Tugas

ANALISIS OBAT DAN TANAMAN

REVIEW JURNAL PENELITIAN

OLEH:
NAMA : YUSTIAN OKWANI
NIM : F201701110
KELAS : K2 FARMASI

PROGRAM STUDI S1 FARMASI

SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN MANDALA WALUYA
KENDARI
2020
Review Jurnal Efek Antioksidan dan Antikolinesterase dari Ekstrak Etanol, Fraksi
Ekstrak Etanol dan Total Alkaloid dari yang Dibudidayakan Ruta chalepensis
1. Latar Belakang
Penyakit Alzheimer (AD) adalah gangguan neurodegeneratif multifaktorial secara klinis
oleh penurunan kemampuan kognitif dan perilaku ( Jia et al., 2009 ). Otak dengan AD
ditandai oleh deposisi amiloid ekstraseluler β-Caroten peptida, neuro intraseluler fmerupakan
protein terkait mikrotubulus hyperphosphorylated “ taurin ", dan hilangnya neuron ( mentega
fi eld dan Lauderback, 2002 ). Menurut hipotesis kolinergik dari penyakit Alzheimer,
kerusakan neuron yang mengakibatkan penurunan kadar neurotransmitter asetilkolin akan
mengubah transmisi kolinergik dan melakukan penurunan fungsi kognitif pada pasien (
Parnetti et al., 2007 ).
Perlu dicatat bahwa ada dua bentuk utama cholinesterase dalam jaringan hewan;
acetylcholinesterase (AChE, EC 3.1.1.7) dan butyrylcholinesterase (BChE, EC 3.1.1.8) (
Massoulie dan Bon, 1982 ). BChE dikenal sebagai pseudocholinesterase dan mengkatalisis
hidrolisis banyak ester kolin dan non-kolin, sedangkan asetilkolinesterase menyajikan fi kota
ke asetilkolin dan dikenal sebagai specific cholinesterase ( Darvesh et al., 2003 ).Selama
bertahun-tahun, peran BChE dalam penyakit Alzheimer telah diremehkan dan baru-baru ini
dianggap sebagai target terapi yang penting untuk AD karena aktivitas AChE di daerah otak
tertentu menurun, sementara tingkat BChE tidak berubah atau bahkan meningkat pada AD
lanjut ( Mesulam et al., 2002 ). Lebih lanjut, cholinesterase dapat mempengaruhi proses lain,
seperti β- agregasi amiloid. Akibatnya, penghambatan AChE / BChE ganda dapat merupakan
strategi penting untuk mengembangkan molekul terapi baru untuk pengobatan AD ( Bajda et
al., 2013 Beberapa fakta mendukung peran sentral radikal bebas dalam kerusakan jaringan
otak dan implikasinya pada timbulnya penyakit Alzheimer. Radikal bebas diproduksi secara
berlebihan selama penyakit ini akibat astrosit dan aktivasi mikroglia sebagai respons
terhadap amiloid.β-Caroten posisi peptida di otak ( Wang et al., 2005 ). Jaringan serebral
tampaknya sangat dipengaruhi oleh radikal bebas karena kandungan antioksidannya yang
rendah, tingginya kandungan asam lemak tak jenuh ganda dari membran neuron dan
kebutuhan oksigen yang tinggi untuk metabolismenya ( Halliwell dan Gutteridge, 1985;
Casado et al., 2008 ). Protein dan lipid mengalami oksidasi parah, yang diamati oleh
peningkatan level 4-hydroxynonenal (HNE), isoprostan, dan adanya produk akhir glikasi
 maju (AGE) ( Varadarajan et al., 2000 ). Radikal bebas juga dapat mengaktifkan ekspresi
proin flavanoid gen peradangan yang akan mempertahankan in fl respons inflamasi dan
menginduksi cedera pada jaringan otak ( Ramesh et al., 2013 ). Antioksidan memainkan
peran penting dalam pencegahan efek buruk radikal bebas melalui netralisasi mereka.
Antioksidan juga dapat menghalangi pembentukan radikal bebas dengan mengasingkan
logam transisi seperti besi dan tembaga. Ini adalah sifat yang menarik terutama pada otak
dengan penyakit Alzheimer di mana kerusakan oksidatif dari konstituen neuron dihasilkan
dari generasi radikal hidroksil yang dikatalisasi oleh logam transisi ( Zhu et al., 2007 ).
Dilaporkan bahwa suplemen vitamin E dan C mengurangi risiko penyakit Alzheimer (
Morris et al., 1998; Luchsinger et al., 2003 ). Diet kaya polifenol juga seharusnya mencegah
efek buruk dari radikal bebas dan menekan timbulnya penyakit Alzheimer ( Ramesh et al.,
2013 ).
