KROMATOGRAFI

Kelompok 3
Next
Next
Anggota kelompok
1. Nur Aulia Erwin (1913016098)
2. Putri Sekardjati/1913016101
3. Nicky Assifa Juwanto (1913016104)
4. Muhammad Rizvan Septian Nur (1913016107)
5. Ridha Yulia Fajriani Kilab (1913016110)
6. Diffa Fadhila Chairani (1913015113)
7. Elvina Dewi Kumalasari (1913016116)
8. Rhenaldo Elvanda Pratama Burhan (1913016119)
9. Ahmad Rezky (1913016122)
10. Nabila Nur Rahma Hidayat (1913016125)
11. Khoirunnisa (1913016128)
12. Baihaki Amrurohman (1913016131)
13. Muhammad Hafiz (1913016134)
14. Hannifah puspitasari (1913016137)
 A. Pengertian

Kromatografi adalah teknik pemisahan berdasarkan

partisi atau distribusi sampel (zat terlarut) antara fase
bergerak atau bergerak dan tetap atau stasioner
tahap. Kromatografi dapat dilihat sebagai rangkaian
keseimbangan antara ponsel dan stasioner tahap.
 B. Sejarah kromatgrafi
Kromatografi modern berasal dari akhir abad sembilan belas dan awal abad kedua puluh dari karya
David T. Day, seorang ahli geologi dan insinyur pertambangan yang terkenal di Amerika, dan
Mikhail Tsvet, seorang ahli botani Rusia. Hari mengembangkan prosedur untuk fraksionasi minyak
mentah dengan melewatkannya Bumi Fuller, dan Tsvet menggunakan metode kolom yang dikemas
untuk memisahkan pigmen daun menjadi pita berwarna. Tsvet mengenali dan menafsirkan dengan
benar proses kromatografi dan menamai fenomena tersebut kromatografi, dia umumnya dikenal
dengan penemuannya. Setelah bertahun-tahun, kromatografi mulai berkembang kembali pada 1940-
an karena pengembangan kromatografi partisi kolom oleh Martin dan Synge dan penemuan
kromatografi kertas. Publikasi pertama tentang GC muncul di 1952. Pada akhir 1960-an, GC, di
industri perminyakan, telah berkembang menjadi teknik instrumental yang canggih, yaitu
kromatografi instrumental pertama yang tersedia secara komersial. Sejak aplikasi awal di
pertengahan 1960-an, HPLC, mengambil keuntungan dari teori dan instrumental kemajuan GC,
telah memperluas wilayah kromatografi cair menjadi sama canggihnya dan metode yang berguna.
SFC, pertama kali didemonstrasikan pada tahun 1962, akhirnya mulai terkenal. Teknik kromatografi
modern, termasuk sistem otomatis, sangat luas digunakan dalam karakterisasi dan pengendalian
kualitas bahan baku pangan dan produk pangan.
C. Prinsip Kromatografi

Pemisahan yang didasarkan atas distribusi diferensial komponen-

komponen sampel diantara dua fasa yaitu fasa diam (stasionary phase)
dan fasa gerak (mobile phase). Gerakan fasa gerak ini
mengakibatkan terjadinya migrasi diferensial komponen-komponen
dalam sampel.
1.Fasa Diam (stasionary phase): Dapat berupa zat padat atau zat cair
yang terikat pada permukaan padatan (kertas atau suatu adsorben).
Fasa Gerak (mobile phase): Dapat berupa cairan sebagai eluen atau
pelarut atau gas pembawa yang inert
 kromatgrafi

Keseimbangan distribusi sampel di antara kedua fase ditunjukkan oleh nilai koefisien distribusi
(K).

