DAFTAR ISI

Klasterisasi Staphylococcus aureus Resisten Neutrofil Berdasar Assesory Gene Regulator 93-103
Christin Marganingsih Santosa, Fajar Budi Lestari, Rini Widayanti, Siti Isrina Oktavia Salasia

Platelet Rich Plasma (Prp) dari Limbah Darah Sapi Sebagai Obat Luka Bakar pada Tikus Putih 104-109
(Rattus Norvegicus)
Rahmad Dwi Ardhiansyah, Riefky Pradipta Baihaqie, Muhammad Nuriy Nuha Naufal,
Muhamad Atabika Farma Nanda, Aprilia Maharani, Yuda Heru Fibrianto

Hubungan Kepadatan Permukiman dengan Luas Permukiman terhadap Sebaran Demam Berdarah Dengue 110-118
Marlena, Rinidar, Muhammad Rusdi, Farida, Teuku Reza Ferasyi,, Nurliana

Gambaran Leukosit Kucing Penderita Feline Panleukopenia 119-123

Hary Purnamaningsih, Soedarmanto Indarjulianto, Yanuartono, Alfarisa Nururrozi,
Irkham Widiyono, Rusmihayati

Pengembangan Media Transpor untuk Koleksi Sampel Preputium, untuk deteksi Bovine Genital 124-132
Campylobacteriosis
Apris Beniawan, Agustin Indrawati, Fachriyan Hasmi Pasaribu

Korelasi antara Padat Tebar dengan Infestasi Ektoparasit pada Udang Vaname (Litopenaeus Vannamei) 133-141
di Tambak Super Intensif
Eren Adiacahya, Setiawan Koesdarto, Gunanti Mahasri

Efektifitas Terapi Asam Urat dengan Poliherbal Ekstrak Bawang Merah (Allium ascalonicum L.) 142-148
dan Jahe Merah (Zingiber officinale var rubrum) pada Tikus Hiperurisemia
Fathur Rohman Haryadi, Dela Ria Nesti, Ida Tjahajati, Okti Herawati

Kajian Doking Molekul Flavonoid Ekstrak Coleus Amboinicus dan Penurunan Konsentrasi Malondialdehid 149-156
(MDA) pada Induksi Cisplatin Tikus Putih Wistar
Rondius Solfaine, Lailatul Muniroh, Wida Wahidah Mubarokah

Karakter Morfologi Rambut Kelompok Cervidae Indonesia 157-165

Ni Luh Putu Rischa Phadmacanty, Zulkurnia Irsaf, Gono Semiadi

Deteksi Staphylococcus aureus dan Staphylococcus sp. Secara Langsung Dari Susu Segar Kambing 166-172
Peranakan Etawa dengan Teknik Polymerase Chain Reaction (PCR)
Fatkhanuddin Aziz, Fajar Budi Lestari, Sarah Nuraida S., Endah Purwati, Siti Isrina Oktavia Salasia

Keracunan Coklat (Theobroma Cacao) pada Anjing: Manajemen Terapi dan Pencegahan 173-182
Yanuartono, Alfarisa Nururrozi, Soedarmanto Indarjulianto, Slamet Raharjo, Hary Purnamaningsih, Nurman haribowo

Profil Reseptor Gonadotropine Releasing Hormone (GnRH) dari Hipothalamus Sapi 183-188
Irma Dian Nurani, Claude Mona Airin, Pudji Astuti, Khrisdiana Putri, Bambang Sutrisno

INDEK PENULIS 189-190

INDEK SUBYEK 191-192

Gambar Depan: Karakter morfologi rambut kelompok Cervidae Indonesia. Ni Luh Putu Rischa Phadmacanty, Zulkurnia
Irsaf, Gono Semiadi. Halaman: 154-162.
 PENGANTAR REDAKSI

Para pembaca JSV yang budiman dimanapun berada,

Pada saat ini di tengah masa pandemi COVID-19 yang masih terus berlangsung di Indonesia, JSV
vol. 38 no. 2 edisi Agustus 2020 akhirnya dapat terbit tepat waktu. JSV pada edisi ini merupakan edisi
kedua yang terbit di tahun 2020 setelah JSV memutuskan untuk menerbit tiga edisi setiap tahun dengan
jumlah artikel sebanyak 12 artikel setiap kali terbit, sehingga dalam setahun JSV mempublikasikan
sebanyak 36 artikel ilmiah.
Berdasarkan surat dari Deputi Bidang Penguatan Riset dan Pengembangan, Kementerian Riset
dan Teknologi/Badan Riset dan Inovasi Nasional, Republik Indonesia bernomor B/804/E5.2.1/2020
tertanggal 3 April 2020, Alhamdulillah JSV kembali terakreditasi dalam kategori Sinta-2 yang dimulai
dari edisi Desember 2019 sampai dengan edisi Desember 2024. Hal ini merupakan kabar yang sangat
menggembirakan bagi seluruh sisvitas akademika di FKH UGM pada umumnya, khususnya seluruh
anggota dewan penyunting JSV mengingat persiapan re-akreditasi JSV yang cukup panjang dan menyita
banyak waktu, energi dan pikiran. Untuk itu mewakili seluruh anggota Dewan Penyunting JSV, kami
mengucapkan terimakasih yang sebesar besarkan kepada Dekan dan jajaran Wakil Dekan, asisten Wakil
Dekan di FKH, segenap sivitas akademika FKH UGM, Reviewer dan Mitrabe Bestari, serta para mitra
penulis, contributor dan authors JSV di manapun berada atas kerjasama dan kontribusi yang luar biasa
sehingga JVS kembali terakreditasi selama lima tahun ke depan.
Pada JSV volume 38, nomor 2 edisi Agustus 2020 ini, memuat sebanyak 12 artikel ilmiah dari
berbagai bidang ilmu veteriner, yaitu bidang Kesmavet, Bedah Veteriner, Virologi, Ilmu Penyakit
Dalam, Mikrobiologi, Prasitologi, Farmakologi dan Anatomi. Kami senantiasa mengundang bapak/ibu/
saudara penulis dan kontributor artikel ilmiah untuk mengirimkan manuskript artikel ilmiah agar dapat
dipublikasikan di JSV pada edisi yang akan datang secara online melalui Open Journal System (OJS)
pada situs JSV. Pada situs tersebut, sudah tersedia Template untuk artikel ilmiah yang akan disubmitkan,
sehingga lebih mudah dan dapat menyeragamkan format penulisan artikel ilmiah pada JSV. Kami selalu
menerima kritik, saran dan masukkan yang bersifat membangun untuk perbaikan pada masa yang akan.
Kami berharap bahwa JSV akan semakin berkembang dalam mempublikasi artikel artikel ilmiah yang
berkualitas di bidang veteriner.

Terimakasih atas perhatian dan kerjasamanya.

Ketua Dewan Penyunting JSV

Aris Haryanto

iii
 Jurnal Sain Veteriner, Vol. 38. No. 2. Agustus 2020, Hal. 93-101
DOI: 10.22146/jsv.50653
ISSN 2443-1583 (Print), ISSN 2407-3733 (Online)
Tersedia online di https://jurnal.ugm.ac.id/jsv

Klasterisasi Staphylococcus aureus Resisten Neutrofil

Berdasar Assesory Gene Regulator

Clusterization of Neutrophil Resistant Staphylococcus aureus

Based on the Assesory Gene Regulator

Christin Marganingsih Santosa1, Fajar Budi Lestari2, Rini Widayanti3,

Siti Isrina Oktavia Salasia1*

Departemen Patologi Klinik, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada

1

2
Departemen Teknologi Hayati dan Veteriner, Program Studi Diploma Kesehatan Hewan,
Universitas Gadjah Mada,
3
Departemen Biokimia, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada,
Jl. Fauna 2, Karangmalang, Yogyakarta 55281
*Corresponding author; e-mail: isrinasalasia@ugm.ac.id

Naskah diterima: 17 Oktober 2019, direvisi: 24 Januari 2020, disetujui: 30 Juli 2020

Abstract

Staphylococcus aureus is recognized worldwide as a major pathogen causing subclinical intramammary

infections in dairy cows and food poisoning due to its ability to produce enterotoxin. The study aimed to identify
enterotoxins of S. aureus and clustering the enterotoxins based on assessory gene regulator (agr). Virulence of S.
aureus to the host was characterized based on the response of polymorphonuclear cells to the infection. Twelve
S. aureus were isolated from cows’ milk in central of dairy farming in Sumedang West Java. The identification of
S. aureus was based on cultural and biochemical tests and an amplification of a specific section of the 23S rRNA
gene. The sensitivity test against antibiotics revealed that some isolates of S. aureus were resistant to penicillin
and methycillin. By PCR amplification one or more staphylococcal enterotoxin genes could be observed five
genes in combinations of sea (216 bp), seb (478 bp), seh (375 bp), sei (576 bp), and sej (142 bp). Clustering of S.
aureus based on the assesory gene regulator could be grouped into 4 clusters for agr1 (1 isolat), agr2 (2 isolates),
in combination for agr1 and agr2 (1 isolate), and for non agr (2 isolates). Based on the response of neutrophil cell
in vitro and in vivo assays, revealed that S. aureus strain I-2 (agr1 cluster) and P1 (agr1+agr2 cluster) were more
resistant to neutrophil cells and could survive intracellularly, indicated that these strains could be used as proper
candidates to develop dignostic tool based on agr against S. aureus infection.

Key words: assesory gene regulator; enterotoxin; neutrophil; Staphylococcus aureus

Abstrak

Staphylococcus aureus telah diketahui sebagai patogen utama yang menyebabkan infeksi intramammae
subklinis pada sapi perah dan pada keracunan makanan, karena kemampuan bakteri ini menghasilkan enterotoksin.
Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi enterotoksin S. aureus dan mengelompokkan enterotoksin
berdasarkan regulator gen penilaian (agr). Virulensi S. aureus terhadap inang dikarakterisasi berdasarkan respons
sel polimorfonuklear terhadap infeksi. Dua belas S. aureus telah diisolasi dari sapi perah di pusat peternakan
sapi perah di Sumedang Jawa Barat. Identifikasi S. aureus didasarkan pada kultur sel, biokimia dan amplifikasi

93
Christin Marganingsih Santosa, et. al.

bagian spesifik dari gen 23S rRNA. Uji sensitivitas terhadap antibiotik mengungkapkan bahwa beberapa isolat
S. aureus resisten terhadap penisilin dan metisilin. Dengan amplifikasi PCR, satu atau lebih gen enterotoksin
stafilokokus dapat diamati lima gen dalam kombinasi sea (216 bp), seb (478 bp), seh (375 bp), sei (576 bp),
dan sej (142 bp). Pengelompokan S. aureus berdasarkan regulator gen assesori dapat dikelompokkan menjadi
4 kelompok untuk agr1 (1 isolat), agr2 (2 isolat), dalam kombinasi untuk agr1 dan agr2 (1 isolat), dan untuk
non-agr (2 isolat). Berdasarkan respon sel neutrofil secara in vitro dan in vivo, terungkap bahwa S. aureus strain
I-2 (agr1 cluster) dan P1 (agr1 + agr2 cluster) lebih tahan terhadap sel neutrofil dan dapat bertahan secara
intraseluler, menunjukkan bahwa strain ini dapat digunakan sebagai kandidat yang tepat untuk mengembangkan
alat dignostik berdasarkan agr terhadap infeksi S. aureus.

Kata kunci: accessory gene regulato; enterotoksin; neutrofil; Staphylococcus aureus

Pendahuluan patogenisitas, sehingga berdasarkan sifat

patogenisitas tersebut akan mempermudah dalam
Mastitis pada sapi perah menyebabkan
menentukan strategi kontrol dan pengendalian
produksi susu turun yang berakibat pada kerugian
infeksi S. aureus. Berbagai macam stafilokokal
ekonomi yang cukup signifikan bagi industri susu
enterotoksin diatur oleh sistem pengontrol gen yang
(Hogeveen et al., 2011; Abebe et al., 2016). Mastitis
mengekspresikan faktor-faktor virulen S. aureus
subklinis sulit untuk dideteksi karena sapi yang
yang disebut dengan accessory gene regulator
terinfeksi tidak menunjukkan gejala sakit, tetapi
(agr) (Kornblum et al., 1990). Gen agr ini dapat
produksi susu turun secara signifikan. Susu yang
digunakan sebagai dasar pengembangan deteksi
berasal dari kasus mastitis subklinis mengandung
staphylococcal mastitis dan enterotoksikosis,
banyak bakteri, terutama Staphylococcus aureus.
untuk memperoleh produk susu yang aman dan
Untuk peneguhan diagnosis mastitis secara tepat
sehat.
diperlukan perangkat diagnostik yang sensitif,
Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan
cepat dan akurat sehingga dapat segera ditentukan
strain S. aureus yang mengandung gen enterotoksin
strategi pengobatan yang tepat dan aman untuk
dan acessory gen regulator yang bersisifat resisten
pemulihan produksi susu.
terhadap sel polimorfonuklear/neutrofil, dalam
Produksi susu segar nasional hingga saat ini
rangka memperoleh kandidat strain S. aureus
belum bisa mencukupi kebutuhan bahan baku
sebagai dasar pengembangan sarana deteksi
industri pengolahan susu. Rendahnya tingkat
staphylococcal mastitis dan food borne disease.
produksi susu di Indonesia antara lain terkait
Deteksi secara dini keberadaan SE pada susu sapi
dengan standardisasi kualitas susu. Mayoritas
segar dan berbagai produk olahan yang berbahan
penurunan produksi susu sapi perah akibat kasus
susu sapi dapat digunakan untuk meningkatkan
mastitis disebabkan oleh bakteri, terutama S.
kualitas pangan olahan yang berbahan susu sapi.
aureus. Staphylococcus aureus merupakan bakteri
penyebab keracunan pangan, karena S. aureus
memproduksi enterotoksin (staphylococcal Materi dan Metode
enterotoxin/SE). Susu sapi yang mengandung
S. aureus dapat membahayakan bagi konsumen. Isolasi dan Identifikasi S. aureus
Staphylococcus aureus dalam susu segar (hulu) Staphylococcus aureus diisolasi dari susu sapi
dan produk pangan olahan berbahan susu (hilir) perah di sentra peternakan sapi perah Sumedang,
dapat menyebabkan toxic schock syndrome dan Jawa Barat. Sampel susu diambil secara random
food borne diseases sebagai akibat dari keracunan pada 58 ekor sapi baik yang menunjukkan gejala
pangan (Salasia et al., 2009). Dalam 1 strain S. sakit (mastitis klinis) maupun tidak menunjukkan
aureus dapat mengandung berbagai macam gejala klinis (mastitis subklinis). Identifikasi
gen yang bertanggung jawab dalam produksi bakteri dilakukan melalui pengamatan terhadap
enterotoksin (Salasia et al., 2004). Kombinasi sifat pertumbuhan bakteri dalam media padat
lokasi gen ini dapat digunakan untuk menentukan (PAD), pewarnaan Gram, uji mannitol salt agar

94
 Klasterisasi Staphylococcus aureus Resisten Neutrofil Berdasar Assesory Gene Regulator
(MSA), katalase, dan koagulase. Tipe hemolisis
ditentukan berdasar adanya zona hemolisis yang
dibentuk oleh S. aureus pada plat agar darah.
Uji Kepekaan Antibiotika
Kepekaan antibiotika terhadap S. aureus
dilakukan melalui uji difusi agar Müller-Hinton
(Oxoid, Wesel, Germany), dengan menempelkan
lempengan diskus antibiotik (Oxoid). Zona
inhibisi yang terbentuk setelah inkubasi pada susu
37°C selama 24 jam, di interpretasi sesuai standar
zona hambatan Kirby-Bauer (Tato et al., 2011).
Preparasi DNA
DNA S. aureus diekstraksi dengan
menggunakan Qiamp tissue kit (Qiagen, Hilden,
Germany) sesuai prosedur yang telah ditentukan
oleh pabrik. Setelah bakteri ditanam pada plat agar
darah selama 24 jam pada suhu 37C, 5-10 koloni
bakteri disuspensikan dalam buffer TE (10 mM
Tris-HCl, 1 mM EDTA pH 8, yang mengandung
5 µl lysostaphin (1.8 U/µl; Sigma, Aldrich, USA).
Setelah inkubasi selama 30 menit pada suhu 37°C,
ditambahkan 25 µl of proteinase K (14,8 mg/ml;
Sigma) dan 200 µl of buffer AL (yang berisi reagen
AL1 and AL2). Suspensi bakteri diinkubasi selama
3 menit pada suhu 70°C dan selama 10 menit pada
suhu 95°C, kemudian setelah disentrifuse beberapa
detik sebanyak of 420 µl etanol ditambahkan
kedalam masing-masing sampel dan ditempatkan
kedalam kolom QIAamp. Setelah sentrifugasi
selama 1 menit kolom QIAamp ditempatkan
diatas tabung koleksi dan sampel dicuci dua kali
dengan 500 µl of buffer AW (Qiagen). Kolom
QIAamp kemudian disentrifus selama 3 menit,
kolom kemudian ditempatkan diatas 2 ml tabung
eppendorf dan DNA yang ada pada kolom dicuci
dua kali dengan cara elusi dengan 200 µl buffer
AE. Hasil elusi sampel DNA dapat disimpan pada
suhu -20°C (Salasia et al., 2004).
Identifikasi gen 23 SrRNA S. aureus
Identifikasi spesies spesifik S. aureus
dilakukan berdasar amplifikasi gen 23S rRNA
dengan menggunakan primer spesies spesifik
dengan teknik polymerase chain reaction (PCR)
dengan program yang telah ditentukan berdasar
referensi (Toshkova et al., 2001).
Amplifikasi gen enterotoksin dengan PCR
Identifikasi gen enterotoksin S. aureus (sea,
seb, sec, sed, see, seg, seh, sei, sej) ditentukan
dengan menggunakan primer spesifik untuk
masing-masing enterotoksin dan program PCR
berdasar referensi (Salasia et al., 2004). Campuran
reaksi untuk PCR sebanyak 30 µl terdiri atas 1
µl primer 1 (10 pmol), 1 µl primer 2 (10 pmol),
0.6 µl dNTP (10 mM; MBI Fermentas, St. Leon
Rot, Germany), 3.0 µl 10 x thermophilic buffer
(Promega/Boehringer, Ingelheim, Germany), 1.8
µl MgCl2 (25 mM; Promega/Boehringer) dan
0.2 µl Taq DNA polymerase (5U/µl; Promega/
Boehringer) dan 21.4 µl aquades. Masing-
masing reaksi kemudian ditambahkan 1 µl DNA.
Campuran reaksi disentrifus beberapa detik,
dan dimasukkan kedalam thermal cycler T3
(Biometra, Göttingen, Germany). Hasil dapat
dibaca dengan menggunakan gel agar DNA setelah
dielektroforesis dan dianalisis dengan melihat
adanya pita tunggal pada gel dengan pembanding
kontrol negatif S. epidermidis.
Amplifikasi accessory gen regulator (agr)
Identifikasi agr ditentukan dengan
menggunakan primer spesifik untuk agrI: 5’- CAC
TTA TCA TCA AAG AGC C - 3’ dan agrII: 5’-
CCA CTA ATT ATA GCT GG -3’ dengan program
PCR yang telah ditentukan berdasar Moore dan
Lindsay (2001), 32 siklus (94°C 30 detik, 55°C 30
detik, 72°C 60 detik), sumber sekuen: AF94826.
Besar amplikon agrI sekitar 351 bp dan agrII
sekitar 1200 bp.
Uji respon neutrofil secara in vivo
Bakteri ditanam dalam 10 ml THB pada
temperatur 37°C selama 24 jam. Setelah di-vortex,
kultur bakteri disentrifus dengan kecepatan 5000
rpm selama 10 menit. Supernatan dibuang dan
pelet ditambah 5 ml Hanks balanced salt solution
(HBSS, Sigma), diresuspensi dan disentrifus
dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit.
Supernatan dibuang dan pelet ditambah 5 ml
HBSS dan ditentukan optical density (OD)-nya
menggunakan spektrofotometer dengan 10%
transmisi pada l 620 nm sehingga diperoleh
larutan sebanyak 109 bakteri/ml. Suspensi yang
digunakan untuk uji in vivo adalah pengenceran
95
Christin Marganingsih Santosa, et. al.
larutan tersebut menjadi 108 bakteri/ml dalam
HBSS. Sebanyak 10 ekor mencit Balb/c (UPHP
UGM) masing-masing diinjeksi dengan larutan
kultur S. aureus (108 bakteri/ml) dari berbagai
klaster. Sebelum dan setelah 5 hari infeksi, masing-
masing mencit diambil darah melalui plexus
retroorbitalis, kemudian darah diperiksa terhadap
jenis differensial leukosit (neutrofil). Sebagian
darah diteteskan pada gelas obyek, kemudian
diapuskan dan diberi pewarnaan Giemsa 10%
untuk diamati respon terhadap S. aureus yang
telah diinfeksikan dengan memperhitungkan
persentase respon neutrofil sebelum dan sesudah
infeksi (Salasia, 2001).
Uji fagositosis in vitro
Darah manusia diperoleh dari donor sebanyak
5 ml, dimasukan ke dalam tabung yang telah
berisi 1mg/ml EDTA. Sebanyak 2,5 ml larutan
Histopaque 1191 (Sigma) dimasukkan kedalam
tabung ditambah 2,5 ml larutan Histopaque 1077
(Sigma), kemudian ditambahkan 5 ml darah secara
perlahan melalui dinding tabung dan disentrifus
dengan kecepatan 700 g selama 30 menit pada
suhu 20°C. Setelah sentrifugasi akan diperoleh 6
lapisan dengan susunan dari atas ke bawah yaitu
plasma, monosit, Histopaque 1191, granulosit
(polymorphonuclear/PMN sel), Histopaque 1077
dan eritrosit. Lapisan granulosit kemudian diambil
dengan menggunakan pipet pasteur dimasukkan
dalam eppendorf, disentrifuse dan dicuci dengan
menggunakan HBSS. Granulosit dihitung dengan
haemocytometer, sehingga diperoleh larutran
granulosit sekitar 5x105 sel/ml. Larutan granulosit
(5x105 sel/ml) sebanyak 100 mL dimasukan
ke dalam eppendorf yang telah berisi 100 mL L
larutan bakteri (108 bakteri/ml), dicampur dan
diinkubasi pada waterbath dengan suhu 37°C
selama 1 jam. Setelah inkubasi larutan ditambah
800 mL HBSS dingin, disentrifuse 1000 g selama 7
menit. Supernatan dibuang dan endapan ditambah
200 mL larutan Acridine orange (20 mg/ml, Sigma)
dan 800 mL HBSS dingin, dibiarkan selama 45
menit. Aktivitas fagositosis sel PMN/neutrofil
ditentukan dengan menghitung jumlah bakteri
yang difagosit oleh setiap sel neutrofil dari 20 sel
neutrofil pada setiap preparat apus menggunakan
mikroskop fluorescence (Olympus, USA). Sel-
sel bakteri yang mati akan berwarna merah dan
96
sel yang masih hidup (intracellular survive) akan
berpendar warna hijau (Salasia, 2001).
Hasil dan Pembahasan
Hasil pengamatan klinis, terdapat 4 ekor sapi
perah yang menunjukkan gejala klinis mastitis, ditandai
dengan ambing bengkak, palpasi keras seperti batu,
dan terlihat puting bocor. Sebagian besar sapi perah
tidak menampakkan gejala klinis mastitis (mastitis
subklinis). Dari sampel susu sapi perah mastitis klinis
dan subklinis, dapat diidentifikasi 12 isolat S. aureus
berdasar sifat pertumbuhan, Gram positif, positif pada
uji MSA, katalase, koagulase, dan mengandung gen
23S rRNA. Hasil identifikasi S. aureus, uji hemolisin
dan resistensi terhadap berbagai antibiotika dapat
dilihat pada Tabel 1 dan Tabel 2.
Hasil uji sensitifitas terhadap berbagai antibiotika,
diketahui bahwa S. aureus sensitif terhadap gentamisin
(100%), oksasilin (100%), ampisilin (83,3%),
intermedier terhadap ampisilin (16,7%) an penisilin
(66,6%), dan resisten terhadap penisilin (33,4%) dan
metisilin (100%). Sharma et al. (2015) melaporkan S.
aureus asal susu sapi dan kerbau mastitis telah resisten
terhadap penisilin (100%), metisilin (66,6%), ampisilin
(33,3%) dan gentamisin 22,2%. Staphylococcus
aureus asal susu sapi mastitis dilaporkan telah resisten
terhadap penisilin dan metisilin, tapi masih peka
terhadap gentamisin (Chandrasekaran et al., 2014).
Hasil identifikasi gen enterotoksin terhadap 6
isolat S. aureus, terdapat 5 macam gen enterotoksin
yaitu sea (216 bp), seb (478 bp), seh (375 bp), dan sei
(576 bp), sej (142 bp). Dalam penelitian ini terdapat
5 isolat S. aureus mempunyai kombinasi 4 gen
enterotoksin (sea, seb, seh, sei) dan 1 isolat dengan
kombinasi 5 gen (sea, seb, seh, sei, sej) (Tabel 3).
Hasil analisis assessory gene regulator
(agr) yang mengatur berbagai determinan virulen
S. aureus dapat dilihat pada Gambar 1 dan Tabel
3, gen agr1 mempunyai ukuran amplikat sebesar
351 bp dan agr2 sebesar 1200 bp. Berdasar
analisis gen agr, S. aureus dalam penelitian ini
dapat dikelompokkan menjadi 4 klaster, yaitu
klaster agr1 (I-2), klaster agr2 (P5 dan Mjl2),
klaster agr1+agr2 (P1), dan klaster non-agr (Jaed
dan I-4) (Tabel 3).
Dari hasil klasterisasi tersebut, selanjutnya
S. aureus masing-masing klaster dilakukan
uji fagositosis untuk mengetahui ketahanan
 Klasterisasi Staphylococcus aureus Resisten Neutrofil Berdasar Assesory Gene Regulator
masing-masing strain terhadap fagositosis sel
polimorfonuklear/neutrofil. Hasil uji fagosotisis
dapat dilihat pada Tabel 4.
Dari hasil uji neutrofil secara in vitro dan in
vivo dapat dilihat bahwa S. aureus strain I-2 yang
termasuk dalam klaster agr1 dengan kombinasi
gen enterotoksin se (a, b, h, i, j) dan strain P1 yang
termasuk dalam klaster agr1+agr2, mengandung
gen toksin dengan kombinasi se (a, b, h, i), mampu
bertahan hidup dalam sel neutrofil dalam jumlah
lebih banyak masing-masing sebesar 52.6 bakteri/
neutrofil dan 48.3 bakteri/neutrofil.
Identifikasi S. aureus dalam penelitian
ini diteguhkan berdasar sifat pertumbuhan, uji
biokimia dan amplifikasi spesies spesifik gen
23S rRNA. Identifikasi molekuler S. aureus
dengan menggunakan target gen 23S rRNA
dapat digunakan untuk identifikasi bakteri secara
sensitif dan spesifik (Salasia et al., 2004). Hasil
identifikasi lanjut diketahui bahwa diantara 6
isolat S. aureus memperlihatkan hemolisin alfa
(4 isolat/66,7%) dan 2 isolat (33,3%) bersifat beta
hemolitik. Hemolisin tipe alfa dan beta dilaporkan
lebih patogen, dibanding tipe gamma yang tidak
membentuk zona hemolisis pada media agar
darah (Kebaier et al. 2012). Alfa (α) dan beta (β)
hemolisin termasuk eksotoksin yang berperan
penting dalam patogenesis infeksi S. aureus
(Burnside et al., 2010).
Permasalahan utama dalam mengatasi infeksi
S. aureus adalah masalah resistensi terhadap
antibiotik. Beberapa strain S. aureus saat ini
dilaporkan telah resisten terhadap hampir semua
antibiotik komersial (Tato, 2011).
Dari hasil penelitian ini diketahui ada beberapa
isolat bersifat intermedier terhadap antibiotik
(ampisilin dan penisilin), kondisi tersebut
kemungkinan akan berubah menjadi resisten,
karena sifat intermedier akan cenderung menjadi
resisten. Ampisilin merupakan derivat penisilin.
Dengan perkembangan penelitian tentang
antibiotika, telah ditemukan derivat penisilin yaitu
methicilin yang efektif terhadap mikroorganisme
yang resisten dengan penisilin karena antibiotik
ini tidak rusak oleh enzim beta lactamase. Namun
telah dilaporkan bahwa di beberapa rumah sakit
terjadi peningkatan frekuensi methicillin resistant
S. aureus (MRSA) dan biasanya strain MRSA ini
telah terjadi resisten terhadap multipel antibiotik
(Gurung et al., 2020). Isolat MRSA asal rumah
sakit telah terjadi multidrug resistant terhadap
eritromisin, klindamisin, ciprofloxacin dan
levofloxacin (Kot et al., 2020). Algammal et al.
(2020) melaporkan adanya strain MRSA asal susu
sapi dan kerbau. Ektik et al. (2018) menemukan
isolat MRSA pada susu sapi yang telah resisten
terhadap ampisilin, penisilin dan sulfametoksazol-
trimetoprim.
Penyalahgunaan antibiotik telah
menyebabkan timbulnya resistensi pada S. aureus
secara luas karena adanya transfer resistensi
antibiotik (Pekana dan Green, 2018; Jensen
dan Lyon, 2009). Resistensi S. aureus terhadap
antibiotik dapat pula disebabkan oleh adanya
faktor lingkungan dan penggunaan antibiotik yang
tidak tuntas. Bakteri mempunyai seperangkat
cara untuk beradaptasi terhadap lingkungan yang
mengandung antibiotik. Menghadapi tekanan
selektif dari penggunaan antibiotik, bakteri akan
beradaptasi dan mengembangkan mekanisme
kompleks untuk bertahan hidup (Watkins et al.,
2019).
Adanya enterotoksin yang diproduksi oleh
S. aureus dapat memperparah kondisi mastitis
pada sapi perah, yang berakibat pada penurunan
produksi susu. Disamping itu enterotoksin
dalam susu segar dapat menyebabkan kasus
keracunan pangan. Stafilokokal enterotoksin
sering sebagai sumber pencemar makanan, karena
enterotoksin ini tahan terhadap pemanasan dan
tahan terhadap ensim protease seperti pepsin yang
terdapat dalam saluran pencernaan. Stabilitas SE
terhadap pemanasan dan ensim-ensim pencernaan
merupakan salah satu sifat yang sangat penting
berkaitan dengan keamanan pangan, karena
toksin akan tetap bertahan meskipun suatu bahan
makanan yang tercemar SE sudah dimasak atau
dipanaskan dan toksin ini apabila sudah termakan
akan tahan terhadap ensim-ensim yang ada dalam
saluran pencernaan (Balaban dan Rasooly, 2000).
Dalam penelitian ini diketahui S. aureus
mengandung gen sea yang menyandi enterotoksin
tipe A (SEA). Outbreak keracunan pangan
dilaporkan lebih sering akibat stafilokokal
enterotoksin tipe A (SEA). Kadar enterotoksin
dalam menimbulkan enterotoksikosis relatif sangat
kecil, dosis infektif kurang dari 1 μg dalam makanan
yang terkontaminasi, dapat mengakibatkan gejala-
97
Christin Marganingsih Santosa, et. al.
gejala intoksikasi. Dosis toksin ini dapat dicapai
apabila terdapat populasi S. aureus mencapai
100.000 per gram. Kejadian enterotoksikosis di
AS dilaporkan akibat konsumsi susu coklat yang
mengandung SEA. Pada kasus tersebut kadar rata-
rata SEA dalam 400 ml kontainer hanya sekitar
0.5 ng/ml. Enterotoksin dapat dideteksi apabila
terdapat toksin sedikitnya sekitar 103/g inokulat S.
aureus (Balaban dan Rasooly, 2000; Le Loir et al.,
2003).
Salasia et al., (2003) melaporkan adanya
gen sea, seb, seg, seh dan sei serta gen kombinasi
see dengan seh, sea dan seh, seg dengan sei dan
kombinasi seb, seg, seh dengan sei pada S. aureus
isolat asal manusia di Yogyakarta. Gen seb,
serta kombinasi seg dengan sei juga dilaporkan
terdapat pada S. aureus yang diisolasi dari kasus
staphylococcal scarlet fever di rumah sakit pusat
Taiwan bagian utara (Wang et al., 2004) dan
pada isolat klinik di Iran (Ababaf et al., 2018).
Kasus fatal endokarditis yang disebabkan oleh
stafilokokal enterotoksin A pernah dilaporkan
terjadi pada wanita yang awalnya menderita
radang telinga bagian tengah yang berlanjut
menjadi endokarditis (Ellis et al., 2003)
Dalam penelitian ini gen penyandi stafilokokal
enterotoksin B (seb) dapat pula diidentifikasi
pada S. aureus asal susu sapi perah Sumedang
Jawa Barat. Enterotoksin tipe B telah dilaporkan
mempunyai potensi dalam meningkatkan aktifitas
superantigen (Greenfield et al., 2002; Kadariya et
al., 2014). Sifat penting stafilokokal yang bersifat
superantigenik, yaitu dengan memperlihatkan
aktifitasnya melalui interaksi antara antigen
dan limfosit T, tanpa adanya spesifitas antigen
pada sel. Kondisi ini merangsang terjadinya
proliferasi sel dan peningkatan sitokin dengan
konsentrasi yang tinggi (Kadariya et al., 2014).
Sitokin yang diproduksi dalam jumlah yang
banyak mengakibatkan gejala-gejala toxic shock
syndrome.
Dalam penelitian ini dapat diidentifikasi pula
gen enterotoksin tipe H (seh) dan tipe I (sei). Gen
stafilokokal enterotoksin seb, seg, seh dan sei
pernah diidentifikasi dari isolat S. aureus yang
diisolasi dari susu sapi segar yang menderita
mastitis subklinis di wilayah Jawa Tengah (Salasia
et a.l, 2004). Gen stafilokokal enterotoksin seg,
sei dan sej merupakan gen enterotoksin yang
98
lebih sering ditemukan pada sapi yang mengalami
mastitis. Di wilayah Hesse, Jerman lebih dominan
ditemukan gen stafilokokal enterotoksin sec, sed,
seg, seh, sei dan sej isolat S. aureus dari sapi yang
menderita mastitis subklinis (Salasia et al., 2004).
Adanya kombinasi berbagai gen enterotoksin
dalam S. aureus kemungkinan dikarenakan gen-
gen tersebut secara struktural saling berdekatan.
Kebanyakan pathogenicity islands S. aureus
memiliki gen yang mengontrol toxic shock
syndrome toxin (tst), s- dan cell-like protein
(Fitzgerald et al., 2001) serta gen yang mengontrol
stafilokokal enterotoksin B, K, dan Q (Yarwood et
al., 2002). Zhang et al. (1998) melaporkan bahwa
dalam pathogenicity islands terdapat gen tst dan
open reading frame yang sekuennya mirip dengan
gen yang menyandi stafilokokal enterotoksin serta
satu bagian yang mengandung gen enterotoksin
D dan J. Grup gen enterotoksin yang terdiri dari
seg, sei, sen, seo, dan sem disandi oleh enterotoxin
gene cluster (egc) (Jarraud et al., 2001). Gen seg,
seh, sei dan kombinasi dengan gen sea dan atau
sed juga dilaporkan terdapat pada S. aureus yang
berhasil diisolasi dari sampel makanan (Chen et
al., 2004).
Keberadaan S. aureus dalam susu segar dapat
membahayakan bagi manusia (konsumen), karena
diketahui bahwa S. aureus memproduksi beberapa
macam enterotoksin yang menyebabkan toxic
shock syndrome (Lowy, 2003; Kadariya et al.,
2014). Penyebab penting pada kasus keracunan
makanan yaitu enterotoksin yang dihasilkan ketika
S. aureus tumbuh pada makanan yang mengandung
karbohidrat dan protein. Staphylococcus aureus
bersifat patogen karena adanya kombinasi toksin
mediasi virulensi, invasif dan resistensi terhadap
antibiotik (Le Loir et al., 2003).
Respon sel neutrofil terhadap infeksi S. aureus
secara in vivo pada mencit percobaan, ditentukan
berdasar persentase peningkatan jumlah neutrofil
sebelum dan sesudah infeksi. Dari hasil penelitian
terlihat bahwa S. aureus dari berbagai wakil klaster
memperlihatkan respon neutrofil yang bervariasi.
Aktivitas fagositosis lebih tinggi (> 70
bakteri/neutrofil) diperlihatkan pada neutrofil
yang mampu melakukan fagositosis terhadap S.
aureus lebih banyak. Klaster agr1+2 (strain P1)
mampu memfagosit sebanyak 97.2 bakteri (terdiri
dari bakteri yang hidup 48.3 sel dan yang mati 46.9
 Klasterisasi Staphylococcus aureus Resisten Neutrofil Berdasar Assesory Gene Regulator
sel), dan kalaster agr1 (strain I-2) yang mampu
memfagosit 83.3 bakteri (bertahan hidup 52.6
bakteri dan mati 30.6 bakteri). Klaster non-agr
(Jaed2) dan agr2 (P5), lebih sedikit difagosit oleh
sel-sel neutrophil (Tabel 4). Aktifitas fagositosis
sel neutrofil yang cukup tinggi terhadap S.
aureus (strain P1 dan I-2), menunjukkan bahwa
sel neutrofil sangat responsif terhadap infeksi S.
aureus. Apabila dilihat dari kemampuan S. aureus
yang mampu bertahan hidup (intracellular survive)
terhadap fagositosis neutrofil, menunjukkan
bahwa bakteri mampu bertahan terhadap sistem
pertahanan sel neutrofil hospes. Dari hasil
penelitian ini memperlihatkan bahwa S. aureus
strain P1 dan I-2, kemungkinan mempunyai sifat
lebih patogen, atau dengan kata lain S. aureus
strain P1 dan I-2 lebih resisten terhadap neutrofil
(mampu survive dalam neutrofil). Sifat patogen
atau resisten terhadap sistem pertahanan tubuh
hospes ini kemungkinan karena bakteri dilindungi
oleh berbagai determinan virulen ataupun
enterotoksin yang terkandung dari masing-masing
S. aureus baik secara sendiri-sendiri maupun
secara sinergi yang dapat memperparah terjadinya
infeksi pada hospes yang terinfeksi. Bakteri yang
mampu intracellular survive akan berlindung
dalam sel fagositik tanpa dikenal asing oleh sistem
pertahanan tubuh hospes, sampai akhirnya bakteri
tersebut dapat menyebar keseluruh tubuh dan
merusak jaringan hospes secara lebih luas.
Dari aktifitas fagositosis sel neutrofil secara in
vitro yang relatif tinggi tersebut, sebaliknya terlihat
bahwa respon sel neutrofil pada sirkulasi (in vivo)
tampak rata-rata lebih rendah (< 50%), sedangkan
aktifitas fagositosis yang lebih rendah (< 70 sel/
neutrofil, in vitro) tampak respon neutrofil lebih
tinggi (in vivo) (Tabel 4). Hal ini dapat difahami
bahwa aktifitas fagositosis sel neutrofil terhadap
bakteri biasanya terjadi didalam jaringan, ketika
neutrofil berada dalam jumlah banyak dalam
jaringan, maka neutrofil yang ada dalam sirkulasi
akan berkurang karena telah dipasok untuk
memenuhi kebutuhan dalam melakukan fungsi
fagositosis dalam jaringan (Stevens, et al., 2011).
Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat
disimpulkan bahwa, S. aureus strain I-2 (klaster
agr1) dan strain P1 (klaster agr1+2), merupakan
kandidat terpilih sebagai strain yang bersifat
patogen karena lebih resisten terhadap neutrofil,
mampu bertahan hidup dalam sel neutrofil,
bersifat resisten terhadap methicilin, bersifat
alfa hemolitik, dan mengandung kombinasi gen
enterotoksin se (a, b, h, i, dan j). Kandidat terpilih
S. aureus strain I-2 dan P1 dapat digunakan
sebagai sumber antigen yang dapat dikembangan
sebagai sarana diagnostik dan kontrol stafilokokal
mastitis.
Ucapan Terimakasih
Penelitian ini dikembangkan melalui dana PDUPT
No. 2749/UN1.DITLIT/DIT-LIT/PT/2020.
Daftar Pustaka
Abebe, R.,   Hatiya, H.,   Abera, M.,  Megersa,
B. and  Asmare, K. 2016. Bovine mastitis:
prevalence, risk factors and isolation
of Staphylococcus aureus in dairy herds at
Hawassa milk shed, South Ethiopia. BMC
Veterinary Research. 12: 270. Doi. 10.1186/
s12917-016-0905-3.
Ababaf,
S., Ghasemian, A., Motamedi, H.,
Nojoomi, F. (2018). Prevalence of
enterotoxins B and C in clinical isolates of
Staphylococcus aureus from Southwest of
Iran. Immunopathology Persa. 4(2):e24.
DOI:10.15171/ ipp.2018.24.
Algammal, A.M., Enany, M.E., El-Tarabili, R.M.,
Ghobashy, M.O.I. and Helmy, Y.A. (2020).
Prevalence, Antimicrobial Resistance
Profiles, Virulence and Enterotoxins-
Determinant Genes of MRSA Isolated
from Subclinical Bovine Mastitis in
Egypt. Pathogens,   9(5), 362; doi.org/10.3390/
pathogens9050362
Balaban, N. and A. Rasooly, (2000). Review
staphylococcal enterotoxins. Journal Food
Microbiology, 61: 1-10.
Burnside, K., Lembo, A., de los Reyes, M., Iliuk,
A., Binhtran, Ng-Th., Connelly, J.E., Lin,
W.-J., Schmidt, B.Z., Richardson, A.R.,
Fang, F.C., Tao, W.A. and Rajagopal, L.
(2010) Regulation of Hemolysin Expression
and Virulence of Staphylococcus aureus by
99
Christin Marganingsih Santosa, et. al.
a Serine/Threonine Kinase and Phosphatase.
PLoS ONE 5(6): e11071. doi:10.1371/
journal.pone.0011071
Chandrasekaran, D., Venkatesan, P., Tirumurugaan,
K.G., Nambi, A.P., Thirunavukkarasu, P.S.,
Kumanan, K., Vairamuthu, S. and Ramesh,
S. (2014) Pattern of antibiotic resistant
mastitis in dairy cows, Veterinary World,
7(6): 389-394.
Chen, T.R., Chiou, C,S. and Tseng, H.Y. (2004).
Use of novel PCR primers spesific to the
genes of Staphylococcal Enterotoxin G, H,
J for the survey of Staphylococcus aureus
strains isolated from food-poisoning cases
and food samples in Taiwan. Journal Food.
Microbiology. 92: 189-197.
Ektik, N., Gökmen, M., & Çibik, R. (2018).
The Prevalence and Antibiotic Resistance
of Methicillin-Resistant Staphylococcus
aureus (MRSA) in Milk and Dairy Products
in Balikesir, Turkey. Journal of the Hellenic
Veterinary Medical Society, 68(4): 613-620.
Ellis M., Serreli A., Navarro P.C., Hedstrom U.,
Chacko A., Siemkowicz E. and Möllby R.
2003. Role of Staphylococcal enterotoxin
A in a fatal case of endocarditis. Journal
Medical Microbiology. 52: 109-112.
Fitzgerald, J.R., Monday, S.R., Foster, T.J.,
Bohach, G.A., Hartigan, P.J., Meaney, W.J.
and Smyth, C.J. (2001). Characterisation of
a putative pathogenicity island from bovine
Staphylococcus aureus encoding multiple
superantigens. Journal Bacteriology. 183:
63-70.
Greenfield, R.A., Brown, B.R., Hutchins, J. B.,
Iandolo, J.J., Jackson, R., Slater, L.N. and
Bronze, M.S., (2002). Microbiological,
biological, and chemical weapons of
warfare and terrorism. American of the
Journal Medical Sciences. 323: 326-340.
Gurung, R.R., Maharjan, P. and Chhetri, G.G.
(2020). Antibiotic resistance pattern of
Staphylococcus aureus with reference to
MRSA isolates from pediatric patients.
Future Science, 10.2144/fsoa-2019-0122
C.OA (2020) 6(4), FSO464
100
Hogeveen, H., Huijps, K., and Lam, T.
(2011). Economic aspects of mastitis: New
developments. New Zealand Veterinary
Journal, 59(1): 16-23.
Jarraud, S., Peyrat, M.A., Lim, A., Tristan, A., Bes,
M., Mougel, C., Etienne, J., Vandenesch, F.,
Bonneville, M. and Lina, G. (2001). egc,
a highly prevalent operon of enterotoxins
gene, forms A Putative Nursery Of
Superantigens in Staphylococcus aureus.
Journal Immunology, 166: 669-677.
Jensen, S.O. and Lyon, B.R. (2009). Genetics of
antimicrobial resistance in Staphylococcus
aureus. Future Microbiology, 4: 565-582.
Kadariya, J., Smith, T. C., and Thapaliya, D.
(2014). Review Article: Staphylococcus
aureus and Staphylococcal Food-Borne
Disease: An Ongoing Challenge in Public
Health. BioMed Research International.
http://dx.doi.org/10.1155/2014/827965.
Kebaier, C., Chamberland, R.R., Allen, I.C.,
Gao, X.,   Broglie, P.M., Hall, J.D.,
Jania, C., Doerschuk, C.M., Tilley, S.L.
and  Duncan, J.A. (2012). Staphylococcus
aureus  α-Hemolysin Mediates Virulence
in a Murine Model of Severe Pneumonia
Through Activation of the NLRP3
Inflammasome. The Journal of Infectious
Diseases. 205(5): 807-817.
Kornblum, J., Kreiswirth, B. N., Projan, S. N.,
Ross, H. and Novick, R.P. (1990). Agr: a
polycistronic locus regulating exoprotein
synthesis in Staphylococcus aureus. In:
Molecular Biology of the Staphylococci
(Novick, R.P., and Skurry, R., eds.). VCH,
New York, NY, USA, pp. 373-402.
Kot, B., Wierzchowska, K., Piechota, M. and
Grużewska, A. (2020). Antimicrobial
Resistance Patterns in MethicillinResistant
Staphylococcus aureus from Patients
Hospitalized during 2015–2017 in Hospitals
in Poland. Medical Principles and Practice,
29: 61-68
Le loir, Y., Baron, F and Gautier, M, (2003).
Staphylococcus and food poisoning.
Genetics and Molecular Research. 2(1): 63-
76.
 Klasterisasi Staphylococcus aureus Resisten Neutrofil Berdasar Assesory Gene Regulator
Lowy, F.D. (2003). Antimicrobial resistance: the
example of Staphylococcus aureus.  Journal
Clinical Investigation. 111: 1265-1273.
Moore, P.C.L. and J. A. Lindsay. 2001. Genetic
Variation among Hospital Isolates of
Methicillin-Sensitive  Staphylococcus
aureus: Evidence for Horizontal Transfer
of Virulence Genes, Journal Clinical
Microbiology, 39(8): 2760-2767.
Pekana, A.  and E. Green. (2018). Antimicrobial
Resistance Profiles of  Staphylococcus
aureus Isolated from Meat Carcasses
and Bovine Milk in Abattoirs and Dairy
Farms of the Eastern Cape, South Africa.
International Journal Environmental
Research and Public Health. 15(10): 2223.
doi: 10.3390/ijerph15102223
Wang, C.C., Lo, W.T., Hsu, C.F., Chu, M.L.
(2004). Enterotoxin B is the Predominant
Toxin Involved in Staphylococcal Scarlet
Fever in Taiwan. Journal Clinical Infectious
Diseasis. 38: 1498-1502.
Salasia, S.I.O., Khusnan, Lämmler, C. and H.
Nirwati. (2003). Pheno-and genotyping of
Staphylococcus aureus isolated from human
skin infections in Yogyakarta. Indonesian
Journal Biotechnology. 612-620.
Salasia, S.I.O., Z. Khusnan, Lämmler, C. and
Zschöck, M. (2004). Comparative studies
on pheno- and genotypic properties of
Staphylococcus aureus, isolated from
bovine subclinical mastitis in Central Java
in Indonesia and Hesse in Germany. Journal
Veterinary Science. 5(2):103-109.
Salasia, S.I.O., Khusnan, dan Sugiyono (2009).
Distribusi gen enterotoxin Staphylococcus
aureus dari susu segar dan pangan asal
hewan. Jurnal Sain Veteriner. 10 (3): 111-
117.
Salasia, S.I.O. (2001): Resistensi Streptococcus
equi subsp. zooepidemicus terhadap aktivitas
bakterisidal leukosit polimorfonuklear.
Jurnal Sain Veteriner. 19 (1): 1-7.
Sharma, L., Verma, A.M., Kumar, A., Rahat, A.,
Neha, N. and Nigam, R. 2015. Incidence
and Pattern of Antibiotic Resistance of
Staphylococcus aureus Isolated from
Clinical and Subclinical Mastitis in Cattle
and Buffaloes. Asian Journal of Animal
Sciences, 9 (3): 100-109.
Stevens, A., James S. Lowe, J. S., and Scott,
I. (2011). Veterinary Hematology. A
Diagnostic Guide and Color Atlas-Saunders.
Tato, S., Salasia, S.I.O., S. Indaryulianto, V.
Waranurastuti, Kurniasih (2011). Resistensi
Staphylococcus aureus isolat asal manusia
dan sapi perah terhadap berbagai antibiotika.
Jurnal Sain Veteriner. 29 (2): 115-123.
Toshkova, K., Annemüller, C., and Lämmler, C.
(2001). The significance of nasal carriage
of Staphylococcus aureus as risk factor for
human skin infections. FEMS Microbiology
Letters. 202: 17-24.
Watkins, R.R., Holubar, M. and David, M.Z. (2019).
Antimicrobial resistance in methicillin
resistant Staphylococcus aureus to newer
antimicrobial agents. Antimicrobial Agents
Chemotherapy, 63:e01216-19. https://doi.
org/10 .1128/AAC.01216-19
Woods, G.I. and J.A. Washington. (1995). Manual
of clinical Microbiology, 6th ed, ASM Pess,
Washingtong, D.C. Pp. 327-341.
Yarwood, J. M. and P.M. Schlievert. (2003).
Quorum sensing in Staphylococcus
infections. Journal of Clinical Investigation.
112: 1620-1625.
Zhang J., Iandolo J. and Stewart. G.C. (1998). The
Enterotoxin D Plasmid of Staphylococcus
aureus Encodes A Second Enterotoxin
Determinant (sej). FEMS Microbiology
Letters. 168, 227-233.
101
Christin Marganingsih Santosa, et. al.

