II. Materi : Teknik penanaman atau isolasi bakteri
III. Tujuan : Untuk mengetahui dan memahami cara menginokulasi mikroorganisme.
IV. Daar Te!ri
Penanaman bakteri atau biasa disebut juga inokulasi adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi. Untuk melakukan penanaman bakteri (inokulasi) terlebih dahulu diusakan agar semua alat yang ada dalam hubungannya dengan medium agar tetap steril, hal ini agarmenghindari terjadinya kontaminasi (Dwijoseputro, 1!). "da beberapa tahap yang harus dilakukan sebelum melakukan teknik penanaman bakteri (inokulasi) yaitu # 1.Menyiapkan ruangan $uang tempat penanaman bakteri harus bersih dan keadannya harus steril agar tidak terjadi kesalahan dalam pengamatan atau percobaaan .dalam labotarium pembuataanserum %aksin dan sebagainya. 2.Pemindahan dengan dengan pipet &ara ini dilakukan dalam penyelidikan air minum atau pada penyelidikan untuk diambil1 ml contoh yang akan diencerkan oleh air sebanyak ml murni (Pelc'ar, 1!). 3.Pemindahan dengan kawat inokulasi kawat inokulasi sebaliknya dari platina atau nikel .ujungnya boleh lurus jugaboleh berupa kolongan yang diametrnya 1*mm. Dalam melakukuan penanaman bakterikawat ini terlebih dahulu dipijarkan sedangkan sisanya tungkai cukup dilewatkan nyalaapi saja setelah dingin kembali kawat itu disentuhkan lagi dalam nyala (Pelc'ar, 1!). Teknik +nokulasi "da beberapa metode yang digunakan untuk mengisolasi biakan murni mikroorganisme yaitu # -etode gores Penggoresan yang sempurna akan menghasilkan koloni yang terpisah. +nokulum digoreskan di permukaan media agar nutrien dalam cawaan petri dengan jarum pindah (lup inokulasi). Di antara garisgaris goresan akan terdapat selsel yang cukup terpisah sehingga dapat tumbuh menjadi koloni. &ara penggarisan dilakukan pada medium pembiakan padat bentuk lempeng. ila dilakukan dengan baik teknik inilah yang paling praktis. Dalam pengerjaannya terkadang berbeda pada masingmasing laboratorium tapi tujuannya sama yaiitu untuk membuat goresan sebanyak mungkin pada lempeng medium pembiakan. "da beberapa teknik dalam metode goresan, yakni # /oresan T /oresan $adian /oresan sinambung -etode tusuk -etode tusuk yaitu dengan dengan cara meneteskan atau menusukan ujung jarum ose yang didalamnya terdapat inokolum, kemudian dimasukkan ke dalam media (0inarni, 1).
Teknik +solasi Dan Pemurnian
Teknik isolasi mikroba untuk memisahkan dan mengidenti2ikasi, jenis mikroba dari biakan dapat diklasi2ikasikan berdasarkan si2at pertumbuhan yang nampak pada media. -etode penanaman pada agar Pada metode penanaman pada agar, jika sedikit saja sel diletakkan dalam medium agar, maka tiap sel akan tumbuh menjadi koloni yang terpisah. 3ika suspensi sel cukup diencerkan, koloni akan terpisah dengan baik, sehingga masingmasing memiliki kemungkinan tinggi untuk diturunkan menjadi sel tunggal. 4amun untuk membuat yang demikian, penting untuk mengambil satu tipe koloni yang diinginkan, memasukkan ke dalam air dan menanamnya kembali ke agar. Dengan mengulangi prosedur ini beberapa kali menjamin untuk memperoleh biakan murni. -etode Pengenceran -etode yang sedikit dapat dipercaya adalah pengenceran. 5uspensi diencerkan seri dan contoh masingmasing pengenceran ditanam pada agar. 3ika hanya sedikit contoh dari pengenceran tertentu menunjukkan pertumbuhan, diperkirakan bahwa beberapa dari biakan tadi dimulai dari sel tunggal. -etode ini tidak digunakan kecuali jika penanaman pada agar tidak dimungkinkan karena beberapa alasan. /ambaran yang tidak diinginkan dari metode ini adalah bahwa metode ini hanya dapat digunakan untuk isolasi tipe organisme yang dominan dalam populasi campuran.
Terdapat berbagai cara mengisolasi mikroba, yaitu#
1.Isolasi Pada Agar Cawan Prinsip pada metode isolasi pada agar cawan adalah mengencerkan mikroorganisme sehingga diperoleh indi%idu spesies yang dapat dipisahkan dari organisme lainnya. setiap koloni yang terpisah yang tampak pada cawan tersebut setelah diinkubasi berasaldaris atu sel tunggal. Terdapat beberapa cara dalam metode isolasi pada agar cawan,yaitu# metode gores kuadran dan metode agar cawan tuang. ila metode gores kuadran dilakukan dengan baik akan menghasilkan terisolasinya mikroorganisme, dimana setiap koloni berasaldari satu sel. 2.Isolasi Pada Medium Cair -etode isolasi pada medium cair dilakukan bila mikroorganisme tidak dapat tumbuh pada agar cawan (medium padat), tetapi hanya dapat tumbuh pada kultur cair. -etode ini juga perlu dilakukan pengenceran dengan beberapa serial T.5.+." Panaskan ose tusuk agar steril Panaskan mulut tabung reaksi dengan melewatkan sekilas melalui api "mbil bakteri dari agar menggunakan ose tusuk letakkan pada tabung lalu di geser dalam bentuk 'ig 'ag Tusukkan ;* > sampai dasar Tutup kembali tabung reaksidengan kapas Panaskan kembali ose tusuk agar steril 5.+.- Panaskan ose tusuk agar steril Panaskan mulut tabung reaksi dengan melewatkan sekilas melalui api "mbil bakteri dari agar menggunakan ose tusuk Tusukka ose tersebut sampai dasar Tutup kembali tabung reaksidengan kapas Panaskan ose tusuk setelah digunakan 5.& Panaskan ose tumpul agar teril Panaskan mulut tabung reaksi dengan melewatkan sekilas melalui api "mbil bakteri dari agar menggunakan ose tumpul /oreskan di media dalam bentuk 'ig'ag Tutup kembali tabung reaksidengan kapas Panaskan kembali ose tumpul setelah digunakan b) -edia &air /: VII.Pe%&a#aan