PENGARUH KOMBINASI ZAT PENGATUR TUMBUH (ZPT)

DAN POSISI EKSPLAN TERHADAP PERTUMBUHAN

KALUS DAUN TIN VARIETAS GREEN YORDAN (Ficus
Carica L.) SECARA IN VITRO

SKRIPSI

Untuk memenuhi sebagai syarat memperoleh gelar sarjana (S1)

Oleh:
Ririn Suryani
1157060069

JURUSAN AGROTEKNOLOGI
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SUNAN GUNUNG DJATI
BANDUNG
2019 M/ 1440
PENGARUH KOMBINASI ZAT PENGATUR TUMBUH (ZPT)
DAN POSISI EKSPLAN TERHADAP PERTUMBUHAN
KALUS DAUN TIN VARIETAS GREEN YORDAN (Ficus
Carica L.) SECARA IN VITRO

SKRIPSI

Untuk memenuhi sebagai syarat memperoleh gelar sarjana (S1)

Oleh:
Ririn Suryani
1157060069

JURUSAN AGROTEKNOLOGI
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SUNAN GUNUNG DJATI
BANDUNG
2019 M/ 1440
 LEMBAR PENGESAHAN

Judul : Pengaruh Kombinasi Zat Pengatur Tumbuh (ZPT)

dan Posisi Eksplan Terhadap Pertumbuhan Kalus
Daun Tin Varietas Green Yordan (Ficus carica. L)
Secara In Vitro
Nama : Ririn Suryani
NIM : 1147060069
Program Studi : Agroteknologi
Tanggal Sidang :

Menyetujui,

Dosen Pembimbing I Dosen Pembimbing II

Prof. Dr. H. M. Subandi, Drs., Ir.,MP Dr. Liberty Chaidir, SP.,M.Si

NIP. 195404241985031004 NIP.197808282009122002
 LEMBAR PERNYATAAN

Bismillahirrahmanirrahim,

Dengan ini saya menyatakan bahwa:

1. Skripsi ini adalah asli dan belum pernah diajukan untuk mendapatkan

gelar akademik baik di UIN Sunan Gunung Djati maupun di perguruan

lain.

2. Karya tulis ini adalah murni gagasan, rumusan, dan peneitian saya, tanpa

bantuan pihak lain, kecuali arahan Tim Pembimbing dan masukan Tim

Penelaah.

3. Dalam karya tulis ini terdapat karya atau pendapat yang telah ditulis atau

dipublikasikan orang lain, kecuali secara tertulis dengan jelas dicantumkan

dalam daftar pustaka sebagai acuan dalam naskah dengan menyebutkan

nama pengarangnya.

4. Pernyataan ini saya buat dengan sesungguhnya dan apabila dikemudian

hari terdapat penyimpangan dan ketidakbenaran dalam pernyataan ini,

maka saya bersedia menerima sanksi akademik berupa pencabutan gelar

yang telah diperoleh karena karya ini, serta sanksi lainnya sesuai dengan

norma yang berlaku di perguruan tinggi ini.

Bandung, September 2018

Yang memberi pernyataan,

Novita Eka Anggraeni

(1147060056)
 RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan
ABSTRAK
ABSTRACT
 KATA PENGANTAR

Segala puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT, karena berkat

rahmat, hidayah dan karunia-Nya maka penulis dapat menyelesaikan skripsi ini

dengan judul “Pengaruh Kombinasi Zat Pengatur Tumbuh (ZPT) dan Posisi

Eksplan Terhadap Pertumbuhan Kalus Daun Tin Varietass Green Yordan

(Ficus carica. L) Secara In Vitro”. Skripsi ini diajukan untuk memenuhi salah

satu syarat dalam mendapatkan gelar sarjana (S1) di Fakultas Sains dan Teknologi

Program Studi Agroteknologi Universitas Islam Negeri Sunan Gunung Djati

Bandung. Penulis sangat mengharapkan masukan, kritik dan saran yang bersifat

membangun kearah perbaikan dan penyempurnaan proposal usulan penelitian ini.

Cukup banyak kesulitan yang penulis temui dalam penulisan proposal ini, tetapi

Alhamdullilah dapat penulis atasi dan selesaikan dengan baik. Laporan ini dibuat

dengan bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis mengucapkan

terimakasih yang sebesar besarnya kepada :

1. Kedua orang tua dan keluarga yang senantiasa selalu memberikan dukungan

yang berharga selama penulis menimba ilmu dikampus UIN Bandung baik

dalam bentuk moril maupun materi.

2. Prof.Dr.H.M.Subandi,Drs.,Ir.,MP. Dosen Pembimbing I.

3. Dr. Liberty Chaidir, SP.,M.Si . Dosen Pembimbing II

4. Ir.Ahmad Taofik , M.P. Ketua Program Studi Jurusan Agroteknologi UIN

Sunan Gunung Djati Bandung.

5. Dr.H.Opik Taupik Kurahman. Dekan Fakultas Sains dan Teknologi UIN Sunan

Gunung Djati Bandung.

6. Seluruh dosen dan staf Jurusan Agroteknologi dan Fakultas Sains dan

Teknologi yang telah membantu penulis.

7. Teman teman Minorrapin yaitu Mira Mutiara, Rahayu Puji, Puspita Amalya,

Siti Sapuroh, Novita Ramadhanti yang selalu memberikan semangat dalam

melaksanakan penelitian ini.

8. Seluruh teman teman seperjuangan Agroteknologi angkatan 2015 yang telah

menemani menimba ilmu selama 4 tahun.

9. Dan semua pihak yang telah membantu yang tidak bisa penulis sebutkan satu

persatu, penulis mengucapkan terimaksih atas doa dan dukungannya kepada

penulis dalam menyelesaikan tugas akhir ini.

Akhir kata penulis berharap semoga proposal usulan penelitian ini dapat

bermanfaat bagi semua pihak dan semoga amal baik yang telah diberikan kepada

penulis mendapat balasan dari Allah SWT.

Bandung, Januari 2109

Ririn Suryani
 DAFTAR ISI

Judul Halaman
LEMBAR PENGESAHAN...................................................................................ii
LEMBAR PERNYATAAN....................................................................................i
RIWAYAT HIDUP................................................................................................ii
ABSTRAK.............................................................................................................iii
ABSTRACT...........................................................................................................iv
KATA PENGANTAR............................................................................................v
DAFTAR ISI........................................................................................................vii
DAFTAR TABEL.................................................................................................ix
DAFTAR GAMBAR..............................................................................................x
BAB I.......................................................................................................................1
PENDAHULUAN...................................................................................................1
1.1 Latar Belakang....................................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah..............................................................................................3
1.3 Tujuan Penelitian................................................................................................3
1.4 Kegunaan Penelitian...........................................................................................4
1.5 Kerangka Pemikiran............................................................................................4
1.6 Hipotesis.............................................................................................................8
BAB II.....................................................................................................................9
TINJAUAN PUSTAKA.........................................................................................9
2.1 Taksonomi dan Morfologi Tanaman Tin.............................................................9
2.1.1 Syarat Tumbuh..............................................................................................12
2.1.2 Manfaat.........................................................................................................12
2.2 Kultur Jaringan.................................................................................................13
2.3 Zat Pengatur Tumbuh.......................................................................................15
1.3.1 2,4-D (Dichlorophenoxyaceticacid)...........................................................16
2.3.2 Kinetin (Furfurylaminopurine).......................................................................17
2.4 Induksi Kalus..........................................................................................................18
2.5 Posisi Penanaman Eksplan Abaksial dan Adaksial..................................................22
BAB III..................................................................................................................24
METODOLOGI...................................................................................................24
3.1 Tempat dan Waktu Penelitian..........................................................................24
3.2 Alat dan Bahan.................................................................................................24
3.3 Metode Penelitian............................................................................................24
3.3.1 Rancangan Percobaan..............................................................................25
3.3.2 Rancangan Perlakuan...............................................................................25
3.3.3 Rancangan Respon...................................................................................26
3.4 Rancangan Analisis...........................................................................................31
3.5 Pelaksanaan Penelitian.....................................................................................33
3.5.1 Sterilisasi Alat...........................................................................................33
3.5.2 Sterilisasi Eksplan.....................................................................................34
3.5.3 Sterilisasi Ruang............................................................................................34
3.5.3 Pembuatan Media....................................................................................35
3.5.4 Penanaman...............................................................................................36
BAB IV..................................................................................................................37
HASIL DAN PEMBAHASAN............................................................................37
4.1 Karantina Tanaman buah Tin varietas Green Yordan (Ficus carica L.)...................37
4.2 Kondisi Lingkungan Ruang Inkubasi........................................................................38
4.3 Persentase Eksplan Hidup................................................................................39
4.4 Induksi Kalus.....................................................................................................41
4.4.1 Waktu muncul kalus.................................................................................42
DAFTAR PUSTAKA...........................................................................................48
LAMPIRAN..........................................................................................................53
 DAFTAR TABEL

No Judul Halama

1. Tabel Sidik Ragam............................................................................................26

2. Daftar Sidik Ragam...........................................................................................33
3. Persentase eksplan hidup daun tin hingga 6 MSI.............................................40
 DAFTAR GAMBAR

No Judul Halama

1.Alur Kerangka Pemikiran......................................................................................13

2. Tanaman Tin Green Yordan.................................................................................16
3. Buah Tin Green Yordan.......................................................................................17
4. Fase pertumbuhan kalus........................................................................................27
5. Perkembangan kalus hingga membentuk planlet...................................................28
6. Posisi Daun...........................................................................................................29
7. Tekstur Kalus (A) Kalus kompak (B) Kalus remah...............................................34
8. Sumber Eksplan di Sreen House...........................................................................43
9. Perkembangan kalus dari 1 MSI hingga 6 MSI.....................................................48
10. Pembengkakan Eksplan........................................................................................49
11. Awal muncul kalus pada perlakuan m1a2.............................................................51
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Tanaman tin atau ara (Ficus carica L.) merupakan tanaman asli Asia Barat dan

telah dibudidayakan selama ribuan tahun di Mediterania negara-negara Eropa dan

Afrika Utara (Manago, 2006). Tanaman ini telah dikenal sebagai tanaman yang

mempunyai khasiat, buah tin mengandung zat sejenis alkalin yang mampu

menghilangkan kemasaman pada tubuh, mengobati luka luar, merangsang

pembentukan hemoglobin darah, serta mengandung kadar glukosa yang cukup

tinggi tanpa menyebabkan diabetes (Sobir & Amalya, 2011). Hashemi (2011)

menyebutkan bahwa buah tanaman tin mampu mencegah terjadinya kanker perut.

Daun tin memiliki berbagai bahan aktif seperti flavonoid, fenolik, kumarin,

glikosida, steroid, dan triterpenoid (Khalaskar, 2010).

Manfaat dari buah tin yang banyak dan saat ini masih merupakan buah buahan

langka di Indonesia, menyebabkan buah tin memiliki peluang yang besar untuk

dibudidayakan. Pohon tin baru ditanam di beberapa daerah di Indonesia, terutama

di Pulau Jawa dan sebatas di lingkungan penggemar (Haris, 2010). Pada dasarnya

tanaman tin diperbanyak dengan biji, stek, atau cangkok, namun masih banyak

ditemukan berbagai kendala, antara lain perbanyakan biji sulit tumbuh, cangkok

yang sangat lambat dan terbatas, serta kualitas bibit yang kurang baik (Dhage et

al., 2012). Dan perbanyakan dengan stek hanya 20-30% bibit yang berhasil

tumbuh karena gagal pada saat perakaran. Oleh karena itu, diperlukan teknik

untuk memperbanyak bibit tanaman yang mampu menghasilkan tin dalam jumlah

1
 2

banyak dan waktu yang cukup singkat, serta bebas dari hama dan penyakit, dan

bibit yang dihasilkan telah berakar salah satunya yaitu dengan kultur in vitro.

Lindsey & Jones (1990) Bibit hasil kultur jaringan telah memiliki akar sehingga

akan cepat tumbuh dilapang, selain itu apabila aklimatisasi dilakukan secara

serentak akan diperoleh bibit yang seragam.

Keberhasilan kultur jaringan tanaman dipengaruhi oleh beberapa faktor,

diantaranya sterilisasi, pemilihan bahan eksplan, faktor lingkungan seperti pH,

cahaya dan temperatur, serta kandungan ZPT (Zat Pengatur Tumbuh ) dalam

medium kultur. Bahan eksplan yang digunakan dalam kultur kalus dapat diperoleh

dari berbagai organ tumbuhan seperti batang, petiol, daun, hipokotil, kotiledon,

akar dan lain-lain (Mastuti, 2017). Namun pada kultur kalus tin digunakan

eksplan daun tin yang masih muda karena organ daun mudah didapat dan bersifat

marestematik.

