FAJR Vol. No.

Bulan Tahun

MANUSKRIP Jurnal Riset Kefarmasian

ISSN: ___________

DETEKSI CEMARAN Coliform PADA MINUMAN SUSU KEDELAI DENGAN

METODE Most Probable Number (MPN)

I Wayan Eka Wiliyana1*; Hamidah Sri Supriati2; Muhammad Fathurrachman Mantali3

1,2,3
Program Studi D3 Farmasi Universitas Muhammadiyah Manado (95249)
*koresponden, Email: wayaneka282003@gmail.com

ABSTRAK
Susu kedelai adalah minuman yang diperoleh dari sari kedelai yang kaya akan nutrisi. Salah
satu kontaminan yang sering dijumpai pada makanan atau minuman yaitu Coliform bakteri ini
dapat menyebabkan gejala diare. Tujuan penelitian ini yakni untuk mengetahui ada atau
tidaknya cemaran bakteri Coliform pada susu kedelai yang dijual di Pasar Kota Manado bagian
Utara. Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan metode MPN (Most Probable Number).
Hasil penelitian menunjukan bahwa pada lima sampel susu kedelai yang diujikan negatif
mengandung Coliform hal tersebut dilihat dari tidak terbentuknya gelembung pada tabung
durham yang menunjukan adanya Escherichia coli pada sampel tersebut atau mengandung <
3.0 MPN/g. Dari hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa lima sampel yang diambil dari lima
tempat yang berbeda memenuhi syarat susu yang aman untuk dikonsumsi.

Kata Kunci : Susu kedelai, Most Probable Number (MPN), Coliform

ABSTRACT
Soy milk is beverage by soybean juice with rich of nutrients. One of the contained in is Coliform,
this bacteria can cause the symptoms of diarrhea. The purpose of this study was to determine
the contamination of Coliform bacteria in soy milk sold in the northern part of Manado Market.
This research conducted using MPN (Most Probable Number) method. The results showed
that the five samples of soy milk, negative for Coliform. It could be seen from the absence of
bubbles in the Durham tube indicating the presence of Escherichia coli in the sample or
containing < 3.0 MPN/g. From these results it can be concluded the five samples from five
different places is safe to consumption.

Keywords : Soy milk, Most Probable Number (MPN), Coliform

Diajukan: Diterbitkan oleh:

