PANDUAN PELATIHAN

KULTUR JARINGAN

PT. Intidaya Agro Lestari

Bogor
 PENGANTAR
Perbanyakan tanaman secara vegetatif
merupakan alternatif untuk mendapatkan
tanaman baru yang mempunyai sifat yang
sama dengan induknya dalam jumlah yang
banyak. Perbanyakan secara vegetatif secara
konvensional, umumnya membutuhkan
waktu yang cukup lama. Oleh karena itu, saat ini
di beberapa negara maju telah banyak
dikembangkan suatu sistem perbanyakan
tanaman secara vegetatif yang lebih cepat
dengan hasil yang lebih banyak lagi. Yaitu
dengan sistem ‘kultur jaringan’.
Kultur jaringan sering disebut juga
dengan perbanyakan tanaman secara ‘in
vitro’. Yaitu budidaya tanaman yang
dilakukan di dalam botol berisi nutrisi
unsur makro, mikro, vitamin, hormon,
pemadat dan tanaman dalam kondisi steril.
Tanaman baru yang dihasilkan nantinya
mempunyai sifat-sifat keturunan yang sama
dengan induknya.
Pelaksanaan kultur jaringan di
Indonesia saat ini telah banyak dilakukan.
Mulai dari skala industri sampai rumah
tangga dengan peralatan yang canggih
hingga sangat sederhana sekali.
Buku panduan ini merupakan
ringkasan dari metode kultur jaringan yang
sangat luas sekali. Ringkasannya dibuat
sesederhana mungkin, sehingga bagi
pemula tidak membingungkan. Semoga
buku panduan ini dapat bermanfaat bagi
orang yang berminat bisnis tanaman dengan
kultur jaringan.
Bogor, Agustus 2019
Indarto
PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI
BAB I
PENDAHULUAN
Sejarah kultur jaringan dimulai pada
tahun 1838 ketika Schwann dan Schleiden
mengemukakan teori TOTIPOTENSI SEL,
yang menyatakan bahwa sel-sel bersifat
otonom. Dan pada prinsipnya mampu
beregenerasi menjadi tanaman lengkap.
Berdasarkan teori TOTIPOTENSI SEL ini,
Haberlandt menyatakan bahwa jaringan
tanaman dapat diisolasi dan dikultur menjadi
tanaman normal dengan melakukan
manipulasi terhadap kondisi lingkungan dan
nutrisi.
Namun usaha Haberlandt menerapkan
tehnik kultur jaringan tanaman pada tahun
1902 masih mengalami kegagalan.
Keberhasilan aplikasi tehnik kultur jaringan
secara vegetatif pertama kali dilaporkan oleh
White pada tahun 1934, yaitu kultur akar
tomat.
Kultur jaringan berasal dari kata
“Kultur” yaitu mengembangbiakan dan
“jaringan” yaitu kumpulan dari beberapa sel
yang memiliki fungsi dan sifat yang sama.
Kultur jaringan adalah suatu metode
untuk mengisolasi bagian dari tanaman
seperti protoplasma, sel, sekelompok sel,
jaringan dan organ, serta menumbuhkannya
dalam kondisi aseptik.
Yaitu pada media steril yang berisi
unsur makro, mikro, vitamin, asam amino,
hormon yang dipadatkan dengan
penambahan agar-agar. Sehingga bagian-
bagian tersebut dapat memperbanyak diri
dan beregenerasi menjadi tanaman utuh
kembali.
1
 1. Ukuran bibit tanaman yang dihasilkan
Jenis tanaman yang secara ekonomi seragam
menguntungkan untuk diperbanyak secara 2. Sifat bibit tanaman yang dihasilkan sama
kultur jaringan sudah banyak. Namun harus persis seperti induknya
diakui bahwa ada beberapa tanaman yang 3. Bibit tanaman yang dihasilkan bebas
tidak menguntungkan bila dikembangkan virus
dengan kultur jaringan. Misalnya; kecepatan 4. Menghasilkan bibit tanaman dengan nilai
multiplikasinya rendah, terlalu banyak ekonomis tinggi setelah dilakukan
langkah untuk mencapai tanaman kegiatan pemuliaan tanaman
sempurna atau terlalu tinggi tingkat
penyimpangan genetiknya.
Manfaat perbanyakan melalui ***
kultur jaringan;
1. Memperbanyak tanaman dengan hasil
yang banyak dan dalam waktu yang
cepat
2. Pemuliaan tanaman ;
 Untuk menghasilkan tanaman bebas
virus dengan kultur meristem
 Menghasilkan tanaman tanpa biji
dengan kultur endosperma
 Menggandakan kromosom tanaman
sehingga ukuran buah, bunga dan
daun menjadi lebih besar
 Membuat mutasi tanaman dengan
bahan mutagen kimia
 Mendapatkan bibit tanaman yang
toleran dengan tanah asam
 Meningkatkan kandungan metabolit
sekunder
3. Melestarikan tanaman yang hampir
punah
4. Perbanyakan tanaman yang secara
konvensional lambat
5. Perbanyakan tanaman yang mempunyai
nilai ekonomis tinggi

Kelebihan bibit tanaman hasil kultur

jaringan:

PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI 2

 BAB II
RUANGAN LABORATORIUM KULTUR
JARINGAN
Pertumbuhan eksplant dalam kultur
jaringan diusahakan dalam lingkungan yang
aseptik dan terkendali. Laboratorium yang
efektif merupakan salah satu unsur penting
yang ikut menentukan keberhasilan
pekerjaan, baik untuk penelitian, maupun
produksi. Laboratorium sebaiknya di
bangun di daerah yang udaranya bersih,
tidak banyak debu dan polutan. Bangunan
laboratorium kultur jaringan sebaiknya
mempunyai pembagian ruangan yang diatur
sedemikian rupa sehingga tiap kegiatan
terpisah satu dengan yang lainnya, tetapi
mudah saling berhubungan dan mudah
dicapai.
Pembagian ruangan laboratorium
kultur jaringan berdasarkan kegiatan-
kegiatannya adalah sebagai berikut :
1. Ruang persiapan/preparasi
2. Ruang kultur/tanam
3. Ruang inkubasi
4. Ruang penyimpanan media
5. Ruang timbang/bahan kimia
Ruang Persiapan
Ruang ini dipergunakan untuk
memasak media kultur, persiapan bahan
tanaman yang akan dipergunakan, sebagai
tempat mencuci alat-alat laboratorium, dan
tempat untuk menyimpan alat-alat gelas.
Sesuai dengan fungsinya, maka diruangan
ini terdapat :
1. Hot plate dengan magnetic stirer
2. Oven
3. Pengukur pH, dapat berupa pH meter,
atau kertas pH indikator
PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI
4. Autoklaf
5. Kompor gas
6. Tempat cuci
7. Labu takar, gelas piala, erlenmeyer,
pengaduk gelas, spatula, petridish, pipet,
botol kultur, pisau scapel.
Ruang Kultur/Tanam
Ruang kultur/tanam merupakan ruang
di mana pekerjaan aseptik dilakukan. Dalam
ruangan ini dilakukan kegiatan isolasi
tanaman, sterilisasi dan penanaman eksplant
dalam media. Ruangan ini sedapat mungkin
bebas dari debu dan hewan kecil, serta
terpisah dan tersekat dengan ruangan lain.
Penggunaan AC sangat dianjurkan dalam
ruangan ini. Ruang kultur/tanam dilengkapi
peralatan sebagai berikut :
1. Laminar air flow cabinet, bisa juga enkas
2. Alat-alat diseksi; pisau bedah/scapel,
pinset, spatula, dan gunting.
3. Hand sprayer yang berisi alkohol 70 %
4. Lampu bunsen
Ruang Inkubasi
Merupakan ruang yang dipakai untuk
menumbuhkan tanaman botolan. Ruangan
ini harus dijaga kebersihannya dan sedapat
mungkin dihindari terlalu banyak keluar
masuknya orang-orang yang tidak ber-
kepentingan. Ruangan ini berisi rak-rak
kultur yang berfungsi untuk menampung
botol-botol kultur yang berisi tanaman. Rak
ini juga dilengkapi dengan lampu-lampu
sebagai sumber cahaya bagi tanaman kultur.
Selain rak kultur, ruang kultur juga harus
dilengkapi dengan AC, pengukur suhu dan
kelembapan, serta timer yang digunakan
3
untuk menghidupkan dan mematikan lampu
secara otomatis.
Cahaya yang digunakan sebagai
penerangan, sebaiknya cahaya putih yang
dihasilkan dari lampu flourescent. Lampu
flourescent dipakai karena sangat baik dan
sangat efisien dalam penggunaan energi bila
dibanding dengan lampu pijar. Karena pada
lampu pijar, hampir 90 % merupakan energi
panas, sehingga mempengaruhi ruangan.
Intensitas cahaya yang baik dari
lampu flourescent adalah antara 100 – 400 ftc
(1000 – 4000 lux). Intensitas cahaya dapat
diatur dengan menempatkan jumlah lampu
dengan kekuatan tertentu.
Lampu yang digunakan bisa berupa
lampu TL dengan daya 16 watt atau 40 watt,
tergantung panjang rak yang dibuat.
Panjang penyinaran /lama penyinaran
yang dibutuhkan oleh tiap tanaman ber-
beda-beda. Berapa lama penyinaran harus
diberikan, tergantung pada jenis tanaman
dan respon yang diinginkan. Ada kultur
yang membutuhkan waktu pe-nyinaran yang
terus menerus, ada yang 14 – 16 jam/hari, ada
yang 10 – 12 jam/hari. Rata-rata waktu
penyinaran yang efektif adalah 12 – 16
jam/hari.
Suhu ruang kultur diatur pada suhu 25 –
28o C. Pada suhu yang terlalu dingin, kultur
kadang tidak berkembang dengan baik,
begitu juga jika suhu ruang kultur terlalu
panas, maka jamur dan bakteri akan
berkembang biak dengan cepat dan tanaman
menjadi layu.
Rak bisa terbuat dari besi atau kayu
sebagai rangka. Alas bisa pakai kaca atau
triplek. Ukuran rak; jarak antar rak 30 – 35
PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI
cm, lebar 50 cm, tinggi dan panjang me-
nyesuaikan kebutuhan.
Ruang penyimpanan media
Ruangan ini berfungsi sebagai ruang
untuk menyimpan media tanam yang sudah
di autoklaf (disterilisasi). Ruang stok tidak
harus ber-AC, dianjurkan penyimpanan
pada suhu ruang. Media tanam akan
diinkubasi pada ruang ini selama 3 hari
sebelum digunakan. Hal ini untuk
mengetahui kondisi media tanam apakah
steril atau terkontaminasi jamur/bakteri.
Apabila media terkontaminasi, sebaiknya
segera dikeluar-kan dan disterilisasi selama 1
jam pada tekanan 0.14 Mpa.
Ruang Timbang/Bahan Kimia
Ruang ini berisi stok bahan-bahan
kimia, timbangan analitik, magnetik stirer
dan kulkas. Semua kegiatan penimbangan
bahan kimia dan pembuatan larutan stok
dilakukan di ruangan ini. Larutan stok yang
sudah di buat di simpan di dalam kulkas.
Contoh Denah Ruangan Laboratorium
Modern
Kantor R. R. Bahan
Preparasi/ Kimia
persiapan
R. Penyimpanan media
R. Inkubasi
R. Kultur/tanam
4
 Contoh Denah Ruangan Laboratorium
Sederhana
Pada laboratorium sederhana, ruang
tanam, ruang inkubasi dan ruang media dapat
digabung menjadi satu ruangan. Sedangkan
ruang preparasi/persiapan dapat digabung
dengan ruang bahan kimia (seperti dalam
gambar di bawah). Dari 2 ruangan ini, ruang
tanam + kultur harus memakai AC. Untuk
daerah yang bersuhu dingin, tanpa memakai
AC tidak ada masalah.
Atau ruang tanam, ruang inkubasi,
ruang media, ruang bahan kimia bisa
digabung menjadi satu ruangan. Sedangkan
ruang preparasi bisa dilakukan di dapur
rumah tangga
4 kotor.
3
5
2
BAB III
TEKNIK STERILISASI
Salah satu faktor penentu keberhasilan
kultur jaringan adalah tahap sterilisasi.
Kegiatan sterilisasi ini meliputi pada:
1. Sterilisasi pada lingkungan kerja.
2. Sterilisasi pada alat-alat dan media tanam.
3. Sterilisasi bahan tanaman (eksplant).
Kegiatan sterilisasi ini sangat penting
untuk dilakukan, karena kontaminasi pada
kultur jaringan dapat berasal dari:
1. Eksplant, baik kontaminasi eksternal
maupun internal.
2. Organisme kecil yang masuk ke dalam
media, seperti semut.
3. Botol kultur atau alat-alat yang kurang
steril.
4. Lingkungan kerja dan ruang kultur yang
5. Kecerobohan dalam bekerja.
Sterilisasi Lingkungan Kerja

