SILDE 1-7

1. HPTLC
2. PENDAHULUAN
 Bentuk kromatografi lapis tipis yang canggih. Ini melibatkan prinsip teoretis yang
sama dengan kromatografi lapis tipis.
 Juga dikenal sebagai kromatografi planar atau kromatografi flat-bed.
 Kromatografi Lapis Tipis Tradisional & versi analisis kuantitatif instrumental
modernnya HPTLC sangat populer karena berbagai alasan seperti
 kromatogram visual,
 kesederhanaan,
 penanganan sampel berganda,
 biaya operasi dan pemeliharaan yang rendah,
 biaya operasional dan pemeliharaan yang rendah, lapisan sekali pakai dll.
3. PRINSIP
 HPTLC memiliki pendekatan yang sama dan menggunakan prinsip fisik TLC
(adsorpsi kromatografi) yang sama yaitu prinsip pemisahan adalah adsorpsi.
 Pelarut fase gerak mengalir karena aksi kapiler. Komponen bergerak sesuai dengan
afinitasnya terhadap adsorben. Komponen dengan afinitas yang lebih terhadap fase
stasioner berjalan lebih lambat. Komponen dengan afinitas yang lebih rendah
terhadap fase diam bergerak lebih cepat. Dengan demikian komponen dipisahkan
pada piring kromatografi.
4. Langkah-langkah HPTLC
 Pemilihan lapisan kromatografiPra-cuciPra-pengkondisian
 Persiapan Sampel HPTLCAplikasi pengembangan kromatografi sampelDeteksi
bintik-bintikPemindaian & dokumentasi
5. Sampel dan Pelarut Persiapan Standar yang digunakan adalah
 Metanol,
 Kloroform: Metanol (1: 1),
 Etil asetat: Metanol (1: 1),
 Kloroform: Metanol: Amonia (90:! 0: 1),
 Metilen klorida: Metanol (1: 1),
 1% Amonia atau 1% asam asetat.
6. Pemilihan lapisan kromatografi
 Pelat prapembuat - bahan pendukung berbeda - Sorben berbeda tersedia
 80% analisis dilakukan oleh silika gel GF ·
 Asam amino, dipeptida, gula dan alkaloid - selulosa
 Zat non-polar, asam lemak, karotenoid , kolesterol - RP2, RP8 dan RP18
 Pengawet, barbiturat, analgesik, dan fenotiazin- Piring hibrida-RPWF254s
 7. Plat pra dilapisi
 Plat dengan bahan pendukung yang berbeda dan lapisan sorben dengan format dan
ketebalan yang berbeda digunakan.
 Pelat dengan ketebalan sorben 100- 250μm digunakan untuk analisis kualitatif dan
kuantitatif.

Slide 43-46

Penentuan kuantitatif

1. Penelitian biokimia/bioteknologi-pemisahan gangliosides (sisi pusat)

2. Klinik-

Organik dan anorganik merkuri dalam air dan serum manusia. Kafein dalam urin

3. Kodmetik-

Hidrokortison dan sinkokain dalam salep lanolin

4. Analisis lingkungan-

Pestisida dalam air minum

Selenium dalam air

5. Analisis makanan

Vitamin C dalam jus buah

Aflatoksin dalam bahan makanan

6. Bahan obat & zat kimia

Uji keseragaman kandungan dari Na Diklofenak

7. Bahan alam/unsur tanaman

Glikosida dalam obat herbal

Asam glisirizat dalam liquirutae (akar manis)

