HPTLC

KELOMPOK : 3
1. DINNIA AKHWANY
2. FIRSTIO ANFASA MASHUDI
3. ISMI NADIYATUL HUSNA
4. NADEA OLYVIA WARDANI
5. NOFRITA MARLI
6. PRICILLIA RAHAYU
7. RIZKA AULIA
8. SITI ARIFAH FITRIYANTI

DOSEN PENGAMPU :
Armon Fernando, M.Si.,Apt
http://www.free-powerpoint-templates-design.com
 Pokok Bahasan
Pengertian HPTLC Instrumen HPTLC
Prinsip Kerja HPTLC Kegunaan HPTLC
Klasifikasi teknik HPTLC Syarat sampel HPTLC
Perbedaan antara TLC & HPTLC. Contoh analisis HPTLC
Validasi metode HPTLC untuk analisis farmasi
Langkah-langkah dasar dalam HPTLC.
Bahan yang digunakan untuk plates.
Fase mobile/seluler.
Proses yang terjadi
selama anallisis
 PENGERTIAN HPTLC

High Perfomance Thin Layer Chromatography (HPTLC) merupakan

perkembangan dari metode TLC, suatu metode kromatografi yang
merupakan pengembangan dari TLC hal yang dikembangkan adalah
fase diam dari instrumen, yang diharapkan menghasilkan daya pisah
yang lebh baik dari TLC. Baik diihat dari hasil efisiensi waktu dan biaya.
 PRINSIP HPTLC

Memisahkan sampel berdasarkan perbedaan kepolaran antara

sampel dengan pelarut yang digunakan. Teknik ini biasanya
menggunakan fase diam dari plat silika dan fase geraknya
disesuaikan dengan jenis sampel yang ingin dipisahkan.
 KLASIFIKASI TEKNIK HPTLC

Place Your Picture Here Place Your Picture Here Place Your Picture Here Place Your Picture Here
 TABEL PERBEDAAN TLC DAN HPTLC
PARAMETER TLC HPTLC
Ketebalan Lapisan 250 um 100 um
Efisiensi
Place Your Picture Here Place Your Kurang
Picture Here Place Your Picture HereTinggi (Karena
Placeukuran partikelHere
Your Picture lebih kecil)

Pemisahan 10 – 15 cm 3 – 5 cm
Scanning/Memindai Tidak memungkinkan Penggunaan UV / terlihat, fluoresensi.
Pemindai adalah jenis densitometer canggih

Sample spotting/Sampel bercak Bercak manual (Capillary) Sampler otomatis (Syringe)

Waktu analisis Lebih lambat Jarak migrasi yang lebih pendek dan waktu
analisis sangat berkurang

Solid support Silica gel, keiselguhr, alumina Berbagai pilihan fase st.seperti gel silika
untuk ph normal dan c8, C18 untuk mode ph
terbalik

Development chamber/Ruang pengembangan Jumlah yang lebih banyak Jumlah fase seluler yang lebih sedikit
 Validasi metode HPTLC untuk analisis
farmasi:

Spesifisitas
Linearitas
Rentang
Akurasi
Presisi
Batas Deteksi, Batas Kuantitas
Kuat/kekokohan nya
 Langkah-langkah dalam HPTLC

Pemilihan fase stasioner

Seleksi dan optimasi fase mobile/seluler

Persiapan dan Aplikasi Sampel

Pengembangan Kromatogram (pemisahan)

Deteksi
 Langkah-langkah dasar dalam HPTLC
7. Visualisasi pada UV 366
1. Pemilihan fase nm
diam-
8. Visualisasi pada cahaya
2. Seleksi dan optimasi fase putih
seluler
9. Derivatisasi
3. Persiapan Sampel dan Aplikasi

4. Pengembangan Kromatogram (pemisahan)

5. Deteksi
6. Visualisasi pada UV
254 nm
 Pemilihan lapisan kromatografi

Platprapembuat - bahan pendukung berbeda - Sorben berbeda

80% analisis - silika gel GF · Zat dasar, alkaloid dan steroid -
Aluminium oksida
Asam amino, dipeptida, gula dan alkaloid - selulosa
Zat non-polar, asam lemak, karoten, kolesterol - RP2, RP8 dan
RP18
Pengawet, barbiturat, analgesik, dan fenotiazin- Plat hibrida-
RPWF254s
 Persiapan sampel dan standar

Untuk menghindari gangguan dari kotoran dan

uap air
Rasio sinyal terhadap kebisingan rendah - Garis dasar lurus
- Peningkatan LOD
Pelarut yang digunakan adalah Methanol, Chloroform:
Methanol (1: 1), Ethyl acetate: Methanol (1: 1), Chloroform:
Methanol: Ammonia (90:! 0: 1), Methylene chloride: Methanol
(1: 1), 1% Amonia atau asam asetat 1%
Keringkan piring dan simpan dalam suasana bebas debu
 Aktivasi plates/pelat pra-dilapisi

Kotak pelat yang baru dibuka tidak memerlukan aktivasi

Pelat yang terpapar dengan kelembaban tinggi atau
dipegang lama untuk diaktifkan

Dengan menempatkan dalam oven pada 110-120ºc

selama 30 'sebelum bercak

Lembaran aluminium harus disimpan di antara dua pelat

kaca dan menempatkannya dalam oven pada 110-120ºc
selama 15 menit
 Penerapan sampel dan standar

