Pemeriksaan TPHA

Tanggal : Selasa, 20 September 2016

Tujuan : Untuk mendeteksi antibodi terhadap Treponema pallidum dalam serum

atau plasma manusia.

Metode : Hemaglutinasi tidak langsung (IHA)

Prinsip : Reagen TPHA ini digunakan untuk mendeteksi antibodi Treponema

pallidum pada serum manusia dengan menggunakan metode
hemaglutinasi tidak langsung (IHA). Eritrosit burung yang diawetkan
dan dilapisi dengan antigen dari Treponema pallidum patogen (Nichol’s
Strain). Pada uji tersebut akan menimbulkan aglutinasi apabila
direaksikan dengan antibodi spesifik untuk Treponema pallidum dan
menunjukan reaksi pada plate mikrotiter.

Alat dan bahan :

Alat : 1. Plate mikrotiter berbentuk U

2. Mikropipet 12 ul, 25ul,75ul, dan 190ul.

3. Tissue

4. Waste

Bahan : 1. Sel uji (eritrosit burung yang sudah direkatkan dengan ekstrak
Treponema pallidum)

2. Sel kontrol (eritrosit burung yang tidak direkatkan dengan ekstrak

Treponema pallidum)

3. serum kontrol positif

4. serum kontrol negative

Sampel : Serum
Cara Kerja : KUALITATIF

1. Siapkan alat dan bahan

2. Masukkan 190ul regaen pengencer ke well 1
3. Tambahkan 10ul serum ke well 1
4. Dengan menggunakan mikropipet, homogenkan larutan pada well 1, lalu masing-masing
sebanyak 25ul dipipet ke dalam well 2 dan 3
5. Pastikan sel kontrol dan sel uji homogen secara menyeluruh, tambahkan 75ul sel kontrol ke
well 2 dan tambahkan 75ul sel tes ke dalam well 3.
6. Dimasukan 25ul serum kontrol positif ke well 4 dan 5 kemudian ditambahkan sel kontrol pd
well 4 dan sel uji pada well 5.
7. Dimasukan 25ul serum kontrol negatif ke well 6 dan 7 kemudian ditambahkan sel kontrol pd
well 6 dan sel uji pada well 7.
8. Homogenkan campuran pada masing-masing well dengan menggoyangkan plate secara
perlahan.
9. Inkubasi selama 45-60 menit pada suhu kamar.
10. Hati-hati! Hindari plate mikrotiter dari panas, sinar matahari langsung dan getaran.
11. Baca hasil. Hasil akan stabil selama 24 jam jika plate mikrotiter terjaga dan diperlakukan
seperti cara kerja no. 7.

Interpretasi Hasil :

HASIL SEL UJI SEL KONTROL

Positif kuat Seluruh sususan sel menutupi Tidak terjadi aglutinasi
dasar well
Positif lemah Susunan sel menutupi kira- Tidak terjadi aglutinasi
kira 1/3 bagian dari dasar well
Tak tentu Susunan sel membuka bagian Tidak terjadi aglutinasi
tengah
Negatif Sel-sel tersusun rapat di dasar Tidak terjadi aglutinasi
khas dengan bagian tengah
yang encer
Tidak Spesifik Reaksi positif Reaksi positif
Hasil :

Keterangan : Well 1 = Pengenceran diluet dan sampel

Well 2 = Sampel + sel kontrol

Well 3 = Sampel + sel uji

Well 4 = Positif kontrol + sel kontrol

Well 5 = Positif kontrol + sel uji

Well 6 = Negatif kontrol + sel kontrol

Well 7 = Negatif kontrol + sel uji

Kesimpulan : Berdasarkan hasil pemeriksaan didapatkan hasil pada well 2 tidak terjadi
aglutinasi, sel mengumpul pada satu titik sehingga pemeriksaan
dinyatakan valid dan Pada well 3 menunjukan hasil yang reaktif kuat
yaitu susunan sel menutupi dasar well. Hasil tersebut menunjukan
sampel serum pasien mempunyai antibodi terhadap Treponema
pallidum.