Tabel 1. Identifikasi Staphylococcus aureus isolat asal susu sapi perah pada sentra peternakan sapi perah
Sumedang Jawa Barat

No. Kode Isolat Gejala Mastitis Gram MSA Koagulase Katalase

P5 subklinis + + + +

I-2 subklinis + + + +

P1 subklinis + + + +

D10 subklinis + + + +

MJL2 klinis + + + +

Jaed 2 klinis + + + +

S279 subklinis + + + +

D6 subklinis + + + +

S219 subklinis + + + +

S3 subklinis + + + +

A10932 subklinis + + + +

I-4 subklinis + + + +

Keterangan: MSA = mannitol salt agar

Tabel 2. Persentase kepekaan Staphylococcus aureus terhadap berbagai antibiotika

Jumlah Isolat/ Jumlah Isolat/ Jumlah Isolat/

Jenis Antibiotika
Resisten (%) Intermedier (%) Sensitif (%)
Gentamisin 0/0 0/0 6/100
Oksasilin 0/0 0/0 6/100
Metisilin 6/100 0/0 0/0
Ampisilin 0/0 1/16,7 5/83,3
Tetrasiklin 0/0 0/0 6/100
Penisilin 2/33,4 4/66,6 0/0

Tabel 3. Identifikasi gen 23S rRNA dan gen enterotoksin Staphylococcus aureus

Gen Enterotoksin
23S
rRNA sea seb sec sed see seg seh sei sej
No. Kode
P5 + + + - - - - + + -
I-2 + + + - - - - + + +
P1 + + + - - - - + + -
+ + + - - - - + + -
+ + + - - - - + + -
I-4 + + + - - - - + + -

102
Tabel 4. Hasil uji fagositosis neutrofil (in vitro) dan respon neutrofil terhadap infeksi Staphylococcus aureus (in vivo)

Uji Fagositosis Peningkatan Respon

Kode Sel neutrofil in vitro Neutrofil (%)
Klaster Toxin gen (Rerata jumlah sel bakteri hidup/mati) in vivo
Isolat
Non-agr Jaed2 se (a, b, h, i) (54.0) 27.7/26.3 109.52
agr1 I-2 se (a, b, h, i, j) (83.2) 52.6/30.6 20.83
agr2 P5 se (a, b, h, i) (38.4) 20.1/18.3 184.21
agr1+agr2 P1 se (a, b, h, i) (97.2) 48.3/46.9 18.75

M 1 2 3 4 5 M
Gambar 1. Analisis assessory gene regulator (agr) Staphylococcus aureus dengan ukuran 351 bp (agr1) dan 1200 bp (agr2). Lajur 1
(agr2, P5), lajur 2 (agr2, P1), lajur 3 (agr1, P1), lajur 4 (agr1, I-2), lajur 5 (non-agr, Jaed2). M = marker DNA ladder.
 Jurnal Sain Veteriner, Vol. 38. No. 2. Agustus 2020, Hal. 104-109
DOI: 10.22146/jsv.32631
ISSN 2443-1583 (Print), ISSN 2407-3733 (Online)
Tersedia online di https://jurnal.ugm.ac.id/jsv

Platelet Rich Plasma (Prp) dari Limbah Darah Sapi sebagai Obat Luka Bakar pada Tikus Putih
(Rattus Norvegicus)

Platelet Rich Plasma (Prp) From The Waste Of Cow’s Blood As A Cure For Burns In
Rat (Rattus Norvegicus)

Rahmad Dwi Ardhiansyah1*, Riefky Pradipta Baihaqie1, Muhammad Nuriy Nuha Naufal1,
Muhamad Atabika Farma Nanda1, Aprilia Maharani1, Yuda Heru Fibrianto1

1
Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
*
Email: rahmad.dwi.a@mail.ugm.ac.id

Naskah diterima: 24 Januari 2018, direvisi: 29 Januari 2019, disetujui: 6 Nopember 2019

Abstract

The burn is tissue damage to the skin caused by exposure to high heat, chemicals or electric current. Skin or
tissue that burns will become necrotic tissue. Platelet Rich Plasma (PRP) is a platelet that is concentrated in a little
plasma. PRP is used to stimulate and accelerate the healing of bone and soft tissue because it contains growth
factor. PRP is obtained by blood centrifugation to get the most of platelets by minimizing plasma. The purpose
of this study was to prove the ability of PRP from the waste cow’s blood to accelerate the healing of rat burns.
Experimental animals used in this study were 10 white rats. An iron with round shape heat in fire, then stick into
rats skin to make wound. The experimental design were used 5 groups. Groups 1-3 were animal with 10%, 20%,
30% PRP concentration treatment. The other 2 groups would be the negative control (not treated) and the positive
control (placenta extract 10% + neomycin sulfate 0,5%). The parameters used to measure the rate of wound
healing is the healing time and the type of tissue that is formed. The data were analyzed using One-way Analysis
of variance (Anova) with Kruskal-Wallis statistical method in 95% significant rate. The result showed there is
a significant difference between treatments. The results shown by the best healing wounds treated with PRP
concentration of 30%. Tissues analysis were done by making preparations of histopathological from the skin.
The results showed that the treated wounds healed but the untreated wound, ephitelization were not formed yet.

Key words: blood, burns; growth factor; Platelet Rich Plasma; Slaughterhouse

Abstrak

Luka bakar adalah kerusakan jaringan pada kulit akibat terkena panas tinggi, bahan kimiawi maupun arus
listrik. Luka bakar akan lama penyembuhannya tergantung derajat keparahan luka. Platelet Rich Plasma (PRP)
merupakan platelet/trombosit yang terkonsentrasi pada sedikit plasma. PRP digunakan untuk menstimulasi dan
mempercepat kesembuhan pada tulang dan jaringan lunak karena mengandung growth factor. PRP didapat
dengan cara mensentrifuse darah hingga didapatkan bagian terbanyak dari platelet dengan meminimalisir
plasma. Tujuan penelitian ini adalah membuktikan kemampuan PRP dari limbah darah sapi untuk mempercepat
kesembuhan pada luka bakar tikus. Hewan coba yang dipakai pada penelitian ini adalah tikus putih sebanyak 10
ekor dibagi menjadi 5 kelompok. Besi panas berbentuk bulat dengan diameter 1x1 cm dipanaskan dengan api,
lalu ditempelkan pada kulit. Kelompok perlakuan diberi PRP dengan konsentrasi 10%, 20% dan 30% dengan
salep vaselin album, kelompok kontrol negatif yang tidak diberi perlakuan dan kelompok kontrol positif yang
diberi obat yang terbuat dari ekstrak plasenta sapi 10%+neomycin sulfate 0,5%. Parameter yang dipakai untuk
mengukur tingkat kesembuhan luka adalah waktu kesembuhan dan pemeriksaan histopatologi. Data dianalisis

104
 Platelet Rich Plasma (Prp) dari Limbah Darah Sapi Sebagai Obat Luka Bakar ....

dengan metode statistik One-way Analsisis of variance (Anova) tingkat signifikansi 95% yang dilanjutkan dengan
Kruskal-wallis. Hasil penelitian menunjukkan perbedaan signifikan antara PRP konsentrasi 10%, 20%, 30%, dan
kontrol positif dengan kontrol negatif. Konsentrasi PRP yang optimal adalah 20%. Pemeriksaan mikroskopik
pada jaringan kulit dilihat dengan pembuatan preparat histopatologi. Hasil menunjukkan bahwa luka pada
kelompok perlakuan dan kontrol positif tampak sembuh, sedangkan kelompok kontrol negatif epitelisasi belum
tertutup jelas.

Kata kunci: limbah darah sapi; luka bakar; Platelet Rich Plasma

Pendahuluan mikrotubulus kontraktil di sekeliling bagian

Luka adalah hilang atau rusaknya kesatuan/
komponen jaringan yang secara spesifik terdapat
substansi jaringan yang rusak atau hilang.
Beberapa ahli berpendapat luka adalah suatu
gangguan dari kondisi normal pada kulit (Taylor,
1997). Luka bakar adalah kerusakan jaringan
pada kulit akibat terpajan panas tinggi, bahan
kimiawi maupun arus listrik (Moenadjat, 2002).
Kulit atau jaringan tubuh yang terbakar akan
menjadi jaringan nekrotik. Jaringan nekrotik ini
tidak dapat dibuang segera tetapi tetap melekat
di tubuh penderita untuk waktu yang relatif lama
(Marzoeki, 1993).
Rumah Potong Hewan (RPH) adalah suatu
bangunan atau kompleks bangunan dengan
desain dan syarat tertentu yang digunakan
sebagai tempat memotong hewan bagi konsumsi
masyarakat umum (Anonim, 2010). Seekor sapi
yang disembelih menghasilkan limbah darah
kurang lebih sebanyak 28 liter. Limbah darah ini
mencemari air dan berdampak pada kualitas fisik
air yaitu warna dan pH disamping itu total padatan
terlarut. padatan tersuspensi, kandungan lemak,
Biological Oxygen Demand (BOD), ammonium,
nitrogen, fosfor akan mengalami peningkatan.
Hal tersebut dapat menurunkan kualitas air
dan mengganggu kesehatan bila dikonsumsi
(Sanjaya,1996)
Komponen darah terdiri dari plasma,
sel darah merah, sel darah putih dan platelet.
Platelet adalah sel darah berbentuk diskoid kecil
berukuran 1-3µm. Jumlah rata-rata platelet
dalam sirkulasi darah antara 1,5-3,0x105/mL,
dan dalam in vivo waktu bertahan platelet sekitar
7 hari (Everts, 2006). Jumlah platelet normal
pada darah antara 150.000/µl sampai 350.000/
µl, dan rata-rata sekitar 200.000/µl (Marx, 2001).
Platelet dibentuk dari megakariosit dan disintesis
di sumsum tulang. Platelet mempunyai ring dari
luarnya, mengandung aktin dan myosin. Bagian
dalam platelet, beberapa struktur intraseluler
menunjukkan kandungan glikogen, lisosom, dan
2 tipe granula yaitu dense granula dan α granula.
Dense granula yang mengandung ADP, ATP,
serotonin, dan calsium. α granula mengandung
faktor penjendalan, growth factor, dan protein
lain (Everts, 2006). Platelet dengan konsentrasi
1.000.000 platelet/µl dalam 5 ml volume plasma
telah terbukti dapat mempercepat penyembuhan
tulang dan jaringan lunak (Marx, 2001).
Berdasarkan teori diatas dilakukan penelitian
tentang Platelet Rich Plasma (PRP) dari limbah
darah sapi sebagai obat luka bakar pada tikus putih
(Rattus norvegicus).
Materi dan Metode
Darah sapi diambil dari Rumah Potong
Hewan (RPH) Giwangan di Yogyakarta. Darah
sapi ditampung dengan Falcon® tube yang telah
ditambahkan ethylene deamine tetra acetic acid
(EDTA) untuk mencegah penggumpalan darah.
Perbandingan antara EDTA dan darah adalah 1:9.
Darah yang sudah ditampung dalam Falcon® tube
di sentrifuge dengan kecepatan 2400 rpm selama
10 menit. Bagian padat atau pellet dibuang,
sehingga tertinggal bagian plasma saja. Plasma
disentrifuge dengan kecepatan 3600 rpm selama
15 menit. Bagian Platelet Rich Plasma (PRP)
dipisahkan dengan membuang bagian Platelet
Poor Plasma memakai spet (Tozum, 2003). PRP
yang telah didapat dicampurkan langsung secara
homogen dengan basis krim. Perbandingan untuk
pembuatan krim PRP 10% adalah 15 gram basis
krim ditambahkan dengan 1,5 ml PRP. Krim PRP
20% adalah 15 gram basis krim ditambahkan
dengan 3 ml PRP. Krim PRP 30% adalah 15 gram
krim ditambahkan dengan 4,5 ml PRP.

105
Rahmad Dwi Ardhiansyah, et. al.
Tikus putih di adaptasikan selama 1 minggu
pada kandang di Laboratorium Practical Animal,
Fakultas Kedokteran Hewan UGM. Jumlah
tikus yang dipakai sebanyak 10 ekor dan diberi
5 perlakuan yang berbeda. Tikus terlebih dahulu
dianestesi menggunakan ketamine 10% dengan
dosis 25 mg/Kg. Luka bakar pada tikus dibuat
dengan mencukur rambut pada bagian punggung
terlebih dahulu. Besi dengan diamter 1x1 cm
dipanasi terlebih dahulu menggunakan bunsen
selama 15 menit. Besi panas ditempelkan pada
kulit selama 3 detik. Luka diberikan pada 5 bagian
tempat untuk kontrol (-), kontrol (+), krim PRP
10%, krim PRP 20%, dan krim PRP 30 %. Kontrol
negatif tidak diberi pengobatan, sedangkan
kontrol positif diberi obat komersial yang terbuat
dari ekstrak plasenta 10%, neomycin sulfate 0,5%,
dan basis gel. Setiap pagi dan sore dilakukan
pengobatan dengan cara mengolesi obat-obat
tersebut secara topikal.
Parameter yang dipakai untuk mengukur
tingkat kesembuhan luka adalah waktu kesembuhan
dengan melihat ukuran luka setiap 3 hari dan tipe
jaringan yang terbentuk. Data waktu kesembuhan
luka dianalisis dengan metode statistik One-way
Analsisis of variance (Anova) tingkat signifikansi
95% dengan Kruskal-wallis. Analisa data tipe
jaringan yang terbentuk dilakukan dengan
pembuatan dan pembacaan preparat histopatologi.
Hasil dan Pembahasan
Berikut ini adalah tabel hasil pengukuran
luka setiap 3 hari, dihitung dari besaran luka
menggunakan milimeter blok.
Luka bakar yang diberikan obat dengan salep
PRP 10% memiliki waktu kesembuhan luka lebih
Tabel 1. Hasil pengukuran luka setiap 3 hari
Hari ke- Kontrol (-) Kontrol (+)
1 12,20 ±1,304 8,80 ±0,837
4 12,60 ±1,140 10.60 ±2,702
7 12,40 ±1,140 11,20 ±1,304
10 11,80 ±0,447 11,40 ±1,140
13 11,20 ±0,447 10,40 ±0,894
16 9,20 ±1,304 7,60 ±1,817
19 8,20 ±1,304 6,00 ±1,225
22 7,00 ±1,414 4,20 ±1,483
25 2,40 ±1,949 0 0
106
cepat daripada kontrol (+) dibuktikan dari ukuran
luka pada kulit tikus. PRP 20% maupun PRP 30%
pertumbuhan luka relatif sama tetapi lebih cepat
daripada kontrol (-), kontrol (+) maupun 10%.
Hasil analisis dengan metode One-way Analsisis
of variance (Anova) dengan Kruskal-wallis
(p<0,05) menunjukkan bahwa terdapat perbedaan
yang signifikan antara kontrol positif dengan
kontrol negatif, sementara itu tidak ada perbedaan
yang signifikan antara kontrol + dengan PRP
10%. Kontrol positif dengan PRP 20% dan 30%
terdapat perbedaan yang signifikan. PRP 20% dan
30% tidak ada perbedaan yang signifikan.
Pemeriksaan Histopatologi
Hasil pembacaan preparat histopatologi
menunjukkan bahwa tipe kesembuhan luka
bervariasi pada masing-masing perlakuan Berikut
ini adalah gambaran histopatologi kulit pada hari
ke 14:
Pada kontrol (-), epithelisasi epidermis belum
menutup jaringan luka, infiltrasi neutrofil, limfosit,
plasma sel, makrofag dan fibrin serta hancuran sel
di epidermis; scab/keropeng yang berisi hancuran
sel masih terlihat di epidermis; tampak fibroblast
di dermis; infiltrasi neutrofil, limfosit di sub kutan
dan muskularis; dan infiltrasi limfosit dan makrofag
di dermis. Hasil pembacaan preparat histopatologi
pada kontrol (-) menunjukkan bahwa luka belum
sembuh secara sempurna. Hasil ini sangat berbeda
dengan Kontrol (+), Salep PRP 10%, 20%, dan
30% yang menunjukkan kesembuhan luka prima.
Hal tersebut ditandai dengan tampak ephitelisasi
epidermis sudah menutup permukaan luka, lapisan
dermis banyak tampak terisi jaringan ikat kolagen
padat, tampak fibroblast di dermis, infiltrasi
Krim PRP 10% Krim PRP 20% Krim PRP 30%
9,40 ±1,673 10,20 ±0,447 10,20 ±0,447
9,60 ±1,140 9,80 ±0,447 9,20 ±0,447
9,20 ±0,837 9,20 ±0,447 9,00 ±0,707
9,80 ±1,304 9,60 ±1,342 9,20 ±1,095
9,40 ±0,548 9,20 ±0,837 8,20 ±0,837
6,60 ±1,140 5,60 ±1,342 4,60 ±1,342
4,60 ±1,140 4,20 ±1,095 3,40 ±0,894
3,40 ±1,140 2,80 ±0,447 1,80 ±0,447
0 0
 19 8,20 ±1,304 6,00 ±1,225 4,60 ±1,140 4,20 ±1,095 3,40 ±0,894
22 7,00 ±1,414 4,20 ±1,483 3,40 ±1,140 2,80 ±0,447 1,80 ±0,447
25 2,40 ±1,949 0 0 0 0

Platelet Rich Plasma (Prp) dari Limbah Darah Sapi Sebagai Obat Luka Bakar ....
:

Volume 2, Issue 2, Pages 116–126.

Gambar 1. Gambaran histopatologi kulit. Keterangan: A. Keratin; B. Fibroblast; C. Jaringan ikat kolagen padat; D. Sel radang; E. Scab

limfosit di dermis sedikit, dan infiltrasi neutrofil,
limfosit di subkutan dan muskularis sedikit.
Infiltrasi sel radang biasanya terjadi pada
hari 2-4 pasca terjadinya luka, hal ini diakibatkan
karena trombosit yang dilepaskan saat terjadi luka
menarik sel-sel radang ke daerah luka. Infiltrasi
sel radang terutama neutrofil berfungsi untuk
memfagositosis bakteri yang mengontaminasi
luka (Rozman dan Bolta, 2007). Jumlah infiltrasi
sel radang harusnya menurun setiap harinya,
apabila masih terdapat infiltasi sel radang tersebut
menunjukkan bahwa luka masih belum sembuh
secara optimal. Fibroblast pertama muncul
pada hari ketiga pasca terjadinya luka dan akan
mencapai puncak pada hari ketujuh. Fibroblast
bermigrasi ke daerah luka akan memulai sintesis
matriks ekstraseluler dan bertahap digantikan oleh
matriks kolagen, kejadian ini berlangsung hingga
dua minggu pasca luka. Matriks kolagen apabila
terdeposisi dalam jumlah yang cukup pada daerah

107
Rahmad Dwi Ardhiansyah, et. al.
luka maka fibroblast akan berhenti memproduksi
kolagen (Singer dan Clark, 1999). Fibroblast
berperan serta dalam proses angiogenesis dengan
cara menstimuli makrofag untuk menghasilkan
berbagai jenis growth factor (Gabriel dan
Mussman, 2009). Angiogenesis merupakan
proses pembentukan darah baru yang berperan
dalam pembentukan jaringan granulasi. Proses
angiogenesis akan berhenti melalui apoptosis
(programmed cell death). Pada fase ini fibroplasia
dan angiogenesis merupakan proses terintegrasi
dan dipengaruhi oleh substansi yang dikeluarkan
oleh platelet dan mikrofag (Robert, 2004).
Protein yang terkandung dalam α-granule dari
platelet yang sangat berpengaruh pada kesembuhan
luka, termasuk didalamnya adalah Platelet-
Derived Growth Factor (PDGF) dengan isomer αα,
ββ, dan αβ, Transformer Growth Factor (TGF)-β
dengan isomer β1 dan β2, Platelet Factor 4 (PF4),
Interleukin (IL), Platelet-Derived Angiogenesis
Factor (PDAF), Vascular Endothelial Growth
Factor (VEGF), Epidermal Growth Factor (EGF),
Platelet-Derived Endothelial Growth Factor
(PDEGF), Epithelial Cell Growth Factor (ECGF),
Insulin-like Growth Factor (IGF), osteocalcin,
osteonectin, fibrinogen, vitronectin, fibronectin,
dan thrombospondin (TSP). Protein ini secara
kolektif adalah anggota dari kelompok growth
factor, cytokines, dan chemokines yang termasuk
dalam protein sekretori (Eppley, 2006). Menurut
Everts (2006) platelet juga mengandung Basic
Fibroblast Growth Factor (bFGF), Connective
Tissue Growth Factor (CTGF) (Eppley, 2006).
Peran platelet pada tahap kesembuhan
luka adalah sebagai berikut: 1) Degranulasi
Platelet: kerusakan jaringan, PDGF dan FGF
mulai diproduksi oleh sel yang terluka. Platelet
membentuk sumbat pada tempat itu, dan akan
memulai degranulasi dengan merilis growth
factor, PDGF dan TGF-β adalah growth
factor yang sangat penting pada tempat luka
dan mulai melakukan proses penyembuhan
luka. Karakteristik dari molekul PGF adalah
kemotaktik dan mitogenik yang berhubungan
dengan sel radang seperti neutrofil, monosit, dan
makrofag. 2) Aksi Inflamasi: dosis tunggal PDGF
yang diberikan pada lika incisi menunjukkan
bahwa terjadi respon radang dengan peningkatan
pemasukan netrofil dan makrofag. 3) Deposisi
108
Matrik: fase sintesis matrik dan deposisi matrik,
PGF kembali melakukan peran predominan.
Pada penelitian, bahwa dosis tunggal dari PDGF
meningkatkan volume granulasi jaringan sebesar
200% setelah 7 hari. Pemberian TGF-β secara
tunggal pada luka, itu menyatakan bahwa matrik
sebagian besar membentuk kolagen baru. 4)
Produksi Kolagen: Produksi koagen kolagen
sangat penting dalam penyembuhan luka, yang
diinisiasi aksi kemotaktik dan mitogenik dari
fibroblast oleh FGF. 5) Epitelialisasi: Pemberian
secara topikal Epidermal Growth Factor (EGF)
memulai untuk mempercepat epitelialisasi.
PDGF sangat penting dalam epitelialisasi,
bersama dengan FGF meningkatkan kontraksi
dan waktu remodeling (Everts, 2006). Platelet
juga mempunyai aktifitas antimikroba yang dapat
mencegah terjadinya infeksi pada luka, platelet
mengandung dan melepaskan protein yang bersifat
mikrobisidal yaitu termed platelet microbicidal
proteins (PMPs) atau thrombin-induced PMPs
(tPMPs) jika dirangsang dengan mikroorganisme
atau agonis trombosit berhubungan dengan infeksi
pada vitro (Yeaman & Arnold, 1999).
Kesimpulan
Berdasarkan paparan hasil analisis
makroskopis dan mikroskopis dapat ditunjukkan
bahwa salep Platelet Rich Plasma yang dihasilkan
dari limbah darah sapi memiliki kemampuan yang
lebih baik dibandingkan dengan obat luka bakar
komersial.
Daftar Pustaka
Anonim. (2010). Peraturan Menteri Pertanian
Nomor 13/Permentan/Ot.140/1/2010
Tentang Persyaratan Rumah Potong Hewan
Ruminansia Dan Unit Penanganan Daging
(Meat Cutting Plant). Kementrian Pertanian
Republik Indonesia
Eppley, B.L., Pietrzak, W.S. dan Blanton M.
(2006). Platelet-Rich Plasma: A Review of
Biology and Applications in Plastic Surgery.
Plastic Reconstructive Surgery Volume 118
(6)
 Platelet Rich Plasma (Prp) dari Limbah Darah Sapi Sebagai Obat Luka Bakar ....
Everts, P.A.M., Johannes, T.A.K., Gernot, W.,
Jacques P.A.M.S., Johannes H., Eddy, P.O.,
Hemk A.M.B., dan Andre, V.Z. (2006).
Platelet-Rich Plasma and Platelet Gel: A
Review. JECT, 2006:38:174-187
Gabriel A, Mussman, J. (2009). Wound Healing,
Growth Factor. Department of Plastic
Surgery. Loma Linda University School of
Medicine. Birmingham.
Marx, R.E.( 2001). Platelet-Rich Plasma (PRP):
What Is PRP and What Is Not PRP?. Implant
Dentistry Vol. 10 No. 4. USA: Lippincott
Williams & Wilkins
Marzoeki, D. (1993). Ilmu Bedah Luka dan
Perawatannya. Surabaya: Airlangga
University Press
Moenadjat, Y. (2003). Luka Bakar: Pengetahuan
Klinik Praktis. Jakarta: Balai Penerbit FKUI
Robert F. (2004). Wound Healing: an overview of
acute, fibrotic and delayed healing. Frontiers
in Bioscience, 9: 283-289.
Rozman P, Bolta Z. (2007). Use of platelet growth
factor in treating wounds and soft tissue
injuries. Acta Dermatoven APA, 16(4).
Sanjaya A.W., Sudarwanto M, dan Pribadi
E.(1996). Pengelolaan Limbah Cair Rumah
Potong Hewan di Kabupaten Dati II Bogor.
Bogor: Media Veteriner Vol III (2)
Singer AJ, Clark RA. (1999). Cutaneous wound
healing. NEJM, 341(1).
Taylor, C. (1997). Fundamental of Nursing The Art
and Science of Nursing Care. 4th Edition.
Philadelpia: JB Lippincoff hal 699-705.
Tozum T.F. dan Demiralp, B. (2003). Platelet-
Rich Plasma: A Promising Innovation
in Dentistry. di dalam Clinical Practice
Canada: Journal of the Canadian Dental
Association. Vol 69 No 10.
Yeaman, M.R. dan Arnold, SB. (1999).
Antimicrobial peptides from platelets. Drug
Resist Updat Volume 2, Issue 2, Pages 116–
126.
109
 Jurnal Sain Veteriner, Vol. 38. No. 2. Agustus 2020, Hal. 110-118
DOI: 10.22146/jsv.47774
ISSN 2443-1583 (Print), ISSN 2407-3733 (Online)
Tersedia online di https://jurnal.ugm.ac.id/jsv

Hubungan Kepadatan Permukiman dengan Luas Permukiman terhadap Sebaran

Demam Berdarah Dengue

Relationship of The Settlement of The Density With The Extensive Settlement of The Settlement
Dengue Hemorrhagic Fever
Marlena1, Rinidar2, Muhammad Rusdi3, Farida4, Teuku Reza Ferasyi5, Nurliana6
1
Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh, Aceh
2
Laboratorium Farmakologi, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh Aceh
3
Laboratorium Penginderaan Jauh dan Kartografi, Fakultas Pertanian Universitas Syiah Kuala
Banda Aceh, Aceh
4
Laboratorium Parasitologi, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh, Aceh
5
Laboratorium Kesehatan Masyarakat Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Syiah Kuala,
Banda Aceh, Aceh
6
Laboratorium Kesehatan Masyarakat Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Syiah Kuala,
Banda Aceh, Aceh
Email: lena_kkp@yahoo.co.id

Naskah diterima: 17 Juli 2019, direvisi: 30 Juli 2019, disetujui: 11 April 2020

Abstract

Banda aceh which part of the area is a coastal area and lowland, is an endemic area of dengue
​​ hemorrhagic
fever (DHF). The case of DHF in Banda Aceh is always fluctuating from year to year so it needs to be analyzed
the relationship of the environment to the distribution of DHF. The purpose of this study was to analyze the
relationship between settlement density and settlement area to the distribution of DHF in Banda Aceh City.
This research uses visual interpretation and overlay methods using quantitative descriptive research design.
Descriptive research was conducted using a survey method based on a cross-sectional study. The survey was
carried out on the density of settlements and was associated with the incidence of DHF spatially. The type of data
used is primary data obtained through direct observation using the Global Positioning System (GPS) to see the
distribution of DHF and interpretation data of remote sensing images to see patterns of settlement density. While
secondary data from the Banda Aceh City Public Works and Spatial Planning Office and the Banda Aceh City
Health Office. The number of samples was all DHF sufferers in 2017 totaling 236 people spread in the city of
Banda Aceh. Data were analyzed using ArcGIS and processed statistically using Chi-Square. Sparse residential
density areas of 46.7% have 3 points of high category DHF cases, areas of medium settlement density of 34.4%
have 7 points of high category DBD cases and areas of densely populated densities of 18.9% have 5 points of high
category DBD cases. Statistical test results showed a value of P> 0.05, meaning that there was no relationship
between settlement density and the incidence of dengue cases in Banda Aceh City. There is no relationship
between the density of settlements with the area of ​​settlements to the distribution of dengue hemorrhagic fever
(DHF) in the city of Banda Aceh.

Keywords: Aedes aegypty; case DHF; Geographic Information System; settlement density

110
 Hubungan Kepadatan Permukiman dengan Luas Permukiman

Abstrak

Kota Banda Aceh merupakan daerah endemis penyakit Demam Berdarah Dengue (DBD). Kasus DBD di
Banda Aceh selalu fluktuatif dari tahun ke tahun sehingga perlu dianalisis hubungan lingkungan terhadap sebaran
DBD. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menganalisis hubungan kepadatan permukiman dengan luas
permukiman terhadap sebaran DBD di Kota Banda Aceh. Penelitian ini menggunakan metode interpretasi visual
dan overlay dengan menggunakan rancangan penelitian deskriptif kuantitatif. Penelitian deskriptif dilakukan
dengan metode survei berdasarkan studi cross-sectional. Survei dilakukan terhadap kepadatan permukinan dan
dikaitkan dengan kejadian DBD secara spasial. Jenis data yang digunakan adalah data primer diperoleh melalui
observasi langsung menggunakan alat Global Positioning System (GPS) untuk melihat sebaran DBD dan data
interpretasi citra penginderaan jauh untuk melihat pola kepadatan permukiman. Sedangkan data skunder dari
Dinas Pekerjaan Umum dan Penataan Ruang Kota Banda Aceh dan Dinas Kesehatan Kota Banda Aceh. Jumlah
sampel adalah seluruh penderita DBD tahun 2017 berjumlah 236 orang yang tersebar di Kota Banda Aceh.
Data di analisis menggunakan ArcGIS dan diolah secara statistik menggunakan Chi-Square. Daerah kepadatan
permukiman jarang sebesar 46,7% memiliki 3 titik kasus DBD katagori tinggi, daerah kepadatan permukiman
sedang sebesar 34,4% memiliki 7 titik kasus DBD katagori tinggi dan daerah kepadatan permukiman padat
sebesar 18.9% memiliki 5 titik kasus DBD katagori tinggi. Hasil uji statistik memperlihatkan nilai P>0,05,
artinya tidak ada hubungan kepadatan permukiman dengan kejadian kasus DBD di Kota Banda Aceh.Tidak
terdapat hubungan kepadatan permukiman dengan luas permukiman terhadap sebaran demam berdarah dengue
(DBD) di Kota Banda Aceh.

Kata kunci : Aedes aegypty; kasus DBD; kepadatan permukiman; sistem informasi geografis

Pendahuluan negara hiperendemik dengan jumlah provinsi

Demam berdarah dengue (DBD) adalah
penyakit yang banyak ditemukan di sebagian
besar wilayah tropis dan subtropis dan merupakan
masalah kesehatan masyarakat dunia (WHO,
2012). Hostalami DBD adalah manusia, agentnya
adalah virus dengue yang termasuk kedalam
family Flaviridae dan genus Flavivirus, terdiri
dari 4 serotipe yaitu Denv-1, Denv-2, Denv3 dan
Denv-4, ditularkan ke manusia melalui gigitan
nyamuk yang terinfeksi, khususnya nyamuk
Aedes aegypti dan Aedes albopictus (Chandra,
2010). Penyebaran DBD sangat cepat meningkat
sejak 30 tahun terakhir. Pada tahun 1970, hanya
sembilan negara yang melaporkan kasus demam
berdarah. Namum saat ini, diperkirakan 100
negara yang memiliki iklim tropis dan subtropis
merupakan daerah endemis DBD. Diperhitungkan
lebih dari 40% dari populasi dunia beresiko terkena
virus dengue dan 87% dari total populasi di Asia
Tenggara beresiko demam berdarah (WHO, 2009).
Di Indonesia penyakit DBD sejak tahun 1968
telah terjadi peningkatan persebaran kasus DBD.
Pada tahun 1968 hanya 58 kasus menjadi 158.912
kasus pada tahun 2009. World Health Organization
(WHO menetapkan Indonesia sebagai salah satu
yang terkena DBD sebanyak 32 provinsi dari 33
provinsi di Indonesia dan 355 kabupaten/kota dari
444 kota terkena DBD. Setiap hari dilaporkan,
sebanyak 380 kasus DBD dan 1-2 orang meninggal
setiap hari (WHO, 2009). Penyakit ini pertama
kali dilaporkan terjadi di Surabaya. Selama tahun
1996-2005 tercatat 334.685 kasus DB dengan
jumlah penderita yang meninggal 3.092 orang
(Widyawati et al., 2011).
Kasus DBD di Indonesia pada tahun 2017
berjumlah 68.407 kasus, dengan jumlah kematian
sebanyak 493 orang. Jumlah tersebut menurun
cukup drastis dari tahun sebelumnya, yaitu
204.171 kasus dan jumlah kematian sebanyak
1.598 orang. Angka kesakitan DBD tahun 2017
menurun dibandingkan tahun 2016, yaitu dari
78,85 menjadi 26,10 per 100.000 penduduk.
Namun, penurunan Case fatality rate (CFR) dari
tahun sebelumnya tidak terlalu tinggi, yaitu 0,78%
pada tahun 2016, menjadi 0,72% pada tahun 2017.
Berikut tren angka kesakitan DBD selama kurun
waktu 2010-2017 (Kemkes, 2018).
Berdasarkan laporan Dinas Kesehatan Kota
Banda Aceh, Jumlah warga yang terjangkit DBD
tahun 2012 sebanyak 506 kasus, tahun 2013

111
Marlena, et. al.
sebanyak 258 kasus, tahun 2014 sebanyak 299
kasus, tahun 2015 sebanyak 127 kasus dan tahun
2016 sebanyak 152 kasus (Dinkes Banda Aceh,
2017). Pada tahun 2017 terdapat sebanyak 236
kasus DBD tersebar dalam sembilan kecamatan
dengan IR (Incidence Rate) per 100.000 penduduk
sebesar 59,6 (Dinkes Banda Aceh. 2018).
Jumlah kasus penyakit DBD cenderung
meningkat sepanjang tahun, peningkatan ini
terjadi karena adanya pembukaan lahan untuk
pemukiman baru yang menambah jumlah habitat
nyamuk (Kemkes, 2012). Penggunaan lahan yang
di alih fungsikan menjadi pemukiman penduduk
baik sementara maupun tidak menjadi salah satu
faktor penyebab penyebaran penyakit DBD di
suatu wilayah. Dikarenakan adanya mobilitas
penduduk yang kemungkinan membawa virus
dengue dari satu tempat ke tempat lainnya
(Hadinegoro dan Satari, 2004). Penyebaran DBD
banyak dilaporkan di daerah-daerah perkotaan dan
daerah dengan pengembangan pemukiman baru
yang strategis (Prasetyo, 2012). Dimana dengan
kondisi seperti ini populasi penduduk semakin
padat dan menyebabkan kepadatan tempat tinggal
pada daerah tersebut. Hal ini menyebabkan jarak
terbang nyamuk menjadi lebih pendek sehingga
penularan semakin mudah dan cepat sehingga
menciptakan kondisi yang tepat untuk transmisi
nyamuk. Pemukiman penduduk yang padat dengan
tingkat mobilisasi yang tinggi merupakan salah
satu tempat yang sangat potensial untuk terjadinya
penularan DBD (Sujariyakul et.al., 2005).
Secara nasional DBD tergolong penyakit
menular dan menjadi prioritas pembangunan
nasional jangka panjang 2005-2025 (Koban,
2005). Oleh karena itu, pemerintah kota Banda
Aceh terus berupaya menanggulangi wabah DBD,
namun penanggulangan DBD di kota Banda Aceh
belum secara signifikan menurunkan jumlah
kasus DBD. Selama ini, sebaran kasus DBD
hanya berdasarkan adanya laporan dari kunjungan
masyarakat ke Puskesmas atau layanan kesehatan
lainnya. Padahal Penyakit DBD dipengaruhi tiga
elemen utama yaitu agent, host dan environment
yang sangat dinamis. Agentnya adalah nyamuk,
hostnya adalah manusia dan environment
adalah lingkungan dimana adanya habitat yeng
mendukung untuk pertumbuhan nyamuk. Kondisi
nyamuk yang dinamis serta mobilitas penduduk
112
yang tinggi, memerlukan suatu sistem untuk
memetakan sehingga diketahui pola sebaran DBD
yang dapat dijadikan sebagai prediksi awal untuk
dipakai sebagai dasar dalam melakukan intervensi
DBD.
Sistem Informasi Geografis (SIG) merupakan
suatu sistem komputer berdasarkan geografis
yang dapat digunakan untuk menganalisis data.
Seiring dengan berkembangnya teknologi, SIG
dapat dimanfaatkan di dunia kesehatan untuk
memetakan sebaran DBD dan melihat keterkaitan
faktor lingkungan yang menjadi risiko terjadinya
DBD. Pemetaan sebaran dengan menggunakan
SIG bertujuan untuk mendapatkan suatu informasi
baru mengenai gambaran pemetaan suatu
penyakit atau masalah kesehatan agar mudah
untuk dianalisis (Sunaryo et al., 2014). SIG dalam
bidang kesehatan digunakan untuk melakukan
analisis spasial penyakit khususnya hubungan
antara faktor agen, vektor, dan populasi dengan
lingkungan geografisnya (Chang et al., 2009).
Materi dan Metode
Penelitian ini dilakukan di sembilan
Kecamatan yang ada di Kota Banda Aceh.
Pelaksanaan penelitian dilakukan selama tiga
bulan yaitu bulan Agustus s.d Oktober 2018.
Subjek penelitian adalah lokasi tempat tinggal
penderita demam berdarah dengue sejak Januari
2017 sampai dengan 31 Desember 2017. Bahan
dan alat yang digunakan pada penelitian ini
meliputi Global Positioning System (GPS),
aplikasi ArcGIS, laporan kasus DBD tahun 2017
dan peta administrasi Kota Banda Aceh. Data
yang digunakan dalam penelitian ini adalah data
primer berupa titik kasus DBD dan kepadatan
permukiman. Sedangkan data sekunder diperoleh
dari Dinas Kesehatan Kota Banda Aceh berupa
data jumlah penderita demam berdarah dengue
tahun 2017 sebanyak 236 sampel dan data peta
adminstrasi Kota Banda Aceh dari Dinas Pekerjaan
Umum dan Penataan Ruang Kota Banda Aceh.
Data primer diperoleh melalui observasi
langsung ke lokasi rumah penderita DBD
menggunakan alat Global Positioning System
(GPS) untuk melihat sebaran DBD dan data
interpretasi citra penginderaan jauh untuk melihat
kepadatan permukiman. Data tersebut kemudian
 Hubungan Kepadatan Permukiman dengan Luas Permukiman

dinput kedalam aplikasi ArcGis. Klasifikasi sebaran Hasil dan Pembahasan

kasus DBD dan kepadatan permukiman digunakan
Kota Banda Aceh secara astronomi terletak
metode skoring. Pembuatan peta kepadatan
antara 05°16’15”–05°36’16” Lintang Utara dan
permukiman dilakukan dengan pengambilan
95°16’15”–95°22’35”  Bujur Timur dan berada di
data dari citra penginderaan jauh. Kepadatan
belahan bumi bagian utara dengan ketinggian
permukiman suatu desa dihitung berdasarkan
wilayah kota berkisar antara 0,80 m–5,0 m di
jumlah luas seluruh atap dibagi dengan luas
atas permukaan laut. Kota Banda Aceh memiliki
blok pemukiman dalam satuan unit pemukiman,
9(sembilan) kecamatan dan 90 (sembilan puluh)
sehingga dari hasil perhitungan tersebut dapat
desa dengan luas wilayah administratif adalah
diketahui perbandingan antara penggunaan lahan
61,36 km. Kota Banda Aceh memiliki posisi
pemukiman dan non pemukiman di desa tersebut
geografis dengan batas-batas sebagai berikut; (1)
(Dinas Cipta Karya PU, 2006).
sebelah utara berbatasan dengan Selat Malaka;
Parameter yang digunakan dalam menilai
(2) sebelah selatan berbatasan dengan Kabupaten
kepadatan permukiman adalah berdasarkan Ditjen
Aceh Besar; (3) sebelah Timur berbatasan dengan
Cipta Karya Departemen Pekerjaan Umum tahun
Kabupaten Aceh Besar dan (4) sebelah Barat
2006. Dasar perhitungan Kepadatan permukiman
berbatasan dengan Samudra Hindia. Berdasarkan
adalah dengan menghitung persentase luas
letak geografis Kota Banda Aceh berada di ujung
atap terhadap blok permukiman, besarnya nilai
utara Pulau Sumatera sekaligus menjadi wilayah
diklasifikasikan menggunakan metode skoring
paling barat dari Pulau Sumatera (PUPR, 2018).
(Drobne dan Lisec, 2009). Kepadatan jarang
Kota Banda Aceh memiliki jumlah penduduk
dikenali dengan adanya halaman lebih luas dari
tahun 2017 sebanyak 259.913 orang yang terdiri
luas bangunan. Keberadaan pohon lebih dominan
dari 133.728 orang laki-laki dan 126.185 orang
dan jarak antar bangunan berjauhan. Kepadatan
perempuan, jumlah penduduk tertinggi terdapat
sedang dapat dilihat dari jarak antar rumah yang
di Kecamatan Kuta Alam yaitu sebesar 52.130
jarang, di antara bangunan rumah yang satu
jiwa dan jumlah penduduk terendah di Kecamatan
dengan rumah yang lainnya masih terdapat pohon
Kuta Raja yaitu sebesar 13. 499 jiwa (BPS, 2018).
yang merupakan halaman. Kepadatan padat
Berdasarkan Gambar 1, distribusi kasus
dikenali dengan keberadaan bangunan yang saling
penyakit DBD di Kota BandaAceh yaitu Kecamatan
berdekatan, dimana tiap bangunan relatif tidak
Jaya Baru dan Kecamatan Baiturrahman masing-
memiliki halaman samping dan jika ada halaman
masing terdapat 37 kasus, Kecamatan Kuta alam
lebih sempit dari pada luas bangunan (Kurniadi,
dan Lueng Bata terdapat 32 kasus, Kecamatan
2014). Kepadatan permukiman diberi kategori
Syiah Kuala terdapat 26 kasus, Kecamatan Banda
sebagai berikut.
Raya terdapat 25 kasus, Kecamatan Ulee Kareng
terdapat 21 kasus, Kecamatan Meuraxa terdapat
Tabel 1. Klasifikasi kepadatan permukiman
15 kasus dan Kecamatan Kuta Raja terdapat 11
Kriteria Klasifikasi Skor
Kepadatan rumah rata-rata pada
Jarang 1
pemukiman jarang (≤40%)
Kepadatan rumah rata-rata pada
Sedang 2
pemukiman sedang (>41% - 60%)
Kepadatan rumah rata-rata pada
Padat 3
pemukiman padat (>60%)
Sumber : Ditjen Cipta Karya PU tahun 2006 dengan modifikasi.

