Jurnal Penelitian Kesehatan Pelamonia Indonesia Volume 02, Nomor 01, Januari-Juni 2019

pISSN 2620-9683, eISSN 2654-9921

UJI ESCHERICIA COLI PADA ES DAWET DI KOTA MAKASSAR

ESCHERICIA COLI TEST ON DAWET ICE IN MAKASSAR CITY

1 2 3
Taufiq Dalming , Dedy Ma’ruf , Sitti Nurazizah
1,2,3
Department of Pharmacy, Stikes Pelamonia Kesdam VII Wirabuana, Indonesia
ahta2010@gmail.com, himadipo@gmail.com, andinurazizahahmad30@gmail.com

ABSTRAK

Es Dawet yang dijajakan di pinggir jalan dan menggunakan bahan-bahan yang rentang tercemar Eschericia coli
sehingga penelitian dilaksanakan dengan tujuan untuk menguji adanya cemaran bakteri Eschericia coli pada es
dawet. Penelitian merupakan observasi laboratorium terhadap es dawet yang diperoleh dari 4 pedagang yang
-1 -2 -3
ada di kota Makassar dengan menggunakan pengenceran dengan variasi konsentrasi yaitu 10 , 10 dan 10 .
Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan metode MPN, dimana terdapat tiga pengujian yaitu uji penduga
menggunakan medium Lactose Broth (LB) dan Bromtimol Blue (BTB). Selanjutnya sampel positif dari hasil uji
penduga dilanjutkan untuk uji penguat, yang menggunakan media Eosin methylen Biru Agar (EMBA), selanjutnya
pewarnaan gram dan pengamatan menggunakan mikroskopik sehingga dapat disimpulkan es dawet tercemar
bakteri Eschericia coli. Bakteri ditandai pada uji penduga adanya gas dalam tabung durham, adanya koloni hijau
metalik dengan bintik hitam ditegah pada uji penguat dan bentuk batang panjang, pendek dan bulat berwarna
merah pada uji pelengkap.

Kata Kunci: Eschericia Coli, Es Dawet

ABSTRACT

Dawet ice is sold on the roadside and uses materials that are contaminated with Eschericia coli so that the
research is carried out with the aim to test the presence of Escherichia coli contamination on dawet ice. The
study was a laboratory observation of dawet ice which was obtained from 4 traders in Makassar using a dilution
with concentration variations of 10-1, 10-2 and 10-3. This research was conducted using the MPN method, where
there are three tests, namely the estimator test using the medium Lactose Broth (LB) and Bromtimol Blue (BTB).
Furthermore, positive samples from the results of the estimation test were continued for the reinforcement test,
which used Eosin methylen Blue Agar (EMBA) media, then gram staining and observation using microscopic so
that it could be concluded that ice dawet was contaminated with Eschericia coli bacteria. Bacteria were marked
on the gas test in the presence of durham tubes, the presence of a metallic green colony with a black spot was
confirmed in the reinforcement test and the shape of the long, short and round red bars in the complementary
test.

