Nama : Alysa Luthfiani

Nim : 18035052

Tugas : Kimia Analitik 2 (menerjemahkan)

BAB 2

Dasar Teoritis Lapisan Tipis Kromatografi (KLT)

2.1 Kromatografi Planar dan Kolom

Dalam kromatografi kolom jumlah sampel yang ditentukan disuntikkan ke dalam

aliranfase gerak. Campuran sampel dan fase seluler kemudian dimigrasikan melalui kolom.
Jika kondisi pemisahan diatur sedemikian rupa sehingga tingkat migrasi komponen sampel
berbeda maka diperoleh pemisahan. Seringkali menjadi target senyawa (analit) harus
dipisahkan dari semua senyawa lain yang ada di sampel, dalam hal ini hanya cukup untuk
memilih kondisi di mana analit tingkat migrasi berbeda dari semua senyawa lainnya. Dalam
sistem yang dipilih dengan benar, semua senyawa akan meninggalkan kolom satu demi satu
dan kemudian bergerak melalui detektor. Sinyal mereka, oleh karena itu, terdaftar secara
berurutan sebagai sebuah kromatogram. Metode kromatografi kolom selalu bekerja secara
berurutan. Ketika sampel disuntikkan, pemisahan kromatografi terjadi dan diukur. Jenis
kromatografi ini dikenal sebagai “Kromatografi Online”.

Metode kromatografi kolom yang berbeda dapat dibedakan dengan metode mereka
sistem fase. Kromatografi gas menggunakan gas inert seperti nitrogen atau helium sebagai
fase seluler. Dalam kromatografi cair, fase gerak adalah cairan dengan a komposisi konstan
atau bervariasi diubah selama proses pemisahan. Pemisahan menggunakan komposisi fase
gerak konstan dikenal sebagai pemisahan isokratik. Jika komposisi fase gerak bervariasi
selama pemisahan ini disebut a pemisahan gradien. Pompa digunakan untuk memindahkan
fase gerak melalui kolom pada kecepatan yang sesuai. Pemisahan dioptimalkan dengan
terlebih dahulu memilih kolom yang sesuai dan kemudian memvariasikan komposisi fase
seluler untuk mencapai resolusi yang diinginkan dalam waktu yang dapat diterima.

Untuk pemisahan planar seperti TLC, sampel yang berbeda biasanya diterapkan pada
fase diam sebelum dihubungi oleh fase gerak yang mulai bermigrasi melewatinya ke arah
yang pasti. Pergerakan fase seluler melalui fase diam disebut sebagai langkah pengembangan.
Setelah pengembangan fase gerak dihilangkan dengan penguapan dan deteksi dilakukan
dalam fase diam. Catatan respon detektor diplot terhadap pemisahan jarak disebut
densitogram.

Pemisahan dengan kromatografi planar terjadi secara paralel kontras dengan

pendekatan berurutan dari kromatografi kolom. Situasi ini memiliki kelebihan dan
kerugiannya: proses berurutan seperti memfasilitasi kromatografi kolom otomatisasi di mana
protokol tetap umumnya digunakan untuk sejumlah sampel. Pemisahan kromatografi planar
lebih fleksibel tetapi tidak mudah diotomatisasi, dan urutan langkah-langkah manual yang
biasa digunakan membuat validasi metode lebih sulit dan telah menyebabkan, misalnya, pada
kenyataan bahwa industri farmasi hampir tidak pernah menggunakan kromatografi planar
untuk memeriksa produk obat (Gbr. 2.1).

Perbedaan penting lainnya antara kromatografi planar dan kromatografi kolom

terletak pada penggunaan fase diam yang lebih fleksibel. Fase diam baru diperlukan untuk
setiap pemisahan dalam kromatografi planar, sehingga mencegah kontaminasi silang dari satu
sampel ke yang lain. Sehingga sampel bahkan sangat terkontaminasi dapat diterapkan pada
fase diam tanpa pembersihan sampel. Komponen sampel biasanya tidak diabaikan selama
deteksi karena seluruh pemisahan dapat terjadi dipindai. Kromatografi kolom hanya
mengukur zat-zat yang meninggalkan kolom. Yang tersisa di kolom mungkin mudah
dilupakan. Itu juga sulit untuk mengamati dekomposisi pada kolom selama proses pemisahan.

Perbedaan yang signifikan antara kedua metode pemisahan terletak pada metode
tersebut deteksi. Dalam kromatografi kolom, sampel ditentukan dalam ponsel fase dan ini
membatasi jumlah cairan yang bisa digunakan. Kromatografi cair adalah didominasi oleh
pemisahan fase terbalik di mana 90% atau lebih dari pemisahan menggunakan fase gerak
yang terdiri dari asetonitril atau metanol dalam air atau air penyangga. Dalam TLC, fase
seluler dihapus sebelum deteksi, sehingga tidak dapat mengganggu dengan pengukuran. Di
sisi lain, deteksi sekarang dilakukan di Internet fase diam, yang merupakan media buram,
yang mengarah ke kompromi sendiri dengan cara di mana pendeteksian difasilitasi atau
dihalangi.

Pada prinsipnya, proses kromatografi kolom dan planar berbeda metode pemisahan,
masing-masing dengan kekuatan dan kelemahannya sendiri. Banyak orang lihat tidak adanya
persaingan antara TLC dan HPLC, tetapi kedua metode ini dapat diterapkansebagaimana
tepat karena mereka saling melengkapi.

2.2 Aliran Kapiler TLC

Perbedaan signifikan antara HPLC dan TLC terletak pada cara ponsel fase menembus
fase diam. Dalam HPLC, gradien tekanan dikenakan kolom bertanggung jawab untuk aliran
fase gerak, tetapi dalam TLC klasik fase gerak bergerak melalui lapisan oleh kekuatan
kapiler. Dalam buku teks TLC banyak variasi dari pendekatan TLC klasik dijelaskan [1-11].
Ini termasuk a seluruh rangkaian proses di mana aliran dipaksa melalui lapisan dan disebut
untuk secara kolektif sebagai metode aliran paksa. Jika aliran fase gerak dipertahankan
melalui lapisan dengan menempatkan medan listrik melintasi lapisan metode tersebut disebut
menjadi kromatografi elektro-planar (EPC). Dapat dianalogikan dengan HPLC disegel pada
permukaan yang biasanya terbuka dan tekanan yang digunakan untuk menggerakkan fase
gerak melalui lapisan oleh serangkaian metode secara kolektif disebut sebagai overpressure
kromatografi lapis atau kromatografi laminar kinerja optimal (OPLC). Ada juga metode
tambahan seperti kromatografi planar rotasi (RPC), di mana aliran fase gerak diinduksi oleh
gaya sentrifugal. Semua metode yang disebutkan di atas tidak akan dibahas lebih lanjut di
sini, karena kami akan berkonsentrasi pada metode TLC klasik, di mana kekuatan kapiler
mengontrol aliran fase gerak.

Dalam TLC, fase diam berpori dapat dimodelkan sebagai bundel yang sangat kapiler
halus, di mana kohesi fase gerak secara khusus lebih unggul daripada adhesi dinding kapiler.
Ketegangan permukaan fase gerak dengan demikian terasa berkurang, menciptakan
perbedaan tekanan yang mendorong cairan melalui kapiler. Jenis aliran fase gerak dalam
TLC dikenal sebagai TLC kapiler, untuk membedakannya dari TLC aliran paksa. Aliran fase
gerak ke atas terhenti di ruang vertikal ketika tekanan balik statis yang disebabkan oleh fluida
naik sama dengan permukaan kekuatan ketegangan. Selama pengembangan di ruang
horisontal, hanya itu meningkatkan kekuatan gesekan yang membuat aliran kapiler berhenti
setelah beberapa saat. Dalam kasus pelat TLC dicelupkan, posisi depan pelarut bergerak
cepat pada awalnya dan kemudian secara bertahap melambat. Total jarak (Zf) yang bergerak
depan adalah a fungsi akar kuadrat dari waktu: Zf ¼

wt p: (2.1)

Faktor proporsionalitas w dikenal sebagai konstanta aliran. Hubungan ini

mengungkapkan fakta bahwa aliran kapiler tidak konstan. Hubungan ini bukan valid ketika
fase gerak menguap dari permukaan lapisan atau mengembun dari fase uap. Dalam
mengembangkan kamar dengan volume gas yang besar, ini selalu terjadi. Adsorpsi dan
desorpsi komponen fase gerak oleh lapisan kemudian bervariasi dengan cara yang rumit.
Untuk mendapatkan migrasi fase seluler yang dapat direproduksi, penting untuk
menggunakan kamar-kamar yang sedang berkembang dengan ruang gas sesedikit mungkin.
Dalam ruang yang lebih besar, penguapan fase gerak dapat secara efektif ditekan dengan
menjenuhkan ruang gas dengan fase gerak sebelum mengembangkan Piring TLC.

Ungkapan berikut untuk konstanta aliran mempertimbangkan kedua gesekan internal

yang disebabkan oleh aliran kapiler dan tekanan balik statis dari fase gerak naik, tetapi bukan
pertukaran uap [6,11,12]: w ¼ 2k0d

Ko : konstanta permeabilitas k0 ¼ 6–8 103

dp : ukuran partikel rata-rata fase diam

  :viskositas fase gerak

γ : tegangan permukaan (permeabilitas)

cos ϑ cosinus dari sudut pembasahan ϑ

Semakin tinggi viskositas dan semakin rendah tegangan permukaan γ dari ponsel fase,
semakin lambat bagian depan akan bergerak (Gbr. 2.2). Viskositas dan tegangan permukaan
hasil bagi disebut sebagai faktor permeasi. Faktor permeasi memberikan a ukuran standar
kecepatan depan fase gerak. Semakin besar permeasi Faktornya, semakin cepat fase ponsel
akan mengalir melalui lapisan. Permeation faktor untuk di-isopropil eter adalah 9,1,
sedangkan untuk 1-propanol adalah 1,05. Di-isopropil ether bermigrasi tiga kali lebih cepat
γ
dari 1-propanol: (Zf)2 = (2k0dp cosϑ)t.
μ

Ada sedikit perbedaan dalam waktu yang dibutuhkan untuk pengembangan antara a
piring horisontal dan vertikal. Jika jarak pengembangan Zf diukur pada berbagai interval dan
diplot sebagai (Z2f) melawan waktu, hasilnya membentuk serangkaian garis lurus

(Gbr. 2.3).