Banyak makalah telah melaporkan pentingnya tanaman sebagai sumber senyawa bioaktif
termasuk senyawa fenolik, alkaloid, dan terpenoid dengan efek farmakologis yang luas ( Cai
et al., 2004 ). Ruta chalepensis dilaporkan memiliki sifat depresan antipiretik, analgesik, dan
SSP, anti-diabetes, antioksidan, antimikroba, dan anti-in fl kegiatan ammatory ( Al-Said et
al., 1990; Iauk et al., 2004; Loizzo et al., 2017 ).
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mempelajari aktivitas antioksidan dan
antikolinesterase dari berbagai ekstrak dari bagian udara yang dibudidayakan. Ruta
chalepensis sebagai sumber molekul bioaktif yang mungkin menunjukkan sifat antioksidan
dan antikolinesterase untuk pengobatan penyakit Alzheimer.
2. Metode Penelitian
a. Persiapan ekstrak alkaloid total
Ekstrak alkaloid total dibuat sesuai dengan metode Dehmlow et al. (1999) . 100 g serbuk
diekstraksi secara mendalam dalam peralatan Soxhlet (Behl-Laborr-Technik) oleh
metanol. Pelarut kemudian dihilangkan dengan tekanan rendah dalam rotary evaporator
(BUCHI, R215). Residunya kemudian diambil dalam asam asetat 4% (500 ml) dan
diekstraksi tiga kali oleh petroleumether (masing-masing 100ml) untuk menghilangkan
senyawa netral. Lapisan berair dialkalinisasi dengan 120 ml amonia (150 ml) untuk
memberikan pH = 11 dan kemudian diekstraksi lagi dengan minyak bumi (50ml × 10).
Lapisan organik diuapkan untuk memberikan ekstrak alkaloid mentah.
b. Total fenolik, flavonoid menghindari dan flavonol penentuan konten avonols
Total konten fenolat dari ekstrak etanol dan fraksi berikutnya ditentukan oleh Folin –
Metode Ciocalteu ( Singleton dan Rossi, 1965 ). Briefly, 0,25 ml masing-masing ekstrak
dicampur dengan Folin - Reagen Ciocalteu (0,2 N, 1,25 ml), diistirahatkan pada suhu
kamar selama 5 menit dan kemudian larutan natrium karbonat (75% dalam air, 1 ml)
ditambahkan. Setelah 1 jam inkubasi, absorbansi diukur pada 765 nm dalam
spektrofotometer (HELIOS EPSILON) terhadap blanko. Konsentrasi senyawa fenolik
dihitung menggunakan persamaan yang diperoleh dari kurva standar asam galat:
y = 0; 0116 Asam galat (μg) (R 2 = 0; 996)
Penentuan kandungan flavonoid dilakukan sesuai dengan Moreno et al. (2000) metode.
Volume 0,5 ml ekstrak / fraksi dalam metanol ditambahkan ke tabung reaksi yang
mengandung 50 μ l dari 10% aluminium nitrat, 50 μ l dari 1 M kalium asetat berair dan
1,9 ml metanol. Setelah 40 menit pada suhu kamar, absorbansi ditentukan pada 415 nm.
Konsentrasi fl senyawa avonoid dihitung menurut persamaan berikut yang diperoleh dari
kurva standar kuersetin:
y = 0; 0108 quercetin μg (R 2 = 0; 9987)
c. Aktivitas antioksidan
1) Evaluasi aktivitas antioksidan oleh reagen fosfomolibdenum
Total kapasitas antioksidan dari berbagai ekstrak / fraksi dievaluasi.diciptakan
dengan metodePrieto et al. (1999). Ekstrak tumbuhan 0,1 ml alikuot dicampur
dengan 1 ml larutan reagen (28 mM natrium fosfat dan 4 mM ammoniummolybdate
dalam asam sulfat 0,6 M). Tabung adalah incutertahan pada suhu 95 ° C selama 90
menit.
2) Kegiatan memperoleh radikal DPPH
Aktivitas stabil 1,1-difenil-2-pikrillhidrazil (DPPH) radikal bebas ditentukan oleh
metode yang dijelaskan oleh Blois (1958). Tes diwujudkan dalam microplate 96 well.
160 μl dari DPPH jadi- lution (1 mM) dalam metanol dicampur dengan 40 μl sampel
pada berbeda konsentrasi. Absorbansi dibaca pada 517 nm setelah 30
menitmenggunakan pembaca lempeng mikro (PerkinElmer, Enspire). Persentase dari
penghambatan dihitung menggunakan rumus berikut:

I % = Ac − As / Ac*-100
 Di mana I (%) adalah persentase penghambatan, Ac dan As adalah absor- kontrol dan
sampel ujimasing-masing setelah 30 menit. Itu Nilai IC50 yang sesuai dengan
konsentrasi ekstrak menghasilkan 50% penghambatan ditentukan dari kurva
penghambatan. Hasilnya adalah dibandingkan dengan BHA antioksidan standar.