Keywords: Eschericia Coli, Dawet Ice

PENDAHULUAN

Es dawet dijajakan tanpa kemasan khusus,
diproduksi dan dipersiapkan di tempat penjualannya
sehingga pengawasan sulit dilakukan (Andrianto &
Nova, 2011). Sedangkan makanan dan minuman
dinilai baik bila telah memenuhi persyaratan
Kepmenkes RI No. 942 /Menkes /SK/VII/2003
Tentang Persyaratan Kesehatan Makanan Jajanan
(BPOM, 2008).
Bakteri dalam es dawet akan menimbulkan
gangguan kesehatan seperti, sakit perut, mulas,
muntah, diare, dan penyakit infeksi lain yang dapat
berakibat fatal pada kehidupan. Bakteri yang
mungkin ditemukan diproduk makanan khususnya
es dawet adalah jenis Eschericia coli. Escherichia
coli termasuk bakteri patogen yang sering
menyebabkan keracunan pangan dan juga salah
satu mikroba indikator sanitasi. Adanya Escherichia
coli pada pangan dapat menunjukkan praktek
sanitasi lingkungan yang buruk (Wijaya, 2009).
Sumber cemaran Escherichia coli dapat
melalui air yang digunakan, para pekerjanya, serta
alat dan proses pembuatannya yang tidak hygiene.
Kota Makassar merupakan salah satu pusat
perbelanjaan terbesar dimana banyak terdapat
berbagai macam pedagang salah satunya
pedagang jajanan es dawet. Lingkungan pedagang
jajanan es dawet sendiri tidak terlalu begitu
hygiene.
METODE
Jenis penelitian ini adalah penelitian
Observasi Laboratorium. Penelitian ini telah
dilaksanakan pada bulan juni sampai Juli 2018.
Tempat penelitian dilaksanakan di Laboratorium
Farmasi. D III Farmasi Stikes Pelamonia Kesdam
VII / Wirabuana.
Dalming, Ma’ruf, Nurazizah : Uji… JPKPI Vol 02 No 01 Jan-Jun 2019, ISSN 2620-9683, pISSN 2654-9921
Metode Kerja
Metode kerja dilakukan dengan tahap (1)
Sterilisasi Alat. Semua alat yang digunakan melalui
tahap sterilisasi yang bertujuan mematikan semua
bentuk kehidupan mikroorganisme yang ada pada
alat. (2) Pembuatan Media Lactose Broth (LB).
Ditimbang bahan yang digunakan sebanyak 2,6
gram dimasukkan ke dalam Erlenmeyer, dilarutkan
dengan air suling hingga volume 200 ml kemudian
di aduk hingga homogen. Disterilkan dalam autoklaf
o
pada suhu 121 C selama 15 menit. (3) Pembuatan
medium Eosin methylen Biru Agar (EMBA).
Ditimbang bahan yang digunakan dimasukkan ke
dalam Erlenmeyer, dilarutkan dengan air suling
hingga volume 250 ml kemudian di aduk hingga
homogen. Disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121
o
C selama 15 menit Dibagi kedalam cawan petri
kira-kira 15 cc dan dibiarkan sampai beku.
Alat dan Bahan Penelitian
Alat yang digunakan pada penelitian antara
lain : Autoclave, Api Bunsen, Batang pengaduk,
Erlenmeyer, Gelas ukur, Gelas kimia, Inkubator,
Kapas, Mikropipet, Mikroskop, Ose bulat/lurus,
Objek glass, Objek dglass, Spoit 1 cc, Tabung
reaksi, Tabung durham, Timbangan analitik. Bahan
yang digunakan pada penelitian antara lain : Aqua
Pro Injeksi, Aquades, Alkohol 70%, Bromtimol Blue
(BTB), Es Dawet, Eosin methylen Biru Agar
(EMBA), Lactose Broth (LB), Lugol, Safranin.
Prosedur Penelitian
Prosedur penelitian dilakukan dengan tahap
(1) Pengambilan Bahan Uji. Rumput Laut Coklat
(Sargassum sp.) diambil di Kec. Binamu, Kab.
Jeneponto. Rumput laut yang diambil berumur 1-2
bulan. Waktu pengambilan rumput laut dilakukan
pada pagi hari. (2) Pengolahan Bahan Uji. Rumput
Laut Coklat (Sargassum sp.)segar yang telah
diperoleh selanjutnya dibersihkan dengan
menggunakan air mengalir sampai pasir dan
kotoran yang menempel hilang. Selanjutnya,
dipotong kecil-kecil dan dikering-anginkan
kemudian dihaluskan dengan menggunakan
blender sampai menjadi serbuk halus. (3) Ekstraksi
Bahan dengan Metode Maserasi. Serbuk Rumput
Laut Coklat (Sargassum sp.) sebanyak 400 g
dimasukkan ke dalam wadah maserasi kemudian
ditambahkan dengan cairan penyari etanol 96%
hingga serbuk simplisia terendam seluruhnya
sambil diaduk dengan pengadukan setiap 1x24 jam.
Selanjutnya, wadah maserasi ditutup dan
dibiarkan selama 3x24 jam pada temperatur kamar
yang terlindung cahaya matahari. Setelah 3 hari,
saring dengan menggunakan kertas saring atau
kain putih. Kemudian cairan penyari diganti dengan
pelarut yang baru dan di maserasi kembali hingga
simplisia tersari sempurna. Ekstrak cair yang
diperoleh dari proses maserasi kemudian diuapkan
untuk mendapatkan ekstrak kental. (4) Pembuatan
Suspensi Na-CMC 1 %. Na-CMC ditimbang