Untuk fase gerak polaritas rendah, cosinus dari sudut kontak biasanya sekitar satu dan
karena itu dapat diabaikan dalam hubungan di atas. Ini tidak berlaku untuk lapisan yang
terikat secara kimiawi seperti RP-18 tempat kosinus sudut kontak dapat berada dikurangi
menjadi nol dalam kasus ekstrim. Ketika lapisan tidak lagi basah oleh, kekuatan kapiler tidak
memadai untuk aliran, tetapi ini dapat dibalik jika a surfaktan ditambahkan ke fase gerak
berair [6]. Persamaan (2.3) menunjukkan a laju aliran yang lebih rendah untuk lapisan yang
dibuat dari partikel yang lebih kecil. Bagian depan bergerak lebih pendek jarak per unit
waktu. Pengembangan pada pelat HPTLC dengan partikel rata-rata ukuran dp <10 mm lebih
lama dari pelat TLC dengan diameter partikel rata-rata sekitar 40 μm.

2.3 Ekuilibrium Distribusi TLC

Setelah sampel diterapkan ke pelat TLC, piring ditempatkan di kontak dengan fase
seluler dan pengembangannya dimulai. Selama pengembangan, zat diterapkan pada pelat
didistribusikan antara dua fase yang berbeda, stasioner dan fase seluler. Komponen sampel
berinteraksi dengan stasioner dan fase gerak sesuai dengan apakah mekanisme didominasi
oleh adsorpsi atau proses penyerapan. Dalam kasus pertama mekanisme ini disebut
kromatografi adsorpsi dan dalam kasus kedua kromatografi partisi.

2.3.1 Kromatografi Adsorpsi

Adsorpsi adalah sifat khas dari permukaan, terutama permukaan padat. Adsorpsi dalam
TLC terjadi pada permukaan partikel fase diam, yang berhubungan dengan fase ponsel.
Kekuatan yang terlibat dalam adsorpsi proses adalah kekuatan van der Waal, interaksi tipe
dipol, dan kompleksasi interaksi seperti ikatan hidrogen.

Untuk pemisahan kromatografi, proses adsorpsi harus dapat dibalik dan hanya
melibatkan interaksi fisik. Pada lapisan oksida anorganik semakin kutub kelompok senyawa
memiliki semakin kuat diserap. Struktur senyawa dan suhu sistem juga berperan dalam
adsorpsi. Faktor sterik mempengaruhi luasnya interaksi dengan situs aktif di permukaan
lapisan dan suhu yang lebih tinggi cenderung melemahkan interaksi kutub secara umum
karena gerakan yang lebih besar spesies yang teradsorpsi.
 Keseimbangan interaksi adsorpsi pada suhu konstan hanya bergantung pada konsentrasi
zat terlarut pada permukaan adsorben dan konsentrasinya dalam fase gerak. Rasio konsentrasi
kesetimbangan suatu zat dalam fase diam dan bergerak adalah koefisien distribusi K untuk
adsorpsi kromatografi, juga dikenal sebagai koefisien partisi ulang [6]:

g
CS[ ]
g
K=
g
Cm[ ]
cm

Ketika konsentrasi zat terlarut dalam fase sorbing secara logaritmik menuru dengan
konsentrasi dalam fase gerak, situasinya digambarkan sebagai isoterm menurut Feundlich.
Jika ada hubungan linier antara jumlah zat yang diserap dan konsentrasi dalam fase cair, dan
jika itu menunjukkan efek saturasi karena semua pusat adsorpsi tercakup, ini dijelaskan
sebagai isoterm Langmuir.

Kedua proses menghasilkan isoterm adsorpsi cekung. Tidak masalah seperti apa
hubungan itu, aspek yang penting adalah untuk bekerja di wilayah linier isoterm, yang akan
menghasilkan berbentuk Gaussian puncak. Zona asimetris akan menghasilkan konsentrasi
yang lebih tinggi, dalam kisaran hubungan melengkung. Fase diam adalah kelebihan beban di
sini, jadi fase bergerak tidak dapat mengikat lebih banyak zat terlarut meskipun konsentrasi
meningkat. Non-teradsorpsi zat terlarut akan bermigrasi melalui fase diam lebih cepat dari
yang diharapkan, sebuah fenomena dikenal sebagai "tailing" karena zat ini menelusuri garis
di belakangnya seperti ekor (Gbr. 2.4)

Di daerah cekung isoterm adsorpsi, lebih banyak zat diadsorpsi oleh fase diam daripada
di daerah linier isoterm. Ini case digambarkan sebagai "fronting". Dalam kromatografi
adsorpsi, fase diam umumnya terdiri dari silika gel, aluminium oksida, kieselguhr, atau
magnesium silikat.

Zat-zat ini semuanya polar dan dapat dengan mudah menyimpan air dalam kondisi yang
diaktifkan. Fase semacam itu dapat dikeringkan dengan pemanasan, sehingga melepaskan
dan mengaktifkan kembali yang aktif situs fase diam. Sebagai gantinya, air secara efektif
menonaktifkan alat tulis tahap. Dalam kromatografi adsorpsi, adsorpsi air dengan cepat
mengarah ke fase kelebihan beban, menjelaskan mengapa sejumlah kecil air dapat
menyebabkan signifikan perubahan perilaku retensi selama kromatografi adsorpsi.

2.3.2 Kromatografi Partisi

Pada pertengahan 1930-an, Martin mengembangkan alat untuk melawan arus ekstraksi,
untuk memisahkan zat dengan sifat serupa dengan mendistribusikannya antara dua pelarut tak
larut. Bekerja dengan Synge pada tahun 1940, ia memperhatikan hal itu pemisahan campuran
dapat dilakukan ketika hanya satu cairan diimobilisasi dan yang lain mengalir di atasnya.
Martin dan Synge gel silika jenuh dengan air dan memungkinkan kloroform mengalir melalui
fase diam ini. Di dalam cara, mereka mampu memisahkan zat yang sangat mirip satu sama
lain. Mirip dengan silika gel, selulosa, kieselguhr, dan aluminium oksida dapat menyerap air
dan dengan demikian bertindak sebagai fase diam dalam kromatografi partisi. Sampel
didistribusikanantara air dan fase gerak organik menurut distribusi Nernsthukum. Dari
pengamatan ini hanya langkah kecil ke kertas kromatografi, di manafase diam terdiri dari air
yang diimobilisasi oleh selulosa. Konsepkertas kromatografi diterbitkan oleh kedua peneliti
pada tahun 1943.Dalam kromatografi partisi, pemisahan tergantung pada kelarutan relatif
komponen sampel dalam dua pelarut tak bercampur dibawa ke kontak satu sama lain menurut
hukum distribusi Nernst:

Cs VmMs
K= =
Cm VsMm

Hukum Nernst menunjukkan bahwa hasil bagi antara konsentrasi masing-masing substansi
dalam fase gerak (cm) dan fase diam (cs) pada waktu tertentu suhu adalah konstanta, yang
disebut koefisien partisi. Yang disebutkan di atas ketergantungan massa dari koefisien partisi
adalah hasil dari konsentrasi definisi:

n m/M
c= =
V V

Karena suatu zat didistribusikan antara fase bergerak dan stasioner, maka jumlah zat n juga
bisa berarti massa m. Pada kenyataannya, koefisien partisi K tidak tergantung pada
konsentrasi total zat yang menghasilkan isoterm linier. Jenis distribusi ini disebut fungsi
Nernst. Namun, jika disosiasi atau asosiasi terjadi pada kedua fase, seperti transfer proton
asam / basa atau kompleks formasi yang menghasilkan penyimpangan cembung atau cekung
dari distribusi Nernst, kemudian zona tailing atau garis depan diamati dalam kromatografi
partisi planar. Jadi kisaran dari K ¼ 1 hingga K ¼ 10 ideal untuk kromatografi partisi.

Fitur dominan dalam kromatografi adsorpsi adalah fenomena permukaan, dan dalam
kromatografi partisi, peran yang menentukan dimainkan oleh distribusi. antara dua fase cair.
Oleh karena itu, dalam kromatografi adsorpsi, jenisnya, posisi, dan jumlah kelompok
fungsional zat terlarut mengontrol pemisahan, sementara polaritas keseluruhan zat terlarut
memainkan peran yang sama dalam kromatografi partisi. Namun, tidak ada perbedaan yang
sangat jelas antara kedua metode. Misalnya, fase gel silika berlapis cair dapat memiliki situs
adsorpsi kosong, yang dapat bertindak sebagai pusat adsorpsi. Dalam fase yang disebut
"ujung-capped", pusat-pusat aktif adsorpsi sebagian diblokir oleh reaksi kimia. Sebagai
contoh, fase selulosa bekerja dengan menggunakan air yang terikat permukaan sebagai fase
diam. Jika sebuah lapisan selulosa kering digunakan untuk pemisahan, selulosa utamanya
berfungsi sebagai fase adsorpsi dan dengan demikian mengeringkan fase gerak. Jadi asam
amino pada a lapisan selulosa kering dapat dipisahkan dengan baik di bagian pemisahan
pertama tetapi kemudian "Dioleskan" di yang kedua. Ini karena air diperlukan untuk
pembentukan fase diam tidak lagi tersedia dari fase gerak. Terikat secara kimiawi fase
aminopropil berperilaku seperti fase distribusi hidrofilik. Ponsel asam fase memprotonasi
gugus NH2, membentuk pusat kationik. Fase diam yang dimodifikasi ini kemudian bertindak
sebagai penukar ion permukaan-aktif.