Kisaran konsentrasi biasa adalah 0,1-1 μg / μl

Di atas ini menyebabkan perpisahan yang buruk

Linomat IV (aplikator otomatis) - semprotan gas nitrogen

sampel dan standar dari jarum suntik • pelat TLC sebagai pita

Aplikasi pita bijaksana - pemisahan lebih baik - respons

tinggi terhadap densitometer
 Pemilihan fase mobile
Fase normal
• Fase diam adalah kutub
• Fase seluler adalah non polar
• Senyawa non-polar dielusi terlebih dahulu karena afinitas rendah dengan fase diam
• Senyawa kutub dipertahankan karena afinitas yang lebih tinggi dengan stasioner
• tahap·
Fase terbalik
• Fase diam adalah non polar
• Fase seluler bersifat polar
• Senyawa polar dielusi terlebih dahulu karena afinitas rendah dengan fase diam
senyawa non-Polar dipertahankan karena afinitas yang lebih tinggi dengan fase diam

• 3 - 4 fase komponen ponsel harus dihindari

• Fase gerak multi komponen saat ini digunakan tidak direkomendasikan untuk
penggunaan lebih lanjut dan komposisi pelarut dinyatakan oleh volume (v / v) dan
jumlah volume biasanya 100
• Diperlukan bilik bak kembar hanya 10 -15 ml fase gerak.
• -Komponen fase gerak harus dicampur dimasukkan ke dalam ruang bak kembar.
Proses yang terjadi selama proses HPTLC

1. Adsorbsi : penyerapan pada permukaannya saja, dan jangan sekali-kali dikacaukan

dengan proses absorbsi yang berarti penyerapan keseluruhan.

2. Partisi : proses sorbsi yang analog dengan ekstraksi pelarut.

3. Pertukaran ion : proses yang mana solur-solut ion dalam fase gerak dapat bertukar
dangan ion-ion yang bermuatan sama yang terikat secara kimiawi pada fase diam.

4. Eksklusi : berbeda dari mekanisme sorpsi yang lain, yakni dalam eksklusi tidak ada
interaksi spesifik antara solut dengan fase diam.
INSTRUMEN HPTLC
Place Your Picture Here And Sand Back

Pra-kondisi (saturasi chamber)

Place Your Picture Here

 Ruang tidak jenuh menyebabkan nilai Rf tinggi

 Ruang jenuh oleh lapisan dengan kertas saring
selama 30 menit sebelum pengembangan -
distribusi seragam pelarut uap - pelarut lebih
sedikit untuk sampel untuk bepergian - nilai Rf Place Your Picture Here

yang lebih rendah

PENGEMBANGAN DAN PENGERINGAN
KROMATOGRAFI
 PENGEMBANGAN DAN PENGERINGAN
Place Your Picture Here KROMATOGRAFI

Setelah pengembangan, lepaskan

piring dan fase gerak dikeluarkan dari
piring - untuk menghindari kontaminasi
atmosfer lab
Keringkan dalam desikator vakum -
hindari pengering rambut - komponen
minyak atsiri dapat menguap
DETEKSI DAN VISUALISASI
Place Your Picture Here
 DETEKSI DAN VISUALISASI
Place Your Picture Here
 DETEKSI DAN VISUALISASI
Deteksi di bawah sinar UV adalah pilihan utama - tidak merusak
Bintik-bintik senyawa fluoresens dapat dilihat pada 254 nm (pendek
panjang gelombang) atau pada 366 nm (panjang gelombang
panjang)

Dapat terlihat bercak-bercak senyawa non-fluoresen - fase diam

fluoresen digunakan - gel silika GF

Senyawa yang tidak menyerap UV seperti etambutol, dicylomine,

dll. - celupkan pelat ke dalam larutan yodium 0,1%

Ketika komponen individu tidak menanggapi UV - Derivasi

diperlukan untuk deteksi
 KEGUNAAN HPTLC
Aplikasi LC dan HPTLC-densitometri untuk penentuan simultan
benazepril hidroklorida dan hidroklorotiazid

Pemisahan dilakukan pada lembaran aluminium HPTLC dari

silika gel Merck 60 F254, menggunakan etil asetat-metanol-
kloroform (10: 3: 2 v / v) sebagai fase gerak.

Aplikasi TLC dan HPTLC dalam analisis pewarna rambut

semipermanen.

Aplikasi HPTLC untuk penentuan bahan aktif dalam formulasi

herbal dan farmasi.

Analisis kosmetik dan lingkungan.

Metalurgi, pelapisan listrik

Toksikologi, analisis forensik.

Syarat sampel HPTLC

Syarat sampel : sama dengan KLT

1. Zat cair
2. Mudah diperoleh
3. Murah
4. Tidak mudah terbakar
5. Tidak beracun
6. Tidak kental 0.5 CP
KEUNTUNGAN DAN KERUGIAAN HPTLC

1. Tebal, keseragaman menghasilkan garis dasar stabil dalam densitometri .

2. Jarak pengembangan dan waktu lebih singkat

3. Pita difusi rendah menghasilkan keterpaduan pita sampel.

4. Mikro sampel (nano gram atau pikogram) dapat dianalisis

5. Sifat reproduksibilitas dalam hasil kromotografi

THANK YOU