Revisi: Program Studi Farmasi
Diterima: Universitas Muhammadiyah Manado

1
FAJR Vol. No. Bulan Tahun
PENDAHULUAN
Susu kedelai adalah minuman yang
diperoleh dari sari kedelai, yang kaya akan
nutrisi. Susu kedelai bukan suatu obat,
tetapi minuman tambahan yang dapat
menjaga kondisi tubuh agar tetap sehat
sehingga tidak mudah terserang penyakit.
Bahan baku yang digunakan adalah biji
kedelai, dan sebagai tambahannya
digunakan pemanis dan pengaroma.
Protein susu kedelai memiliki susunan
asam amino yang hampir sama dengan
susu sapi sehingga susu kedelai dapat
digunakan sebagai pengganti susu sapi
bagi orang yang alergi terhadap protein
hewani (Cahyadi, 2007).
Proses pembuatan susu kedelai
yaitu kacang kedelai direndam semalaman
selama 18 jam dalam air hangat untuk
menghasilkan rasio kacang:air (1:3).
Selama perendaman kacang kedelai pada
suhu kamar, larutan natrium bikarbonat
0,5-1% juga digunakan untuk mengurangi
bau langu atau bau yang tidak disenangi
oleh sebagian masyarakat pada kacang
kedelai. Kacang kemudian dikeringkan,
dibilas dengan air minum dan direbus
selama 5 menit dalam air mendidih.
Kacang dikeringkan, dikupas kulitnya dan
digiling dengan air minum dalam blender.
Bubur yang dihasilkan disaring melalui kain
muslin dan ekstrak (susu) yang diperoleh
direbus selama 15 menit (Banerjee, 2019).
Coliform merupakan bakteri yang hidup
di saluran pencernaan manusia maupun
hewan. Bakteri ini merupakan bakteri yang
dapat tumbuh pada keadaan aerob
maupun anaerob yang sering dijumpai.
Coliform merupakan bakteri gram negatif,
berbentuk batang pendek (coccobasil)
dengan ukuran 0,4-0,7 nm bersifat motil
(dapat bergerak), tidak
2
memiliki nucleus, organel eksternal yakni
vili yang merupakan filamen tipis dan lebih
panjang tidak berspora, positif pada tes
indol, glukosa dan sukrosa (Romadhon,
2016).
Metode MPN adalah metode
enumerasi atau teknik menghitung jumlah
mikroorganisme yang menggunakan data
dari hasil pertumbuhan mikroorganisme
pada medium cair spesifik dalam seri
tabung yang ditanam dari sampel padat
atau cair sehingga dihasilkan kisaran
jumlah mikroorganisme dalam jumlah
perkiraan terdekat. Metode MPN memiliki
metode lanjutan yaitu uji praduga, uji
penegas dan uji pelengkap. Pada uji
praduga dimana sampel dicampurkan
dengan media Lactose Broth (LB) lalu di
sterilkan dalam erlemeyer, dan dimasukan
sampel dalam tabung reaksi 1 ml hasil dari
pengenceran lalu tambahkan medium LB
sebanyak 9 ml lalu masing-masing tabung
dari sampel pengenenceran 0,1 ppm, 0,01
ppm, 0,001 ppm tetesi media Bromtimol
Blue (BTB) sebanyak 3 tetes dan
masukkan tabung durham kocok dan
inkubasi 1x24 jam setelah diinkubasi dan di
amati bila warna medium berubah hijau
menjadi kuning dan ada gas dalam tabung
durham maka positif terdapat bakteri
Escherichia coli. Lalu setelah itu dilanjutkn
dengan uji penguat Siapkan medium Eosin
Methylen Biru Agar (EMBA) steril dalam
erlemeyer tuangkan medium Eosin
Methylene Biru Agar (EMBA) pada cawan
petri dengan memanaskan tepi cawan
terlebih dahulu, diamkan hingga medium
berbetuk agar panaskan ose bulat terlebih
dahulu kemudian masukkan dalam tabung
reaksi yang berisi sampel cincau hitam lalu
goreskan pada cawan petri secara tipis dan
merata, merata kemudian inkubasi pada
FAJR Vol. No. Bulan Tahun
suhu 37º C, pada 1 x 24 jam pertama, amati
perubahan yang terjadi yaitu reaksi positif
apa bila terdapat koloni yang berwarna
hijau metalik maka positif terdapat Coliform.
Kemudian dilakukam uji pelengkap dengan
menginokulasikan koloni bakteri pada
medium agar dengan cara digoreskan dan
diinkubasikan selama 24 jam pada suhu