8. Analisis obat

Atenolol dalam urin

B. Analisis sidik jari

1. Sidikjari dari tanaman valerian

2. Sidikjari bawang putih, ashwaganda

3. Sidikjari untuk identifikasi akar manis, ginseng

9. Identifikasi dan pemisahan fenil tionidantoin-asam amino

10. Analisis obat dalam darah

Contoh : pemisahan obat fenotiazin yang mirip klorpromazin, asetofenazin, perfenazin,

trifluoerazin, dan thoridazine

11. Identifikasi mikotoksin dalam suatu campuran

12. Penentuan hidrokarbon polisiklik aromatik dalam sampel khusus

Contoh : penentuan chryesense, piren, fluoreten, dll

Daftar pustaka

‌hptlc quantitative analysis of pharmaceutical formulation by Dr. P.d Sethi page no.3-72

p‌ harmaceutical analysis vol II by A. V. Kasture, Dr. K. R. Mahadik nirali publisher page no.28-
30

t‌extbook of pharmaceutical analysis, third edition by S. Ravi Shankar, Rx publication pages mo

14.10 to 14.12

‌www.pharminfo.com

‌www.camagausa.com

‌www.infoexpo.com
Slide 36-42

Aplikasi industri Farmasi HPTLC: Kontrol kualitas, keseragaman konten, uji keseragaman,
pemeriksaan identitas / kemurnian.

Analisis Makanan: Kontrol kualitas, pestisida aditif, pengujian stabilitas, analisis tingkat sub-
mikron dari aflotoxins, dll.

Aplikasi Klinis: Studi metabolisme, penyaringan obat, pengujian stabilitas dll.

Aplikasi Industri: Proses pengembangan dan optimalisasi, Dalam proses Q.C. periksa, validasi
dll.

Forensik : Investigasi Keracunan

Perbedaan antara TLC dan HPTLC Parameter TLC Kualitatif Hand-made / pra-dilapisi HPTLC
Kuantitatif kromatografi piring digunakan Sorbent layer thickness Kisaran ukuran partikel Pra-
cuci piring Aplikasi sampel Bentuk Ukuran tempat Sampel volume Aplikasi volume lebih besar
Pra-dilapisi 250 um 5- 20um Tidak diikuti 100-200pm 4-8pm Harus Manual / Tempat semi
otomatis 2-4mm 1-10pl Spotting yang mengarah ke pemuatan 15-20 Titik semi otomatis /
Otomatis / Band 0.5-1mm 0.2-5pl Dapat diterapkan sebagai pita 40- 50 Jumlah sampel / pelat
(20X20) 10-15 cm 5-7 cm Jarak pengembangan optimal Waktu pengembangan Reprodusibilitas
hasil Tergantung pada fase gerak Sulit 40% Lebih sedikit dari TLC Dapat Reproduksi

Dokumentasi

perangkat lunak pindai video untuk evaluasi kuantitatif pengambilan gambar dengan digistore
7) DOKUMENTASI:

1. Dokumentasi penting karena pelabelan setiap kromatogram tunggal dapat menghindari

kesalahan sehubungan dengan urutan aplikasi

2. Jenis pelat, sistem ruang, komposisi fase gerak, waktu berjalan dan metode deteksi harus
dicatat

3. UNTUK membantu analis dan peneliti E.merck telah memperkenalkan pelat berlapis HPTLC
dengan kode identifikasi tercetak

Dokumentasi Foto dengan Kamera Digital

Keuntungan dari pemindai densitometer:

Tujuan pemindai adalah untuk mengubah titik / pita pada lapisan menjadi densitogram yang
terdiri dari puncak yang mirip dengan HPLC.

Posisi puncak yang dipindai pada grafik perekam terkait dengan nilai Rf.

Kuantifikasi lebih cepat, dapat diandalkan, akurat & dapat direproduksi

2) Pengukuran pendinginan fluoresensi:

Sesuai dengan indeks namanya, ia menggunakan kemampuan analit untuk menyerap &
memadamkan cahaya fluoresensi. Dalam teknik ini, latar belakang fluoresen dimasukkan ke
dalam lapisan. Ketika bersemangat oleh radiasi panjang gelombang pendek, plat fluoresensi
seragam.

Jika zat penyerap UV ada di piring, sebagian dari cahaya fluoresensi diserap & akibatnya padam.

Pengurangan fluoresensi ini diukur sebagai fungsi dari jumlah analit di tempat.