3) Kegiatan penentuan ABTS

Aktivitas penentuan radikal ABTS ditentukan berdasarkan metode Reetal. (1999).
ABTS• + diproduksi dengan mereaksikan 2 mM ABTS dalam H2O dengan 2,45 mM
potassiumpersulfate (K2S2O8), disimpan dalam gelap pada suhu kamar selama 16
jam. Solusi ABTS • + diencerkan dengan air suling untuk memberikan absorbansi
0,700 ± 0,025 pada 734 nm. 160 μl larutan ini dicampur dengan 40 μl sampel dalam
metanol dan ab sorbance direkam pada 734 nm setelah 10 menit. Tingkat
penghambatan adalah dihitung mengikuti rumus (1). BHA digunakan sebagai
antioksidan standar.
4) Penghambatan pemutihan asam β-Karoten-linoleat
Kemampuan ekstrak / fraksi Rutachalepensis untuk menghambat penjernihan emulsi
asam β-karoten-linoleat ditentukan menggunakan metode Marco (1968).
5) Mengurangi kekuatan
Daya reduksi diukur dengan reduksi Fe3 + (CN−) 6 untuk Fe2 + (CN−) 6
menggunakan metode Oyaizu (1986) dengan beberapa modifikasi. BHA dan
quercetin digunakan sebagai standar. Nilai A0.5 dihitung dari kurva absorbansi.
6) Kegiatan chelating besi
Aktivitas pengkelat besi dari ekstrak / fraksi diukur dengan ferene (C16 H11 N4 Na
O8 S2) metode (Hennessyetal., 1984) dengan beberapa modifikasi. Untuk 40 μl
masing-masing sampel (dilarutkan dalam metanol), adalah menambahkan 40 μl
metanol dan 40 μl 0,2 mM FeCl2.4H2O
d. Aktivitas antikolinesterase
Kegiatan penghambatan asetilkolinesterase dan butyrylcholinesterase diukur dengan
metode spektrofotometri yang sedikit dimodifikasi dari Ellmanetal. (1961).
Acetylthiocholineiodide dan butyrylthiocholine klorida digunakan sebagai substrat
reaksi. Hidrolisis substrat ini dipantau secara spektrofotometri oleh reaksi anion kuning
5-thio-2-nitrobenzoate sebagai akibat dari reaksi tersebut. DTNB dengan thiocholine
dilepaskan oleh hidrolisis enzimatik acetylthiocholineiodide atau
butyrylthiocholinechloride, masing-masing, pada panjang gelombang 412 nm
menggunakan 96-well microplatereader (Perkin Elmer, Enspire). Kosong dengan
metanol, bukan larutan enzim sudah disiapkan. Absorbansi diukur setiap 5 menit selama
20 menit. Persentase penghambatan I (%) ditentukan dengan menggunakan sebagai
berikut rumus:

I % = (E – S)/E*- 100
 Di mana E adalah aktivitas enzim tanpa sampel uji, dan S adalah aktivitas enzim di
hadapan sampel uji. Mea- perbaikan dilakukan dalam rangkap tiga dan Galanthamine
digunakan sebagai senyawa referensi. Nilai IC50 ditentukan dengan memplot persentase
penghambatan dibandingkan konsentrasi larutan ekstrak.