1 Lingkungan kerja laboratorium kultur

jaringan dapat dibagi atas lingkungan umum
dan lingkungan khusus. Yang dimaksud
dengan lingkungan umum adalah ruangan
Keterangan :
persiapan media (preparasi) dan ruang staf.
1. Laminar/entkas Ruangan ini hanya perlu dijaga kebersihannya
2. Media tanam siap pakai dengan mengepel lantai dengan disenfektan
3. Lemari bahan kimia minimal seminggu sekali.
4. Meja untuk penimbangan
5. Rak kultur Sedangkan ruangan khusus meliputi
ruang tanam, ruang media dan ruang
inkubasi. Ruang tanam sebaiknya disemprot
****
seminggu sekali dengan alkohol 70 % dan
dibersihkan lantainya dengan disenfektan
seminggu 1-3 kali. Khusus meja penabur
(laminar air flow cabinet) sebelum mulai

PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI 5

bekerja, permukaan tempat kerja disemprot
dan dilap dengan alkohol 70 %, setelah itu
laminar baru dihidupkan.
Ada juga tipe laminar yang dilengkapi
dengan lampu ultra violet. Sebelum bekerja,
lampu UV dinyalakan selama ½ - 1 jam
untuk mematikan kontaminan di permukaan
tempat kerja. Sehabis kerja, permukaan
laminar dibersihkan dengan alkohol 70 %
atau dengan lampu UV selama ½ - 1 jam.
Keterangan :
1. Bahan dari kaca dengan tebal 0.4 -0.5 cm
2. Lubang A adalah tempat masuknya tangan
untuk bekerja. Diameter lubang A dibuat
berdasarkan diameter toples yang ter-
sedia. Sebaiknya toples yang ber-diameter
12 – 15 cm.
3. Toples ini nantinya di ambil bagian
atasnya + tutup untuk digunakan menjepit
sarung tangan karet yang panjang.

Khusus meja tabur tipe entkas, 4. Lubang B juga dibuat dengan mengikuti
diameter toples yang tersedia, diameter-nya
sebelum dipakai semua bahan media,
16 – 20 cm.
eksplantt dan alat tanam dimasukkan.
5. Pada lubang B, toples juga di potong
Kemudian disemprot dengan alkohol 70 %
bagian atasnya + tutupnya dan direkatkan
pada seluruh ruang entkas dan ditutup
pada kaca.
selama ½ - 1 jam. Pemakaian lampu
6. Lubang B digunakan untuk memasukkan
bunsen/spiritus di dalam entkas dilarang,
tanaman, botol media dan peralatan.
karena dapat menyebabkan ledakan. Sebagai
penggantinya dapat menggunakan kapas
yang sudah dibasahi dengan bayclin/sunclin Sterilisasi Alat-Alat dan Media Tanam
tanpa diencerkan untuk mensterilkan mulut Alat-alat yang dipakai ketika penanaman
botol. harus dalam keadaan steril. Alat-alat logam,
Pada ruang inkubasi, kegiatan sterilisasi gelas dan media tanam disterilkan dengan
dapat dilakukan dengan menyemprotkan autoclave. Berikut tabel standart waktu,
alkohol 70 % keseluruh ruangan minimal 2 tekanan dan suhu untuk sterilisasi dengan
minggu sekali. Lantai juga harus dibersihkan menggunakan autoklaf :
dengan disenfektan minimal 1 minggu sekali.
Wakt Tekanan yang
Obyek dipakai Suh
N u
sterilisas u
Gambar entkas o (men Mpa Kg/c ps
i (oC)
it) m2 i
1 Botol 20-40 0.10 1.05- 15 121
kosong 5- 1.4 - -
0.14 20 126
2 Media 20 0.10 1.05- 15 121
tanam 5- 1.4 - -
0.14 20 126
3 Air steril 60 0.10 1.05- 15 121
5- 1.4 - -
0.14 20 126

PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI 6

 4 Peralata 20-40 0.10 1.05- 15 121 3. Nyalakan kompor gas dengan nyala api
n tanam 5- 1.4 - - besar.
0.14 20 126
4. Tunggu sampai air mendidih dan keluar
5 Media 60 0.10 1.05- 15 121
tekanan uap dari katup ’release valve’,
kontami 5- 1.4 - -
nan 0.14 20 126 kemudian tutup katup tersebut.
5. Biarkan tekanan naik sampai pada tekanan
Autoklaf yang dapat di- 0.14 Mpa.
gunakan ada bermacam-macam, mulai
6. Kecilkan api kompor dan jaga jarum
dari yang sederhana sampai yang pro-
penunjuk tekanan pada angka 0.14 Mpa dan
gamable. Autoklaf yang sederhana mengguna hitung waktunya.
kan sumber panas dengan menggunakan
7. Waktu untuk autoklaf media tanam 20
kompor gas. Pada autoklaf yang sederhana ini, menit, air steril 1 jam, botol kosong dan
tekanan dan suhu diatur dengan mem- alat-alat tanam 30 – 45 menit serta botol
besarkan atau mengecilkan sumber api. kontaminan 1 jam.
Kelemahan autoklaf ini adalah perlunya 8. Apabila waktu sterilisasi sudah tercapai,
penjagaan dan pengaturan panas secara matikan kompor dan biarkan tekanan
manual selama masa sterilisasi dilakukan. turun dengan sendirinya ke angka nol.
Keuntungan penggunaan autoklaf ini adalah 9. Buka terlebih dahulu katup ’release valve’,
sederhana pengoperasianya, harganya relatif kemudian baru buka tutup autoklaf.
murah, tidak tergantung pada aliran listrik,
dan lebih cepat masak dibandingkan dengan
Sterilisasi Bahan Tanaman (eksplant)
autoklaf listrik.
Autoklaf yang progamable menggunakan Dalam kultur jaringan, inisiasi kultur
sumber energi dari listrik. Alatnya dilengkapi yang bebas dari kontaminan merupakan
dengan timer dan thermostat. Bila pengatur langkah yang sangat penting, karena tanaman
automatik ini berjalan dengan baik, maka yang dari lapang mengandung debu, kotoran-
autoklaf ini dapat dijalankan sambil men- kotoran dan berbagai kontaminan hidup pada
gerjakan pekerjaan lain. Kelemahannya permukaannya. Kontaminan hidup dapat
adalah bila salah satu pengatur tidak bekerja, berupa cendawan, bakteri, serangga dan
maka pekerjaan persiapan media menjadi sia- telurnya, tungau serta spora-spora. Bila
sia dan kemungkinan menyebabkan kerusakan sumber kontaminan ini tidak dihilangkan,
total pada autoklaf. maka pada media yang mengandung gula,
vitamin dan mineral akan ditumbuhi oleh
Berikut adalah prosedur sterilisasi dengan
jamur dan bakteri. Apabila eksplant ter-
autoklaf sederhana (gas) :
kontaminasi, maka akan mati oleh per-
1. Autoklaf di isi air sampai batas ”sang-sang
senyawaan beracun yang di produksi dan
atau sarangan”.
dikeluarkan oleh bakteri atau jamur.
2. Kemudian botol dimasukkan sampai penuh
dan tutup rapat, dengan posisi katup Pada beberapa tanaman, ditemukan
’release valve’ terbuka dan ’savety valve’ juga kontaminan yang berasal dari dalam
tertutup. jaringan tanaman, terutama bakteri.

PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI 7

Kontaminan internal ini sangat sulit diatasi, N Bahan Konsentrasi Lama
karena sterilisasi permukaan tidak me- o perendama
nyelesaikan masalah. Pada bahan tanaman n

yang mengandung kontaminan internal, 1 Kalsium 1 – 10 % 5 – 30

harus diberi perlakuan antibiotik atau hipoklorit menit

bakterisida yang sistemik. Bisa juga memakai 2 Natrium 1–2% 7 – 15

PPM yang dicampurkan ke dalam media hipoklorit menit

tanam dengan dosis 1-2 ml /liter media. 3 Hidrogen 3 – 10 % 5 – 15

peroksida menit
Tiap bahan tanaman mempunyai tingkat
kontaminasi permukaan yang berbeda-beda, 4 Perak nitrat 1% 5 – 30
tergantung dari : menit

1. Jenis tanamannya 5 Merkuri 0.1 – 0.2 10 – 20

klorit % menit
2. Bagian tanaman yang dipergunakan (HgCl2)
3. Morfologi permukaan (ex. Berbulu atau
6 Bethadine 2.5 – 10 5 – 10
tidak)
% menit
4. Lingkungan tumbuhnya (green house atau
7 Fungisida 2 g/l 20 – 30
lapangan)
menit
5. Musim waktu mengambil (musim hujan
8 Antibiotik 50 – 100 ½-1
atau kemarau)
mg/l jam
6. Umur tanaman (seedling atau tanaman
9 Alkohol 70 % 1 – 10
dewasa)
menit
7. Kondisi tanamannya (sehat atau sakit)
10 Bayclin/sunc 5 – 30 % 5 – 25
Keadaan ini menyukarkan penentuan lin menit
suatu prosedur sterilisasi standart yang
berlaku untuk semua tanaman. Juga sukar Bahan-bahan sterilisasi ini pada
untuk menentukan prosedur standart yang umumnya bersifat toxic/racun terhadap
dapat digunakan untuk suatu jenis tanaman jaringan tanaman. Pembilasan yang berkali-
yang berasal dari tempat yang berbeda. kali sesudah perendaman eksplant di dalam
Prosedur sterilisasi setiap tanaman harus larutan bahan streilisasi, sangat diperlukan
ditentukan melalui percobaan pendahuluan. untuk menghilangkan sisa-sisa bahan aktif
yang masih menempel dipermukaan bahan
Dalam sterilisasi bahan tanaman, hal
tanaman.
yang penting yang harus mendapat per-
hatian adalah; bahwa sel tanaman dan Dalam sterilisasi, kadang-kadang di-
kontaminan adalah sama-sama benda gunakan dua atau lebih bahan sterilisasi.
hidup. Kontaminan harus dihilangkan tanpa Misalnya; perendaman dalam alkohol dulu,
mematikan sel tanaman. kemudian dalam bayclin, setelah itu bilas
dengan air steril. Dapat juga perendaman di
Beberapa jenis bahan disenfektan yang
mulai dengan larutan fungisida atau
dapat digunakan untuk sterilisasi bahan
antibiotik, kemudian baru HgCl2 dan dibilas
tanaman :

PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI 8

dengan air steril. Prosedur mana yang efektif,
harus ditentukan melalui percobaan pen-
dahuluan.
Sterilisasi bahan tanaman dimulai
dengan pencucian dan pembuangan bagian-
bagian yang kotor dan mati di bawah
pancuran air bersih. Pencucian dapat
dilakukan dengan penyikatan menggunakan
detergent halus. Kadang-kadang bahan
yang sudah bersih dibiarkan dibawah
pancuran air selama 30 menit. Hal ini
dilakukan untuk memecah koloni
kontaminan yang masih menempel
dipermukaan agar koloni tersebut lebih peka
terhadap bahan-bahan sterilisasi. Juga untuk
mengurangi dan menghilangkan senyawa
fenol, terutama pada tanaman yang
kandungan fenoliknya tinggi.
Prosedur sterilisasi dapat dimodifikasi sesuai
dengan kebutuhan, seperti :
1. Fungisida – alkohol – bayclin – bayclin –
aquades steril
2. Alkohol – bayclin – bayclin – aquades steril
3. HgCl2 – alkohol – aquades steril
4. Fungisida – bayclin – bayclin – bayclin –
aquades steril
Metode Sterilisasi Tanaman
A. Persyaratan eksplant dari jenis tanaman
berkayu :
1. Usia mother plant yang akan di ambil
tunasnya berusia < 1 tahun, karena
semakin tua umur mother plant maka
kandungan fenolnya tinggi
2. Mother plant sebaiknya diberi perlakuan
awal dengan penyemprotan fungisida
kontak dan bakterisida sistemik secara
PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI
rutin tiap minggu untuk mengurangi
kontaminasi jamur
3. Sebaiknya mother plant diletakkan di
dalam green house atau suatu tempat
yang tertutup atau terlindung dari udara
bebas
4. Eksplan yang akan diambil sebaiknya
tunas samping yang baru keluar, caranya
dengan memotong tunas apikal/tua, dan
merangsang tanaman tersebut dengan
hormon supaya lebih cepat keluar tunas
sampingnya
5. Eksplant setelah diambil, maka lakukan
kegiatan pembersihan dengan menyikat
eksplant menggunakan sikat gigi yang
sudah dicelupkan ke dalam larutan sabun
cair (sun light dll). Lakukan beberapa kali
sampai yakin.
6. Untuk bagian-bagian yang masih
kelihatan kotor/gelap, lakukan
pengerokan bagian permukaanya dengan
menggunakan pisau/cutter.
7. Bila tanaman tersebut beruas, maka
potong tiap ruas atau 2 ruas tergantung
panjang pendeknya ruas.
8. Rendam eksplant tersebut selama 15 menit
dengan air steril untuk mengeluarkan
senyawa fenol dalam jaringan. Setelah 15
menit ganti lagi dengan air steril dan
diamkan selama 15 menit, ulangi terus bila
fenol tetap masih keluar Apabila fenol
tidak keluar lagi bisa dilakukan kegiatan
inisiasi di dalam laminar.
9. Hindari pemakaian Rinso, perendaman
bakterisida + fungisida, karena bisa
memacu terjadinya browning pada
eksplan dan media tanam
B. Persyaratan eksplant dari jenis tanaman
non kayu :
1. Lebih baik tanaman terlebih dahulu
dikarantina dan diberi perlakuan
9
 penyemprotan fungisida kontak dan
bakterisida sistemik secara rutin
2. Tanaman yang akan menjadi sumber
eksplant bukan tanaman sakit
3. Potong tunas apikal dan rangsang dengan
penyemprotan hormon agar tumbuh
tunas samping
4. Eksplant setelah diambil, maka lakukan
kegiatan pembersihan dengan menyikat
eksplant menggunakan sikat gigi yang
sudah dicelupkan ke dalam larutan sabun
cair (sun light dll). Lakukan beberapa kali
sampai yakin.
5. Potong bagian – bagian yang tidak penting
6. Untuk bagian-bagian yang masih kelihatan
kotor/gelap, lakukan pengerokan bagian
permukaanya dengan menggunakan
pisau/cutter.
7. Bila tanaman tersebut beruas, maka
potong tiap ruasnya.
8. Rendam eksplant tersebut selama 15 menit
dengan air steril untuk mengeluarkan
senyawa fenol dalam jaringan. Setelah 15
menit ganti lagi dengan air steril dan
diamkan selama 15 menit, ulangi terus bila
fenol tetap masih keluar Apabila fenol
tidak keluar lagi bisa dilakukan kegiatan
inisiasi di dalam laminar.
9. Hindari pemakaian Rinso, perendaman
bakterisida + fungisida, karena bisa
memacu terjadinya browning pada
eksplan dan media tanam
C. Metode Sterilisasi Eksplant Berkayu dan
Non Kayu
Cara I.
Setelah eksplant direndam beberapa kali
dalam air steril, kemudian eksplant di
bawa ke laminar. Bilas 1 kali dengan air
steril. Rendam dalam larutan clorox 10 %
(10 ml) + 1 tetes tween 20 (bila ada tween).
Gojok selama 10 menit. Bilas sekali dengan
air steril. Rendam kembali dengan larutan
PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI
clorox 15 % + 1 tetes tween 20 bila ada.
Gojok selama 10 menit. Bilas 3 kali dengan
air steril. Kemudian tiriskan di atas tissue
steril dan tanam
Cara II.
Eksplant di rendam dalam larutan clorox
10 % + 1 tetes tween 20 (bila ada tween).
Gojok selama 10 menit. Bilas sekali dengan
air steril. Rendam dengan alkohol 70 %
selama 1 menit. Bilas dengan air steril 3
kali. Kemudian tiriskan di atas tissue steril
dan tanam.
Cara III.
Eksplant di rendam dalam larutan clorox
10 % + 1 tetes tween 20 (bila ada tween).
Gojok selama 10 menit. Bilas sekali dengan
air steril. Rendam dalam larutan HgCl2
selama 1 menit. Bilas dengan air steril 3
kali. Kemudian tiriskan di atas tissue steril
dan tanam.
Cara IV
Rendam dalam larutan HgCl2 selama 1
menit. Bilas sekali dengan air steril.
Rendam dalam larutan HgCl2 selama 1
menit. Bilas dengan air steril 3 kali.
Kemudian tiriskan di atas tissue steril dan
tanam.
Catatan:
Bila eksplant tersebut lunak, maka
konsentrasi dan waktu perendaman
dengan clorox bisa dikurangi
***
10
 BAB IV
MEDIA KULTUR JARINGAN
Keberhasilan dalam penggunaan metode
kultur jaringan sangat tergantung pada
media yang digunakan. Media kultur jaringan
tanaman tidak hanya menyediakan unsur
hara makro, mikro, vitamin dan ZPT (zat
pengatur tumbuh), tetapi juga karbohidrat
yang pada umumnya berupa gula untuk
menggantikan karbon yang biasanya di
dapat dari atmosphere melalui fotosintesis.
Unsur Makro
Hara makro dalam media kultur jaring-
an adalah; N (nitrogen), P (phospor), K (kalium),
Mg (magnesium), Ca (kalsium) dan S (sulfur).
Fungsi masing-masing unsur adalah sebagai
berikut:
1. Nitrogen (N)
Kegunaan nitrogen bagi tanaman adalah
untuk menyuburkan tanaman, sebab unsur
N dapat membentuk protein, lemak dan
berbagai persenyawaan organik lain. Yang
paling penting dalam hal ini adalah
pembentukan protein atau lazim disebut
putih telur. Putih telur banyak terdapat
pada sel-sel yang masih hidup, yaitu pada
bagian yang sedang aktif tumbuh. Jadi unsur
N dipergunakan terutama untuk pertumbuh-
an vegetatif tanaman. Kecuali itu, unsur
N juga berperanan dalam pembentukan
hijau daun, di mana hijau daun ini berguna
untuk melaksanakan proses pemasakan
pada tanaman (proses fotosintesis) yang
nantinya akan menghasilkan karbonhidrat.
2. Fosfor (P)
PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI
Unsur P terutama dibutuhkan tanaman untuk
pembentukan karbohidrat. Maka unsur P
ini dibutuhkan secara besar-besaran pada
waktu pertumbuhan benih, pembungaan,
pemasakan buah dan bici
3. Kalium (K)
Unsur K berfungsi untuk memperkuat tubuh
tanaman, karena unsur ini dapat menguat-
kan serabut-serabut akar sehingga daun,
bunga dan buah tidak mudah gugur. Di
samping itu, unsur K juga berfungsi mem-
perlancar metabolisme dan mempengaruhi
penyerapan makanan.
4. Sulfur (S)
Unsur S merupakan unsur yang penting
untuk pembentukan beberapa jenis protein,
seperti asam amino dan vitamin B1. Unsur
S juga berperanan penting dalam pem-
bentukan bintil-bintil akar. Di samping
itu, unsur S juga membantu pembentukan
anakan sehingga pertumbuhan dan ketahan-
an tanaman terjamin.
5. Kalsium (Ca)
Unsur Ca terdapat pada batang dan daun
tanaman. Unsur Ca ini bertugas merangsang
pembentukan bulu-bulu akar, mengeras-
kan batang dan merangsang pembentukan
biji . Karena unsur Ca bersama-sama dengan
unsur Mg akan memproduksi cadangan
makanan.
6. Magnesium (Mg)
Dengan menambahkan unsur Mg, maka
kandungan fosfat dalam tanaman dapat
meningkat. Sedangkan kegunaan dari fosfat
itu sendiri adalah sebagai bahan mentah
untuk pembentukan sejumlah protein.
Dengan terbentuknya sejumlah protein ini
11
 maka pertumbuhan daun menjadi sempurna
dan terbentuk karbohidrat, lemak dan minyak.
Hara Mikro
Hara mikro dalam media kultur jaringan
diantaranya adalah: Fe (besi), Mn (mangan),
Zn (seng), B (boron), Cu (tembaga), Co
(cobalt), Na (natrium), dan Mo (molib-
denum). Masing-masing fungsi dari unsur
tersebut adalah sebagai berikut:
1. Besi (Fe)
Unsur Fe dibutuhkan sedikit lebih banyak
daripada unsur mikro lainnya. Unsur fe
biasa diberikan dalam bentuk FeSO4. 7H2O.
Pada tanaman, unsur Fe berfungsi sebagai
pembentuk hijau daun dan membantu
proses respirasi.
2. Natrium (Na)
Natrium pada umumnya bagi tanaman tidak
mutlak diperlukan. Beberapa macam tana-
man seperti; bit, rupanya mem-butuhkan
natrium. Unsur ini sama perlunya seperti
kalium untuk pertumbuhan tanaman bit.
3. Mangan (Mn)
Mangan mempunyai peranan yang penting
di dalam fisiologi tanaman, karena mangan
merupakan komponen berbagai enzim.
Juga diperlukan oleh tanaman untuk pem-
bentukan hijau daun. Menurut Gerretsen,
mangan juga mempunyai pengaruh ter-
hadap proses asimilasi karbon.
4. Tembaga (Cu)
Mengenai fungsi Cu terhadap tanaman
masih sangat sedikit diketahui. Ia men-
dorong terbentuknya hijau daun dan ter-
masuk komponen dari beberapa enzim.
Pada tanaman muda yang kekurangan Cu,
PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI
gejalanya adalah pucuk-pucuk daun yang
mati dan lemas.
5. Boron (B)
Boron mempunyai peranan pada transpor-
tasi di dalam tanaman. Pada tanaman yang
isi benihnya terdiri dari 2 bagian; boron
berfungsi terhadap pembagian sel. Pada
tanaman semacam ini kekurangan B dapat
mengakibatkan terjadinya mati pucuk
yang masih muda dan rusaknya titik-titik
tumbuh dari bagian-bagian tanaman yang
akhirnya menjadi busuk dan mati.
6. Kobalt (Co)
Fungsi Co secara detail belum diketahui
terhadap pertumbuhan tanaman. Tetapi
pada ternak; ketiadaan unsur Co dapat me-
nyebabkan terganggunya stok vitamin B 12.
7. Molibdenum (Mo)
Molibdenum sebagai zat makanan tanaman.
Pada beberapa kasus tanaman yang ke-
kurangan zat ini gejalanya adalah tidak
terbentuknya bunga, daun-daunnya tidak
tumbuh, dan tanaman kerdil. Tanaman
yang menderita biasanya memperlihatkan
pertumbuhan daun yang buruk dan warna-
nya hijau muda.
Vitamin
Vitamin yang paling sering diguna-
kan dalam media kultur jaringan adalah
thiamine (B1), nicotinic acid (niacin) dan
pyridoxine (B6). Thiamine merupakan vitamin
yang essensial dalam kultur jaringan tanaman.
Penambahan myo inositol ke dalam
media dapat memperbaiki pertumbuhan dan
morfogenesis. Menurut George dan Sherrington,
kemungkinan peranannya melalui keikut-
sertaannya dalam lintasan biosintesa asam D-
12
galakturonat yang menghasilkan vitamin C
dan pektin. Sumber Energi
Selain sebagai sumber energi, gula
Zat Pengatur Tumbuh juga berfungsi sebagai pengatur tekanan
osmotik media. Konsentrasi gula yang di-
Zat pengatur tumbuh adalah per se-
pakai antara 2 – 4 %, konsentrasi rata-rata
nyawaan organik selain nutrient yang
yang sering dipakai adalah 30 g/l.
dalam jumlah sedikit (1 mM) dapat me-
rangsang, menghambat, atau mengubah
Bahan Pemadat Media
pola pertumbuhan dan perkembangan tana-
Bahan pemadat yang sering banyak
man. Dalam kultur jaringan ada beberapa
digunakan adalah agar-agar. Keuntungan dari
golongan zat pengatur tumbuh, diantaranya
pemakaian agar-agar adalah :
adalah:
1. Agar-agar membeku pada suhu 45O C dan
Sitokinin. Adalah turunan dari adenine.
mencair pada suhu 100O C, sehingga dalam
Golongan ini penting dalam pengaturan pem-
kisaran suhu kultur, agar-agar akan berada
belahan sel dan morfogenesis. Manfaat dari dalam keadaan beku yang stabil.
hormon sitokinin ini diantaranya adalah;
2. Tidak dicerna oleh enzim tanaman.
untuk mempercepat pertumbuhan tunas, mem-
3. Tidak bereaksi dengan persenyawaan-per-
percepat penambahan jumlah daun, memper-
senyawaan media.
banyak anakan, dan menghambat penuaan
organ tanaman. Jenis-jenis sitokinin antara
Arang Aktif
lain; BAP (6 benzyl amino purine), kinetin, 2iP
Penambahan arang aktif dapat mem
(6-∂-∂ dimethiyl allylamino-purine), TDZ
bantu pertumbuhan dan perkembangan kultur,
(thidiazuron), dan Zeatin.
tergantung dari jenis kulturnya. Secara umum,
Auksin. Auksin secara luas digunakan
pengaruh arang aktif adalah sebagai berikut :
dalam kultur jaringan untuk merangsang per-
1. mengadsorpsi persenyawaan - persenyawaan
tumbuhan akar, kalus, suspensi sel dan
beracun yang terdapat dalam media yang
organ. Berikut jenis-jenis auksin yang sering
dapat menghambat pertumbuhan kultur.
dipakai dalam kultur jaringan, antara lain;
2. Mengadsorpsi zat pengatur tumbuh sehingga :
IBA (indole butyric acid), NAA (naphtaleine
a. Mencegah pertumbuhan kalus yang tidak
acetic acid), 2,4-D (2,4 dichlorophenoxy
diinginkan, seperti dalam androgenesis
acetic acid), dan IAA (indole acetic acid). IBA
dan pucuk yang ingin diakarkan.
sering dipakai untuk pengakaran tanaman
b. Membantu embriogenesis kultur dalam
karena sifatnya yang stabil dan tidak mudah
media regenerasi tanpa auksin.
rusak oleh suhu tinggi. IAA bersifat photo
3. Merangsang perakaran dengan mengurangi
oksidasi, mudah terurai oleh cahaya dan tidak
tingkat cahaya yang sampai ke bagian
tahan oleh suhu tinggi. 2,4-D dapat diguna-
eksplant yang terdapat dalam media.
kan untuk pembentukan kalus tanaman,
tetapi apabila dipakai secara terus menerus
dapat menyebabkan mutasi.

PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI 13

 Arang aktif ditambahkan dengan
konsentrasi yang bervariasi. Mulai dari 0.5
% - 6 %, tergantung dari tujuan.
pH Media
Sel-sel tanaman membutuhkan pH yang
sedikit asam, berkisar antara 5.5 – 5.8.
Pengaturan pH biasa dilakukan dengan
penambahan KOH/NaOH dan HCL. Apabila
media terlalu asam, media ditambah be-
berapa tetes NaOH/KOH 1 N, kemudian
diukur dengan pH meter atau kertas pH
indikator. Juga kalau media terlalu basa,
tambahkan HCl beberapa tetes, kemudian
ukur.
Sekalipun media sudah ditentukan pH-
nya, seringkali setelah sterilisasi pH-nya ber-
ubah. Pada umumnya terdapat penurunan pH
setelah disterilisasi dengan autoklaf. Untuk
itu lebih baik pH media sebelum di masak
ditentukan di angka 6.
Pembuatan Media
Dalam membuat media, langkah per-
tama adalah membagi senyawa penyusun
media ke dalam masing-masing kelompok
larutan stok sesuai dengan sifat dan tingkat
kelarutannya. Tujuan pembuatan larutan
stok adalah untuk menghemat dan memudah-
kan pekerjaan menimbang bahan kimia setiap
kali pembuatan media. Stok vitamin tidak
dapat disimpan lama, umumnya dibuat untuk
digunakan dalam 1 - 2 minggu. Stok hormon
dapat disimpan antara 2 – 4 minggu. Sedang-
kan stok hara dapat disimpan 4 – 8 minggu.
Dengan adanya larutan stok, pembuatan
media selanjutnya dilakukan hanya dengan
teknik pengenceran dan pencampuran saja.
PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI
Hal yang perlu diperhatikan dalam
pembuatan larutan stok adalah mengenai
penyimpanan larutan. Larutan yang sudah
mengalami pengendapan tidak dapat di-
gunakan lagi. Pengendapan larutan stok
biasa terjadi bila kepekatan larutan terlalu
tinggi atau pengadukannya tidak rata. Oleh
karena itu pengendapan larutan dapat
dihindari dengan membuat larutan stok
tidak terlalu pekat dan membuat campuran
larutan stok sesuai dengan kelompoknya.
Larutan stok dikelompokkan dalam :
1. Larutan stok A untuk persenyawaan KNO3
2. Larutan stok B untuk persenyawaan NH4NO3
3. Larutan stok C untuk persenyawaan KH2PO4
dan MgSO4
4. Larutan stok D untuk persenyawaan CaCl2
5. Larutan stok E untuk persenyawaan FeSO4
dan Na2EDTA
6. Larutan stok F untuk persenyawaan MnSO4,
ZnSO4, H3BO3, KI, Na2MoO4, CoCl2, dan
CuSO4
7. Larutan stok G untuk vitamin; thiamine
HCl, Nicotinic acid, pyridoxin, dan glycine
8. Larutan stok H untuk myo inositol
Cara membuatnya:
1. Larutan stok A 1 liter (100 x konsentrasi,
ambil 10 ml)
a. Dalam 1 liter media, KNO3 dibutuhkan
sebanyak 1.900 mg/l. Karena larutan
stok yang akan dibuat konsentrasinya
100 kali, maka KNO3 yang harus di-
larutkan adalah 100 x 1.900 mg/l =
190.000 mg/l atau 190 g/l.
b. Kemudian larutkan dalam 700 ml aqua-
dest, aduk-aduk sampai larut.
c. Setelah larut sempurna, tambahkan
aquadest sampai volume 1 liter.
14
 d. Pindahkan ke dalam erlenmeyer atau
botol dan beri label ’A’.
e. Untuk membuat 1 liter media, ambil
larutan stok A 10 ml.
2. Larutan stok B 1 liter (100 x konsentrasi,
ambil 10 ml)
a. Dalam 1 liter media, NH4NO3 dibutuh-
kan sebanyak 1.650 mg/l. Karena
larutan stok yang akan dibuat kon-
sentrasinya 100 kali, maka NH4NO3 yang
harus dilarutkan adalah 100 x 1.650
mg/l = 165.000 mg/l atau 165 g/l.
b. Kemudian larutkan dalam 700 ml aqua-
dest, aduk sampai larut.
c. Setelah larut sempurna, tambahkan aqua-
dest sampai volume 1 liter.
d. Pindahkan ke dalam erlenmeyer atau
botol dan beri label ’B’.
e. Untuk membuat 1 liter media, ambil
larutan stok B 10 ml.
3. Larutan stok C 1 liter (100 x konsentrasi,
ambil 10 ml)
a. Dalam 1 liter media, KH2PO4 dibutuhkan
sebanyak 170 mg/l. Karena larutan stok
yang akan dibuat konsentrasinya 100
kali, maka KH 2PO4 yang harus dilarut-
kan adalah 100 x 170 mg/l =17.000 mg/l
atau 17 g/l. MgSO4 dibutuhkan sebanyak
180,5 mg/l. Karena larutan stok yang
akan dibuat konsentrasinya 100 kali,
maka MgSO4 yang harus dilarutkan
adalah 100 x 180,5 mg/l =18.500 mg/l
atau 18,5 g/l.
b. Kemudian larutkan secara terpisah
kedua senyawa tersebut dalam 350 ml
aquadest, aduk sampai larut.
c. Setelah larut sempurna, campurkan
kedua senyawa tersebut dan tambahkan
aquadest sampai volume 1 liter.
PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI
d. Pindahkan ke dalam erlenmeyer atau
botol dan beri label ’C’.
e. Untuk membuat 1 liter media, ambil
larutan stok C 10 ml.
4. Larutan stok D 1 liter (100 x konsentrasi,
ambil 10 ml)
a. Dalam 1 liter media, CaCl2 dibutuhkan
sebanyak 332.02 mg/l. Karena larutan
stok yang akan dibuat konsentrasinya
100 kali, maka CaCl2 yang harus di-
larutkan adalah 100 x 332,02 mg/l =
33.200 mg/l atau 33,2 g/l.
b. Kemudian larutkan senyawa tersebut
dalam 700 ml aquadest, aduk sampai
larut.
c. Setelah larut sempurna, tambahkan
aquadest sampai volume 1 liter.
d. Pindahkan ke dalam erlenmeyer atau
botol dan beri label ’D’.
e. Untuk membuat 1 liter media, ambil
larutan stok D 10 ml.
5. Larutan stok E 1 liter (100 x konsentrasi,
ambil 10 ml)
a. Dalam 1 liter media, FeSO4 dibutuhkan
sebanyak 27,8 mg/l. Karena larutan
stok yang akan dibuat konsentrasinya
100 kali, maka FeSO 4 yang harus di-
larutkan adalah 100 x 27,8 mg/l = 2.780
mg/l atau 2,78 g/l. Na2EDTA dibutuhkan
sebanyak 37,3 mg/l. Karena larutan
stok yang akan dibuat konsentrasinya
100 kali, maka Na2EDTA yang harus
dilarutkan adalah 100 x 37,3 mg/l = 3.730
mg/l atau 3.730 g/l.
b. Kemudian larutkan secara terpisah kedua
senyawa tersebut dalam 350 ml air aqua
dest yang hangat atau panas dan aduk
sampai larut.
c. Setelah larut sempurna, campurkan
Na2EDTA ke dalam botol FeSO 4 secara
15
 perlahan-lahan sambil diaduk dan tambah-
kan aquadest sampai volume 1 liter.
d. Pindahkan ke dalam erlenmeyer atau
botol dan beri label ’E’.
e. Erlenmeyer atau botol seluruh sisi-sisinya
harus ditutup dengan alumunium foil
atau kertas koran, karena larutan Fe ini
peka terhadap cahaya.
f. Setelah dingin, simpan dalam lemari es.
g. Untuk membuat 1 liter media, ambil
larutan stok E 10 ml.
6. Larutan stok F 1 liter (100 x konsentrasi,
ambil 10 ml)
a. Dalam 1 liter media, dibutuhkan MnSO4
16,9 mg/l, ZnSO4 8,6 mg/l, H3BO3 6,2
mg/l, KI 0,83 mg/l, Na2MoO4 0,25 mg/l,
CoCl2 0,025 mg/l, dan CuSO4 0,025 mg/l.
Untuk larutan stok 1 liter dengan
konsentrasi 100 kali, maka bahan-bahan
tersebut harus diambil sebanyak; MnSO4
1.690 mg/l, ZnSO4 860 mg/l, H3BO3 620
mg/l, KI 83 mg/l, Na2MoO4 25 mg/l,
CoCl2 2,5/l, dan CuSO4 2,5 mg/l.
b. Timbang dan larutkan senyawa-senyawa
tersebut satu persatu sambil diaduk
hingga larut dalam 700 ml aquadest.
Jangan memasukkan senyawa berikut-
nya sebelum senyawa yang diaduk larut.
c. Setelah larut sempurna, tambahkan
aquadest sampai volume 1 liter.
d. Pindahkan ke dalam erlenmeyer atau
botol dan beri label ’F’.
e. Untuk membuat 1 liter media, ambil
larutan stok F 10 ml.
7. Larutan stok G 100 ml (100 x konsentrasi,
ambil 1 ml)
a. Dalam 1 liter media, dibutuhkan thiamine
0,1 mg/l, Nicotinic acid 0,5 mg/l,
pyridoxin 0,5 mg/l, dan glycine 2 mg/l.
Untuk larutan stok 100 ml dengan
PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI
konsentrasi 100 kali, maka bahan-bahan
tersebut harus diambil sebanyak;
thiamine 10 mg/l, Nicotinic acid 5 mg/l,
pyridoxin 5 mg/l, dan glycine 200 mg/l.
b. Timbang dan larutkan senyawa-senyawa
tersebut satu persatu sambil diaduk
hingga larut dalam 50 ml aquadest.
Jangan memasukkan senyawa berikutnya
sebelum senyawa yang diaduk larut.
c. Setelah larut sempurna, tambahkan
aquadest sampai volume 100 ml.
d. Pindahkan ke dalam erlenmeyer atau
botol dan beri label ’G’.
e. Untuk membuat 1 liter media, ambil
larutan stok G 1 ml.
8. Larutan stok H 200 ml (20 x konsentrasi,
ambil 10 ml)
a. Dalam 1 liter media, myo inositol di-
butuhkan sebanyak 100 mg/l. Karena
larutan stok yang akan dibuat konsen-
trasinya 20 kali, maka myo inositol yang
harus dilarutkan adalah 20 x 100 mg/l =
2.000 mg/l atau 2 g/l.
b. Kemudian larutkan dalam 100 ml aqua-
dest, aduk sampai larut.
c. Setelah larut sempurna, tambahkan aqua-
dest sampai volume 200 ml.
d. Pindahkan ke dalam erlenmeyer atau
botol dan beri label ’H’.
e. Untuk membuat 1 liter media, ambil
larutan stok H 10 ml.
9. Larutan stok zat pengatur tumbuh
Zat pengatur tumbuh, umumnya hanya
dibutuhkan dalam jumlah sedikit. Larut-
an stok dibuat dengan kepekatan 1 – 10 mg
/ml. Berikut ini akan diuraikan pembuatan
larutan stok zat pengatur tumbuh dengan
kepekatan 1 mg/ml sebanyak 100 ml.
16
 a. Larutan stok auksin (IAA, IBA, NAA
dan 2,4-D)
Timbang bahan sebanyak 100 mg, ke-
mudian tuangkan ke dalam gelas piala
ukuran 100 ml yang berisi aquadest 50
ml. Sambil diaduk-aduk, teteskan sedikit
demi sedikit larutan NaOH 1N hingga
larut benar. Setelah larut merata, volume
ditepatkan 100 ml menambah aquadest.
Larutan yang telah ditepatkan volume-
nya ini dapat dipindah ke botol lain dan
diberi label. Untuk membuat 1 liter
media dengan perlakuan hormon auksin
1 ppm, maka dibutuhkan 1 ml larutan
stok hormon.
b. Larutan stok sitokinin (BAP, dan kinetin)
Timbang bahan sebanyak 100 mg, ke-
mudian tuangkan ke dalam gelas piala
ukuran 100 ml yang berisi aquadest 50
ml. Sambil diaduk-aduk, teteskan sedikit
demi sedikit larutan HCl 1N hingga
larut benar. Setelah larut merata, volume
ditepatkan 100 ml menambah aquadest.
Larutan yang telah ditepatkan volume-
nya ini dapat dipindah ke botol lain
dan diberi label. Untuk membuat 1 liter
media dengan perlakuan hormon sito-
kinin 1 ppm, maka dibutuhkan 1 ml
larutan stok hormon.
Apabila hormon sukar untuk larut,
aquadest dapat dipanaskan sampai men-
didih terlebih dahulu. Kemudian di guna-
kan untuk melarutkan hormon dengan
ditambahkan zat pelarut (HCl atau NaOH)
sedikit demi sedikit sambil diaduk hingga
larut.
Cara Membuat media:
Lihat lampiran 6
PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI
Cara membuat media dari media botolan
Murashige and Skoog :
1. Siapakan panci dan isi air bersih 500 ml
2. Timbang media MS jadi sebanyak 4,43
gram dan masukkan ke dalam panci
sambil di aduk
3. Timbang gula sebanyak 30 gram dan
masukkan ke dalam panci dan aduk
4. Timbang agar-agar sebanyak 6,5 gram
dan masukkan ke dalam panci
5. Tambahkan air sebanyak 500 ml dan
aduk-aduk sampai gulanya larut
6. Tambahkan hormon sesuai jenis media
yang akan dibuat
7. Ukur pH dengan kertas pH indikator
8. Apabila pH di warna angka 5, maka
tambahkan NaOH setetes demi setetes
sampai ke warna pH 6 (hijau)
9. Masak sampai mendidih
10. Tuangkan ke dalam botol kultur dengan
volume 20-30 ml/botol
11. Autoklaf dengan tekanan 0,14 Mpa (garis
merah) selama 18 menit.
***
BAB V
MACAM-MACAM MEDIA DASAR
KULTUR JARINGAN
Pada umumnya media kultur jaringan
dibedakan menjadi media dasar dan media
perlakuan. Resep media dasar adalah resep
kombinasi zat yang mengandung hara esensial
(makro dan mikro), sumber energi dan
vitamin. Dalam teknik kultur jaringan dikenal
puluhan macam media dasar. Penamaan
resep media dasar umumnya diambil dari
17
nama penemunya. Sedangkan media per- Berikut rincian berbagai komposisi media
lakuan adalah media dasar yang sudah dasar:
mengalami penambahan zat pengatur
1. Media dasar Murashige dan Skoog (MS)
tumbuh (ZPT) sesuai dengan jenis tanaman
yang akan di kultur. No Unsur Mg/liter

