Apa yang terjadi dengan vaksin DNA pada ikan?

Tinjauan tentang pengetahuan saat ini

ABSTRAK
Fungsi utama dari vaksin DNA, DNA plasmid bakteri yang mengandung konstruksi
untuk antigen pelindung tertentu, adalah untuk membangun kekebalan pelindung
yang spesifik dan tahan lama terhadap penyakit dimana vaksin konvensional gagal
untuk menginduksi perlindungan. Diakui bahwa sedikit usaha telah dilakukan untuk
mempelajari nasib, dalam hal serapan seluler, persistensi dan degradasi, dari vaksin
DNA setelah pemberian in vivo. Namun, selama tahun lalu beberapa makalah telah
memberikan wawasan baru tentang nasib vaksin DNA pada ikan. Dengan
membandingkan informasi yang baru diperoleh pada ikan dengan pengetahuan
serupa dari penelitian pada mamalia, kesamaan dalam hal transportasi,
pembersihan darah, penyerapan seluler dan degradasi vaksin DNA telah ditemukan.
Tetapi jumlah vaksin DNA yang didistribusikan kembali dari situs administrasi
setelah pemberian intramuskular tampaknya berbeda antara ikan dan mamalia.
Ulasan ini menyajikan pengetahuan terkini dan mendalam tentang nasib vaksin DNA
dengan penekanan pada distribusi jaringan, serapan seluler dan mekanisme
serapan sebelum akhirnya menjelaskan rintangan intraseluler yang perlu diatasi oleh
vaksin DNA untuk menghasilkannya. produk gen. ª 2008 Elsevier Ltd. Semua hak
dilindungi undang-undang.

PENDAHULUAN

Vaksin DNA

DNA plasmid (pDNA) sering digunakan sebagai kendaraan untuk pengiriman

gen pada mamalia dan ikan. PDNA adalah molekul melingkar yang terdiri dari asam
deoksiribonukleat untai ganda (DNA, tidak berbeda dari \ DNA kromosom), biasanya
mampu direplikasi secara mandiri dalam prokariota. DNA plasmid yang digunakan
dalam studi pengiriman gen biasanya berisi urutan promotor dan penambah, gen
yang diinginkan, urutan poli-adenilasi, urutan penghentian transkripsi, gen resistensi
antibiotik, dan asal replikasi. Untuk mengekspresikan gen yang diinginkan, pDNA
ditranskripsi dan mRNA diterjemahkan menjadi protein oleh peralatan sel itu sendiri.
Ini membuka penerapan pDNA di dua bidang penting: terapi gen dan vaksinasi DNA.
 Definisi terapi gen dan vaksin DNA tidak konsisten dalam literatur. Seringkali,
terapi gen juga mencakup penggunaan vaksin DNA. Dewan Penasihat Bioteknologi
Norwegia (www.bion.no) mendefinisikan terapi gen pada hewan sebagai transfer
materi genetik yang disengaja ke sel somatik untuk tujuan selain mempengaruhi
sistem kekebalan [1]. Terapi gen sering ditujukan untuk mencapai ekspresi gen yang
cocok secara fisiologis, tanpa mengaktifkan sistem kekebalan. Sebaliknya, vaksinasi
DNA didefinisikan sebagai transfer materi genetik yang disengaja ke sel somatik
untuk tujuan mempengaruhi sistem kekebalan [1]. Untuk vaksinasi DNA, ekspresi
jangka pendek sudah cukup untuk membangkitkan respons imun.

Mekanisme kerja vaksin DNA

Respon imun setelah vaksinasi DNA terutama diluncurkan oleh antigen

presenting cells (APC), mis. sel dendritik (DC) [2]. APC profesional seperti makrofag
dan DC telah terbukti mengandung pDNA setelah i.m. administrasi [3,4].
Selanjutnya, APC di tempat pemberian dapat menjadi primadona sel imun seperti
limfosit T naif setelah presentasi antigen [5]. APC yang mengandung pDNA
pengkodean sitosol dapat mentranskripsikan dan menerjemahkan transgen dan
dengan demikian menghasilkan protein imunogenik, meniru infeksi patogen
intraseluler (sitosol) dan memungkinkan presentasi peptida antigen asing oleh major
histocompatibility complex (MHC) kelas I pada permukaan APC . Sel penyaji antigen
juga dapat mengambil antigen terlarut yang dilepaskan dari sel penghasil transgen
lain (misalnya miosit), memprosesnya dan menyajikan peptida pada molekul MHC
kelas II di permukaan sel. Reseptor sel T (TCR) dapat mengenali peptida yang
disajikan pada MHC kelas I dan MHC kelas II, yang masing-masing merangsang sel
T CD 8þ (sel T sitotoksik) dan sel T CD4þ (sel T pembantu). . Selain itu, APC juga
dapat mengambil tubuh apoptosis antigen-sarat dari miosit yang ditransfeksi (atau
sel lain) dan menyajikan peptida yang relevan pada MHC (Gbr. 1).

Dalam keadaan tertentu, peptida yang diturunkan secara eksogen dapat

disajikan pada MHC I dan II. Cross-priming ini berasal dari pengamatan bahwa PC
profesional dapat menampilkan antigen atau peptida dari jalur eksogen klasik
melalui jalur presentasi antigen kelas I MHC [6]. Berbeda dengan pengenalan
terbatas TCR dari MHC kelas I / II, limfosit B, prekursor dari sel-sel yang mensekresi
antibodi, dapat secara langsung mengenali antigen asli melalui reseptor sel-B
mereka [5,6].