Data di analisis menggunakan ArcGIS melalui

analisis buffer, skoring dan overlay. Data diolah
secara statistik menggunakan Chi-Square.
Gambar 1. Jumlah kasus penyakit DBD Kota Banda Aceh tahun
2017

113
Marlena, et. al.

kasus. Distribusi kasus DBD katagori rendah
terdapat sebanyak 39 desa. Dari 39 desa tersebut
ada 9 desa yang merupakan desa dengan katagori
pemukiman padat yaitu Desa Keudah, Keuramat,
Laksana, Merduati, Neusu Jaya, Peunayong,
Peuniti, Peurada dan Punge Jurong. Distribusi
kasus DBD katagori sedang terdapat sebanyak
20 desa. Dari 20 desa tersebut ada 2 desa yang
merupakan desa dengan katagori pemukiman
padat yaitu Mulia dan Setui. Distribusi kasus
DBD katagori tinggi terdapat sebanyak 15 desa.
Ada 5 desa yang merupakan desa dengan katagori
pemukiman padat yaitu Ateuk Pahmawan,
Emperom, Lamteumen Timur, Panterik dan
Sukaramai.
Tabel 2. Distribusi kepadatan permukiman berdasarkan luas
pemukiman di Kota Banda Aceh
Kepadatan Luas Pemukiman Jumlah
permukiman (ha) (desa)
Jarang 1-10 42
Sedang 11-21 31
Padat 22-32 17
Berdasarkan Tabel 2, desa yang memiliki
kepadatan permukiman jarang sebanyak 42
desa atau 46.7%, desa yang memiliki kepadatan
permukiman sedang sebanyak 31 desa atau 34.4%
dan desa yang memiliki kepadatan permukiman
padat sebanyak 17 desa atau 18.9%.
Berdasarkan Tabel 3 dapat diketahui bahwa
desa yang memiliki jumlah kasus DBD sedikit
dengan kepadatan permukiman jarang sebesar
31,1%, desa yang memiliki jumlah kasus DBD
sedikit dengan kepadatan permukiman sedang
sebesar 21,1%, desa yang memiliki jumlah kasus
DBD sedikit dengan kepadatan permukiman padat
sebesar 8,9%, desa yang memiliki jumlah kasus
DBD sedang dengan kepadatan permukiman
jarang sebesar 10,0%, desa yang memiliki jumlah
kasus DBD sedang dengan kepadatan permukiman
sedang sebesar 6,7%, desa yang memiliki jumlah
kasus DBD tinggi dengan kepadatan permukiman
jarang sebesar 5,6%, desa yang memiliki jumlah
kasus DBD tinggi dengan kepadatan permukiman
sedang sebesar 6,7 % dan desa yang memiliki
jumlah kasus DBD tinggi dengan kepadatan
permukiman tinggi sebesar 4,4 %.
Berdasarkan uji statistik Chi Square antara
kepadatan permukiman dengan sebaran kasus
DBD menunjukan kepadatan permukiman tidak
mempengaruhi pola sebaran DBD di Kota Banda
Aceh dengan nilai P > 0,05.
Pada Gambar 2 menjelaskan tingkat
kepadatan permukiman terhadap sebaran kasus
DBD kota Banda Aceh berdasarkan data kasus
DBD tahun 2017. Daerah kepadatan permukiman
%
jarang sebesar 46,7% memiliki 3 titik kasus DBD
46.7 katagori tinggi terdapat pada Kecamatan Lueng
34.4 Bata yaitu Desa Batoh, Lamdom dan Blang Cut.
18.9
Daerah kepadatan permukiman sedang sebesar
34,4% memiliki 7 titik kasus DBD katagori tinggi
terdapat pada kecamatan Ulee Kareng ada 2 desa
Gambar 2. Peta kepadatan permukiman dan sebaran DBD di
Kota Banda Aceh

Tabel 3. Hubungan kejadian DBD dengan Kepadatan Permukiman di Kota Banda Aceh

Kepadatan Permukiman
Jumlah
Jumlah Kasus Jarang Sedang Padat %
Volume
Vol % Vol % Vol %
Rendah 28 31.1 19 21.1 8 8.9 55 61.1
Sedang 9 10.0 6 6.7 5 5.6 20 22.2
Tinggi 5 5.6 6 6.7 4 4.4 15 16.7
Jumlah 42 46.7 31 34.4 17 18.9 90 100

114
7

yaitu Desa Ceurih dan Ie Masen Kayee Adang,
Kecamatan Syiah Kuala ada 1 desa yaitu Desa
Pineueng, Kecamatan Banda Raya ada 1 desa
yaitu Desa Geuceu Komplek, Kecamatan Kuta
Alam ada 1 desa yaitu Desa Lampulo, Kecamatan
ada 1 desa yaitu Neusu Aceh dan Kecamatan Jaya
Baru ada 1 desa yaitu Desa Punge Blang Cut.
Daerah kepadatan permukiman padat sebesar
18.9% memiliki 5 titik kasus DBD katagori tinggi
terdapat pada Kecamatan Jaya Baru ada 2 desa
yaitu Desa Emperom dan Lamteumen Timur,
Kecamatan Baiturrahman ada 2 desa yaitu Desa
Ateuk pahlawan dan Sukaramai dan Kecamatan
Lueng Bata ada 1 desa yaitu Desa Panterik.
Banda Aceh merupakan kota kecil dengan luas
wilayah permukiman padat sebesar 18,9% dari jumlah
wilayah kota Banda Aceh. Pada Gambar 2 menjelaskan
tingkat kepadatan permukiman terhadap sebaran
DBD kota Banda Aceh. Daerah berwarna merah
menggambarkan daerah permukiman padat, daerah
berwarna kuning menggambarkan daerah permukiman
sedang dan daerah berwarna hijau menggambarkan
daerah permukiman jarang. Pada daerah permukiman
padat hanya terdapat 5 desa dari 90 desa yang ada
di Kota Banda Aceh yang memiliki kasus DBD
katagori tinggi yaitu Desa Emperom, Lamteumen
Timur, Ateuk pahlawan, Sukaramai dan Panterik.
Persentase daerah permukiman padat dengan kasus
DBD katagori tinggi hanya sebesar 5,55%. Hasil uji
statistik menyatakan bahwa kepadatan permukiman
di Kota Banda Aceh tidak mempengaruhi penyebaran
kasus penyakit DBD. Hal ini tidak sesuai dengan
penelitian (Indrayati dan Setyaningsih, 2013). yang
menyatakan faktor kepadatan perumahan berhubungan
dengan kasus DBD.
Selain kepadatan permukiman, faktor lainnya
yang mempengaruhi kejadian DBD adalah kepadatan
penduduk suatu daerah (Prasetyowati, 2015).
Kepadatan penduduk yang tinggi dipusat-pusat
perkotaan dengan perumahan dibawah standar, sarana
air yang tidak memadai, saluran pembuangan dan
limbah yang buruk menciptakan kondisi ideal untuk
meningkatkan perkembangbiakan nyamuk Aedes.
Aedes aegypti adalah nyamuk perkotaan yang hidup
ditengah masyarakat dan berkembang biak dalam
wadah buatan manusia (Gubler, 1997). Frekuensi
nyamuk menggigit dipengaruhi oleh keberadaan
manusia. Estimasi Aedes aegypti menggigit pada
permukiman padat lebih tinggi dari frekuensi menggigit
Hubungan Kepadatan Permukiman dengan Luas Permukiman
di permukiman yang kurang padat (Candra, 2010).
Pusat-pusat perkotaan adalah tempat berkembang biak
demam berdarah, virus dengue dengan ketahanan yang
lebih baik diangkut ke kota-kota lain melalui orang
yang terinfeksi bepergian dengan pesawat jet (Gubler,
2004).
Kepadatan penduduk berperan di mana
wilayah padat penduduk bisa menjadi area
berisiko tinggi untuk demam berdarah (Naqvi et
al., 2015). Semakin tinggi kepadatan penduduk
di suatu wilayah dapat menyebabkan kurangnya
keseimbangan antara penduduk dan lingkungan
sehingga dapat menyebabkan sanitasi lingkungan
yang kurang baik dan penularan penyakit
bertambah cepat (Kemkes, 2012). Kepadatan
penduduk terkait juga dengan kebutuhan
persediaan air bersih dimana semakin besar
jumlah dan kepadatan penduduk, maka semakin
banyak pula kebutuhan air (Anggraini et al.,
2013). Adanya penderita DBD pada daerah padat
akan meningkatkan peluang orang lain terkena
penyakit DBD (Li et al., 2012).
Kepadatan penduduk kota Banda Aceh
tahun 2017 adalah 4.236 jiwa setiap 1 km². Dari
sembilan kecamatan yang ada di Kota Banda
Aceh, Kecamatan Baiturrahman memiliki
kepadatan penduduk tertinggi yaitu 8.088 jiwa/
km2. Sedangkan Kecamatan Kuta Raja memiliki
kepadatan penduduk terendah adalah 2.565
jiwa/km2. Daerah kepadatan permukiman padat
yang memiliki kasus DBD katagori tinggi yaitu
Desa Emperom memiliki luas wilayah 27,8 Ha,
jumlah penduduk 2.790 jiwa dan jumlah rata-rata
penduduk 100 jiwa per ha. Desa Lamteumen Timur
memiliki luas wilayah 50,5 Ha, jumlah penduduk
5.577 jiwa dan jumlah rata-rata penduduk 110
jiwa per ha. Desa Ateuk pahlawan memiliki luas
wilayah 49,85 Ha, jumlah penduduk 5.420 jiwa
dan jumlah rata-rata penduduk 109 jiwa per ha.
Desa Sukaramai memiliki luas wilayah sebesar
49,75 Ha, jumlah penduduk 4.491 jiwa dan
jumlah rata-rata penduduk 90 jiwa per ha. Desa
Panterik memiliki luas wilayah sebesar 51,3 Ha,
jumlah penduduk 4.462 jiwa dan jumlah rata-rata
penduduk 87 jiwa per ha (BPS, 2018).
Beberapa penelitian menyatakan faktor-
faktor lain yang berhubungan dengan kejadian
DBD adalah mobilitas, urbanisasi, pertumbuhan
penduduk, ekonomi, perilaku masyarakat,
115
Marlena, et. al.
perubahan iklim, sanitasi lingkungan dan
ketersediaan air bersih (Ali and Ma’rufi,
2016). Perubahan demografis dan sosial seperti
transportasi modern berperan dalam peningkatan
kejadian dan penyebaran virus dengue (Setiati et
al., 2006).
Kejadian DBD akan meningkat di daerah
dengan aktivitas manusia yang tinggi, seperti
daerah perumahan, kawasan industri dan
sekolah-sekolah (Gubler dan Meltzer, 1999).
Daerah tersebut merupakan daerah yang banyak
manusia melakukan kegiatan (Shafie, 2011).
Selain tempat-tempat dengan aktivitas manusia
yang tinggi, tempat-tempat yang ditinggalkan
juga bisa menjadi tempat berkembangbiak bagi
nyamuk. Pemakaman, yang memiliki wadah
seperti vas bunga, dapat menjadi sumber untuk
perkembangbiakan nyamuk Aedes (Chang et al.,
2011).
Pasca tsunami tahun 2004, lahan yang ada
di Kota Banda Aceh banyak dimanfaatkan untuk
pembangunan perumahan. Bangunan-bangunan
baru tersebut banyak yang berbentuk komplek
yang saling berdekatan (Dinas PUPR, 2018). Pola
sebaran penduduk dan perumahan yang saling
berdekatan mempengaruhi proses penularan DBD
(Indrayati dan Setyaningsih, 2013). Jarak terbang
nyamuk kurang dari 40 meter dan mungkin lebih
jika terbawa kendaraan atau angin sehingga
penularan DBD terjadi pada radius 100 meter dari
rumah penderita DBD (Anggraeni, 2010). Jarak
penyebaran nyamuk Aedes aegypti tidak lebih dari
200 meter (Liu-Helmersson et al., 2014).
Banda Aceh memiliki pola permukiman yang
berdekatan dengan aliran sungai, persawahan
dan jalan lokal yang cenderung terjadi mobilitas
penduduk yang cukup tinggi (Dinas PUPR,
2018). Banyaknya pepohonan rindang dan tempat
penampungan air, sangat mendukung untuk
tempat perindukan nyamuk. Pohon dan air tanah
merupakan faktor penting dalam kejadian DBD
(Ndenga et al., 2017). Pemukiman yang luas
mempengaruhi kasus DBD di daerah perkotaan
(Vanwambeke et al., 2006). Transmisi dengue
sangat lokal dan dibatasi oleh ruang dan waktu
(Ibarra, et al., 2014).
Perpindahan penduduk dari perdesaan ke
perkotaan mempengaruhi pola persebaran dan
kejadian DBD (Telle et al., 2016). Pertumbuhan
116
penduduk yang tidak memiliki pola tertentu
merupakan salah satu faktor yang berperan dalam
munculnya DBD. Perkembangan perkotaan telah
menyebabkan meningkatnya sumber daya air
buatan, seperti tempat penyimpanan air, ban atau
wadah lama di tempat sampah untuk diternakkan
oleh vektor (Kumar et al., 2001). Kejadian
DBD erat kaitannya dengan sumber penularan
berupa tempat perindukan nyamuk penular dan
status DBD itu sendiri yang merupakan penyakit
menular yang disebabkan oleh gigitan vektor
nyamuk Aedes aegypti yang didalam tubuhnya
telah mengandung virus dengue (Cameron et al.,
2012). Dengue yang ditularkan ke manusia oleh
nyamuk Aedes aegypti perempuan dengan tingkat
transmisi yang tinggi sepanjang hari dan malam di
daerah perkotaan (Pereda et al., 2014).
Kesimpulan
Daerah kepadatan permukiman padat kota
Banda Aceh memiliki kasus DBD kategori
tinggi sebesar 18.9% dan hasil uji statistik
memperlihatkan nilai P>0,05, artinya tidak
terdapat hubungan kepadatan permukiman dengan
luas permukiman terhadap sebaran demam
berdarah dengue (DBD) di Kota Banda Aceh.
Ucapan Terima Kasih
Penelitian ini didukung oleh Kementerian
Kesehatan Republik Indonesia melalui Universitas
Syiah Kuala (Beasiswa Pasca Sarjana).
Daftar Pustaka
Ali, K., and Ma’rufi, I. (2016). Study of Factors
Caused Dengue Haemorrhagic Fever Case
Study: Pasuruan, Jawa Timur Indonesia.
Journal of Medical and Bioengineering (5):
108-112.
Anggraeni DN. (2010). Stop! demam berdarah
dengue. Bogor: Bogor Publ House
Anggraini, F.D., Samadi., dan Warnadi. (2013).
Pengaruh kebutuhan penduduk terhadap
kebutuhan air bersih di Pulai Panggang,
Provinsi DKI Jakarta. Spasial Wahana
Komunikasi dan Informasi Geografi. 12 (2):
25-30.

Badan Pusat Statistik Kota Banda Aceh. (2018).
Kota Banda Aceh dalam Angka 2018.
Banda Aceh
Cameron, R.W.F., Blanusa, T., Taylor, J.E.,
Salisbury, A., Halstead, A.J., Henricot, B.,
and Thompson, K. (2012). The dosmetic
garden its contribution to urban green
infrastructure. Urban Foresty & Urban
Greening. 11(2): 129-137.
Candra, A. (2010). Demam berdarah dengue,
epidemiologi, patogenesis, dan faktor risiko
penularan. Aspirator. (2): 110 –119.
Chang, A.Y., Maria, E.P., Javier, Jimenez.,
Magdalena. E.S., Scott, M.H., David, J.C.,
and Rajan, P. K. (2009). Combining Google
Earth and GIS mapping technologies in a
dengue surveillance system for developing
countries. International Journal of Health
Geographics. 8:49
doi:10.1186/1476-072X-8-49.
Chang, M.S., Christophel, E.M., Gopinath, D.,
Abdur, R. (2011). Challenges and future
perspective for dengue vector control
in Western Pacific Region. West Pacific
Surveill Response.(2): 9–16.
Dinas Cipta Karya PU. (2006). Konsep Pedoman
Identifikasi Kawasan Permukiman Kumuh
Penyangga Kota Metropolitan. Jakarta.
Dinas Kesehatan Kota Banda Aceh. (2017).
Laporan kasus dan kematian deman
berdarah dengue Kota Banda Aceh tahun
2016. Banda Aceh.
Dinas Kesehatan Kota Banda Aceh. (2018). Profil
Dinas Kesehatan Kota Banda Aceh tahun
2017. Banda Aceh.
Dinas Pekerjaan Umum dan Penataan Ruang.
(2018). Profil Dinas PUPR Kota Banda
Aceh tahun 2017. Banda Aceh
Drobne, S., dan Lisec, A. (2009). Multi-attribute
decision analysis in GIS: weighted linear
combination and ordered weighted
averaging. Informatica. : 459-474.
Gubler, D.J.(2004). Cities spawn epidemic dengue
viruses. Nat Med; 10: 129–130
Gubler, D.J. (1997). Dengue and Dengue
Hemorrhagic Fever: Its History and
Hubungan Kepadatan Permukiman dengan Luas Permukiman
Resurgence as a Global Public Health
Problem In: Gubler DJ, Kuno G, eds.
Dengue and Dengue Hemorrhagic Fever.
London: CAB International; pp. 1–22
Gubler, D.J and Meltzer, M. (1999). Impact of
dengue/dengue hemorrhagic fever on the
developing world. Adv Virus Res. (53): 35–
70.
Hadinegoro, S.R.H., dan Satari, H.I. (2004).
Demam Berdarah Dengue, Jakarta, Balai
Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas
Indonesia, h. 17.
Ibarra, A.M.S., Luzadis, V.A., Cordova, M.J.B.,
Silva, M., Ordoñez, T., Ayala, E.B., and
Ryan, S.J. (2014). A social-ecological
analysis of community perceptions of
dengue fever and Aedes aegypti in Machala,
Ecuador. BMC Public Health. 14 (1135):
2-14.
Indrayati A dan Setyaningsih W. (2013). Penentuan
lokasi priortas penanganan kasus demam
berdarah di Kota Semarang berbasis sistem
informasi geografis. Jurnal Forum Ilmu
Sosial. (40): 56-67.
Kementerian Kesehatan. (2012). Data penyakit
tahun 2011 yang menurun dibandingkan
dengan 2010. Direktur Jenderal
Pengendalian Penyakit dan Penyehatan
Lingkungan. Jakarta.
Kementerian Kesehatan. (2018). Profil
Kementerian Kesehatan Tahun 2017.
Jakarta.
Koban, A.W. (2005). Kebijakan pemberantasan
wabah penyakit menular: Kasus kejadian
luar biasa demam berarah dengue (KLB
DBD). The Indonesian Institute. Center For
Public Policy Research. 1-35.
Kumar, A., Sharma, S., Padbidri, V., Thakare, J.,
Jain, D., and Datta, K. (2001). An outbreak
of dengue fever in rural areas of northern
India. Jounal Commun Dis. (33):274-81.
Kurniadi, A. (2014). Analisis kualitas lingkungan
permukiman di Kecamatan Kotagede Kota
Yogyakarta menggunakan citra quickbird.
Journal Universitas Negeri Yogyakarta.
(3):1-9.
117
Marlena, et. al.
Li, Z., Yin, W., Clements, A., Williams, G., Lai, S.,
Zhou, H. (2012). Spatiotemporal analysis
of indigenous and imported dengue fever
cases in Guangdong province, China. BMC
Infectious Diseases. (12): 132.
Liu-Helmersson, J., Stenlund, H., Wilder-Smith,
A., and Rocklov, J. (2014). Vectorial capacity
of Aedes aegypti: effects of temperature and
implications for global dengue epidemic
potential. PLoS ONE; 9:e89783.
Naqvi, SAA, Kazmi, SJH, Shaikh, S and Akram,
M. (2015).Evaluation of prevalence Patterns
of Dengue Fever in Lahore District through
Geo-Spatial Techniques. Journal of Basic
and Applied Sciences;11:20–30.
Ndenga, B.A., Mutuku, F.M., Ngugi, H.N.,
Mbakaya, J.O., Aswani, P., and Musunzaji,
P.S. (2017). Characteristics of Aedes aegypti
adult mosquitoes in rural and urban areas
of western and coastal Kenya. PLoS ONE.
(12): 1-14.
Pereda, P.C., Menezes, T.A., Alves, D. (2014)
Impact of Climate Change on Dengue
Risk in Brazil (Russia: European Regional
Science Association).
Prasetyo. (2012). Analisis spasial penyebaran
penyakit DBD di Kecamatan Magetan
Kabupaten Magetan. Tesis. Program
Pascasarjana Fakultas Kedokteran
Universitas Gajah Mada Yogyakarta.
Prasetyowati, I. (2015). Kepadatan penduduk
dan insidens rate demam berdarah dengue
(Dbd) Kabupaten Bondowoso, Jawa Timur.
Indonesia. Jurnal Heal Sci. 5(2).
Setiati, T.E., Wagenaar, J.F., Kruit, M.D.,
Mairuhu, A.T., Gorp, E.C., Soemantri, A.
(2006). Changing epidemiology of dengue
haemorrhagic fever in Indonesia. Dengue
Bull. (30): 1–14.
118
Shafie, A. (2011). Evaluation of the spatial risk
factors for high incidence of dengue fever
and dengue hemorrhagic fever using GIS
application. Sains Malaysiana. 40(8): 937–
43.
Sujariyakul, A., Prateepko, S., Chongsuvivatwong,
V., Thammapalo, S. (2005). ‘Transmission
of Dengue Hemorrhagic Fever: At home of
School?’, Dengue Bulletin. (29): 32-40.
Sunaryo, Bina Ikawati, Dewi Puspita Ningsih.
(2014). Distribusi spasial demam berdarah
dengue di Kabupaten Banyumas, Provinsi
Jawa Tengah. Balaba. 10(01): 1-8.
Telle, O., Vaguet, A,, Yadav, N.K., Lefebvre, B.,
Daudé, E., Paul, R.E., et al. (2016). The
spread of dengue in an endemic urban
milieu–the case of Delhi, India. PLoS ONE
11(1): e0146539.
Vanwambeke, S.O., Benthem, B.H.B.V.,
Khantikul, N., Burghoorn-Maas, C., Panart,
K., Oskam, L., Lambin, E.F., and Somboon,
P. (2006). Multi-level analyses of spatial
and temporal determinants for dengue
infection. International Journal of Health
Geographics. (5):1-16.
Widyawati, Nitya, I.F., Syaukat, S., Tambunan,
R.P., dan Soesilo, T.E.B. (2011).
Penggunaan sistem informasi geografi
efektif memprediksi potensi demam
berdarah di Kelurahan Endemis. Makara
Kesehatan. (15): 21-30.
World Health Organization. (2009). Neglected
Tropical Disease (Geneva: World Health
Organization) p 32.
World Health Organization. (2012). Dengue and
severe dengue. Mediacentre/factsheets/
fs112012WHO.
 Jurnal Sain Veteriner, Vol. 38. No. 2. Agustus 2020, Hal. 117-121
DOI: 10.22146/jsv.50202
ISSN 2443-1583 (Print), ISSN 2407-3733 (Online)
Tersedia online di https://jurnal.ugm.ac.id/jsv

Gambaran Leukosit Kucing Penderita Feline Panleukopenia

Leucocyte Profile Of Feline Panleukopenia

Hary Purnamaningsih1, Soedarmanto Indarjulianto1*, Yanuartono1, Alfarisa Nururrozi1,
Irkham Widiyono1, Rusmihayati1

1
Departemen Ilmu Penyakit Dalam, Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gadjah Mada, Jl. Fauna No.2,
Karangmalang, Depok, Sleman. 55281 Yogyakarta, Indonesia

*Coresponding author; Email: indarjulianto@ugm.ac.id

Naskah diterima: 27 September 2019, direvisi: 27 Oktober 2019, disetujui: 30 Desember 2019

Abstract

One of the diseases in cats with high morbidity and mortality is feline panleukopenia (FPL). This study
aims to evaluate the total of leukocytes to determine the prognosis in cats suffer Feline Panleukopenia, males
and females of various ages. This study used 27 male and female cats of various ages, that have been diagnosed
as FPL based on the feline parvo virus Ag test. As much as 1 ml blood sample were collected from all of cats to
examinated the total of leukocytes, then analyzed descriptively. The results showed that a total of 19 FPL (70.4%)
had a total of leukocytes <1,000 cells/ mm3, 4 FPL (14.8%) 1,000 - 2,500 cells/mm3 and 4 others (14.8%) > 2,500
cells/mm3. The incidence of FPL was more in cats ≤ 6 months, ie 21 (77,8%) compared to > 6 months, ie 6 cats
(22,2%). Feline Panleukopenia was suffered by more male (59.3%) than females (40.7%) cats. Based on the
results of this study it was concluded that the majority of feline panleukopenia have very low leukocytes with
infausta prognosis, especially in male and young cats.

Key words: cat; Feline Panleukopenia; leukocyte

Abst­rak

Salah satu penyakit pada kucing dengan morbiditas dan mortalitas tinggi adalah Feline Panleukopenia
(FPL). Tujuan dari penelitian ini adalah mengetahui jumlah leukosit untuk menentukan prognosis pada kucing
jantan dan betina berbagai umur penderita Feline Panleukopenia. Penelitian ini menggunakan 27 ekor kucing
jantan dan betina berbagai umur yang didiagnosa FPL berdasar Feline Parvo Virus Ag test. Semua kucing diambil
darah secara lege artis sebanyak 1 ml, diperiksa jumlah leukositnya, kemudian dianalisis secara diskriptif. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa sebanyak 19 ekor (70,4 %) FPL mempunyai jumlah total leukosit < 1.000 sel/
mm3, 4 ekor (14,8 %) 1.000 – 2.500 sel/mm3 dan 4 ekor yang lain (14,8 %) > 2.500 sel/mm3. Kejadian FPL lebih
banyak diderita kucing umur ≤ 6 bulan, yaitu 21 ekor (77,8 %) dibanding umur > 6 bulan, yaitu 6 ekor (22,2 %).
Feline Panleukopenia lebih banyak diderita kucing jantan (59,3 %) dari pada betina (40,7%). Berdasarkan hasil
penelitian ini disimpulkan bahwa sebagian besar penderita Feline Panleukopenia mengalami penurunan leukosit
berat dengan prognosis infausta, terutama pada kucing jantan dan umur muda.

Kata Kunci: Feline Panleukopenia; kucing; leukosit

119
Hary Purnamaningsih, et. al.
Pendahuluan
Feline Panleukopenia (FPL)  adalah
suatu penyakit yang disebabkan oleh Feline
Panleukopenia Virus (FPV) dengan morbiditas
dan mortalitas tinggi pada kelompok famili
Felidae (Kruse et al., 2010; Hartmann, 2017).
Penyakit ini disebabkan oleh virus tipe DNA,
famili Parvoviridae subgrup feline parvovirus.
Infeksi FPV menyerang segala umur kucing
dengan morbiditas dan mortalitas tertinggi terjadi
pada anak kucing hingga umur 12 bulan. Kematian
dapat mencapai 25-90% pada panleukopenia
akut dan 100% pada infeksi per akut. (Abd-
Eldaim et al., 2009; Kruse et al., 2010). Virus ini
menyerang jaringan pembentuk darah dan limfe
serta mukosa organ gastro intestinal, sehingga
menyebabkan enteritis yang disertai penurunan
jumlah leukosit. Anak kucing, kucing sakit dan
kucing yang tidak divaksin adalah individu yang
lebih rentan tertular. Kucing dewasa biasanya lebih
tahan karena mempunyai kekebalan bawaan atau
sudah berulang kali terinfeksi. Mende et al. (2014)
melaporkan bahwa status vaksinasi berhubungan
secara signifikan dengan kurangnya antibodi
melawan FPV. Apabila induk kucing menyusui
anaknya maka anak kucing akan memperoleh
kekebalan laktogen. Kekebalan pasif bertahan
selama tiga sampai dua belas minggu.
Penyakit FPL dapat berjalan perakut dan
akut, tetapi seringkali ditemukan kasus yang
subklinis. Kasus per akut menyebabkan kematian
tiba-tiba dengan sedikit atau tanpa tanda-tanda
penyakit. Kasus akut menunjukkan demam (40-
41,7oC), depresi dan anoreksia muncul setelah
periode inkubasi 2 -7 hari. Pada kasus infeksi
FPV subklinis seringkali tidak ada gejala klinis
yang menciri seperti muntah, diare dan dehidrasi.
Hal tersebut menyulitkan pengambilan diagnosis
sebagai dasar terapi. Penelitian Kruse et al. (2010)
menghasilkan bahwa diagnosis infeksi FPV dapat
didasarkan salah satunya adanya penurunan
jumlah leukosit.
Infeksi FPV telah ditemukan di seluruh
dunia, termasuk di Indonesia. Penentuan
diagnosis adanya FPL di klinik praktisi dokter
hewan seringkali didasarkan ketika gejala klinis
sudah menciri, dimana kondisi kucing penderita
sudah parah. Hal ini mengakibatkan prognosis
dan terapi yang diberikan tidak dapat memberikan
120
efek maksimal. Dewasa ini telah berkembang
cara diagnosis FPL dengan menggunakan kit
untuk melihat adanya FPV di dalam feses, namun
demikian selain harganya cukup mahal metode ini
tidak dapat memperkirakan keparahan penyakit.
Keparahan penyakit dapat dilihat salah satunya
dari jumlah rendahnya leukosit dari kucing yang
terinfeksi FPV (Greene, 2012). Tujuan penelitian
ini adalah mengevaluasi jumlah leukosit untuk
menentukan prognosis pada kucing penderita
Feline Panleukopenia, jantan dan betina berbagai
umur.
Materi Dan Metode
Materi yang digunakan dalam penelitian ini
adalah data hasil pemeriksaan 27 ekor pasien-
pasien kucing jantan dan betina berbagai umur dan
berbagai ras di Laboratorium Klinik Departemen
Ilmu Penyakit Dalam Fakultas Kedokteran
Hewan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Pasien tersebut dinyatakan positif menderita
Feline Panleukopenia berdasarkan pemeriksaan
FPV Ag test kit ® (Bionote Inc, Korea) melalui
test sampel swab kloaka kucing. Kucing diambil
darah sebanyak 1 ml secara lege artis melalui
vena chepalica, dimasukkan ke dalam tabung
berisi EDTA, kemudian diperiksa jumlah total
leukositnya dengan metode hitung manual
menggunakan Neubauer Chamber (Duncan et al.,
2011; Nossafadli et al., 2014). Data yang didapat
dianalisis secara deskriptif.
Hasil dan Pembahasan
Semua 27 ekor kucing yang dipakai di dalam
penelitian ini telah didiagnosis menderita infeksi
FPV berdasarkan hasil skrining terhadap feses
kucing menggunakan FPV Ag test kit ® (Bionote
Inc, Korea). Penghitungan jumlah total leukosit
dari 27 ekor kucing pada penelitian ini didapatkan
bahwa sebagian besar kucing penderita infeksi
FPV mempunyai jumlah total leukosit kurang dari
1.000 sel/mm3, yaitu 19 ekor (70,4 %), diikuti
dengan jumlah total leukosit antara 1.000-2.500
sel/mm3 sebanyak 4 ekor (14,8 %) dan dengan
jumlah total leukosit >2.500 sel/mm3 sebanyak
4 ekor (14,8 %) (Tabel 1 dan 2). Hasil penelitian
yang serupa juga dilaporkan oleh Hussein dan
Al-Bayati (2016) yang menemukan penurunan

Tabel 1. Jumlah total leukosit FPL umur ≤ 6 bln dan > 6 bln (n=27)
Umur <1.000 sel/mm3 % 1.000-2.500 sel/mm3
≤ 6 bln 14 51,9
> 6 bln 5 18,5
Jumlah 19 70,4
jumlah total leukosit pada kucing penderita FPL
antara 1.700 – 4.900 sel/ mm3.
Apabila dibanding dengan referensi, jumlah
leukosit dari semua kucing dalam penelitian ini
berada dibawah normal. Menurut Ishida (2011) dan
Moritz et al. (2004) jumlah normal total leukosit
pada kucing berkisar 5.500 -19.500 sel/mm3 dan
10.570 – 14.390 sel/mm3. Penurunan leukosit pada
penelitian ini kemungkinan diakibatkan karena
tidak mampunya kucing memproduksi leukosit
karena adanya gangguan pada sumsum tulang
akibat infeksi FPV.
Infeksi FPV dimulai dari masuknya virus
yang terdapat pada sekresi hewan penderita
(feses, muntahan, urin, dan saliva). Virus FP
masuk ke tubuh hospes yang baru secara oral,
infeksi dan replikasi virus akan dimulai di
jaringan limfoid orofaring dan gastrointestinal.
Dalam waktu 2-7 hari viremia tampak terjadi dan
virus didistribusikan ke seluruh tubuh, terutama
menuju kripta intestinum. Virus berlokasi di
epithelium lidah, mulut, dan mukosa esophagus,
usus kecil, dan jaringan limfoid. Virus selanjutnya
menginfeksi dan merusak sel germinal kripta
intestinal dan menyebabkan villi runtuh, sehingga
terjadi diare, muntah, perdarahan usus dan invasi
bakteri berikutnya. Aktivitas mitosis dari sel
myeloid pada sumsum tulang dan sel limfoid
juga menjadi target, sehingga mengakibatkan
terjadinya neutropenia dan limfopenia (Abd-
Eldaim et al., 2009; Duncan et al., 2011; Sykes,
2014; Barrs, 2019).
Penurunan leukosit pada kucing penderita
FPL akan memudahkan masuknya agen-agen
infeksi yang lain. Hal ini menyebabkan kondisi
hewan menjadi semakin memburuk dan bahkan
dapat menyebabkan kematian. Stockham dan
Scott (2008) menyatakan penurunan jumlah
total leukosit (leukopenia) ini berdampak pada
melemahnya sistem kekebalan tubuh sehingga
tubuh akan rentan terhadap infeksi. Berdasar
Gambaran Leukosit Kucing Penderita Feline Panleukopenia ....
% >2.500 sel/mm3 % jumlah
3 11,1 4 14,8 21 (77,8%)
1 3,7 0 0,0 6 (22,2%)
4 14,8 4 14,8 27 (100%)
evaluasi penurunan jumlah leukosit, prognosis
pada penderita FPL dapat diperkirakan. Kruse et
al. (2010) menyatakan pula bahwa risiko kematian
kucing dengan total leukosit < 1.000 sel/mm3 lebih
tinggi (1,77 kali) dibandingkan kucing dengan
leukosit 1.000 – 2.500 sel/mm3 dan 1,85 kalinya
dibandingkan dengan kucing yang mempunyai
leukosit > 2.500 sel/mm3.
Apabila mengacu pendapat Kruse et al.
(2010) tersebut di atas, maka dalam penelitian
27 ekor dengan FPL ini kemungkinan sebanyak
19 ekor (70,4 %) mempunyai prognosi infausta
dengan total leukosit < 1.000 sel/mm3, 4 ekor (14,8
%) mempunyai prognosis Dubius-infausta dengan
leukosit 1.000 – 2.500 sel/mm3 dan 4 ekor yang lain
(14,8 %) prognosis dubius dengan jumlah leukosit
> 2.500 sel/mm3 (Tabel 2). Resiko kematian pada
kucing dengan leukosit <1000 adalah 4.75 kali
dibandingkan dengan kucing dengan leukosit
>1000 – 2.500 dan 1,73 kali dibanding kucing
dengan leukosit diatas 2.500 sel/mm3.
Dilihat dari umur kucing pada penelitian
ini diketahui bahwa kejadian infeksi FPV dapat
ditemukan pada semua kucing baik umur muda
maupun dewasa, tetapi kejadianya lebih banyak
ditemukan pada kucing berumur ≤ 6 bulan, yaitu
sebanyak 21 dari 27 ekor (77,8 %), dibanding
pada kucing umur > 6 bulan sebanyak 6 dari 27
ekor (22,2 %) (Tabel 1). Hasil ini mirip dengan
hasil penelitian studi di Jerman yang menunjukkan
bahwa dari 242 kucing penderita FPL sebanyak
57% berumur kurang dari 6 bulan (Kruse et al.,
2010). Penelitian Mosallanejad et al. (2009)
terhadap 23 ekor kucing diare akibat infeksi
FPV menunjukkan bahwa 14 ekor kucing (60,9
%) berumur < 6 bulan dan 9 ekor kucing (39,1
%) berumur > 6 bulan. Islam et al. (2010) juga
mendapat hasil yang sama, yaitu 8 (61,5 %) dari
13 ekor kucing yang positip FPL berumur dibawah
dari 2 bulan. Perbedaan ini kemungkinan dapat
berkaitan dengan status imunitas dari individu.
121
Hary Purnamaningsih, et. al.
Kucing umur < 6 bulan yang sudah disapih
tidak memiliki maternal antibodi lagi di dalam
tubuhnya, sehingga lebih rentan terhadap infeksi
FPV. Keberadaan Maternally-derived antibody
(MDA) terhadap FPV pada anak kucing dilaporkan
sangat bervariasi yang dapat mencapai umur 14-16
minggu, dan setelah itu tidak dapat memproteksi
terhadap infeksi FPV (Reese et al., 2008; DiGangi
et al., 2012). Kucing yang berumur lebih dari 6
bulan kemungkinan lebih tahan terhadap infeksi
FPV karena kemungkinan sudah terbentuknya
antibodi terhadap FPV yang cukup akibat paparan
dari alam maupun karena vaksinasi. Program
vaksinasi terhadap FPV biasanya diberikan pada
umur 6-8 minggu diikuti umur 10-12 minggu dan
umur 14-16 minggu, dan setelah itu diulang setiap
1 tahun kemudian (DiGangi et al., 2012; Jakel et
al., 2012; Scherk et al., 2013). Hasil penelitian
Mosallanejad et al. (2009) menunjukkan bahwa
7 dari 23 (30,4 %) FPL mati walaupun sudah
mendapatkan pengobatan suportif. Kebanyakan
kucing yang mati adalah berumur dibawah 6
bulan. Oleh karena itu sangat perlu dikembangkan
penelitian yang berkaitan dengan terapi FPL
sehingga dapat menekan angka kematian penderita
FPL.
Kejadian infeksi FPV berdasarkan jenis
kelamin menunjukkan bahwa kucing jantan
lebih banyak (16 dari 27 ekor atau 59,3 %)
dibanding pada betina, yaitu 11 dari 27 ekor (40,7
%) (Tabel 2). Kondisi ini mirip dengan hasil
penelitian Kruse et al. (2010) yang melaporkan
bahwa dari 237 ekor kucing penderita infeksi
FPV, sebanyak 142 ekor (59,9 %) adalah kucing
jantan dan 95 ekor (40,5%) adalah kucing betina.
Penelitian Mosallanejad et al. (2009) terhadap 23
ekor kucing positip terinfeksi FPV didapatkan
sebanyak 13 ekor (56,5 %) jantan dan 10 ekor
(43,5 %) betina. Walaupun sedikit perbedaannya,
hasil penelitian yang dilakukan oleh Awad et al.
(2018) juga menunjukkan persentase kejadian
infeksi FPV pada kucing jantan lebih tinggi
Tabel 2. Jumlah penderita Feline panleukopenia berdasarkan jenis kelamin
Jenis Kelamin <1.000 sel/mm3
Betina 7 3
Jantan 12
Total 19 (70,4%)
122
dibanding kucing betina, yaitu 83 kucing jantan
dari 165 ekor (50,7%) dan 82 betina dari 165
ekor (49,3%). Lebih tingginya kejadian infeksi
FPV pada kucing jantan kemungkinan disebabkan
lebih luasnya wilayah jelajah dari kucing jantan.
Hal ini akan berdampak paparan FPV akan lebih
banyak didapatkan oleh kucing jantan. Menurut
Hansen (2010) daerah jelajah dari kucing jantan
dapat mencapai 2 kali lebih jauh dibanding kucing
betina.
Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian ini disimpulkan
bahwa sebagian besar penderita Feline
Panleukopenia mengalami penurunan leukosit
berat (< 1.000 sel/mm3) dengan prognosis infausta,
terutama pada kucing jantan dan umur muda.
Ucapan Terima Kasih
Penulis mengucapkan terima kasih kepada
Hibah Pengembangan Departemen Fakultas
Kedokteran Hewan UGM yang telah mendanai
penelitian ini dengan nomor kontrak 1182/
J01.1.22/HK4/2017.
Daftar Pustaka
Abd-Eldaim, M., Beall, M.J. and Kennedy, M.A.
(2009). Detection of feline panleukopenia
virus using a commercial ELISA for canine
parvovirus. Vet. Ther. 10: E1-6.
Awad, A.R., Khalil, W.K.B., and Attallah, G.A.
(2018). Epidemiology and diagnosis
of feline panleukopenia virus in Egypt:
Clinical and molecular diagnosis in cats,
Vet. World. 11(5): 578-584. doi: 10.14202/
vetworld.2018.578-584.
Barrs, V. (2019). Feline Panleukopenia, A Re-
emergent Disease. Vet. Clin. North Am.
Small Pract. 29 (4): 651-670. Doi: 10.1016/j.
cvsm.
1.000-2.500 sel/mm3 >2.501 sel/mm3 Jumlah
1 11 (40,7%)
1 3 18 (59,3%)
4 (14,8%) 4 (14,8%) 27 (100%)

DiGangi, B.A., Levy, J.K., Griffin, B., Reese,
M.J., Dingman, P.A., Tucker, S.J.,
and Dubovi, E.J. (2012). Effects of
maternally-derived antibodies on serologic
responses to vaccination in kittens.
J. Feline Med. Surg. 14(2), 118–123.
doi:10.1177/1098612x11432239.
Duncan, J.R., Prasse, K.W. and Mahaffey, E.A.
(2011). Veterinary Laboratory Medicine:
Clinical Pathology. 5th ed. Wiley-Blackwell,
Ames, IA.
Greene, C.E. (2012). Infectious Diseases of the
Dog and Cat Fourth Edition. Elsevier
Saunders, Missouri.
Hansen, C.M. (2010). Movements and Predation
Activity of Feral and Domestic Cats (Felis
catus) on Banks Peninsula. Thesis, Lincoln
University, Christchurch, New Zealand.
Hartmann, K. (2017). Feline panleukopenia-
update on prevention and treatment. Thai J
Vet Med Suppl. 47:S101-S104.
Hussein, A., and Al-Bayati, M. (2016). Detection
of Feline Parvovirus (FPV) from Cats
infected with Enteritis Using Rapid Test and
Polymerase Chain Reaction in Iraq. Kufa J.
Vet. Med. Sci. 7 (2): 61-70.
Ishida, T, (2011). How to Get Maximum
Information Out of Feline Hematology.
Prosiding WSAVA World Congress
Proceedings.
Islam, M.A., Rahman, M.S., Rony, S.A., Uddin,
M.J., and Rahman, A.K.M.A. (2010).
Antigenic detection of feline panleukopenia
virus in local breed cats at Tangail District
in Bangladesh. Int. J. BioRes. 2(11):25-28
Jakel, V., Cussler, K., Hanschmann, K.M., Truyen,
U., Matthias König, M., Kamphuis, E. and
Duchow, K. (2012). Vaccination against
Feline Panleukopenia: implications from a
field study in kittens. BMC Vet. Res. 8(62):
2-8.
Kruse, B.D., Unterer, S., Horlacher, K., Sauter-
Louis, C, Hartman, K. (2010). Prognostic
Factors in cats with feline panleukopenia. J.
Vet. Int. Med. 24 : 1272-1276.
Gambaran Leukosit Kucing Penderita Feline Panleukopenia ....
Mende, K., Stuetzer, B., Louis ,C.S., Homeier,
T, Yruyen, U and Hartmann, K. (2014).
Prevalence of Antibodies againts Feline
Panleukopenia virus in client-owned cats in
Southern Germany. Vet. J. 199: 419-423
Moritz, A., Fickenscher, Y., Meyer, K. (2004).
Canine and feline hematology reference
values for the ADVIA 120 hematology
system . Vet. Clin. Pathol. 33 : 32 – 38 .
Mosallanejad, B., Avizeh, R and Ghorbanpoor,
N.M. (2009). Antigenic detection of Feline
Panleukopenia virus (FPV) in diarrhoeic
companion cats in Ahvaz area. Iranian J.
Vet. Researc. Shiraz University. 10 (3) 28:
289 – 293.
Nossafadli, M. R Handarini, R., dan Dihansih,
E. (2014). Profil darah Domba Ekor Tipis
(Ovis aries) yang diberi ransum fermentasi
isi rumen Sapi. Jurnal Pertanian. 5 (2): 95-
103.
Reese M.J., Patterson E.V., and Tucker S.J.,
(2008). Effects of anesthesia and surgery
on serologic responses to vaccination in
kittens. J. Am. Vet. Med. Assoc. 233: 116–
21. 20.
Scherk, M.A., Ford, R.B., Gaskell, R.M.,
Hartmann, K., Hurley, K.F., Lappin, M.R.,
Levy, J.K., Little, S.E., Nordone, S.K., and
Sparkes, A.H. (2013). 2013 AAFP Feline
Vaccination Advisory Panel Report. J.
Feline Med. Surg. 15 (9): 785-808.
Sykes, E.J. (2014). Feline Panleukopenia Virus
Infection and Other Viral Enteritides: in
Canine and feline infectious diseases.
Canine and Feline Infectious Disease. 187-
194. doi.org/10.1016/B978-1-4377-0795-
3.00019-3
Stockham, S.L and Scott, M.A., (2008).
Fundamental of Veterinary Clinical
Pathology. Oxword, Blackwell Publising.
123
 Jurnal Sain Veteriner, Vol. 38. No. 2. Agustus 2020, Hal. 124-132
DOI: 10.22146/jsv.25912
ISSN 2443-1583 (Print), ISSN 2407-3733 (Online)
Tersedia online di https://jurnal.ugm.ac.id/jsv

Pengembangan Media Transpor untuk Koleksi Sampel Preputium, untuk deteksi Bovine Genital
Campylobacteriosis

The Development of Transport Media for Prepuce Sample Collection, for Bovine Genital
Campylobacteriosis detection
Apris Beniawan1, Agustin Indrawati2, Fachriyan Hasmi Pasaribu2

Badan Karantina Pertanian, Kementerian Pertanian, Jl. Harsono RM. No.3 Ragunan, Jakarta Selatan
1

2,
Departemen Ilmu Penyakit Hewan dan Kesehatan Masyarakat Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan, Institut
Pertanian Bogor, Dramaga, Bogor.

