rendamen ini berfungsi untuk
mengetahui kadar metabolit sekunder yang terbawa
oleh pelarut namun tidak dapat menentukan jenis
senyawa yang terbawa oleh pelarut (Ahmad, Juwita
dan Malik 2016, h. 6). Dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil ekstrak etanol dari kulit buah alpukat
(Persea americana Mill.)
Analisis kualitatif dilakukan untuk
mengetahui komponen kimia pada tumbuhan dengan
menggunakan reagen besi (III) klorida (FeCl3).
Diamati perubahan warna yang terbentuk yaitu warna
hijau (Harborne, J.B 1987). Hasil identifikasi
menunjukkan ekstrak etanol kulit buah alpukat
(Persea americana Mill.) positif mengandung
flavonoid yang dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Hasil analisis kualitatif ekstrak etanol kulit
buah alpukat (Persea americana Mill.)
Analisis kuantitatif senyawa flavonoid total
dengan menggunakan spektrofotometri UV-Vis
dilakukan untuk mengetahui seberapa besar kadar
flavonoid total yang terkandung pada ekstrak etanol
kulit buah alpukat (Persea americana Mill.). Analisis
flavonoid dilakukan dengan menggunakan
Jurnal Fitofarmaka Indonesia, Vol. 4 No.2
Spektrofotometri UV-Vis karena flavonoid
mengandung sistem aromatik yang terkonjugasi
sehingga menunjukkan pita serapan kuat pada daerah
spektrum sinar ultraviolet dan spektrum sinar tampak
(Harborne, J.B 1987).
Pada penelitian ini untuk menentukan kadar
flavonoid total pada sampel digunakan kuarsetin
sebagai larutan standar dengan deret konsentrasi 6, 8,
10, 12 dan 14 ppm. Digunakan deret konsentrasi
karena metode yang di pakai dalam menentukan kadar
adalah metode yang menggunakan persamaan kurva
baku, untuk membuat kurva baku terlebih dahulu
dibuat beberapa deret konsentrasi untuk mendapatkan
persamaan linear yang dapat digunakan untuk
menghitung persen kadar. Digunakan kuarsetin
sebagai larutan standar karena kuersetin merupakan
flavonoid golongan flavonol yang mempunyai gugus
keto pada C-4 dan memiliki gugus hidroksil pada
atom C-3 atau C-5 yang bertetangga dari flavon dan
flavonol (Azizah dan Faramayuda 2014, h. 48).
Pengukuran serapan panjang gelombang maksimum
dilakukan running dari panjang gelombang 400 – 450
nm. Hasil running menunjukkan panjang gelombang
maksimum standar baku kuarsetin berada pada
panjang gelombang 435 nm. Panjang gelombang
maksimum tersebut yang digunakan untuk mengukur
serapan dari sampel ekstrak etanol kulit buah alpukat
(Persea americana Mill.). Dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Hasil pengukuran absorbansi larutan standar
kuersetin pada panjang gelombang maksimum 435
nm
Gambar 1. Kurva kalibrasi kuersetin pada panjang
gelombang maksimum 435 nm
228
 Dari pengukuran tersebut, dapat disimpulkan
bahwa semakin tinggi konsentrasi yang digunakan
maka semakin tinggi pula absorban yang di peroleh.
Hasil baku kuersetin yang diperoleh diplotkan antara
kadar dan absorbannya, sehingga diperoleh persamaan
regresi linear yaitu y = 0,0438x + 0,0177 dengan nilai
R2 yang diperoleh sebesar 0,9944 dan nilai r adalah
0,997. Persamaan kurva kalibrasi kuersetin dapat
digunakan sebagai pembanding untuk menentukan
konsentrasi senyawa flavonoid total pada ekstrak
sampel.
Pengujian analisis kuantitatif
dengan spektrofotometri UV-Vis digunakan larutan
blanko sebagai kontrol yang berfungsi sebagai
pemblank (mengkali nol-kan) senyawa yang tidak
perlu dianalisis (Basset,1994).
Pada pengukuran senyawa flavonoid total,
larutan sampel ditambahkan AlCl3 yang dapat
membentuk kompleks, sehingga terjadi pergeseran
panjang gelombang ke arah visible (tampak) yang
ditandai dengan larutan menghasilkan warna yang
lebih kuning. Dan penambahan kalium asetat yang
bertujuan untuk mempertahankan panjang gelombang
pada daerah visible (tampak) (Chang et al, 2002).
Perlakuan inkubasi selama 1 jam sebelum pengukuran
dimaksudkan agar reaksi berjalan sempurna, sehingga
intensitas warna yang dihasilkan lebih maksimal
(Azizah dan Faramayuda 2014, h. 48). Sehingga dari
hasil penelitian ini diperoleh kadar flavonoid total
ekstrak etanol kulit buah alpukat (Persea americana
Mill.) sebesar 4,0122 mgQE/g ekstrak yang dapat
dilihat pada tabel 3.
