Nama : Moch.

Prima Taqiyudin
NIM : 17/411710/BI/09850

Resume jurnal by:

Semiarti, E., A. Indrianto, Y.H. Purwantoro, I.N.A. Martiwi, Y.M.L. Feroniasanti, F.Nadifah,
I.S. Mercuriana, R. Dwiyani, H. Iwakawa, Y. Yoshioka, Y. Machida and C. Machida.
2010. High-frequency genetic transformation of Phalaenopsis amabilis orchid using
tomato extract-enriched medium for the pre-culture of protocorms. Journal of
Horticultural Science & Biotechnology. 85(3): 205–210.

High-frequency genetic transformation of Phalaenopsis amabilis orchid using tomato

extract-enriched medium for the pre-culture of protocorms

Pengembangan metode yang efisien dalam transformasi genetik anggrek dibutuhkan

untuk mendukung rekayasa genetika pada anggrek. Oleh karena itu, penting untuk
mengetahui faktor-faktor yang mempengaruhi proses transformasi. Penelitian sebelumnya
menggunakan metode konvensional untuk transformasi Phalaenopsis amabilis menggunakan
Agrobacterium tumefaciens, dimana protocorm utuh digunakan. Hasilnya ditemukan bahwa
embrio yang dikulturkan pada medium yang mengandung ekstrak tomat tumbuh lebih cepat
daripada yang dikulturkan di medium air ditambah kelapa. Saat kami gunakan protocorm
yang ditumbuhkan pada media yang mengandung ekstrak tomat, kami memperoleh tunas
yang telah ditransformasikan dengan gen resistensi kanamisin pada frekuensi yang relatif
tinggi (7 - 17%). Hasil ini menunjukkan bahwa laju pertumbuhan protocorm pra-kultur
mungkin penting untuk keberhasilan regenerasi tunas yang ditransformasi. Kami juga
mendapatkan tunas yang telah diregenerasi yang telah ditransformasi dengan gen protein
fluorescent hijau (GFP) di frekuensi tinggi (10 - 14%). Kehadiran dan ekspresi transgen ini
dikonfirmasi dalam transformasi tanaman dengan analisis molekuler dan dengan deteksi
fluoresensi hijau setelah eksitasi dengan cahaya biru.
Studi sebelumnya telah melaporkan bahwa transformasi anggrek baik secara langsung
melalui pengiriman gen penanda seperti gen pengkode beta-glucuronidase (GUS)
Escherichia coli dan green fluorescence protein (GFP) Aequorea victoria ke dalam sel
tanaman oleh penembakan partikel, atau tidak langsung melalui penggunaan
anti-oksidan seperti vitamin C, gula, dan senyawa lain dalam ekstrak tomat yang bisa
mempromosikan perkecambahan dan pertumbuhan protocorms. Kombinasi
polyvinylpolypyrrolidone dan dithiothreitol sebagai anti-oksidan meningkatkan kelangsungan
hidup tanaman. Jaringan nekrosis di kalus embriogenik Agrobacterium dihambat sepenuhnya
dengan menggunakan anti-oksidan, sedangkan virulensi Agrobacterium juga terpengaruh.
 Benih ditaburkan pada media NP dimodifikasi dengan berbagai konsentrasi air kelapa
dan / atau tomat ekstrak dan tumbuh selama 3 minggu untuk menghasilkan protocorms, yang
digunakan untuk transformasi. Untuk menentukan tingkat pertumbuhan embrio anggrek dan
protocorms, ukuran, warna, dan bentuk embrio atau protocorms dievaluasi.
Tingkat tercepat perkembangan embrio diamati pada
media NP dilengkapi dengan air kelapa dan ekstrak tomat. Protocorms yang dikultur pada
medium NP yang mengandung ekstrak tomat sendiri tampaknya mengalami perubahan dari
kuning ke hijau lebih cepat daripada yang dikultur pada media NP mengandung air kelapa
saja. Ekstrak tomat mengandung karoten, vitamin C, dan anti-oksidan lain yang tidak
ditemukan dalam air kelapa. Komponen-komponen ini dapat mempengaruhi pertumbuhan
embrio.
Buah tomat matang mengandung nutrisi dasar dan vitamin penting. Efisiensi
transformasi ditentukan berdasarkan persentase protocorms yang menghasilkan tunas pada
media selektif dari jumlah total protocorms diperiksa. Frekuensi transformasi tunas
regenerasi meningkat dari 1,2% pada media NP dengan air kelapa saja menjadi 13,2% pada
media NP mengandung 100 mg l tomat ekstrak saja, dan untuk antara 6,8-16.
Hasil ini lebih tinggi dari frekuensi tunas regenerasi yang ditumbuhkan pada medium yang
mengandung air kelapa saja. Analisis molekuler dari transforman diduga
diprediksi pada fragmen 105-bp diamplifikasi dari semua transforman terduga di masing-
masing perlakuan. Dari 210 planlet yang diperiksa, 191 positif untuk fragmen GFP gene.
Untuk mengkonfirmasi kehadiran GFP gene, dan untuk menilai jumlah salinan gen pada
tanaman yang juga menunjukkan resistensi kanamisin, kami melakukan hibridisasi.
Hibridisasi menggunakan probe untuk 3' akhir GFP gene menunjukkan dua sampai empat
salinan GFP gene di setiap baris transgenik.
Resume jurnal by:
Semiarti, E., A. Indrianto, A. Purwantoro, S. Isminingsih, N. Suseno, T. Ishikawa, Y.
Yoshioka, Y. Machida, C. Machida. 2007. Agrobacterium-mediated transformation of
the wild orchid species Phalaenopsis amabilis. Plant Biotechnology. 24: 265–272.