Penggunaan daun dalam kultur in vitro juga berhubungan dengan ketersediaan

stomata. Menurut Haryanti (2010) distribusi stomata pada daun berhubungan

dengan kecepatan dan intensitas transpirasi daun. Semakin banyak pori pada daun

maka akan memicu penguapan. Distribusi stomata pada daun dipengaruhi oleh

posisi daun meliputi daun bagian atas (adaksial) dan daun bagian bawah

(abaksial). Penggunaan berbagai letak posisi penanaman daun sebagai eksplan

perlu dilakukan untuk mendapatlan pertumbuhan kalus terbaik.

Induksi kalus sangat berkaitan dengan zat pengatur tumbuh endogen dan

eksogen. Zat pengatur tumbuh yang paling berpengaruh pada induksi kalus adalah

auksin dan sitokinin. Penggunaan auksin (2,4-D) dan sitokinin (kinetin) akan
 3

meningkatkan proses induksi kalus. 2,4-D efektif untuk merangsang pembentukan

kalus karena aktivitas yang kuat untuk memacu proses diferensiasi sel,

organogenesis dan menjaga pertumbuhan kalus. Kinetin merupakan salah satu

sitokinin yang sering digunakan dalam kultur jaringan, berfungsi untuk

mempercepat sintesis protein, sehingga mendorong pembelahan dan pembesaran

sel (Santoso & Nursandi, 2002).

1.2 Rumusan Masalah

Rumusan masalah penelitian ini yaitu:

1. Bagaimana pengaruh posisi penanaman eksplan dan kombinasi zat

pengatur tumbuh terhadap pertumbuhan kalus daun Tin varietas Green

yordan (Ficus carica L.) secara in vitro ?

2. Posisi penanaman eksplan dan kombinasi zat pengatur tumbuh manakah

yang memberikan pengaruh terbaik terhadap pertumbuhan kalus daun

Tin varietas Green yordan (Ficus carica L.) secara in vitro ?

1.3 Tujuan Penelitian

Tujuan dilakukan penelitian ini yaitu:

1. Mengetahui pengaruh posisi penanaman eksplan dan kombinasi zat

pengatur tumbuh terhadap pertumbuhan kalus daun Tin varietas Green

yordan (Ficus carica L.) secara in vitro.

2. Memperoleh posisi penanaman eksplan dan kombinasi zat pengatur

tumbuh yang memberikan pengaruh terbaik terhadap pertumbuhan

 4

kalus daun tin varietas Green yordan (Ficus carica L.) secara in vitro.

1.4 Kegunaan Penelitian

Penelitian ini berguna untuk:

1. Hasil penelitian ini diharapkan mampu memberikan informasi mengenai

Posisi penanaman eksplan dan komposisi media yang memberikan

pengaruh terbaik terhadap pertumbuhan kalus daun Tin (Ficus carica

L.).

2. Untuk mengembangkan dan memperbanyak pertumbuhan tanaman Tin

(Ficus carica L.) dengan cepat dan steril secara in vitro.

3. Bagi ilmu pengetahuan, hasil penelitian ini diharapkan dapat bermanfaat

bagi perkembangan dalam bidang fisiologi tumbuhan dan bioteknologi.

1.5 Kerangka Pemikiran

Tanaman Tin (Ficus carica L.) merupakan tanaman hortikultura tahunan

berbentuk perdu atau semak berkayu dan termasuk kedalam golongan tanaman

berbunga (Angiospermae) serta termasuk tanaman dikotil karena bentuk batang

yang bercabang-cabang, daun menjari dan berakar tunggang dengan keadaan

berkas pengangkut teratur dan biji berkeping dua. Keadaan daun tin pada

umumnya menjari seperti jari tangan manusia dan ada beberapa varietas menjari

namun tumpul serta oval lancip seperti daun jati. Tanaman tin termasuk kedalam

famili Moraceae (suku nangka-nangkanan) dengan keadaan bunga tidak tampak

karena terlindung oleh dasar bunga yang menutupi sehingga dikira buah.
 5

Tanaman tin memiliki tipe penyerbukan mandiri yaitu menyerbuk sendiri diantara

bunga-bunganya (Tjitrosoepomo, 2010).

Tanaman tin sudah mulai dibudidayakan di Indonesia, misalnya di daerah

Gresik dan beberapa kota di Indonesia seperti Tulung agung, Kediri dan Blitar.

Tanaman tin di Gresik sudah mulai dibudidayakan di lahan dan telah dibuat obat,

sedangkan di Tulungagung hanya bibit yang diperjual belikan. Hingga saat ini

tanaman tin di Indonesia yang mudah berbuah ada varietas Green yordan (gy),

Purple yordan (py) dan Brown turkey (bt). Menurut Hilmerick (1999) tiga varietas

ini merupakan varietas tin dengan warna khas hijau-kuning. Varietas Green

yordan mempunyai kelebihan pertumbuhan lebih cepat dari varietas Purple

yordan dan Brown turkey serta rasa buahnya manis dan kaya rasa (Brien & Hardy,

2002). Perkembangan tin di Indonesia belum bisa memenuhi pasar nasional, hal

ini terbukti masyarakat belum banyak yang mengetahui tentang tanaman ini dan

hasil jadi bibit masih rendah. Perbanyakan tanaman tin dapat dilakukan dengan

biji, cangkok maupun stek. Namun benih yang sulit tumbuh, cangkok yang sangat

lambat dan beresiko merusak induk tanaman serta stek yang sulit pada saat

perakaran menjadi kendala dalam perbanyakan tanaman tin (Mustafa, 2012).

Teknik kultur in vitro merupakan metode alternatif yang dapat digunakan

untuk perbanyakan tanaman tin karena menghasilkan bibit dalam jumlah besar

dengan waktu yang relatif singkat, pertumbuhan seragam, bebas patogen, dan

produksi bibit yang tidak tergantung musim (Farid, 2003).

Zat pengatur tumbuh menjadi salah satu factor keberhasilan kultru in vitro agar

eksplan dapat tumbuh dengan baik. (Pierik, 1997). Pada kultur kalus ZPT yang
 6

sering digunakan yaitu auksin dan sitokinin, dalam jumlah yang seimbang,

sitokinin dan auksin akan mendorong pembentukan kalus (Yusnita, 2003). 2,4-D

adalah zat pengatur tumbuh golongan auksin yang sering digunakan dalam

pembentukan kalus. Menurut Indah & Ermavitalini, (2013) 2,4-D efektif untuk

merangsang pembentukan kalus karena aktivitas yang kuat untuk memacu proses

diferensiasi sel, organogenesis dan menjaga pertumbuhan kalus. Kinetin adalah

salah satu sitokinin yang sering digunakan dalam kultur jaringan, berfungsi untuk

mempercepat sintesis protein, sehingga mendorong pembelahan dan pembesaran

sel (Santoso & Nursandi, 2002). Kinetin yang ditambahkan pada media kultur

akan menaikkan laju sintesis protein sehingga mendorong pembesaran dan

pembelahan sel (mitosis). Hasil penelitian Daniah (2014) pada penambahan

Kinetin 0,2 mg/l dan 2,4-D 2 mg/l dan Kinetin 0,4 mg/l dan 2,4-D 4 mg/l berhasil

menginduksi kalus daun tin dengan persentase 100%.

Daun pada kebanyakan tanaman dikotil (juga beberapa tanaman monokotil)

bersifat dorsiventral, artinya daun-daun tersebut memiliki permukaan bagian atas

(adaksial) dan permukaan sebelah bawah (abaksial) yang secara morfologis dan

anatominya berbeda. Epidermis atas tersusun dari satu lapis sel, berbentuk persegi

empat hingga menyudut ke kanan (rectangular), dinding sebelah luarnya tertutup

oleh kutikula, dan tidak mengandung kloroplas. Epidermis bawah strukturnya

mirip dengan epidermis atas, namun berbeda dalam stomatanya (Zulkarnain,

2009). Menurut Gunawan (1995) kemampuan morfogenesis berhubungan dengan

tempat sel yang kompeten. Pengaplikasian posisi penanaman eksplan yang

berbeda yaitu posisi daun adaksial dan abaksial merupakan metode yang dapat
 7

dilakukan. Hasil penelitian Rahmi (2016) menunjukan bahwa eksplan perlakuan

adaksial mampu membentuk kalus lebih baik dibandingkan eksplan perlakuan

abaksial pada media MS + 2,4-D 2 mg/l + PVP 0,5 % tanaman Jeruk Besar

Cikoneng ST dan Jeruk Manis pada 28 HSI. Penelitian Fadilah (2014)

pembentukan kalus daun tin perlakuan terbaik ditunjukkan oleh medium MS

dengan penambahan IBA 0,5 mg/l dan Kinetin 1,5 mg/l dengan posisi penanaman

abaksial.

Gambar 1.Alur Kerangka Pemikiran

 8

1.6 Hipotesis

1. Terdapat pengaruh posisi penanaman eksplan dan kombinasi zat

pengatur tumbuh terhadap pertumbuhan kalus daun tin varietas Green

yordan (Ficus carica L.) secara in vitro.

2. Terdapat posisi penanaman eksplan dan kombinasi zat pengatur tumbuh

yang terbaik terhadap pertumbuhan kalus daun tin varietas Green yordan

(Ficus carica L.)

 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Taksonomi dan Morfologi Tanaman Tin

Tanaman tin (Ficus carica L.) merupakan tanaman asli Asia Barat dan telah

dibudidayakan selama ribuan tahun di Mediterania negara-negara Eropa dan

Afrika Utara (Manago, 2006). Budidaya tanaman tin di mancanegara telah

berkembang luas terutama di Spanyol, Turki, dan Italia, tetapi di Amerika Serikat

budidayanya masih terbatas. Buah tin memiliki sumber serat yang baik dan dapat

membantu proses metabolisme feses dalam tubuh. Buah tin segar mengandung

1,2% serat, sedangkan yang kering mengandung 5,6% (Pipattanawong et al.,

2008).

Tanaman tin atau ara (Ficus carica L.) merupakan tanaman khas Timur

Tengah yang saat ini telah dibudidayakan di Indonesia meskipun masih tergolong

langka, tanaman ini telah dikenal sebagai tanaman yang mempunyai khasiat. Buah

tin mengandung zat sejenis alkalin yang mampu menghilangkan kemasaman pada

tubuh, mengobati luka luar, merangsang pembentukan hemoglobin darah, serta

mengandung kadar glukosa yang cukup tinggi tanpa menyebabkan diabetes (Sobir

& Amalya, 2011).

9
 10

Taksonomi Buah Tin adalah sebagai berikut:

Divisio : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Ordo : Rosales

Famili : Moraceae

Genus : Ficus

Species : Ficus carica L (Joseph and Raj, 2011)

Gambar 2. Tanaman Tin Green Yordan

a. Akar

Akar tanaman tin pada umumnya sama dengan akar suku Moraceae lainnya

yaitu berakar tunggang bulat menembus kedalam tanah. Akar utama lurus

kearah bumi dengan kedalaman ± hingga 3 meter dan cabang serta bulu akar

menyebar secara lateral mencapai ± 2 meter (Rukmana, 1997).

b. Batang

Tanaman Tin dapat mencapai ketinggian 3-10 m. Tanaman Tin tumbuh

dengan banyak percabangan. Struktur batang tanaman tin semua varietas

adalah beruas-ruas/ berbuku-buku dengan jarak antara ruas 1-3 cm. Batang ini
 11

memiliki tekstur keras dan berkambium. Batang berwarna coklat kehitaman

dan berdiameter 2-10 cm serta mempunyai tinggi 3-10 meter atau sesuai

varietasnya (Rukmana, 1997).

c. Daun

Daun tanaman tin merupakan daun tunggal tumbuh berselang seling pada

ranting tanaman. Daun ini terdiri dari helai daun, tangkai daun dan pada

umumnya menjari dengan bagian atas kasar dan bagian bawah daun lembut.

Warna daun bagian atas hijau muda sedangkan bagian bawah hijau keputihan.

Bentuk daun menjari seperti tangan manusia. Pada varietas green yordan daun

membentuk seperti jari manusia (terdiri dari lima jari) (Priono, 2013).

d. Buah

Buah Tin muncul di tunas lateral pada daun. Bunga muncul pada cabang

tunas lateral daun (Dolgun and Tekintas, 2008). Periode awal pertumbuhan

adalah dikarakteristikkan dengan oleh pertumbuhan ukuran diameter dan

berat. Pada tahap ini hampir tidak terdapat perbedaan terhadap akumulasi

gula. Tahap kedua adalah tingkat kematangan yang ditandai dengan akumulasi

gula tanpa ada perubahan ukuran dan berat. Tahap ketiga dikarakteristikkan

oleh percepatan ukuran diameter buah, kematangan, serta air dan kandungan

gula (Flaishman et al., 2008).