K adalah Perbandingan Konsentrasi

Pemisahan dapat terjadi apabila koefisien distribusi komponen sampel berlainan (KA? KB?
KC). Komponen dengan nilai K lebih besar akan terpisah lebih lambat daripada komponen
dengan nilai K lebih kecil.
 D. Jenis Jenis Kromatografi

Berdasarkan jenis fasa gerak yang digunakan, ada 2 klasifikasi dalam kromatografi, yaitu :
1.Kromatografi gas
Kromatografi gas adalah teknik kromatografi kolom, di mana fase gerak adalah gas dan fase
diam adalah cairan yang tidak bisa bergerak atau padat yang dikemas dalam tabung tertutup. Gas-
Cair digunakan untuk memisahkan komponen volatil yang stabil secara termal dari suatu
campuran. Kromatografi gas, khususnya kromatografi gas-cair, melibatkan penguapan sampel
dan menyuntikkannya ke kepala kolom. Di bawah gradien suhu yang terkontrol, sampel diangkut
melalui kolom dengan aliran fase gerak gas yang inert. Bahan volatil kemudian dipisahkan
berdasarkan beberapa sifat, antara lain titik didih, ukuran molekul, dan polaritas. Kelebihan
kromatografi gas yaitu:
a.Analisis dapat dilakukan dengan cepat
b.Sensivitasnya tinggi
c.Mampu mengidentifikasi konstituen renik
d.Batas deteksi sampai dengan 10-9 g/L
Dapat dilengkapi sistem komputer untuk mengontrol bagian- bagian kromatogram dan
menyimpan data hasil percobaan dalam memorinya.
kekurangan kromatografi Gas:
a.Teknik kromatografi gas terbatas untuk zat yang mudah menguap
b.Kromatografi gas tidak mudah dipakai untuk memisahkan campuran dalam umlah besar. Pemisahan
pada tinkat mg mudah dilakukan, pemisahan pada tingkat gram mungkin dilakukan, tetapi pemisahan
dalam tingkat pon atau ton sukar dilakukan kecuali jika ada metode lain.
c.Fase gas dibandingkan sebagian besar fase cair tidak bersifat reaktif terhadap fasa diam dan zat
terlarut.
2. Kromatografi cairan.
Pada kromatografi cairan, fasa geraknya berbentuk cairan. Ada beberapa kromatografi cair teknik yang
diterapkan dalam analisis pangan yaitu kromatografi kertas, kromatografi lapis tipis (KLT) (kedua
teknik ini dapat disebut sebagai kromatografi planar), dan kromatografi kolom cair, yang semuanya
melibatkan fasa gerak cair dan fasa diam atau fasa diam cair. Namun, bentuk fisik dari fase diam pada
setiap kasus cukup berbeda.
a.Kromatografi Kertas
Kromatografi kertas diperkenalkan pada tahun 1944. Dalam kromatografi kertas, fase diam dan fase
gerak keduanya cair. Kertas umumnya berfungsi sebagai penunjang fase diam cair. Sampel terlarut
diterapkan sebagai titik kecil atau goresan satu setengah inci atau lebih dari tepi kertas saring
(biasanya selulosa), yang kemudian dibiarkan mengering. Strip kering ditangguhkan di wadah tertutup
di mana atmosfer jenuh dengan mengembangkan pelarut (fase gerak), dan kromatogram kertas adalah
dikembangkan.
Fase diam dalam kromatografi partisi kertas biasanya adalah air. Namun, pendukung dapat
diresapi dengan pelarut organik nonpolar dan dikembangkan dengan air atau pelarut polar
lainnya atau air (fase terbalik kromatografi kertas). Dalam kasus campuran sampel yang
kompleks, teknik dua dimensi dapat digunakan.
Dalam kertas dan kromatografi lapis tipis, komponen campuran dikarakterisasi oleh
relatifnya mobilitas (R f) nilai, dimana:

Sayangnya, R f nilai tidak selalu konstan untuk zat terlarut / sorben / pelarut tertentu, tetapi
bergantung pada banyak hal faktor-faktor, seperti kualitas fase diam, ketebalan lapisan,
kelembaban, jarak pengembangan, dan suhu.
Prinsip kerja kromatografi kertas adalah Pelarut bergerak lambat pada kertas, komponen-
komponen bergerak pada laju yang berbeda dan campuran dipisahkan berdasarkan pada
perbedaan bercak warna
Kelebihan kromatografi kertas yaitu :
1) Tidak diperlukan peralatan yang teliti dan mahal
2) Hasil yang baik dapat diperoleh dengan peralatan yang sangat sederhana
3) Senyawa yang terpisah dapat dideteksi pada kertas dan dapat diidentifikasi
Kekurangan kromatografi kertas yaitu :
1) Banyaknya permasalahan menyangkut cara pemasukan fasa gerak, perambatan fasa gerak, dan
penggumpalan
2) Membutuhkan waktu lama Keterbatasan parameter senyawa yang diuji