Email: aprisbeniawan@pertanian.go.id

Naskah diterima: 14 Juni 2017, direvisi: 5 Nopember 2019, disetujui: 15 Juli 2020

Abstract

Campylobacter fetus subsp. Venerealis (Cfv) is bacteria causing contagious genital diseases in cows called
Bovine Genital Campylobacteriosis (BGC) or vibriosis. Isolation of Cfv is difficult, because the bacteria are
fragile and need specific nutrients and oxygen (5-10%). The transport media is very important to maintain Cfv
survival before culturing in laboratory. The aim of this study was to modify a new transport media as an alternative
media for Cfv. Modification media capability was compared to Weybridge media, and Phosphate Buffered Saline
(PBS). All transport media was contaminated by Cfv with concentrations of 105, 104, 103, 102, 101 (CFU/ml),
and was stored for <6, 24, 48, 72, and 96 hours in each transport medium before culturing on blood agar, all in
triplicate. The quality of transport media was analyzed based on bacterial growth on blood agar. PCR test was
used as a confirmatory test of growing bacteria cultured on blood agar. Based on culture results, Cfv stored in
three transport mediums for <6 hours, Cfv grew on blood agar from all concentration levels provided. Cfv stored
for 24, 48, 72 and 96 hours on PBS did not grow, whereas on modification and Weybridge media, the bacteria
could grow, and enrichment occurs at all concentration levels given. This study indicated the media modification
can be used as an alternative transport medium for Cfv bacteria.

Key words: Campylobacter fetus subs. venerealis (Cfv); culture; transport Media

Abstrak

Campylobacter fetus subsp. venerealis (Cfv) adalah bakteri penyebab genital menular pada ternak yang disebut
Bovine Genital Campylobacteriosis (BGC) atau vibriosis. Isolasi Cfv ini tidak mudah dilakukan dikarenakan
sifat bakteri yang mudah mati, kebutuhan akan nutrisi dan udara yang spesifik (5-10 % O2). Pemakaian media
transpor menjadi sangat penting dalam menjaga keberlangsungan hidup Cfv sebelum dilakukan pengujian di
laboratorium. Tujuan penelitian ini adalah pengembangan media transpor sebagai alternatif media transpor untuk
Cfv. Kemampuan media transpor pengembangan ini dibandingkan dengan media Weybridge, dan Phosphate
Buffered Saline (PBS). Ketiga media transpor dikontaminasi Cfv dengan konsentrasi bertingkat 105, 104, 103, 102,
101 (CFU/ml), dan sampel disimpan berdasarkan masa simpan <6, 24, 48, 72, dan 96 jam pada masing-masing
media transpor, kemudian dikultur pada media agar darah dengan 3 ulangan. Kualitas ketiga media transpor
dianalisa berdasarkan pertumbuhan bakteri pada media agar darah. Uji Polimerase Chain Reaction (PCR)
dilakukan sebagai uji konfirmasi hasil kultur dari bakteri yang tumbuh pada media agar darah. Berdasarkan hasil
kultur, Cfv yang disimpan pada ketiga media transpor selama < 6 jam, tumbuh pada media agar darah dari semua

124
 Pengembangan Media Transpor untuk Koleksi Sampel Preputium, .....

tingkat kosentrasi yang diberikan, Cfv dengan masa simpan dalam media transpor 24, 48, 72 dan 96 jam pada PBS
tidak tumbuh, sedangkan pada media pengembangan dan media Weybridge tumbuh semakin banyak jumlahnya
pada semua tingkat konsentrasi yang diberikan. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa media pengembangan
dapat digunakan sebagai alternatif media transpor untuk bakteri Cfv.

Kata kunci: Campylobacter fetus subspecies venerealis (Cfv); kultur bakteri; media transpor

Pendahuluan peternakan, dan menyebabkan kerugian produksi

dalam jangka panjang (Hum, 2007). Isolasi bakteri
Campylobacter fetus subsp. venerealis
Cfv tidak mudah dilakukan dikarenakan bakteri
(Cfv) adalah bakteri penyebab Bovine Genital
mudah mati, membutuhkan nutrisi dan udara
Campylobacteriosis (BGC). Penyakit ini dahulu
yang spesifik. Spesimen yang akan digunakan
disebut vibriosis, dengan gejala yang ditimbulkan
dalam proses pengujian seperti kultur bakteri
diantaranya infertilitas temporer pada ternak betina,
memerlukan penanganan yang cermat dan cepat
mortalitas embrio stadium awal, siklus estrus tidak
karena kelangsungan hidup Cfv di luar tempat
teratur, konsepsi tertunda dan terkadang abortus.
alaminya terbatas dan bersifat mikroaerofilik.
Hewan yang sembuh dari infeksi Cfv, siklus estrus
Keberadaan kontaminan bakteri lain dapat
akan kembali normal dalam beberapa bulan, tetapi
tumbuh lebih cepat dalam sampel, seperti
akan mengalami penurunan angka kebuntingan
Pseudomonas spp. dan Proteus spp, membuat
dan periode kelahiran yang lebih panjang (Monke
sulit dalam mendeteksi keberadaan Cfv (Monke
et al., 2002). Pada hewan jantan biasanya tidak
et al., 2002). Media transpor sangat penting
menunjukkan gejala klinis, tetapi menjadi carrier
dalam menjaga keberlangsungan hidup Cfv dalam
dan menginfeksi hewan betina. Inseminasi Buatan
sampel sebelum dilakukan kultur sebagai standar
(IB), vaksinasi dan pemisahan kelompok yang
baku pengujian. Beberapa media transpor untuk
terinfeksi dengan yang tidak terinfeksi merupakan
Cfv telah dikembangkan, diantaranya: Clark’s,
cara yang efektif dalam pengendalian BGC
Landers’s, dan Cary-Blair’s, serta Weybridge
(Eaglesome and Garcia, 1992).
sebagai media transpor yang direkomendasikan
Berdasarkan Kepmentan No. 3238/Kpts/
OIE (2012). Media transpor komersial untuk
PD.630/9/2009, BGC termasuk Hama dan
Cfv relatif mahal serta masih sulit didapatkan.
Penyakit Hewan Karantina Golongan I (Kementan
Berdasarkan pertimbangan tersebut, diperlukan
RI, 2009). Penelitian BGC di Indonesia dilakukan
pengembangan media transpor untuk Cfv yang
oleh peneliti Balai Besar Peneilitian Veteriner
lebih mudah dipersiapkan, murah dan berkualitas
(BBLITVET) pada tahun 1998, oleh Hardjoutomo
untuk koleksi sampel sebelum pengujian.
pada 9 Provinsi di Indonesia dengan hasil negatif
Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan
Cfv, dan sampai saat ini belum ada publikasi lebih
media transpor yang berkualitas, murah dan
lanjut tentang BGC di Indonesia.
mudah untuk mendukung pengujian Cfv.
Indonesia sampai sekarang ini melakukan
importasi sapi hidup dari Australia yang
merupakan negara belum bebas dari BGC Materi Dan Metode
(Koya, 2016). Ketergantungan impor sapi hidup
Desain Penelitian
Indonesia dari Australia jumlahnya sangat banyak,
mencapai rata-rata 800 ribu ekor per tahunnya Isolat bakteri Cfv referensi diuji terlebih
untuk memenuhi kebutuhan protenin hewani dahulu menggunakan metode kultur dan
masyarakat, oleh karena itu, deteksi Cfv harus Polymerase Chain Reaction (PCR) sebagai
mulai diterapkan, untuk mencegah penyebaran uji konfirmasi. Bakteri hasil kultur kemudian
BGC pada sapi di Indonesia. dilakukan pengukuran konsentrasi dengan
Identifikasi BGC pada hewan masih sulit, spektrofotometri  untuk mendapatkan konsentrasi
karena tidak adanya tanda-tanda klinis penyakit, awal bakteri 108 CFU/ml (Standar  kekeruhan  Mc
bersifat tersembunyi, membahayakan karena Farland, 0.5). Bakteri Cfv dari hasil pengukuran
sering tidak diketahui keberadaannya dalam konsentrasi awal dilakukan pengenceran

125
Apris Beniawan, et. al.
bertingkat untuk menghasilkan konsentrasi
bakteri Cfv dengan konsentrasi 105, 104, 103, 102,
101 (CFU / ml). Bakteri Cfv dari masing masing
konsentrasi dicampur dan disimpan dalam media
transpor. Media transpor yang sudah bercampur
bakteri Cfv disimpan dalam suhu ruang (25-27ºC)
selama penelitian. Sampel bakteri Cfv dari masing-
masing media transpor dikultur pada media agar
darah sesuai masa simpan bakteri dalam media
transpor (< 6, 24, 48, 72 dan 96 jam) di masing-
masing konsentrasi bakteri yang telah ditentukan.
Kultur dilakukan ulangan sebanyak 3 kali dari
semua sampel bakteri Cfv yang diujikan. Hasil
kultur dilakukan pengamatan secara makroskopis
dan penghitungan jumlah koloni bakteri Cfv yang
tumbuh pada media agar darah. Bakteri yang
tumbuh pada media agar darah sebagai hasil kultur
dilakukan uji konfirmasi menggunakan PCR.
Isolat Bakteri Referensi
Isolat bakteri referensi berasal dari koleksi
BBLITVET, yaitu Campylobacter fetus subspecies
venerealis (Kode No. C5) dan Campylobacter
fetus subs. fetus (Kode No. C2) sebagai kontrol
pembanding.
Ekstraksi DNA
Metode ekstraksi DNA dilakukan dengan
perebusan, dengan mengambil 2-3 ose bakteri
hasil kultur dan dicampurkan dalam larutan PBS,
kemudian suspense bakteri disentrifus 12.000
rpm selama 5 menit, dan dibuang supernatannya.
Endapan bakteri kemudian ditambahkan nuclease
free water dan kembali disentrifus 12.000 rpm
selama 5 menit, dan dibuang supernatannya.
Endapan ditambahkan kembali nuclease free
water 1 ml dan dididihkan dalam waterbath suhu
95°C selama 10 menit, kemudian disentrifus
10.000 rpm selama 1 menit. Supernatan diambil
sebagai DNA template.
Uji Polimerase Chain Reaction (PCR)
Uji multiplex PCR dilakukan dengan reaksi
yang terdiri dari 10 µl Kapa ReadyMix, 0.6 µl
(10µM) untuk masing-masing primer MG3F dan
MG4R dan 0.5 µl (10µM) untuk masing-masing
primer VenSF dan VenSR dan nuclease free water
hingga mencapai volume 18 µl, dan 2 µl DNA
template ditambahkan dengan total keseluruhan
126
20 µl. Kontrol positif, negatif dan non template
control (NTC) disertakan dalam setiap amplifikasi.
Program PCR yang digunakan adalah 1 siklus
pada 95 °C selama 3 menit untuk denaturasi awal,
dilanjutkan dengan 35 siklus pada 95 °C selama
15 detik untuk denaturasi, 54 °C selama 15 detik
untuk annealing, dan 72 °C selama 30 detik untuk
ekstensi, kemudian dilanjutkan dengan 1 siklus
pada 72 °C selama 5 menit untuk ekstensi akhir.
Produk amplifikasi kemudian dianalisis dengan
elektroforesis. Pita spesifik Cff akan terbaca pada
764 pb, sedangkan Cf  terbaca pada 764 pb dan
142 pb (Hum et al., 2009). Produk PCR diseparasi
menggunakan 2% agarose yang telah ditambahkan
ethidium bromide 0.5 µg/ml pada tegangan 120 V
selama 1 jam menggunakan marker 1000 bp DNA
ladder . Hasil elektroforesis selanjutnya dilihat
menggunakan Gel-Documentation.
Primer yang digunakan dalam penelitian
ini adalah primer MG3F dan MG4R yang yang
spesifik terhadap dua subspesies C. fetus ; primer
VenSF dan VenSR yang spesifik terhadap C. fetus
subsp. venerealis. Sekuens oligonukleotida primer
yang digunakan dalam pengujian dapat dilihat
pada Tabel 1.
Tabel 1. Sekuen primer untuk Multiplex PCR (Hum et al., 2009)
Primer Sekuen
Ukuran
Produk
5’-CTT AGC AGT TTG CGA TAT TGC
VenSF 142 bp
CAT T-3’
5’-GCT TTT GAG ATA ACA ATA AGA
VenSR
GCT T-3’
5’-GGT AGC CGC AGC TGC TAA
MG3F 764 bp
GAT-3’
5’-TAG CTA CAA TAA CGA CAA
MG4R
CT-3’
Media Transpor
Media transpor yang dikembangkan dibuat
dengan menggunakan suspensi dari 10 g/lt
protease peptone, 2 g/lt glucose, 5 g/lt NaCl, ke
dalam aquadestt rata sampai dengan volume total
1 L dan dilakukan penyesuaian pH 7.2. Suspensi
tersebut selanjutnya ditambahkan 50 gr/L daging
sapi cincang tanpa lemak, dan diautoklaf pada suhu
121 °C selama 15 menit untuk sterilisasi. Setelah
media dingin, ditambahkan suplemen yang terdiri
dari 40 mg Vancomycin, 20 mg Trimetropim,
10.000 IU Polymyxin B Shulphate, yang dilarutan
 Pengembangan Media Transpor untuk Koleksi Sampel Preputium, .....
dalam aquadest tilata dan dilakukan filter secara
steril ke dalam media menggunakan membran
filter 0.22 um (Milipore®). Larutan disimpan pada
suhu 4-8 oC sampai saat penggunaan.
Media Weybridge dibuat dengan
menambahkan Mueller-Hinton broth dan charcoal
bacteriologis ke dalam 900 ml aquadestt dan di
autoklaf, setelah media dasar dingin, ditambahkan
darah kuda, dan ditambahkan vancomysin,
polymixin B dan Polymyxin B Shulphate yang
dilarutan dalam aquadest dan filter secara steril
ke dalam media dasar menggunakan membrane
filter 0.22 um (Milipore®). Larutan ditambahkan
dengan Sodium Pyruvate, Sodium Metabisulphite
dan Ferrous Sulphate secara steril, dicampur
(diaduk), kemudian disimpan pada suhu 4-8 oC
sampai saat penggunaan.
Phosphate Buffered Saline (PBS) dalam
penelitian ini digunakan sebagai media transpor
pembanding dengan perlakuan dan desain
penelitian yang sama. Phosphate Buffered
Saline adalah larutan garam berbasis air yang
mengandung natrium klorida, natrium fosfat,
dan dalam beberapa formulasi, kalium klorida
dan kalium fosfat.
Media Agar Darah
Media kultur bakteri pada penelitian ini
menggunakan media agar darah. Pembuatan media
agar dilakukan dengan menambahkan Columbia
blood agar base (39 g/L), selanjutnya diautoklaf
pada suhu 121 oC selama 15 menit dan didinginkan
dalam waterbath yang diatur pada suhu 50 oC.
Setelah larutan hangat (50 oC), ditambahkan 100
ml darah domba defibrinasi dan diaduk perlahan
secara merata. Larutan secara perlahan dituang
sebanyak ± 18 ml ke dalam cawan petri ukuran
15 x 90 mm dan dibiarkan membeku. Media
disimpan pada suhu 4-8 oC dalam wadah plastik
tertutup maksimum hingga 3 minggu.
Kultur
Kultur bakteri dilakukan dengan menggunakan
tingkat konsentrasi bakteri yang berbeda dan
disimpan dalam media transpor dengan waktu
yang berbeda (< 6 d/H), diambil 100 ul sampel
dari media media transpor, kemudian diteteskan
pada satu sisi tepi agar darah, dan diratakan,
digoreskan di semua sisi tanpa menyentuhan ose
ke ujung akhir setiap goresan. Agar darah yang
sudah digores dimasukkan ke dalam Aanaerobic
Jar yang di dalamnya diberi CampyGen untuk
mendapatkan kondisi mikroaerofilik. Anaerobic
Jar dimasukkan ke dalam inkubator, diinkubasi
selama 3 hari pada suhu 37 oC.
Analisa Makroskopis dan Statistika
Setelah masa inkubasi, koloni bakteri hasil
kultur yang tumbuh pada media agar darah
dilakukan pengamatan secara makroskopis dan
penghitungan koloni bakteri. Data hasil hitung
koloni bakteri Cfv dilakukan analisa statistika
menggunakan uji Kruskal–Wallis.
Hasil Dan Pembahasan
Isolat Bakteri Referensi
Hasil kultur isolat bakteri referensi dari
kedua isolat (Cff dan Cff) yang ditumbuhkan,
terlihat tumbuh pada media agar darah,
sebagaimana terlihat pada Gambar 1. Gambaran
makroskopis koloni bakteri Cfv dan Cff yang
tumbuh bentuknya seragam, terlihat halus,
berwarna abu-abu merah muda, mengkilap, koloni
berukuran kecil dan tidak ada perubahan warna
pada media agar darah. Menurut Ng et al. (1985)
bakteri Cfv hasil kultur biasanya menunjukkan
koloni yang berbentuk bulat atau coccus bening
(mengkilap). Koloni bakteri Cfv dan Cff berukuran
kecil yaitu 1-3 mm, terlihat halus, berwarna abu-
abu merah muda, mengkilap dan bersifat non
haemolytic (OIE, 2012).
Hasil PCR menunjukkan bahwa isolat
bakteri referensi No. C5 dan C2 yang tumbuh
pada media agar darah adalah bakteri Cfv dan Cff,
sesuai dengan kontrol yang terlihat pada Gambar
2. Uji PCR menggunakan seperangkat primer
(MG3F dan MG4R) untuk identifikasi strain fetus
yang teridentifikasi sebagai 762 bp (Muller et
al., 2003), dan primer kedua (VenSF dan VenSR)
(a) (b)
Gambar 1
Gambar 1. Hasil Kultur Isolat (a) Cfv/C5 dan (b) Cff (C2)
Kontrol
127
764 bp
 142 bp

C5 C2 C5 C2 Cfv Cff

Gambar 2.
Apris Beniawan, et. al.
Gambar 1

(a) (b) (c)

Kontrol

764 bp

142 bp

C5 C2 C5 C2 Cfv Cff

Gambar
Gambar 2. 2. PCR Hasil Kultur Isolat Referensi (Cfv dan Cff) yang Gambar 3. Media transport (a) Media Pengembangan; (b)
Gambar 3.
tumbuh pada media agar darah. Weybridge; dan (c) PBS.

(a) (b) (c)

yang spesifik untuk fetus subs. venerealis (142 bp)
dalam format multiplex PCR (Hum et al., 2009).
Hasil Kultur Bakteri Cfv dari Media Transpor
Kultur bakteri pada media agar darah
dilakukan sesuai masa simpan dalam media
transpor selama < 6, 24, 48, 72 dan 96 jam dari
masing-masing konsentrasi bakteri. Gambaran
Gambarmedia
3. traspor dalam penelitian ini terlihat pada
Gambar 3. Media transpor yang dikembangkan
terlihat berwarna sedikit bening kekuningan
dikarenakan adanya daging sapi yang terurai
sebagai kaldu. Media Weybridge terlihat berwana
hitam dan sedikit merah kecoklatan karena
adanya charcoal dan darah domba sebagai materi
penyusun media. Phosphate Buffered Saline
konsentrasi awal koloni Campylobacter yang ada
dalam sampel, dan waktu dari inokulasi sampai
inkubasi dalam media transpor. Konsentrasi
bakteri Cfv dalam preputial dapat bervariasi antara
102 – 105 CFU/ml (Clark, 1971).
Koloni bakteri yang tumbuh pada media agar
darah dilakukan pengamatan makroskopis dan
dilakukan penghitungan jumlah koloni. Gambaran
makroskopis koloni bakteri Cfv dan Cff yang
tumbuh pada media agar darah dalam penelitian
ini tampak seragam, terlihat halus, berwarna abu-
abu merah muda, mengkilap, berbentuk bulat,
berukuran kecil dan darah dalam media agar tidak
lisis yang menggambarkan bahwa bakteri yang
tumbuh bersifat non haemolytic (Gambar 4).
(a) (b)

sebagaimana umumnya, dalam penelitian ini

terliha berwarna bening.
Penelitian ini menggunakan konsentrasi
bakteri Cfv bertingkat yaitu 105, 104, 103, 102, 101
(CFU/ml), dan disimpan dalam masing-masing
media transpor, sesuai dengan tingkat konsentrasi.
Menurut Lander (1990), karakteristik sampel Gambar 4. Hasil Kultur sampel H2 (102
Gambar 4
cfu/ml); (a)
yang mempengaruhi keberhasilan kultur adalah Pengembangan; (b) Weybridge
Media Pengembangan Media Weybridge Kontrol

Tabel 2. Jumlah Koloni Bakteri Cfv

764 bp

Jumlah Bakteri ( x10)

Media transpor Cfu/ ml
H1 H2 H3 H4 H5
142 bp
Pengembangan 10 1
5 12 101 10241 103 104 10>300
5
101 102 103 >300
104 105 Cff Cfv
102 37 70 134 >300 >300
103 218 218 >300 >300 >300
104 >300 >300
Gambar 5
>300 >300 >300
105 >300 >300 >300 >300 >300
Weybridge 101 6 11 145 >300 >300
102 21 167 >300 >300 >300
103 119 >300 >300 >300 >300
104 >300 >300 >300 >300 >300
105 >300 >300 >300 >300 >300

128
 Pengembangan Media Transpor untuk Koleksi Sampel Preputium, .....
Jumlah hasil penghitungan bakteri Cfv yang
tumbuh pada media agar darah terlihat pada
Tabel 2. Koloni yang tidak memungkinkan untuk
dihitung, terhitung >300 koloni/cawan.
Hasil kultur dari sampel dengan masa simpan
kurang dari 6 jam (H1) di media transpor yang
dikembangkan, Weybridge dan PBS, bakteri Cfv
tumbuh pada semua media agar darah pada semua
tingkat konsentrasi bakteri 105, 104, 103, 102, 101
(CFU/ml). Hasil pengamatan pada masa simpan
24, 48, 72 dan 96 jam dalam media pengembangan
dan Weybridge terjadi peningkatan jumlah koloni
bakeri yang tumbuh di semua tingkat konsentrasi,
sedangkan pada sampel yang disimpan dalam PBS
tidak ada pertumbuhan bakteri disemua tingkat
konsentrasi. Hasil ini menunjukkan bahwa ketiga
media dapat digunakan sebagai media transpor
untuk banteri Cfv apabila masa simpan bakteri
kurang dari 6 jam dalam media transpor. Namun
dengan masa simpan lebih dari 24, 48, 72 dan
97 jam hanya media pengembangan dan media
Weybridge yang bersifat enrichment untuk bakteri
Cfv, sehingga dapat tumbuh pada media kultur
(Tabel. 2).
Phosphate Buffered Saline (PBS) merupakan
media cair yang biasa digunakan untuk
pengambilan sampel Cfv apabila tidak memerlukan
transportasi yang lama, namun untuk sampel
yang memerlukan perjalanan lebih dari 6-8 jam
sebelum pengujian (kultur), diperlukan Transport
Enrichment Medium (OIE, 2012). Phosphate
Buffered Saline sebagai buffer membantu bakteri
dalam mempertahankan konsistensi pH, namun
kandungan PBS tidak memenuhi kebutuhan
nutrisi dari bakteri Cfv untuk tumbuh dan
mempertahankan hidup dalam waktu yang lebih
lama. Bakteri Cfv sama dengan mikroorganisme
lainnya, memerlukan suplai nutrisi sebagai
sumber energi dan pertumbuhannya. Unsur-unsur
dasar tersebut adalah: karbon, nitrogen, hidrogen,
oksigen, sulfur, fosfor, zat besi dan sejumlah
komponen lainnya. Tidak adanya atau kekurangan
sumber-sumber nutrisi ini dapat mempengaruhi
pertumbuhan mikroba hingga pada akhirnya
dapat menyebabkan kematian. Menurut Hum et
al. (2009) Camplylobacter fetus subsp. venerealis
(Cfv) adalah parasit obligat yang menular melalui
kelamin pada sapi, beradaptasi pada permukaan
mukosa preputial dan rongga vagina, non spora,
bersifat rentan karena hanya mampu bertahan 6
jam pada kondisi atmosfer normal.
Media Weybridge merupakan media transpor
yang direkomendasikan oleh OIE (2012),
dikembangkan oleh Lander (1990), dengan
formula terdiri dari mueller hinton broth terbuat
dari beef infusion (ekstrak daging sapi), acid
casein peptone, dan Corn Starch. Ekstrak daging
sapi dan acid casein peptone sebagai sumber
nitrogen, vitamin, mineral dan asam amino yang
penting untuk pertumbuhan bakteri Cfv. Corn
starch (tepung pati) merupakan faktor pendukung
pertumbuhan bakteri sebagai sumber energi dan
berfungsi untuk menyerap racun yang dikeluarkan
bakteri, sehingga tidak mengganggu pertumbuhan
bakteri. Charcoal sering digunakan sebagai
sumber carbon, komponen media transporasi,
penyimpanan dan propagasi mikroorganisme,
terutama untuk bakteri mudah mati (Lander,
1990). Darah domba adalah sumber nutrisi
kaya protein dan tinggi zat besi sebagai faktor
pertumbuhan sel bakteri. Suplemen yang terdiri
dari Sodium Pyruvate, Sodium Metabisulphite dan
Ferrous Sulphate (FBP) dapat meningkatkan sifat
aerotoleran bakteri Campylobacter fetus (George
et al., 1978). Penambahan kombinasi antibakteri
Vankomysin, Trimetoprim dan Polymyxin sebagai
medium selektif, untuk mematikan bakteri
kontaminan lainnya (Skirrow, 1994).
Media transpor yang dikembangkan dibuat
dari daging sapi, protease peptone, glucose,
NaCl sebagai penghambat pertumbuhan bakteri
lain yang toleran terhadap garam, air (aquadestt)
sebagai pelarut dan antibiotik spesifik
(vancomysin, polymixin B dan cycloheximide)
sebagai penghambat pertumbuhan bakteri
kontaminan. Daging sapi sering digunakan
sebagai bahan untuk media pertumbuhan bakteri,
dikarenakan memiliki banyak nutrisi yang
dibutuhkan bakteri untuk tumbuh. Kandungan
danging sapi terdiri dari kalori, protein, lemak,
karbohidrat, kalsium, fosfor, zat besi, selenium,
seng, zink, vitamin B kompleks, omega 3 dan
zat lainnya. Protease peptone mengandung
nitrogen, amino nitrogen dan sodium klorida yang
dibutuhkan oleh bakteri untuk pertumbuhan.
Hasil uji statistik terhadap ketiga media
transpor menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan
129
Apris Beniawan, et. al.

Tabel 3. Uji Kruskal Wallis untuk media pengenbangan, Weybridge dan PBS

Pengenceran (Cfu/ Median

Masa simpan Nilai P
ml) Pengembangan Weybridge’s PBS
H1 101 5.000 6.000 4.000 0.658
(<6 jam) 102 33.00 35.00 39.00 0.646
103
218.0 300.0 156.0 0.488
H2 101 1.20000E+01 1.50000E+01 0.000000000 0.045
(24 jam) 102
7.00000E+01 1.49000E+02 0.000000000 0.024
103 2.48000E+02 3.00000E+02 0.000000000 0.021
H3 101
4.90000E+01 1.07000E+02 0.000000000 0.028
(48 jam) 102 1.27000E+02 3.00000E+02 0.000000000 0.021
Keterangan: Nilai P < 0.5 = ada perbedaan signifikan

signifikan pada perlakuan masa simpan < 6 jam,
namun ada perbedaan signifikan pada masa
simpan 24, 48, 72 dan 96 jam (Tabel 3), dimana
tidak ada pertumbuhan bakteri pada media agar
darah dari sampel asal PBS.
Uji statistik media pengembangan
dibandingkan dengan media Weybridge
didapatkan tidak adanya perbedaan signifikan
dari masa simpan < 6 jam (H1) di semua tingkat
konsentrasi. Hasil uji statistik dari masa simpan 24
(H2) konsentrasi 101,102 tidak berbeda signifikan,
namun ada perbedaan signifikan (P = 0.037) pada
konsentrasi 103, begitu juga pada masa simpan
48 jam (H3) pada media dengan konsentrasi 101
tidak berbeda signifikan, namun ada perbedaan
signifikan (P = 0.037) pada konsentrasi 102 (Tabel
4). Hal ini menunjukkan bahwa bakteri Cfv dapat
tumbuh dan berkembang (enrichment) dalam
media pengembangan, namun masih lebih sedikit
hasilnya dibandingkan dengan media Weybridge.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwan
media Weybridge mengandung nutrisi-nutrisi
yang dibutuhkan untuk pertumbuhan bakteri
Cfv. Media Weybridge memiliki sumber zat besi
yang lebih dikarenakan adanya adanya tambahan
suplemen FBP (meningkatkan sifat aerotoleran
untuk bakteri Cfv yang bersifat mikroaerofilik),
darah domba, mueller hinton dan Ferrous Sulfat
sebagai sumber zat besi. Media pengembangan
mendapatkan zat besi dari daging sapi, dimana
terdapat 14-15 % zat besi dalam daging sapi.
Zat besi merupakan nutrisi penting bagi semua
organisme hidup, karena merupakan kofaktor dari
banyak enzim, dan berperan penting dalam reaksi
transpor elektron dan reaksi redoks, sehingga
terbatasnya ketersediaan zat besi menghambat
pertumbuhan bakteri. (van Vliet et al., 2002).
Hasil multiplex PCR sebagai uji konfirmasi
menunjukkan bahwa dari semua bakteri yang
tumbuh di semua tingkat perlakuan (konsentrasi)
yang diberikan adalah bakteri Cfv (Gambar. 5).
Media Pengembangan Medi
Media pengembangan memiliki komponen
yang cukup untuk pertumbuhan bakteri Cfv,
dimana bahan-bahan yang digunakan lebih

Tabel 4. Hasil Uji Kruskal Wallis media pengembangan dan Weybridge

Median
Masa simpan Pengenceran (Cfu/ml) Nilai P
Pengembangan Weybridge’s
101 5.000 6.000 0.369
H1 (<6 jam) 10 2
33.00 35.00 0.827
103 218.0 300.0 0.507
10 1
12.00 15.00 0.268
H2 (24 jam) 102 70.00 149.00 0.050
10 3
248.00 300.00 0.037
101 49.00 107.00 0.077
H3 (48 jam)
10 2
127.0 300.0 0.037

130

Media Pengembangan Media Weybridge
764 bp
142 bp
101 102 103 104 105 101 102 103 104
Gambar 5. Hasil Uji multiplex PCR Cfv yang tumbuh pada media
pengembangan dan media Weybridge
murah dan mudah didapat di Indonesia. Proses
pembuatan media pengembangan lebih sederhana
dan lebih mudah, sehingga waktunya lebih cepat.
Kesimpulan
Media pengembangan bersifat enrichment
(pengkayaan), dapat digunakan sebagai alternatif
media transpor untuk koleksi sampel untuk deteksi
Campylobacter fetus subspecies venerealis.
Ucapan Terimakasih
Terimakasih penulis ucapkan kepada Program
Studi Mikrobiologi Medik, Sekolah Pasca Sarjana
IPB. Penulis juga menyampaikan Terimakasih
kepada Badan Karantina Pertanian atas beasiswa
S2 yang telah diberikan. Semoga karya ilmiah ini
bermanfaat.
Daftar Pustaka
Clark, B.L. (1971). Review of Bovine Vibriosis.
ia Weybridge Kontrol
Australian Vet J. 47:103-107.
Eaglesome, M.D. and Garcia, M.M. (1992).
Microbial agents associated with bovine
genital tract infections and semen.
Part I. Brucella abortus, Leptospira,
Campylobacter fetus and Tritrichomonas
foetus. Vet Bull. 62(8):743-775.
George, H.A., Hoffman, P.S., Smibert, R.M. and
Krieg, N.R. (1978). Improved media for
growth and aerotolerance of Campylobacter
fetus. J Clin Microbiol 8(1): 36-41.
Hardjoutomo, S. (1998). Tinjauan tentang
Vibriosis Sapi di Indonesia. Wartazoa 7 (1);
10-14.
Pengembangan Media Transpor untuk Koleksi Sampel Preputium, .....
Kontrol Hum, S. (2007). Vibriosis of Cattle. New South
Wales Department of Primary Industries.
Australia. Primefact 451.
Hum, S., Hornitzky, M., Berg, T. (2009). Bovine
Genital Campylobacteriosis. Australia
105 Cff Cfv and New Zealand Standard Diagnostic
Procedures, SCAHLS, ed. (Department of
Agriculture, Fisheries and Forestry).
[Kementan RI] Kementerian Pertanian Republik
Indonesia. (2009). Keputusan Menteri
Pertanian Nomor 3238/Kpts/Pd.630/9/2009:
Tentang Penggolongan Jenis-Jenis Hama
Penyakit Hewan Karantina, Penggolongan
dan Klasifikasi Media Pembawa. Jakarta
(ID): Kementerian Pertanian Republik
Indonesia.
Koya, A. (2016). Bovine Genital
Campylobacteriosis: Isolation, identification
and virulence profiling of Campylobacter
fetus subsp. venerealis in a small animal
model. Thesis for the degree of Doctor of
Philosophy. School of Veterinary Science.
University of Queensland.
Lander, K.P. (1990). The application of a transport
and enrichment medium to the diagnosis of
Campylobacter fetus infections in bulls.
British Vet J. 146:334-340.
Monke, H.J., Love, B.C., Wittum, T.E., Monke,
D.R. and Byrum, B.A. (2002). Effect of
transport enrichment medium, transport
time, and growth medium on the detection
of Campylobacter fetus subsp. venerealis. J
Vet Diagn Investigation. 14:35-39.
Muller, W., Hotzel, H. and Schulze, F. (2003).
Identification and differentiation of
Campylobacter fetus subspecies by PCR.
Dtsch Tierarztl Wochenschr 110(2): 55-59.
Ng, L., Sherburne, R., Taylor, D.E. and Stiles,
M.E. (1985). Morphological forms and
viability of Campylobacter species studied
by electron microscopy. J Bacteriol.
164(1):338-343.
[OIE] World Organization for Animal Health.
(2012). Manual of Diagnostic Tests and
Vaccines for Terrestrial Animals. Terrestrial
131
Apris Beniawan, et. al.
Manual 2012 Seventh Edition Volume 2.
https://www.oie.int/doc/ged/D12009.PDF.
Skirrow, M.B. (1994). Diseases due to
Campylobacter, Helicobacter and related
bacteria. J Comparative Pathol. III:113-
149.
132
van Vliet, A.H.M., Ketley, J.M., Park, S.F.
and Penn, C.W. (2002). The role of
iron in Campylobacter gene regulation,
metabolism and oxidative stress defence.
FEMS Microbiology Reviews 26 (2002):
173-186.
 Jurnal Sain Veteriner, Vol. 38. No. 2. Agustus 2020, Hal. 133-141
DOI: 10.22146/jsv.54894
ISSN 2443-1583 (Print), ISSN 2407-3733 (Online)
Tersedia online di https://jurnal.ugm.ac.id/jsv

Korelasi antara Padat Tebar dengan Infestasi Ektoparasit pada Udang Vaname
(Litopenaeus Vannamei) di Tambak Super Intensif

The Correlation Between Stocking Density and Ectoparasite Infestations In White Shrimp
(Litopenaeus Vannamei) In Super Intensive Ponds
Eren Adiacahya1, Setiawan Koesdarto2, Gunanti Mahasri3*

Fakultas Perikanan dan Kelautan, Universitas Airlangga, Surabaya

1

2
Departmen Parasitologi, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga, Surabaya
3
Departemen Manajemen Kesehatan Ikan dan Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan
Kelautan Universitas Airlangga, Surabaya
*
Email : mahasritot@gmail.com

Naskah diterima: 17 Maret 2020, direvisi: 7 Mei 2020, disetujui: 30 Mei 2020

Abstract

Aquaculture technology for shrimp that has been widely used in ponds in Indonesia is a super intensive
system, using a high stocking density, which is more than 150 fish /m2. The high stocking density can cause the
decrreasing water quality, so that shrimp get stress, decreased body defenses, and will be susceptible to disease.
The purpose of this study was to determine the correlation between stocking density of white shrimp (Litopenaeus
vannamei) and protozoan ectoparasites infestation during rearing period in super intensive ponds. This research
is a survey research, with a Cross Sectional Study Research Design; The proporsive sampling method was used
at several shrimp ponds in Temaji Village, Jenu District, Tuban Regency. Shrimp samples was taken each as
many as 50 individual from 3 pondswith stocking densities of 150, 200 and 300 shrimp/m2. The results showed
that ectoparasites was found in white shrimp that were reared on ponds with high stocking densities (super
intensive). That ectoparasites were Zoothamnium, Epistylis and Vorticella, with consecutive intensities of 278.32;
391.34 and 466.02 on shrimps that were reared with all stocking densities test, so that value classified in a heavy
infestation degree. There is a less close correlation between stocking density and ectoparasite infestation in
vaname shrimp in super intensive ponds, (R = 0.394) it show that an increasing in stocking density until 300
shrimp/m2 is accompanied by infestation of the three genera of ectoparasites.

Key words : ectoparasite; infestation; super intensive; white shrimp

Abstrak

Teknologi budidaya udang yang sudah banyak digunakan di pertambakan di Indonesia, adalah teknologi
budidaya yang menggunakan pola super intensif, dengan menggunakan padat tebar tinggi, yaitu lebih dari 150
ekor/ m2. Padat tebar yang tinggi tersebut dapat mengakibatkan penurunan kualitas air, sehingga menyebabkan
udang stres, mengalami penurunan ketahanan tubuh, dan akan mudah terserang penyakit. Tujuan dari penelitian
ini adalah untuk mengetahui korelasi antara padat tebar udang vaname (Litopenaeus vannamei) dengan
infestasi ektoparasit protozoa selama pemeliharaan di tambak budidaya dengan sistem super intensif. Penelitian
ini merupakan penelitian survei, dengan rancangan penelitian Cross Sectional Study. Pengambilan sampel
menggunakan metode proporsive sampling, yang dilakukan di daerah pertambakan di Kabupaten Tuban. Sampel
udang yang diambil masing-masing sebanyak 50 ekor dari 3 petak tambak dengan padat tebar 150, 200 dan 300
ekor/m2. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ektoparasit yang ditemukan pada udang vaname yang dipelihara
pada tambak super intensif dengan berbagai padat tebar tersebut adalah Zoothamnium, Epistylis dan Vorticella,

133
Eren Adiacahya, et. al.

dengan intensitas berturut-turut sebesar 278,32 ; 391,34 dan 466,02 individu/ekor, sehingga dikategorikan
derajat infestasi berat. Terdapat korelasi kurang erat antara padat tebar dengan infestasi ektoparasit pada udang
vaname pada tambak super intensif, (R = 0,394) yang menunjukkan bahwa adanya peningkatan padat tebar
udang vaname hingga 300 ekor/m2 diiringi dengan infestasi ketiga genus ektoparasit tersebut.