Lapisan sianopropil yang berikatan secara kimia menunjukkan sifat yang sangat
ambivalen sehubungan dengan mekanisme retensi. Pemisahan dengan kromatografi adsorpsi
diamati dengan fase seluler polaritas rendah. Dengan fase gerak yang mengandung air
mekanisme retensi berubah menjadi kromatografi partisi fase terbalik. Karena untuk perilaku
ambivalen ini, lapisan cyanopropyl sangat sesuai untuk 2D pemisahan (Gbr. 2.5).

Apakah kromatografi partisi atau adsorpsi terlibat dalam pemisahan akhir? kurang
penting. Pertanyaan vitalnya adalah apakah pemisahan itu dapat dipercaya direproduksi.
Densitogram dengan puncak simetris memverifikasi bahwa pemisahan terjadi di wilayah
linear isoterm di mana reproduksibilitas yang dapat diterima dapat diharapkan.

Dengan demikian, nilai distribusi selalu dapat dihitung dalam kasus puncak simetris;
tidak relevan apakah ini dikaitkan dengan kromatografi partisi atau adsorpsi. Cara terbaik
untuk mendefinisikan nilai distribusi ini adalah melalui massa zat yang ditemukan di

fase diam (ms) dan fase gerak (mm): k ¼ nS nm ¼ mS mm

Ekspresi distribusi k disebut faktor retensi dan terhubung ke koefisien distribusi melalui
rasio fase untuk sistem.

2.4 Faktor Retardasi (Rf)

2.4.1 Faktor Empiris Rf

Faktor Rf digunakan untuk evaluasi kualitatif pemisahan TLC. Ini adalah hasil bagi dari jarak
zona zat dari asal sampel ke depan fase seluler (zf). Secara historis, Goppelsr € oder adalah
orang pertama yang menggunakan Rf ini nilai (terkait dengan ekspresi depan) untuk
mengkarakterisasi pemisahan planar:

Zs
Rf=
Zf −Zo

Menurut definisi, nilai Rf tidak boleh melebihi 1. Untuk menghindari titik desimal, Rf
nilai kadang-kadang dikalikan dengan 100 dan kemudian digambarkan sebagai nilai hRf.
Nilai faktor retardasi dalam sistem pemisahan yang diberikan pada suhu konstan sepenuhnya
tergantung pada sifat karakteristik dari zat yang dipisahkan. Ini penting untuk keperluan
identifikasi bahwa nilai Rf akurat dan dapat diproduksi kembali, tetapi ini sulit untuk dicapai,
karena hampir tidak mungkin untuk mengendalikan semua kondisi eksperimental yang
memengaruhi proses pemisahan (Gbr. 2.6). Masalah ini dihindari dengan mendefinisikan
faktor keterbelakangan untuk zat standar (Rst) yang telah dipisahkan dalam sistem:

2.4.2 The Termodinamika R0

Faktor Sementara hanya nilai Rf empiris yang dapat diberikan dari densitogram, Rf
termodinamika Nilai 0 (juga dikenal sebagai nilai Rf sebenarnya) dengan benar mewakili
perilaku zat dalam sistem pemisahan. Termodinamika Rf

0 Nilai didefinisikan sebagai fraksi waktu analit dilarutkan dalam ponsel fase (tm) dalam
kaitannya dengan total waktu pengembangan (tms):

Rf

0 ¼ tm

tm þ tS

Sini, Hubungan antara massa zat di ponsel dan stasioner fase tidak tergantung waktu. Dengan
asumsi distribusi konstan antara fase, distribusi massa untuk analit dijelaskan oleh

Rf

0 ¼ mm

mm þ mS

Dimana Mengembalikan ke definisi konsentrasi (c¼n / V¼m / MV), mengikuti itu

Rf

0 ¼ cmVm

cmVm þ cSVS

¼ Vm

Vm þ cS

cm VS

;
Dimana Jika hubungan koefisien partisi diterapkan untuk persamaan ini, hasilnya adalah
disebut persamaan Martin – Synge: Analit waktu dilarutkan dalam fase gerak Waktu analit
dikaitkan dengan fase diam mm massa sampel dalam fase gerak ms sampel massa dalam fase
diam konsentrasi cS, m sampel dalam fase diam atau bergerak (mol / L) VS, m mobile atau
volume fase diam (L)

Sini Nilai Rf yang diukur secara empiris hanya identik dengan termodinamika

Rf 0 bernilai jika salah satu dari kondisi berikut dapat diterapkan:

- Jika rasio fase tetap konstan untuk seluruh lapisan

- Jika komposisi fase seluler tidak berubah selama pengembangan

- Jika fase diam bebas dari pelarut sebelum pengembangan

- Jika kecepatan depan pelarut sama dengan kecepatan fase gerak di tempat posisi

Tetapi kondisi ini tidak pernah terpenuhi di dunia nyata. Karena itu yang diamati Nilai Rf
akan selalu lebih kecil dari Rf "benar" atau termodinamika Nilai 0. Rf nilai mulai dari 62
hingga 100% dari Rf termodinamik 0 nilai dikutip dalam literatur yang relevan. Perkiraan
yang masuk akal untuk termodinamika Rf Nilai 0 adalah diperoleh dengan mengalikan nilai
Rf yang diamati dengan 1,1. Apalagi di sini nilai Rf-nya digunakan tanpa membedakan
antara nilai "terukur" atau "termodinamika". Jika tidak disebutkan lebih lanjut, singkatan Rf
diambil untuk berarti yang diukur dengan benar Nilai Rf identik dengan nilai termodinamika.

2.5 Komposisi Fase Seluler

Komposisi fase gerak jarang konstan pada seluruh jarak pemisahan. Beberapa penyimpangan
hampir selalu diamati di dekat asal sampel dan depan pelarut. Karena itu hanya gunakan nilai
Rf yang diukur dalam kisaran 0,05-0,9 saat solvasi selektif dari fase stasioner yang mengarah
ke demixing tidak menjadi masalah. Distribusi komponen-komponen campuran fasa ponsel
ternary yang diamati pada lapisan gel silika ditunjukkan pada Gambar. 2.7. Fase seluler
terdiri dari polaritas rendah mesitylene dan polar benzyl alkohol (dicampur dengan etil
asetat). Pada 40 mm jarak pemisahan gradien depan mesitylene dapat diamati dengan
penurunan dalam konsentrasi benzyl alkohol. Penjelasannya sederhana. Relatif konsentrasi
mesitylene dalam fase gerak meningkat dengan mengorbankan benzyl alkohol; semakin
banyak polar benzil alkohol diserap secara selektif oleh situs aktif pada lapisan gel silika.
Mesitylene, yang kurang teradsorpsi dengan silika gel, diperkaya dalam fase gerak dan
membentuk gradien di bagian depan pelarut. Ini menggambarkan suatu fitur penting dari
pemisahan menggunakan mode pengembangan:

Gradien komposisi pelarut depan terbentuk di semua jenis kromatografi pengembangan.

Komposisi fase gerak tidak identik dengan campuran pelarut yang dipilih pemisahan. Gradien
komposisi terbentuk selama pengembangan, karena saling interaksi antara fase bergerak dan
stasioner.
 Gambar 2.7 menunjukkan kromatografi adsorpsi khas dengan pengembangan fase
normal, yaitu, dengan komposisi fase gerak yang kurang polar daripada fase diam. Zat
polaritas rendah bermigrasi dalam pelarut polaritas rendah gradien depan. Dengan demikian
beberapa pemisahan dapat menghasilkan sinyal depan yang kuat yang disebabkan oleh
komponen sampel polaritas rendah yang bermigrasi dalam gradien depan pelarut. Gambar 2.7
menunjukkan bahwa konsentrasi alkohol benzil dalam fase gerak turun dengan cepat pada
jarak pemisahan 40 mm. Mesitylene agak mudah menguap mengumpulkan di depan. Dalam
sistem ini komposisi fasa gerak konstan hanya terjadi hingga jarak pemisahan 40 mm. Dalam
fase ponsel ini nilai Rf lebih tinggi dari 0,85 tidak berarti karena zat yang tidak dipisah di
wilayah ini bergerak bersama gradien depan pelarut.

Dapat juga disimpulkan dari Gambar 2.7 bahwa semua zat dengan nilai Rf <0,85 telah
dikuasai oleh gradien polaritas rendah di bagian depan pelarut. Karena itu semuanya
substansi dengan jarak pemisahan kurang dari 40 mm telah menghabiskan waktu bermigrasi
dalam gradien depan pelarut. Ini menjelaskan mengapa nilai Rf yang diukur berbeda dari Rf
termodinamika yang "benar" 0 nilai.

Gambar 2.8 mengilustrasikan plot tipikal komposisi untuk fase gerak terner
mengandung metanol dalam pemisahan fase normal menggunakan lapisan gel silika
octadecylsiloxanebonded. Fase gerak terdiri dari volume mesitylene yang sama dan benzyl
alkohol dalam metanol. Dalam hal ini adalah mesitylene, yang memiliki yang lebih tinggi
afinitas untuk fase stasioner polaritas rendah RP-18 dari benzyl alkohol dan secara selektif
diserap dari fase gerak oleh lapisan. Komponen utama dari fase gerak adalah metanol yang
relatif polar, yang membersihkan benzy alkohol menghasilkan gradien depan pelarut yang
luas. Di bawah kondisi ini, kutub zat tetap tidak terpisahkan dalam gradien depan. Mesitylene
kecil sinyal di depan puncak alkohol benzyl menunjukkan mesitylene menguap, yang diserap
oleh lapisan dan sekarang diserap oleh bagian depan pelarut yang bergerak. Perubahan
komposisi fase gerak dapat dilihat di bawah jarak pemisahan 5 mm. Di sini, proporsi
mesitylene dalam fase gerak kurang dari pada campuran pelarut asli. Mesitylene diperkaya
pada 5 mm pertama stasioner fase sementara konsentrasi benzyl alkohol berkurang. Setelah
jarak pemisahan sekitar 5 mm keseimbangan baru antara fase membentuk fase gerak konstan
komposisi. Ini menjelaskan mengapa nilai Rf di bawah 0,1 dan di atas 0,85 seharusnya tidak
digunakan untuk karakterisasi zat.