Gambar 3. Buah Tin Green Yordan

 12

2.1.1 Syarat Tumbuh

Tanaman tin menghendaki tanah gembur berpasir dengan pH 6,0-7,8 dan

dapat hidup pada tanah vulkanik, aluvial sampai tanah gurun. Tanaman ini tidak

menghendaki penyiraman yang terlalu sering, jika tanah terlalu basah akan

menyebabkan busuk akar atau penyakit lainnya yang disebabkan oleh

mikroorganisme tanah lainnya. Di daerah asalnya yakni daerah israel, arab,

yordan, texas, chicago, turki dan mesir tanaman ini mampu tumbuh pada iklim

panas kering pada suhu yang dikehendaki antara 25 0C - 420C dengan curah hujan

rata-rata 925 mm/ tahun. Ketinggian tempat tumbuh yang baik untuk tanaman tin

pada ketinggian ± antara 0 - 813 m dpl atau tergantung varietasnya. Tanaman ini

menghendaki kelembaban tidak kurang dari 70%. Untuk negara indonesia sendiri

dari paparan di atas cocok berbudidaya tin karena memiliki musim kemarau dan

kelembaban yang optimal (Polat & Caliskan, 2012)

2.1.2 Manfaat

Tin adalah buah-buahan yang mengandung zat sejenis alkalin yang mampu

menghilangkan keasaman pada tubuh. Zat - zat aktif yang terdapat dalam buah tin

adalah sejenis zat-zat pembersih yang bisa dipakai untuk mengobati luka luar

dengan cara melumurinya. Unsur yang terkandung dalam buah Tin adalah

karbohidrat, protein, dan minyak. Buah Tin juga mengandung yodium, kalsium,

fosfor, zat besi, magnesium, belerang (fosfat), chlorin, serta malic acid dan

nicotinic acid. Hasil penelitian lebih lanjut menyebutkan bahwa buah Tin

termasuk buah yang dapat merangsang pembentukan hemoglobin darah, cocok

sebagai obat penyakit anemia. Di samping itu buah tin juga mengandung kadar
 13

glukosa yang cukup tinggi. Menurut hasil penelitian medis, buah yang besarnya

seperti buah kelengkeng itu selain kaya akan kalsium dan potasium juga

mengandung zat benzaldehyde yang bermanfaat melawan sel-sel kanker. Di dalam

buah tin yang rasanya manis itu juga mengandung zat yang sangat penting bagi

tubuh manusia karena dapat mengurangi kolesterol jahat, menguatkan jantung dan

menormalkan pernafasan bagi penderita sesak nafas. Buah yang juga dikenal

dengan nama Ara atau Figs itu banyak dijumpai di negara-negara Arab. Buah ini

mudah dicerna oleh alat pencernaan, bermanfaat untuk mengobati sulit buang air

besar, bermanfaat untuk hati dan limpa. (Khasanah,2011)

Tanaman tin (Ficus carica L.) merupakan tanaman yang memiliki banyak

manfaat, salah satunya adalah daunnya yang secara tradisional digunakan untuk

mengobati berbagai penyakit karena mengandung banyak senyawa kimia, antara

lain bergapten, 4’,5’-dihydropsoralen, rutin, 24-methylene cycloartenol

umbelliferone, marmesin, stigmasterol, β-sitosterol, ficusogeninlupeol,

taraxsterol ester, dan tyrosine moisture (Ahmad et al., 2013).

2.2 Kultur Jaringan

Kultur jaringan tanaman adalah suatu teknik menumbuh kembangkan bagian

tanaman, baik berupa sel, jaringan, atau organ dalam kondisi aseptik secara in

vitro dengan ciri-ciri kondisi kultur yang aseptik, penggunaan media kultur buatan

dengan kandungan nutrisi lengkap dan zat pengatur tumbuh (ZPT), serta kondisi

ruangan kultur yang suhu dan pencahayaannya terkontrol (Yusnita, 2003).

 14

Kultur jaringan tanaman merupakan metode yang digunakan untuk

mengisolasi bagian tanaman seperti sel, sekelompok sel, jaringan ataupun organ

dan membudidayakannya dalam lingkungan terkendali (in vitro) secara aseptis

sehingga bagian tanaman dapat menjadi tanaman utuh kembali melewati proses

regenerasi. Teknik kultur jaringan berkembang setelah dikemukakannya teori

totipotensi oleh Schwann dan Schleiden pada tahun 1938. Teori totipotensi

menyatakan masing-masing sel tumbuhan memiliki informasi genetik dan sarana

fisiologis yang dapat membuat sel tumbuhan mampu membentuk tanaman utuh

bila diletakkan di dalam lingkungan yang sesuai (Sulistiani & Yani, 2012).

Media kultur merupakan salah satu faktor keberhasilan kultur jaringan

tanaman. Media kultur terdiri dari air sebagai pelarut dan komponen utama, agar

sebagai pemadat media, garam-garam anorganik terdiri dari hara makro dan

mikro, sumber energi berupa sukrosa, dan vitamin. Dalam media kultur juga

ditambahkan zat pengatur tumbuh untuk perbanyakan propagul, dengan rasio

antara sitokinin dan auksin (Hartman et al., 2002).

Ekplan adalah bahan tanaman yang akan dikulturkan yang kemudian

diharapkan menghasilkan bibit-bibit tanaman yang sehat dan seragam. Eksplan

merupakan faktor penting penentu keberhasilan kultur jaringan. Dalam memilih

eksplan perlu diperhatikan umur fisiologi, umur ontogenetik, ukuran eksplan, dan

bagian tanaman yang diambil sebagai bahan awal kultur (Yusnita, 2003). Eksplan

yang sering digunakan dalam kultur in vitro untuk tujuan perbanyakan tanaman

yaitu jaringan meristem, setek satu buku, dan embrio (George et al., 2008).

Bagian tanaman yang digunakan sebagai eksplan berasal dari jaringan muda yang
 15

sedang tumbuh aktif. Jaringan tanaman yang masih muda memiliki daya

regenerasi yang lebih tinggi, sel-selnya masih aktif membelah diri, dan relatif

lebih bersih. Sementara jaringan yang sudah tua lebih sulit beregenerasi, dan

biasanya mengandung lebih banyak kontaminan (Yusnita, 2003).

2.3 Zat Pengatur Tumbuh

Zat pengatur tumbuh (ZPT) adalah senyawa organik bukan hara, yang dalam

jumlah sedikit dapat mendukung, menghambat, dan dapat merubah proses

fisiologi tumbuhan (Taiz & Zeiger, 2008). Zat pengatur tumbuh tanaman berperan

penting dalam mengontrol proses biologi dalam jaringan tanaman. Perannya

antara lain mengatur kecepatan pertumbuhan dari masing-masing jaringan dan

mengintegrasikan bagian-bagian tersebut guna menghasilkan bentuk yang kita

kenal sebagai tanaman. Aktivitas zat pengatur tumbuh di dalam pertumbuhan

tergantung dari jenis, struktur kimia, konsentrasi, genotipe tanaman serta fase

fisiologi tanaman (Gaba, 2005).

Zat pengatur tumbuh yang banyak digunakan dalam kultur jaringan adalah

auksin dan sitokinin. Dalam proses pembentukan organ seperti tunas atau akar ada

interaksi antara zat pengatur tumbuh eksogen yang ditambahkan ke dalam media

dengan zat pengatur tumbuh endogen yang diproduksi oleh jaringan tanaman.

Penambahan auksin atau sitokinin ke dalam media kultur dapat meningkatkan

konsentrasi zat pengatur tumbuh endogen di dalam sel, sehingga menjadi “faktor

pemicu” dalam proses tumbuh dan perkembangan jaringan. Peran auksin yang
 16

ditambahkan pada media antara lain, merangsang pertumbuhan kalus, merangsang

pembentangan sel dan mengatur morfogenesis (Santoso & Nursandi, 2002).

1.3.1 2,4-D (Dichlorophenoxyaceticacid)

2,4-D adalah zat pengatur tumbuh golongan auksin yang sering digunakan

dalam pembentukan kalus. Menurut Indah & Ermavitalini (2013) 2,4-D efektif

untuk merangsang pembentukan kalus karena aktivitas yang kuat untuk memacu

proses diferensiasi sel, organogenesis dan menjaga pertumbuhan kalus.

Penambahan auksin pada jumlah yang lebih besar, atau penambahan auksin yang

lebih stabil, seperti asam 2,4-D cenderung menyebabkan terjadinya pertumbuhan

kalus dari eksplan dan menghambat regenerasi pusuk tanaman (Wetherell, 1987).

Pemakaian zat pengatur tumbuh asam 2,4-D biasanya digunakan dalam jumlah

yang kecil dan dalam waktu singkat, antara 2-4 minggu karena pemakaian auksin

kuat artinya auksin ini dapat diuraikan di dalam tubuh tanaman (Hendrayono &

Wijayani, 1994). Sebab pada dosis tertentu asam 2,4-D sanggup membuat

mutasi-mutasi (Suryowinito, 1996). Penambahan auksin dengan konsentrasi

tinggi akan merangsang pembentukan kalus dan menekan morfogenesis (Smith,

1992).

Mekanisme kerja 2,4-D dalam pembentukan kalus yaitu dengan berdifusi

kedalam jaringan tanaman yang telah dilukai. 2,4-D yang diberikan akan

merangsang auksin yang terkandung didalam jaringan eksplan menstimulasi

pembelahan sel terutama sel-sel yang berada di sekitar daerah luka. Auksin

menginisiasi pemanjangan sel dengan cara mempengaruhi fleksibilitas dinding

sel dan memacu protein tertentu yang ada di membrane plasma untuk memompa
 17

ion H+ ke dinding sel. Ion H + mengaktifkan enzim tertentu sehingga memutuskan

ikatan silang hydrogen rantai molekul selulosa penyusun dinding sel. Sel tumbuh

memanjang akibat air yang masuk secara osmosis. Sel terus tumbuh dengan

mensintesis kembali mineral dinding sel dan sitoplasma (Ulfa, 2011).

2.3.2 Kinetin (Furfurylaminopurine)

Sitokinin merupakan kelompok hormon tumbuhan yang memacu pembelahan

sel (Wahyuningtiyas, 2014). Sitokinin yang sering digunakan dalam kultur

jaringan adalah BAP (Benzyl 6-Amino Purine), 2-Ip (Dimethyl Allyl Amino

Purine), dan kinetin. Sitokinin pada umumnya berperan dalam pengaturan

pembelahan sel dan morfogenesis. Pembelahan sel yang disebabkan oleh sitokinin

dapat membentuk kalus dan mendorong proses embriogenesis somatik (Gaba,

2005).

Kinetin adalah salah satu sitokinin yang sering digunakan dalam kultur

jaringan, berfungsi untuk mempercepat sintesis protein, sehingga mendorong

pembelahan dan pembesaran sel (Santoso & Nursandi, 2002). Kinetin yang

ditambahkan pada media kultur akan menaikkan laju sintesis protein sehingga

mendorong pembesaran dan pembelahan sel (mitosis). Sitokinin berperan

terutama dalam pembentukan benang gelendong dalam tahap metafase

(Watimena, 1992). Sitokinin mendorong pembelahan sel dalam biakan jaringan

dengan cara meningkatkan peralihan dari G2 (sesudah replikasi DNA) ke mitosis,

karena sitokinin menaikkan laju sintesis protein. Sintesis protein dapat

ditingkatkan dengan cara memacu pembentukan RNA-messenger dan menjaga

 18

kestabilannya, sehingga mempercepat translasi pesan genetik menjadi protein

(Salisbury & Ross, 1995).

2.4 Induksi Kalus

Induksi kalus adalah salah satu metode kultur jaringan yang dilakukan dengan

memacu pembelahan sel secara terus menerus dari bagian tanaman tertentu seperti

tunas, daun, akar, batang. Tahap induksi kalus ini akan terbentuk massa sel (kalus)

dengan menggunakan zat pengatur tumbuh (ZPT). Kalus adalah kumpulan masa

sel yang belum terorganisasi (amorphous) yang terjadi dari sel-sel jaringan yang

membelah diri secara terus menerus (Bustami, 2011).

Pembentukan kalus in vitro pada eksplan menunjukan bahwa respon eksplan

terhadap medium inisiasi sangat bervariasi. Tidak semua jaringan eksplan akan

menghasilkan kalus. Posisi terjadinya inisiasi kalus, warna, friabilitas dan jumlah

kalus juga akan bervariasi. Secara visual terjadinya induksi kalus ditandai dengan

jaringan eksplan ukuranya bertambah, terlihat menebal atau membengkak dan

kaku. Selanjutnya diikuti dengan terbentuknya nodul berwarna putih atau

kehijauan terutama pada bagian pelukaan.