Berikut beberapa media dasar yang 1 KNO3 1900

banyak digunakan antara lain: 2 NH4NO3 1650
1. Media Murashige dan Skoog (MS) (1962) 3 MgSO4 180.5
yang dapat digunakan untuk hampir semua
4 KH2PO4 170
jenis kultur, terutama untuk tanaman
herbaceous. 5 CaCl2 332.02
2. Media dasar Gamborg B5 untuk kultur sel 6 FeSO4. 7H2O 27.8
kedelai, alfalfa dan legume lain.
7 Na2EDTA 37.3
3. Media dasar White (1934) yang sangat
cocok untuk kultur akar tanaman tomat. 8 CoCl2. 6H2O 0.025
4. Media dasar Vacin dan Went (VW) (1949) 9 CuSO4. 5H2O 0.025
yang biasa digunakan untuk kultur tanam- 10 H3BO3 6.2
an anggrek.
11 KI 0.83
5. Media dasar Nitsch dan Nitsch (1969) yang
biasa digunakan untuk kultur tepung sari 12 MnSO4. H2O 16.9
(pollen) dan kultur sel.
13 Na2MoO4. 2H2O 0.25
6. Media dasar Schenk dan Hildebrandt (SH)
14 ZnSO4. 7H2O 8.6
(1972) yang cocok untuk kultur jaringan
tanaman-tanaman monokotil. 15 Glycine 2
7. Media dasar Woody Plant Medium (WPM) 16 Myo inositol 100
(1981) yang khusus untuk kultur tanaman
17 Nicotinic acid 0.5
berkayu.
8. Media dasar N6 (1975) untuk serealia ter- 18 Pyridoxin HCl 0.5
utama padi. 19 Thiamine HCl 0.1
Dari sekian banyak media dasar yang
20 Agar-agar 6,5 – 7
paling sering dan banyak digunakan adalah
komposisi media dari Murashige dan Skoog. 21 Gula 30.000
Kadang-kadang untuk kultur tertentu kombi-
nasi zat kimia dari Murashige dan Skoog 2. Media dasar Gamborg B5
masih tetap digunakan tetapi konsentrasi-
No Unsur Mg/liter
nya diubah. Sebagai contoh media ½ MS,
berarti konsentrasi persenyawaan yang diguna- 1 KNO3 2500
kan adalah setengah konsentrasi media MS. 2 (NH4)2 SO4 134
3 MgSO4 121.56

PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI 18

 4 NaH2PO4 130.44 No Unsur Mg/liter
5 CaCl2 113.23 1 Ca(NO3)2. 4H2O 471.26
6 FeSO4. 7H2O 27.8 2 NH4NO3 400
7 Na2EDTA 37.3 3 MgSO4 180.5
8 CoCl2. 6H2O 0.025 4 KH2PO4 170
9 CuSO4. 5H2O 0.025 5 CaCl2 72.5
10 H3BO3 3 6 K2SO4 990
11 KI 0.75 7 FeSO4. 7H2O 27.8
12 MnSO4. H2O 10 8 Na2EDTA 37.3
13 Na2MoO4. 2H2O 0.25 9 H3BO3 6.2
14 ZnSO4. 7H2O 2 10 MnSO4. H2O 16.9
15 Myo inositol 100 11 Na2MoO4. 2H2O 0.25
16 Nicotinic acid 1 12 ZnSO4. 7H2O 8.6
17 Pyridoxin HCl 1 13 Glycine 2
18 Thiamine HCl 10 14 Myo inositol 100
19 Agar-agar 6,5 – 7 15 Nicotinic acid 0.5
20 Gula 20.000 – 16 Pyridoxin HCl 0.5
30.000
17 Thiamine HCl 0.1
18 Agar-agar 6,5 – 7
3. Media dasar Vacin dan Went (VW)
19 Gula 20.000 –
No Unsur Mg/liter 30.000
1 KNO3 525