2.6 Transfer Pemisahan TLC ke Kolom

Nilai Rf mencirikan jarak migrasi analit untuk kondisi berkaitan dengan TLC. Namun,
suatu zat hanya bisa bergerak sementara terlarut dalam fase gerak; kalau tidak tetap di
tempatnya. Jika suatu zat memiliki Nilai Rf 0,2, maka harus menghabiskan 1/5 dari waktu
pengembangan di ponsel fase dan 4/5 dari waktu pengembangan dalam fase stasioner. Nilai
untuk faktor retensi k dengan demikian dihitung dengan k ¼ 4. Hubungan yang disebutkan di
atas antara Rf Nilai 0 dan faktor retensi harus valid untuk sampai pada Rf Nilai 0 0,2:

Rf

0¼1
k þ 1 ¼ tm

Intensitas

0 10 20 30 40 50 60 70 70

Jarak pemisahan (mm)

Gambar 2.8. Perubahan komposisi pelarut campuran metanol, benzil alkohol dan mesitylene

(18þ1þ1, V / V) pada pelat HPTLC RP-18. Pada awalnya konsentrasi mesitylene terletak di
atas itu

dari benzyl alkohol

2.6 Transfer Pemisahan TLC ke Kolom 27

Rf

Nilai 0 adalah konstanta spesifik analit untuk stasioner dan seluler tertentu

kombinasi fase. Dengan demikian, teknik layer dan kolom memiliki retensi yang sama

faktor, seperti yang ditunjukkan oleh persamaan

k ¼ tS

tm

¼ 1 Rf

Rf

0: (2,7)

Mentransfer kondisi pemisahan dari pemisahan planar ke HPLC memiliki keunggulan

praktis karena pemisahan TLC lebih cepat, secara umum, dan lebih murah daripada
pemisahan yang tidak dioptimalkan oleh HPLC. Prasyarat untuk mentransfer retensi data dari
TLC ke kromatografi kolom adalah koefisien distribusi harus identik di kedua sistem. Ini
adalah kasusnya, ketika menggunakan stasioner yang sama dan ase seluler. Persamaan
Martin – Synge (2.6), ditetapkan sesuai dengan partisi koefisien, hasil

K ¼ 1 Rf

Rf

0
Vm

VS

(2.8)

Jika koefisien distribusi TLC dan HPLC disetel sama dan jika Vm mewakili volume fase
gerak dan W berat sorben, hubungan berikut hasil antara pemisahan TLC dan HPLC:

Dari persamaan Martin-Synge yang ditransformasikan, berarti bahwa hasil bagi dari Rf
Nilai 0 dalam persamaan TLC sama dengan faktor retensi dalam HPLC. Jika dibagi dengan
Vm / W, itu menghasilkan ekspresi berikut

kHPLC ¼ fg Vm = W TLC

fg Vm = W HPLC

1 Rf

Rf

Jika berat fase diam dan volume fase gerak adalah dikenal, Rf Nilai 0 yang ditentukan
oleh TLC dapat digunakan untuk menghitung retensi faktor yang diharapkan untuk
pemisahan HPLC. Untuk menghindari penentuan berat dan volume, sistem pemisahan dapat
dikalibrasi dengan membuat percobaan hubungan antara pemisahan TLC dan HPLC untuk
serangkaian standar dan menggunakan informasi ini untuk memprediksi pemisahan HPLC
untuk zat lain setelah TLC data telah diperoleh [13].

2.7 Nilai Rm

Termodinamika Rf Nilai 0 tidak linier terkait dengan sifat struktural a molekul. Namun,
korelasi linear dengan struktur ada jika bentuk logaritmi dari Rf Nilai 0 digunakan. Nilai Rm
ini disebut diperkenalkan pada 1950 oleh BateSmith dan Westall [14]: 28 2 Dasar Teoretis
Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Rm ¼ lg 1

Rf

01

 ¼ lgðkÞ: (2.9)
 Ekspresi untuk nilai Rm ketika dimasukkan dalam persamaan Martin-Synge (2.8) hasil

Rm ¼ lg VS

Vm

þ lg K: (2.10)

Dengan menerapkan persamaan Dm0 ¼ RT ln K ¼ 2: 3RTlg K untuk potensi kimia, itu

memberi hubungan Martin penting:

Rm ¼ lg VS

Vm

Dm0

2: 3RT: (2.11)

Potensial kimia Dm0 menggambarkan perubahan energi bebas yang dihasilkan dari
transfer satu mol analit dalam kondisi standar antara fase. Martin hubungan didasarkan pada
pertimbangan termodinamika dan berlaku untuk adsorpsi serta kromatografi partisi. Martin
menjelaskan pemisahan yang luar biasa kekuatan kromatografi dengan menggunakan
persamaan ini. Jika hanya dua molekul sedikit berbeda, misalnya, berbeda hanya dalam satu
elemen struktur, mereka perbedaan potensi kimia sebanding dengan elemen struktural. Ini
menjelaskan mengapa molekul besar dengan perbedaan struktural kecil dapat dipisahkan.
Untuk pemisahan, perbedaan struktural individu adalah penting, bukan relatif perbedaan [7].

Persamaan Martin berfungsi sebagai dasar untuk hubungan struktur-retensi kuantitatif.

Dalam kasus ideal, potensi kimia suatu zat adalah jumlah dari kontribusi parsial elemen
strukturalnya (atom, kelompok fungsional, dan obligasi). Nilai substansi Rm dapat dihitung
dari zat homolog sebagai a kelipatan dari struktur dasar, seperti yang diilustrasikan pada
Gambar. 2.9 untuk alifatik yang berbeda asam karboksilat. Jika Rm val anggota

2.8 Ketergantungan Suhu Pemisahan TLC

Pengaruh suhu pada pemisahan lapisan tipis relatif lemah dibandingkan dengan pengaruh
lain. Perubahan suhu memiliki efek nyata pada komposisi kesetimbangan fase gerak dalam
kontak dengan fase diam. Konstanta distribusi bergantung pada suhu seperti halnya isoterm
sorpsi. Lebih tinggi suhu mendukung penguapan komponen yang lebih mudah menguap dari
ponsel fase ke fase gas serta mengurangi viskositas fase gerak. Lebih lanjut, kandungan air
yang bergantung pada suhu memainkan fase uap peran penting dalam kromatografi adsorpsi.
Ini adalah fakta yang terkenal bahwa TLC pemisahan berdasarkan adsorpsi pada umumnya
stabil dan berjalan dengan baik pada suhu sedang 2.8 Ketergantungan Suhu Pemisahan TLC
29 zona iklim tetapi merupakan bencana total pada hari-hari musim panas di daerah tropis.
Udara tinggi kelembaban jelas membuat perbedaan dan ada efek suhu juga. Oleh karena itu,
faktor-faktor yang bergantung pada suhu di atas saling bersaing satu sama lain membuatnya
hampir mustahil untuk secara tepat memprediksi efek perubahan suhu terhadap pemisahan
TLC. Hubungan Martin menggabungkan suhu dan Nilai Rm dalam persamaan tunggal di
mana nilai Rm meningkat seiring suhu berkurang. Dengan demikian nilai-nilai Rf harus
meningkat ketika suhu menurun pada konstanta kelembaban absolut untuk fase gas [6]. Pada
kelembaban relatif konstan, nilai Rf yang diamati naik dengan penurunan suhu. Dengan
demikian, dapat disimpulkan bahwa semakin tinggi suhunya, semakin rendah aktivitas fase
stasioner. Bahkan, viskositas fase gerak menurun pada suhu yang lebih tinggi, sehingga
meningkatkan kecepatan konstan. Ini menghasilkan pemisahan pusat zona yang lebih tinggi
tetapi dengan peningkatan diameter tempat. Oleh karena itu, tidak ada argumen substantif
yang mendukung kinerja Pemisahan TLC pada suhu yang lebih tinggi. Di sisi lain, ada
beberapa pemisahan hanya berhasil pada suhu rendah. Misalnya pemisahan polycyclic
hidrokarbon aromatik pada lapisan gel silika diresapi kafein pada 20 C [16, 17].

Singkatnya, dapat dinyatakan bahwa perubahan suhu di wilayah 10 C menyebabkan

sedikit atau tidak ada perubahan dalam proses pemisahan, asalkan kelembaban sistem dijaga
konstan. Dalam praktiknya, ini berarti laboratorium perlu melakukannya mempertahankan
suhu sedang untuk melakukan pemisahan TLC.

2.9 Pertimbangan Teoritis Lanjut

Pemisahan kromatografi ditentukan oleh kombinasi kinetik dan sifat termodinamika. Sifat
termodinamika bertanggung jawab atas perilaku retensi dan selektivitas. Properti kinetik
menentukan perluasan zona selama pemisahan [18].