e. Analisis statistic
Data dicatat sebagai rata-rata ± standar deviasi tiga pengukuran. Analisis varian
dilakukan oleh prosedur ANOVA Dures. Perbedaan signifikan antara sarana ditentukan
oleh Uji Tukey, nilai p b0,05 dianggap signifikan.
3. Hasil
a. Kandungan total fenolat, flavonoid, dan flavonol Total konten fenolat dinyatakan sebagai
mikrogram asam galat ekuivalen per miligram ekstrak (μg GAE / mg) dan flavonoid total
dan konten flavonol sebagai setara mikrogram kuersetin per mili- gram ekstrak (μg QE /
mg). Konten fenolik total tinggi adalah direkam dengan fraksi butanol dan etil asetat
dengan nilai 210,00 ± 4,93 dan 175,23 ± 5,64 μg GAE / mg ekstrak masing-masing
(Tabel 1), sedangkan konten terendah diperoleh dengan air fase (12,2 ± 0,8493 μg GAE /
mg ekstrak). Flavonoid dan flavonol juga ditentukan. Heksana, Kloroform dan fraksi
berair memberikan nilai flavonoid yang rendah (8,52 ± 0,85 μg / mg, 2,31 ± 0,13 μg QE /
mg dan 3,43 ± 0,13 μg QE / mg masing-masing), sedangkan fraksi butanol memberi
konten penting (166,73 ± 2,78 μg QE / mg), diikuti oleh etil fraksi asetat dan ekstrak
etanol. Isi flavonol bervariasi dari 2,16 ± 0,11 μg QE / mg yang direkam dalam fraksi
berair hingga 75,23 ± 0,72 μg QE / mg dalam fraksi butanol. Berair dan kloroform tions
tidak menunjukkan perbedaan dalam konten flavonol (p ≤ 0, 05).
b. Aktivitas antioksidan
Potensi antioksidan dari berbagai ekstrak / fraksi dari bagian udara Rutachalepensis
dinilai menggunakan metode yang berbeda dan hasilnya ditunjukkan pada Tabel 2
sebagai setara asam askorbat, Nilai IC50 dan A0.5. Aktivitas antioksidan total dari fraksi
butanol dan etil asetat Tions diukur dengan metode phosphomolybdenum lebih tinggi
dari bahwa dari ekstrak etanol dan fraksi lainnya (202,81 ± 2,58 dan 204,30 ± 3,54 μg
AAE / mg ekstrak masing-masing) tanpa signifikan perbedaan (p <0,05), sedangkan nilai
terendah dicatat dengan aque- fraksi ous dan kloroform yang menunjukkan kapasitas
dekat tanpa perbedaan signifikan (54,77 ± 1,72 dan 49,30 ± 1,43 AAE / mg ekstrak
masing-masing.
c. Aktivitas antikolinesterase
Hasil untuk penghambatan AChE dan BChE ditunjukkan pada Tabel 3 sebagai
persentase penghambatan pada dua konsentrasi akhir dan nilai IC50. Semua fraksi dan
ekstrak kasar menghambat AChE kecuali heksana dan fraksi berair yang tidak aktif.
Fraksi kloroform adalah yang paling aktif, menghambat AChE dengan nilai IC50 41,14 ±
2,85 μg / ml diikuti oleh fraksi butanol, ekstrak kasar, dan etil fraksi asetat. Sedangkan
fraksi heksana tidak aktif. Kita bisa mengamati bahwa penghambatan AChE oleh ekstrak
etanol dan fraksinya secara umum lebih efisien daripada BChE. Fraksi kloroform
 menunjukkan-ited aktivitas yang paling penting terhadap BChE dengan IC50 79,56 ±
3,66 μg / ml, diikuti oleh fraksi heksana, butanol, dan ekstrak kasar. Fraksi berair tidak
menunjukkan aktivitas apa pun terhadap BChE. Alkaloid total menunjukkan efek
penghambatan yang menarik terhadap pemberian AChE Nilai IC50 sebesar 10,37 ± 0,83
μg / ml dan menunjukkan efek yang lebih baik daripadagalanthamine terhadap BChE
yang dihambat total 100 μg / ml. Namun demikian, galanthamine menunjukkan aktivitas
penghambatan yang lebih baik AChE (IC50 = 6,27 ± 1,15 μg / ml).
4. Kesimpulan
Untuk pertama kalinya, penelitian kami menggambarkan antioksidan dan antikolin aktivitas
esterase alkaloid dari tanaman obat Rutachalepensis tumbuh di Aljazair. Antioksidan dan
antikolinesterase etanol ekstrak dan fraksinya juga dilaporkan dalam makalah ini untuk dicari
lebih lanjut kemungkinan molekul aktif. Senyawa fenolik tampaknya meyakinkan aktivitas
antioksidan dari ekstrak kasar dan fraksinya dan dapat agen yang bertanggung jawab atas
penghambatan AChE dan BChE dalam fraksi yang kaya fenolik. Ekstrak alkaloid juga
menunjukkan anti- aktivitas oksidan dengan aktivitas antikolinesterase yang kuat. Dari
perbedaan- Jika hasil yang diperoleh, kita dapat mempertimbangkan Rutachalepensis sebagai
potensi sumber molekul dengan aksi ganda dalam pengembangan obat baru /nutraceuticals
untuk pengelolaan penyakit Alzheimer. Namun, studi lebih lanjut harus dilakukan pada
senyawa yang diisolasi untuk mengidentifikasi molekul bioaktif. Investigasi toksisitas
ekstrak adalah hal lain parameter yang harus ditentukan untuk memastikan keamanan
penggunaannya.