Salah satu fitur unik dari vaksin DNA adalah kemampuannya untuk
menstimulasi respon imun seluler (termasuk sitotoksisitas) dan humoral [2,7e9] (Gbr.
1). Respon imun seluler diwakili, untuk sederhananya, oleh sel Th1 yang diaktifkan
yang dapat mengeluarkan sitokin proinflamasi, dan sel T CD8þ yang dapat
membunuh sel yang menyajikan transgen. Respon imun humoral adaptif,
bagaimanapun, diwakili oleh aktivasi limfosit B dan produksi antibodi.

Beberapa temuan menunjukkan bahwa sistem kekebalan ikan menyerupai

sistem kekebalan mamalia; homologi ditemukan antara mamalia dan ikan MHC
kelas I (ditinjau dalam [10]), TCR [11e22] dan koreseptor TCR CD8 [23]
menunjukkan kesamaan dalam proses presentasi antigen. Limfosit yang terdeteksi
pada ikan setara dengan sel T dan B mamalia [24e28]. Namun, sel B teleost
(bertulang ikan) memiliki aktivitas fagositik, tidak seperti limfosit B mamalia [29].
Pada ikan, subset sel T yang berbeda tidak dikarakterisasi dengan baik, tetapi
homolog CD8 [23,30e32] dan CD4 [33e35] dilaporkan. Gen MHC kelas IIb [36e38]
dan gen kelas I MHC [39] ditemukan, dan gen yang terlibat dalam jalur pemuatan
kelas I [40] dan kelas II [41] dijelaskan pada ikan. Hanya tiga kelas imunoglobulin;
IgM [42e46], IgD [47e54] dan IgZ / IgT [55,56] dilaporkan pada ikan, tetapi tidak ada
indikasi bahwa repertoar imunoglobulin ini secara fungsional terhambat dengan cara
apapun selain tidak adanya, misalnya, IgG, IgA dan IgE. pada ikan respon imun
lebih sulit untuk diselidiki pada ikan dibandingkan dengan mamalia, karena
kurangnya alat (misalnya garis sel, urutan gen, penanda dan antibodi). Namun,
publikasi terbaru menunjukkan bahwa baik respon imun bawaan dan adaptif yang
dimediasi sel yang melibatkan sel natural killer (NK) dan limfosit T sitotoksik (CTL),
masing-masing, dipicu setelah infeksi virus hemorrhagic septicemia virus (VHSV) [9].
Pada ikan rainbow trout, peningkatan regulasi ekspresi kelas II MHC ditemukan di
tempat pemberian pDNA [57], dan ekspresi gen ini menunjukkan rekrutmen sel
imunokompeten yang teraktivasi (misalnya sel B dan makrofag) [58]. Situs CpG
adalah daerah DNA di mana nukleotida sitosin terjadi di sebelah nukleotida guanin
dan dihubungkan oleh ikatan fosfodiester. Urutan CpG ini (motif CpG) biasanya
sangat termetilasi pada mamalia, tetapi DNA bakteri dan virus memiliki frekuensi
metilasi yang lebih rendah. Dengan demikian, sekuens CpG sering tidak termetilasi
dalam pDNA karena asal bakterinya. Sistem kekebalan vertebrata mengenali motif
CpG yang tidak termetilasi sebagai sinyal 'asing' dan 'bahaya'. Sel dan hewan yang
diobati dengan oligodeoksinukleotida CpG sintetis (ODN) dan pDNA dapat
menghasilkan sitokin yang dapat menginduksi aktivasi makrofag, proliferasi sel B
dan sekresi imunoglobulin [59,60]. DNA CpG juga dapat secara langsung
mengaktifkan monosit, makrofag, dan sel dendritik untuk mengeluarkan sitokin mirip
Th1 [60e62] untuk menginduksi respon imun seluler, yang merupakan respon yang
diinginkan untuk memerangi patogen intraseluler. Aktivasi leukosit oleh CpG DNA
tidak dimediasi melalui reseptor permukaan sel tetapi tergantung pada serapan DNA
[59] ke dalam kompartemen lisosom yang menyimpan reseptor spesifik, yang
disebut reseptor mirip Toll 9 (TLR9), untuk pengenalan [63,64]. TLR9 diekspresikan
dalam sel dendritik [63], makrofag [63], sel B [65] dan sel endotel hati [66]. TLRs
berfungsi sebagai reseptor pengenalan pola bawaan (PRRs) dan menginduksi
kaskade pensinyalan intraseluler tertentu yang menghasilkan aktivasi dan transkripsi
gen pro inflamasi [67e69]. Ligan untuk TLR9 adalah pDNA yang mengandung CpG
dan ODN CpG. Respon imun yang diinduksi CpG tampaknya terjadi tanpa efek
samping yang jelas [70]. Dengan demikian, mungkin bermanfaat bagi vektor plasmid
untuk juga menyertakan motif CpG untuk meningkatkan dan mengarahkan respons
imun. Tidak semua motif CpG memiliki aktivitas stimulasi imun yang sama, dan
efeknya bergantung pada urutan ODN, panjang, konsentrasi dan spesies penerima
[71]. Karena TLR9 telah diusulkan untuk berikatan dengan CpG ODN, terdapat
indikasi bahwa CpG juga mengandung pDNA yang berikatan dengan TLR9 [72,73].
Namun, tidak jelas apakah urutan CpG imunostimulan di tulang punggung pDNA
berperilaku serupa dengan yang diprediksi dari penelitian CpG ODN sintetis [74].