Proses pemisahan kromatografi dapat dibandingkan dengan cairan-cair distribusi dalam

corong pisah, kecuali bahwa keseimbangan antara fase terjadi beberapa ribu kali dalam
pemisahan kromatografi. Selain itu, dalam a pemisahan kromatografi fase gerak melewati
fase diam sedangkan dua fase hanya dibawa ke dalam kontak dan dipisahkan secara khas
percobaan distribusi cair-cair. Dalam kromatografi kolom, suatu zat adalah didistribusikan
secara permanen antara kedua fase tetapi hanya bergerak ketika di ponsel tahap. Simulasi
proses ini, ditransfer ke TLC, mengarah ke sampel bergerak melalui lapisan TLC dalam
bentuk distribusi binominal. Asumsi bahwa sejumlah analit n diterapkan pada lapisan TLC
sebelum menghubungi fase gerak, jumlah total zat terkonsentrasi di zona kecil dan fase
seluler belum memiliki kontak dengan sampel, situasi ini diwakili oleh persamaan

Nominator dalam persamaan ini mewakili fase gerak dan penyebut fase diam. Arti dari g
dan b akan dijelaskan di bawah ini. Kesetimbangan belum ditetapkan antara dua fase, karena
semua sampel n masih terletak di zona awal fase diam. Setelah menambahkan fase seluler,
beberapa sampel didistribusikan antara fase diam dan bergerak, menurut masing-masing
faktor retensi. Faktor nS mengacu pada jumlah zat yang tersisa di fase diam dan nm dengan
jumlah yang dilarutkan dalam fase gerak. Ini saat ungkapan berikut ini valid untuk substansi
dalam fase diam:

nS ¼ knm:

Karena jumlah sampel dilestarikan, maka harus didistribusikan di antara keduanya fase,
dan ungkapan berikut ini juga valid:

n ¼ nS þ nm

Jika persamaan atas diganti dengan yang lebih rendah, ini mengarah ke ekspresi

n ¼ nmðk þ 1Þ

dan setelah penataan ulang, itu menjadi

nm ¼ 1

ðk þ 1Þ

n bn:

Dari sampel yang diterapkan n, fraksi bn akan pindah ke fase gerak. Itu persamaan di
bawah ini mewakili fraksi jumlah sampel n, yang tetap dalam fase diam:

Fraksi sampel amobil yang tetap dalam fase diam diberikan oleh gn. Ekspresi untuk b dan
g memungkinkan deskripsi pemisahan yang lebih pendek proses. Menurut definisi, fraksi b
mengubah fase sementara fraksi g tetap di belakang, sehingga mengarah ke b + g ¼ 1.

Pada langkah berikutnya, fase seluler baru menghubungi zona sampel mendorong fraksi
nb molekul sampel ke area pelat yang bersih. Fraksi ng dari sampel diimobilisasi oleh fase
diam dan tidak bergerak. Setelah yang pertama keseimbangan, situasinya direpresentasikan
sebagai berikut:

Kesetimbangan selanjutnya dapat digambarkan sebagai berikut. Fraksi n di ponsel dan

fase diam akan didistribusikan sesuai dengan faktor retensi mereka. Dari jumlah zat yang
tersisa dalam fase diam, fraksi b dari jumlah ng akan pindah ke fase seluler (mis. bng),
sedangkan fraksi g dari ng (mis. gng) tetap pada asal sampel pada fase diam. Dari substansi
jumlah nb dalam fase gerak, fraksi g akan pindah ke fase diam (mis. gnb), sedangkan fraksi b
dari nb tetap dalam fase seluler. Jika selanjutnya bersih fase seluler diperkenalkan, maka kita
miliki

0
gng

þ bng

gnb þ bnb

Phase fase ponsel

fase nstationary

¼ nð Þ g þ b 2

Jika fraksi individual n dari fase diam dan bergerak adalah disimpulkan pada akhir tiga
tahap keseimbangan yang dijelaskan di atas, hasilnya dapat diwakili oleh ekspresi binominal.
Bentuk persisnya tergantung pada sejumlah tahap kesetimbangan. Untuk x jumlah
keseimbangan hasilnya diwakili oleh

nð Þ b þg x

Setelah banyak keseimbangan, gambar yang berguna tentang distribusi sampel pada TLC
hasil lapisan. Untuk faktor retensi rendah ðk ffi 1Þ dan untuk jumlah tak terbatas equilibria,
distribusi binominal bergabung menjadi distribusi tipe Guassian

Sudah sering dikatakan bahwa zat bergerak di sepanjang pelat TLC sebagai urutan Zona
berbentuk gaussian. Pernyataan ini hanya dapat dianggap sebagai perkiraan, karena bahkan
pelat TLC terpanjang tidak memiliki kapasitas untuk memungkinkan jumlah tak terbatas
tahapan kesetimbangan. Oleh karena itu, puncak TLC yang direkam dalam densitogram
adalah benar digambarkan sebagai fungsi binominal. Meskipun demikian, fungsi Gauss
masih tetap a perkiraan yang memuaskan untuk banyak pemisahan TLC menggunakan
kinerja tinggi lapisan. Distribusi jumlah zat n sebagai distribusi Gaussian, ditandai dengan
nilai rata-rata zS dan varians, didefinisikan sebagai berikut:

: (2.12)

Untuk x ¼ zS fungsi-e adalah 1 dan fungsi Gaussian mendekati maksimum ketinggian f

(zS) ¼ (1 / s pffi 2p) 1. Nilai zS dari puncak dalam densitogram harus diambil di mana sinyal
mencapai nilai tertinggi. Lebar distribusi Gaussian didefinisikan sebagai jarak antara median
puncak yang direkam dan titik belok. Pengukuran lebar ini digambarkan sebagai standar
deviasi puncak. Kuadrat dari deviasi standar disebut varians (s2).

Gambar 2.10 mengilustrasikan distribusi jumlah kafein yang konstan di jarak migrasi
yang berbeda. Kafein dioleskan ke piring, direkam (puncak sempit di awal), mengembangkan
jarak pendek, dan kemudian direkam lagi. Proses ini diulang sembilan kali. Perhatikan bahwa
sinyal kafein melebar setiap pengembangan. Jika kuadrat dari jarak pemisahan (zS) dibagi
dengan varians, ini pada awalnya akan menghasilkan nilai yang lebih atau kurang konstan:
: (2.13)

Produk dari faktor retensi k dan jumlah langkah distribusi memberikan nilai konstan x
yang menunjukkan efisiensi serta migrasi jarak dalam pemisahan TLC. Produk efisiensi dan
jarak migrasi ini disebut "bilangan real pelat teoritis" dan diwakili oleh simbol N0 . Jika
hubungan dirumuskan sesuai dengan standar deviasi puncak direkam dalam densitogram, ini
menghasilkan persamaan berikut:

sS ¼ 1

p 0 zS: (2.14)

Sini, Ungkapan ini secara umum valid dan berarti bahwa lebar puncak (2sS) meningkat
dengan jarak migrasi yang lebih panjang, seperti yang ditunjukkan dengan jelas pada Gambar
2.10. Jadi begini bahwa sistem kromatografi hanya dapat memisahkan sejumlah sampel
karena jarak pemisahan yang tak terhingga panjang akan menyebabkan puncak yang sangat
luas.

Ungkapan "jumlah pelat teoritis" atau "nomor pelat" di kolom kromatografi mengacu
pada panjang kolom yang sesuai dengan tahap kesetimbangan tunggal. Nomor pelat dalam
kromatografi kolom dapat dihitung secara langsung dari kromatogram karena setiap zat,
terlepas dari waktu retensinya, harus bermigrasi dengan jarak yang sama yang ditentukan
oleh panjang kolom. Sebaliknya, masing-masing substansi yang terpisah dalam TLC telah
dikaitkan dengan itu jarak migrasi yang berbeda didefinisikan sebagai sebagian kecil dari
jarak migrasi depan pelarut. Oleh karena itu, dalam kromatografi lapis tipis, jumlah pelat
maksimum N ditentukan pada pelarut posisi depan harus dikoreksi untuk setiap zat dalam
kromatogram oleh fraksi jarak migrasi depan pelarut yang mereka migrasi menggunakan
Nilai Rf [6,11]:

N0 ¼ NRf: (2.15)

Jika nilai lebar puncak di dasar untuk puncak Gaussian digunakan, dengan w ¼ 4sm (atau
lebih tepatnya, dengan 1. 2 1,96s), hubungan berikut ini valid:

N0 ¼ zS

; (2.16)

dimana

standar deviasi sS

zJarak migrasi zat

N0 jumlah sebenarnya dari pelat teoritis

N0 nomor plat nyata

zJarak migrasi zat

Lebar puncak wB pada basis ¼ 4s

N0 menjelaskan nomor pelat teoritis untuk setiap zat yang sesuai dengan fraksi dari
nomor pelat untuk jarak migrasi depan pelarut yang masing-masing substansi bermigrasi.
Nomor pelat pada jarak migrasi depan pelarut N mewakili nilai maksimum yang mungkin
untuk pemisahan itu. Ini adalah nilai yang meningkat karena pemisahan tidak dapat dicapai
pada bagian depan pelarut di mana N dihitung:

N¼1

: (2.17)

Sini, Untuk zat-zat yang berada pada posisi aplikasi sampel tidak ada interaksi dengan fase
seluler, dan jarak migrasi adalah nol. Untuk mereka zat yang bermigrasi pada bagian depan
pelarut tidak ada interaksi dengan stasioner fase, dan jumlah langkah-langkah keseimbangan
karena itu nol. Dalam kedua kasus, ini akan membuat N atau N0 nol juga. Nilai untuk N lebih
besar dari nol hanya untuk zat dengan nilai Rf dalam kisaran 0 <Rf <1. Hanya pemisahan
kromatografi terjadi ketika kinerja pemisahan sistem selain dari nol.

Gambar 2.11 menunjukkan pemisahan enam pewarna, menunjukkan peningkatan puncak

lebar dengan meningkatnya jarak migrasi zS. Densitogram memungkinkan lebar puncak pada
jarak pangkalan dan migrasi yang akan diekstraksi untuk perhitungan nomor pelat

2.10 Indeks yang Mencirikan Pemisahan dan Resolusi

Bagaimana pemisahan dapat ditingkatkan? Tentu saja Anda ingin memisahkan a

substansi dari semua komponen sampel lain sehingga dapat dikuantifikasi dengan benar.
Untuk tujuan ini, sistem kromatografi harus dipilih yang menyediakanndiferensiasi yang
cukup dari nilai Rf dari masing-masing zat. Pada penyelesaian langkah pengembangan zona
substansi menempati ruang yang ditentukan oleh jarak migrasi depan pelarut yang ditandai
oleh lokasi (nilai Rf) dan a distribusi yang kira-kira diwakili oleh fungsi Gaussian. Karena
dispersi, zona individu menempati ruang pada lapisan yang tergantung pada zona mereka
Nilai Rf dan sifat sistem.