sebanyak 1 g lalu dimasukkan sedikit demi sedikit
dalam 50 ml air panas dengan suhu 70˚C, sambil
diaduk dengan batang pengaduk hingga homogen.
Kemudian volumenya dicukupkan dengan aquades
hingga 100 ml.
100
Tahap (5) Penyiapan Zat uji. Ekstrak
Rumput Laut Coklat (Sargassum sp.) dengan
konsentrasi 1,5% b/v, 2% b/v dan 2,5% dibuat
suspensi. Untuk konsentrasi 1,5% b/v dibuat
dengan cara ekstrak Rumput Laut Coklat ditimbang
sebanyak 1,5 g kemudian disuspensikan dengan
Na-CMC 1% b/v hingga 100 ml. Untuk pembuatan
ekstrak Rumput Laut Coklat dengan konsentrasi 2%
b/v dan 2,5% b/v digunakan cara yang sama
dimana ekstrak Rumput Laut Coklat ditimbang
masing-masing sebanyak 2 dan 2,5 g. (6)
Pembuatan Aloksan. Sebanyak 50 mg aloksan
dimasukkan kedalam labu ukur 100 ml, lalu
dicukupkan volumenya dengan NaCl 0,9% hingga
100 ml. (7) Pembuatan Suspensi Glibenklamid
0,002% b/v. Sebanyak 10 tablet glibenklamid
ditimbang kemudian dihitung bobot rata-rata tiap
tablet. Serbuk tablet glibenklamid ditimbang 0,13 g
glibenklamid kemudian ditambahkan larutan Na-
CMC 1% b/v sedikit demi sedikit sambil diaduk
hingga homogen. Dicukupkan volumenya dengan
larutan Na-CMC 1% b/v hingga 100 ml.
Tahap (8) Pemilihan Hewan Uji. Hewan uji
yang digunakan dalam penelitian ini adalah mencit
jantan sehat yang berumur 2-3 bulan dengan berat
rata-rata 20-30 g. (9) Penyiapan Hewan Uji. Mencit
yang digunakan dalam penelitian sebanyak 15 ekor,
dan dikelompokkan menjadi 5 kelompok masing-
masing kelompok terdiri dari 3 ekor mencit.
Kelompok 1 sebagai kontrol negatif, kelompok 2-4
sebagai kelompok ekstrak/perlakuan dan kelompok
5 sebagai kontrol positif. (10) Perlakuan terhadap
Hewan Uji. Mencit dipuasakan selama 4-8 jam, lalu
ditimbang dan diukur kadar glukosa normal.
Kemudian diinduksi dengan larutan aloksan secara
intraperitonial selama 5 hari dengan takaran 1 ml /
30 g bobot badan mencit. Kemudian diambil
darahnya melalui vena caudalis untuk ditentukan
kadar glukosa setelah diinduksi. Selanjutnya
diberikan perlakuan terhadap masing-masing
kelompok hewan uji sesuai dengan konsentrasinya
yaitu Na-CMC 1%, ekstrak Rumput Laut Coklat 1,5
b/v, 2% b/v dan 2,5% b/v. Pemberian dilakukan
secara oral dengan takaran 1 ml / 30 g bobot badan
mencit. Setelah itu diambil darahnya melalui vena
caudalis dan ditentukan kadar glukosa darahnya
dengan menggunakan alat glukometer tiap 30 menit
selama 90 menit sebagai kadar glukosa darah
pasca perlakuan.
Tahap (11) Penentuan Kadar Glukosa
Darah. Sebelum pengambilan darah, terlebih
dahulu glukometer diaktifkan kemudian strip
dimasukkan ke dalam glukometer. Darah diambil
melalui pembuluh darah vena pada ujung ekor
mencit kemudian diteteskan pada strip glukometer.
Tetesan darah yang mengandung glukosa dan
beraksi dengan zat tertentu yang terkandung dalam
strip (glukosa oksidase) kemudian secara otomatis
dalam waktu 10 detik kadar glukosa darah akan
terukur dan hasilnya dapat dibaca dimonitor
glukometer. (12) Pengolahan dan Analisis Data.
Data yang telah dikumpulkan dari hasil
pengamatan, kemudian di analisis secara statistic
dengan metode Analisis Of Vanans (ANOVA) dan
dilanjutkan uji Newman-Keuls.
Dalming, Ma’ruf, Nurazizah : Uji… JPKPI Vol 02 No 01 Jan-Jun 2019, ISSN 2620-9683, pISSN 2654-9921
HASIL
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan
dilaboratorium terpadu terhadap 4 macam sampel
jajanan es dawet yang beredar di Kota Makassar
dengan mengambil 4 penjual es, maka diperoleh
hasil penelitian yang dapat dilihat pada tabel 1 dan
tabel 2.
PEMBAHASAN
Dalam penelitian ini sampel yang digunakan
adalah jajanan es dawet yang diambil dari 4 penjual
jajanan es dawet yang beredar di Kota Makassar.
Es dawet tersebut merupakan jajanan yang
langsung bisa dikonsumsi oleh masyarakat tanpa
harus melakukan proses pengolahan lagi.
Mengingat es dawet juga merupakan salah satu
media pertumbuhan mikroorganisme, maka perlu
dilakukan uji mikrobiologis. Penelitian ini
dimaksudkan untuk mengetahui adanya cemaran
bakteri Escherichia coli pada jajanan es dawet
tersebut. Pengerjaan sampel dilakukan dengan
menggunakan pengenceran dengan variasi
-1 -2 -3
konsentrasi yaitu 10 , 10 dan 10 . Hal ini
dilakukan untuk mendapat konsentrasi yang
berbeda pada tiap pengenceran dan mengurangi
tingkat kontaminasi sehingga memudahkan