a. Kromatografi Kolom
Kromatografi kolom adalah metode yang paling berguna
memisahkan senyawa dalam campuran. Fraksinasi zat terlarut
terjadi sebagai hasil dari migrasi diferensial melalui tabung tertutup
fase diam, dan analit dapat dipantau saat pemisahan sedang
berlangsung. Pada kromatografi cair kolom, fase gerak berbentuk
cair dan fase diam bisa padat atau cairan yang didukung oleh
padatan inert
Sebuah sistem untuk kromatografi cair kolom tekanan rendah. Dalam diagram ini,
limbah kolom sedang dipecah antara dua detektor untuk memantau aktivitas enzim (di
Kanan) dan penyerapan UV (di Kiri). Keduanya penelusuran dapat direkam secara
bersamaan dengan menggunakan perekam dua pena (Ismail & Nielsen, 2010).
Kelebihan Kromatografi Kolom:
1)Proses kromatografi kolom termasuk proses yang sederhana.
2)Tidak membutuhkan alat-alat yang kompleks dalam melakukan metode kromatografi
kolom.
3)Biaya yang dikeluarkan untuk metode kromatografi kolom cukup murah jika
dibandingkan dengan metode kromatografi lainnya.
Kekurangan Kromatografi Kolom:
1)Membutuhkan waktu yang lama untuk menyelesaikan prosesnya.
Perlu dilakukan elusi secara bertahap agar semua fasa gerak yang digunakan akan habis
dan di tampung pada wadah yang berbeda.
 E. Teori pemisahan pada kromatgrafi
1. PLATE THEORY
Pelat teori adalah pelat imajiner dalam kolom yang tebalnya sedemikian rupa, sehingga komponen
dalam fasa gerak yang keluar daripadanya mempunyai komposisi yang sama dengan andaikata benar-
benar telah terjadi kesetimbangan partisi antara fasa gerak dengan fasa diam ditengah-tengah lapisan
tersebut. maka pelat teori dapat dianggap analog dengan satu tabung dari alat ekstraksi countercurrent
Craig. Tebal dari pelat imajiner tersebut dikenal sebagai Height Equivalent of Theoritical Plate (HETP)
atau Tinggi Ekunvalen Pelat Teoritis.
Besaran HETP ini mencerminkan cfisiensi dari kolom.
HETP = L/N
L = Panjang kolom,
N = Jumlah pelat teoritis

ω=lebar puncak pada dasarnya

δ=lebar pada setengah tinggi puncak
Karena N mencerminkan jumlah kesetimbangan yang dapat terjadi didalam suatu proses kromotografi
maka HETP adalah ukuran kemampuan kolom untuk memisahkan komponen-komponen dari
campurannya. Dimana semakin kecil nilai HETP semakin besar pula efisiensi dari kolom.
Tingkat pemisahan atau resolusi adalah suatu besaran kromatografi lain yang dimanfaatkan untuk
mencerminkan daya pisah dari suatu kolom.
Resolusi, RS dirumuskan sebagai:

∆t_R=jarak antara maksimum dua puncak berdekatan

ω_A=lebar alas dari puncak yang pertama
ω_B=lebar alas dari puncak yang kedua
Beberapa faktor yang bergantung mempengaruhi resolusi, diantaranya selektifitas (α) dan jumlah pelat teoritis
(N). Ketergantungan RS dari berbagai faktor ini dapat dinyatakan dengan rumus:

Walaupun teori ini telah dapat menjelaskan proses yang terjadi pada kromotografi,
namun masih terdapat kekurangan salah satunya yang mendasar adalah bahwa teori
pelat tidak dapat memberikan petunjuk bagaimana kondisi-kondisi percobaan
kromatografi harus diatur suapa diperoleh nilai HETP yang kecil agar didaptkan
efiseinsi kolom yang optimal.
2. RATE THEORY
a. Difusi Eddy
Difusi Eddy terjadi karena perbedaan kecepatan jarak tempuh antara partikel dalam kolom yang
berhubungan dengan bentuk dan ukuran partikel dalam kolom. Difusi Eddy dapat diminimalkan dengan
menggunakan partikel yang berukuran kecil dan seragam. ( Susanti dkk)
Kecepatan zat cair yang bergerak melalui penampang garis tengah kolom dapat berbeda secara berarti,
tergantung pada struktur penyangga padat dalam kolom. Dalam kolom yang kemasan penyangganya tidak
baik, beberapa molekul akan bergerak lebih cepat dengan melewati alur yang lebih terbuka atau alur yang
tahanannya lebih rendah dan ini disebut penyaluran atau pengkanalan. Kecepatan rata-rata linarut
menentukan waktu retensinya. Pelebaran pita disebabkan oleh kecepatan aliran yang berbeda ketika melalui
kolom. Peranan difusi pusaran ditunjukkan pada persamaan