Tabel 4. Hasil penetapan kadar flavonoid total %
(b/b) pada ekstrak etanol kulit buah alpukat (Persea
americana Mill.)
Menurut penelitian yang telah dilakukan
oleh kurniasari (2006) menyatakan bahwa sejumlah
tanaman obat yang mengandung flavonoid telah
dilaporkan memiliki aktivitas
antioksidan, antibakteri, antivirus,
antiradang, antialergi dan antikanker.
Jurnal Fitofarmaka Indonesia, Vol. 4 No.2
IV. KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang telah
dilakukan dapat disimpulkan bahwa kadar flovonoid
total dari ekstrak etanol kulit buah alpukat (Persea
americana Mill.) yaitu 4,0122 mgQE/g ekstrak.
DAFTAR PUSTAKA
Ahmad, A.R., Juwita, J., Ratulangi, S.A.D. dan Malik,
A., 2016. Penetapan Kadar Fenolik Dan
Flavonoid Total Ekstrak Metanol Buah Dan
Daun Patikala (Etlingera Elatior (Jack) Rm
Sm) Menggunakan Spektrofotometri UvVis.
Pharmaceutical Sciences And Research
(Psr), 2(1), Pp.1-10.
Azizah, B. dan Salamah, N., 2013. Standarisasi
Parameter Non Spesifik dan Perbandingan
Kadar Kurkumin Ekstrak Etanol dan Ekstrak
Terpurifikasi Rimpang Kunyit.
Pharmaciana, 3(1).
Azizah, D.N. dan Faramayuda, F., 2014. Penetapan
Kadar Flavonoid Metode AlCl3 Pada Ekstrak
Metanol Kulit Buah Kakao (Theobroma
Cacao L.). Kartika Jurnal Ilmiah
Farmasi, 2(2).
Basset, J., R. C. Denney, G.H Jeffrey, J. Mendhom.,
1994. Buku Ajar Vogel Kimia Analisis
Kuantitatif Anorganik, Jakarta : EGC.
Chang C. Yang M, Wen Hand Chern J. 2002.
Estimation of Total Flavonoid Content in
Propolis by Two Complementary
Colorimetric Methods, J. Food Drug Anal.
Dahlia, A.A. dan Ahmad, A.R., 2016. Penetapan Kadar
Flavonoid Total Dari Ekstrak Etanolik
Daun Benalu Mangga (Dendrophthoe
Pentandra L. Miq). Jurnal Fitofarmaka
Indonesia, 1(1). pp.14-17.
Gustandy, M, dan Soegihardjo, C,J 2016,‘Uji Aktivitas
Antioksidan Menggunakan Radikal 1, 1-
Difenil-2-Pikrihidrazil dan Penetapan
Kandungan Fenolik Total Fraksi Etil Asetat
Ekstrak Etanol Buah Anggur Bali (Vitis
vinifera L.)’, Jurnal Farmasi Sains dan
Komunitas, 10(2).
Harborne, J.B., 1987, Metode Fitokimia; Penuntun
Cara Modern Menganalisa Tumbuhan,
Terbitan Kedua, Terjemahan Kosasih
Padmawinata dan Iwang Soediro ITB,
Bandung.
Katja, D. G., Suryanto, E., dan Wehantouw, F., 2009.
Potensi daun alpukat (persea Americana
Mill.) sebagai sumber antioksidan alami.
Chemistry Progress, 2(1), pp. 58-64.
Kurniasari, I. 2006. Metode cepat penentuan flavanoid
total meniran (Phyllantus niruri L) berbasis
229
 teknik spektrofotometri inframerah
dan kemometrik. Bogor: IPB
Markham, K.R. 1988. Cara
Mengidentifikasi Flavonoid.
Penerjemah Kosasih
Padmawinata.Bandung: ITB.
Mokodompit, AN, Edy, HJ dan Wiyono, W 2013,
Penentuan nilai sun protective factor (spf)
secara in vitro krim tabir surya ekstrak etanol
kulit alpukat. Pharmacon, 2(3), pp. 83-85.
Pourmorad, F., Hosseinimehr, S.J. and Shahabimajd,
N., 2006. Antioxidant activity, phenol and
flavonoid contents of some selected Iranian
medicinal plants. African journal
of biotechnology, 5(11). pp 1142-1145
Rais, I. R., 2015. Isolasi dan penentuan kadar
flavonoid ekstrak etanolik herba sambiloto
(andrographis paniculata (burm.
F.) Ness). Pharmaciana, pp 100:106.
Stankovic, M.S., 2011. Total phenolic content,
flavonoid concentration and antioxidant activity of
Marrubium peregrinum L. extracts. Kragujevac J Sci,
33(2011), pp.6372.
Yuliani, S. dan Satuhu, S., 2012. Panduan lengkap
minyak atsiri. Penebar swadaya: Jakarta. Hal,
46.

Jurnal Fitofarmaka Indonesia, Vol. 4 No.2 230