35℃. Pembenihan pada media agar
menjadi berwarna merah menyala
dikarenakan adanya pertumbuhan Coliform
(Ma’ruf, 2019).
Hasil dari metode MPN adalah nilai
MPN. Nilai MPN adalah perkiraan jumlah
unit tumbuh (growth unit) atau unit
pembentuk koloni (colony forming unit)
dalam sampel. Namun pada umumnya,
nilai MPN juga diartikan sebagai perkiraan
jumlah individu bakteri. Satuan yang
digunakan, umumnya per 100 mL atau per
gram. Jadi misalkan terdapat nilai MPN
10/gram dalam sebuah sampel air, artinya
dalam sampel air tersebut diperkirakan
setidaknya mengandung 10 Coliform pada
setiap gramnya. Makin kecil nilai MPN nya,
maka air tersebut makin tinggi kualitasnya,
dan semakin layak minum. Metode MPN
mempunyai limit kepercayaan 95%
sehingga pada setiap nilai MPN, terdapat
jangkauan nilai MPN terendah dan nilai
MPN tertinggi (Dwidjosaputro, 2010).
Berdasarkan uraian di atas, maka
peneliti akan melakukan penelitian yang
berjudul “Deteksi bakteri Coliform pada
minuman susu kedelai dengan metode
MPN (Most Probable Number) yang dijual
di pasar Kota Manado bagian utara”.
3
METODE
Alat dan Bahan
Alat yang digunakan yaitu, tabung
reaksi, rak tabung reaksi, botol media,
gunting, tabung durham, jarum ose,
bunsen, pH meter, timbangan analitik, pipet
ukur 1 ml, 2 ml, 5 ml, dan 10, lemari steril,
lemari pendingin, inkubator, oven, autoklaf,
alumunium foil.. Bahan yang digunakan
dalam penelitian ini adalah Sampel (susu
kedelai), aquades, Lactose broth (LB),
Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB)
dan Eosin Methylen Blue Agar (EMBA).
PROSEDUR PENELITIAN
Sterilisasi alat
Alat-alat kaca berupa gelas beker,
gelas ukur dan tabung reaksi dicuci bersih
terlebih dahulu lalu dikeringkan dan
disterilisasi menggunakan autoklaf dengan
tekanan 2 atm dan suhu 121⁰C selama 15
menit. Semua alat yang akan disterilkan ke
dalam oven dibungkus terlebih dahulu
dengan alumunium foil. Kemudian
dimasukan ke dalam oven selama 1 jam
pada suhu 150⁰C (Agustin, 2019).
Pengambilan Sampel
Pengambilan sampel susu kedelai
diambil di pasar kota Manado bagian utara.
Susu kedelai diambil sebanyak 5 botol, 3
botol dari modern market (pasar swalayan)
dan 2 botol diambil dari pasar tradisional,
kemudian dibawa ke Laboratorium
Mikrobiologi, Fakultas Ilmu Kesehatan,
Universitas Muhammadiyah Manado,
untuk dianalisis cemaran bakteri Coliform.
FAJR Vol. No. Bulan Tahun
Pembuatan Media
Media Lactose Broth (LB)
Menimbang media LB sebanyak 13 g
dan dilarutkan dalam 500 ml aquades,
melarutkan ke dalam erlenmeyer, lalu
digojok sampai larut. Memipet masing-
masing 10 ml di dalam tabung reaksi yang
berisi tabung durham. Menutupi tabung
reaksi dengan kapas. Media disterilkan
pada autoklaf pada suhu 121ºC selama
kurang lebih 15 menit (Alfiyah, 2016).
Media Brilliant Green Lactose Bile Broth
(BGLBB)
Menimbang 20 gram media BGLBB
dalam Erlenmeyer 500 ml kemudian
dilarutkan dengan aquadest dicukupkan
volumenya sampai 500 ml, kemudian
dihomogenkan hingga larut dimasukan ke
dalam autoklaf untuk disterilkan pada suhu
121℃ selama 15 menit didinginkan dan
disimpan dalam lemari pendingin (Alfiyah,
2016).
Media Eosin Methylen Blue Agar (EMBA)
Media EMBA ditimbang sebanyak 1,5
gram, lalu dimasukkan ke dalam gelas
beker yang telah berisi 40 ml aquadest,
kemudian panaskan pada hotplate selama
15 menit 150˚C. Setelah itu masukkan ke
dalam tabung erlenmeyer 250 ml, dan tutup
dengan kapas. Kemudian sterilisasi di
autoklaf selama 1-2 jam, kemudian tuang
media kedalam cawan petri kurang lebih 20
ml kemudian didinginkan, bila telah
mengeras masukkan kedalam kulkas
(Alfiyah, 2016).
Penyiapan Sampel
Sampel sebanyak 10 ml diambil dan