Agrobacterium-mediated transformation of the wild orchid species Phalaenopsis

amabilis

Hibrida Phalaenopsis merupakan tanaman hias utama. Spesies induk penting bagi
banyak hibrida adalah Phalaenopsis amabilis. Kami mengembangkan metode yang nyaman
untuk modifikasi genetik menggunakan Agrobacterium tumefaciens. Protocorm utuh yang
ditransformasikan, merupakan bibit anggrek muda P. Amabilis. Gen resistensi kanamisin di
bawah kendali promotor 35S dapat digunakan sebagai penanda selektif. Selain itu, vektor T-
DNA mengandung gen KNOX Arabidopsis kelas 1, BP/KNATI, berhasil dimasukkan ke
dalam protocorm. Tunas dihasilkan dengan bentuk daun abnormal yang mudah dibedakan
dari pucuk normal, menunjukkan bahwa BP / KNAT1 dapat digunakan sebagai gen penanda
yang terlihat. Selanjutnya, protocorm yang ditransformasikan
dengan BP / KNAT1 menghasilkan beberapa tunas. Keduanya hadir dan ekspresi transgen
pada tanaman yang ditransformasi dikonfirmasi dengan analisis molekuler.
Hibrida dari genus Phalaenopsis sangat ekonomis sebagai tanaman rumah dan kebun
serta bunga potong. Pada saat yang sama, banyak spesies liar Phalaenopsis adalah sangat
langka di alam karena hilangnya habitat dan juga dikoleksi berlebihan. Hibrida ini biasanya
diperbanyak secara klonal. Namun, tunas tambahan yang diinduksi dari cut seperti protocorm
badan (PLB) dapat secara efisien diperoleh dengan menggunakan yang baru.
Media Phalaenopsis , yang mengandung konsentrasi nitrogen tinggi. Pengembangan metode
untuk meningkatkan Phalaenopis anggrek melalui modifikasi genetik bisa sangat luar biasa
berharga untuk hortikultura dan, secara tidak langsung, juga untuk konservasi. Pembentukan
metode transformasi untuk P. amabilis penting untuk memahami fungsi gen dan
memanipulasi anggrek Phalaenopsis.
Pertama, kami menganalisis kondisi untuk pembentukan pucuk P. amabilis dari
protocorm. Penambahan sitokinin dan auksin ke medium induksi tembak meningkatkan
frekuensi pengambilan gambar dari protocorm. Tabel 1 menunjukkan bahwa frekuensi
pemotretan tertinggi (98%) dari protocorm diamati dengan 5mM 2-IP dan 0,15mM.
Pengobatan NAA. Kondisi ini digunakan untuk regenerasi anggrek transgenik.
Hibrida Phalaenopsis baru-baru ini menjadi berharga tanaman hias, dan untuk
meningkatkan potensinya, program pemuliaan anggrek yang dapat bergantung pada
pengembangan metode modifikasi genetik menunjukkan harapan besar. Transformasi genetik
tanaman oleh Agrobacterium miliki telah berhasil diterapkan ke berbagai tanaman yang
terpisah jauh. Meskipun demikian, ini masih sulit untuk menerapkan metode ini pada
tanaman hortikultura tertentu yang tidak mudah diperbanyak secara klon.