Kalus pada dasarnya terbentuk sebagai respon alami terhadap gangguan

mekanik atau pelukaan. Sel-sel disekitar pelukaan akan membelah secara cepat

hingga membentuk lapisan sel-sel yang menutup bagian luka. Pada tahap ini

terjadi peningkatan aktivitas metabolism seperti produksi polifenol untuk

memperkuat dinding sel. Senyawa- senyawa yang dapat melindungi sel dari

serangan pathogen disintesis. Salah satu contoh adalah enzim kitinase disintesis
 19

untuk menghidrolisis komponen kitin dinding sel pathogen atau fungi. Terjadinya

induksi sel untuk membelah dan membentuk lapisan sel-sel penutup luka diduga

sebagai hasil interaksi hormon yang dikeluarkan oleh sel-sel yang rusak akibat

pelukaan (Mastuti, 2017). Berdasarkan fenomena alami tersebut maka para

peneliti terdahulu meyakini bahwa eksplan perlu mengalami pelukaan agar terjadi

respon pembentukan kalus (Allan, 1991). Walaupun kalus dapat secara alami

dibentuk sebagai penutup luka tetapi untuk mendapatkan masa kalus dalam

jumlah yang banyak perlu ditambahkan zat pengatur tumbuh eksogen.

Respon pertumbuhan kalus dapat dibagi menjadi tiga tahap yang dicirikan oleh

berubahnya rata-rata ukuran populasi sel dan metabolism secara keseluruhan dan

berakhir pada munculnya kalus. Tiga tahap tersebut adalah induksi, pembelahan

sel dan diferensiasi. Pada tahap induksi sel-sel melakukan persiapan untuk

pembelahan yang ditandai dengan perubahan ukuran, struktur dan metabolism sel

seperti sintesis makromolekul. Induksi pembelahan sel secara visual ditandai

dengan bertambahnya ukuran jaringan menjadi lebih luas, lebih tebal dan tampak

lebih padat serta kaku terutama pada ekplan daun atau kotiledon (Mastuti, 2017).

Pada tahap pembelahan sel menjadi bersifat meristematik, aktif membelah

sehingga rata-rata ukuran selnya menurun. Proses ini disebut dediferensiasi, yaitu

perubahan secara morfologi dan sitologi dari sel dewasa menjadi sel muda

kembali. Pembelahan sel diawali ada lapisan sel perifer eksplan, kemudian

dilanjutkan dengan proses dediferensiasi untuk kembali ke stadium meristematic

yang menghasilkan penurunan ukuran sel. Selanjutnya sel-sel yang sudah

terinduksi mengalami proliferasi aktif yang berkelanjutan mulai memunculkan

 20

nodul atau bentukan amorf pada sisi bekas luka akibat pemotongan sebagai respon

perbaikan atau penutupan luka (Mastuti, 2017).

Setelah kalus berhasil diinisiasi pada jaringan eksplan, tahap selnjutnya adalah

isolasi kalus untuk dipelihara sebagai massa jaringan yang tumbuh secara terus

menerus. Kalus hasil subkultur dapat digunakan sebagai sumber sel yang relative

seragam (uniform) untuk berbagai tujuan, antara lain untuk regenerasi planlet,

isolasi protoplas atau seleksi mutan resisten secara in vitro (Mastuti, 2017).

Berdasarkan bentuknya embrio pada kalus memiliki empat macam fase

pertumbuhan, yaitu fase globular, fase hati (Skutelar), fase jantung (Koleoptilar),

dan fase torpedo. Embrio somatik fase globular dicirikan dengan bentuk yang

bulat atau membulat, selanjutnya membentuk embrio fase hati (Skutelar). Leyser

(2002) menyatakan bahwa embrio somatik fase hati diawali dengan pembentukan

satu atau dua kotiledon atau adanya lekukan yang membentuk dua area.

Selanjutnya Dari fase hati embrio somatik berkembang dengan membentuk

dua kotiledon yang terdapat pada bagian atas tetapi masih pendek, pada tahap ini

embrio somatik berada pada fase torpedo. Menurut Leyser (2002) embrio fase

hati memanjang membentuk embrio fase torpedo dengan pola jaringan yang sama.

Fase torpedo mengalami perkembangan membentuk embrio somatik fase

kotiledon. Pada fase ini kotiledon mengalami pertumbuhan memanjang sehingga

dapat dilihat polaritas embrio somatik yang sangat jelas. Waktu munculnya

embrio pada kalus serta regenerasi dari embrio menjadi tunas pada setiap fasenya

akan berbeda beda, tergantung pada jenis tanaman, kondisi kalus, dan kandungan

hara pada media tanam.

 21

Gambar 4. Fase pertumbuhan kalus (A) Kalus embriogenik (B) Fase globular (C)
Fase hati (D) Fase torpedo (E) Fase kotiledon
Tahap awal regenerasi kalus secara embryogenesis somatic adalah pendewasaan

embrio somatic. Pada tahap ini kalus-kalus yang diperoleh pada perlakuan

sebelumnya diregenerasikan untuk membentuk tunas sampai menjadi planlet.

Regenerasi tunas diinduksi dari kalus yang baru terbentuk 45 hari setelah tanam.

Pada hari ke – 29 setelah tanam pada media untuk regenerasi maka kalus tampak

berubah warna dari putih menjadi kuning kecoklatan. Kalus kemudian

membentuk spot atau nodul-nodul berwarna hijau bakal tunas. Perubahan warna

tersebut merupakan adanya morfogenesis (Lestari & Yunita,2008).

Tunas sebagian besar terbentuk pada bagian abaksial daun, sedangkan akar

tumbuh pada bagian adaksial daun. Dhaliwal et al., (2004) mengatakan bahwa

pada eksplan daun tembakau primordia tunas tumbuh dari sel-sel mesofil palisade

yang terletak di bagian adaksial daun, sedangkan akar tumbuh dari barisan sel

parenkim dekat dengan pembuluh vaskuler. Proses perkembangan bakal tunas

diawali dengan pembelahan sel secara periklinal di sisi lateral (periferal), agak di

bawah daerah distal meristem pucuk. Pembelahan sel secara periklinal yang

diikuti dengan pertumbuhan sel anak yang menyebabkan tonjolan yang

membentuk primordial daun, sedangkan pembelahan sel secara antiklinal dapat

meningkatkan luas permukaan primordia daun. Primordial daun ditopang oleh sel
 22

prokambium, selanjutnya prokambium tersebut akan menjadi tulang daun (Qosim,

2005).

Gambar 5. Perkembangan kalus hingga membentuk planlet (A) Kalus

embriogenik (B) dan (C) Pembentukan embrio somatic struktur
globular (D) dan (E) pembentukan dan pertumbuhan tunas (F)
Perkembangan akar.

2.5 Posisi Penanaman Eksplan Abaksial dan Adaksial

Daun pada kebanyakan tanaman dikotil (juga beberapa tanaman monokotil)

bersifat dorsiventral, artinya daun-daun tersebut memiliki permukaan bagian atas

(adaksial) dan permukaan sebelah bawah (abaksial) yang secara morfologis dan

anatominya berbeda. Epidermis atas tersusun dari satu lapis sel, berbentuk persegi

empat hingga menyudut ke kanan (rectangular), dinding sebelah luarnya tertutup

oleh kutikula, dan tidak mengandung kloroplas. Epidermis bawah strukturnya

mirip dengan epidermis atas, namun berbeda dalam stomatanya

(Zulkarnain,2009). Posisi eksplan dalam media induksi akan berpengaruh dalam

jumlah embrio yang dihasilkan, dimana eksplan yang ditanam dengan posisi

bagian abaksial yang menyentuh media mempunyai jumlah embrio yang lebih
 23

banyak dibanding jika eksplan ditanam dengan posisi sebaliknya. Menurut

Muhuria (2007) dalam Suyitno (2012), bahwa jumlah stomata bagian abaksial

lebih banyak dibanding dengan bagian adaksial. Pada bagian adaksial tedapat

lapisan kutikula yang tebal dan menutupi stomata sehingga menghalangi

terjadinya proses transpirasi. Hal ini mengakibatkan kerapatan stomata pada lebih

besar dari kerapatan stomata pada bagian adaksial.

Gambar 6. Posisi Daun

 BAB III

METODOLOGI

3.1 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Kultur Jaringan Tanaman Jurusan

Agroteknologi Universitas Islam Negeri Sunan Gununng Djati Bandung dimulai

dari bulan FebruarI sampai Juli 2019.

3.2 Alat dan Bahan

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian adalah botol kultur, autoklaf, oven,

kertas penimbang, timbangan analitik, pinset, spatula, timer, hot plate and

magnetic stirrer, bunsen, korek api, pH meter, alimunium foil, plastik warp, gelas

piala, gelas ukur, pipet, batang pengaduk, corong, cawan petri, Laminar Air Flow

Cabinet (LAFC), plastik warp, kertas label, dan alat tulis.

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah tanaman tin (Ficus carica

L.) varietas Green Yordan yang diperoleh dari SEAMEO BIOTROP, 2,4-D,

Kinetin, gula, agar-agar, NaOH, HCl, aquadests steril, Bakterisida, Fungisida,

Clorox, Alkohol 70%, Tween 80, media MS (Murashige and Skoog) dan

alumunium foil.

3.3 Metode Penelitian

Metode yang digunakan dalam penelitian ini yaitu metode analisisis statistik

RAL (Rancangan Acak Lengkap) Faktorial terhadap parameter waktu muncul

24
 25

warna kalus, tekstur kalus, Diameter kalus, berat basah dan berat kering kalus.

Pengumpulan data dilakukan dengan cara mengamati pertumbuhan eksplan

selama 8 minggu.

3.3.1 Rancangan Percobaan

Rancangan percobaan yang dilakukan yaitu metode RAL (Rancangan Acak

Lengkap) Faktorial. Terdiri dari dua faktor yaitu Posisi eksplan dan Kombinasi

ZPT.

3.3.2 Rancangan Perlakuan

Rancangan perlakuan yang digunakan yaitu terdiri dari 2 faktor perlakuan

yaitu:

Faktor pertama, Posisi eksplan (a) yang terdiri dari 2 taraf perlakuan, yaitu:

a1 = Abaksial

a2 = Adaksial

Faktor kedua, Kombinasi ZPT (b) yang terdiri dari 2 taraf perlakuan, yaitu :

m1 = 2 mg/l 2,4-D + 0,2 mg/l Kinetin

m2 = 2 mg/l 2,4-D + 0,4 mg/l Kinetin

m3 = 2 mg/l 2,4-D + 0,6 mg/l Kinetin

Kedua faktor tersebut diperoleh 6 kombinasi perlakuan yang masing-masing

perlakuan dilakukan pengulangan sebanyak 4 kali, maka diperoleh 24 unit objek

percobaan yang akan diamati.

 26

Tabel 1. Tabel Sidik Ragam

Posisi Ekslan Kombinasi ZPT (m)
m1 m2 m3
(a)
a1 m1 a1 m2 a1 m3 a1
a2 m1 a2 m2 a2 m3 a2

3.3.3 Rancangan Respon

Parameter pengamatan dalam penelitian ini dibagi menjadi 2 yaitu pengamatan

penunjang dan pengamatan utama. Pengamatan penunjang adalah pengamatan

yang datanya tidak dianalisis secara statistik sedangkan pengamatan utama adalah

pengamatan yang datanya dianalisis secara statistik.

1. Pengamatan penunjang

a. Suhu dan Kelembaban

Pengamatan penunjang yang diamati yaitu lingkungan inkubasi selama

penelitian seperti suhu dan kelembaban. Pengamatan suhu dan kelembaban

ruang inkubasi diamati setiap harinya (senin-jum’at) dengan menggunakan

thermohigrometer dan dihitung rata-ratanya diakhir bulan

b. Persentase Kontaminasi (%)

Pengamatan dilakukan setiap hari dan mengamati sumber kontaminasi pada

eksplan. Sumber kontaminasi berupa cendawan dan bakteri. Ciri-ciri

munculnya cendawan ditandai oleh adanya miselium berwarna putih, hijau,

hitam, sedangkan bakteri ditandai oleh adanya lendir disekitar eksplan.

Pengamatan dilakukan dengan cara mengamati dan menghitung jumlah eksplan

 27

yang terkontaminasi cendawan, bakteri maupun keduanya. Persentase dihitung

dengan cara sebagai berikut (Sudiyanti et al., 2017):

∑ eksplan terkontaminasi
% Kontaminasi= x 100%
∑ seluruh eksplan

Persentase kontaminasi dikelompokan menjadi kontaminasi oleh cendawan

dan oleh bakteri. Kontaminasi oleh cendawan ditandai dengan adanya hifa baik

dimedium maupun dieksplan. Kontaminasi oleh bakteri ditandai dengan

adanya adanya cairan berwarna putih dan lembab pada medium.