2 (NH4)2 SO4 500 ***

3 MgSO4 122
4 Ca3(PO4)2 200 BAB VI
5 KH2PO4 250 PROSES PENANAMAN EKSPLANT

6 Fe2(C4H4O6)3 23.13
Setelah media kultur dibiarkan selama
7 MnSO4. H2O 5.68
3 hari dan tidak menunjukkan adanya konta-
minan bakteri dan jamur pada permukaan
4. Media dasar Woody Plant Medium media, maka kegiatan penanaman eksplant
(WPM) dapat dilakukan. Eksplant sebelum ditanam

PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI 19

pada media kultur, terlebih dahulu di-
lakukan sterilisasi, seperti bahasan pada BAB
III. Eksplant yang telah di cuci dengan air
steril diletakkan dalam petridish yang di-
dalamnya dialasi tissue steril. Fungsi tissue
ini adalah sebagai penyerap air bekas bilasan,
sehingga eksplant kering.
Peralatan dan bahan yang perlu di-
siapkan dan diletakkan di atas meja laminar
adalah ; pinset, gunting, pisau scapel, botol berisi
alkohol 96 % / spiritus, lampu bunsen, tissue
gulung dan air steril. Peralatan dan bahan
ini disemprot terlebih dahulu dengan alkohol
70 % sebelum dimasukkan ke dalam meja
laminar.
1. Proses penanaman eksplant hasil
inisiasi
a. Langkah awal adalah, menata peralatan
dan bahan sedemikian rupa sehingga
memudahkan proses penanaman. Seperti;
botol media ditumpuk dan diletakkan
di sebelah kiri, petridish tepat di depan,
lampu bunsen letakkan di depan sebelah
kiri dari petridish, botol alkohol dan
botol tempat pinset letakkan di sebelah
kanan.
b. Kemudian nyalakan lampu bunsen.
c. Semprot pinset dengan alkohol 70 %
atau celupkan pada alkohol 96 % atau
pada spiritus, kemudian bakar di atas
lampu bunsen dari pangkal sampai
ujung. Lakukan 2 – 3 kali. Langkah ini
untuk memusnahkan spora jamur atau
bakteri yang masih menempel pada
pinset.
d. Letakkan pinset di atas petridish/botol
alkohol.
e. Ambil botol media dan buka.
PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI
f. Ambil eksplant dengan pinset dan masuk-
kan langsung ke dalam botol kultur.
g. Tutup rapat dan letakkan disebelah kanan.
h. Agar tekanan dari luar tidak masuk,
tutup botol dapat dilapisi plastik klin
wrap.
i. Beri label tanggal penanaman, jenis ta-
naman dan nama media.
2. Proses penanaman eksplant hasil multi-
plikasi (sub kultur)
a. Langkah awal adalah, menata peralatan
dan bahan sedemikian rupa sehingga
memudahkan proses penanaman. Se-
perti; botol media ditumpuk dan di-
letakkan di sebelah kiri, petridish tepat
di depan, lampu bunsen letakkan di
depan sebelah kiri dari petridish, botol
alkohol dan botol tempat pinset letak-
kan di sebelah kanan.
b. Kemudian nyalakan lampu bunsen.
c. Semprot pinset dengan alkohol 70 %
atau celupkan pada alkohol 96 % atau
pada spiritus, kemudian bakar di atas
lampu bunsen dari pangkal sampai
ujung. Lakukan 2 – 3 kali. Langkah ini
untuk memusnahkan spora jamur atau
bakteri yang masih menempel pada pinset.
d. Ambil tanaman dari botol kultur yang
akan di multiplikasi.
e. Letakkan tanaman di dalam petridish
dan dipotong-potong dengan meng-
gunakan pisau scapel atau gunting.
f. Ukuran eksplant, bisa pernodlus untuk
tanaman berkayu atau pertunas.
g. Kemudian tanam kembali eksplant pada
media kultur yang baru. Isi 1 botol kultur
bisa 5 -10 eksplant.
h. Tutup rapat dan letakkan disebelah kanan.
20
 i. Agar tekanan dari luar tidak masuk, tutup
botol dapat dilapisi plastik klin wrap.
j. Beri label tanggal penanaman, jenis
tanaman dan nama media.
***
BAB VII
CONTOH PERBANYAKAN TANAMAN
DENGAN KULTUR JARINGAN
Berikut adalah contoh-contoh perbanyak-
an tanaman dengan metode kultur jaringan
beserta cara sterilisasinya. Perlu diingat dalam
kultur jaringan; bahwa suatu media tanam
dan metode sterilisasi bagus di suatu
laboratorium tertentu, belum tentu bagus dan
berhasil di laboratorium lain. Hal ini disebab-
kan oleh banyak faktor, seperti: tingkat kejelian
dan ketrampilan laboran, merk bahan kimia
yang dipakai, keakuratan pemakaian dosis
dan faktor lingkungan tempat eksplant
tumbuh. Oleh karena itu apabila hasilnya
kurang bagus dan tingkat kontaminasinya
tinggi, maka disarankan untuk memodifikasi
sendiri baik media tanam maupun metode
sterilisasinya.
Tanaman Kehutanan
A. Jati
B. Gaharu
1. Eksplant :
Batang tanaman muda, ambil bagian 2
ruas dari ujung/pucuk (pucuk tidak
dipakai karena kandungan fenoliknya
tinggi).
2. Media :
PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI
Media dasar : Murashige & Skoog,
NH4NO3 75 % dan CaCl2
150 %
ZPT : BAP 0.5 mg/l dan kinetin
0.5 mg/l
Cahaya : 12-16 jam penyinaran
dengan intensitas 1000 lux.
Suhu : 28o ± 2o C
3. Sterilisasi :
Eksplant dipotong-potong perbuku
/nodlus, kemudian digosok dengan
sikat gigi yang sudah diberi sabun cair.
Setelah itu bawa eksplant ke dalam
laminar untuk disterilisasi. (Pembersih-
an eksplant dengan rinso dan fungisida
/bacterisida sebaiknya dihindari, karena
akan memacu keluarnya fenol yang
berlebih dari dalam jaringan).
Di dalam laminar, eksplant di
sterilisasi dengan ; HgCl2 0.2 % selama
1 menit dengan digojok – bilas dengan
air steril 2 kali – alkohol 70 % selama 1
menit – bilas dengan air steril 1 kali –
bayclin 10 ml/100 ml air selama 10
menit – bilas dengan air steril 3 kali –
kemudian tiriskan diatas tissue steril
dalam petridish dan tanam dalam media
steril. (larutan HgCl2 dan air bilasan
HgCl2 jangan dibuang, simpan saja
karena berbahaya terhadap lingkungan).
1. Eksplant :
Batang tanaman muda (pucuk tidak
dipakai karena kandungan fenoliknya
tinggi).
2. Media :
Media dasar : Murashige & Skoog
21
 ZPT : BAP 0.5 mg/l Cara 2 : eksplant disterilisasi dengan
Cahaya : 12-16 jam penyinaran alkohol 70 % selama 1 menit – bilas
dengan intensitas 1000 dengan air steril 1 kali – bayclin 10 % +
lux. tween-20 1 tetes selama 10 menit – bilas
dengan air steril 2 kali – bayclin 20 % +
Suhu : 28o ± 2o C
tween-20 1 tetes selama 10 menit – bilas
3. Sterilisasi :
dengan air steril 5 kali, kemudian tiriskan
Eksplant dipotong-potong perbuku
diatas tissue steril dalam petridish
/nodlus, kemudian gosok dengan sikat
dan tanam.
gigi dengan tambahan sabun cair.
Di dalam laminar, eksplant disterilisasi B. Phillodendron
dengan ; HgCl2 0.1 % selama 1 menit 1. Eksplant :
dengan digojok – bilas dengan air Pucuk dan batang muda
steril 2 kali – alkohol 70 % selama 1
2. Media :
menit – bilas dengan air steril 3 kali –
Media dasar : Murashige & Skoog,
kemudian tiriskan diatas tissue steril
NH4NO3 50 %
dalam petridish dan tanam dalam media
steril. ZPT : kinetin 0.5 mg/l atau
BAP 0.3 mg/l
Tanaman Hias Cahaya : 12 jam penyinaran.

A. Anthurium Suhu : 26o ± 2o C

3. Sterilisasi :
1. Eksplant :
Metode sterilisasi untuk jenis phillo
Pucuk tanaman muda atau biji.
berbatang putih/kuning dengan yang
2. Media : berbatang coklat/gelap berbeda. Hal
Media dasar : Murashige & Skoog, ini karena kandungan fenol pada phillo
NH4NO3 75 % berbatang gelap/coklat lebih banyak
ZPT : TDZ 0.05 mg/l dan BAP dan peka terhadap pestisida dan Bayclin.
0.2 mg/l  Metode sterilisasi untuk phillo
Cahaya : 12 jam penyinaran. berbatang coklat/gelap :
Suhu : 26o ± 2o C Pucuk atau batang terlebih dahulu
disikat dengan sabun cair, kemudian
3. Sterilisasi :
bilas dengan air bersih – dalam
Pucuk atau biji terlebih dahulu disikat
laminar disterilisasi dengan HgCl 2
dengan tambahan sabun cair. Bilas dengan
0.1 % selama 1 menit dengan digojok
air mengalir. Di dalam laminar, eksplant
– bilas dengan air steril 2 kali – alkohol
disterilisasi dengan ; HgCl2 0.1 % selama
70 % selama 1 menit – bilas dengan air
1 menit – bilas dengan air steril 1 kali –
steril 3 kali – kemudian tiriskan diatas
alkohol 70 % selama 1 menit – bilas
tissue steril dalam petridish dan tanam.
dengan air steril 3 kali, kemudian tanam.

PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI 22

  Metode sterilisasi untuk phillo
berbatang putih atau kuning :
Pucuk atau batang terlebih dahulu di-
sikat dengan sabun cair. Bilas dengan
air mengalir. Langkah selanjutnya dengan
memakai alkohol 70 % selama 1 menit
– bilas dengan air steril 1 kali – bayclin
5 % selama 15 menit – bilas dengan air
steril 1 kali – bayclin 10 % selama 10
menit – bilas dengan air steril 3 kali –
kemudian tiriskan diatas tissue steril
dalam petridish dan tanam.
C. Spatiphillum
1. Eksplant :
Tunas pucuk atau batang muda
2. Media :
Media dasar : Murashige & Skoog
ZPT : BAP 2 mg/l
Cahaya : 12 jam penyinaran.
Suhu : 26 ± 2 C
o o
3. Sterilisasi :
Pucuk atau batang terlebih dahulu
disikat dengan sabun cair. Bilas dengan
air mengalir. Di dalam laminar di-
sterilisasi dengan memakai alkohol
70 % selama 1 menit – bilas dengan air
steril 1 kali – bayclin 10 % selama 15
menit – bilas dengan air steril 1 kali –
bayclin 15 % selama 10 menit – bilas
dengan air steril 3 kali – kemudian tiris-
kan diatas tissue steril dalam petridish
dan tanam.
D. Aglaonema
1. Eksplant :
Tunas pucuk atau batang muda
2. Media :
PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI
Media dasar : Murashige & Skoog
ZPT : TDZ 0.1 mg/l, BAP 2
mg/l dan IAA 1 mg/l
Cahaya : 12 jam penyinaran.
Suhu : 26o ± 2o C
3. Sterilisasi :
Pucuk atau batang terlebih dahulu
disikat dengan sabun cair. Bilas dengan
air mengalir. Di dalam laminar disterili-
sasi dengan bayclin 10 % selama 15
menit – bilas dengan air steril 1 kali –
sterilisasi dengan alkohol 70 % selama
1 menit – bilas dengan air steril 3 kali
– kemudian tiriskan diatas tissue steril
dalam petridish dan tanam.
E. Anggrek
1. Eksplant :
Keiki (tunas samping) dan biji.
2. Media :
Media dasar : Vacint & Went (VW)
atau ½ MS
ZPT : BAP 0.1 - 0.5 mg/l
Cahaya : 10 - 12 jam
penyinaran.
Suhu : 26o ± 2o C
3. Sterilisasi :3
Pucuk terlebih dahulu disikat dengan
sabun cair. Bilas dengan air mengalir. Di
dalam laminar disterilisasi dengan
memakai alkohol 70 % selama 1 menit
– bilas dengan air steril 1 kali – bayclin
10 % selama 10 menit – bilas dengan
air steril 1 kali – bayclin 15 % selama
10 menit – bilas dengan air steril 3
kali – kemudian tiriskan diatas tissue
steril dalam petridish dan tanam.
23
 Dengan biji : biji terlebih dahulu disikat
dengan sabun cair, kemudian bilas dengan
air bersih. Di dalam laminar, biji di-
celupkan ke dalam spiritus dan di-
bakar. Setelah itu belah biji dengan
pisau scapel dan ambil biji-bijinya
dengan spatula dan masukkan langsung
ke dalam botol kultur.
B. Pepaya
Tanaman Buah
A. Pisang
1. Eksplant :
Tunas pucuk atau tunas muda pada
bonggol
2. Media :
Media dasar : Murashige & Skoog
ZPT : IAA 0.5 mg/l + BAP 4.5
mg/l, atau bisa pakai
Kinetin 2 mg/l + BAP 4
mg/l
Cahaya : 12 jam penyinaran.
Suhu : 26o ± 2o C
3. Sterilisasi :
Pucuk/tunas dikelupas dari kulitnya
sampai ukuran 2 cm. Sikat dengan sabun
cair sampai bersih, kemudian bilas
dibawah air yang mengalir selama 15 -
30 menit. Di dalam laminar, eksplant
direndam dalam bayclin 30 % selama
15 menit – bilas dengan air steril 2 kali
– kupas 1 lapisan kulitnya – rendam
lagi dengan bayclin 20 % selama 10
menit – bilas dengan air steril 2 kali –
kupas 1 lapisan kulitnya – bilas dengan
air steril 3 kali – kemudian tiriskan diatas
tissue steril dalam petridish dan tanam
dalam media steril.
PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI
Bisa juga sterilisasi dengan HgCl2 0,1
% selama 1 menit – bilas dengan air
steril 1 kali – kupas 1 lapisan kulitnya
– rendam lai dalam HgCl2 0,1 %
selama 1 menit – kupas 1 lapisan kulit-
nya – bilas dengan air steril 3 kali –
tiriskan ke dalam petridish – siap
ditanam di dalam media.
1. Eksplant :
Tunas pucuk berukuran 0.5 - 1 cm
2. Media :
Media dasar : Murashige & Skoog
ZPT : NAA 2 mg/l dan kinetin
10 mg/l atau NAA 0.1
mg/l dan BAP 0.5 mg/l
Tambahan : Thiamine 0.4 mg/l,
Pyridoxine 0.1 mg/l,
Nicotinic 0.4 mg/l
Cahaya : 12 jam penyinaran.
Suhu : 26o ± 2o C
3. Sterilisasi :
Pucuk terlebih dahulu disikat dengan
sabun cair. Bilas dengan air mengalir. Di
dalam laminar disterilisasi dengan
alkohol 70 % selama 1 menit - bilas
dengan air steril 1 kali – bayclin 10 %
selama 15 menit – bilas dengan air steril
2 kali – rendam lagi dengan bayclin 15 %
selama 10 menit – bilas dengan air steril
3 - 5 kali –tiriskan di atas tissue steril
dalam petridish dan tanam dalam media
steril.
***
24
 BAB VIII
AKLIMATISASI
Tanaman kultur atau plantlet yang
telah mengalami pertumbuhan maksimal dan
siap untuk dipindah tanam ke media tanah,
harus mengalami masa aklimatisasi. Yaitu
masa penyesuaian diri dengan lingkungan
baru. Masa aklimatisasi merupakan masa
yang sangat kritis, karena plantlet in vitro
menunjukkan sifat yang tidak menguntung-
kan seperti :
1. Lapisan lilin/cuticula tidak berkembang
dengan baik.
2. Lignifikasi batang kurang.
3. Sel-sel palisade daun kurang.
4. Jaringan pembuluh dari akar ke pucuk
kurang berkembang.
5. Stomata seringkali tidak berfungsi (tidak
menutup pada penguapan tinggi).
Keadaan seperti ini menyebabkan
pucuk in vitro sangat peka terhadap :
1. Evapotranspirasi.
2. Serangan cendawan dan bakteri tanah.
3. Cahaya dengan intensitas tinggi.
Oleh karena itu, kegiatan aklimatisasi
pucuk-pucuk in vitro memerlukan penanganan
khusus. Berikut prosedur aklimatisasinya :
A. Bahan dan alat :
1. Pucuk in vitro dengan daun berwarna
hijau tua, batang gelap dan tidak me-
nunjukkan gejala nekrosis (batang dan
daun warna hijau muda dan transparan).
2. Pinset.
3. Baki dengan ukuran tinggi ± 15 cm dan
panjang ± 35 cm.
4. Plastik lembaran yang telah dipotong
dengan ukuran 30 cm x 50 cm.
PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI
5. Karet ban motor/mobil yang telah dipotong
kecil.
6. Media tanam, yang terdiri dari; kompos
steril 1 bagian : tanah steril 1 bagian :
Pasir steril 1 bagian.
B. Pelaksanaan :
1. Siapkan campuran media dalam baki.
Isinya kurang lebih 1/3 bagian. Usahakan
media tidak terlalu kering dan juga tidak
basah.
2. Keluarkan tanaman dari dalam botol
dengan menggunakan pinset.
3. Bersihkan tanaman dari sisa agar-agar
(agar-agar yang tertinggal akan menjadi
sumber jamur dan bakteri).
4. Rendam tanaman dalam larutan Dithane
2 g/l selama 10 menit.
5. Kering anginkan.
6. Tanam dalam media tanam dengan meng-
gunakan pinset.
7. Tutup dengan plastik kemudian diikat
dengan karet.
8. Biarkan tanaman ± 1 minggu (jangan
dibuka). Setelah itu dicek, kalau kurang
air dapat disiram.
9. Bila setelah 2 minggu tanaman sudah
berakar atau beradaptasi dengan baik
yang ditandai dengan pertumbuhan
daun baru, tutup plastik dapat dibuka
sedikit demi sedikit, lakukan beberapa
jam pada pagi hari saja, setelah itu
tutup kembali.
10. Apabila tanaman sudah tahan dengan
kondisi luar, tutup plastik dapat dilepas.
Bila ada yang layu, sungkup kembali
dengan plastik.
C. Cara membuat media tanam steril :
1. Campurkan bahan-bahan yang akan di-
sterilisasi. Haluskan dengan meremas-
remas dengan tangan.
25
 2. Masukkan ke dalam kantong plastik yang
tahan panas.
3. Masukkan ke dalam autoklaf, masak se-
lama 1 jam pada suhu 121 - 126o C.
4. Apabila tidak diautoklaf, maka dapat
menggunakan panci/dandang dengan
masa pemasakan selama 3 jam.
D. Catatan :
1. Berdasarkan pengalaman; media aklima-
tisasi dapat memakai media yang tidak
steril. Yaitu media campuran tanah liat
halus, pasir dan kompos yang sudah
difermentasi serta kapur dolomit sedikit
untuk meningkatkan pH media.
2. Pucuk in vitro yang sudah dikeluarkan dan
dicuci bersih, kemudian dicelupkan dalam
hormon akar yang sudah dicampur
bakterisida dan fungisida.
3. Tanam pada baki dan disungkup dengan
plastik.

PANDUAN PELATIHAN KULTUR JARINGAN PT. INTIDAYA AGRO LESTARI 26