Hp = 2.ldp
Dimana
Hp : tinggi pelat yang setara dengan pelat teori yang disebabkan oleh
keragaman dalam laju aliran melalui kolom.
dp : garis tengah partikell : tetapan yang harganya mendekati 1
Harga Hp dapat diperkecil dengan menggunakan partikel yang sebaran
ukurannya sempit dan dengan cara mengemas kolom secara baik. Hp
dapat diminimumkan dengan memakai partikel bergaris tengah kecil.
 b. Difusi Longitudinal

Seperti yang diungkapkan oleh persamaan Van Deemter, laju aliran fase gerak, u, berkontribusi
terhadap tinggi pelat dengan cara yang berlawanan - meningkatkan laju aliran akan meningkatkan titik
kesetimbangan (Au 1/3 dan Cu), tetapi menurun difusi longitudinal dari partikel zat terlarut (B / u).
Plot Van Deemter (Gbr. 27-13) dapat digunakan untuk menentukan laju aliran fase gerak di mana
ketinggian pelat diminimalkan dan efisiensi kolom dimaksimalkan. Laju aliran di atas optimal dapat
digunakan untuk mengurangi waktu analisis jika resolusi yang memadai masih diperoleh. Namun, pada
laju aliran yang sangat tinggi, akan ada sedikit waktu untuk mendekati ekuilibrium, yang akan
mengarah pada pelebaran pita.
c. Transfer Massa
Perpindahan massa (mass transfer) adalah perpindahan salah satu unsur dari
daerah yang konsentrasinya lebih tinggi ke daerah yang konsentrasinya lebih
rendah. Prinsip perpindahan massa analog dengan perpindahan panas.
Perpindahan panas terjadi dalam arah yang mengurangi gradient suhu yang ada
sedangkan perpindahan massa terjadi dalam arah yang mengurangi gradien
konsentrasi yang ada. Mekanisme perpindahan massa sebagian besar bergantung
pada dinamika fasa-fasa fluidanya.
Hukum Fick tentang difusi menurut Holman (1993) dalam Rohmawati (2013),
laju difusi diberikan oleh hukum Fick tentang difusi, yang menyatakan bahwa
fluks massa dari suatu konstituen per satuan luas berbanding lurus dengan
gradien suhu.
Model Matematis Koefisien Perpindahan Massa Overall
Koefisien perpindahan massa (overall) dapat ditentukan dengan persamaan:

Luas muka antar fasa spesifik dihitung dari diameter drop rata-rata (Sauter-mean diameter)

d32 (Sauter-mean diameter) diprediksi secara empirik dengan korelasi yang diusulkan oleh Mlynek dan
Resnick’s. Korelasi ini dipresentasikan dalam persamaan:

Bilangan Weber didefinisikan sebagai persamaan:

Tegangan muka antar fasa dapat dicari dengan persamaan:

Korelasi Empirik Dalam Bentuk Bilangan Tak Berdimensi
Data koefisien perpindahan massa fasa fenol dapat diringkas menjadi sebuah
persamaan empirik dalam bentuk bilangan tak berdimensi. Melihat korelasi-korelasi
perpindahan massa yang ada di literatur, maka koefisien perpindahan massa dapat
dinyatakan sebagai bilangan Sherwood. Bilangan tak berdimensi ini dapat
didefinisikan dengan persamaan:

Bilangan Sherwood yaitu perpindahan masa antara solutdan solvendalam vessel

berpengaduk. Hasil persaman yang diperoleh dapat didekati dengan teori lapisan
film dan teori penetrasi.
Dv merupakan koefisien difusivitas diperkirakan dengan persamaan Wilke dan
Chang:
Dimana:
kc= koefisien perpindahan massa overall (kg/m2.s)
rt= laju perpindahan massa pada waktu t (kg/s)
a= luas muka antar fasa spesifik tiap unit volum
(1/m)
V = volum total (m3)
yt= fraksi berat fenol dalam ekstrak pada waktu t
y* = fraksi berat fenol dalam rafinat pada waktu t
A = luas muka antar fasa spesifik (m2)
d32= Sauter-mean diameter
dp= diameter partikel = 4,2×10-10 m
r = jari jari partikel (m)
ɷ= kecepatan putaran (rps)
dl = diameter pengaduk (m)
𝜙= fraksi volum fasa dispersi
Nwe= bilangan Weber pengaduk
Sh= bilangan Sherwood
N = kecepata pengaduk (rps)
⍴c = densitas campuran (kg/m3)
σ = tegangan muka antar fasa (N/m)
Dv= difusivitas(m2/s)
M = berat molekul pelarut (kg/kmol)
T = Suhu (K)
μ = viskositas (kg/m.s)
θ= volume molal solutpada titik didih normal
(m3/kmol)
𝜙=faktor asosiasipelarut= 1,9 untuk methanol
 F. Manfaat dalam bidang Farmasi

Manfaat kromatografi dalam bidang farmasi sangat banyak sekali khususnya dalam
bidang industri karena kromatografi dapat berperan sebagai kontrol kualitas, riset,
analisis, pemisahan skala preparasi dan pengukuran fisiko kimia pada berbagai bahan.
Pada industri juga kromatografi dapat berguna seperti pemurnian beragam bahan, dan
farmasetika. Pada laboratorium metode ini juga sering digunakan untuk pemisahan
substansi dalam jumlah sangat kecil. Contoh-contoh spesifik dari penggunaan metode
kromotografi dalam bidang farmasi antara lain:
a. Pada perusahan farmasi –penentuan jumlah bahan aktif dalam produk obat
b. Rumah sakit- mendetiksi komponen-komponen dalam darah tubuh pasien
c. Pabrik kimia- pemurnian bahan untuk membuat produk
G. Manfaat dalam kehidupam sehari hari

Manfaat kromatografi sangat luas, mulai dari kimia, biokimia,

biologi, kontrol kualitas, riset, analisis, pemisahan skala preparasi
dan pengukuran fisikokimia pada berbagai bahan. Teknik ini dapat
diterapkan dengan baik pada skala mikro dan makro. Kromatografi
dapat digunakan dalam dunia industri untuk pemurnian beragam
bahan seperti gula tebu, farmasetika dan unsur-unsur rare earths.
Metode ini juga digunakan secara luas di laboratorium untuk
pemisahan substansi dalam jumlah sangat kecil.
 DAFTAR
DAFTARPUSTAKA
PUSTAKA

Aloisia, Maria. (2017). Buku Ajar Ekstraksi dan Real Kromatografi. Yogyakarta: Deepublish.
Ismail, B., & Nielsen, S. S. (2010). Basic principles of chromatography. In Food analysis. Boston: Springer, MA.
Ismail, B. & Nielsen, S. S. (2010). Food Analysis, Food Science Texts Series. Springer Science+Business Media, LLC
Futri, Amelia Ernesta Suharno. (2011). Optimasi Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) Fase Terbalik Pada
Penetapan Kadar Nikotin Dalam Ekstrak Etanolik Daun Tembakau. Yogyakarta: Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma.
R.A. Day, JR & AL. Underwood. (2006). Analisis Kimia Kuantitatif, Jakarta: Erlangga
Rafiqi, M. (2016). Kajian Fenomena Perpindahan Massa dalam Tangki Berpengaduk pada Proses Ekstraksi Fenol dari
Larutan Tir Batu Bata Artifisial. Universitas Negeri Semarang.
Rubiyanto, D. (2016). Teknik Dasar Kromatografi. Yogyakarta: Deepublish.
Rubiyanto, D. (2017). Metode Kromotografi: Prinsip Dasar, Praktikum, dan Pendekatan Pembelajaran Kromotografi.
Yogyakarta: CV Budi Utama.
Susanti, Meri, dan Dachriyanus. (2017). Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Padang: Lembaga Pengembangan
Teknologi Informasi dan Komunikasi Universitas Andalas.
Thank you!