Perhitungan persentasemya yaitu:

∑ eksplan terkontaminasi cendawan

% Kontaminasi = x 100%
∑ eksplan terkontaminasi

∑ eksplan terkontaminasi bakteri

% Kontaminasi = x 100%
∑ eksplan terkontaminasi

c. Persentase Eksplan Hidup (%)

Persentase eksplan hidup dilakukan dengan cara mengamati dan

menghitung jumlah eksplan yang masih hidup, dan tidak terjadi kontaminasi

dan tidak mati secara fisiologis dengan interval pengamatan satu minggu sekali

Pengamatan eksplan hidup dapat dihitung sebgai berikut (Sudiyanti et al.,

2017):

∑ eksplan hidup
% Eksplan hidup = x 100%
∑ seluruh eksplan
 28

2. Pengamatan Utama

Pengamatan utama adalah pengamatan yang datanya dianalisis secara

statistik. Komponen pengamatan utama yang diamati adalah:

a. Waktu Muncul Kalus

Pengamatan dilakukan setiap hari dengan menghitung hari saat muncul

kalus pertama kali yang dinyatakan dalam HSI (Hari Setelah Inisiasi).

Ditandai dengan adanya pembengkakan atau munculnya jaringan berwarna

putih kehijauan pada permukaan eksplan.

b. Warna Kalus

Pengamatan warna kalus dilakukan pada akhir pengamatan (60 HSI)

dengan mengamati secara visual menggunakan standar colour chart.

c. Tekstur Kalus

Pengamatan tekstur kalus dilakukan pada akhir pengamatan (60 HSI)

dengan mengamati tekstur kalus yang terbentuk menggunakan pinset, apakah

termasuk kalus yang kompak atau remah.

Gambar 7. Tekstur Kalus (A) Kalus kompak (B) Kalus remah

 29

d. Berat Basah Kalus (gram)

Pengukuran berat basah kalus dapat dilakukan didalam atau diluar LAF,

bila data berat basah kalus dibutuhkan untuk mengetahui pertumbuhan dalam

kurun waktu atau seri waktu tertentu maka penimbangan harus dilakukan di

LAF. Kalus diambil dari medium agar kemudian agar yang menempel

dihilangkan selanjutnya kalus diletakan sebentar dicawan petri yang

beralaskan kertas tisu. Langkah ini bertujuan agar kertas tisu menyerap air

yang berada di bagian luar jaringan kalus. Saat kalus ditimbang menggunakan

timbangan analitik diharapkan yang terukur adalah berat basah jaringan murni

kalus. Selanjutnya kalus siap dimasukkan kembali kedalam botol kultur untuk

ditumbuhkan kembali. Namun apabila data berat basah kalus yang akan diukur

merupakan tahap akhir fase pertumbuhan atau sample kalus yang akan

dianlisis lebih lanjut maka pengukuran dapat dilakukan diluar LAF (Mastuti,

2017).

e. Berat kering kalus (gram)

Pengukuran berat kering kalus dapat dilakukan dengan cara kalus dari botol

kultur dipindahkan ke aluminium foil kemudian beratnya ditimbang. Setelah

kalus dibungkus aluminium foil kemudian kalus di oven pada suhu 80 0C

selama kurang lebih 2 hari. Kalus yang dikeluarkan dari oven didinginkan

kemudian ditimbang (Mastuti,2017).

f. Diameter Kalus (cm)

 30

Pengamatan eksplan diameter kalus (cm) dilakukan pada ahir pengamatan.

Diameter kalus dapat diukur dengan cara meletakkan kalus pada cawan petri

yang dibawahnya telah diletakan kertas millimeter blok.

3. Pengamatan Cadangan

1. Waktu Muncul Tunas

Waktu awal muncul tunas dilakukan dengan mengetahui awal waktu tunas

terbentuk pada mata tunas setelah penanaman. Awal muncul tunas merupakan

indikator awal pertumbuhan eksplan. Terbentuknya tunas ditandai dengan

adanya tonjolan berwarna kehijauan pada eksplan. Tunas yang baru lahir,

batang muda, atau tanaman baru yang tumbuh dari setiap bagian dari tanaman

yang ada (Rahardja & Wahyu, 2003).

2. Panjang Tunas (cm)

Pertumbuhan panjang tunas terjadi karena ada pembelahan dan

pemanjangan sel dalam jaringan meristem. Panjang tunas ditentukan dengan

mengukur tunas menggunakan penggaris (dalam cm) pada dinding botol

setiap dua mingggu.

3. Jumlah tunas (tunas)

Jumlah tunas diamati diakhir pengamatan yaitu dengan menghitung jumlah

tunas yang tumbuh dari setiap eksplan yang tumbuh.

4. Waktu muncul akar

Waktu awal muncul akar dilakukan dengan mengetahui awal waktu akar

terbentuk. Pengamatan dilakukan setiap hari dengan menghitung hari saat

muncul akar.
 31

5. Jumlah akar

Jumlah akar diamati diakhir pengamatan yaitu dengan menghitung jumlah

akar yang tumbuh dari setiap eksplan yang tumbuh.

3.4 Rancangan Analisis

Hasil penelitian dianalisis dengan sidik ragam berdasarkan model linear dari

Rancangan Acak Lengkap Faktorial (RAL Faktorial) yaitu sebagai berikut :

Yijk = μ + αi + βj + (αβ)ij + εijk

Keterangan:

Yijk = nilai pengamatan (respon) dari perlakuan ke-i dan kelompok ke-j

µ = nilai rata-rata

αi = pengaruh posisi eksplan pada taraf ke i

βj = pengaruh kombinasi ZPT pada taraf ke j

(αβ)ij = pengaruh interaksi antara posisi eksplan pada taraf ke i dan kombinasi

ZPT ke-j

εijk = pengaruh komponen galat

Bila uji F berbeda nyata atau berbeda sangat nyata, maka analisis dilanjutkan

dengan Duncan Multiple Range Test (DMRT) pada taraf signifikan 5% dan 1%.

Tabel sidik ragam

Hipotesis :

 Jika F hitung < F 0,05 maka perlakuan tidak berpengaruh nyata.

 Jika F 0,05 < F hitung < F 0,01 maka perlakuan berpengaruh nyata.

 Jika F > F 0,01 maka perlakuan sangat berpengaruh nyata.

 32

Untuk menguji apakah ada keragaman diantara perlakuan, digunakan uji F

taraf nyata 5% apabila terdapat keragaman yang nyata maka dilanjutkan dengan

uji jarak berganda Duncan untuk perbedaan di antara perlakuan dengan rumus

sebagai berikut :

LSR (α, p, dbg) = SSR (α, p, dbg). Sx

Untuk mencari Sx dihitung dengan cara sebagai berikut.

 Jika terjadi interaksi :

KTG
LSR =SSR
√ r

 Jika tidak terjadi interaksi

1. Membedakan taraf factor posisi eksplan (a) :

KTG
LSR = SSR
√ r.a

2. Membedakan Taraf factor kombinasi ZPT (m) :

KTG
LSR = SSR
√ r.b

Keterangan :

LSR : Least Significant Renges

SSR : Studentized Significant Ranges

dbg : derajat bebas galat

Sx : standar error

b : jumlah taraf posisi eksplan

a : jumlah taraf berbagai kombinasi ZPT

r : ulangan
 33

KTG : kuadrat tengah galat

α : taraf nyata 5%

p : banyaknya perlakuan yang dibandingkan

Tabel 2. Daftar Sidik Ragam

Sumber DB JK Fhit KT F table

Keragaman F5% F1%
Perlakuan (P) t -1= 5 JKP KTP KTP/KTG
Posisi A-1=1 JKA KTA KTA/KTG

Eksplan (a)
Kombinasi B-1=2 JKB KTB KTB/KTG

ZPT(m)
Interaksi (A-1)(B-1)=2 JKAB KTAB KTAB/KTG

(NK)
Galat AxB(r-1)=18 JKG KTG -
Total ABr-1=23 JKT -

3.5 Pelaksanaan Penelitian

3.5.1 Sterilisasi Alat

Sterilisasi alat dilakukan dengan mencuci alat-alat diseksi meliputi pinset,

pisau scalpel, dan gunting sedangkan sterilisasi peralatan gelas meliputi sterilisasi

botol kultur, petridish (cawan petri), gelas ukur dan lain-lain menggunakan air

dan deterjen hingga bersih. Peralatan yang terbuat dari logam dan cawan petri

dibungkus menggunakan kertas. Kemudian dilakukan sterilisasi basah

menggunakan autoklaf selama + 40 menit pada suhu 1210C dan tekanan 1 atm

setelah sterilisasi basah dilanjutkan dengan sterilisasi kering menggunakan oven

 34

pada suhu 1000C selama 1 jam kemudian peralatan tetap disimpan dalam oven

pada suhu 800C.

3.5.2 Sterilisasi Eksplan

Eksplan diambil dari tanaman yang sehat dan bebas dari hama dan penyakit.

Eksplan yag digunakan yaitu bagian daun tangkai ke satu dan ke dua dari pucuk.

Sebelumnya tanaman dikarantina didalam green house dengan pemeliharaan

disemprot fungisida. Eksplan dibersihkan dengan air mengalir 10 menit,

kemudian direndam dalam 100 ml air dan ditambah 3 tetes tween 80 bilas

sebanyak 3 kali menggunakan aquades steril. Rendam dalam larutan fungisida 0,5

g/ 200 ml air dan ditambah 3 tetes tween 80 selama 1 jam bilas sebanyak 3 kali

menggunakan aquades steril. Rendam dalam larutan bakterisida 0,5 g/ 200 ml air

ditambah 3 tetes tween 80 selama 1 jam bilas sebanyak 3 kali menggunakan

aquades steril. Selanjutnya sterilisasi dilakukan didalam LAF rendam eksplan

dalam larutan clorox 10% ditambah 3 tetes tween 80 selama 10 menit bilas

sebanyak 3 kali menggunakan aquades steril, kemudian bilas dalam alkohol 70%

eksplan siap ditanam pada media cara sterilisasi ini diambil dari Sterilisasi eksplan

buah tin di Seameo Biotro Bogor.

3.5.3 Sterilisasi Ruang

Sterilisasi ruangan laboratorium dilakukan dengan cara membersihkan ruangan

laboratorium yaitu membersihkan lantai ruangan secara rutin. Selanjutnya LAF

disterilkan dengan cara membersihkan meja serta dinding bagian dalam laminar

dengan menggunakan lap steril dan alkohol 70%. Kemudian pintu laminar

ditutup, nyalakan lampu UV dengan cara menekan tombol UV, lamanya

 35

penyinaran dengan lampu UV minimal 30 menit. Setelah itu, matikan lampu UV,

kemudian buka penutup laminar dan tekan tombol untuk menyalakan lampu TL

(tubular lamp) dan blower, laminar siap digunakan. Setelah selesai digunakan,

bershkan kembali meja laminar dengan menggunakan lap steril dan alcohol 70%,

tekan tombol untuk mematikan lampu TL dan blower, kemudian laminar ditutup.

3.5.3 Pembuatan Media

Pembuatan media dilakukan pada ruang persiapan bahan yang diawali dengan

menimbang bahan bahan yang akan digunakan yaitu media MS instan 4,43 g/L,

Gula 30 g/L dan agar – agar 7 g/L. Bahan-bahan tersebut dilarutkan dengan

aquadest sampai volume larutan mencapai 1 liter kecuali agar-agar. Larutan

dimasukkan dalam beker glass dan diaduk dengan menggunakan magnetic stirer.

Setelah itu dimasukan zat pengatur tumbuh sesuai dengan perlakuan. Setiap

perlakuan menggunakan media 150 ml sehingga agar-agar yang ditambahkan

sebanyak 1,05 g/150 ml. Larutan dikondisikan pada pH 5,8 bila pH terlalu rendah

ditambahkan dengan NaOH atau buffer 4 dan pH terlalu tinggi ditambahkan

dengan HCl atau buffer 7. Larutan tersebut diaduk serta didihkan dengan

menggunakan magnetic stirer dan hot plate. Setelah mendidih, larutan tersebut

dituangkan ke botol kultur 15-20 ml setiap botolnya. Botol ditutup aluminium foil

dan karet gelang. Media disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121 0C, tekanan

1,75 Psi (kg/cm2) selama 30 menit. Setelah itu, botol-botol ditempatkan pada rak-

rak kultur.

3.5.4 Penanaman

Penanaman eksplan dilakukan di Laminar Flow Cabinet (LAFC). Eksplan

 36

daun tin yang sudah di sterilisasi diletakkan pada cawan petri steril dan dipoton-

gpotong ukuran ± 1 cm menggunakan pinset dan scalpel. Potongan eksplan daun

tin dimasukkan dalam botol-botol kultur berisi media sesuai dengan perlakuan.

setelah itu botol ditutup dengan aluminium foil dan diikat dengan karet gelang

lalu disimpan di rak-rak kultur.

 BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Karantina Tanaman buah Tin varietas Green Yordan (Ficus carica L.)

Persiapan tanaman induk merupakan langkah awal dalam proses kultur

jaringan atau yang sering disebut dengan karantina. Karantina penting dilakukan

karena sterilisasi permukaan tidak cukup membunuh mikroba kontaminan.

Konsentrasi bahan sterilisasi yang rendah dan waktu yang singkat pada sterilisasi

permukaan, tidak bisa membunuh mikroba kontaminan. Namun, jika konsentrasi

dan waktu perendaman eksplan dengan bahan sterilisasi dinaikkan, mikroba akan

terbunuh dan dapat mematikan eksplan. Kegiatan karantina dilakukan sebagai

kontrol pertumbuhan cendawan dan bakteri secara kontinyu. Kegiatan karantina

ini juga sebagai penurun tingkat kontaminasi secara internal dan secara tidak

langsung mengurangi besarnya konsentrasi bahan sterilisasi serta lamanya waktu

sterilisasi yang akan merusak eksplan.

Gambar 8. Sumber Eksplan di Screen House

Karantina dilakukan sebelum penggunaan bahan eksplan yaitu 2 minggu

sebelumnya. Proses karantina dilakukan di Kebun Percobaan Saintek tepatnya di

37
 38

screen house. Pemeliharaan dilakukan dengan penyemprotan fungisida dengan

dosis 2 gram/liter, selain itu dilakukan penyiraman 2 hari sekali dan juga

dilakukan pengecekkan hama ataupun penyakit yang dimungkinkan menyerang

tanaman indukan pada buah tin. Pemberian fungisida pada tanaman indukan buat

tin ini digunakan fungisida yang memiliki bahan aktif Mankozeb 80 %.

4.2 Komponen Pengamatan Penunjang

4.2.1 Kondisi Lingkungan Ruang Inkubasi

Lingkungan merupakan salah satu faktor penting yang harus diperhatikan

dalam pelaksanaan kultur jaringan. Kondisi lingkungan ini, akan menentukan

keberhasilan pertumbuhan tanaman yang dikulturkan. faktor lingkungan seperti

suhu dan kelembaban udara merupakan faktor penting dan memiliki pengaruh

yang besar terhadap pertumbuhan dan perkembangan eksplan (Sandra, 2013).

Suhu ruang inkubasi sangat menentukan pertumbuhan eksplan, karena suhu

yang terlalu rendah atau tinggi dapat mengganggu pertumbuhan dan

perkembangan eksplan. Pada umumnya, suhu optimum untuk terjadinya

morfogenesis setiap tanaman berbeda-beda. Faktor suhu berpengaruh terhadap

perkembangan sel dan jaringan serta berkaitan dengan enzim yang berpengaruh

terhadap siklus perkembangan tanaman (Santoso dan Nursandi, 2001).

Pada penelitian ini, eksplan dipelihara di dalam ruang inkubasi dengan suhu

rata-rata harian yaitu dengan suhu kisaran . Menurut Sandra (2013) suhu optimum

untuk pertumbuhan eksplan dalam kultur jaringan yaitu berkisar 24oC-28oC.

Abbas (2011) menyatakan bahwa tanaman kultur dapat dipelihara sesuai dengan
 39

suhu lingkungan in vitro umumnya 23oC-24oC lebih rendah dari pada suhu di luar

kultur in vitro.

Kelembaban merupakan salah satu factor yang mempengaruhi pertumbuhan

eksplan sehingga pengamatan terhadap kelembaban sangat penting untuk

dilakukan karena kelembaban merupakan salah satu faktor penting yang juga

mempengaruhi keberhasilan kultur jaringan untuk berbagai spesiaes tanaman.

Rata-rata kelembaban pada ruang inkubasi yaitu 90,17% dengan kisaran 89-92%.

Pada umumnya, kelembaban relatif yang diperlukan dalam kultur jaringan adalah

sebesar 70%, namun kelembaban dalam wadah kultur sebaiknya mendekati 90%

(Zulkarnain, 2009; Sandra, 2013).

4.2.2 Persentase Eksplan Hidup

Perhitungan persentase eksplan hidup bertujuan untuk mengetahui besarnya

persentasi eksplan yang masih hidup, sehingga masih memiliki potensi untuk

tumbuh. Eksplan yang hidup yaitu eksplan yang tidak mengalami hambatan

hidup, yang dapat disebabkan oleh kontaminasi maupun mati fisiologis, kondisi

fisiologis eksplan memiliki peranan penting bagi keberhasilan kultur jaringan

(Muliati, 2017).

Persentase eksplan daun tin yang hidup dan yang mati hingga 14 MSI dapat

dilihat pada Tabel 3.

 40

Tabel 3. Persentase eksplan hidup daun tin hingga 14 MSI

Umur Eksplan Persentase Eksplan Hidup

(MSI) Jumlah Eksplan Awal % Jumlah Eksplan Ahir %
1 MSI 100 100
2 MSI 100 100
3 MSI 100 100
4 MSI 100 100
5 MSI 100 100
6 MSI 100 100
7 MSI 100 100
8 MSI 100 100

9 MSI

10 MSI

11 MSI

12 MSI

13 MSI

14 MSI

Berdasarkan tabel diatas eksplan tidak mengalami kematian mulai dari 1 MST

hingga 6 MST. Jumlah eksplan daun tin yang ditanam yaitu 24 eksplan yang telah

diinisiasi pada media kultur dan diamati selama 8 MST. Eksplan yang hidup

ditandai dengan eksplan berwarna hijau, eksplan masih mengalami pertumbuhan

dan eksplan tidak terjadi kontaminasi oleh bakteri maupun jamur. Menurut

Karjadi dan Buchory (2007), Eksplan yang hidup ditandai dengan kondisi masih

berwarna hijau segar, dan dapat tumbuh dengan baik potensi eksplan hidup yang

berkembang menjadi tanaman dengan memiliki struktur sempurna yang meliputi

adanya daun,batang dan akar. Pertumbuhan pada eksplan yang terlihat secara
 41

visual merupakan hasil pemanjangan dan pembesaran jaringan serta diferensiasi

jaringan.

Kemampuan atau daya tahan suatu eksplan tumbuhan ditunjukkan oleh adanya

persentase hidup eksplan tersebut. Apabila persentase hidup eksplan tumbuhan

tinggi, maka eksplan tersebut mempunyai peluang hidup yang baik. Sehingga

dapat disimpulkan bahwa eksplan buah tin yang ditanam memilki daya tumbuh

yang sangat baik.

4.3 Komponen Pengamatan Terhadap Kalus

Kalus merupakan sumber bahan tanam yang penting untuk meregenerasikan

tanaman baru. Penggunaan kalus sangat menguntungan karena kalus dapat di

inisiasi dari jaringan pada seluruh bagian tanaman (Marlin, 2012).

Pada penelitian ini eksplan diperoleh dari daun yang masih muda yaitu daun

pertama dari tanaman induk. Sesuai dengan pendapat Santoso (2001) bahwa

macam eksplan sangat mempengaruhi kecepatan pembentukan kalus. Eksplan

yang berasal dari daun mempunyai kemampuan tumbuh lebih cepat dibandingkan

dengan eksplan yang berasal dari batang utama, cabang, atau tangkai bunga.

Selama proses induksi kalus, eksplan disimpan pada kondisi gelap, yaitu eksplan

ditutup dengan kertas hitam selain itu juga lampu yang berada pada ruangan

inkubasi dimatikan kembali setelah selesai pengamatan.

Penyemprotan alkohol pada botol eksplan dilakukan setiap hari, hal tersebut

dilakukan untuk meminimalisir terjadinya penyebaran mokroorganisme yang

dapat menyebabkan kontaminasi eksternal pada eksplan yang telah ditanam,

 42

sehingga menghambat proses pembentukan kalus pada eksplan daun tin tersebut.

Penyemprotan dilakukan dengan alkohol 70 %.

Respon pertumbuhan yang ditunjukan oleh eksplan buah tin yang ditanam pada

media perlakuan mengandung ZPT 2,4 D dan Kinetin secara in vitro selama 8

MSI berupa pertumbuhan dan perkembangan kalus. Pertumbuhan kalus muncul

dari bagian tulang daun dan bagian pelukaan daun kemudian akan menyebar

keseluruh bagian daun.

Fase Perkembangan Kalus :

a b
c

d e f

Gambar 9. Perkembangan kalus dari 1 MSI hingga 6 MSI

Keterangan : a). Perlakuan m1a2 pada umur 1 MSI b). pada umur 2 MSI c). pada
umur 3 MSI d). pada umur 4 MSI e). pada umur 6 MSI
4.3.1 Waktu muncul kalus

Pengamatan waktu muncul kalus dilakukan setiap hari hingga 3 MSI secara

visual, yang ditandai dengan terbentuknya benjolan berwarna putih pada bagian

tulang daun eksplan dan bagian pinggir daun. Sebelum kalus terbentuk eksplan
 43

mengalami pelengkungan terlebih dahulu dan tulang daun membengkak.

Pembengkakan terjadi pada hari ke-7 terdapat 11 perlakuan yang mengalami

pembengkakan yaitu m1a1 U3, m1a1 U4, m1a2 U1, m1a2, U2, m1a2, U3, m1a2

U4, m2a1 U1, m2a1 U2, m2a1 u4, m3a1 U1 dan m3a2 U2. Hal ini sesuai dengan

pendapat Arianto (2003) dimana sebelum terbentuk kalus, eksplan mengalami

perubahan fisik, pada awalnya eksplan berbentuk lurus akan berubah menjadi

bengkok dan membesar serta berwarna lebih gelap dibandingkan eksplan sebelum

dikulturkan. Pelengkungan dan pembengkakan tulang daun pada proses induksi

kalus disebabkan karena adanya pengaruh auksin dan tekanan turgor. Tekanan

turgor terjadi apabila sel menyerap molekul air sebagai respon akan meningkatnya

konsentrasi zat terlarut yang terdapat dalam vakuola, sehingga akan menyokong

perluasan sel yang terjadi.

Gambar 10. Pembengkakan Eksplan

Pada penelitian induksi kalus ini menggunakan kombinasi zat pengatur tumbuh

2,4-D dan Kinetin dengan posisi penanaman eksplan secara abaksial dan adaksial.

Waktu kemunculan kalus eksplan daun tin disajikan pada tabel

 44

No Perlakua Hari Muncul Kalus (HSI) Jumlah Eksplan Terbentuk

n Kalus
1 m1a1 U2 14 1/24
2 m1a2 U1 14 3/24

U2 U3
3 m2a1 U1 14 2/24

U2
4 m3a2 U1 14 1/24
5 m1a1 U1 18 2/24

U4
6 m2a2 U1 18 1/24
7 m3a1 U1 18 1/24
8 m1a1 U3 20 1/24
9 m1a2 U4 20 1/24
10 m2a1 U3 20 2/24

U4
11 m2a2 U2 20 2/24

U4
12 m3a1 U2 20 2/24

U4
13 m3a2 U4 20 1/24
14 m2a2 U3 21 2/24
15 m3a1 U3 21 1/24
16 m3a2 U2 21 1/24

Keterangan: m1 = 2 mg/l 2,4-D + 0,2 mg/l Kinetin

m2 = 2 mg/l 2,4-D + 0,4 mg/l Kinetin
m3 = 2 mg/l 2,4-D + 0,6 mg/l Kinetin
a1 = Posisi penanaman eksplan secara Abaksial
a2 = Posisi penanaman eksplan secara Adaksial
 45

Berdasarkan tabel diatas awal muncul kalus terjadi pada hari ke -14 setelah

penanaman (HSI), awal muncul kalus ditandai dengan benjolan berwarna putih

pada bagian tulang daun dan pinggir daun bekas pelukaan. Menurut Lizawati et al

(2012) menyatakan bahwa pembentukan kalus diawali dengan terjadinya

pembengkakan pada permukaan eksplan. Pembengkakan ini disusul dengan

terbentuknya kalus pada pinggir daun dan permukaan pertulangan daun, karena

pertulangan daun merupakan daerah peyalur makanan ke seluuruh bagian

permukaan daun sehingga sel yang terdapat dekat pertulangan daun dapat

membelah dan membentuk kalus.

Gambar 11. Awal muncul kalus pada perlakuan m1a2

Kalus terbentuk paling banyak Perlakuan a2 yaitu posisi penanaman eksplan

secara adaksial (posisi tulang daun diatas) pada hari ke -14 yaitu sebanyak 4

eksplan lebih banyak dibandingkan dengan perlakuan a1 yaitu sebanyak 3 eksplan.