dimasukkan ke dalam erlenmeyer yang
berisikan 90 ml aquades. Sebanyak 1 ml
diambil dan dimasukkan ke dalam tabung
reaksi yang berisikan 9 ml aquades
sebagai pengenceran 0,1 ppm kemudian
4
dihomogenkan, selanjutnya dibuat
pengenceran 0,01 ppm dan 0,001 ppm
dengan cara yang sama (Agustin, 2019).
Pengujian Most Probable Number
(MPN)
Presumtive test (Uji praduga)
Sampel hasil pengenceran 0,1 ppm,
0,01 ppm dan 0,001 ppm diambil sebanyak
1 ml dan masing-masing dimasukkan ke
dalam 3 tabung yang berisi 9 ml media
Lactose Broth (LB). Selanjutnya setiap
tabung yang berisi sampel diinkubasi
selama 24-48 jam dengan suhu 37⁰C.
Setelah diinkubasi jumlah tabung yang
terdapat gas diamati dan dicatat (Agustin,
2019).
Comfirmatory test (Uji penegasan)
Dari setiap tabung yang menunjukan
gas postif pada uji praduga dikocok dan
masing-masing diambil 1-2 ose, kemudian
diinokulasi pada suhu 37℃ selama 24-48
jam, kemudian amati terbentuknya asam
dan gas pada tabung durham. Adanya
asam dan gas disebabkan karena
fermentasi laktosa oleh Coliform. Asam
dilihat dari perubahan warna hijau pekat
dan gas dapat dilihat dalam tabung durham
berupa gelembung udara, kemudian catat
tabung BGLBB yang postif dan hasilnya
dirujuk ke tabel MPN (Romadhon, 2019).
Complementory test (Uji kepastian)
Ditanam 1-2 ose biakan yang positif
pada Brilliant Green Lactose Bile Broth
(BGLBB) ke pembenihan Eosin Methylen
Blue Agar (EMBA) dalam cawan petri,
Kemudian diinkubasi selama 18-24 jam
pada suhu 37℃, Diamati dan pilih koloni
yang berwarna menyala (Romadhon,
2019).
Analisis Data
Analisis data dilakukan dengan
mendeskripsikan data kuantitatif dan hasil
FAJR Vol. No. Bulan Tahun
pengujian berupa terbentuknya gas pada
tabung durham untuk bakteri pembentuk
gas kemudian dibandingkan dengan tabel
MPN.
Hasil dan Pembahasan
Hasil
Sampel yang diujikan
menggunakan metode MPN (Most
Probable Number) dalam 3 seri tabung
pengenceran yaitu 0,1 ppm, 0,01 ppm dan
0,001 ppm. Hasil positif uji ini ditandai
dengan adanya gas di rongga tabung
durham yang terbalik di dalam tabung
reaksi. Hasil yang didapatkan dari masing-
masing sampel dari berbagai tempat yaitu
sampel 1 dari Kecamatan Tuminting (Toko
Galaxy), sampel 2 dari pasar Tuminting,
sampel 3 Pasar Bailang11, sampel 4 Pasar
45, sampel 5 Freshmart Singkil adalah
negatif yang ditandai dengan tidak adanya
rongga di dalam rongga tabung durham
yang terbalik di dalam tabung reaksi. Hasil
uji praduga (Presumtive test) pada sampel
susu kedelai dapat dilihat pada tabel di
bawah ini:
Tabel 1. Hasil Identifikasi
5
Hasil deteksi Coliform pada susu kedelai
yang diambil dari beberapa pasar
tradisional dan modern market menunjukan
hasil negatif adanya bakteri Coliform hal
tersebut ditandai dengan tidak
terbentuknya gas atau rongga yang
terdapat pada tabung durham yang terbalik
di dalam tabung reaksi.
Pembahasan
Pada penelitian ini dilakukan
pemeriksaan deteksi ada atau tidaknya
Coliform pada susu kedelai yang dijual di
pasar Kota Manado Bagian Utara.
Pengujian kualitas susu kedelai tersebut
dapat dilakukan berdasarkan analisis
adanya Coliform. Penelitian ini
menggunakan metode MPN yang mana
setiap sampelnya akan dianalisis ada atau
tidaknya Coliform yang terdapat di
dalamnya. Jumlah sampel yaitu 5 yang tiap
sampelnya telah diberikan tanda, sampel 1
yaitu sampel yang diambil dari kecamatan
Tuminting, sampel 2 dari pasar Tuminting,
sampel 3 dari pasar Bailang, sampel 4 dari
pasar 45, sampel 5 dari Singkil.
Uji praduga (Presumtive test) pada uji
ini menggunakan media Lactose Broth
sebagai media tumbuhnya bakteri. Hasil
postif terjadi jika fermentasi laktosa oleh