Kata kunci : ektoparasit; infestasi; super intensif, udang vaname

Pendahuluan glukosa (indikator tingkat stres) dengan infestasi

Berbagai teknologi budidaya udang vaname
telah dilakukan untuk meningkatkan produksi
agar dapat memenuhi permintaan pasar dunia
terhadap komoditas ini. Salah satu teknologi
teknologi budidaya udang vaname yang sudah
banyak dilakukan di Indonesia yaitu teknologi
budidaya super intensif di tambak menggunakan
dasar plastik. Menurut Sumadikarta, et al., (2013)
budidaya udang dengan sistem super intensif
adalah pembesaran udang dengan padat tebar
tinggi yaitu lebih dari 150 ekor/m2. Permasalahan
yang muncul pada penerapan budidaya dengan
pola super intensif adalah adanya penurunan daya
dukung lingkungan tambak bagi kehidupan udang
yang dibudidayakan (Suwoyo dan Mangampa,
2010). Berdasarkan Badan Standardisasi Nasional
(BSN) (2014), tercantum bahwa padat tebar yang
diterapkan pada budidaya udang vaname sistem
super intensif umumnya menggunakan padat tebar
lebih dari 250 ekor/ m2 untuk benih asal hatchery
yaitu stadia PL-11.
Dampak lain dari budidaya udang dengan
sistem super intensif akan menyebabkan
terjadinya peningkatan bahan organik, kompetisi
dalam mendapatkan makanan, oksigen dan tempat
untuk hidup sehingga menyebabkan udang stres,
yang dapat berdampak pada penurunan daya tahan
tubuh dan tingkat kelulushidupan udang (Gao et
al., 2017). Selanjutnya dikatakan oleh Widanarni,
et al., (2012) bahwa tingginya padat tebar
maupun sisa pakan, dapat meyebabkan terjadinya
peningkatan kadar bahan organik terutama nitrit
dan amonia dalam air serta akumulasi limbah.
Kondisi lingkungan yang buruk akan menyebabkan
udang mengalami stres dan penurunan respon
imun (Gao et al., 2017). Kondisi udang yang stres
tersebut dapat menyebabkan terjadinya penurunan
daya tahan tubuh, sehingga udang akan mudah
terserang penyakit.
Prihardana (2018) dan Cholil (2019),
menyatakan bahwa terdapat korelasi antara kadar
ektoparasit pada udang vaname pada tambak
dengan dasar plastik. Hasil penelitian tersebut
menunjukkan bahwa semakin tinggi kadar glukosa
semakin tinggi infestasi ektoparasit Zoothamnium,
Epistylis dan Vorticella. Ektoparasit yang sering
menyerang udang adalah ektoparasit protozoa dari
kelas Ciliata yaitu Zoothamnium, Vorticella dan
Epistylis (Mahasri, 2007). Udang yang terinfestasi
oleh ketiga genus tersebut ditemukan gejala
klinis bahwa pada permukaan tubuh, kaki renang,
dan kaki jalan yaitu terdapat kumpulan parasit
yang menempel berwarna putih kecoklatan,
sehingga udang sulit bernapas, bergerak dan
mencari makanan. Keberadaan parasit ini dapat
meningkat dengan cepat dan menginfestasi udang
apabila kualitas perairan menurun. Infestasi oleh
Ciliata patogen dari filum Protozoa, dari genus
Zoothamnium, Epistylis dan Vorticella dapat
tumbuh optimal pada lingkungan dengan padat
tebar tinggi, bahan organik tinggi dan oksigen
terlarut kurang dari 3 ppm (Mahasri, 2007).
Udang yang terserang ektoparasit dari
ketiga genus tersebut di atas akan menunjukkan
gejala klinis sesuai gejala klinis dari Mahasri,
et al., (2018). Farras, et al., (2017) mengatakan
bahwa udang vaname yang dipelihara di tambak
intensif dan tambak tradisional di Kabupaten
Gresik, ditemukan adanya beberapa ektoparasit
yang menginfestasi yaitu Zoothamnium, Epistylis
dan Vorticella. Derajat infestasi dari ketiga genus
ektoparasit tersebut pada udang vaname di tambak
intensif termasuk dalam kategori berat sebesar 76,56
zooid dan di tambak tradisional termasuk dalam
kategori sedang sebesar 43,78 zooid. Penelitian
yang dilakukan Wulandari (2014) di Gampong
Pande Banda Aceh membuktikan bahwa setiap
kelas pada udang mengalami serangan ektoparasit
dengan nilai prevalensi tertinggi mencapai 100%
dan nilai intensitas tertinggi mencapai 135 parasit/
ekor yang terdapat pada udang yang berukuran
16-20 cm. Pengamatan dilakukan di tabak udang

134
 Korelasi antara Padat Tebar dengan Infestasi Ektoparasit pada Udang Vaname .....
vaname dengan pola intensif di daerah Tuban,
dikarenakan pada tahun 2018, sudah pernah
terjadi kasus infestasi ektoparasit dari genus yang
sama. Pemeliharaan udang di tambak dengan pola
intensif dan super intensif , dapat menyebabkan
kandungan bahan Kabupaten Tuban merupakan
salah satu sentra budidaya udang vaname di
Jawa Timur. Sebagian besar sekitar 80% usaha
budidaya udang menggunakan pola intensif dan
super intensif, dengan padat tebar rata-rata 150
– 400 ekor per meter persegi. Sudarno, et al.,
(2017) mengatakan bahwa prevalensi udang yang
terifestasi ektoparasit di pertambakan di Desa
Jenu, Kabupaten Tuban menunjukkan nilai yang
tiggi, yaitu mencapai 86%. Berdasarkan pada
uraian di atas, maka perlu dilakukan penelitian
untuk mengetahui korelasi antara padat tebar
dengan infestasi ektoparasit pada udang vaname
yang dipelihara pada tambak super intensif.
Materi dan Metode
Peralatan untuk pemeriksaan parasit yaitu
sectio set, scalpel, mikroskop binokuler, object
glass, cover glass, pipet, kertas label, serbet/tisu
dan kamera untuk dokumentasi serta alat tulis
untuk mencatat data. Peralatan yang dibutuhkan
untuk persiapan sebelum pengambilan sampel
udang yaitu bak pemeliharaan berukuran (50
x 36 x 30) cm³ lengkap dengan batu aerasi dan
selang aerator. Untuk pengambilan sampel udang
digunakan anco, plastik packing dan styrofoam
sebagai wadah udang serta supplier oksigen.
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah
benih udang vaname (Litopenaeus vannamei)
dengan ukuran PL-30 sampai PL-40.
Penelitian ini merupakan penelitian survei,
dengan rancangan penelitian cross sectional study,.
(Cameron, 2002). Pengambilan sampel dilakukan
di daerah pertambakan di Desa Temaji, Kecamatan
Jenu, Kabupaten Tuban, yang dilakukan dengan
metode proporsive sampling terhadap penentuan
petakan tambak yang diambil maupun pengambilan
sampel udang pada petak tambak yang telah
ditentukan tersebut. Pengambilan sampel udang
dilakukan dengan menggunakan anco sebanyak
4 buah yang ditempatkan pada 4 titik di petak
tambak. Pengambilan sampel dilakukan dengan
teknik proporsive sampling sesuai dengan tujuan
penelitian (Sugiyono, 2006).
Sampel udang yang digunakan dalam
penelitian ini berukuran PL-30 sampai dengan
PL-40, sebanyak 50 ekor dari masing-masing
petakan dengan padat berbeda, yang dilakukan
dua kali pengambilan. Dasar pengambilan jumlah
sampel ini mengacu pada Cameron (2002), yang
mengatakan bahwa banyaknya jumlah sampel yang
diambil untuk penelitian deskriptif korelasional
adalah 27 – 30 ekor tiap populasi yang ada pada
satu wilayah. Masing-masing sampel dilakukan
packing dengan memberikan oksigen tambahan
ke dalam kantong plastik dan selanjutnya dibawa
ke Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas
Airlangga untuk pengamatan.
Pemeriksaan ektoparasit pada udang
dilakukan dengan metode natif, yaitu metode
pemeriksaan secara langsung tanpa pewarnaan
sampel yang dilakukan dengan menggunakan
mikroskop (Aziz, et al., 2012). Bagian tubuh yang
diperiksa antara lain kaki renang, kaki jalan, ekor
dan insang, yang diamati dengan menggunakan
mikroskop perbesaran 100x dan 400x (Mahasri,
et al., 2018). Pemeriksaan ektoparasit pada
permukaan tubuh dilakukan dengan scrapping
dan hasil scrapping kemudian diperiksa di bawah
mikroskop dengan pembesaran 100x dan 400x.
Parameter utama dari penelitian ini adalah
infestasi dan derajat infestasi ektoparasit pada
udang vaname pada padat tebar 150, 200 dan 300
ekor/m2. Infestasi adalah keberadaan parasit pada
permukaan tubuh udang, yang dinyatakan dengan
jumlah ektoparasit pada tiap-tiap individu udang,
sedang derajat infestasi adalah tingkat keparahan
akibat adanya infestasi parasit (Fegan, et al.,
1993). Parameter pendukung pada penelitian ini
yaitu kualitas air tambak pemeliharaan yang
diperiksa pada saat pengambilan sampel.
Pemeriksaan parameter kualitas air meliputi suhu
yang diperiksa menggunakan termometer, salinitas
menggunakan refraktometer, oksigen terlarut atau
DO menggunakan DO meter, pH menggunakan
pH meter dan amonia menggunakan test kit.
Data yang terkumpul dianalisis statistik
dengan korelasi regresi software IBM SPSS 20.
Analisis ini digunakan untuk mengetahui korelasi
antara padat tebar dengan infestasi ektoparasit,
dengan koefisien korelasi regresi R. Jika nilai R =
0.999 (mendekati nilai 1) dapat diartikan terdapat
korelasi korelasi yang sangat erat.
135
Eren Adiacahya, et. al.
Hasil dan Pembahasan
Hasil Penelitian
Hasil pemeriksaan ektoparasit di permukaan
tubuh sampel udang pada berbagai padat tebar
menunjukkan bahwa semua sampel udang
vaname yang diperiksa positif terinfestasi
ektoparasit yaitu campuran dari 3 genus, dengan
derajat intensitas berat. Penentuan kategori derajat
infestasi ini bersasarkan Udang yang terinfestasi
berat menunjukkan gejala klinis bahwa seluruh
permukaan tubuh ditemukan ektoparasit yang
menempel, sulit bernafas dan tidak bisa ganti
kulit (moulting). Ke tiga genus yang ditemukan
tidak menunjukkan adanya dominasi dari genus
tertentu. Hal ini sesuai dengan ktegori yang telah
disampaikan oleh Fegan, et al., (1993) yang
menyatakan bahwa tingkat keparahan (derajat
infestasi) ektoparasit ditentukan eleh banyaknya
ektoparasit yang menginfestasi. Adapun bila ikan
terinfestasi ektoparasit sebanyak 5 – 25 zooid
termasuk dalam kategori ringan, 26 – 50 kategori
sedang dan di atas 50 zooid termasuk kategori
berat (parah). Ciri morfologi dari Zoothamnium
yang ditemukan pada penelitian ini sesuai dengan
kunci identifikasi dari Lynn (2007), yaitu zooid
atau stadia dewasa berbentuk bulat oval, hidup
berkoloni, berwarna keputih-putihan, menempel
pada inang dengan semacam akar dan batang yang
disebut pedicle yang bercabang.
Tabel 1. Hasil penghitungan infestasi dan derajat infestasi ektoparasit pada udang vaname dengan padat tebar 150 ekor/m2, 200 ekor/m2
dan 300 ekor/m2
Padat Tebar Jumlah Sampel Ektoparasit yang Ditemukan
(ekor/m2) Diperiksa (ekor) pada Sampel
150 50 Zoothamnium, Epistylis dan
Vorticella
200 50 Zoothamnium, Epistylis dan
Vorticella
300 50 Zoothamnium, Epistylis dan
Vorticella
136
Morfologi Epistylis yang ditemukan dalam
penelitian ini sesuai dengan kunci identifikasi dari
Lom and Dicova (1996) yaitu hidup berkelompok
dan kebanyakan ditemukan di permukaan tubuh,
kaki renang, kaki jalan dan insang. Mempunyai
tangkai yang bercabang dengan dasar tangkai
menempel pada permukaan. Berbentuk seperti
lonceng terbalik namun lebih ramping dan
tangkainya tidak mengalami pergerakan. Zooid
berbentuk memanjang, Ukuran zooid yang
terdiri dari tangkai peristomial bersilia, vakuola
makanan, mikronukleus dan makronukleus. Pada
satu koloni terdapat 2-5 tangkai.
Vorticella merupakan parasit yang bersifat
soliter dan menempel pada substrat dengan
tangkai yang kontraktil. Berbentuk seperti lonceng
terbalik, di sekeliling peristoma terdapat cilia, sel
mengandung makronukleus dan mikronukleus, sel
berwarna kekuningan atau kehijauan, Vorticella
mempunyai ukuran tubuh sekitar 15-30 µm.
Hasil penghitungan infestasi dan derajat
infestasi ektoparasit udang Vaname
Hasil penghitungan infestasi dan derajat
infestasi ektoparasit pada udang vaname dengan
padat tebar 150 ekor/m2, 200 ekor/m2 dan 300
ekor/m2 secara lengkap dapat dilihat pada Tabel
1. Derajat infestasi ditentukan berdasarkan Fegan,
et al., (1993), dengan kriteria jika pada udang
ditemukan ektoparasit sebanyak 5-25 zooid
Jumlah Sampel Infestasi Derajat Infestasi
Positif (ekor) (individu/ekor) (ekor)
50 278,32 ± 5,782 Normal (1 ekor)
Ringan (6 ekor)
Sedang (2 ekor)
Berat (41ekor)
50 391,34±3,500 Normal (0 ekor)
Ringan (0 ekor)
Sedang (4 ekor)
Berat (46 ekor)
50 466,02±2,610 Normal (0 ekor)
Ringan (0 ekor)
Sedang (0 ekr)
Berat (50 ekor)
 Korelasi antara Padat Tebar dengan Infestasi Ektoparasit pada Udang Vaname .....

termasuk dalam katagori ringan, 26-50 zooid
termasuk sedang, di atas 50 zooid termasuk dalam
kategori berat. Secara rinci hasil penghitungan
infestasi dan penentuan derajat infestasi dapat
dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 menunjukkan bahwa infestasi
ektoparasit pada udang yang tertinggi sebesar
466,02 individu/ekor, terjadi pada udang yang
dipelihara pada padat tebar 300 ekor/ m2, kemudian
diikuti oleh udang dengan padat tebar 200 ekor/
m2sebesar 391,34 individu/ekor. Sedangkan rata-
rata terendah yaitu sebesar 278,32 individu/ekor
terjadi pada udang dengan padat tebar 150 ekor/
m2. Jika dilihat dari derajat infestasi ektoparasit
(tingkat keparahan), menunjukkan bahwa
semua udang dari berbagai padat tebar termasuk
terinfestasi berat, yaitu ditemukan ektoparasit
lebih dari 50 invidu/ekor udang, walaupun ada 4
ekor udang terinfestasi dengan derajat infestasi
sedang dan 6 ekor ringan dan sedang.
Hasil analisis statistik dengan korelasi regresi
Software IBM SPPS 20, menunjukkan bahwa
terdapat korelasi yang sangat lemah, karena
korelasi antara padat tebar dengan infestasi
ektoparasit didapatkan nilai koefisiensi kerelasi
regresi R2 = 0.005 dan R = 0,394 dan Kurva
korelasi regresi antara padat tebar dengan infestasi
ektoparasit disajikan pada Gambar 1 yang
menunjukkan bahwa terdapat hubungan linear
tetapi kurang erat (lemah), yang dapat diartikan
bahwa adanya peningkatan padat tebar akan
diikuti dengan peningkatan infestasi ektoparasit
walaupun kecil nilainya, akan tetapi terlihat
terdapat kecenderungan peningkatan infestasi
ektoparasite pada udang vaname,
Hasil Pengukuran Kualitas Air
Hasil pengukuran kualitas air media
pemeliharaan saat pengambilan sampel pada padat
Gambar 1. Kurva korelasi regresi antara padat tebar dengan
infestasi ektoparasit pada udang vaname
tebar udang vaname yang berbeda disajikan pada
Tabel 2.
Tabel 2 menunjukkan ada beberapa parameter
kualitas air yang tidak dalam kondisi normal,
yaitu suhu dan kecerahan pada tambak dengan
padat tebar 150 ekor/m2, amonia pada padat tebar
200 ekor/m2 dan 300 ekor/m2 yaitu 1,25 dan 1, 5
juga suhu 26 derajad celcius pada padat tebar 150
ekor/ m2, sedangkan yang lain berada pada kondisi
normal.
Pembahasan
Hasil peneaname terinfestasi ektoparasit
baik udang yang dipelihara pada tambak dengan
padat tebar 150, 200 maupun 300 ekor/m2.
Genus ektoparasit yang ditemukan juga sama
yaitu Zoothamnium, Vorticella dan Epistylis.
Hal ini sesuai dengan pendapat dari Rajabunizal

Tabel 2. Rata-rata Hasil Pengukuran Kualitas air pada ketiga Tambak

Padat Tebar (ekor/m2) Kualitas Air pada Budidaya Udang

No Parameter
(Permen-KKP, 2016)
150 200 300
1. Suhu (°C) 26 29 29 28-32
2. DO (mg/L) 3 3,5 3,7 >3
3. pH 7,9 7 7 7,5-8,5
4. Salinitas (ppt) 18 19 20 10-35
5. Amonia (mg/L) 0,1 1,25 1,5 < 0,1
6. Nitrit (mg/L) 0,9 1,3 0,7 <1
7. Kecerahan (cm) 45 30 35 35 -40

137
Eren Adiacahya, et. al.
and Ramanibai (2011) bahwa protozoa dari klas
Ciliophora juga sering ditemukan pada klas
Crustacean. Selanjutnya menurut Lynn (2007)
bahwa ciri morfologi genus Zoothamnium antara
lain zooid berbentuk globuler atau membulat seperti
lonceng terbalik berwarna bening (transparan),
mempunyai makronukleus dan mikronukleus
serta vakuola kontraktil, Zoothamnium hidup
berkoloni yang memiliki 2-31 zooid dalam satu
koloni. Zoothamnium dengan ciri morfologi yang
sama juga pernah ditemukan pada tambak udang
pada tambak intensif di Kabupaten Lamongan
oleh Prihardana (2018). Berdasarkan dari ciri
morfologi Zoothamnium yang ditemukan dalam
penelitian ini sesuai dengan kunci identifikasi
Lynn (2007).
Vorticella yang ditemukan dalam penelitian
memiliki ciri morfologi berbentuk oval, berwarna
kekuning-kuningan dan hidup soliter atau tidak
berkoloni. Setiap zooid memiliki makronukleus,
mikronukleus dan tangkai (stalk) yang panjang,
serta kuran zooid Vorticella berkisar antara 80-
90 µm. Ditambahkan oleh Lynn (2007) yang
menyatakan bahwa genus Vorticella bersifat
kontraktil atau dapat memanjang dan memendek,
bersifat soliter atau individu, berwarna kehijauan
atau kekuningan. Epistylis yang ditemukan dengan
ciri morfologi sesuai pernyataan Setiyaningsih, et
al., (2014) menyatakan bahwa Epistylis memiliki
bentuk seperti Zoothamnium namun lebih panjang
dan oval, pada bagian adoral terdapat flagella
yang dapat bergerak. Ektoparasit ini hidup secara
koloni atau berkelompok dengan jumlah 2-5 zooid
pada setiap batangnya.
Hasil penelitian ini juga menunjukkan bahwa
ditemukan adanya Epistylis dengan ciri morfologi
sesuai dengan Gilbert dan Schroder (2003) dan
Canals and Salvadó (2016) yaitu memiliki bentuk
mirip seperti Zoothamnium tapi lebih panjang
dan oval, dan diameter zooidnya lebih kecil
dari Epistylis yaitu 15 µ, bagian adoral terdapat
flagella yang dapat bergerak. Epistylis memiliki
panjang zooid sekitar 32-42 µm dan lebar 23-
30 µm sedangkan panjang batang sekitar 13-
15 µm. Ektoparasit ini hidup secara koloni atau
berkelompok dengan jumlah 2-5 zooid pada
setiap batangnya. Ciri morfologi juga sesuai
dengan Lynn (2007) yaitu memiliki zooid dengan
panjang 60 µm berbentuk seperti telur, silinder
138
mengerucut atau seperti lonceng, bersifat soliter
atau koloni, memiliki makronukleus dan vakuola
kontraktil. Genus Epistylis yang ditemukan pada
pemeriksaan terlihat berkoloni atau berkelompok,
dalam satu batang terdapat 1-6 zooid berwarna
bening atau transparan.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ketiga
genus ektoparasit tersebut ditemukan pada seluruh
permukaan tubuh, kaki renang, kaki jalan, ekor,
kepala dan insang. Infestasi terjadi pada semua
udang pada tambak dengan padat tebar 150, 200 dan
300 ekor/m2 dengan prevalensi 100%. Intensitas
ektoparasit yang ditemukan berturut-turut sebesar
278,32 ; 391,34 dan 466,02 individu/ekor dengan
derajat infestasi sebagian besar termasuk kategori
berat. Derajad infestasi ektoparasit yang termasuk
katagori normal sebanyak 1 ekor, ringan 6 ekor
dan sedang terdapat 2 ekor pada padat tebar 150
ekor/m2. Udang pada padat tebar 200 ekor/m2
terdapat derajat infestasi ringan sebanyak 4 ekor
dan 46 semua dengan derajat infestasi berat.
Untuk udang yang dipelihara dengan padat tebar
300 ekor/m2 semua udang terinfestasi berat (Tabel
2). Hasil penelitian ini juga menunjukkan bahwa
hasil analisis regresi terdapat korelasi yang kurang
erat (lemah), yang disebabkan karena semua
udang dipelihara dengan padat tebar yang tinggi
dengan sistem super intensif. Infestasi ektoparasit
yang dominan adalah dari genus Zoothamnium,
karena genus ini daya toleransi terhadap salinitas
tinggi dan akan meningkat pertumbuhannya pada
salinitas 15 ppt sampai dengan 28 ppt, sedangkan
untuk Vorticella dan Epistylis akan tumbuh
dengan baik pada salinitas di bawah 15 ppt
(Mahasri, 2007). Dikaitkan dengan rata-rata nilai
salinitas selama pemeliharaan (Tabel 2) sebesar 18
ppt sampai dengan 20 ppt, merukan kisaran yang
sesuai dengan kehidupan Zoothamnium. Selain
salinitas suhu air juga berkaitan dengan infestasi
dari ketiga genus tersebut, suhu yang lebih rendah
yaitu 26 oC pada tambak dengan padat tebar 150
ekor/m2 juga merupakan suhu yang optimal untuk
pertumbuhan Zoothamnium. Nilai infestasi pada
tambak dengan padat tebar 150 ekor/m2 juga
menunjukkan angka yang tinggi dengan derajat
infestasi yang sama dengan pada padat tebar 200
ekor/m2 dan 300 ekor/m2.
Padat tebar yang sangat tinggi pada tambak
super intensif akan menyebabkan konsentrasi
 Korelasi antara Padat Tebar dengan Infestasi Ektoparasit pada Udang Vaname .....
bahan organik yang tinggi pada media
pemeliharaan. Bahan organik yang tinggi tersebut
dapat disebabkan dari sisa pakan dan feses udang
serta organisme yang mati. Sisa pakan akan
meningkatkan amonia yang bersifat toksik bagi
udang (Canals and Salvadó, 2016). Hal ini akan
menyebabkan pemakaian oksigen untuk oksidasi
bahan organik lebih tinggi dibandingkan kecepatan
difusi oksigen ke dalam air. Kondisi yang demikian
akan berdampak buruk pada udang karena dapat
menyebabkan oksigen berkurang hingga batas
yang merugikan kehidupan udang dan udang akan
menjadi stres (Sumadikarta, et al., 2013). Kondisi
stres pada udang dan buruknya kualitas air, akan
menyebabkan pertahanan tubuh udang menurun
dan mudah terinfestasi oleh ektoparasit (Gao, et
al. 2017).
Bahan organik yang tinggi tersebut
akan menumpuk di dasar tambak dan apabila
terjadi penurunan oksigen terlarut, maka akan
menyebabkan terjadinya pembusukan bahan
organic, pH menjadi rendah, nitrit dan ammonia
mengalami peningkatan (Tabel 2) (Gao, et al.,
(2017). Kualitas air yang buruk pada tambak beton
dapat dibuktikan dengan nilai nitrit mencapai
1,25 mg/L dan nilai amonia mencapai 0,75 ppm
dimana kedua nilai tersebut melebihi batas yang
disarankan oleh Peraturan Menteri Kelautan dan
Perikanan /Permen-KKP (2016) untuk kegiatan
budidaya udang. Hal tersebut sesuai dengan
pernyataan Zafran, et al., (2005) yang menyatakan
bahwa kedua ektoparasit tersebut dapat tumbuh
dan berkembang dengan baik apabila kandungan
bahan organik yang terlalu tinggi dan perubahan
kualitas air yang drastis. Tabel 2 juga menunjukkan
bahwa suhu air pada kolam pemeliharaan dengan
padat tebar 150 ekor/ m2 lebih rendah dari normal
yaitu 26 oC. Hal ini disebabkan karena letak
kolamnya paling jauh dari sumber air, sehingga
aliran air yang masuk ke kolam lebih rendah dan
tidak sama dengan kolam yang lain.
Hasil analisis statistik dengan korelasi regresi
menunjukkan bahwa terdapat korelasi yang lemah
antara padat tebar dengan infestasi ektoparasit
dengan nilai koefisien korelasi R2 = 0,394. Hal ini
dapat diartikan bahwa dengan adanya peningkatan
padat tebar seiring dengan adanya peningkatan
infestasi ektoparasit pada udang, walaupun
korelasinya kurang erat (lemah) (software IBM
SPSS 20). Di sisi lain padat tebar yang tinggi juga
akan berpengaruh terhadap parameter biologi air.
Salah satu parameter tersebut adalah pertumbuhan
plankton akan meningkat karena kandungan
bahan organik yang tinggi akan berfungsi sebagai
pupuk yang dapat menyuburkan perairan (Gao, et
al., (2017) Tabel 2 menunjukkan bahwa parameter
kualitas air pada tambak dengan padat tebar yang
berbeda tidak semuanya dalam kondisi normal, ada
yang mengalami peningkatan maupun penurunan.
Amonia dan nitrit yang tinggi (Tabel 2) indikator
adanya bahan organik tinggi dan oksigen rendah,
akan tetapi kandungan oksigen ini walaupun
menunjukkan angka yang berbeda, akan tetapi
semuanya masih dalam kondisi yang normal
(Perme-KKP, 2016). Kondisi yang demikian
merupakan habitat yang ideal bagi ektoparasit
Zoothamnium, Epistylis dan Vorticella, sehingga
dapat dapat berkembang dengan baik (Mahasri.,
et al. 2018). Selanjutnya dikatakan Gao, et al.,
(2007). Beberapa parameter kualitas air pada
semua tambak dengan padat tebar yang berbeda
menunjukkan tidak terdapat pada konsentrasi
yang normal (Tabel 2). Kualitas air yang menurun
inilah yang mengakibatkan udang menjadi stres,
sehingga pertahanan tubuh udang menurun dan
rentan terhadap infestasi ektoparasit (Mahasri et
al., 2018).
Kesimpulan
Kesimpulan dari penelitian ini adalah
ektoparasit yang ditemukan pada udang vaname
yang dipelihara pada tambak dengan padat tebar
tinggi (super intensif) adalah Zoothamnium,
Epistylis dan Vorticella, dengan derajat infestasi
berat, berturut turut kolam dengan padat tebar 150,
200 dan 300 ekor/meter persegi adalah 278, 32 ;
391,34 dan 466.02 individu/ekor. Terdapat korelasi
yang kurang erat (lemah) antara peningkatan padat
tebar dengan infestasi ektoparasit pada udang
vaname yang ditunjukkan dari nilai koefisien
korelasi R2 = 0,394. Saran yang dapat diberikan
dari hasil penelitian ini adalah perlu adanya
pengelolaan kualitas air tambak super intensif
untuk menghambat pertumbuhan ektoparasit.
139
Eren Adiacahya, et. al.
Daftar Pustaka
Aziz, H. Iromo dan Darto. (2012). Identifikasi
Ektoparasit Pada Udang Windu (Penaeus
monodon Fabricus) di Tambak Tradisional
Kota Tarakan. Thesis. Fakultas Perikanan
Ilmu Kelautan. Universitas Borneo.
Tarakan. 33 hal.
Badan Standardisasi Nasional (BSN). (2014).
Udang vaname (Litopenaeus vannamei),
Boone 1931) Bagian 1: Produksi induk
model indoor, SNI 8037.1: 1-7.
Cameron, A. (2002). Survey Toolbox for Aquatic
Animal Disease. ACIAR. Australia. Pp.
1-376.
Canals, O. and H. Salvadó. (2016). Description of
Epistylis camprubii n. sp. a Species Highly
Tolerant to Ammonium and Nitrite. Acta
Protozoologica, 55: 7-18.
Cholil, N.P.L. (2019). Infestasi dan Intensitas
Ektoparasit pada Benih Udang Vaname
(Litopenaeus vannamei) dengan Ukuran
Berbeda yang Dipelihara dengan Dasar
Beton. Fakultas Perikanan dan Kelautan.
Universitas Airlangga. Surabaya. hal. 49-
51.
Farras, A., G. Mahasri, H. Suprapto. (2017).
Prevalensi dan Derajat Infestasi Ektoparasit
Pada Udang Vaname (Litopenaeus
vannamei) di Tambak Intensif dan
Tradisional Di Kabupaten Gresik. Jurnal
Ilmiah Perikanan dan Kelautan. 9(2) : 7-14.
Fegan, D.F. Nieles, T. Flegel, S. Rossuwan, M.
Waiyakaruitata. (1993). The Development
of A Method for Determining the quality of
post larva of Penaeus monodon Fab.. Asian
Fisheries Society Conferences. Oktober
1993. 23 hal.
Gao, Y., H. Zhuliu, V. Hector, Z. Bo, L. Zhiwei, H.
Jie, L. Jeong and C. Zhangjie. (2017). Effect
of Stocking Density on Growth, Oxidative
Stress and HSP 70 of Pacific White Shrimp
Litopenaeus vannamei. Turkish Journal of
Fisheries and Aquatic Sciences, 17: 877-
884.
Gilbert, J. J. & Schroder, T. (2003). The Ciliate
Epibiont Epistylis pygmaeum: Selection
140
for Zooplankton Hosts, Reproduction
and Effect on Two Rotifers. Journal of
Freshwater Biology, 48(5): 878–893.
Kementerian Kelautan dan Perikanan. (2017).
Pedoman Umum Pembesaran Udang Windu
(Penaeus monodon) dan Udang Vaname
(Litopenaues vannamei). Jakarta. 43 hal.
Lynn, D. H. (2007). The Ciliated Protozoa
(Characterization, Classification and Guide
to the Literature). 3rd Edition. Canada. 628
pp.
Lom, J. and Dicova, D. (1992). Protozoan parasite
on fishes. ELSEVIER Amsterdam-London-
New York-Tokyo.p. 284.
Mahasri, G. (2007). Protein Membran Imunogenik
Zoothamnium penaei Sebagai Bahan
Pengembangan Imunostimulan pada Udang
Windu (Penaeus monodon Fabricus)
Terhadap Zoothamniosis [DISERTASI].
Program Pascasarjana Universitas Airlangga
Surabaya. 171 hal
Mahasri, G., Kusdarwati, R., Kismiyati, Rozi
and Gustrifandi, H. (2018). Effectivity
of immunostimulant from Zoothamnium
penaei protein membrane for decreasing the
mortality rate of white shrimp (Litopenaeus
vannamei) in traditional plus pond.IOP
Conf Ser: Earth and Enviromental Science
Vol: 137.
Peraturan Menteri Kelautan dan Perikanan Nomor
75. (2016). Pedoman Umum Pembesaran
Udang Windu (Penaeus monodon) dan
Udang Vaname (Litopenaeus vannamei). 43
hal.
Prihardhana, R. (2018). Korelasi Antara Kadar
Glukosa Darah dan tingkat Infestasi
Ektoparasit pada Udang Vaname
(Litopenaeus vannamei) di Tambak dengan
Dasar Plastik. Skripsi. Fakultas Perikanan
dan Kelautan. Universitas Airlangga.
Surabaya. hal. 31-38.
Setiyaningsih, L., Sarjito dan A. H. C. Haditomo.
(2014). Identifikasi Ektoparasit Pada
Kepiting Bakau (Scylla serata) yang
Dibudidayakan di kolam Pesisir Pemalang.
Jurnal Manajemen Akuakultur dan
Teknologi, 03(03):8-16.
 Korelasi antara Padat Tebar dengan Infestasi Ektoparasit pada Udang Vaname .....
Sudarno, G. Mahasri dan R. Kusdarwati. (2017).
IbM Bagi Petambak Udang di Desa Jenu,
Kecamatan Jenu, Kabupaten Tuban,
Laporan Pengabdian Kepada Masyarakat.
Universitas Airlangga. 51 hal.
Sugiyono. (2006). Metode Penelitian Pendidikan
(Pendekatan Kuantitatif, Kualitatif dan
R&D). Penerbit Alfabeta. Bandung, hal
6-15.
Sumadikarta, A., Srie dan Rahman. (2013).
Korelasi Antara Panjang dan Berat
Udang Vaname (Litopenaeus vannamei)
yang Dipelihara Secara Intensif dengan
Kepadatan Berbeda. Fakultas Perikanan
dan Ilmu Kelautan IPB Bogor, hal. 1-7.
Widanarni, D. Wahjuningrum dan F. Puspita.
(2012). Aplikasi Bakteri Probiotik Melalui
Pakan Buatan untuk Meningkatkan Kinerja
Pertumbuhan Udang Windu (Penaeus
monodon). Jurnal Sains Terapan, 2(1) : 32-
49.
Zafran, D.R., I. Koshrayani, F. Johnny, K. Yuasa.
(2005). Manual for Fish Diseases Diagnosis:
Marine Fish and Crustacean Diseases
in Indonesia. Gondol Research Institute
for Mariculture and Japan Internasional
Cooperation Agency, Japan. 10 pp.
141
 Jurnal Sain Veteriner, Vol. 38. No. 2. Agustus 2020, Hal. 140-146
DOI: 10.22146/jsv.51360
ISSN 2443-1583 (Print), ISSN 2407-3733 (Online)
Tersedia online di https://jurnal.ugm.ac.id/jsv

Efektifitas Terapi Asam Urat dengan Poliherbal Ekstrak Bawang Merah (Allium ascalonicum L.)
dan Jahe Merah (Zingiber officinale var rubrum) pada Tikus Hiperurisemia

Effectiveness of Gout Therapy with Polyherbal Extract of Shallot (Allium ascalonicum L.) and Red
Ginger (Zingiber officinale var rubrum) in Hyperuricemia Rats
Fathur Rohman Haryadi1*, Dela Ria Nesti1, Ida Tjahajati2, Okti Herawati2
1
Program Studi Diploma Kesehatan Hewan, Departemen Teknologi Hayati dan Veteriner,
Sekolah Vokasi Universitas Gadjah Mada
2
Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada
*Email : fathur_haryadi@yahoo.com

Naskah diterima: 11 Nopember 2019, direvisi: 3 Desember 2019, disetujui: 30 Juli 2020

Abstract

Uric acid cause inflammation of acute gout arthtritis and other complications. Giving chemical drugs
has side effects. Flavonoids in shallots (Allium ascalonicum L.) can inhibit the xanthine oxidase enzyme
as antihyperuricemia. Gingerol in red ginger (Zingiber officinale var rubrum) as antihyperuricemia with
antiinflammatory effect. The research aims to determine the effectiveness of the polyherbal extract of shallots
(Allium ascalonicum L.) and red ginger (Zingiber officinale var rubrum) in hyperuricemia rats. Twenty five of
male rats were divided into five goups, namely negative control, positive control, (P1) 25% red ginger extract
and 75% shallot, (P2) 50% red ginger extract and 50% shallot, (P3) 75% red ginger extract and 25% shallot.
Potassium oxonate 250 mg / kg BW was induced intraperitoneally on the 7th day. Uric acid has been measured
on 14th, 21th and 28th days. On the 15th to 28th days, herbs/chemical drugs were administered according to the
groups. Data were analyzed using Anova Multifactorial Randomized Design, continued with Post Hoc with the
Least Significant Different test. The results showed that administration of potassium oxonate, chemical drugs and
combination of herbs extracts had a significant effect (p <0.05) on uric acid levels compare with negative control.
The conclusion show that the administration of polyherbal shallot extract (Allium ascalonicum L.) and red ginger
(Zingiber officinale var rubrum) indicates as antihyperuricemia. The most effective dose is red ginger extract 450
mg/200 g and shallot 150 mg/200 g BW/day for two weeks of administration.

Key words: hyperuricemia; rats; red ginger; shallots; uric acid

Abstrak

Asam urat dapat menyebabkan inflamasi gout arthtritis akut, serta penyakit komplikasi lain. Pemberian
obat kimia memiliki efek samping. Flavonoid dalam bawang merah (Allium ascalonicum dapat menghambat
enzim xantin oksidase sebagai antihiperurisemia. Gingerol dalam jahe merah (Zingiber officinale var
rubrum) sebagai antihiperurisemia dengan efek antiinflamasi. Penelitian bertujuan untuk mengetahui
efektifitas poliherbal ekstrak bawang merah (Allium ascalonicum L.) dan jahe merah (Zingiber officinale
var rubrum) pada tikus hiperurisemia. 25 ekor tikus jantan dibagi lima kelompok yaitu kontrol negatif,
kontrol positif, (P1) ekstrak jahe merah 25% : bawang merah 75%, (P2) ekstrak jahe merah 50% : bawang
merah 50%, (P3) ekstrak jahe merah 75% : bawang merah 25%. Induksi kalium oksonat 250 mg/kg BB
secara intraperitoneal pada hari ke-7. Pengukuran asam urat pada hari ke-14, 21 dan 28. Pada hari ke-
15 sampai ke-28 dilakukan pemberian herbal/obat kimia sesuai kelompok. Data dianalisis menggunakan
Anova Multifactorial Randomized Design, dilanjutkan Post Hoc dengan uji Least Significant Different. Hasil

142
 Efektifitas Terapi Asam Urat dengan Poliherbal Ekstrak Bawang Merah ....

penelitian menunjukkan bahwa pemberian kalium oksonat, obat kimia dan kombinasi ekstrak herbal
berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap kadar asam urat kontrol negatif. Kesimpulan menunjukkan pemberian
poliherbal ekstrak bawang merah (Allium ascalonicum L.) dan jahe merah (Zingiber officinale var rubrum)
mengindikasikan sebagai antihiperurisemia. Dosis paling efektif adalah ekstrak jahe merah 450 mg/200 g dan
bawang merah 150 mg/200 g BB/hari selama 2 minggu pemberian.

Kata kunci : asam urat; bawang merah; hiperurisemia; jahe merah; tikus

Pendahuluan et al., 2010). Selain itu, ekstrak jahe yang kaya

akan gingerol dipercaya dapat menurunkan
Asam urat merupakan substansi hasil akhir
kadar asam urat darah dengan efek anti radang
metabolisme purin dalam tubuh. Berdasarkan
yang dimilikinya (Astuti, 2011).
penelitian bahwa 90% dari asam urat merupakan
Berdasarkan informasi mengenai uji
hasil katabolisme purin yang dibantu oleh enzim
aktivitas penurun asam urat pada ekstrak
guanase dan xantin oksidase (Shamley, 2005).
bawang merah (Allium ascalonicum L.) dan jahe
Asam urat ini dibawa ke ginjal melalui aliran
merah (Zingiber officinale var rubrum), maka
darah untuk dikeluarkan bersama urin, jika
memungkinkan dapat dilakukan kombinasi
terjadi gangguan eliminasi asam urat oleh ginjal
antara kedua ekstrak tanaman tersebut untuk
akibat menurunnya sekresi asam urat melalui
meningkatkan efektifitas terapi asam urat, serta
tubuli ginjal, maka akan terjadi peningkatan
mengakselerasi hilirisasi produk obat berbasis
kadar asam urat dalam darah, hal ini merupakan
herbal. Kombinasi ekstrak poliherbal memiliki
suatu kondisi yang disebut hiperurisemia
aktivitas farmakologi yang dapat bekerja sama
(Saputra, 2008). Hiperurisemia yang lanjut
untuk menghasilkan efek terapetik maksimal
dapat berkembang menjadi gout dan pirai,
dan efek samping lebih rendah dibandingkan
yaitu penyakit yang menyerang sendi (Stryer,
monoterapi (Atangwho et al., 2010). Kombinasi
2000). Hiperurisemia beresiko tinggi terhadap
herbal bawang merah dan jahe merah diharapkan
beberapa gangguan seperti penyakit atritis gout,
mampu meningkatkan efektifitas terapi dalam
batu ginjal, kerusakan ginjal, serta hipertensi.
menurunkan asam urat.
Penggunaan obat kimia (Allopurinol)
Penelitian bertujuan untuk mengetahui
dilaporkan dapat menyebabkan toksisitas hati
efektifitas poliherbal ekstrak bawang merah
dan nefrtitis intestinal (Katzung, 2007).
(Allium ascalonicum L.) dan jahe merah
Flavonoid merupakan senyawa bioaktif yang
(Zingiber officinale var rubrum) pada tikus
ada pada tumbuhan. Kemampuan flavonoid dalam
hiperurisemia.
menghambat aktivitas xanthine oxidase sangat
terkait dengan strukturnya (Rohyani, 2008).
Materi dan Metode
Bawang merah (Allium ascalonicum
L.) kaya akan flavonoid, dengan kandungan Hewan coba pada penelitian ini menggunakan
flavonoid dalam 1 kg kurang lebih 415-1917 25 ekor tikus (Rattus norvegicus) jantan umur 2-3
mg (Slimestad et al., 2007). Sebagian besar sifat bulan dan dipelihara selama 28 hari menggunakan
terapeutik flavonoid telah dianggap sebagai kandang individu. Penelitian ini dilakukan
antioksidan dan penghambat aktivitas enzim dibawah izin dan pedoman penelitian di Pusat
(Murota dan Terao, 2003). Xantin oksidase Antar Universitas, Universitas Gadjah Mada
adalah salah satu enzim yang paling penting dengan surat kelaikan etik oleh Komisi Etik
yang dihambat oleh beberapa flavonoid (Van Penelitian Fakultas Kedokteran Hewan UGM
Horn et al., 2002). nomor : 0020/EC-FKH/Eks./2020.
Jahe merupakan salah satu jenis tanaman
yang termasuk kedalam suku Zingiberaceae. Ekstraksi Rimpang Bawang Merah
Jahe merah (Zingiber officinale var rubrum) Ekstraksi dari umbi bawang merah (Allium
mengandung beberapa senyawa diantaranya cepa L.) dilakukan dengan metode maserasi.
alkaloid, flavonoid, terpenoid, dan fenolik (Bintari Sampel yang telah kering, ditimbang sebanyak