pengamatan bakteri atau koloni yang tumbuh.
Pada Metode MPN menggunakan 3 Penguji
yaitu Uji penduga (Presumtive Test), Uji penguat
(confirmed test) dan Uji pelengkap. Hasil penelitian
pada pemeriksaan dengan pengujian pertama yaitu
Hasil uji penduga (Presumtive Test) pada tabel 1
dengan Pengamatan yang terjadi pada tabung
reaksi menggunaan media Lactose Broth (LB) dan
Bromtimol Blue (BTB) untuk hitung MPN coliform
sampel dengan mencocokkan kombinasi MPN
tersebut pada tabel MPN, dari keempat sampel
yang diamati semuanya menunjukkan adanya
pertumbuhan bakteri coliform dengan adanya
kekeruhan dan adanya gas dalam tabung durham.
Jumlah nilai bakteri yang dihasilkan pada sampel 1
adalah >1100 koloni/ml, sampel 2 adalah >1100
koloni/ml, sampel 3 adalah >1100 koloni/ml dan
sampel 4 adalah >1100 koloni/ml. Total untuk
sampel es dawet yaitu <1100 koloni/ml dan nilai
MPN bakteri coliform yaitu <3 MPN/ml.
Maka keempat sampel es dawet tersebut
sudah tidak memenuhi persyaratan untuk di
konsumsi karena melebihi batas maksimum total
bakteri coliforom yang telah ditetapkan. Hal tersebut
dapat disebabkan oleh beberapa faktor,
diantaranya adalah proses pembuatan yang tidak
aseptis, wadah yang digunakan tidak hygiene dan
penjualan yang berada di pinggir jalan
mengakibatkan es dawet mudah tercemar bakteri
coliforom serta penyiapan sampel yang kurang
baik.
Hasil Uji Penguat (confirmed Test) pada
tabel 2 dengan Pengamatan yang terjadi pada
cawan Petri menggunaan media Eosin methylen
Biru Agar (EMBA) sebagai media selektif. Yang
dimana sampel diinokulasikan kedalam cawan petri
yang berisi media EMBA.
101
0
Kemudian diinkubasi pada suhu 37 C
selama 1x24 jam. Hasil yang positif mengandung
Escherichia coli ditandai dengan adanya koloni
hijau metalik dengan bintik hitam ditengah. Adapun
hasil pengujian sampel 1, 2, 3 dan 4 dengan
menggunakan media EMBA yaitu pada sampel 1
memberikan warna pink, merah bahwa pada
sampel 1 terdapat bakteri selain Esherichia coli
sedangkan pada sampel 2 memberikan warna
merah dengan bintik hitam, bahwa pada sampel 2
tercemar oleh bakteri Esherichia coli, sampel 3 dan
4 memberikan warna hijau, pink dan hitam pada
koloni, bahwa pada sampel 3 dan 4 positif tercemar
bakteri Esherichia coli. Setelah itu dilakukan
pewarnaan bakteri dengan menggunakan
mikroskop untuk lebih memastikan bahwa pada
sampel 1,2, 3 dan 4 positif tercemar Escherichia
coli. Pada pewarnaan sederhana ini diperoleh hasil
yang sama dengan media selektif yaitu sampel 1,
sampel 2, sampel 3 dan sampel 4 positif
kemungkinan tercemar Escherichia coli dengan
bentuk batang panjang, batang pendek dan bulat
dan berwarna merah.
Dari hasil analisis kuantitatif yang meliputi
pengujian Angka Most Probable Number (MPN)
coliform bakteri, identifikasi bakteri hingga
pewarnaan gram sederhana menunjukkan bahwa
keempat dari sampel tersebut positif tercemar
Esherichia coli. terdapat cemaran bakteri E-coli
ditandai dengan adanya koloni hijau metalik dengan
bintik hitam ditengah pada cawan petri. Pada uji
pelengkap bakteri diberikan pewarnaan gram
sederhana dengan larutan Gentian violet, Lugol,
Etanol 70% dan Safranin kemudian di amati
menggunakan mikroskop.
KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan dari hasil penelitian dan
pembahasan disimpulkan bahwa es dawet yang
ada di Kota Makassar terdapat cemaran
Escherichia coli yang diuji pada metode MPN :
Pada uji penduga dengan media selektif yaitu BL +
BTB keempat sampel terdapat cemaran bakteri E-
coli ditandai dengan adanya perubahan warna dan
adanya gas pada tabung durham. Pada uji penguat
keempat sampel. Diharapkan pemastian hasil
penelitian ini dengan metode lain dan juga
memperhatikan proses pengerjaan yang steril.
DAFTAR PUSTAKA
Andrianto & Nova. 2011. Bisnis Dawet Ayu
Banjarnegara
BPOM. 2008. Keamanan Pangan Jajanan Anak
Sekolah (PJAS) Serta Upaya
Penanggulangannya. Info POM Vol. 9, No.
6, November (2008) Jakarta: Badan
Pengawas Obat Dan Makanan. Bakterial
terhadap Bakteri Gram Positif dan Gram
Negatif. JKKI – Jurnal Kedokteran dan
Kesehatan Indonesia
Wijaya, R. 2009. Penerapan Peraturan Dan Praktek
Keamanan Pangan Jajanan Anak Sekolah
Di Sekolah Dasar Kota Dan Kabupaten
Dalming, Ma’ruf, Nurazizah : Uji… JPKPI Vol 02 No 01 Jan-Jun 2019, ISSN 2620-9683, pISSN 2654-9921