Hal tersebut dikarenakan posisi tulang daun eksplan yang ditanam secara adaksial

tidak menyentuh media sehingga proses pembentukan kalus tidak terhambat.

Jumlah stomata pada permukaan abaksial (bawah) lebih banyak dibandingkan

dengan stomata yang berada pada bagian adaksial (atas). Hal ini dikarenakan pada

bagian abaksial tidak terkena cahaya matahari secara langsung sehingga tidak

banyak stomata yang rusak karena penyinaran yang terlalu kuat. Penelitian
 46

mengenai jumlah stomata bagian abaksial dan adaksial pernah dilakukan oleh Elis

Tambaru et al, (2014), yang menyatakan bahwa jumlah stomata daun bunga kupu-

kupu pada bagian abaksial lebih banyak yaitu 3044 mm 2 dibandingkan dengan

bagian adaksial yaitu 188 mm2. Selain itu pada permukaan abaksial (bawah)

lapisan kutikula yang melapisi epidermis lebih tipis atau bahkan tidak dilapisi

oleh kutikula, sehingga tidak ada atau sedikit penghalang untuk berlangsungnya

proses transpirasi melalui stomata (Muharia, 2007). Sehingga respon induksi

kalus pada eksplan yang ditanam dengan posisi adaksial (epidermis atas

menyentuh media) terjadi dengan lebih cepat, karena posisi epidermis bagian

bawah yang memiliki stomata lebih banyak dan ketika di posisikan diatas

permukaan media maka akan terjadi kontak langsung dengan udara, sehingga

dapat mengambil oksigen dengan lebih banyak untuk proses respirasi yang

merupakan salah satu proses fisiologi penting bagi tumbuhan.

Posisi tulang daun yang berada diatas permukaan media dapat mengurangi

hambatan penyerapan oksigen, sehingga proses respirasi menjadi lebih optimal

(Ethel, 2003). Massa sel terbentuk pada seluruh permukaan irisan eksplan, kalus

biasanya muncul pada sepanjang tulang daun atau diantara tulang daun, sehingga

pada perlakuan a2 atau posisi tulang daun yang tidak menyentuh media

pertumbuhan kalusnya lebih cepat dibandingkan dengan posisi tulang daun yang

menyentuh media atau a1.

Berdasarkan hasil penelitian dan analisis data diketahui bahwa pemberian

kombinasi zat pengatur tumbuh 2,4-D dan kinetin pada media MS memberikan

pengaruh terhadap induksi kalus daun tin (Ficus carica L.). Eksplan daun tin yang
 47

kompeten akan merespon penambahan zat pengatur tumbuh 2,4-D dan kinetin

pada media tanam MS ditandai dengan pembentangan eksplan dan terbentuknya

massa sel yang tak beraturan, disebut kalus. Semua kombinasi zpt mengalami

pertumbuhan kalus tercepat namun kombinasi zpt pada perlakuan m1 yaitu

kombinasi 2 mg/l 2,4-D dan 0,2 mg/l kinetin merupakan kombinasi zpt terbanyak

pada awal pertumbuhan kalus. Auksin dikenal sebagai hormone yang berperan

dalam menginduksi kalus (Sulistiani dan Yani, 2012). Konsentrasi auksin yang

tinggi akan merangsang pembentukan kalus dan menekan morfogenesis, sehingga

pada umumnya auksin ditambahkan pada media untuk menginduksi kalus

(George dan Sherrington, 1984). Auksin yang digunakan dalam penelitian ini

berupa 2,4-D akan memacu pertumbuhan sel-sel eksplan melalui pelonggaran

dinding selulosa sehingga kalus terbentuk (Nisak et al, 2012). Pemberian 2,4-D

lebih tinggi dari pada pemberian kinetin dengan adanya perbedaan konsentrasi

antara 2,4-D dan kinetin dapat memacu terbentuknya kalus. Hal ini sependapat

dengan Thomy (2012), menyatakan bahwa secara umum penambahan auksin pada

konsentrasi tinggi memacu pembentukan kalus, sebaliknya jika perbandingan

auksin dan sitokinin di dalam media lebih rendah akan memacu pertumbuhan

eksplan beregenerasi membentuk organ.

4.3.2 Tekstur Kalus

 48

Perlakuan Tekstur (Ulangan)

1 2 3 4
m1a1 Kompak Kompak Kompak Kompak
m1a2 Kompak Kompak Remah Kompak
m2a1 Kompak Kompak Kompak Kompak
m2a2 Remah Kompak Kompak Kompak
m3a1 Kompak Kompak Kompak Remah
m3a2 Kompak Kompak Kompak Kompak

4.3.3 Warna Kalus

No Perlakuan Ulangan
1 2 3 4
1 m1a1 2,5 Y 8/4 2,5 Y 8/4 2,5 GY 8/2 2,5 GY 8/4
2 m1a2 2,5 GY 8/4 2,5 GY 8/2 2,5 Y 8/6 2,5 Y 8/4
3 m2a1 2,5 Y 8/4 2,5 Y 6/4 2,5 Y 8/2 2,5 Y 8/4
4 m2a2 5 Y 8/2 2,5 Y 7/4 2,5 Y 7/4 2,5 Y 6/4
5 m3a1 5 Y 8/2 2,5 Y 7/6 2,5 Y 7/6 2,5 Y 7/6
6 m3a2 2,5 Y 7/6 2,5 Y 8/4 2,5 Y 8/2 2,5 Y 5/4
 DAFTAR PUSTAKA

Ahmad J, Khan I, Khan S, Iqbal D,. (2013). Evaluation of Antioxidant and

Antimicrobial Activity of Ficus carica Leaves an In Vitro Approach. India:
An open access journal of Plant Pathology & Microbiology, ISSN:
21577471, JPPM.
Allan, E. 1991. Plant Cell and Tissue Culture. Singapore: Wiley Publisher
Bustami, M.U. 2011. Penggunaan 2,4-D untuk induksi kalus kacang tanah. Media
Litbang Sulteng. 4(2):137-141.
Brien, J and Hardy, S. (2002). Fig growing in NSW. District Horticulturist,
Gosford Division of Plant Industries. Agfact H3.1.19, first edition.
Danial, Gharbia H., Diaa A. Ibrahim1, Sazan A. Brkat1 and Belan M. Khalil .
(2014). Multiple Shoots Production from Shoot Tips of Fig Tree(Ficus
carica L.) and Callus Induction from Leaf Segments. International Journal
of  Pure and  Applied  Sciences and Technology. 117-124
Dhaliwal, H. S. E. C. Yeung and T. A. Thorpe. (2004). Tiba inhibition of in vitro
organogenesis in excised Tobacco leaf explan. In vitro, vol 2 (40) : 235-238.
Dhage SS, Pawar BD, Chimote VP, Jadhav AS, and Kale AA. (2012). In Vitro
Callus Induction and Plant;/[flet Regeneration in Fig (Ficus carica L.).
India: Journal of Cell and Tissue Research Vol. 12(3) 3395-3400 (2012)
Dolgun, O., Tekintas, F.E., (2008). Production of fig (Ficus carica L.) nursery
plants by stem layering method. Agriculture Conspec Science. ACS 73,
157–160.
Fadilah, Rahma. Evie Ratnasari dan Isnawati .(2014). Induksi dan Pertumbuhan
Kalus Daun Tin (Ficus carica) dengan Penambahan Berbagai Kombinasi
Konsentrasi IBA dan Kinetin pada Media Vitro. Lentera bio. Vol. 3 No. 3, :
141–146 http://ejournal.unesa.ac.id/index.php/lenterbio.
Farid, M. (2003). Perbanyakan Tebu (Saccharum officinarum L.) Secara In Vitro
pada Berbagai Konsentrasi IBA dan BAP. J. Sains & Teknologi. 3: 103—
109.

49
 50

Flaishman, M., V. Rodov, and E. Stover. (2008). The Fig: Botany, Horticulture,
and Breeding. Horticultural Reviews. Volume 34 ISBN 9780470171530.
John Wiley & Sons, Inc. USA.sss
Gaba VP. (2005). Plant Growth Regulators in Plant Tissue Culture and
Developmant, p. 87-99. In Trigiano RN, and Gray JD (Eds.). Plant
Development and Biotechnology. CRC Press. New York.
George H. Fried, dan George J. (2008). Hademenos,Schaum’s Outlines Biologi
Edisi Kedua, Jakarta: Erlangga,
George, E.F. dan P. D. Sherrington. (1984). Plant propagation by tissue culture.
Handbook and Directory of Comercial Laboratories. Exegetics
Ltd.,Everslay. Basingtoke. England. 709 p.
Haris, M. (2010). Buah Surga. Balai Besar Pelatihan Pertanian (BBPP) Ketindan
Malang Jawa Timur. http://www.deptan.go.id/bpsdm/bbppketindan/)
diakses 1 Januari 2019
Hartman, H. T., Kester, D. E., Davis, J. R., and R. L. Geneve. (2002). Plant
Propagation. Hall Int. Inc. New Jersey. Jakarta: PT. Agromedia Pustaka.
Haryanti, S. 2010. Jumlah dan Distribusi Stomata pada Daun Beberapa Spesies
Tanaman Dikotil dan Monokotil. Jurnal Buletin Anatomi dan Fisiologi .
Vol. XVIII, No. 2.
Hashemi, A., S. Abediankenari, M. Ghasemi, M. Azadbakht, Y. Yousefzadeh,
A.A. Dehpour. (2011). The effect of fig tree latex (Ficus carica) on stomach
cancer line. Iran Red Crescent Med. J. 13(4):272-275.
Hendaryono, D., Wijayani, A. (1994). Teknik kultur jaringan, Pengenalan dan
Petunjuk Perbanyakan Tanaman secara Vegetatif-Modern.Kanisius.
Yogyakarta.
Hidayat. (2007). Induksi Pertumbuhan Eksplan Endosperm Ulin dengan IAA dan
Kinetin. Fakultas Pertanian Udayana. Agritop 26(4) : 147-152
http://sl.biotrop.org.
Indah, P.N., Ermavitalini, D. (2013). Induksi Kalus Daun Nyamplung
(Calophyllum inophyllum Linn.) pada Beberapa Kombinasi Konsentrasi 6-
 51

Benzylaminopurine (BAP) dan 2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid (2,4-D).

Jurnal Sains Dan Seni Pomits. 2(1), 2337-3520.
Joseph B dan Raj J. S. (2011). Pharmacognostic and phytochemical properties of
Ficus carica Linn –An overview. International Journal of PharmTech
Research. ISSN : 0974-4304. Vol. 3, No.1, pp 08-12
Khalaskar MG, Shah DR, Raja NM, Surana SJ, Gond NY. (2010).
Pharmocognostic and phytochemical investigation of Ficus carica Linn.
Ethnobotan Leaflets 14:599-609
Khasanah, N. (2011). Kandungan Buah-Buahan dalam Alqur’an: Buah Tin
(Ficus Carica L.), Zaitun (Olea europea L.), Delima (Punica granatum L.),
Anggur (Vitis vinivera L.), dan Kurma (Phoenix dactylifera L.) Untuk
Kesehatan. Jurnal Phenomenon, 1, 5-29.
Lestari, E.G. (2008). Kultur Jaringan. AkaDemia. 60 hlm.
Lestari, E. G. & Yunita, R. (2008). Induksi Kalus Dan Regenerasi Tunas dari
Kultur Tangkai Daun Iles-Iles (Amorphophallus muelleri Blume).
Biodiversitas, 36 (2), 106-110.
Leyser, O. (2002). Molecular Genetics of Auxin Signaling. Annu rev Plant Biol 53
: 377 – 398.
Manago, N .(2006). Fig, In the Japanese society for horticultural science (eds.),
Horticulture in Japan, Shoukadoh Publication, Dept. of Publishing of
Nakanishi Printing Co., Ltd., pp. 106- 10
Mastuti, Retno.(2017). Dasar Dasar Kultur Jaringan Tumbuhan. Malang: UB
Press.