Luas puncak distribusi Gaussian sebanding dengan jumlah zat yang terkandung di dalam
spot. Lebar puncak pada dasar (wB) dari puncak Gaussian adalah a ukuran ruang yang
ditempati oleh zona yang dipindai di pelat TLC. Ini bisa dihitung untuk zat individu dengan
menggunakan jarak zS menurut

wB ¼ 4

NRf

p zS: (2.20)
 Resolusi, RS, dari dua kurva Gaussian yang berdekatan (dua puncak) didefinisikan oleh
quotients dari perbedaan antara dua sinyal maksimum (zS1 dan zS2) dan rata-rata aritmatika
lebar puncaknya di pangkalan (wB1 dan wB2):

RS zS2 zS1

wB1 þ wB2

¼ 2 zS2 zS1

wB1 þ wB2

¼ zS2 zS1

2ðs1 þ s2Þ

Untuk RS ¼ 0,5 jarak antara puncak adalah s1 þ s2 2s, -disebut “2s pemisahan". Dua
puncak masih saling tumpang tindih sekitar 20%. Namun demikian dua komponen masih bisa
dikenali. Pada resolusi 1, puncaknya hampir benar-benar terpisah. Profil puncak hanya
tumpang tindih sebesar 3%, sesuai dengan 4s pemisahan (Gbr. 2.13).

Resolusi 1,25 sudah cukup untuk pengukuran kuantitatif dengan memindai densitometri.
Resolusi lebih besar dari 1,5 tidak perlu untuk mengukur puncak yang tumpang tindih karena
tumpang tindih puncak kurang dari 0,3%. Tentu saja ini saja berlaku untuk puncak simetris
yang melekat pada profil Guassian. Dalam hal fronting atau puncak tailing, pemisahan 10s
diperlukan untuk kuantifikasi yang andal, yang sesuai dengan resolusi RS ¼ 2.5.

Dari definisi nilai Rf, zS ¼ Rfðzf z0Þ; dan dengan penyederhanaan s1 s2 s ekspresi
untuk resolusi dapat diubah menjadi

RS ¼ ðRf2 Rf1Þðzf z0Þ

4s:

Dengan ðzf z0Þ ¼ zS1 = Rf1 dan aplikasi dari (2.14), berikut itu

Menurut persamaan Snyder, resolusi dua zat dipengaruhi oleh tiga faktor:

(a) Istilah pertama dalam persamaan Snyder menggambarkan kualitas lapisan. Ini adalah
ditandai dengan nomor pelat NRF dan didominasi oleh kontribusidifusi ke perluasan zona
untuk lapisan yang disiapkan dengan baik. Resolusi bisa ditingkatkan dengan peningkatan
jumlah pelat tetapi hanya sebanding dengan kuadrat akar NRf. Peningkatan nilai Rf
diperkirakan akan meningkatkan resolusi dua bermigrasi dengan erat puncak tetapi ini tidak
terjadi karena resolusi melewati a maksimum di sekitar nilai Rf 0,3. Ini karena lawannya
kontribusi dari dua istilah pertama dalam (2.21).
(B) Istilah kedua dalam (2.21) bertentangan dengan pengertian yang pertama. Semakin besar
Rf nilai, semakin rendah resolusi dua zona bermigrasi erat. Semua zat Gambar 2.13
Pemisahan puncak tetangga menurut definisi pemisahan puncak 4s 38 2 Dasar Teoretis
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) bermigrasi dengan bagian depan pelarut memiliki nilai Rf
satu dan resolusi RS ¼ 0. Semua zat yang bermigrasi di wilayah yang dekat dengan bagian
depan pelarut miliki sejumlah interaksi dengan fase diam dan probabilitas pemisahan mereka
rendah.

(c) Istilah selektivitas tergantung pada rasio faktor retensi. Lebih besar perbedaan untuk
faktor retensi, semakin tinggi selektivitas kromatografi dan semakin tinggi resolusi. Istilah
selektivitas adalah ukuran dari kemampuan sistem pemisahan untuk membedakan antara dua
zat oleh kemampuan mereka untuk interaksi antarmolekul yang berbeda di ponsel dan fase
diam.

Persamaan (2.21) juga dapat diartikan berbeda. Dua istilah pertama (a dan b)
menggambarkan "resolusi potensial" dari sistem TLC. Ini juga merupakan ukuran umum
kinerja pemisahan variabel lokal dari sistem kromatografi di a jarak migrasi tertentu. Dapat
digunakan untuk menghitung resolusi aktual (RS) dari sepasang zat, dengan mengalikan
istilah a dan b dengan istilah c [6]. Olehmengadopsi singkatan Q2 ¼ Rf (1Rf) 2 istilah a dan b
dari (2.21) dapat dijelaskan sebagai berikut (dengan Rf

 Rf2):

Produk NQ2 sebanding dengan resolusi kuadrat dan dikenal sebagai "Nomor plat
efektif". Jika Rf2 digantikan oleh faktor retensi, persamaan di atas dapat dituliskan sebagai

NQ2 ¼ NRf 1 1

Variasi nomor pelat efektif dengan nilai Rf dievaluasi secara grafis pada Gambar 2.14

Menurut Gambar 2.14, nomor plat efektif tertinggi diperoleh dengan Rf nilai sekitar
0,33. Pemisahan yang memuaskan hanya dicapai di wilayah Rf dari 0,05 menjadi sekitar 0,9.
Untuk pemisahan kritis, sistem harus disesuaikan demikian bahwa pasangan kritis memiliki
nilai Rf rata-rata sekitar 0,33. Dalam TLC itu sangat sulit untuk meningkatkan kualitas pelat
(diwakili oleh pffi N) dengan faktor lebih dari 2–3. Namun, selektivitas dapat ditingkatkan
dengan faktor 10-50 hingga a pilihan cerdas dari fase mobile dan stasioner. Dalam
praktiknya, biasanya lebih produktif untuk mengoptimalkan komposisi fase gerak untuk
stasioner yang dipilih fase [6].

2.11 Perluasan Zona dalam Kromatografi Planar

 Kita dapat membedakan antara tiga proses berbeda yang berkontribusi pada zona
memperluas dalam TLC, umumnya disebut sebagai istilah A, B, atau C [6, 20, 22-30].

2.11.1 Istilah A

Istilah A ditentukan oleh heterogenitas layer, yang dihasilkan dari variasi dalam kepadatan
pengepakan lokal, distribusi ukuran dan bentuk partikel, dan keberadaan aditif dalam lapisan
seperti pengikat dan indikator visualisasi. Heterogenitas lapisan bertanggung jawab atas
heterogenitas aliran. Aliran lebih lambat melalui sistem porositas internal daripada melalui
ruang antarpartikel [6]. Efek ini disebut difusi Eddy dan berbanding lurus dengan partikel
diameter. Guiochon dan Siouffi adalah peneliti pertama yang menggantikan istilah itu Difusi
Eddy (dari pendekatan Giddings) untuk proses yang jauh lebih lambat kromatografi cair.
Mereka juga menggunakan konstan Knox tanpa dimensi untuk menggambarkan kualitas
pengemasan lapisan [6]

2.11.2 Istilah B

Molekul sampel dalam fase gerak berdifusi ke segala arah. Berdasarkan Hukum difusi
Einstein, zona zat melebar seiring waktu, sebagaimana ditentukan oleh koefisien difusi.
Perluasan zona dalam fase seluler, dinyatakan sebagai varian s2 , dapat ditulis sebagai

s2 ¼ 2Dmt;

dimana Perluasan zona longitudinal (sx), yaitu zona yang menyebar dalam aliran arah,
dihitung dari perluasan zona karena difusi, dikoreksi ke menjelaskan ruang yang ditempati
oleh partikel sorben yang tak dapat ditembus, labirin faktor, dan memperkenalkan faktor
retardasi untuk memperhitungkan fraksi waktu pemisahan yang dihabiskan sampel dalam
fase seluler:

s2

xB ¼ 2DmlmRft ¼ BDmRft:

Sini,

Situasi serupa juga berlaku untuk standar deviasi transversal yang melintasi

arah aliran.

Kromatografi partisi membutuhkan kontribusi lebih lanjut untuk menjelaskan perluasan zona
longitudinal [20, 22-27]. Fraksi sampel dalam stasioner terlarut

fase dengan koefisien difusi (Ds) dan faktor labirin untuk stasioner

fase (ls) secara perlahan akan bertukar dengan sampel dalam fase gerak yang menghasilkan
perluasan zona longitudinal tambahan diungkapkan oleh [28]

Hubungan ini menunjukkan bahwa dalam partisi TLC, zona memperluas dari hasil difusi
dari kontribusi yang terjadi di ponsel dan stasioner fase. Dalam arah pengembangan, zona
memperluas dengan peningkatan nilai Rf dipengaruhi oleh difusi dalam fase diam terlarut [6].
Ini menghasilkan pembentukan zona elips. Untuk nilai Rf yang lebih kecil ada beberapa
persimpangan antara fase diam dan bergerak dan zona tetap bulat atau padat. Pada nilai Rf
yang lebih tinggi, substansi memiliki beberapa simpang susun dengan fase diam dan
menghabiskan sebagian besar waktunya dalam fase gerak, dan karenanya sulit berdifusi ke
dalam pori fase diam. Perluasan zona bergantung hampir secara eksklusif pada difusi dalam
fase gerak, dengan zona sampel membentuk lingkaran difus.