Bogor. Skripsi.Bogor: Institut Pertanian

Bogor tercemar Eshericia coli

LAMPIRAN

Tabel 1. Hasil Uji Penduga (Presumtive Test) Menggunakan Tabel

Nilai MPN pada media Broth (LB) dan Bromtimol Blue (BTB)

Pengamatan yang Terjadi pada

Sampel Tabung rEaksi
-1 -2 -3 Tabel Nilai MPN
10 10 10
Sampel 1 +++ +++ +++ >1100 koloni/ml
Sampel 2 +++ +++ +++ >1100 koloni/ml
Sampel 3 +++ +++ +++ >1100 koloni/ml
Sampel 4 +++ +++ +++ >1100 koloni/ml
Sumber : Data Primer

Tabel 2. Hasil Uji Penguat (confirmed test) dan Uji Pelengkap dengan Melihat Warna Koloni Pada Media Eosin
methylen Biru Agar (EMBA) dan Bentuk Koloni Dengan Pengamatan Mikroskop

Pengamatan yang Hasil Pengecetan Gram

Sampel
Terjadi pada Cawan Petri Warna Koloni Bentuk Warna Gram
-1 -2 -3 Batang
Sampel 1 10 10 10 Pink, merah Merah Negatif (-)
pendek
Batang
-1 -2 -3
Sampel 2 10 10 10 Merah, hitam panjang, Merah Negatif (-)
bulat
Batang
-1 -2 -3 Hijau, pink da panjang
Sampel 3 10 10 10 Merah Negatif (-)
hitam Batang
pendek
Batang
-1 -2 -3 Hijau, pink dan panjang
Sampel 4 10 10 10 Merah Negatif (-)
hitam Batang
pendek
Sumber : Data Primer

102