143
Fathur Rohman Haryadi, et. al.
300 g lalu dihaluskan menggunakan blender
dengan pelarut etanol 70% sehingga terbentuk
sari atau jus bawang. Jus bawang kemudian
dimaserasi kembali dengan etanol 70% selama
1×24 jam sebanyak 3 kali. Hasil maserasi
disaring dengan menggunakan corong Buchner.
Ekstrak yang diperoleh kemudian diuapkan dan
dipekatkan dengan rotary evaporator tekanan
rendah pada suhu 65oC. Ekstrak hasil rotary
evaporator dikeringkan dalam cawan menguap
diatas penangas air sampai didapat ekstrak
kental.
Ekstraksi Rimpang Jahe Merah
Rimpang jahe dicuci dengan air mengalir
hingga bersih. Rimpang kemudian diiris tipis
dengan ukuran 1-4 mm dan dikeringkan dengan
cara diletakkan di tempat terbuka. Rimpang yang
telah kering diserbukkan menggunakan mesin
penggiling. Serbuk simplisia ditimbang sebanyak
150 gam kemudian didigesti dengan pelarut etanol
96%. Serbuk dimasukkan dalam beaker glass
kemudian direndam dengan pelarut etanol 96%
dengan perbandingan 1:5. Campuran dipanaskan
dengan hot plate dengan suhu 35-45oC dan
diaduk setiap 10 menit. Filtrat dikumpulkan dan
dimasukkan ke dalam rotary evaporator dengan
suhu 50 oC hingga ekstrak kental (Bintari dkk,
2010).
Induksi Asam Urat (Kalium oksonat)
Induksi asam urat dilakukan dengan
pemberian kalium oksonat 250 mg/kg BB
secara intraperitoneal untuk kelompok kontrol
positif, P1, P2, dan P3 (kelompok perlakuan)
(Saputri, 2011). Induksi dilakukan pada hari ke
ke-7 (pasca adaptasi).
Pemberian Allopurinol
Dosis allopurinol untuk asam urat pada
manusia adalah 200 mg per hari (Wilmana,
2005). Konversi dosis manusia (70 kg) ke tikus
putih (200 g) adalah 0,018.
Jadi, dosis allopurinol pada tikus adalah 3,6
mg/200g.
Perlakuan Hewan Coba
Tikus jantan berjumlah 25 ekor dibagi
menjadi 5 kelompok, yaitu kontrol negatif tanpa
144
perlakuan, kontrol positif dengan pemberian
Allopurinol 3,6 mg/200g BB (Wilmana, 2005),
kelompok perlakuan 1 (P1) yang diberi ekstrak
kombinasi jahe merah 150mg/200g BB dan
bawang merah 450mg/200g BB, kelompok
perlakuan 2 (P2) yang diberi ekstrak kombinasi
jahe merah 300mg/200g BB dan bawang merah
300mg/200g BB), serta kelompok perlakuan
3 (P3) yang diberi ekstrak kombinasi jahe
merah 450mg/200g BB dan bawang merah
150mg/200g BB. Pemberian poliherbal ekstrak
bawang merah dan jahe merah adalah 1,5 cc
tiap tikus yang diberikan secara oral dengam
menggunakan sonde.
Pengukuran Kadar Asam Urat
Darah dikoleksi sebanyak 0.5-1 mL melalui
vena ujung ekor (sedativa), serum dipisahkan dan
selanjutnya dianalisis kadar asam urat serumnya.
Kadar asam urat diukur dengan
menggunakan Urid Acid Toos. Pengukuran
kadar asam urat dilakukan sebanyak 3 kali, yaitu
1 minggu setelah induksi kalium oksonat (untuk
memastikan tikus dalam keadaan hiperurisemia), 1
minggu setelah pemberian kombinasi herbal/obat
kimia, dan 2 minggu setelah pemberian kombinasi
herbal/obat kimia.
Analisis Data
Data yang diperoleh dianalisis dengan
menggunakan Anova Multifactorial Randomized
Design, lalu dilanjutkan Post Hoc dengan uji
Least Significant Different (LSD). Semua
perhitungan analisis statistik dilakukan dengan
bantuan software personal komputer Statistical
Product and Service Solution (SPSS) versi 21.0.
Hasil dan Pembahasan
Hiperurisemia merupakan peningkatan kadar
asam urat dalam darah (Berry C.E., et al, 2004).
Kondisi hiperurisemia pada penelitian ini dengan
pemberian kalium oksonat 250 mg/kg BB
secara intraperitoneal untuk semua kelompok
perlakuan (Saputri, 2011). Induksi dilakukan
pada hari ke ke-7 (pasca adaptasi).
Kadar normal asam urat darah pada tikus
adalah 1.2- 5.0 mg/dL (Rumondor dkk, 2019).
 Efektifitas Terapi Asam Urat dengan Poliherbal Ekstrak Bawang Merah ....
Tabel 1. Kadar asam urat pasca induksi kalium oksonat dan herbal/obat
Minggu ke-1
Kelompok
(1 minggu setelah induksi kalium
oksonat)
Kontrol negatif 1.6340 ± 0.16273a
Kontrol positif 8.9840 ± 0.28439b
P1 8.9920 ± 0.30012b
P2 9.0940 ± 0.18876b
P3 9.0620 ± 0.25273b
a,b,c,d
Superscript yang berbeda menunjukkan perbedaan yang signifikan (p < 0,05).
Kontrol negatif (tanpa perlakuan), kontrol
positif (diberikan Allopurinol), P1 = diberikan
jahe merah 150 mg / 200 g & bawang merah 450
mg / 200 g, P2 = diberikan jahe merah 300 mg
/ 200 g & bawang merah 300 mg / 200 g, P3 =
diberikan jahe merah 450 mg / 200 g & bawang
merah 150 mg / 200 g.
Pada Tabel 1 (kolom 1) didapatkan hasil
pengukuran kadar asam urat pertama (setelah 1
minggu pemberian kalium oksonat) yaitu berbeda
secara signifikan dengan (p < 0,05) pada kelompok
kontrol negatif terhadap kelompok kontrol positif
dan kelompok P1, P2, P3 (perlakuan). Pada
kelompok kontrol negatif tidak diinduksi kalium
oksonat. Pemberian kalium oksonat menyebabkan
tingginya kadar asam urat pada kelompok kontrol
positif, P1, P2, P3 (kondisi hiperurisemia) pasca 1
minggu induksi yang mencapai 8.9840-9.0940 mg/
dL. Kadar tersebut lebih tinggi jika dibandingkan
dengan kadar normalnya 1.2- 5.0 mg/dL (Rumondor
et al., 2019). Kalium oksonat merupakan inhibitor
enzim urikase. Dalam kebanyakan mamalia terdapat
enzim urikase yang berfungsi mengubah asam urat
menjadi alantoin yang lebih mudah larut dalam
air (Katzung et al., 2012). Dengan dihambatnya
enzim urikase oleh kalium oksonat, asam urat akan
tertumpuk dan tidak tereliminasi dalam bentuk urin
(Katrin et al., 2009).
Pada Tabel 1 (kolom 2) didapatkan hasil
pengukuran kadar asam urat kedua (setelah 1
minggu pemberian herbal/obat) berbeda secara
signifikan dengan (p < 0,05) pada kelompok
kontrol negatif terhadap kelompok kontrol positif,
P1, P2 dan P3 serta kelompok kontrol positif
terhadap kelompok kontrol negatif, P1, P2 dan
P3. Kelompok kontrol positif menunjukkan hasil
kadar asam urat terkecil dibandingkan ketiga
Kadar asam urat (mg/dL)
Minggu ke-2 Minggu ke-3
(1 minggu setelah pemberian (2 minggu setelah pemberian
herbal/obat) herbal/obat)
1.6880 ± 0.15156a 1.7620 ± 0.17297a
5.6460 ± 0.41198b 2.7160 ± 0.41819b
6.3760 ± 0.19957c 5.6940 ± 0.27637c
6.1940 ± 0.17700c 3.6160 ± 0.15405d
6.1100 ± 0.14612c 2.6720 ± 0.23242b
kelompok perlakuan. Semakin kecil nilai kadar
asam urat, maka semakin besar pula aktivitas
antihiperurisemianya. Pemberian Allopurinol
pada kelompok kontrol positif ternyata mampu
menurunkan kadar asam urat. Menururt literatur,
Allopurinol dapat menurunkan kadar asam
urat dalam darah (Wulandari, Subandi dan
Munthalib 2012) dengan mekanisme kerja
menginhibisi enzim xantin oksidase (Rodwell
et al, 2003). Kombinasi herbal jahe merah dan
bawang merah dengan berbagai dosis mampu
menurunkan kadar asam urat pada kelompok P1,
P2 dan P3. Namun, tidak berbeda secara signifikan
diantara kelompok tersebut. Faktor dosis yang
berbeda tidak memberikan efek yang signifikan
terhadap perbedaan penurunan kadar asam urat
pasca 1 minggu pemberian herbal.
Pada Tabel 1 (kolom 3) didapatkan hasil
pengukuran kadar asam urat ketiga (setelah 2
minggu pemberian herbal/obat) dengan hasil
kadar asam urat pada kelompok kontrol positif
dan kelompok perlakuan lebih kecil dibandingkan
pengukuran yang kedua. Hal ini menunjukkan
bahwa faktor lama waktu (interval pemberian)
berpengaruh terhadap penurunan kadar asam
urat. Secara statistik, terdapat perbedaan secara
signifikan dengan (p < 0,05) pada semua
kelompok, kecuali pada kelompok kontrol positif
(diberi Allopurinol) dan P3 (jahe merah 450 mg
/ 200 g & bawang merah 150 mg / 200 g) tidak
terjadi perbedaan secara signifikan (p>0,05).
Secara statistik, aktivitas antihiperurisemia pada
kedua kelompok tersebut sebanding. Menurut
literatur (Lallo dkk, 2018), Allopurinol 0,06% b/v
memberikan efek penurunan yang hampir sama
dengan ekstrak etanol monoherbal jahe merah
dengan konsentrasi 0,6% b/v.
145
Fathur Rohman Haryadi, et. al.
Tabel 2. Persentase penurunan kadar asam urat
Kadar asam urat awal (mg/dL), pasca
Kelompok
1 minggu induksi kalium oksonat
Kontrol positif 8.9840 ± 0.28439
P1 8.9920 ± 0.30012
P2 9.0940 ± 0.18876
P3 9.0620 ± 0.25273
Pemberian kombinasi ekstrak (P1) jahe merah
150 mg / 200 g dan bawang merah 450 mg / 200
g BB/hari selama 2 minggu mampu menurunkan
kadar asam urat sebesar 15,39 %. Persentase
penurunan diperoleh dengan menghitung selisih
rerata kadar asam urat awal (pasca 1 minggu
induksi kalium oksonat) dengan rerata kadar asam
urat akhir (pasca 2 minggu pemberian herbal),
dibagi dengan seluruh selisih rerata kelompok
dan dikalikan 100%. Kemudian (P2) jahe merah
300 mg / 200 g dan bawang merah 300 mg / 200
g mampu menurunkan kadar asam urat sebesar
25,56%, dan (P3) jahe merah 450 mg / 200 g dan
bawang merah 150 mg / 200 g mampu menurunkan
kadar asam urat sebesar 29,81%. Untuk kelompok
kontrol positif dengan pemberian Allopurinol
3,6 mg/200g BB/hari selama 2 minggu mampu
menurunkan kadar asam urat sebesar 29,24%.
Pada kontrol negatif terjadi sedikit peningkatan
pada akhir perhitungan, hal tersebut dimungkinkan
karena stres selama proses perlakuan. Stres dapat
meningkatkan sistem metabolisme yang berakibat
terhadap meningkatnya asam lambung dan kadar
asam urat dalam darah (Ragab et al., 2017). Dari
data tersebut, persentase penurunan kadar asam
urat pada kontrol positif, P1, P2, dan P3 berturut-
turut adalah 29,24%, 15,39%, 25,56%, dan
29,81%. Sehingga, kombinasi ekstrak jahe merah
dan bawang merah dapat direkomendasikan
sebagai obat alternatif untuk menurunkan kadar
asam urat. Mekanisme antihiperurisemia dari
kombinasi kedua ekstrak tersebut diduga berkaitan
dengan penghambatan kerja enzim xantin oksidase
sehingga dapat menurunkan produksi asam urat
berlebih.
Jahe merah (Zingiber officinale var rubrum)
mengandung beberapa senyawa diantaranya
alkaloid, flavonoid, terpenoid, dan fenolik
(Bintari et al., 2010), sedangkan bawang merah
(Allium ascalonicum L.) memiliki kandungan
146
Kadar asam urat akhir (mg/dL), pasca Persentase penurunan
2 minggu pemberian herbal/obat (%)
2.7160 ± 0.41819 29,24
5.6940 ± 0.27637 15,39
3.6160 ± 0.15405 25,56
2.6720 ± 0.23242 29,81
tertinggi flavonoid (Yani, 2013). Senyawa lain
yang diduga berperan dalam penghambatan
xantin oksidase pada kedua ekstrak tersebut
adalah flavonoid. Senyawa lain seperti alkaloid
(Alsutanee et al., 2014), dan terpenoid (Lin et
al., 2010) dalam ekstrak tersebut juga diduga
ikut berperan dalam menurunkan kadar asam urat
pada mencit hiperurisemia dengan menghambat
kerja enzim xantin oksidase. Senyawa kimia yang
memiliki kemampuan menghambat kerja xantin
oksidase dapat dikatakan memiliki aktivitas
antihiperurisemia. Kombinasi kedua herbal
tersebut juga diketahui memiliki efek antiinflamasi
sehingga dapat mengurangi radang yang terjadi
akibat pengendapan asam urat pada sendi.
Senyawa kimia yang memiliki efek antiinflamasi
pada jahe adalah gingerol (6,8, dan 10)-gingerol
dan (6)-shogaol. Mekanisme kerjanya adalah
menghambat sintesis prostaglandin melalui
penghambatan enzim siklooksigenase-2 (COX-2).
Prostaglandin merupakan mediator yang berperan
dalam proses terjadinya inflamasi (Kusumawati et
al., 2017). Persentase penurunan kadar asam urat
antara kelompok kontrol positif dengan P3 adalah
hampir sama. Diduga aktivitas antihiperurisemia
pada kedua kelompok tersebut sebanding. Menurut
literatur (Lallo dkk, 2018), Allopurinol 0,06% b/v
memberikan efek penurunan yang hampir sama
dengan ekstrak etanol monoherbal jahe merah
dengan konsentrasi 0,6% b/v.
Kesimpulan
Pemberian poliherbal ekstrak bawang
merah (Allium ascalonicum L.) dan jahe merah
(Zingiber officinale var rubrum) mengindikasikan
sebagai antihiperurisemia. Dosis paling efektif
adalah ekstrak jahe merah 450 mg/200 g dan
bawang merah 150 mg/200 g BB/hari selama 2
minggu pemberian.
 Efektifitas Terapi Asam Urat dengan Poliherbal Ekstrak Bawang Merah ....
Ucapan Terima Kasih
Penelitian ini dibiayai oleh Direktorat
Penelitian UGM Tahun Anggaran 2019-2020.
Daftar Pustaka
Alsutanee IR, Ewadh MJ, Mohammed MF. (2014).
Novel Natural Anti Gout Medication Extract
from Momordica charantia. J Nat Sci Res.
4(17): 16-23.
Astuti A.D.W. (2011). Efektivitas Pemberian
Ekstrak Jahe Merah (Zingiber officinale
roscoe varr Rubrum) dalam Mengurangi
Nyeri Otot pada Atlet Sepak Takraw
[Skripsi]. Semarang : Universitas
Diponegoro.
Atangwho IJ, Ebong PE, Eyongm EU, Egbung
GE. (2010). Combined Extracts of
Vernonia amygdalina and Azadirachta
indica May Substitute Insulin Requirement
in the Management of Type I Diabetes.
Res J Med Sci. 19(1): 159-165.
Berry C.E., Hare J.M. (2004). Xanthine
Oxidoreductase and Cardiovascular
Disease: Molecular Mechanisms and
Pathophysiological Implications. The
Journal of Physiology. 555 (Pt 3): 589-606.
doi:10.1113/jphysiol.2003.055913
Bintari YS, Sudarsono, Yuswanto A. (2010).
Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanolik
Rimpang Jahe Merah terhadap Fagositosis
Makrofag pada Mencit Jantan yang
Diinfeksi dengan Listeria monocytogenes.
Majalah Obat Tradisional. 15(2) : 80-88.
Katrin, B. Elya, J., Amin, M. & Permawati. (2009).
Aktivitas Ekstrak Air Daun Gandarusa
(Justicia gendarussa Burm.f) terhadap
Penurunan Kadar Asam Urat Darah Mencit.
Jurnal Bahan Alam Indonesia. 7: 1
Katzung, B.G. (2007). Obat Antiinflamasi Non
Steroid; Obat Antireumatik Pemodifikasi
Penyakit, Analgesic Non Opioid, Obat yang
Digunakan pada Gout dalam Farmakologi
Dasar dan Klinik. Edisi ke-10. Jakarta:
Penerbit EGC.
Katzung, B.G., Masters, S.B. & Trevor, A.J.
(2012). Basic & Clinical Pharmacology, 12
Ed. New York: McGaw-Hill.
Kusumawati N, Anggarani MA, Setiarso P,
Muslim S. (2017). Product Standarization
of Ginger (Zingiber officinale Rosc.)
and Red Ginger (Zingiber officinale var
Rubrum) Simplicia Through Washing
Time, Slice Thickness and Raw Materials
Drying Process Optimization. International
Journal on Advanced Science, Engineering
and Information Technology. 7(1):15-21.
Lin, Huang, Lin, Hour, Ko, Yang, Pu. (2010).
Xanthine Oxidase Inhibitory Terpenoids
of Amentotaxus formosana Protect
Cisplatininduced Cell Death by Reducing
Reactive Oxygen Species (ROS) in Normal
Human Urothelial and Bladder Cancer
Cells. Phytocemistry. 71: 2140-2146.
Lallo Subehan, Muhammad Mirwan, Adrianti
Palino, Nursamsiar, Besse Hardianti.
(2018). Aktifitas Ekstrak Jahe Merah dalam
Menurunkan Asam Urat pada Kelinci
serta Isolasi dan Identifikasi Senyawa
Bioaktifnya. Jurnal Fitofarmaka Indonesia,
Vol. 5 No.1.
Murota, K. and J. Terao. (2003). Antioxidative
Flavonoid Quercetin: Implication of its
Intestinal Absorption and Metabolism.
Arch. Biochem. Biophys., 417: 1217.
Ragab, G., Elshahaly, M., & Bardin, T. (2017).
Gout : An Old Disease in New Perspective
– A review. Journal of Advanced Research,
8(5), 495–511. https://doi.org/10.1016/j.
jare.2017.04.008.
Rodwell,W.V.,Murray, K.R., Ganner, K.D., and
Mayes, A.P. (2003). Harper Illustrated
Biochemistry. McGaw Hill Companies
United State of America.
Rohyami, Y. (2008). Penentuan Kandungan
Flavonoid dari Ekstrak Metanol Daging
Buah Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa
Scheff Boerl). Jurnal Penelitian &
Pengabdian dppm.uii.ac.id
Rumondor Rolef, Muh. Rino Komalig,
Kamaluddin. (2019). Efek Pemberian
147
Fathur Rohman Haryadi, et. al.
Ekstrak Etanol Daun Leilem (Clerodendrum
minahasae) terhadap Kadar Kreatinin,
Asam Urat dan Ureum pada Tikus Putih
(Rattus novergicus). BIOEDU, Vol. 4, No.
3, (99-107).
Slimestad, Vossen T, Vagen IM. (2007). Onions: a
Source of Unique Dietary Flavonoid. J Agic
Food Chem. 55(25):10067-80.
Saputri AADA. (2011). Pengaruh Pemberian
Kombinasi Ekstrak Air Tanaman Akar
Kucing (Acalypha indica Linn.) dengan
ekstrak etanol 70%Rimpang Jahe Merah
(Zingiber officinale Rosc.) terhadap
Penurunan Kadar Asam Urat Tikus Putih
Jantan. Jakarta: Universitas Indonesia.
Shamley. D. (2005). Pathophysiology an Essential
Text for the Allied Health Professions,
Elsevier Limited, USA.
Stryer, Lubert. (2000). Biokimia Vol. 2 Edisi 4.
Jakarta: Buku Kedokteran EGC.
148
Van Hoorn, D.E.C., R.J. Nijveldt, P.A.M. Van
Leeuwen. (2002). Accurate Prediction of
Xanthine oxidase Inhibition Based on the
Structure of Flavonoids. Eur. J. Pharmacol.,
451: 111-118.
Wilmana, P.F. (2005). Farmakologi dan Terapi.
Edisi ke-4. Gaya Baru, Jakarta.
Wulandari S, Subandi, Muntholib. (2012). Inhibisi
Xantin oksidase oleh Ekstrak Etanol
Kulit Melinjo (Gnetum gnemon) Relatif
terhadap Allopurinol. Jurnal Universitas
Negeri Malang. Vol.1, No.1.
Yani, Furin Fendra Indah. (2013). Pengaruh
Ekstrak Bawang Merah (Allium
ascalonicum) terhadap Kadar Asam Urat
Mencit Putih sebagai Sumber Belajar
Biologi SMA Kelas XI. [Skripsi]. Malang
: Universitas Muhammadiyah Malang
Progam Studi Pendidikan Biologi Jurusan
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan.
 Jurnal Sain Veteriner, Vol. 38. No. 2. Agustus 2020, Hal. 149-156
DOI: 10.22146/jsv.51360
ISSN 2443-1583 (Print), ISSN 2407-3733 (Online)
Tersedia online di https://jurnal.ugm.ac.id/jsv

Kajian Doking Molekul Flavonoid Ekstrak Coleus Amboinicus dan Penurunan Konsentrasi
Malondialdehid (MDA) pada Induksi Cisplatin Tikus Putih Wistar

Study of Docking Molecule Flavonoid Coleus Amboinicus in TGF-1β Receptor and Lowering MDA
Concentration on Cisplatin-Induce Wistar Rats
Rondius Solfaine1*, Lailatul Muniroh2, Wida Wahidah Mubarokah3

1
Laboratorium Patologi, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Wijaya Kusuma Surabaya, Surabaya
2
Departemen Gizi Masyarakat, Fakultas Kesehatan Masyarakat, Universitas Airlangga, Surabaya
3
Politeknik Pembangunan Pertanian Yogyakarta Magelang, Tegalrejo, Magelang
*Email : rondius@uwks.ac.id

Naskah diterima: 27 April 2020, direvisi: 8 Juni 2020, disetujui: 30 Juli 2020

Abstract

The aims of this study were to evaluate molecular docking of flavonoid Coleus amboinicus (CA) extracts
in transforming growth factor-1β and lowering MDA concentration on cisplatin-induced in Wistar rat. Eighteen
male Wistar rats (Rattus norvegicus), 3 months of age with a body weight (BW) of 150-200 g, were allocated
into three groups, with six animals per group. The control group received aquadest (P0), the treatment group was
treated with single doses of cisplatin (5 mg/kg BW., ip) (P1) and received 100 mg/kg BW of the CA extracts
(P2) respectively for 7 days. Blood collected for analysis of serum alkaline phospatase (AP), Blood Nitrogen
Urea (BUN) and Malondialdehid (MDA) concentrations. The levels of Malondialdehid (MDA) concentrations
were analyzed by Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) Sandwich-ELISA. All groups were sacrificed for
histopathology. Coleus amboinicus extract significantly decreased the level of AP, BUN and MDA concentrations
compared to the control group (p<0.05). The level of MDA could be detected by its level significantly decreased
in CA treatment group (p<0.05). Coleus amboinicus (CA) extract has a flavonoid as a marker compound of CA
extract has stronger bind to the TGF-β1receptor ​​than its of 3WA_601 ligand in silico analyzed. In histopathological
examination showed that cisplatin-induced could alter severe multifocal hemorrhage, interstitial congestion, cell
inflammatory, acute glomerular and tubular injury with necrotic cells. Immunohistochemical staining labeled with
TGF-1β monoclonal antibodies (Mab) showed marked expression of brownish color aggregates on the surface
of tubular epithelial cells and around glomerular mesangial cells in the CA treatment group. This study was
concluded that CA extract is inhibited renal tissue injuries by lowering MDA and increasing TGF-1β expression
on cisplatin-induced rats. Flavonoid as marker of CA extract has stronger bind to TGF-1β receptor by in silico.

Keywords : Cisplatin; Coleus amboinicus extract; TGF-1β

Abstrak

Tujuan penelitian ini menganalisis doking molekul flavonoid ekstrak torbangun (Coleus amboinicus) pada
transformasi reseptor TGF-1β dan penurunan konsentrasi malondialdehid (MDA) pada induksi Cisplatin tikus
putih Wistar (Rattus norvegicus). Penelitian ini dengan menggunakan 18 ekor tikus putih galur Wistar yang
terbagi menjadi 3 kelompok; kontrol dengan akuades (P0), kelompok induksi cisplatin 5 mg /kg bb dengan CMC-
Na (P1) dan kelompok ekstrak torbangun 100 mg / kg bb secara peroral (P2) selama 7 hari. Pada hari ke-8 pasca
perlakuan, seluruh kelompok tikus dikorbankan untuk diambil sampel darah untuk mengukur kadar blood urea
nitrogen (BUN), alkalin phospatase dan MDA. Organ ginjal diambil untuk analisis histopatologi. Hasil penelitian
menunjukkan ekstrak Coleus amboinicus secara signifikan menurunkan konsentrasi BUN, Alkali phosphatase

149
Rondius Solfaine, et. al.

dan MDA dibandingkan dengan kelompok kontrol (p<0,05). Pemeriksaan histopatologi pada kelompok induksi
cisplatin menunjukkan terdapat kerusakan jaringan ginjal berupa perdarahan multifokal, infiltrasi interstisial,
adesi glomerulus dan nekrotik tubular. Dari pewarnaan imunohistokimia yang dilabel dengan antibodi monoclonal
TGF-1β menunjukkan ekspresi ditandai agregat warna kecoklatan pada permukaan sel epithel tubulus dan sekitar
sel mesangial glomerulus pada kelompok perlakuan. Penelitian ini menyimpulkan bahwa ekstrak torbangun
terbukti menghambat kerusakan ginjal dengan menurunkan konsentasi MDA dan meningkatkan ekspresi TGF-
1β pada tikus putih yang diinduksi cisplatin. Flavonoid sebagai senyawa marker mempunyai ikatan yang lebih
kuat pada reseptor TGF-1β secara in silico.

Kata kunci : Cisplatin; Ekstrak Coleus amboinicus; TGF-1β

Pendahuluan bagi sebagian masyarakat di Afrika, Asia,

Cisplatin merupakan obat yang digunakan
untuk terapi berbagai jenis kanker, termasuk
sarkoma dan karsinoma. Cisplatin sebagai
obat kemoterapi yang banyak digunakan
diketahui mempunyai efek samping pada ginjal.
Cisplatin dapat mengakibatkan gagal ginjal
akut, hipomagnesium, nekrosis tubuler akut
dengan peningkatan Tumor Necrosis Factor-
Alfa (TNF-α) dan Superokside Anion (O2-)
(Bayomi et al., 2013). Mekanisme kerusakan
gagal ginjal akut yang disebabkan cisplatin adalah
penghambatan sintesis protein, kerusakan DNA,
cedera mitokondria dan apoptosis pada tubulus
ginjal. Cisplatin mengurangi aktivitas nitric oxide,
monosit chemoattractant protein-1 dan faktor
pertumbuhan jaringan serta meningkatkan tumor
necrosis factor-α, radikal bebas (ROS) sehingga
menyebabkan cedera ginjal dan peradangan
(Gozeler et al., 2019; Roncal et al., 2007). Cisplatin
dalam sel akan berinteraksi dengan protein dan
komponen seluler mikrofilamen, sitoskleton,
peptida, RNA, dan Glutathione (GSH). Adanya
konjugasi cisplatin dengan glutathione (GSH)
menghasilkan tiol reaktif yang merupakan radikal
bebas. Tiol reaktif menyebabkan menurunnya
produksi vascular endothelial growth factor
(VEGF) sehingga penestrasi sel endotel glomerulus
terganggu. Tiol reaktif juga memicu kematian sel
tubulus proksimal akibat stress oksidatif sehingga
diperlukan antioksidan untuk menanggulanginya
(Perazella and Moeckel, 2010)
Tanaman torbangun (Coleus amboinicus)
dikenal masyarakat sebagai tanaman bangun-
bangun atau torbangun adalah tanaman yang
tersebar luas dan telah dikonsumsi harian untuk
pengobatan dan makanan tambahan (suplemen)
Australia dan Amerika Selatan. (Chiu et al., 2011;
Rice et al., 2011). Tanaman torbangun sejak lama
digunakan masyarakat sebagai jamu tradisional
untuk pengobatan berbagai penyakit seperti panas,
batuk, bronkitis, radang tenggorokan, diare dan
disentri (Bhave and Dasgupta, 2018). Tanaman
torbangun memiliki kandungan senyawa aktif
antara lain 3 metil 4 isopropyl phenol, squalene,
cariophyline, phytol (Uma et al., 2011), alkaloid,
glycosid, flavonoid, quinon, tannin, phenol, dan
terpenoid (Soni and Singhai, 2015; Pillai et al.,
2011; Patel et al., 2010).
Materi dan Metode
Penelitian ini menggunakan tikus putih
Wistar dan dilakukan di Laboratorium Hewan
Coba Fakultas Kedokteran, Laboratorium
Patologi Klinik Rumah Sakit Khusus Infeksi
dan Laboratorium Kimia Medisinal Universitas
Airlangga, Surabaya.
Hewan uji yang digunakan adalah tikus putih
(Rattus norvegicus) jantan galur Wistar sebanyak
18 ekor dengan kisaran umur 2– 3 bulan dan
berat badan 150 – 200 gram, yang diperoleh dari
laboratorium hewan coba Departemen Biokimia,
Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga.
Sebelum digunakan untuk percobaan, 18 ekor
tikus diadaptasikan selama 7 hari, secara klinis
terlihat sehat dan tidak menunjukkan gejala sakit.
Kelompok tikus dibagi menjadi 3; Kelompok
kontrol (P0) dengan akuades, kelompok
induksi cisplatin (Sigma-Aldrich, St. Louis,
Missouri, USA) dosis 5 mg/kg bb dan diberikan
suspensi CMC-Na 0.25% (P1) dan kelompok
perlakuan ekstrak daun torbangun dosis 100 mg
/ kg bb secara peroral selama 7 hari (P2). Induksi

150
 Kajian Doking Molekul Flavonoid Ekstrak Coleus Amboinicus .....
cisplatin dengan dosis tunggal 5 mg/kg bb secara
intraperitoneal pada kelompok P1 dan P2. Pada
hari ke-8 seluruh kelompok tikus dikorbankan dan
diambil sampel organ ginjal dan difiksasi dengan
buffer neutral formalin 10 % untuk pembuatan
preparat histopatologi dan imunohistokimia.
Sampel darah untuk mengukur kadar BUN dan
AP dengan metode kolorimetri. Pengukuran
aktivitas MDA dengan menggunakan sampel
serum darah yang disentrifus dengan kecepatan
1000 g selama 15 menit kemudian dimasukkan ke
tube steril dan disimpan dalam freezer -20 ˚C. Kit
Elisa yang digunakan adalah kit Elisa komersial
Malonilaldehide Assay kit. Pengukuran aktivitas
MDA secara tidak langsung dengan pasangan
reaksi enzimatis yang dapat dibaca nilai Optical
Density (OD). Prinsip kerja pengukuran Elisa
ini dengan cara serum diinkubasikan berturut-
turut dengan reagen antibodi spesifik yang diikat
dengan Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP)
dan diinkubasikan dengan substrat, kemudian
tanpa membuang reaktan hasil inkubasi tersebut
dibaca nilai Optical Density (OD) pada panjang
gelombang 450 nm (RIELE GmbH & Co,
Germany). Ekspresi TGF-1β ginjal diidentifikasi
dengan indirect immunoperoxidase antibodi
monoklonal dan antibodi sekunder anti-peroxidase
dan pewarnaan subtrat diamino-benzidine dengan
kit imunohistokimia (BD, Pharmingen) dan di
labelled streptavidin-biotin (LSAB) dari Star Trek
Universal HRP Detection (Biozantix).
Analisis in silico
Analisis secara in silico digunakan untuk
memprediksi potensi aktivitas, senyawa flavonoid
yang terdapat dalam daun tanaman torbangun
dan digunakan sebagai senyawa marker, terhadap
reseptor TGF-b1 (transforming growth factor β
receptor type 1). Program analisis yang digunakan
adalah Molegro Virtual Docker 5,5. Peralatan yang
digunakan antara lain Program ChemBioOffice
Ultra 12.0 (CambrigdeSoft Co.) untuk membuat
struktur 2 dimensi, Program ChemBio3D 12.0
(CambrigdeSoft Co.) untuk membuat struktur 3
dimensi dan Program Molegro Virtual Docker 5.5
(CLC Bio) untuk doking dan analisis asam amino.
Prinsip analisis ini dengan cara mengikatkan
struktur molekul 3 dimensi sebagai ligan
pada gugus OH reseptor yang ditargetkan dan
menghitung energi ikatan atau interaksi reseptor
dengan ligan tersebut, semakin kecil energi yang
diperlukan maka mempunyai ikatan yang kuat dan
stabil.
Pembuatan struktur 2 dimensi dan 3 dimensi
Pembuatan struktur 2 dimensi (2-D) dari
ligan 4-amino-8H-pyrido[2,3-d] pyrimidin-5-one
dan flavonoid dilakukan dengan menggunakan
program ChemBioOffice Ultra 12.0. Struktur 2-D
dari ligan flavonoid kemudian diubah menjadi
bentuk 3 dimensi (3-D) dengan menggunakan
program ChemBio3D 12.0. Program ini untuk
mengatur bentuk yang paling stabil dari senyawa
dengan cara meminimalkan energi. Setelah energi
struktur senyawa diminimalkan dengan metode
MMFF94, disimpan dalam bentuk file SYBYL.
mol2, agar terbaca oleh program Molegro Virtual
Docker 5.5 dan digunakan untuk proses doking.
Parameter yang diukur dalam proses doking adalah
nilai energi yang terlibat yaitu MolDock Score.
Makin rendah nilai energi doking yang didapat,
makin stabil kekuatan ikatan obat-reseptor, dan hal
ini dapat digunakan untuk memprediksi aktivitas
suatu senyawa (Siswandono, 2014).
Analisis Data
Penelitian ini menggunakan rancangan
Randomized Posttest Control Group Design.
Analisis data parametrik antara kelompok
perlakuan dan kontrol, jika data berdistribusi
normal dan varians homogen dilakukan
menggunakan One Way ANOVA dan dilanjutkan
dengan Post Hoc Test Duncan Multiple Range
Test. Data histopatologi non parametrik dianalisis
dengan menggunakan metode Kruskal Wallis Test
untuk menentukan perbedaan pada kelompok
kontrol dan perlakuan, dan dilanjutkan dengan
uji Mann Whitney Test untuk mengetahui beda
bermakna antar kelompok.
Hasil dan Pembahasan
Berdasarkan hasil penelitian tikus yang
diberikan induksi cisplatin tingkat rata-rata blood
urea nitrogen (BUN) pada tikus kontrol berkisar
antara 42.31 mg/dL masih dalam batas normal
(10-58 mg / dL) menurut Mitruka dan Rawnsley
(1981). Kelompok perlakuan P2 mempunyai kadar
blood urea nitrogen (BUN) 44.19 mg/dL yang tidak
151
Rondius Solfaine, et. al.
meningkat secara nyata, sementara pada kelompok
P1 mempunyai kadar BUN 41.05 mg/dL yang
menunjukkan penu­runan tidak signifikan dibanding
kontrol. Gangguan pada ginjal yang diinduksi
cisplatin dapat diamati dari tingkat konsentrasi
alkalin pospatase (AP). Pada kelompok P1 dan P2
hasil uji kimia darah menunjukkan peningkatan
kadar ALP sebesar 659.16 U/I dan 364.83 U/I.
Pada kelompok P2 dengan diberikan ekstrak 100
mg/kg bb secara signifikan menurunkan kadar ALP
jika dibandingkan dengan kelompok P1 (p≤0,05).
Hasil pemeriksan kadar BUN, Alkalin Phospatase
dan MDA serum darah diperoleh hasil pada
Tabel 1.
Tabel 1. Perbandingan kadar BUN, Alkalin Phospatase dan MDA
pada berbagai kelompok perlakuan.
Alkalin Phos­
BUN MDA
Kelompok patase (ALP)
(mg/dl) (mg/dl)
(U/I)
P0 (n=6) 42.31a±5.02 228.33a±84.26 133.56a±7.910
P1 (n=6) 41.05a±3.27 659.16b±25.77 208.66b±46.99
P2 (n=6) 44.19a±7.65 364.83c±93.13 143.96c±6.15
Keterangan: superskrip yang berbeda pada kolom yang sama
menunjukkan perbedaan yang signifikan p≤ 0.05
Berdasarkan hasil perhitungan statistik
konsentrasi konsentrasi malondialdehide (MDA)
dan Alkalin Phospatase yang diuji normalitas dan
homogenitas Shapiro-wilk dan Levene diketahui
P>0.05 dilanjutkan dengan uji one way Anova
bahwa ada beda nyata secara signifikan (p≤ 0.05)
pada taraf kepercayaan 95% antara kelompok
kontrol dan perlakuan, dilanjutkan dengan post
hoc test Duncan didapatkan hasil perbedaan yang
nyata pada kelompok P0 dengan P1 dan P2 dan
beda nyata kelompok P1dengan P2, sementara
konsentrasi BUN tidak berbeda nyata (p≥0.05).
Hasil induksi dengan pemberian cisplatin
pada kelompok perlakuan P1 dan P2 menunjukkan
seluruh kelompok perlakuan mengalami gangguan
fungsi ginjal yang ditandai kenaikan kadar BUN
dan Alkalin phospatase. Menurut Mazzali et al.,
(2001), nefropati ditandai dengan tingkat blood
urea nitrogen (BUN) yang tinggi karena adanya
hipovolemia dan dehidrasi pada tubulus ginjal
(Kang and Ha., 2014; Shimada, 2009; Kensara,
2013; Roncal et al., 2007).
Perubahan histopatologi menunjukkan
penurunan fungsi ginjal dibuktikan dengan
152
kerusakan jaringan dengan perubahan vakuolisasi,
inflamasi dan jaringan nekrotik pada tubulus ginjal
dan glomerulus. Skoring perubahan histopatologi
menggunakan perhitungan persentase tingkat
kerusakan pada jaringan yang diamati dalam
beberapa lapang pandang dengan perbesaran 400
x (Klopfleisch, 2013) (Gambar. 1). Berdasarkan
pemeriksan skoring histopatologi diperoleh hasil
pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil skor degenerasi, nekrosis dan infiltrasi sel
histopatologi ginjal tikus putih dengan induksi ciplatin
dan pemberian ekstrak torbangun.
Kelompok Degenerasi Nekrosis infiltrasi sel
P0 akuades (n=6) 0.50 ±0.54
a
0.00 ±.00
a
0.33a±0.51
P1 CMC-Na (n=6) 3.33 ±0.51
b
8.33 ±2.58
b
1.83b±1.32
P2 ekstrak CA (n=6) 2.50c±1.22 3.00c±1.67 0.66a±0.51
Keterangan: superskrip yang berbeda pada kolom yang sama
menunjukkan perbedaan yang signifikan p≤ 0.05.
Skor 0; tidak ada kerusakan jaringan, skor 1; terdapat
kerusakan jaringan 1-25 %, skor 3; terdapat kerusakan
jaringan 26-50 %, skor 5; terdapat kerusakan jaringan
51-75 %, skor 7; terdapat kerusakan jaringan 76-100 %
dari seluruh lapang pandang.
Dari data skoring lesi histopatologi pada
ginjal dan hepar dengan perwarnaan HE dengan uji
Kruskal Wallis menunjukkan bahwa ada perbedaan
secara signifikan (p<0.05) antara kelompok
kontrol dan perlakuan. Selanjutnya dengan
dari uji Mann Whitney diketahui ada perbedaan
yang bermakna (p≤0.05) antar kelompok P0, P1
dengan P2. Pada kelompok P1 mempunyai skor
degenerasi 3.33, skor nekrosis 8.33 dan skor
infiltrasi sel 1.83 yang mengindikasikan adanya
tingkat kerusakan jaringan ginjal, diikuti pada
kelompok P2 mempunyai skor degenerasi 2.50,
skor nekrosis 3.0 dan skor infiltrasi sel 0.66 yang
menunjukkan kerusakan jaringan ginjal yang lebih
ringan dibanding kelompok P1 (induksi).
Sementara itu hasil pewarnaan imunokimia
jaringan ginjal yang dilabel dengan antibodi
monokloanal terhadap TGF-1β menunjukkan
adanya peningkatan ekpresi TGF-1β yang ditandai
agregat warna kecoklatan pada permukaan epitel
tubulus dan sekitar sel mesangial pada glomerulus
pada kelompok perlakuan P1 dan P2. Intesitas
dan distribusi ekspresinya paling tinggi pada
kelompok dengan ekstrak CA (Gambar 1.)
 Kajian Doking Molekul Flavonoid Ekstrak Coleus Amboinicus .....

Gambar 1. Histopatologi dan imunokimia jaringan ginjal dengan induksi cisplatin dan pemberian ekstrak
tanaman torbangun. Histopatologi kelompok kontrol menunjukkan struktur sel glomerulus dan
tubulus yang normal (a.d.g,; HE/PAS/Malori, 40x). Histopatologi kelompok P1 menunjukkan lesi
nekrosis di area tubulus convulotus proximal dan penebalan pada membran basalis tubulus contortus
maupun membran glomerulus (b.e.h; HE/PAS/Malori, 40x). Histopatologi kelompok P2 terdapat lesi
degenerasi vakuoler (c.f.i; HE/PAS/Malori, 40x). Imunohistokimia ginjal pada kelompok control
(j), imunokimia ekspresi agregat coklat pada interstitial dan tubulus ginjal yang dilabel antibody
monoclonal TGF-1β terlihat tipis dan menyebar pada kelompok CMC-Na (k) imunoreaksi berupa
agregat coklat lebih tebal dan luas pada kelompok dengan ekstrak CA (l) (IHK, 40x).

Berdasarkan hasil perhitungan doking dengan Tabel 3. Rerata nilai Moldock score (MDS) ligan yang mengikat
program komputer Molegro Virtual Docker antara reseptor TGF-β1 (kcal/mol)
ligan dan reseptor TGF-β1, terlihat bahwa nilai Ligand MDS 1 MDS 2 MDS 3 Mean±SD
rerata Moldock score ligan 3WA_601 adalah -69,29 3WA_601 -73.00 -72.42 -72.02 -69.29 ± 0,35
± 0,3574, sedang senyawa pembanding flavonoid Flavonoid -121.54 --120.71 -115.85 -119.36 ± 0,64
adalah -119,36 ± 0,6462 (Tabel 3). Nilai moldock
score yang lebih rendah mempunyai makna mengikat 2 asam amino, sedang flavonoid dapat
bahwa energi yang diperlukan untuk membentuk mengikat 4 asam amino (Gambar 2).
ikatan antara reseptor dan ligan lebih rendah, yang Hasil penelitian menunjukkan bahwa
berarti ikatan yang terbentuk lebih stabil, dan hal induksi cisplatin 5 mg/kg bb dan pemberian
ini dapat untuk memprediksi aktivitas senyawa. ekstrak daun torbangun (Coleus amboinicus)
Dari hasil analisis ikatan hidrogen dan asam- 100 mg/kgBB yang diberikan pada tikus putih
asam amino yang terlibat pada proses interaksi (Rattus norvegicus) menyebabkan perubahan
ligan-reseptor didapatkan bahwa ligan 3WA_601 pada gambaran histopatologi ginjal. Tanaman

153
Rondius Solfaine, et. al.

Gambar 2. Struktur 3 dimensi molekul ligan 3wa_601 (a) dan flavonoid (b). struktur 2 dimensi molekul ligan
3wa_601 yang mengikat 2 asam amino asp 281 dan his 283 (c), dan struktur 2 dimensi ligan flavonoid
yang mengikat 4 asam amino asp 281, his 283, gly 261, dan ser 280 (d). struktur 3 dimensi asam-asam
amino pada reseptor tgf-1 yang diikat oleh ligan 3wa_601 (e) dan ligan flavonoid (f).

torbangun diketahui mempunyai kandungan profibrogenik secara independen melalui

senyawa flavonoid kuersetin sebanyak 26.6 mg/g
dalam ekstraknya (Bhatt et al., 2013). Ditemukan
adanya degenerasi, nekrosis dan glomerular
infiltration pada kelompok yang diberikan
induksi cisplatin dan adanya penurunan jumlah
degenerasi, nekrosis, glomerular infiltration
yang diberikan ekstrak daun torbangun. Peran
transforming growth factor-1β (TGF-1β) secara
molekuler sangat penting untuk perbaikan sel.
Namun proses perbaikan yang perantarai proses
fibrosis tidak semua menguntungkan bagi
jaringan. Menurut Lee (2013), ekspresi TGF-β1
dalam sel tubular mempunyai peranan dalam
fibrosis tubulointerstitial dan berperan dalam
mengatur proliferasi sel mesangial dan sekresi
matrik ekstraseluler pada nefropati-diabetik.
Ekspresi TGF-β1 secara in vivo mempengaruhi
ekspresi gen kolagen dan sintesis matriks
ekstraselular mesangial (ECM) di mesangium
glomerulus. Akumulasi ECM dapat menyebabkan
fibrosis tubulointerstitial, penebalan membran
basal glomerulus dan glomerular sclerosis (Xie et
al., 2015). Ekspresi TGF-β1 dapat menginduksi
aktivasi reseptor EGF dan aktivasi angiotensin
II, endothelin 1 dan kondisi stress oksidatif
dalam proses fibrogenesis ginjal. Peningkatan
ekspresi TGF-1β mengindikasikan terjadi proses
fibrosis pada glomerulus dan tubulus ginjal oleh
induksi ciplatin merupakan salah satu penyebab
kegagalan ginjal (Liu et al., 2015). Pada jaringan
yang mengalami degenerasi dengan ciri sel
membengkak dan vakuola jelas dalam sitoplasma.
Nekrosis merupakan kematian sel jaringan
secara mikroskopik terjadi perubahan intinya
menjadi keriput, lebih padat, warnanya gelap
hitam (piknosis), terfragmen-fragmen, dan pecah
(karioreksis), dan pecah (kariolisis). Pada kondisi
keradangan pada glomerulus secara mikrokopis
ditemukan adanya sel radang pada glomerulus
ginjal (Ravindra et al., 2010).
Pada kelompok perlakuan dengan ekstrak
mempunyai kadar MDA lebih rendah dan
ada perbedaan yang nyata dengan level MDA
pada kelompok kontrol dan kelompok yang
diinduksi cisplatin. Level MDA yang tinggi
mengindikasikan adanya radikal bebas yang

154
 Kajian Doking Molekul Flavonoid Ekstrak Coleus Amboinicus .....
terjadi pada kerusakan ginjal akut dengan cara
peroksidasi asam lemak. Peningkatan MDA juga
berarti peningkatan peroksidasi lipid yang dapat
menjadi indikasi penurunan jumlah antioksidan
dalam tubuh, baik antioksidan enzimatik maupun
antioksidan non-enzimatik. Lipid yang teroksidasi
dapat memproduksi MDA sebagai produk
sampingan. Mekanisme pembentukan MDA
tersebut melibatkan pembentukan prostaglandin,
endoperoksida sehingga peningkatan MDA pada
serum, plasma, dan berbagai jaringan terjadi pada
induksi cisplatin (Gozeler et al., 2019).
Pada penelitian in silico didapatkan bahwa
dari hasil perhitungan Moldocking Score (MDA)
dengan program komputer Molegro Virtual
Docker antara ligan dan reseptor TGF-β1 terlihat
bahwa nilai MDA flavonoid adalah -191,36 dan
nilai ini lebih rendah dibanding nilai MDA ligan
3WA_601 (-69,29). Nilai MDA yang lebih rendah
mempunyai makna bahwa energi yang diperlukan
untuk membentuk ikatan antara reseptor dan ligan
lebih rendah, yang berarti ikatan yang terbentuk
lebih stabil, sehingga dapat diprediksi bahwa
flavonoid mempunyai aktivitas ikatan terhadap
reseptor TGF-β1 lebih besar dibanding ligan
3WA_601. Hal ini ditunjang oleh ikatan hidrogen
dan asam-asam amino yang terlibat pada proses
interaksi ligan-reseptor, yaitu ligan 3WA_601
hanya mengikat asam amino Asp 281 dan His 283,
sedang flavonoid dapat mengikat asam amino Asp
281, His 283, Gly 261, dan Ser 280. Cisplatin-Induced
Kesimpulan
Pemberian ekstrak torbangun terbukti
menghambat kerusakan ginjal dengan menurunkan
konsentasi MDA dan meningkatkan ekspresi TGF-1β
pada tikus putih yang diinduksi cisplatin. Pada doking
molekul senyawa flavonoid sebagai senyawa marker
mempunyai ikatan yang lebih kuat pada reseptor TGF-
1β secara in silico.
Ucapan Terima kasih
Terimakasih penulis sampaikan kepada
Direktorat Riset dan Pengabdian Masyarakat
Kementerian Riset, Teknologi dan Pendidikan
Tinggi dengan Surat Keputusan No. 15/LPPM/
UWKS/III/2018 yang telah memberikan dana
hibah penelitian kerjasama perguruan tinggi.
Daftar Pustaka
Bayomi, H.S., Elsherbiny, N.M., El-Gayar, A.M.
and Al-Gayyar, M.M.H. (2013). Evaluation
of Renal Protective Effects of Inhibiting
TGF-β Type I Receptor in a Cisplatin-
Induced Nephrotoxicity Model. European
Cytokine Network. 24 (4): 139-147.
Bhave, A. and Dasgupta, S. (2018). Effect of
Cooking on Total Phenol, Total Flavonoids
and DPPH Free Radical Scavenging
Potential of Plectranthus amboinicus.
Journal of Medicinal Plants Studies. 6(3):
82–4.
Bhatt, P., Gilbert, S.J., Pradeep, S.N. and Mandyam,
C.V. (2013). Chemical Composition and
Nutraceutical Potential of Indian Borage
(Plectranthus amboinicus) Stem Extract,
Journal of Chemistry. 2013: 1–7.
Chiu, Y.J., Huang, T.H., Chiu, C.S., Lu, T.C.,
Chen, Y.W., Peng, W.H. and Chen, C.Y.
(2011). Analgesic and Antiinflammatory
Activities of the Aqueous Extract from
Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng.
Both In Vitro and In Vivo. Evidence-Based
Complementary and Alternative Medicine.
2012: 1-11.
Gozeler, M.S., Fazile, N.E.A., Serkan, Y.,
Abdulkadir, S., Gizem, E. and Seda,
A. (2019). Levosimendan Ameliorates
Ototoxicity: Rat
Model. International Journal of Pediatric
Otorhinolaryngology. 122: 70-75.
Kang, D. and Ha, S. (2014). Uric Acid Puzzle:
Dual Role as Anti-oxidantand. Electrolyte
Blood Press. 5997(12):1–6.
Kensara, O.A. (2013). Protective Effect of Vitamin
C Supplementation on Oxonate-Induced
Hyperuricemia and Renal Injury in Rats. Int
J Nutr Metab. 5(6):61–6.
Klopfleisch R. (2013). Multiparametric and
Semiquantitative Scoring Systems
for The Evaluation of Mouse Model
Histopathology-A Systematic Review. BMC
Veterinary Research. 9(1):123-128.
Lee, H.S. (2013). Pathogenic Role of TGF- β in
Diabetic Nephropathy. Journal of Diabetes
and Metabolism. 2013;9.
155
Rondius Solfaine, et. al.
Liu, N., Wang, L., Yang, T., Xiong, C., Xu, L. and
Shi, Y. (2015). EGF Receptor Inhibition
Alleviates Hyperuricemic Nephropathy.
Journal of American Society of Nephrology.
26:1–14.
Mazzali, M., Hughes, J., Kim, Y., Jefferson, J.A.,
Kang, D. and Gordon, K.L. (2001). Elevated
Uric Acid Increases Blood Pressure in
the Rat by a Novel Crystal-Independent
Mechanism. Hypertension. 38:1101–6.
Mitruka, J. and Rawnsley, H. M. (1981). Animal
for Medical Research. New York.
Patel, R., Naveen, M., Naheed, W., Nitin,
U. and Sudarshan, S. (2010) . Phyto-
physicochemical Investigation of Leaves
of Plectranthus amboinicus (Lour) spreng.
Pharmacognosy Journal. 2(13): 536-42.
Perazella, M.A. and Moeckel, G.W. (2010).
Nephrotoxicity from Chemotherapeutic
Agents: Clinical Manifestation,
Pathobiology, and Prevention/Therapy.
Seminars in Nephrology. 30(6): 570-581.
Pillai, P.G., Suresh, P., Aggarwal, G., Doshi, G.
and Bhatia, V. (2011). Pharmacognostical
Standardization and Toxicity Profile of The
Methanolic Leaf Extract of Plectranthus
amboinicus (Lour) Spreng. Journal of
Applied Pharmaceutical Science. 1(02):
75–81.
Ravindra, P., Bhiwgade, D.A., Kulkarni, S.,
Rataboli, P.V. and Dhume, C.Y. (2010).
Cisplatin Induced Histological Changes in
Renal Tissue of Rat. Sciences L. 4(7): 108–
11.
156
Rice, L.J., Brits, G.J., Potgieter, C.J. and Staden,
J.V. (2011). Plectranthus: A Plant for The
Future?. South African Journal of Botany.
77(4): 947–59.
Roncal, C.A., Mu, W., Croker, B., Reungjui, S.,
Ouyang, X., Tabah-Fisch I, Johnson, R.J.,
and Ejaz A.A. (2007). Effect of Elevated
Serum Uric Acid on Cisplatin-Induced
Acute Renal Failure. American Journal of
Physiology Renal Physiology. 224: 116–22.
Siswandono. (2014). Pengembangan Obat Baru,
Cetakan I. Airlangga University Press,. LP3
Universitas Airlangga.
Shimada, M., Johnson, R.J., May, W.S.,
Lingegowda, V., Sood, P. and Nakagawa, T.
(2009). A Novel Role for Uric Acid in Acute
Kidney Injury Associated with Tumor
Lysis Syndrome. Nephrology Dialysis
Transplantation. 24(7): 2960–4.
Soni, H. and Singhai, A.K. (2015). Recent Updates
on The Genus Coleus: A Review. Asian
Journal of Pharmaceutical and Clinical
Research. 5(1): 12–7.
Uma M, Jothinayaki, S., Kumaravel S and
Kalaiselvi P. (2011). Determination of
Bioactive Components of Plectrantus
amboinicus Lour by GC-MS Analysis. New
York Science Journal. 4(8): 66–9.
Xie, S., Lu, K., Zhang, Y., Song, X., Tan, M.
and Wang, C. (2015). Effects of Jiangya
Xiaoke Prescription on TGF-β 1 in Diabetic
Nephropathy Rats with Hypertension and
Its mechanisms. International Journal of
Clinical Medicine. 8(4): 5129–36.
 Jurnal Sain Veteriner, Vol. 38. No. 2. Agustus 2020, Hal. 157-165
DOI: 10.22146/jsv.84894
ISSN 2443-1583 (Print), ISSN 2407-3733 (Online)
Tersedia online di https://jurnal.ugm.ac.id/jsv

Karakter Morfologi Rambut Kelompok Cervidae Indonesia

Morphological Character of Indonesian Cervidae’s Hairs

Ni Luh Putu Rischa Phadmacanty1*, Zulkurnia Irsaf2, Gono Semiadi1

1
Pusat Penelitian Biologi, Bidang Zoologi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Cibinong Fakultas MIPA,
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Tadulako,
Palu, Sulawesi Tengah
Email: rischa.phadmacanty@gmail.com

Naskah diterima: 9 Juli 2019, direvisi: 22 Agustus 2019, disetujui: 24 Maret 2020

Abstract

Identification through animal hair characters has a significant role in forensic work, given the high level of
animal trade in Indonesia, one of which is the deer family (Cervidae). Native to Indonesia, there are Rusa timorensis
(Javan deer), Rusa unicolor (Sambar deer), Muntiacus muntjak (Barking deer) and Axis kuhlii (Rusa Bawean).
Until now, no information on the morphological characters of Indonesian cervidae’s hairs was studied. In this
study, we used 30 shaft/individual/species from Javan deer (8 individuals), Sambar deer (5 individuals), Barking
deer (5 individuals) and Bawean deer (5 individuals) from Museum Zoologicum Bogoriense (MZB) and field
collections. Hairs were analyzed macroscopically and microscopically, with several parameters of morphology,
cuticular structure, medulla, cross-section, and medullary index. The result showed that the distinctive characters
of this family were the filled lattice medulla structure, and each species has a specific character that can be used
for species identification.