2.11.3 Istilah C

Istilah C bertanggung jawab atas keterlambatan yang disebabkan oleh proses transfer
massal selama sorpsi dan desorpsi molekul terlarut. Ini berbanding terbalik dengan
pemisahan waktu dan koefisien difusi dan sebanding dengan kuadrat partikel

diameter [26]:

Sini, Jumlah semua variasi kemudian menggambarkan total varian zona

proses perluasan:

2.11.4 Ketinggian Plat Lokal H

Seperti yang telah disebutkan, N (nomor pelat untuk panjang pemisahan lengkap)
menggambarkan kapasitas pemisahan sistem kromatografi, mis. semakin besar N adalah,
semakin banyak zat yang bisa dipisahkan. Alih-alih memberikan nomor plat, itu

2.11.5 Persamaan van Deemter

Persamaan van Deemter menggambarkan hubungan antara ketinggian lempeng lokal H

dan faktor individu yang menyebabkan perluasan zona. Persamaan ini adalah awalnya
dikembangkan untuk kromatografi gas dan kemudian digunakan dalam kromatografi cair.
Guiochon dan Siouffi menerbitkan adaptasi untuk TLC [6, 28]. Persamaan ini
menggambarkan hubungan antara difusi molekuler, transportasi massa, dan ketinggian pelat
lokal H. Ini memungkinkan kecepatan optimal untuk diperkirakan dalam kolom kromatografi
dan jarak pemisahan optimal dalam TLC. Persamaannya juga memungkinkan kita untuk
memprediksi partikel dan diameter pori mana yang menghasilkan pemisahan optimal kinerja
untuk fase diam. Oleh karena itu persamaan van Deemter yang dimodifikas membuat
kontribusi yang menentukan keberhasilan pengembangan lapisan HPTLC.

Kecepatan depan pelarut, yang sesuai dengan kecepatan fase gerak lokal untuk zona
sampel, dihitung sesuai dengan definisi umum kecepatan:

u ¼ zf z0

t:

Konstan A mencirikan kualitas fase diam, B difusi aksial, dan C ketahanan terhadap
transportasi massa dalam lapisan. Nilai H terutama tergantung pada u (kecepatan fase gerak).
Jika fase gerak bergerak perlahan melalui lapisan, difusi mendominasi; memperluas zona
pemisah menghasilkan pemisahan yang buruk. Jika fase seluler juga bergerak cepat melalui
lapisan, keseimbangan tidak sepenuhnya mapan dan lagi miskin hasil pemisahan. Untuk
pemisahan apa pun ada kecepatan fase gerak optimal sesuai dengan nilai minimum untuk H.
Situasi optimal ini tergantung tegas pada ukuran partikel (dp) lapisan.

Menurut Giddings [30], istilah pertama (istilah A) di van Deemter Persamaan

menggambarkan difusi Eddy dan transportasi massa dalam fase gerak. Ini difusi ke segala
arah disebabkan oleh berbagai kecepatan aliran lokal yang berbeda di fase diam. Penyebab
yang biasa adalah geometri partikel yang bervariasi dari kemasan. Itu semakin seragam
kemasan fase diam, semakin rendah nilai konstanta A. Kontribusi lebih lanjut untuk difusi
eddy muncul dari perbedaan kecepatan lokal di dalam layer. Gradien kecepatan ada dalam
saluran antarpartikel, dengan a perbedaan yang lebih besar antara kecepatan aliran di tengah
dan di sisi yang lebih besar saluran daripada di saluran yang lebih sempit. Partikel yang lebih
kecil meningkatkan aliran yang lebih halus ada sedikit difusi. Tentu saja, seseorang tidak
dapat terus mengurangi ukuran partikel saluran akan menjadi terlalu sempit dan mudah
diblokir.

Istilah kedua dari persamaan van Deemter (istilah B) menggambarkan efek dari fase
gerak difusi molekuler. Istilah ini sudah dibahas dalam bagian tentang "perluasan zona di
TLC". Kecepatan fase seluler berbanding terbalik sebanding dengan perluasan zona. Sebagai
akibatnya, kontribusi dari istilah B untuk perluasan zona berkurang dengan meningkatnya
kecepatan fase gerak. Di TLC, zona pelebaran paling terlihat untuk jarak pemisahan yang
lebih panjang dan pada Rf yang lebih tinggi. nilai-nilai. Ini adalah konsekuensi dari
penggunaan kekuatan kapiler untuk mempromosikan dan mempertahankan aliran fase gerak
dan merupakan kerugian yang cukup besar untuk TLC dibandingkan dengan sistem kolom
yang diatur secara pneumatik.

Ekspresi ketiga dalam persamaan van Deemter yang dimodifikasi (istilah C)

memperhitungkan pertimbangan bahwa adsorpsi dan desorpsi sampel dari fase diam butuh
waktu. Beberapa molekul diadsorpsi dan oleh karena itu tetap pada posisinya sementara yang
lain bergerak maju dengan fase gerak, menghasilkan zona dispersi dalam aliran arah. Karena
efek ini juga terhubung dengan permukaan pengemasan, maka secara langsung tergantung
pada diameter partikel kuadrat. Selanjutnya, ia juga mempertimbangkan itu molekul dalam
lapisan tipis dapat bergerak ke permukaan lapisan lebih cepat dari pada lapisan lebih tebal.
Proses pembubaran kembali yang lebih cepat juga mengurangi dispersi [18].

2.12 Kondisi Pemisahan Optimal dalam TLC

Dalam GC atau HPLC, kecepatan fase gerak optimal dihitung sebagai H minimum
nilai dari hubungan van Deemter. Sayangnya, seperti yang ditunjukkan Geiss dengan benar
[6], kecepatan fase gerak untuk TLC tidak konstan dan, sebagai konsekuensinya, the nilai H
tergantung pada posisi masing-masing zona dalam kromatogram. Karena itu menyatakan
kecepatan fase gerak optimal tidak relevan untuk TLC. Namun demikian Ketergantungan
lokasi ketinggian plat lokal dapat dihilangkan dengan membuat yang baru nilai (H / zf) untuk
ketinggian pelat lokal. Jika hasil bagi ini untuk ketinggian pelat lokal adalah terintegrasi
untuk ruang antara titik aplikasi sampel dan bagian depan pelarut jarak migrasi (dari z0 ke zf)
tinggi plat HM rata-rata yang diperoleh adalah independen dari kecepatan fase gerak tetapi
bukan konstanta kecepatan aliran w. Geiss menyebut ungkapan ini "tinggi pelat rata-rata yang
diamati", yang merupakan jumlah semua ketinggian lempeng lokal melewati selama
pengembangan [6]. Ekspresi TLC untuk persamaan van Deemter lokal harus diintegrasikan
ke seluruh pemisahan jarak [6, 28]:

Istilah A dan istilah C dapat diminimalkan dengan dp kecil. Difusi koefisien sampel
dalam fase gerak (Dm) sulit untuk dioptimalkan karena itu muncul di nominator dari term
kedua serta di penyebut yang pertama dan istilah ketiga. Kontribusi utama dari difusi muncul
dalam istilah B.

Menurut hukum difusi Einstein, batas zona akan berkembang dalam semua arah waktu t
oleh 2Dmt. Akibatnya, pemisahan harus cukup cepat untuk meminimalkan perluasan pita.
Sayangnya, aliran fase seluler terhalang oleh partikel kecil dalam fase diam, yang
mengurangi A dan D istilah dan memperbesar istilah B. Menggunakan fase gerak dengan
konstanta difusi kecil akan membatasi perluasan zona sebanyak mungkin [6]. Konstanta
kecepatan kecil juga mengurangi pengaruh persyaratan B dan C. Selain itu, perlu dicatat
bahwa untuk z0 nilai mendekati nol ekspresi logaritmik cenderung ke nilai yang sangat besar.
Itu jarak antara garis perendaman dan zona aplikasi sampel tidak boleh terlalu pendek.
Menurut Saunders dan Snyder [6, 31], hubungan optimal untuk zf ke z0 harus berada di
antara 7 dan 33.

Seperti ditunjukkan dalam (2.25) dan Gambar 2.15, HM mencapai nilai minimum untuk
panjang pengembangan tetap. Untuk nilai z0 ¼ 1 cm, pengembangan optimal panjang untuk
pemisahan TLC adalah antara 7 dan 15 cm [18]. Demikian standar Stahl nilai untuk TLC
klasik: z0 ¼ 1 cm dan zf ¼ 10 cm [6] dipilih dengan sangat baik. Seperti ditunjukkan pada
Gambar. 2.15, panjang pengembangan optimal untuk HPTLC adalah sekitar 4 cm [18]
Ketinggian plat minimum untuk pemisahan aliran kapiler selalu lebih tinggi daripada untuk
aliran paksa. Pelat HPTLC dengan partikel lebih kecil dari yang disediakan pelat TLC
pemisahan yang lebih baik, tetapi jarak pengembangan 5 cm tidak boleh terlampaui (Tabel
2.1) [33].

Kesimpulan apa yang bisa ditarik dari (2.25)? Situasi yang ideal adalah
mempertahankan a aliran konstan untuk seluruh jarak pemisahan, suatu kondisi yang hanya
terpenuhi dalam Optimal Performance Laminar Chromatography (OPLC). Namun
selanjutnya perincian tentang metode khusus ini tidak akan dibahas di sini.

Poin praktis yang penting adalah pentingnya bekerja dengan pelat TLC dengan a
distribusi ukuran partikel kecil. Ini dapat dicapai dengan menggunakan kinerja tinggi piring
lapisan tipis. Selain itu, fase diam harus dikemas secara homogen, yang berpendapat
menentang mempersiapkan piring sendiri dan untuk membeli secara industri produk yang
diproduksi.

Jika memungkinkan seseorang juga harus menggunakan pelarut dengan difusi rendah
agar meminimalkan perluasan zona. Bagaimanapun, pembangunan harus selalu terjadi
melebihi jarak pemisahan optimal [6]. Belenkii merekomendasikan menggunakan piring
dengan dp ¼ 10 mm dan panjang pengembangan zf ¼ 10 cm untuk bahan yang rendah berat
dan lapisan molekul dengan dp ¼ 5 mm dan panjang pengembangan zf ¼ 5 cm untuk zat
dengan berat molekul lebih tinggi [12].