bakteri Coliform sehingga akan muncul gas
yang dapat dilihat berupa rongga kosong
pada bagian atas tabung durham terbalik di
dalam tabung reaksi. Tabung yang positif
pada uji praduga nantinya akan dilanjutkan
ke uji selanjutnya yaitu uji penegasan
(Comfirmatory test). Pada penelitian ini
tidak dilanjutkan ke uji selanjutnya karena
pada uji praduga ke 5 sampel susu kedelai
yang diujikan tidak mengandung bakteri
Coliform yang ditandai tidak adanya
rongga kosong pada bagian atas tabung
durham terbalik di dalam tabung reaksi.
Dari data sekunder yang didapatkan yaitu
FAJR Vol. No. Bulan Tahun
tidak terdapat rongga pada tabung durham
terbalik di dalam tabung reaksi atau negatif
mengandung Coliform. Hal tersebut dapat
dipastikan bahwa cara pengolahan,
kebersihan alat dan penggunaan air
pencuci yang bersih dan sangat
diperhatikan oleh produsennya.
Bahaya Coliform yang terkontaminasi
pada makanan atau minuman dapat
menyebabkan timbulnya gangguan
pencernaan yaitu sakit perut, diare (BAB
lebih dari tiga kali dalam sehari dengan
konsistensi berair atau encer), dan dapat
disertai mual, muntah, demam, kejang.
Coliform menjadi patogen jika jumlah
bakteri ini dalam saluran pencernaan
meningkat atau berada di luar usus dan
Escherichia coli dapat menghasilkan
enterotoksin yang menyebabkan penyakit
diare. Coliform dapat masuk ke dalam
tubuh manusia terutama melalui konsumsi
pangan yang tercemar, misalnya daging
mentah, daging yang dimasak setengah
matang, susu mentah, dan cemaran fekal
pada air dan pangan (Lestari, 2021).
Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat
disimpulkan bahwa sampel susu kedelai
yang diambil dari tempat yang berbeda dan
telah diberi masing-masing label negatif
mengandung Coliform, dengan
menggunakan metode MPN (Most
Probable Number) yaitu pada uji praduga
(Presumtiv test) menunjukan bahwa dari
lima sampel yang telah diujikan tidak
terdapat adanya gas atau rongga yang
terdapat di tabung durham dengan posisi
terbalik di dalam tabung reaksi.
Saran
Peneliti selanjutnya diharapkan dapat
melakukan penelitian ini dengan
memperluas tempat pengambilan sampel
serta dengan menggunakan metode yang
berbeda.
Daftar Pusaka
Agustin. 2019. Cemaran Bakteri Gram
negatif Pada Jajanan Siomay Di Kota
Kendari. Jurnal. Kendari : Jurusan
Analis Kesehatan Poltekkes
Kemenkes Kendari.
Alifyah, N. 2016. Identifikasi Bakteri
Escherichia coli pada Susu Kedelai
yang dijual di Toko-toko Desa
Sumobito Jombang. Karya Tulis
Ilmiah. Jombang : Program studi D3
Analis kesehatan STIKES Insan
Cendekia Medika Jombang.
Banerjee, S. 2019. Review on Soy Milk and
Other Soy Milk Based Products.
Jurnal. Karnataka : Departement of
Agricultural and food Engineering
Instittut of Technology India
Cahyadi, W. 2007. Teknologi dan Khasiat
Kedelai. Bumi Aksara. Jakarta
Dwidjosaputro. 2010. Dasar-dasar
Mikrobiologi. Djambatan
Perpustakaan I. Jakarta
Lestari, P. 2021. Identifikasi Bakteri
Escherichia coli Pada jajanan Saus
Cilok yang dijual di Area Sekitar
Kampus Stikes Muhammadiyah
Manado Menggunakan Metode MPN
(Most Probable Number). Karya Tulis
Ilmiah. Manado : Program studi D3
Farmasi STIKES Muhammadiyah
Manado
Ma’aruf, D. 2019. Escherichia coli Pada
Cincau Hitam Di pasar Katangka
Kota Makassar. Jurnal. Makassar:
Jurusan Farmasi Stikes Pelamonia
Kesdam VII/Wirabuana
Romadhon, Z. 2016. Identifikasi Bakteri
Escherichia coli dan Salmonella sp
Pada Siomay yang Dijual Di Kantin
SD Negeri Di Kelurahan Pisangan,
Cirendeu, dan Cempaka Putih.
Laporan Penelitian. Jakarta :
Fakultas Kedokteran dan Ilmu
Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah
Jakarta