Key words: Cervidae; deer; hairs; macroscopic; miroscopic; structure

Abstrak

Identifikasi karakter rambut satwa memegang peran penting dalam kegiatan forensik mengingat tingginya
tingkat perdagangan satwa di Indonesia, salah satunya adalah kerabat rusa (Cervidae). Indonesia memiliki empat
jenis rusa, yaitu Rusa timorensis (rusa jawa), Rusa unicolor (rusa sambar), Muntiacus muntjak (muncak) dan
Axis kuhlii (rusa bawean). Hingga saat ini gambaran morfologi rambut rusa Indonesia belum ada. Untuk itu perlu
dibangun basis data untuk menunjang kegiatan forensik keluarga Cervidae. Dalam penelitian ini digunakan 30
helai/individu/spesies dari empat spesies rusa meliputi rusa jawa (8 individu), rusa sambar (5 individu), muncak
(5 individu) dan rusa bawean (5 individu) dari koleksi spesimen kulit yang dideposit di Museum Zoologicum
Bogoriese (MZB) dan koleksi alam. Rambut yang diperoleh dianalisa secara makroskopis dan mikroskopis melalui
parameter morfologi, struktur kutikula, medula, penampang melintang dan indeks medula. Hasil diperoleh bahwa
karakter khusus dari famili Cervidae yaitu memiliki struktur filled lattice pada medula. Selain itu, setiap spesies
Cervidae memiliki karakter khusus pada rambutnya yang dapat digunakan untuk membedakan tiap jenis dari
famili tersebut.

Kata kunci: Cervidae; makroskopis; mikroskopis; rambut; rusa; struktur

157
Fatkhanuddin, et. al.
Pendahuluan
Perdagangan satwa liar menempati posisi
ke dua dalam perdagangan internasional setelah
obat-obatan. Satwa liar yang diperdagangkan
biasanya hanya berupa bagian dari tubuh
satwa, yang kadang sulit untuk dapat langsung
diidentifikasi asal satwanya. Untuk itu identifikasi
melalui sebagian tubuh satwa sangatlah penting
dilakukan (Sahajpal et al. 2009). Metode modern
dalam bidang forensik yang banyak dilakukan
adalah dengan analisa molekuler (Oien 2009),
namun metode ini cukup mahal. Metode yang
cukup murah adalah secara mikroskopis melalui
telaahan anatomi atau morfologi dari salah satu
bagian tubuh satwa (Lungu et al. 2007),.
Setiap spesies satwa memiliki karakter
rambut unik yang dapat digunakan untuk
identifikasi, melalui telaah struktur, ukuran,
bentuk, warna, dan sisik kutikula rambut.
Sisik kutikula rambut memiliki bentuk dan
dimensi yang berlainan yang mencirikan suatu
jenis satwa tertentu (Short 1978). Untuk itu
identifikasi mamalia melalui karakter rambut
dapat diterapkan dalam studi forensik, taksonomi
dan ekologi. Selain itu sifat rambut yang tidak
mudah terdegradasi memungkinkan rambut dapat
digunakan untuk mengetahui jenis mangsa lewat
analisa feses predator (Anwar et al. 2012).
Indonesia memiliki empat spesies rusa,
yaitu Rusa timorensis (rusa jawa), Rusa unicolor
(rusa sambar), Muntiacus muntjak (muncak)
dan Axis kuhlii (rusa bawean). Tingginya
tingkat perburuan ilegal, kerusakan habitat dan
penurunan luasan habitat merupakan tekanan yang
menyebabkan populasi rusa di Indonesia menurun
setiap tahunnya. Berdasarkan Peraturan Menteri
Lingkungan Hidup dan Kehutanan Republik
Indonesia Nomor P 106/MENLHK/SETJEN/
KUM.1/12/2018, tentang Jenis Tumbuhan dan
Satwa yang Dilindungi, keempat jenis satwa
tersebut termasuk dilindungi. Sedangkan dalam
catatan International Union for Conservation
of Nature (IUCN), rusa jawa dan rusa sambar
berstatus vulnerable, muncak berstatus least
concern, sedangkan rusa bawean yang merupakan
spesies endemik berstatus critically endangered.
Diantara keempat jenis tersebut, rusa bawean
masuk dalam daftar Apendiks I CITES (Hedges
158
et al. 2015; Timmins et al. 2015; Timmins et al.
2016).
Kemampuan identifikasi jenis sitaan
melalui pengamatan morfologi rambut menjadi
sangat penting dalam upaya pengungkapan kasus-
kasus pelanggaran yang berhubungan dengan
pemanfaatan secara illegal atas sebagian tubuh
satwa. Hingga saat ini publikasi tentang gambaran
morfologi dari rambut kelompok rusa yang ada
di Indonesia belum ada dan perlu dibangun basis
datanya. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk
mendeskripsi morfologi rambut pada kelompok
rusa (Cervidae) yang ada di Indonesia.
Materi dan Metode
Sampel rambut diperoleh dari koleksi
spesimen kulit yang dideposit di Museum
Zoologicum Bogoriese (MZB), Pusat Penelitian
Biologi-LIPI dan hasil koleksi di lapangan. Semua
analisa dilakukan di laboratorium Pengelolaan
dan Reproduksi Satwa Liar serta laboratorium
Parasitologi, Bidang Zoologi, Pusat Penelitian
Biologi LIPI, Cibinong. Sampel yang digunakan
terdiri dari rambut empat spesies rusa (Cervidae)
dewasa yang ada di Indonesia, meliputi rusa
jawa/Rusa timorensis (8 individu), rusa sambar/
Rusa unicolor (5 individu), muncak/Muntiacus
muntjak (5 individu) and rusa bawean/Axis
kuhlii (5 individu). Rambut yang dikoleksi yaitu
guard hair tanpa folikel yang diambil dari bagian
dorsal, yaitu dorsal depan, tengah dan belakang.
Pengambilan berdasarkan posisi tubuh yang
berbeda ini dilakukan mengingat setiap posisi
memiliki perbedan fitur dan konsistensi rambut
yang spesifik (Tridico et al. 2014).
Analisa makroskopis dilakukan dengan
mengamati tiap helai rambut (30 helai/individu
spesies) terhadap warna, struktur dan tekstur
rambut. Analisa medula dilakukan dengan cara
meletakkan guard hair pada object glass, kemudian
ditetesi gliserin dan ditutup dengan cover glass
yang selanjutnya diamati di bawah mikroskop
compound (Nikon Opiphot, Japan) yang
terhubung camera digital (Canon Powershot S5IS)
pada pembesaran 200 kali. Analisa kutikula dan
penampang melintang dilakukan menggunakan
Scanning Electron Microscope/SEM (Jeol, Japan)
dengan terlebih dahulu dicuci dengan aseton,
 Deteksi Staphylococcus aureus dan Staphylococcus sp. Secara Langsung Dari Susu Segar Kambing .....

kemudian ditempelkan pada stub (Hess et al.
1985). Struktur medula, kutikula dan penampang
melintang diklasifikasikan berdasarkan Teerink
(2003). Pola kutikula merujuk pada Petraco and
Kubic (2004). Analisa kuantitatif, dilakukan
melalui pengukuran ketebalan rambut dan
ketebalan medula, kemudian dianalisa indeks
medulanya dengan rumus: (tebal medula/tebal
rambut) x 100%.
Hasil dan Pembahasan
Analisa secara makroskopis pada rambut
Cervidae Indonesia menunjukkan sedikitnya
variasi yang terlihat diantara ke empat jenis rusa.
Warna rambut rusa jawa dan rusa bawean memiliki
gradasi dengan warna putih-krem pada bagian
distal, cokelat pada bagian medial dan cokelat
tua-hitam pada bagian proximal. Sedangkan pada
rusa sambar dan muncak memiliki warna cokelat
terang tanpa adanya gradasi (Tabel 1, Gambar 1).
Sebagian besar struktur rambut cervidae Indonesia
bergelombang-lurus, namun untuk rusa jawa semua
sampel yang diperoleh berstruktur bergelombang
(Gambar 1). Diantara keempat jenis rusa, hanya
rambut rusa jawa yang secara makroskopis mudah
diidentifikasi secara langsung. Struktur rambut
bergelombang-lurus umum ditemukan pada
famili Cervidae, seperti pada Hydropotes inermis,
Capreolus pygargus, Dama dama, Cervus elaphus
dan Capreolis capreolus (Lee et al. 2013; De
Marinis & Asprea 2006).

Gambar 1. Struktur makroskopis rambut cervidae, a. Rusa jawa; b. Rusa sambar; c. Rusa bawean;
d. Muncak. (1). Ujung, (2). Tengah, (3). Pangkal.

Tabel 1. Struktur makroskopis rambut cervidae

Parameter Rusa timorensis Rusa unicolor Axis kuhlii Muntiacus muntjak

(Rusa jawa) (Rusa sambar) (Rusa bawean) (muncak)
Morfologi a1 a2 a3
Warna Putih /krem pada bagian distal, Cokelat muda tanpa Putih /krem pada bagian distal, Cokelat muda tanpa
v

cokelat muda pada bagian gradasi cokelat muda pada bagian gradasi
medial, dan cokelat tua-hitam medial, dan cokelat tua-hitam
pada bagian proximal pada bagian proximal
Tekstur Kasar Kasar Halus Halus
Struktur Gelombang Gelombang-lurus Gelombang-lurus Gelombang-lurus
b1 b2 b3

159
Fatkhanuddin, et. al.
a1
b1
c1
d1
Gambar 2. Hasil SEM sisik kutikula . a. Rusa jawa; b. Rusa sambar; c. Rusa bawean;
d. Muncak. (1). Pangkal, (2). Tengah, (3). Ujung.
Hasil analisa SEM menujukkan mayoritas
posisi sisik rambut Cervidae Indonesia adalah
transversal, kecuali pada rusa bawean yang
memiliki pola sisik kombinasi antara transversal
dan diagonal (Gambar 2), sedangkan pola sisik
adalah antara mozaic dan wavys, namun terdapat
perbedaan pola gelombang pada tiap jenis rusa.
Pola regular mozaic ditemukan pada bagian
pangkal hingga tengah rambut rusa jawa dan rusa
bawean, sedangkan pola irregular wave ditemukan
pada seluruh bagian rambut pada rusa sambar dan
muncak, serta bagian ujung rambut rusa jawa dan
rusa bawean (Gambar 2).
De Marinis & Asprea (2006) melaporkan
bahwa pada kelompok Cervidae asal Eropa yaitu
Dama dama dan Cervus elaphus memiliki pola
sisik regular wave. Sedangkan pada kelompok
Cervidae dari Amerika Serikat dan China yaitu
Odocoileus virginiatus, C. elaphus, C. albirotris,
dan C. nippon memiliki pola sisik mozaik (Sessions
et al. 2009; Cheng et al. 2007). Perbedaan pola
160
a2 a3
v
b2 b3
c2 c3
d2 d3
sisik dapat terjadi karena perbedaan bagian rambut
yang dianalisa. Dalam penelitian ini menunjukkan
adanya perubahan pola sisik dari bagian pangkal
hingga ujung rambut pada rusa jawa dan rusa
bawean. Perbedaan pola sisik kutikula dalam
satu helaian rambut juga dijumpai pada beberapa
spesies seperti di famili Bovidae yaitu Tragelaphus
scriptus, T. spekei, dan Cephalophus monticola.
Sedangkan struktur kutikula irregular wave yang
merata dari pangkal hingga ujung rambut yang
dimiliki oleh rusa sambar dan muncak, juga
ditemukan pada beberapa famili Bovidae lainnya
yaitu Hippotragus equinus dan Kobus vardonii.
Pola sisik yang mirip dengan rusa bawean dengan
posisi sisik bervariasi dari trasversal dan diagonal
yang ditemukan pada famili Bovidae tampak pada
C. natalensis (Keogh 1983).
Struktur medula pada Cervidae Indonesia
menunjukkan hasil yang konstan dari bagian distal
hingga proksimal. Medula Cervidae menunjukkan
tidak ada perbedaan antar spesies dengan struktur
 Deteksi Staphylococcus aureus dan Staphylococcus sp. Secara Langsung Dari Susu Segar Kambing .....

homogen, multiseluler dan filled lattice (Tabel 2,
Gambar 3). Hal ini senada dengan laporan De
Marins & Asprea (2006) dan Joshi et al. (2012),
dimana medula pada beberapa kelompok ungulata
tidak dapat dijadikan sebagai kunci identifikasi
hingga tingkat spesies karena strukturnya yang
mirip. Selain itu struktur medula tidak terpengaruh
oleh faktor lingkungan, namun terbentuk karena
sejarah evolusinya (Chernova 2002). Struktur
medula yang homogen juga ditemukan pada
Artiodactyla lainnya, namun hanya pada tingkat
subfamili. Misalnya pada Bovidae, subfamili
Caprinae memiliki struktur medula filled lattice
parsial sedangkan pada subfamili Bovinae
menunjukkan struktur multisteriat (De Marinis
and Asprea, 2006). Konsistensi medula pada
Cervidae menunjukkan bahwa struktur medula
filled laticce yang homogen merupakan karakter
khusus dari famili ini,
Untuk penampang melintang, rambut
Cervidae Indonesia memiliki empat struktur
yang berbeda yaitu oblong, oval, circuler dan
triangular. Penampang melintang rambut rusa
jawa berbentuk oval pada bagian pangkal, oblong
pada bagian tengah sedangkan ujung rambut
berbentuk tringular. Pada rusa sambar memiliki
penampang melintang rambut berbentuk oval
pada bagian pangkal dan tengah, sedangkan
bagian ujung berbentuk triangular. Muncak
memiliki penampang melintang rambut berbentuk
oval, sedangkan rusa bawean berbentuk circular.
Bentuk tersebut konsisten dari pangkal hingga
ujung rambut.
Bentuk penampang melintang rambut
tergambar dalam struktur makroskopis rambut
tiap jenis (Gambar 4). Rusa jawa tampak pipih
secara makroskopis sehingga sesuai dengan
struktur penampang melintangnya yang berbentuk
oblong. Selain struktur penampang melintang
tersebut (oblong, oval, circuler dan triangular),
masih banyak struktur lainnya yang membedakan
tiap jenis, misalnya pada salah satu jenis bovidae
Raphicerus sharpei memiliki penampang
melintang concavo-covex. Namun demikian
struktur penampang melintang rambut dapat
berbeda tiap posisi dalam satu helaian rambut
seperti pada Raphicerus campestris yang memiliki
bentuk kombinsi oblong, concavo convex,
dumbbell, triangular dan bentuk bumerang
(Keogh 1983).
Berdasarkan potongan melintang juga
diketahui adanya perbedaan jumlah baris sel

a b

c d

Gambar 3. Struktur medula filled lattice pada bagian medial rambut Cervidae (a) Rusa timor;
(b) Rusa sambar; (c) Rusa bawean; (d) Muncak

161
 a b
Fatkhanuddin, et. al.

penyusun medula. Rusa jawa dan rusa bawean
menunjukkan adanya satu baris sel poligonal,
muncak memiliki banyak baris sel poligonal,
sedangkan rusa sambar memiliki satu baris sel
poligonal pada bagian pangkal rambut, kemudian
banyak baris pada bagian tengah dan ujung
rambut (Tabel 2, Gambar 4). Penelitian Cheng,
et al. (2007) terhadap beberapa jenis Cervidae
c Rusa unicolor, Cervus albirotris dan C.
antara lain
elaphus menunjukkan multi layer sel, C. nippon
dengan multi layer sel, dan C. elaphus dengan
dua baris sel. Konsistensi jumlah baris sel medula
pada rusa sambar yang dilaporkan Cheng et al.
(2007) dan dalam penelitian ini, menunjukkan
bahwa jumlah baris sel suatu spesies memiliki
konsistensi sama halnya dengan struktur medula.
Dengan demikian morfologi potongan melintang
dapat digunakan sebagai karakter identifikasi
hingga ketingkat jenis.
Berdasarkan morfometri, rusa jawa memiliki
diameter rambut terbesar dibandingkan dengan
Cervidae Indonesia lainnya (Tabel 2, Gambar 5),
dengan kecenderungan diameter rambut pada rusa
d lebih besar 18% dibandingkan dengan rusa
timor
sambar. Hasil pengamatan De Marinis and Asprea
(2006) melaporkan bahwa rata-rata diameter
rambut kelompok Cervidae Eropa adalah 232
um. Nilai tersebut jauh lebih besar dibandingkan
dengan diameter rambut hasil penelitian ini yang
rata-rata hanya 63,32 um. Banyak faktor yang

a2 a3
a1 a1

a1
a1
b1 b2 b3

c1 c2 c3

d1 d2 d3

Gambar 4. Penampang melintang rambut Cervidae (a) Rusa jawa, 1. Pangkal (1 layer), 2. Tengah (1 layer), 3.
Ujung (1 layer); (b) Rusa sambar, 1. Pangkal (1 layer), 2. Tengah (multi layer), 3. Ujung (multi layer);
(c) Rusa bawean, 1. Pangkal (1 layer), 2. Tengah (1 layer), 3. Ujung (1 layer); (d) Muncak, 1. Pangkal
(multi layer), 2. Tengah (multi layer), 3. Ujung (multi layer).

162
 Deteksi Staphylococcus aureus dan Staphylococcus sp. Secara Langsung Dari Susu Segar Kambing .....

Table 2. Karakter mikroskopis rambut cervidae

Rusa timorensis Rusa unicolor Axis kuhlii Muntiacus muntjak

Parameter
(Rusa jawa) (Rusa sambar) (Rusa bawean) (Muncak)
Kutikula
Posisi sisik Transvesal Transvesal Transvesal-diagonal Transvesal
Pola sisik Regular mosaic – Iregular wave Regular mosaic- Iregular wave
irregular wave irregular wave
Margin sisik Smooth, rippled Smooth, rippled Smooth, rippled Smooth, rippled
Jarak antar sisik Near-distant Near-distant Near-distant Near-distant
Jumlah sisik tiap 100 um 12,13±1,1 11,6±1,8 13,7±1,9 12,6±1,6
Medulla
Komposisi Multicellular Multicellular Multicellular Multicellular
Struktur Filled lattice Filled lattice Filled lattice Filled lattice
Margin Scalloped Scalloped Scalloped Scalloped
Penampang melintang
Bentuk Pangkal: Oval Pangkal: Oval Pangkal: Sirkular Pangkal: Oval
Tengah: Oblong Tengah: Oval Tengah: Sirkular Tengah: Oval
Ujung; Triangular Ujung; Triangular Ujung; Sirkular Ujung; Oval
Jumlah layer Pangkal: 1 layer Pangkal: 1 layer Pangkal: 1 layer Pangkal: Multi layer
Tengah: 1 layer Tengah: Multi layer Tengah: 1 layer Tengah: Multi layer
Ujung: 1 layer Ujung: Multi ayer Ujung: 1 layer Ujung: Multi layer
Index

mempengaruhi ketebalan rambut, meliputi spesies, menjadi acuan ketebalan rambut satwa tersebut.
habitat, level testosteron pada hewan jantan, Secara ukuran tubuh, terdapat perbedaan ukuran
metabolisme dan nutrisi (Davis et al. 2010; Jones tinggi gumba rusa sambar yang dapat mencapai
et al. 1994). Dengan demikian ketebalan rambut 160 cm atau hampir dua kali lebih besar dari
tidak dapat dijadikan sebagai kunci identifikasi rusa timor yang hanya berkisar antara 76-84 cm
suatu jenis sebagaimana juga disampaikan oleh (Sudibyo et al. 2013; Semiadi et al. 2005). Nilai
Perrin and Campbell (1980). indeks medula pada rusa jawa adalah 93%, rusa
Dalam hal ukuran medula, pada rambut sambar 85%, rusa bawean 81% dan muncak 88%,
Cervidae Indonesia cukup lebar. Selain diameter jauh lebih tinggi bila dibandingkan dengan C.
rambut, diameter medula rambut pada rusa jawa elaphus 66% dan C. nippon 64% (Gambar 6;
juga sekitar 25% lebih besar daripada rusa sambar. Cheng, et al. 2007). Sama halnya dengan ketebalan
Sehingga besarnya ukuran satwa tidak dapat rambut, nilai indeks medula sulit untuk digunakan

350
300
Diameter rambut (um)

250
200
Pangkal
150
Tengah
100 Ujung
50
0
Rusa timor Rusa sambar Muncak Rusa bawean
Spesies

Gambar 5. Diameter rambut Cervidae Indonesia

100
90
80 163
la (%)

70
60
 0
Rusa timor
Fatkhanuddin, et. al.
100
90
80
Indeks medula (%) 70
60
50
40
30
20
10
0
Rusa timor
Gambar 6. Indeks medula Cervidae Indonesia
sebagai karakter identifikasi, hal ini dikarenkan
adanya pengaruh umur yang memungkinkan pada
umur lebih muda akan memiliki indeks medula
yang lebih rendah dibandingkan umur dewasa.
Kesimpulan
Hasil penelitian menyimpulkan bahwa
karakter khusus dari famili Cervidae adalah struktur
filled lattice pada medula. Ciri khas rambut yang
dapat dijadikan kunci identifikasi spesies secara
mudah pada rusa timor adalah bagian morfologi
dan bentuk penampang melintang rambut, rusa
bawean pada bagian posisi sisik kutikula dan
bentuk penampang melintang, sedangkan muncak
dan rusa sambar memiliki kemiripan baik dari
segi makroskopis maupun mikroskopis yang
membedakan keduanya adalah pada jumlah
lapisan sel pada penampang melintang pangkal
rambut dan diameter rambutnya.
Ucapan Terima kasih
Terimakasih kami ucapkan kepada Japan
Science and Technology Agency (JST), Kyoto
University, Collaboration hubs for International
Research Progam (CHIRP) dengan framework
Strategic International Collaborative Research
Program (SICORP) dengan Pusat Penelitian
Biologi-LIPI untuk tahun anggaran 2017-2018,
dalam memenuhi kebutuhan bahan laboratorium.
Selain itu kami ucapkan terimakasih kepada Bapak
Yulianto dan Nanang Supriyatna yang membantu
164
Rusa sambar Muncak Rusa bawean
Spesies
Pangkal
Tengah
Ujung
Rusa sambar Muncak Rusa bawean
Spesies
dalam pengambilan sampel. Ni Luh Putu Rischa
Phadmacanty adalah kontributor utama dalam
penulisan ini.
Daftar Pustaka
Anwar, M.B., M.H. Nadeem, M.A. Beg, A.R.
Kayani, and G. Muhammad. (2012). A
Photographic key for identification of
mammalian hairs of prey species in snow
leopard (Panthera indica) habitat of Gilgit-
Baltistan Province of Pakistan. Pakistan
Journal of Zoology. 44 (3): 37-743.
Cheng, X., T. Kang and Z. Zhao. (2007). Studies
on microscopic identification of animal
drug’s remnant hair (3): identification of
several species of cauda cervi. Journal of
Natural Medicine. 61 (1): 51-55.
Chernova, O.F. (2002). Architectonic and
Diagnostic Significance of Hair Cuticle.
Biology Bulletin. 29(3): 238–247.
Davis, A.K. (2010). A technique for rapidly
quantifying mammal hair morphology for
zoological research. Folia Zoological. 59
(2): 87-92.
De Marinis, A. M. and A. Asprea. (2006). Hair
identification key of wild and domestic
ungulates from southern Europe. Wildlife
Biology. 12(3): 305-320.
Hedges, S., Duckworth, J.W., Timmins, R.,
Semiadi, G. and Dryden, G. (2015). Rusa
 Deteksi Staphylococcus aureus dan Staphylococcus sp. Secara Langsung Dari Susu Segar Kambing .....
timorensis. The IUCN Red List of Threatened
Species 2015: e.T41789A22156866. http://
dx.doi.org/10.2305/IUCN.UK.2015-2.
RLTS.T41789A22156866.en. Downloaded
on 14 May 2019.
Hess, W.M., Flinders J.T. Pritchett CL., and
Allen J.V. (1985). Characterization of hair
morphology in families Tayassuidae and
Suidae with scanning electron microscopy.
Journal of Mammalogy. 66: 75-84.
Keogh, H.J. (1983). A photographic reference
system of the microstructure ofthe hair
ofsouthern African bovids. South African
Journal of Wildlife Research. 13(4): 89-132.
Lee, E., T.Y. Choi, D. Woo, M.S. Min, S. Sugita
and H. Lee. (2013). Species identification
key of Korean mammal hair. Journal of
Veterinary Medical Science. 76(5): 667-
675.
Lungu, A., C. Recordati, V. Ferrazzi and D. Gallazi.
(2007). Image analysis of animal hair:
morphological features useful in forensic
veterinary medicine. Lucrari Sciintifice
Medicina Veterinara. XL: 439-446.
Joshi, H.R., S.A. Gaikwad, M.P.S. Tomar and
K. Shrivastava. (2012). Comparative
trichology of common wild herbivores
of India. Advances in Applied Science
Research. 3(6): 3455-3458.
Oien, C.T. (2009). Forensic Hair Comparison:
Background Information for Interpretation.
Forensic Science Communications.11(2).
Perrin, M.R and Campbell, B.S. (1980). Key to
the mammals of the Andries Vosloo Kudu
Reserve (eastern Cape), based on their
hair morphology, for use in predator scat
analysis. South Africa Tydskr.Natuurnav.
10: 1-14.
Petraco, N. & Kubic, T. (2004). Microscopy for
Criminalist, Chemists, and Conservation.
CRC Press:Washington DC.
Sahajpal, V., S.P. Goyal, R. Raza and R. Jayapal.
(2009). Identification of mongoose (genus:
Herpestes) species from hair through
band pattern studies using discriminate
functional analysis (DFA) and microscopic
examination. Science and Justice. 49: 205-
209
Semiadi, G., I.G. M. Jaya Adi and A. Trasadiharto.
(2005). Pola kelahiran rusa sambar (Cervus
unicolor) di penangkaran Kalimantan
Timur. Biodiversitas. 6(1): 59-62.
Sessions, B.D., W.M. Hess and W.S. Skismore.
(2009). Can hair width and scale pattern
and direction of dorsal scapular mammalian
hair be a relatively simple means to identify
species? Journal of Natural History. 3: 7-8,
489-507.
Short, H.L. (1978). Analysis of cuticular scale on
hair using the scanning electron microscope.
Journa
Sudibyo, M., Y. Santoso, B. Masy’ut, and T.
Toharmat. (2013). Preferencesof Rusa
timorensis to grasses and their body
morphology andvelvet antler characteristic.
Media Peternakan. 2013: 143-151.
Teerink, B.J. (2003). Hair of West European
Mammals: Atlas and Identification Key.
Cambridge University Press.
Timmins, R.J., Duckworth, J.W., and Hedges,
S. (2016). Muntiacus muntjak.  The IUCN
Red List of Threatened Species 2016:
e.T42190A56005589.  http://dx.doi.
org/10.2305/IUCN.UK.2016-1.RLTS.
T42190A56005589.en. Downloaded on 14
May 2019.
Timmins, R., Kawanishi, K., Giman, B, Lynam,
A., Chan, B., Steinmetz, R., Sagar Baral,
H., and Samba Kumar, N. (2015).  Rusa
unicolor (errata version published in
2015).  The IUCN Red List of Threatened
Species :. http://dx.doi.org/10.2305/IUCN.
UK.2015- 2.RLTS.T41790A22156247.
en. Downloaded on 14 Mei 2019.
Tridico, S.R., M.M. Houck, K. Paul Kirbride, M. E.
Smith and C. Yates. (2014). Morphological
identification of animal hair: Myths and
misconceptions, possibilities and pitfalls.
Forensic Science International. 238: 101-
107.
165
 Jurnal Sain Veteriner, Vol. 38. No. 2. Agustus 2020, Hal. 166-172
Fatkhanuddin, et. al. DOI: 10.22146/jsv.84894
ISSN 2443-1583 (Print), ISSN 2407-3733 (Online)
Tersedia online di https://jurnal.ugm.ac.id/jsv

Deteksi Staphylococcus aureus dan Staphylococcus sp. Secara Langsung Dari Susu Segar Kambing
Peranakan Etawa dengan Teknik Polymerase Chain Reaction (PCR)

Detection of Staphylococcus aureus and Staphylococcus sp. Directly From Raw Milk of Etawa
Goat’s with Polymerase Chain Reaction (PCR) Technique
Fatkhanuddin Aziz1, Fajar Budi Lestari1, Sarah Nuraida S.2, Endah Purwati2, Siti Isrina Oktavia Salasia3*

1
Program Studi D3 Kesehatan Hewan, Departemen Teknologi Hayati dan Veteriner, Sekolah Vokasi Universitas
Gadjah Mada
2
Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gadjah Mada
3
Departemen Patologi Klinik, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada
*Email: isrinasalasia@yahoo.com

Naskah diterima: 27 Januari 2020, direvisi: 4 Maret 2020, disetujui: 30 Juli 2020

Abstract

The genus of Staphylococcus is one of the bacterial pathogens that cause mastitis causing economic losses
in Etawa crossbreed goat. Among Staphylococcus sp. which can grow well in raw milk, Staphylococcus aureus
is known causes food borne disease in human because of its ability to produce enterotoxins that are resistant to
digestive enzymes or heating treatment. The purpose of this study was to detect Staphylococcus sp. and S. aureus
directly from raw milk of Etawa crossbreed goat using PCR method. The study was carried out by extracted
DNA from fresh milk using spin column method and then amplified specific 23S rRNA for Staphylococcus
sp. and S. aureus. PCR examination revealed that 37 (61%) and 1 (1,6%) raw milk samples were positive
for Staphylococcus sp. and S. aureus respectively. The detection method using PCR are usefull to discover
Staphylococcus sp. contaminants in a short time.

Keywords: Goat; PCR; raw milk; Staphylococcus aureus; Staphylococus sp.

Abstrak

Genus Staphylococcus merupakan salah satu patogen bakteri penyebab mastitis yang menyebabkan
kerugian ekonomi pada kambing Peranakan Etawa. Staphylococcus sp. yang dapat mencemari susu segar
adalah Staphylococcus aureus sehingga membahayakan kesehatan manusia yang mengkonsumsi (food borne
disease) karena kemampuannya dalam memproduksi enterotoksin yang tahan terhadap enzim pencernaan
maupun pemanasan. Tujuan penelitian ini adalah mendeteksi Staphylococcus sp. dan S. aureus secara langsung
dari susu kambing peranakan etawa dengan teknik PCR. Metode yang dilakukan adalah mengekstraksi DNA
dari 60 sample susu segar dengan prinsip spin column-based nucleic acid purification dan kemudian dilakukan
amplifikasi gen spesifik 23S rRNA Staphylococcus sp. dan S. aureus. Hasil PCR diketahui 37 (61%) sampel susu
positif identifikasi Staphylococcus sp. dan hanya 1 (1,6%) sampel S. aureus. Metode deteksi dengan PCR dapat
digunakan untuk mendeteksi kontaminan Staphylococcus sp. dan S. aureus dengan waktu yang singkat.

Kata kunci: Kambing; PCR; Staphylococcus aureus, Staphylococus sp.;

166
 Deteksi Staphylococcus aureus dan Staphylococcus sp. Secara Langsung Dari Susu Segar Kambing .....

Pendahuluan manusia (Tan dan Hogg, 2008; Fagundes et al.,

2010). Penelitian yang dilakukan oleh Salasia
Kambing Peranakan Etawa (PE) merupakan
et al. (2011) diketahui adanya keberadaan gen-
salah satu ternak indigenous di Indonesia yang
gen penyandi enterotoksin penyebab keracunan
mem­ punyai potensi genetik tinggi sebagai
peng­hasil daging maupun susu, serta mampu makanan pada S. aureus yang diisolasi dari
menghasilkan anak lebih dari satu ekor setiap susu segar yang berasal dari daerah Jawa Barat,
kelahiran (Budisatria et al. 2019). Produksi sus­u Jawa Tengah dan Yogyakarta. Hal tersebut
yang dihasilkan mampu meningkatkan kesejah­tera­ mengindikasikan adanya potensi S. aureus dalam
an masyarakat melalui penjualan susu segar dengan susu yang dapat membahayakan konsumen.
kisaran harga Rp.20.000-Rp.30.000 per liter. Metode yang mudah diaplikasikan dalam
Susu merupakan media pertumbuhan yang mengidentifikasi keberadaan S. aureus dan
baik bagi bakteri, sehingga bakteri patogen seperti Staphylococcus lainnya dari susu segar kambing
genus Staphylococcus dapat tumbuh baik dimedia PE yang mengalami mastitis diperlukan untuk
ini dan menyebabkan mastitis bagi kambing yang mengontrol penyebaran penyakit yang disebabkan
terinfeksi. Penelitian yang dilakukan oleh Haenlein oleh Genus ini. Identifikasi bakteri patogen dari
(2002) mengungkapkan bahwa keberadaan susu segar juga dapat dijadikan diagnosa definitif
Staphylococcus sp. dalam susu kambing normal sumber keracunan pada makanan dan juga
yang terindikasi mastitis subklinis berkisar 59%  memberikan informasi penting sebagai tindakan
diantaranya Staphylococcus aureus 17%, S. preventif dan kontrol sumber keracunan pangan
epidermidis 14%, S. capitis 13%, S. hyicus 11%. yang disebabkan oleh S. aureus (He et al., 2010;
Hal tersebut sependapat dengan Contreras Aziz et al., 2013).
et al. (2007) dan Windria et al. (2016) yang Identifikasi S. aureus dan Staphylococcus sp.
mengemukakan bahwa Staphylococcus sp. pada susu selama ini sebagian besar dilakukan
merupakan prevalent-pathogen yang bertanggung dalam skala laboratorium dengan cara isolasi
jawab pada kasus mastitis pada ruminansia kecil. dan identifikasi mikroba secara konvensional
Staphylococcus aureus (S. aureus) merupakan menggunakan media selektif dan uji biokemis.
salah satu bakteri penyebab mastitis yang Beberapa keterbatasan dari metode ini adalah
menyebabkan kerugian ekonomi pada peternakan kondisi pertumbuhan bakteri pada saat sampel
kambing PE dan sapi perah (Salasia et al., 2004; susu diperiksa, sampel susu kemungkinan hanya
Purnomo et al., 2006; Salasia et al., 2011). Bakteri mengandung jumlah bakteri yang sedikit atau
tersebut merupakan penyebab utama contagious bahkan kultur negatif, hal ini dimungkinkan karena
mastitis (Petterson-Wolfe et al., 2010; Achek et adanya residu antibiotik yang dapat menghambat
al., 2020). Kerugian ekonomi oleh mastitis berupa pertumbuhan bakteri (Phuektes et al., 2001; Riffon
penurunan produksi susu, masa laktasi yang lebih et al., 2001). Berdasarkan keterbatasan metode
pendek dan bertambahnya biaya pengobatan konvensional tersebut, maka teknologi molekular
(Nielsen, 2009; Hayati et al. 2019). Purnomo et al. dengan menggunakan polymerase chain reaction
(2006) melaporkan bahwa 23,08% dari 52 sampel (PCR) merupakan metode yang lebih akurat dalam
susu kambing PE asal Yogyakarta dan Purworejo mengidentifikasi berbagai macam bakteri pada
Jawa Tengah yang diteliti positif ditemukan S. sampel susu. Penelitian ini bertujuan mendeteksi
aureus. Penelitian yang dilakukan oleh Windria et Staphylococcus sp. dan S. aureus secara langsung
al. (2016) diketahui 38,5% dari 52 sampel susu dari susu kambing PE menggunakan metode PCR.
kambing PE yang diuji positif Staphylococcus sp.
Raw milk atau susu segar merupakan sumber Metode Penelitian
utama munculnya S. aureus dalam produk
Sampel
susu. Proses higienisasi terutama pada proses
pasteurisasi yang tidak sempurna merupakan Sampel yang akan digunakan pada
salah satu penyebab food borne disease (penyakit penelitian ini adalah susu segar yang diambil
yang disebabkan oleh mengkonsumsi makanan secara aseptis dari berbagai sentra penghasil susu
atau minuman yang terkontaminasi bakteri) pada kambing PE di koperasi susu asal Yogyakarta

167
Fatkhanuddin, et. al.
dengan jumlah 60 sampel. Isolat S. aureus positif
23S rRNA dengan kode American Type Culture
Cell (ATCC) 25923 milik Balai Besar Veteriner
Wates, Kementrian Pertanian RI dan Methicillin
Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) 1629
milik Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran
UGM digunakan sebagai kontrol positif amplifikasi
PCR untuk Staphylococcus sp. dan S. aureus.
Ekstraksi DNA dari Susu Segar
Ekstraksi DNA langsung dari susu segar
dilakukan dengan metode yang dilakukan oleh
Aziz (2013) menggunakan Qiamp tissue kit
(Qiagen, Jerman). Modifikasi minor dilakukan
untuk mendapatkan pelet dengan sentrifus dengan
kecepatan 14.000 rpm. Sebanyak 1 ml sampel susu
segar dalam tabung eppendorf disentrifus dengan
kecepatan 14.000 rpm selama 10 menit pada suhu
40C, kemudian lemak yang berada dipermukaan
susu dibuang menggunakan spatula, sentrifus
ulang dilakukan dengan kecepatan 14.000 rpm
selama 10 menit pada suhu 40C. Supernatan
dibuang, pelet dicuci sebanyak 2 kali dengan 1 ml
enzymatic lysis buffer (20 mM Tris·Cl, pH 8.02 mM
sodium EDTA, 1.2% Triton® X-100), kemudian
disentrifus dengan kecepatan 14.000 rpm selama
5 menit pada suhu 40C. Pelet ditambahkan 180 μl
enzymatic lysis buffer yang telah ditambahkan 5
μl lysostaphin (1,8 U/μl) dan Lysozyme dengan
konsentrasi 20 mg/ml, kemudian diinkubasi
pada waterbath dengan suhu 370C selama 120
menit. Campuran tersebut ditambahkan buffer
AL dan Proteinase K (14,8 mg/ml) 25μl, inkubasi
waterbath 560C 120 menit. Sebanyak 420 μl etanol
absolut ditambahkan ke dalam masing-masing
sampel dan ditempatkan ke dalam kolom Qiamp.
Kolom selanjutnya disentrifus 6000 g selama
satu menit, kemudian ditempatkan di atas tabung
koleksi dan sampel dicuci dua kali dengan 500 μl
bufer AW. Kolom Qiamp kemudian disentrifus
6000 g selama tiga menit, kemudian kolom
ditempatkan di atas tabung Eppendorf dan DNA
yang ada pada kolom dielusi dengan 200 μl buffer.
Hasil ekstraksi DNA disimpan pada suhu -20oC.
Identifikasi Molekuler Staphylococcus sp. dan
S.aureus
Identifikasi molekuler Staphylococcus sp. dan
S. aureus dianalisis berdasarkan amplifikasi gen
168
23S rRNA yang ditentukan dengan menggunakan
primer spesies spesifik dengan program PCR yang
telah ditentukan berdasarkan referensi (tabel 1).
Campuran untuk PCR sebanyak 25 μl terdiri atas
2 μl primer forward (10 pmol/μl), 2 μl primer
reverse (10 pmol/μl), 12,5 μl PCR mix (GoTaq®
Green Master Mix, Promega), 6,5 μl ddH2O dan 2
μl 20-40 ng template DNA. Campuran kemudian
disentrifus beberapa detik, dan dimasukkan dalam
thermal cycler dengan program siklus sesuai tabel 1.
Hasil amplifikasi dianalisis dengan menggunakan
elektroforesis dengan 2% agarose dan 0,5 μg/ml
ethidium bromide kemudian divisualisasi dengan
UV transluminator, dibandingkan dengan kontrol
dan marker 1 Kb DNA Ladder.
Hasil dan Pembahasan
Hasil penelitian memperlihatkan bahwa
keberadaan Staphylococcus sp. dan S. aureus
didalam susu segar dapat dideteksi langsung
menggunakan PCR dengan primer spesifik spesies.
Ekstraksi DNA dari susu segar dilakukan dengan
modifikasi pada tahapan awal preparasi ekstraksi
dari metode ekstraksi Aziz (2013). Optimasi yang
dilakukan sebelumnya diketahui dapat mendeteksi
keberadaan S. aureus dalam susu segar yang
kompatibel dengan Standar Nasional Indonesia
(SNI) No 01-3141-1998 yaitu batas limit S.
aureus yang diijinkan dalam susu adalah 102 sel/
ml (Aziz et al. 2013). Penggunaan PCR sebagai
alat deteksi diketahui mempunyai spesifisitas dan
sensifisitas yang tinggi sehingga deteksi langsung
keberadaan gen target dari genom bakteri tertentu
dapat dilakukan. Deteksi dini kontaminasi bakteri
patogen pada susu dapat langsung dilakukan
dengan cara lebih cepat.
Pemilihan metode ekstraksi berbasis spin
coloumn dilakukan selain telah teruji kualitas
DNA yang terekstraksi namun juga praktis
penggunaannya. Penggunaan spin column dalam
tahapan ekstraksi DNA langsung dari susu segar
memberikan hasil ekstraksi yang baik. Purifikasi
DNA berbasis column yang menggunakan metode
ekstraksi solid phase telah dikenal luas digunakan
untuk mendapatkan DNA murni (Dash et al.,
2020).
Hasil penelitian diketahui 37 (61%) sampel
susu yang diuji positif Staphylococcus sp. dengan
 Deteksi Staphylococcus aureus dan Staphylococcus sp. Secara Langsung Dari Susu Segar Kambing .....
primer Cremonesi et al. (2005) dan hanya 1
(1,6%) sampel positif mengandung S. aureus
dengan primer Straub et al. (1999). Identifikasi
molekuler Staphylococcus sp. dan S. aureus
dengan menggunakan target gen 23S rRNA dapat
digunakan untuk identifikasi bakteri secara sensitif
dan spesifik termasuk pada Isolat S. aureus ATCC
milik Balai Besar Veteriner Wates dan MRSA milik
Bagian Mikrobiologi FK UGM digunakan sebagai
kontrol positif memberikan hasil yang konsisten
(gambar 1 dan 2). Gen 23S rRNA merupakan
bagian penting pada proses sistesis protein.
Urutan basa nukleotida pada 23S rRNA sangat
identik pada hampir semua bakteri, sehingga dapat
diekploitasi guna identifikasi genus dan spesies.
Gambar 1 menunjukkan bahwa sampel yang diuji
PCR menggunakan primer referensi Cremonesi
et al. (2005) terdeteksi bakteri Staphylococcus
sp. dengan ukuran produk PCR 499 bp dan hanya
1 sampel susu positif S. aureus dengan ukuran
sesuai referensi 1250 bp menggunakan primer
Straub et al. (1999) (gambar 2, sumuran ke-4).
Diketahui konsistensi ditunjukkan dari 1 sampel
positif S. aureus primer Straub et al. (1999) juga
positif terhadap primer Cremonesi et al. (2005)
yang digunakan (Gambar 1 dan 2, sumuran ke-4).
Penelitian yang dilakukan oleh Harvey dan
Gilmour (1988), Coimbra-e-Souza et al. (2019)
diketahui spesies Staphylococcus yang umum
ditemukan di susu kambing diantaranya S. aureus,
S. arlettae, S. capitis, S. caprae, S. chromogenes,
S. epidermidis, S. hominis, S. hycus, S. lentus,
S. lugdunensis, S. saprophyticus , S. sciuri, S.
simulans, S. warneri,dan S. xylosus  sehingga
dipastikan 37 sampel susu yang positif PCR
terhadap primer spesifik Staphylococcus sp.
terdeteksi satu atau lebih dari berbagai spesies
Tabel 1. Primer oligonukleotida dengan program PCR untuk amplifikasi gen target 23S rRNA Staphylococcus sp. dan S. aureus.
Spesies Sekuen primer
Staphylococcus sp. 5’ AGC TGT GGA TTG TCC TTT GG 3’
3’ TCG CTC GCT CAC CTT AGA AT 5’
S. aureus 5’ACG GAG TTA CAA AGG ACG AC 3’
3’AGC TCA GCC TTA ACG AGT AC 5’
Keterangan : *
1 : 30 kali 940C-60 detik, 560C-60 detik, 720C-60 detik
2 : 30 kali 940C-120 detik, 640C-40 detik, 720C-75 detik
Staphylococcus tersebut diatas. Studi molekuler
yang dilakukan Windria et al. (2016) pada susu
kambing PE yang diteliti dengan mengurutkan
basa nukleotida 23S rRNA, teridentifikasi S.
aureus, S. haemolyticus, S. pasteuri, dan S.
xylosus. Hal tersebut mengindikasikan ambing
kambing PE dapat terinfeksi oleh berbagai spesies
dari genus Staphylococcus.
Pada penelitian ini, meskipun hanya 1 sampel
positif S. aureus, namun kontaminasi sampel susu
oleh bakteri ini mempunyai potensi menimbulkan
keracunan makanan karena S. aureus mampu
memproduksi eksotoksin berupa sekresi protein
toksin yang stabil terhadap pemanasan. Susu
diketahui merupakan media yang baik untuk
pertumbuhan S. aureus sehingga dapat menjadi
sumber keracunan makanan. Kontaminasi bakteri
ini terjadi akibat adanya S. aureus dalam susu segar
atau selama pengolahan. Tindakan pasteurisasi
dapat mengurangi jumlah S. aureus akan tetapi
enterotoksin bersifat termostabil sehingga tidak
mengurangi aktivitas biologisnya meskipun telah
mengalami pemanasan (Boerema et al., 2006;
Todar, 2008). Coimbra-e-Souza et al. (2019) dan
Contreras et al. (2007) mengemukakan bahwa
bakteri yang paling patogen penyebab mastitis
pada kambing adalah S. aureus, bakteri ini tidak
hanya berbahaya bagi manusia karena potensinya
namun juga menyebabkan infeksi pada ambing
kambing penderita dan dapat menyebabkan
gangren sehingga menyebabkan angka culling
yang tinggi.
Identifikasi Staphylococcus sp. maupun
S. aureus pada susu selama ini sebagian besar
dilakukan dilaboratorium dengan cara isolasi
dan identifikasi bakteri secara konvensional
menggunakan media selektif dan uji biokemis,
Program* Amplikon Referensi
1 499 bp Cremonesi et al., 2005
Straub et al., 1999
2 1250 bp
169
Fatkhanuddin, et. al.

sehingga penentuan bakteri pengkontaminasi
membutuhkan waktu lebih lebih dari 1 hari.
Beberapa keterbatasan dari metode konvensional
selain lamanya waktu yang dibutuhkan menurut
Phuektes et al. (2001) dan Riffon et al. (2001) juga
dipengaruhi oleh beberapa hal seperti terbatasnya
dinamika alami dari infeksi pada sampel susu,
sampel susu mungkin hanya mengandung jumlah
bakteri yang sedikit dan kultur negatif mungkin
karena adanya residu antibiotik yang dapat
menghambat pertumbuhan bakteri.
Metode PCR memberikan alternatif
identifikasi bakteri secara lebih cepat. Dengan
metode PCR, identifikasi bakteri patogen dapat
dilakukan dalam hitungan kurang dari 24 jam
bila dibandingkan dengan metode konvensional.
Metode PCR dapat digunakan untuk deteksi
bakteri patogen dengan sensitifitas dan spesifisitas
yang tinggi (Taponen et al., 2009).
Kesimpulan
Tiga puluh tujuh sampel positif mengandung
Staphylococcus sp. dan hanya 1 sampel positif
untuk S. aureus dari 60 sampel susu segar yang
diuji dengan teknik PCR.
Daftar Pustaka
Achek, R., El-Adawy, H., Hotzel, H., Tomaso, H.,
Ehricht, R., Hamdi, T. M.& Monecke, S.
(2020). Diversity of staphylococci isolated
from sheep mastitis in northern Algeria.
Journal of Dairy Science. 103(1): 890-897.