Istilah D diminimalkan jika sampel yang akan dipisahkan memiliki stasioner yang
besar koefisien difusi fase (Ds). Ini lebih sering terjadi pada kromatografi partisi daripada
dalam kromatografi adsorpsi.

Plot Van Deemter untuk lapisan yang disiapkan dengan partikel yang berukuran lebih
kecil dari 10 mm terus meningkat garis bukannya kurva hiperbolik khas. Jelas, hanya itu
Istilah B (karena difusi molekul dalam fase gerak) berkontribusi pada perluasan puncak untuk
lapisan-lapisan ini. Semua kontribusi lain untuk perluasan pita dapat diabaikan. Jadi HM
untuk ukuran partikel kecil (dp <10 mm) dikurangi menjadi sebagai berikut [28]:

HM ¼ B

dengan þzf þ z0Þ:

Persamaan ini menunjukkan bahwa ketinggian pelat rendah hanya dapat dicapai untuk
pemisahan jarak pendek. Karena itu piring dengan partikel yang lebih besar harus digunakan
untuk pemisahan jarak yang lebih jauh. Secara umum, setelah memilih piring materi dan fase
ponsel yang optimal, analis hanya dapat meningkatkan pemisahan dengan memilih panjang
pengembangan optimal.

2.13 Nomor Pemisahan

Metode pemisahan yang secara memuaskan memisahkan banyak zat harus dinilai lebih
tinggi dari sistem pemisahan yang hanya dapat memisahkan beberapa zat. Itu nomor
pemisahan yang diperkenalkan oleh Kaiser memberikan dasar untuk evaluasi kapasitas
pemisahan sistem kromatografi [32]. Nomor pemisahan menjelaskan jumlah zona yang dapat
dipisahkan dengan resolusi 4s. Dalam TLC ini sesuai dengan situasi di mana jarak antara dua
puncak yang berdekatan dalam a densitogram sama dengan jumlah lebar puncaknya di
setengah tinggi. Lebar puncak pada setengah tinggi, wH dapat dinyatakan sebagai fungsi
linear dari panjang pengembangan. Untuk menghitung angka pemisahan untuk TLC, Kaiser
menggunakan lebar puncak rata-rata di nilai setengah tinggi diperoleh dengan menjumlahkan
lebar puncak pada setengah tinggi untuk sampel zona di asal dan zona sampel di bagian
depan pelarut diperoleh dengan ekstrapolasi dari serangkaian lebar puncak nyata yang
direkam dalam densitogram:

wH ¼ 1

wH mulai ð Þ þ wH depan ð

Untuk campuran pewarna diperoleh angka pemisahan SN ¼ 9, nilai yang cukup khas
untuk TLC. Nomor pemisahan maksimum dicapai dengan membuat aplikasi zona sekecil
mungkin. Dengan sistem pemisahan yang dipilih, tidak lagi mungkin untuk mempengaruhi
difusi sampel. Namun, geometri spot dapat dioptimalkan dengan menggunakan peralatan
yang sesuai.

2.14 Tinggi Plat Nyata

Teori perluasan zona didasarkan pada asumsi bahwa zona itu tidak realistis perluasan hanya
tergantung pada proses yang terjadi pengembangan. Untuk menjelaskan perluasan zona tak
terhindarkan selama aplikasi sampel, ketinggian pelat harus dikoreksi untuk perluasan zona
selama aplikasi sampel. Ini digambarkan sebagai nyata tinggi pelat Hreal. Kaiser
menyarankan metode sederhana dan praktis untuk menentukan ketinggian plat nyata [29-32].
Lebar puncak analit pada setengah tinggi (wHS) dihitung sebagai jumlah lebar aplikasi pada
setengah tinggi (wH (mulai) 0) dan lebar sinyal (wHreal) disebabkan oleh pengembangan
kromatografi:

Dalam hal campuran pewarna CAMAG, tinggi pelat asli dihitung sebagai Hreal ¼ 23,5 mm.

Untuk membandingkan metode TLC, pelat nyata ditentukan secara eksperimental

ketinggian harus dikutip sesuai dengan (2.30)
Referensi
1. Fried B, Sherma J (1999) Kromatografi lapis tipis - teknik & aplikasi. Dekker, New York

2. Fried B, Sherma J (eds) (1996) Kromatografi lapis tipis yang praktis: multidisiplin
pendekatan. CRC, Boca Raton

3. Poole CF (2001) Dalam: Nyiredy Sz (ed) Planar chromatography. Pandangan retrospektif

untuk milenium ketiga. Springer, Budapest

4. Sherma J, Fried B (eds) (1995) Buku Pegangan kromatografi lapis tipis, edisi ke-2.Dekker,
New York

5. Grinberg N (1990) Kromatografi lapis tipis modern. Dekker, New York

6. Geiss F (1987) Dasar-dasar kromatografi lapis tipis. Huethig, New York

7. Poole CF (2003) Esensi dari kromatografi. Elsevier, Amsterdam

8. Hahn-Deinstrop E (2007) Kromatografi lapis tipis terapan: praktik terbaik & penghindaran
kesalahan, 2nd edn. Wiley, New York

9. Wagner H, Bladt S (1996) Analisis obat tanaman - atlas kromatografi lapis tipis. Peloncat,
New York

10. Frey HP, Zieloff K (1993) Kromatografi lapis tipis kuantitatif dan kualitatif (Grundlagen
dan Praksis). Chemie, Weinheim

11. Kraus Lj, Koch A, Hoffstetter-Kuhn S (1995) Kromatografi lapis tipis. Springer, Berlin

12. Belenkii B, Kurenbin O, Litvinova L, Gankina E (1990) Sebuah pendekatan baru untuk
optimasi dalam TLC. J Planar Chromatogr 3: 340–347

13. Reuke S, Hauck HE (1995) Kromatografi lapis tipis sebagai teknik uji coba untuk HPLC
ditunjukkan dengan sampel pestisida. Fresenius J Anal Chem 351: 739-744

14. Bate-Smith EC, Westall RG (1950) Perilaku kromatografi dan struktur kimia dalam
beberapa zat fenolik yang terjadi secara alami. Biochim Biophys Acta 4: 427-440, 2. Tehnya
katekin 441-444

15. Canic´ VD, Perisˇic´-Janjic´ NU (1974) Pemisahan asam organik alifatik dan aromatik
pada lapisan tipis pati. Perilaku kromatografi dan struktur kimia. Z Anal Chem 270: 16–19

16. Funk W, Gl € uck V, Schuch B, Donnevert G (1989) Hidrokarbon aromatik polinuklear

(PAHs): kromatografi transfer muatan dan penentuan fluorimetri. J Planar Chromatogr 2: 28–
32
17. Funk W, Donnevert G, Schuch B, Gl € uck V, Becker J (1989) Penentuan HPTLC
kuantitatif enam hidrokarbon aromatik polinuklear (PAH) dalam air. J Planar Chromatogr 2:
317–319

18. Poole CF, Fernando WPN (1992) Beberapa renungan tentang pengukuran dan interpretasi
ketinggian pelat teoritis dalam kromatografi lapis tipis. J Planar Chromatogr 5: 323–333

19. Snyder LR (1968) Prinsip-prinsip kromatografi adsorpsi. Dekker, New York

20. Guiochon G, Bressolle F, Siouffi A (1979) Studi kinerja kromatografi lapis tipis IV.
Optimalisasi kondisi eksperimental. J Chromatogr Sci 17: 368-386

21. J € anchen D (1977) Dalam Zlatkis A, Kaiser RE (eds) HPTLC - lapisan tipis kinerja
tinggi kromatografi. Elsevier, Amsterdam, hlm. 129–145

22. Guiochon G, Siouffi A, Engelhardt H, Hala'z I (1978) Studi kinerja lapisan tipis
chromatography I. Pendekatan fenomenologis. J Chromatogr Sci 16: 152–157

23. Guiochon G, Siouffi A (1978) Studi kinerja kromatografi lapis tipis II. Pelebaran pita dan
persamaan tinggi pelat. J Chromatogr Sci 16: 470–481

24. Guiochon G, Siouffi A (1978) Studi kinerja kromatografi lapis tipis III. Aliran kecepatan
fase gerak. J Chromatogr Sci 16: 598–609

25. Guiochon G, K € atau € osi G, Siouffi A (1980) Studi tentang kinerja kromatografi lapis
tipis V. Laju aliran dalam pelat fase terbalik. J Chromatogr Sci 18: 324–329

26. Belenkii BG, Nesterov VV, Gaukina ES, Semirnov MM (1967) Sebuah teori dinamis
tipis kromatografi lapis. J Chromatogr 31: 360-368 Referensi 51

27. Belenkii BG, Kolevov UI, Nesterov VV (1975) Teori kromatografi lapis tipis. Efek dari
struktur lapisan adsorpsi pada penyebaran bintik-bintik. J Chromatogr 107: 265–283

28. Siouffi AM, Bressolle F, Guiochon G (1981) Optimalisasi dalam kromatografi lapis tipis.
Beberapa pertimbangan praktis. J Chromatogr 209: 129–147

29. Knox JH (1976) Dalam Simpson CF (ed) Praktis kromatografi cair kinerja tinggi.
Heyden, London

30. Giddings JC (1965) Dinamika kromatografi, Bagian I. Dekker, New York

31. Saunders DL, Snyder LR (1970) Dalam: Zlatkis A (ed) Kemajuan dalam kromatografi.
Simposium kromatografi, Houston, hlm. 307–321

32. Zlatkis A, Kaiser RE (1977) HPTLC - Kromatografi lapis tipis kinerja tinggi. Elsevier,
Amsterdam, hlm 15-38

33. C. F. Poole, S. K. Poole, Multidimensionality dalam planar chromatography, J.

Chromatogr. SEBUAH 703 (1995) 573 - 612