Mustafa, N.S. and Rania A. Taha. (2012). Influence of Plant Growth Regulators
and Subculturing on In Vitro Multiplication of Some Fig (Ficus Carica)
Cultivars. Journal of Applied Sciences Research, 8(8): 4038-4044: Cairo.
Rukmana, R. 1997. Budi Daya Nangka. Kanisius, Yogyakarta
Pierik,R.L.M.1997. In Vitro Culture Of Higher Plants. The Netherland: Kluwer
Academic Publisher, Dordrecht.
Pipattanawong, N, Tiwong, S, Thongyean, B, Darak, R Thamin, P & Techa, W
(2008). ‘Improvement of propagation by hardwood cuttings with and
 52

without using plastic pavilions in fig (Ficus carica L.)’, Kasetsart J. (Nat.
Sci.), vol. 42, pp. 207-14.
Priono, S.H. 2013. Pengaruh Komposisi Media Tanam Terhadap Pertumbuhan
Stek Batang Tanaman Ara (Ficus carica L.). Departemen Agronomi dan
Hortikultura, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Polat, AA dan Caliskan, O. 2012. Morphological diversity among fig ( Ficus
carica L.) accessions sampled from the Eastern Mediterranean Region of
Turkey. Department of Horticulture, Faculty of Agriculture, Mustafa Kemal
University, Antakya, Hatay, Turkey.
Salisbury, F. B. dan C. W. Ross. (1992). Fisiologi Tumbuhan. Institut Teknologi
Bandung, Bandung.
Santoso, U., F. Nursandi. (2002). Kultur Jaringan Tanaman. Malang: Universitas
Muhammadiyah Malang Press
SEAMEO-BIOTROP. 2017. Teknis Budidaya Tin Kultur Jaringan. Diambil dari
Smith, E.F.1992.The Preparation Of Micropropagated Plantlets For
Transplantation. British Society For Plant Growth Regulation Newsletter 1.
Sobir dan M. Amalya. (2011). Bertanam 20 Buah Koleksi Eksklusif. Penerbit
PT.Penebar Swadaya. Jakarta. 208 hal.
Sulistiani E, Yani SA. (2012). Produksi bibit tanaman dengan menggunakan
teknik kultur jaringan. Bogor (ID): SEAMEO BIOTROP.
Suryowinoto. 1996. Pemuliaan Tanaman Secara In vitro. Yogyakarta: Kanisius
Suyitno. 2012. Perbandingan jumlahstomata pada bagian abaksial danadaksial.
http://www.  pertanian.untag smd.ac.id/wpcontent/uploads/2012/06/Proses_
Tranpirasi_PadaTanaman Bab IX.pdf.(diakses pada tanggal9 Desember
2013)
Taiz, L. Zeiger, L. (2008). Plant Physiology. Third Edition. Sunderland
Massachusets: Sinauer Associates, Inc., Publisher.
Tjitrosoepomo, Gembong. 2010. Taksonomi Tumbuhan Spermatophyta.
Yogyakarta: UGM press.
Ulfa, M. B. 2011. Penggunaan 2,4-D untuk Induksi Kalus Kacang Tanah. Media
Litbang Sulteng. Vol: IV(2): 137-147
 53

Wahyuningtyas, L., Resmisari, RS., Nashichuddin. (2014). Induksi Kalus Akasia

(Acacia mangium) dengan Penambahan Kombinasi 2,4-D dan BAP Pada
Media MS. Jurusan Biologi Fakultas Sains dan Teknologi. Universitas Islam
Negeri Maulana. Malang.
Wattimena. (1991). Zat Pengatur Tumbuh Tanaman. Bogor: PAU IPB.
Wetherell, D. F. 1976. Pengantar Propagasi Tanaman secara In Vitro.
Terjemahan: D. Gunawan. IKIP Semarang Press
Yusnita. (2003). Kultur Jaringan Cara Memperbanyak Tanaman Secara Efisien.
Jakarta: PT Agromedia pustaka
Zulkarnain. (2009). Kultur Jaringan Tanaman: Solusi Perbanyakan Tanaman
Budidaya. Bumi Aksara :Jakarta
 LAMPIRAN

Lampiran 1. Komposisi Stok Media MS 1 L

Stok Bahan Kimia Jumlah Jumlah Bahan Kebutuhan

I NH4NO3 16,5 g 100 ml 10 ml L-1
KNO3 19 g
II CaCl2.2H2O 4,4 g 100 ml 10 ml L-1
III MgSO4.7H2O 3,7 g 100 ml 10 ml L-1
KH2PO4 1,7 g
H3BO3 0,062 g
MnSO4.4H2O 0,169 g
ZnSO4 0,086 g
IV KI 0,166 g 500 ml 2,5 ml L-1
Na2MoO4.2H2O 0,050 g
CuSO4.5H2O 0,005 g
CoCl2 0,005 g
V FeSO4.7H2O 0,278 g 100 ml 10 ml L-1
Na2EDTA 0,373 g
Vit Pyrodoxine-HCl 0,001 g 100 ml 10 ml L-1
Asam Nikotinat 0,005 g
Thiamine-HCl 0,005 g
Myo-inositol 0,1 ml L-1
Sumber : Zulkarnain, 2011
 Lampiran 2. Alur Sterilisasi Alat

Sterilisasi Alat

Sterilisasi Basah Sterilisasi Kering

Peralatan seperti botol kultur dan Peralatan yang sudah di autoklaf

cawan petri direndam dengan selanjutnya dimasukkan
deterjen selama 10 menit. kedalam oven, untuk peralatan
Kemudian peralatan dicuci logam dan cawan petri terlebih
sampai bersih dan dibilas dahulu dibungkus menggunakan
menggunakan air mengalir kertas

Peralatan di sterilisasi dengan Peralatan di oven pada suhu

autoklaf selama 60 menit pada 800C
tekanan 17,5 psi dan suhu 1210C
Lampiran 3. Alur Pembuatan Media

Menambahkan media MS instan 4,43 dalam 500 ml

aquades steril

Menambahkan 30 g gula masukkan dalam beker glass

dan diaduk dengan menggunakan magnetic stirer

Menambahkan aquadest steril sampai volume mendekati

1000 ml, media dibagi per 200 ml

Menambahkan ZPT sesuai dengan perlakuan dan pH

diatur sampai 5,8

Menambahkan agar-agar sesuai dengan perlakuan,

panaskan media hingga mendidih

Menuangkan media pada botol kultur sebanyak 15

ml/botol dan ditutup dengan alumunium foil serta
dikencangkan dengan karet gelang

Memberi label pada botol sesuai dengan perlakuan

Media disterilisasi dengan autoklaf selama 30

menit suhu 121o C tekanan 17,5 psi
Lampiran 4. Alur Teknik Sterilisasi Eksplan Daun Tin

Daun Tanaman Tin

Dipotong daun tin yang masih muda

yaitu daun pertama dari pucuk

Direndam dalam 100 ml aquades steril +

3 tetes tween 80

Dicuci dengan air mengalir hingga bersih

Direndam dalam 100 ml aquades steril +

3 tetes tween 80 selama 10 menit

Direndam dalam larutan fungisida 0,5 g /

200 ml selama 1 jam

Direndam dalam larutan bakterisida 0,5 g

/ 200 ml selama 1 jam

Sterilisasi didalam LAF rendam eksplan

dalam larutan clorox 10% ditambah 3
tetes tween 80 selama 10 menit

Bilas dalam alcohol 70 %

Lampiran 5. Alur Penanaman Eksplan

Eksplan Daun

Dipotong bagian tulang daun dengan

ukuran 1 cm

Disayat dengan pisau scalpel

Ditanam dalam botol media sesuai dengan

perlakuan

Botol di tutup menggunakan aluminium foil dan

direkatkan dengan karet kemudian dilapisi
menggunakan palstik wrap

Beri label pada botol yang telah ditanam (tanggal

penanaman dan perlakuan penelitian)

Simpan botol dalam ruang

inkubasi
Lampiran 7. Kelembaban dan Suhu Harian Ruang Inkubasi

Tanggal Suhu (oC) RH (%)

Denah Percobaan

m2a1 m3a2 m2a1 m2a2 m2a1 m3a1

1 2 3 1 2 3
m2a1 m1a2 m3a2 m1a2 m3a1 m3a1

4 4 1 2 2 1
m1a1 m2a2 m1a1 m2a2 m1a2 m1a2

1 2 3 4 3 1
m1a1 m1a1 m3a2 m2a2 m3a1 m3a3

2 4 3 3 4 4
Lampiran 2

Deskripsi Tanaman Tin Green Yordan

Nama Tanaman : Buah Tin Varietas Green Yordan

Asal Tanaman : Yordania (Jordan)

Perakaran : Dangkal

Warna Batang : Abu-abu

Tekstur Batang : Lunak

Warna Getah : Putih Susu

Panjang Daun : 12 - 25 cm

Lebar Daun : 10 – 18 cm

Bentuk Daun : Menjari lima

Jenis Daun : Tunggal (Berselang-seling)

Rasa : Manis

Warna Kulit Buah Muda : Hijau

Warna Kulit Buah Matang : Kuning

Warna Daging Buah : Merah keunguan

Lampiran 3

Kalender Kegiatan Penelitian

Bulan
Kegiatan Februari Maret April Mei
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
Persiapan Bahan
Sterilisasi Alat
Pembuatan Media
Sterilisasi Eksplan
Penanaman Eksplan
Pemeliharaan dan
Pengamatan
Lampiran 4

Deskriptor Kalus
No Karakter Prosedur Pengamatan
1 Tekstur Kalus Tekstur kalus ditentukan menggunakan pinset dengan
cara menekan bagian kalus (Clay Model Deskriptor).

(A) Kalus kompak (B) Kalus remah (Friable)

A. Kalus kompak : Struktur padat, terbentuk dari

sel-sel nodular, dan mengandung banyak air.
B. Kalus remah : Struktur sel renggang dan tidak
teratur, tersusun dari sel-sel tubular dan mudah
rapuh

2 Warna Kalus Warna kalus ditentukan menggunakan standar colour

chart.
1. Warna hijau (green)
2. Warna cream
3. Warna putih (white)
4. Warna cokelat (brown)
5. Warna hijau muda (lightgreen)
6. Warna kekuningan (yellow)

3 Diameter Pengukuran diameter kalus dilakukan diakhir

Kalus (cm) pengamatan menggunakan penggaris.

4 Berat Basah Pengukuran berat basah kalus dapat dilakukan didalam

 Kalus (gr) atau diluar LAF, bila data berat basah kalus dibutuhkan
untuk mengetahui pertumbuhan dalam kurun waktu atau
seri waktu tertentu maka penimbangan harus dilakukan
di LAF. Kalus diambil dari medium agar kemudian agar
yang menempel dihilangkan selanjutnya kalus diletakan
sebentar dicawan petri yang beralaskan kertas tisu.
Langkah ini bertujuan agar kertas tisu menyerap air yang
berada di bagian luar jaringan kalus. Saat kalus
ditimbang menggunakan timbangan analitik diharapkan
yang terukur adalah berat basah jaringan murni kalus.
Selanjutnya kalus siap dimasukkan kembali kedalam
botol kultur untuk ditumbuhkan kembali. Namun apabila
data berat basah kalus yang akan diukur merupakan
tahap akhir fase pertumbuhan atau sample kalus yang
akan dianlisis lebih lanjut maka pengukuran dapat
dilakukan diluar LAF.
5 Berat Kering Pengukuran berat kering kalus dapat dilakukan dengan
Kalus (gr) cara kalus dari botol kultur dipindahkan ke aluminium
foil kemudian beratnya ditimbang. Setelah kalus
dibungkus aluminium foil kemudian kalus di oven pada
suhu 800C selama kurang lebih 2 hari. Kalus yang
dikeluarkan dari oven didinginkan kemudian ditimbang.
6 Fase Fase pertumbuhan kalus di amati dari awal pembentukan
Pertumbuhan kalus sampai ahir.

(A) Kalus embriogenik (B) Fase globular (C)

Fase hati (D) Fase torpedo (E) Fase kotiledon

A. Kalus embriogenik dicirikan dengan warna kalus

yang putih kekuningan dan mengkilat. memiliki
struktur remah.
B. Fase globular dicirikan dengan bentuk yang
membulat
C. Fase hati diawali dengan pembentukan satu atau
dua kotiledon atau adanya lekukan yang
membentuk dua area sehingga penampilan
 embrio berbentuk hati
D. Fase torpedo merupakan pertumbuhan
berkelanjutan kotiledon dan perpanjangan sumbu
E. Fase kotiledon, pada fase ini kotiledon
mengalami pertumbuhan memanjang sehingga
dapat dilihat polaritas embrio somatik yang
sangat jelas. Pembentukan kotiledon merupakan
proses morfogenetik yang penting dalam
embryogenesis somatik.

Referensi :

1. Ketchum., Gamborg., Panning.,Nabors. 1987. Clay Model: Tissue Culture

for
Crops Project Progress Report. Colorado: Tissue Culture for Crops
Project Department of Botany Colorado State University Fort Collins.
2. Mastuti, Retno. 2017. Dasar Dasar Kultur Jaringan Tumbuhan. Malang:
UB Press.
3. Mohajer.,Rosna Mat Taha., Arash Khorasani., and Jamilah Syafawati
Yaacob. 2012. Induction of different types of callus and somatic
embryogenesis in various explants of Sainfoin (Onobrychis sativa).
Journal of Crop Science 6(8):1305-1313.