Gambar 1. Gel elektroforesis hasil PCR 23S rRNA dari susu segar dengan primer Cremonesi et al. (2005) (Ket:
M= marker, sumuran 1-2 kontrol positif ATCC dan MRSA, sumuran 3-11 sampel dan sumuran 12
kontrol negatif).

Gambar 2. Gel elektroforesis hasil PCR 23S rRNA dari susu segar dengan primer Straub et al. (1999) (Ket: M=
marker, sumuran 1-2 kontrol positif ATCC dan MRSA, sumuran 3-11 sampel dan sumuran 12 kontrol
negatif).

170
 Deteksi Staphylococcus aureus dan Staphylococcus sp. Secara Langsung Dari Susu Segar Kambing .....
Aziz, F. (2013). Determinasi Genetik
Staphylococcus aureus Sapi Perah di
Baturraden dan Pengembangan Deteksi
Stafilokokal Mastitis Langsung dari Susu
Segar dengan Polymerase Chain Reaction
(PCR). Master Thesis. Program Studi
Bioteknologi, Sekolah Pascasarjana, UGM,
Yogyakarta.
Aziz, F. Salasia, S.I.O., Artdita, C.A. dan Lestari,
F.B. (2013). Pengembangan Deteksi
Staphylococcus aureus Langsung dari Susu
Segar dengan Polymerase Chain Reaction
(PCR) dalam Prosiding Seminar Nasional
Teknologi Terapan, 01 Oktober 2013,
Yogyakarta (ISBN 978-62-14066-2-5).
Boerema, J. A., Clemens, R. and Brightwell, G.
(2006). Evaluation of molecular methods
to determine enterotoxigenic status and
molecular genotype of bovine, ovine, human
and food isolates of Staphylococcus aureus.
International Journal of Microbiology. 107
(2): 192-201.
Budisatria, I. G. S., Maharani, D., & Ibrahim,
A. (2019). Kambing Peranakan Etawah:
Kepala Hitam atau Cokelat. UGM PRESS.
Cremonesi, P., Luzzana, M., Brasca, M., Morandi,
S., Lodi, R., Vimercati, C., & Castiglioni,
B. (2005). Development of a multiplex PCR
assay for the identification of Staphylococcus
aureus enterotoxigenic strains isolated from
milk and dairy products. Molecular and
cellular probes, 19(5): 299-305.
Coimbra-e-Souza, V., Rossi, C. C., Jesus-de
Freitas, L. J., Brito, M. A. V., Laport, M. S., &
Giambiagi-deMarval, M. (2019). Diversity
of species and transmission of antimicrobial
resistance among Staphylococcus spp.
isolated from goat milk. Journal of dairy
science. 102(6): 5518-5524.
Contreras, A., Sierra, D., Sánchez, A., Corrales, J.
C., Marco, J. C., Paape, M. J., & Gonzalo, C.
(2007). Mastitis in small ruminants. Small
Ruminant Research. 68(1): 145-153.
Dash, H. R., Shrivastava, P., & Das, S. (2020).
Isolation of DNA by Using Column-Based
Extraction System. In Principles and
Practices of DNA Analysis: A Laboratory
Manual for Forensic DNA Typing (pp. 103-
108). Humana, New York, NY.
Fagundes, H., Barchesi, L., Filho, A. N., Ferreira,
L. M. and Olieveira, C. A. F. (2010).
Occurrence of Staphylococcus aureus in
Raw Milk Produced in Dairy Farms in São
Paulo State, Brazil. Brazilian Journal of
Microbiology. (41): 376-380.
Haenlein, G. F. (2002). Relationship of somatic
cell counts in goat milk to mastitis
and productivity. Small ruminant
research. 45(2): 163-178.
Harvey, J. and Gilmour, A. (1988), Isolation and
characterization of staphylococci from
goats milk produced in Northern Ireland.
Letters in Applied Microbiology. 7: 79–82.
He, Y., Liu, H., Xian, M. and Li, Y. (2010). Detection
and Identification of Staphylococcus
aureus in Raw Milk By Hybridization
to Oligonucleotide Microarray. African
Journal of Biotechnology. 9(15): 2284-
2289.
Hayati, L. N., Tyasningsih, W., Praja, R. N.,
Chusniati, S., Yunita, M. N., & Wibawati,
P. A. (2019). Isolasi dan Identifikasi
Staphylococcus aureus pada Susu
Kambing Peranakan Etawah Penderita
Mastitis Subklinis di Kelurahan Kalipuro,
Banyuwangi. Jurnal Medik Veteriner. 2 (2):
76-82.
Nielsen, C. (2009). Economic Impact Of Mastitis
in Dairy Cow. Doctoral Thesis. Swedish
University of Agricultural Sciences
Uppsala.
Petersson-Wolfe, C. S., Mullarky, I. K. and
Andjones, G.M. (2010). Staphylococcus
aureus Mastitis: Cause, Detection and
Control. Virginia Cooperative Extension.
Publication 404-229. www.ext.vt.edu.
Diakses: 08 Mei 2019.
Phuektes, P., Mansell, P. D, Browning, G. F.
(2001). Multiplex Polymerase Chain
Reaction Assay For Simultaneous Detection
of Staphylococcus aureus and Streptococcal
Causes of Bovine Mastitis. J Dairy Sci. 84
(5):1140–1148.
171
Fatkhanuddin, et. al.
Purnomo, A., Hartatik, Khusnan, Salasia, S. I.
O. Dan Soegiyono. (2006). Isolasi dan
Karakterisasi Staphylococcus aureus Asal
Susu Kambing Peranakan Ettawa. Media
Kedokteran Hewan. 22 (3):142 – 147
Riffon, R., Sayasith, K., Lhalil, H., Dubreuil,
P., Drolet, M. and Lagace, J. (2001).
Development of A Rapid and Sensitive Test
For Identification of Major Pathogens in
Bovine Mastitis by PCR. J. Clin. Microbiol.
39 (7): 2584–2589.
Salasia, S. I. O., Khusnan, Z., Lammler, C.,
Zschock, M. (2004). Comparative studies
on pheno-and genotypic properties of
Staphylococcus aureus isolated from
bovine subclinical mastitis in central Java
in Indonesia and Hesse in Germany. J Vet
Sci. 5 (2): 103–109.
Salasia, S. I. O., Tato, S., Sugiyono, N., Ariyanti,
D. and Prabawati, F. (2011). A Genotypic
characterization of Staphylococcus aureus
isolated from bovines, humans and food in
Indonesia. J. Vet. Sci. 12(4): 353-361.
Straub, J. A., Hertel, C. and Hammes, W. P. (1999).
A 23S rRNA-Targeted Polymerase Chain
Reaction-Based System for Detection of
Staphylococcus aureus in Meat Starter
Cultures and Dairy Products. J. Food Prot.
62 (10):1150–1156.
172
Tan, A. and Hogg, G. (2008). Staphylococcus
aureus and Food Borne Disease.
Microbiology Australia. 29 (23): 155-156.
Taponen, S., Salmikivi, L., Simojoki, H.,
Koskinen, M. T. and Pyörälä, S. (2009).
Real-Time Polymerase Chain Reaction-
Based Identification of Bacteria in Milk
Samples From Bovine Clinical Mastitis
With No Growth in Conventional Culturing.
J. Dairy Sci. 92 (6):2610–2617.
Todar, K. (2008). Staphylococcus aureus and
Staphylococcal Disease; Todar’s Online
Textbook of Bacteriology. www.textbook of
bacteriology.net. Diakses : 08 Januari 2020.
Windria, S., Widianingrum, D. C., & Salasia, S. I.
O. (2016). Identification of Staphylococcus
aureus and Coagulase Negative
Staphylococci Isolates from Mastitis Milk
of Etawa Crossbred Goat. Research Journal
of Microbiology, 11(1): 11.
 Jurnal Sain Veteriner, Vol. 38. No. 2. Agustus 2020, Hal. 173-182
DOI: 10.22146/jsv.51559
ISSN 2443-1583 (Print), ISSN 2407-3733 (Online)
Tersedia online di https://jurnal.ugm.ac.id/jsv

Case Report
Keracunan Coklat (Theobroma Cacao) pada Anjing:
Manajemen Terapi dan Pencegahan

Chocolate (Theobroma Cacao) Poisoning in Dogs:

Therapeutic Management and Prevention
Yanuartono1, Alfarisa Nururrozi1, Soedarmanto Indarjulianto1*, Slamet Raharjo, Hary Purnamaningsih1, Nurman haribowo1

1
Departemen Ilmu Penyakit Dalam, Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gadjah Mada.
Jl. Fauna No.2, Karangmalang, Depok, Sleman. 55281 Yogyakarta
*Email: indarjulianto@ugm.ac.id

Naskah diterima: 17 Nopember 2019, direvisi: 7 Januari 2020, disetujui: 30 Juli 2020

Abstract

Chocolate poisoning has long been recognized as a common cause mostly in dogs, although many species are
susceptible. Contributing factors include indiscriminate eating habits and readily available sources of chocolate.
In general, the poisoning resulted from a lack of public knowledge of the health hazard to dogs that may be
imposed by these products.Chocolate is derived from the seeds of the plant Theobroma cacao, and the main toxic
components are the methylxanthine alkaloids theobromine and caffeine, causing gastrointestinal, cardiovascular
and central nervous signs. Diagnosis is based on history of exposure, along with clinical signs. Amphetamine or
cocaine toxicosis, and ingestion of antihistamines, antidepressants, or other CNS stimulants should be considered
in the differential diagnosis. Stabilization of symptomatic animals is a priority in treating chocolate toxicosis.
Although there is no specific antidote, supportive management includes induction of vomiting and administration
of activated charcoal, oxygen, and intravenous fluids. Preventing exposure is the key to reducing the incidence
of these poisoning episodes. Therefore, it is important to increase the knowledge of dogs owners with regard
to foodstuffs that must not be fed to dogs and should be stored outside their reach.. This paper aims to briefly
describe the clinical symptoms, treatment and prevention of chocolate poisoning in dogs.

Key words: antidote; chocolate; Theobroma cacao; toxicosis

Abstrak

Coklat telah lama dikenal sebagai penyebab keracunan pada anjing dan beberapa spesies juga bersifat
rentan. Faktor yang turut berperan dalam kejadian tersebut adalah kebiasaan memberikan pakan sembarangan
dan tersedianya makanan yang berbahan utama coklat. Pada umumnya keracunan terjadi karena kurangnya
pengetahuan publik tentang bahaya kesehatan pada anjing yang mungkin disebabkan oleh produk-produk coklat.
Coklat berasal dari biji tanaman Theobroma cacao, dan komponen racun utama adalah alkaloid methylxanthine
theobromine dan kafein, menyebabkan tanda-tanda klinis pada gastrointestinal, kardiovaskular dan susunan
saraf pusat. Diagnosis didasarkan pada riwayat pajanan dan gejala gejala klinis yang teramati. Amfetamin,
kokain, antihistamin, antidepresan, atau stimulan system syaraf pusat harus dipertimbangkan dalam diagnosis
banding. Penanganan gejala klinis yang muncul merupakan prioritas pada pengobatan kasus keracunan cokelat.
Meskipun tidak ada obat penawar khusus, perlu dilakukan penatalaksanaan suportif meliputi induksi muntah,
pemberian activated charcoal, oksigen, dan cairan secara intravena. Mencegah anjing terpapar adalah kunci
untuk mengurangi kejadian keracunan coklat. Oleh karena itu, penting untuk meningkatkan pengetahuan pemilik
anjing terkait dengan bahan makanan yang mengandung coklat tidak boleh diberikan pada anjing dan harus

173
Yanuartono, et. al.
disimpan di luar jangkauannya. Tulisan ini bertujuan untuk menguraikan secara singkat tentang gejala klinis,
penanganan dan pencegahan keracunan coklat pada anjing.
Kata kunci: coklat; Theobroma cacao; toksikosis; antidota
Pendahuluan
Keracunan pada hewan kesayangan seperti
anjing kebanyakan bersifat tidak sengaja dan
terjadi di dalam rumah atau sekitarnya. Salah
satu penyebab adalah kebiasaan pemilik hewan
memberikan makanan ataupun minuman yang
mereka konsumsi dan tanpa disadari dapat
membahayakan hewan peliharaanya jika
dimakan. Banyak makanan dan minuman untuk
manusia seperti anggur (Campbell, 2007), kismis
(Mazzaferro et al., 2004), kue sultana ( Sutton et
al., 2009), bawang merah (Yamato et al., 2005)
dan bawang putih (Lee et al., 2000 ) bersifat toksik
pada hewan kesayangan seperti anjing dan kucing
(Smit, 2011). Sifat toksik makanan tersebut karena
mengandung methylxanthines seperti kafein,
theobromine dan theophilin yang merupakan
alkaloid asal tumbuhan yang pada umumnya
ditemukan dalam berbagai makanan, minuman,
obat-obatan manusia, dan produk yang banyak
tersedia di rumah tempat tinggal (Beasley, 1999
;Thompson, 2012). Beberapa contoh makanan
dan minuman yang mengandung methylxanthines
adalah coklat, kopi, teh dan berbagai bahan aditif
dalam banyak minuman ringan (Caloni et al., 2012;
Mahdi and Van der Merwe, 2013; Cortinovis and
Caloni, 2016). Munculnya kasus kasus tersebut
disebabkan karena pada umumnya ada kebiasaan
memberikan makanan manusia untuk hewan
peliharaanya tetapi pemilik kurang menyadari
bahaya serta akibat yang ditimbulkannya. Salah
satu makanan yang memiliki potensi toksik pada
anjing dan kucing telah banyak dilaporkan adalah
coklat (Hudd, 1997; Cortinovis and Caloni, 2016).
Meskipun demikian, kasus keracunan tersebut
lebih banyak terjadi pada anjing jika dibandingkan
dengan kucing. Selain anjing dan kucing, hewan
hewan lain juga dapat mengalami keracunan
theobromine asal coklat adalah babi (Yang et al.,
1997), kuda (Kelly and Lambert, 1978), kelinci
(Tarka et al., 1986), sapi (Hanington and bell,
1972), kambing (Aregheore, 2002), domba (Aly,
1981), coyote (Johnston, 2005), red fox (Jansson
et al., 2001), ayam pedaging (Odunsi and Longe
174
1998) dan ayam petelur (Black and Barron, 1943).
Tingginya kasus keracunan disebabkan oleh rasa
manis coklat yang disukai anjing dan ras kecil
tampaknya lebih rentan terhadap keracunan
dibandingkan dengan ras besar (Kovalkovicova et
al., 2009).
Kasus keracunan coklat pada anjing telah
banyak dilaporkan di berbagai negara seperti
Inggris (Berny et al., 2010), Jerman (McFarland et
al., 2017), India (Reddy et al., 2013) dan Amerika
Serikat (Gwaltney-Brant, 2012). Laporan
kejadian di Indonesia secara resmi jarang sekali
muncul karena kemungkinan coklat maupun
makanan berbahan dasar coklat masih dianggap
mahal sehingga jarang diberikan pada hewan
kesayangan. Cokelat berasal dari biji tanaman
Theobroma cacao dan substansi bersifat racun
yang utama adalah alkaloid methylxanthine seperti
theobromine atau 3,7-dimethylxanthine dan
kafein atau 1,3,7-trimethylxanthine (Finlay, 2005;
Albretsen 2004; Smit 2011). Meskipun kedua
substansi tersebut dapat menimbulkan gejala
gejala klinis keracunan coklat, namun demikian
theobromine lebih berdampak karena konsentrasi
dalam coklat 3-10 kali lebih tinggi dari kafein
dan waktu paruh lebih lama jika dibandingkan
dengan kafein (Merck Veterinary Manual, 2005).
Luiz and Heseltine (2008) menambahkan bahwa
keracunan tidak tergantung dari volume atau
jumlah yang tertelan tetapi lebih pada jenis coklat
yang termakan. Lebih lanjut Thompson (2012)
menyatakan keracunan pada anjing disebabkan
oleh lambatnya metabolisme theobromine jika
dibandingkan pada manusia.
Gejala klinis yang sering muncul adalah
muntah, takikardia dan kejang (Gwaltney-Brant,
2001; Hooser and Beasley, 1986). Menurut Noble
et al. (2017), terapi yang dapat diberikan untuk
mengatasi kejadian tersebut adalah activated
charcoal, apomorfin, terapi cairan dan anti
emesis. Terapi lain yang dapat ditambahkan
adalah bronkodilatator, aminophyllin dan
diuretika (Erling and Mazzaferro, 2008; Agudelo
et al., 2013), meskipun demikian terapi yang
 Keracunan Coklat (Theobroma Cacao) pada Anjing: Manajemen Terapi dan Pencegahan
diberikan tergantung dari gejala klinis yang
muncul. Pencegahan yang dapat dilakukan adalah
menjauhkan coklat atau makanan berbahan dasar
coklat serta memberikan pengetahuan tentang
bahaya pemberiannya kepada pemilik anjing.
Tulisan ini bertujuan untuk menguraikan secara
singkat tentang gejala klinis, penanganan dan
pencegahan keracunan coklat pada anjing.
Kandungan Coklat
Biji tanaman coklat (Theobroma cacao L.)
mengandung berbagai macam komponen kimia,
zat gizi, dan senyawa bioaktif di dalamnya.
Menurut Wahyudi et al. (2015) komposisi kimia
tepung coklat per 100 gram mengandung kalori
228,49 Kkal, lemak 13,5 g, karbohidrat 53,35
g, serat 27,90 g, protein 19,59 g, air 2,58 g, dan
kadar abu 6,33%. Kadar abu 6,33% tersusun atas
kalium (K) 1495,5 mg, natrium (Na) 8,99 mg,
kalsium (Ca) 169,45 mg, besi (Fe) 13,86 mg,
seng (Zn) 7,93 mg, tembaga (Cu) 4,61 mg dan
mangan (Mn) 4,73 mg. Kandungan lemak pada
biji coklat berkisar antara 50 – 70%, yang terdiri
dari 34% asam stearat, 34% asam oleat, 25% asam
palmitat dan 2% asam linoleat (Torres-Moreno et
al., 2015). Komponen senyawa bioaktif dalam
tepung coklat adalah senyawa polifenol yang
berfungsi sebagai antioksidan (Hammerstone et
al., 1999; Othman et al., 2007) serta berperan
juga dalam rasa dan aroma coklat (Cruz et al.,
2015). Menurut Ackar et al. (2013) serta Chin et
al. (2013), biji coklat segar mengandung senyawa
polifenol sekitar 12-18% yang terdiri dari gugus
polifenol utama yaitu flavan-3-ol/flavanol,
anthocyanidin dan proanthocyanidin. Sedangkan
senyawa polifenol yang lain adalah catechin
dan epicatechin dengan jumlah sekitar 15%
dalam biji coklat bentuk kering (Richelle et al.,
1999). Namun demikian, menurut Kowalska and
Sidorczuk (2007), jumlah kandungan senyawa
polifenol bervariasi tergantung pada tingkat
kematangan buah, varietas dan lingkungan tempat
tumbuh tanaman tersebut. Methylxanthines seperti
kafein (1,3,7-trimethylxanthine), theophylline
(1,3-dimethylxanthine) dan theobromine
(3,7-dimethylxanthine) adalah kelompok
senyawa bioaktif alkaloid terdapat dalam biji
coklat (Martínez-Pinilla et al., 2015; Mourya
et al., 2019). Methylxanthines seperti kafein,
theobromine, dan theophylline yang terkandung
di dalam berbagai bentuk makanan dan minuman
serta produk farmasi saat ini telah menjadi
konsumsi setiap hari (Shively and Tarka, 1984;
Stavric, 1988; Monteiro et al., 2016). Kandungan
theobromine dalam coklat bervariasi karena
adanya variasi asal biji coklat dan keragaman
produk coklat di pasaran (Luiz and Heseltine
2008). Jansson et al. (2001) menambahkan bahwa
perbedaan jenis coklat mencerminkan perbedaan
kandungan methylxanthines, dimana konsentrasi
terendah terdapat dalam kulit biji dan biji coklat
memiliki konsentrasi tertinggi. Hasil penelitian
dengan menggunakan HPLC pada berbagai
produk komersial minuman yang berbahan baku
coklat rata rata mengandung theobromine 1,22%
dan kafein 0,21% (Zoumas et al.,1980). Menurut
Merck Veterinary Manual (2019) produk makanan
asal coklat yang mengandung methylxanthine
contohnya adalah bubuk coklat kering (28,5
mg/g), coklat tanpa pemanis dalam kue (16mg/g),
kulit biji coklat (9,1mg/g), semisweet chocolate
dan sweet dark chocolate (5.4-5.7 mg/g), susu
coklat (2,3mg/g) dan kembang gula coklat (1,4-
2,1mg/g).
Etiologi dan Pathogenesis
Kandungan coklat yang bersifat toksik adalah
alkaloid methylxanthine seperti theobromine
dan kafein tetapi theobromine diketahui jauh
lebih bersifat toksik dan prevalensi kejadiannya
lebih sering pada anjing (Kovalkovicova et al.,
2009). Penyebab tingginya prevalensi keracunan
disebabkan adanya kenyataan bahwa anjing lebih
sering memiliki akses ke berbagai makanan yang
mengandung coklat dengan bahan-bahan beracun
termasuk theobromine dan kafein (Albretsen,
2004). Menurut Gwaltney-Brant, (2001) anjing
yang mengkonsumsi produk coklat buatan rumah
tangga atau berasal dari toko roti yang telah dikemas
kemungkinan sulit untuk mengidentifikasi jumlah
serta jenis coklat yang digunakan sebagai bahan
pembuatannya. Dalam kasus tersebut, pemilik
maupun praktisi hanya mampu memperikirakan
dosis methylxanthine berdasarkan pada prognosa
terburuk yang menimpa anjing.
Dosis toksik coklat bervariasi tergantung pada
beberapa faktor seperti ukuran anjing (Albretsen,
2004), kepekaan anjing terhadap coklat, konsumsi
175
Yanuartono, et. al.
cokelat saat saluran pencernaan kosong dan
setelah makan serta jenis coklat (Gwaltney-Brant,
2001; Agudelo et al., 2013). Menurut Trognitz et
al., (2013) konsentrasi theobromine dalam cokelat
3-10 kali tinggi dari kafein tetapi kedua substansi
tersebut berperan dalam munculnya gejala
klinis pada kasus keracunan coklat. Meskipun
konsentrasi theobromine lebih tinggi dari kafein,
namun pada anjing, kafein diabsorbsi dengan
cepat setelah terkonsumsi sedangkan theobromine
diserap 10 kali lebih lambat dan mencapai kadar
puncak plasma sekitar 10 jam (Dolder, 2013).
Efek toksik pada anjing disebabkan karena
metabolisme Theobromine dan kafein lebih
lambat jika dibandingkan dengan pada manusia.
Theobromine dan kafein mudah diserap dari
saluran pencernaan dan didistribusikan secara
luas ke seluruh tubuh. Metabolisme terjadi di
hati dan menjalani daur ulang enterohepatik
(Miller et al., 1984; Finlay, 2005). Thompson
(2012) memberikan penjelasan tambahan
bahwa setelah tertelan, theobromine diabsorbsi
sepanjang saluran pencernaan, dimetabolisme
oleh hati dan kemudian merangsang sistem saraf
pusat. Theobromine juga menghambat reseptor
sel adenosin dan mengakibatkan gejala tremor
dan kekejangan. Menurut Serafin, (1996) dan
Tazzeo et al., (2012), Theobromine dan kafein
merupakan antagonis reseptor seluler adenosin,
sehingga menyebabkan stimulasi SSP, diuresis,
dan takikardia.
Waktu paruh theobromine dan kafein pada
anjing masing-masing adalah 17,5 jam dan 4,5
jam sehingga gejala klinis dapat teramati dalam
waktu yang lama pada kasus yang berat (Merck
Veterinary Manual, 2005). Perbedaan waktu paruh
tersebut mengakibatkan perbedaan dampak antara
theobromine dan kafein. Dampak yang muncul
adalah theobromine diekskresikan melalui urin
dalam bentuk metabolit dan sebagian tidak
mengalami perubahan bentuk (Bonati et al., 1984).
Theobromine berperan juga dalam meningkatkan
kadar kalsium intraseluler dengan meningkatkan
pemasukan kalsium seluler dan menghambat
penyerapan kalsium intraseluler oleh retikulum
sarkoplasma otot (Serafin, 1996; Finlay, 2005;
Kovalkovicova et al., 2009). Dampak yang muncul
berupa peningkatan kekuatan dan kontraktilitas
otot skelet dan jantung. Methylxanthines juga
176
berkompetisi untuk reseptor benzodiazepine
dalam SSP dan menghambat fosfodiesterase,
mengakibatkan peningkatan level siklik AMP.
Dampak methylxanthines yang lain adalah
meningkatkan level epinefrin dan norepinefrin
dalam sirkulasi (Craft and Powell, 2010; Dolder,
2013). Pada akhirnya dampak negatif yang
dimanifestasikan pada gejala klinis yang muncul
tergantung dari dosis, jenis coklat, kandungan
theobromine dalam coklat ataupun produk produk
asal coklat dan bobot anjing.
Dosis toksik pada anjing
Banyak kejadian anjing keracunan cokelat,
produk makanan dan minuman, cacao bean
mulch asal coklat telah dilaporkan (Strachan
dan Bennett, 1994; Hovda and Kingston, 1994;
Pittenger, 2002; Hansen et al., 2003). Penelitian
maupun laporan kasus menunjukkan bahwa
dosis lethal theobromine dan kafein dalam
coklat sangatlah bervariasi. Meskipun demikian,
konsentrasi theobromine biasanya lebih tinggi
dari kafein pada beberapa produk makanan
maupun minuman sehingga theobromine lebih
sering dikaitkan dengan keracunan dibandingkan
dengan kafein, meskipun memiliki potensi toksik
sama (Eteng et al., 1997). Menurut Carson (2006)
LD50 theobromine dan kafein pada anjing adalah
100–500 mg/kg sedangkan Gans et al. (1980)
menyatakan bahwa LD50 oral pada anjing
adalah 300mg/kg. Gwaltney-Brant (2001) dalam
tulisannya menyatakan bahwa LD50 theobromine
dan kafein 100-200 mg/kg, tetapi tidak menutup
kemungkinan gejala klinis yang berat dan
kematian terjadi dengan dosis yang jauh lebih
rendah karena adanya variasi sensitivitas individu
terhadap methylxanthine. Pada umumnya gejala
ringan seperti polidipsi, muntah dan diare muncul
pada anjing yang menelan 20 mg/kg sedangkan
efek kardiotoksik akan muncul pada dosis 40-50
mg/kg dan kejang dapat terjadi pada dosis ≥60
mg/kg. Dosis 40-50 mg/kg akan menunjukkan
efek kardio toksik seperti gangguan irama detak
jantung dan kejang, sedangkan dosis yang lebih
tinggi dapat mengakibatkan kematian (Stidworthy
et al., 1997). Dosis 20mg/kg pada anjing umumnya
menunjukan gejala ringan seperti muntah, diare
dan polidipsi (Finlay, 2005; Kovalkovicova et al.,
2009).
 Keracunan Coklat (Theobroma Cacao) pada Anjing: Manajemen Terapi dan Pencegahan

Kajian toksisitas akut pada anjing Mongrel
jantan, dosis theobromine tunggal 500 atau 1000
mg/ kgBB menunjukkan gejala terengah-engah,
gelisah, dan tremor otot 4 sampai 5 jam setelah
pemberian theobromine, dan bertahan selama 6
hingga 8 jam. Sedangkan anjing yang diberi 200
mg/ kgBB tidak ada yang mati, akan tetapi 3 dari
14 anjing dengan pemberian 300-1000 mg/kg BB
mengalami kematian (Gans et al., 1980). Loeffler
(2000) menambahkan bahwa 160 g coklat atau
tepung coklat (setara dengan 60mg/kgBB) dapat
mengakibatkan keracunan pada anjing dengan
bobot badan 20 kg dan jika diberikan 400 g (setara
dengan 150mg/kgBB) dapat mengakibatkan
kematian. Gans et al. (1980) dalam kajian lanjut
toksisitas subakut theobromine pada sepuluh
anjing yang selamat dari uji toksisitas akut
sebelumnya menunjukkan semuanya mampu
bertahan hidup. Dosis yang diberikan adalah 125-
150 mg/kg BB/ per hari selama 21 sampai 28 hari.
namun demikian, tujuh dari sepuluh anjing mati
selama penelitian meskipun tanpa menunjukkan
gejala klinis sebelum kematian. Namun sayangnya
penyebab kematian 7 anjing tersebut tidak diteliti
lebih lanjut.
Gejala klinis dan Diagnosis
Gejala klinis keracunan coklat pada anjing
sangat bervariasi seperti dehidrasi, tremor,
peningkatan nafsu minum (Reddy et al., 2013),
muntah, diare, distensi abdomen (Luiz and
Heseltine, 2008) aritmia, hyperthermia (Strachan
and Bennett 1994) dan biasanya muncul 6-12 jam
setelah mengkonsumsinya. Meskipun demikian,
menurut pengamatan Finlay (2005), sebagian
besar gejala klinis akan mulai muncul dalam dua
jam setelah konsumsi, namun demikian karena
theobromine dimetabolisme secara perlahan,
maka diperlukan waktu sampai 24 jam untuk
muncul gejala klinis dan hingga tiga hari untuk
pemulihan. Hornfeldt (1987) menambahkan
bahwa gejala klinis toksisitas coklat yang berat
terkait dengan gangguan sistem syaraf pusat
(SSP) seperti nervous, gelisah, tremor, kejang

Tabel 1. Gejala klinis dan pemeriksaan laboratoris kasus keracunan theobromine dan kafein dalam coklat

Hewan Anamnesa Gejala klinis Pemeriksaan laboratoris Pustaka

Airedale Ditemukan mati setelah Sebelum mati anjing muntah, Ditemukan theobromine dengan Decker and Myers,
Terrier mengkonsumsi sekitar 250 koma disertai dengan kejang menggunakan metode thin-layer 1972
g coklat otot dan konvulsi chromatography
red fox Ditemukan lim­bah co­kelat Tidak teramati karena sudah analisis kimia methylxanthine Jansson et al., 2001
(Vulpes berbentuk batang yang dalam kondisi mati theo­bromine sampel isi lambung
vulpes) digunakan untuk pakan mengandung 420 µg/g dan 64 µg/g
ternak dan babi di lokasi hati.
kematian red fox.

West Pemilik sebelumnya hipotermia ringan, Pernafasan Peningkatan hematokrit, leukositosis Atkinson, 2008
Highland memberikan coklat dalam dangkal dan cepat, pulsus dengan neutrofilia dan eosinophilia.
white jumlah yang tidak pasti, lemah tetapi frekuensi Kimia darah total bilirubin menun­
terrier muntah intermiten selama meningkat, membrana mukosa jukkan sedikit peningkatan dan
beberapa jam dan diare mulut sianotik, dehidrasi ringan hiperglikemia
Anjing pug 12-14 jam sebelum gejala tremor, salivasi, muntah, total leukosit (9200 / cumm), Reddy et al., 2013
klinis muncul anjing polidipsi, terengah-engah, neutrofil (6256 /cumm), limfosit
diberi makan coklat gelisah, frekuensi urinasi (2760/cumm), eosinofil (18 / cumm),
meningkat. hemoglobin (13 g/dl), TEC (6,2 x
106/ cumm) dan PCV (43%).
Anjing Lima jam sebelum peme­ Muntah, hipersalivasi, Pemeriksaan darah lengkap/ Agudelo et al., 2013
Dachshund rik­saan, anjing diketahui dispnu, selaput lendir complete blood count (CBC) sedikit
oleh pemilik makan se­ kemerahan, takikardia, perut mengalami peningkatan, alanine
potong kue cokelat dengan membesar disertai nyeri saat transferase (ALT) 1,91 μkat / l,
Berat 200 g. dipalpasi

Yorkshire 6 - 8 jam sebelum takikardia ekstrem, fasikulasi Pemeriksaan laboratoris tidak Hensel et al., 2017
terrier pemeriksaan, anjing muka, koma/ pingsan dan sempat dilakukan
mengonsumsi 800 mg akhirnya mati
tablet kafein

177
Yanuartono, et. al.
dan akhirnya koma dan mati. Kematian terutama
disebabkan karena aritmia, hipertermia, kegagalan
pernapasan, kongesti dan edema (Jansson et al.,
2001). Sedangkan Hooser and Beasley (1986)
menyatakan bahwa gejala lain yang dapat
teramati adalah stimulasi jantung, terengah-
engah, muntah, haus, diare, inkontinensia urin dan
kematian mendadak. Bervariasinya gejala klinis
yang muncul membuat kita harus berhati hati
dalam melakukan anamnesa, pemeriksaan klinis
maupun laboratoris sehingga diharapkan dapat
menentukan diagnosa serta memberikan terapi
dengan cepat dan tepat. Gejala klinis yang muncul
akibat keracunan coklat pada anjing disajikan
dalam tabel 1.
Tabel 1 menunjukkan bahwa diagnosa yang
diambil pada umumnya akan tepat jika anamnesa
diketahui secara pasti. Sedangkan gejala gejala
klinis yang muncul sulit digunakan sebagai dasar
diagnosa karena banyaknya gejala yang mirip
namun tidak disebabkan oleh keracunan coklat.
Diagnosa banding yang perlu mendapatkan
perhatian adalah keracunan amfetamin, kafein,
pseudoefedrin, kokain, antihistamin dan
antidepresan (Reich et al., 2000; Diniz et al., 2003;
Gwaltney-Brant, 2012; Tawde et al., 2012; Kang
and Park, 2012; Thomas et al., 2014; Buchweitz
et al., 2014). Oleh sebab itu kita perlu lebih
berhati hati dalam menentukan diagnosa yang
tepat karena banyaknya diagnosa banding yang
menunjukkan gejala klinis yang sama. Laporan
kasus oleh Atkinson (2008) menunjukkan diagnosa
meragukan meskipun beberapa hasil pemeriksaan
klinis mengarah pada kasus keracuan coklat.
Pada kasus tersebut diagnosa keracunan coklat
diambil berdasarkan adanya kesembuhan tanpa
pengobatan setelah pemberian coklat dihentikan.
Meskipun tidak banyak laporan kasus keracunan
coklat yang dipublikasikan, namun demikian
laporan kasus yang terdokumentasikan banyak
terjadi di Negara Negara Eropa dan Amerika
Serikat dimana kasus keracunan akan meningkat
saat menjelang hari raya Paskah dan Natal dimana
coklat lebih banyak dan mudah diakses dalam
rumah tangga yang banyak memelihara anjing
(Noble et al., 2017). Tabel 1. juga menunjukkan
bahwa hasil pemeriksaan laboratoris tampaknya
sulit untuk membantu menentukan diagosa
kecuali pada analisis kimia sampel isi lambung
178
ditemukan theobromine. Diagnosa yang lebih
akurat seharusnya dilakukan melalui pendekatan
anamnesa yang seksama dan didukung dengan
gejala gejala klinis yang muncul.
Secara umum, hasil anamnesa berupa
konsumsi cokelat, tanda-tanda klinis yang selaras
dengan keracunan cokelat dan keberadaannya
dalam saluran pencernaan adalah metode diagnosis
yang paling ideal. Menurut Smit (2011), jenis
coklat juga dapat menunjukkan gejala gejala pada
saluran pencernaan guna membantu penentuan
diagnosa. Coklat yang banyak mengandung
lemak jika termakan akan menunjukkan gejala
pada saluran pencernaan seperti muntah, diare,
distensi abdominal dan pankreatitis. Selain itu,
pemeriksaan dengan kromatografi cair kinerja
tinggi (HPLC) juga dapat membantu memastikan
diagnosa. Deteksi keberadaan theobromine
dapat ditentukan dengan HPLC dalam isi
lambung, serum atau urin (Carson, 2006). Hasil
pemeriksaan makroskopis menunjukkan lesi yang
tidak spesifik seperti hiperemia mukosa lambung
dan duodenum serta kongesti organ yang bersifat
difus (Iannaccone, 1999; Jansson et al., 2001).
Pemerikasaan laboratoris perlu dikakukan untuk
mendukung penentuan diagnose yang lebih pasti.
Hasil pengujian sampel isi lambung, plasma,
serum, urin dan hepar mengalami peningkatan
kadar methylxanthine dan metabolitnya tiga
sampai empat hari setelah paparan awal (Carson,
2006). Smit (2011) menambahkan bahwa terdapat
keberagaman antara konsentrasi serum dengan
gejala klinis yang teramati. Keberagaman tersebut
dapat dilihat dari laporan Stidworthy et al. (1997)
dan Reising et al., (1999) yang menggambarkan
kematian pada seekor anjing terkait dengan
konsentrasi serum 133 μg/ml theobromine dan
sebaliknya, anjing dengan konsentrasi theobromine
serum 250μg/ml tidak mengalami kematian.
Terapi
Tidak ada antidota spesifik untuk
theobromine dan pengobatan yang dilakukan lebih
banyak bersifat simtomatik dan supportif untuk
menghilangkan gejala gejala klinis yang muncul
dan memperbaiki kondisi tubuh hewan. Terapi
yang dapat dilakukan lebih kearah simptomatis dan
suportif tergantung dari gejala klinis yang muncul
(Thompson, 2012). Pendapat tersebut didukung
 Keracunan Coklat (Theobroma Cacao) pada Anjing: Manajemen Terapi dan Pencegahan
oleh Iannaccone (1999) yang menyatakan tidak
ada antidota khusus untuk keracunan theobromine
dari coklat. Meskipun demikian, keberhasilan
dapat diupayakan dengan terapi kombinasi
detoksifikasi, perawatan suportif dan simtomatik.
Detoksifikasi dapat dilakukan setelah 3-4 jam
pertama konsumsi dengan, pencucian lambung
dan pemberian activated charcoal. Sedangkan
terapi suportif dapat dilakukan dengan pemberian
cairan pengganti secara intra vena (IV) untuk
mencegah dehidrasi dan kateterisasi untuk
mencegah reabsorbsi toksin. Obat obatan relaksan
otot dan anti konvulsi perlu diberikan saat muncul
gejala gejala tersebut. Gejala klinis dan terapi
pada kasus keracunan coklat pada anjing tersaji
pada tabel 2.
Tabel 2 menunjukkan bahwa terapi
simptomatis berdasarkan gejala klinis yang
muncul mendominasi terapi yang diberikan
dalam penanganan kasus keracunan coklat.
Terapi simptomatis tersebut disebabkan karena
hampir semua anjing yang keracunan coklat
menunjukkan gejala-gejala muntah sehingga
diberikan berbagai macam obat anti emesis seperti
ranitidine, thiethylperazin dan activated charcoal.
Namun demikian, jika tidak terjadi muntah dalam
waktu 4 jam setelah menelan coklat maka perlu
diberikan induksi dengan menggunakan saturated
salt solution 400 ml (Ahlawat et al., 2014) agar
hewan menjadi muntah atau dilakukan pencucian
lambung yang diikuti pemberian Activated
charcoal (Finlay, 2005; Luiz and Heseltine, 2008).
Pemberian activated charcoal ditujukan karena
adanya resirkulasi enterohepatik theobromine
dan cafein dengan pengulangan pemberian
setiap 4-6 jam sekali. Activated charcoal juga
mampu menurunkan waktu paruh theobromine
(Farbman, 2000). Methocarbamol  atau
diazepam dapat diberikan untuk mengatasi
gejala seperti tremor dan kejang serta pemberian
propranolol atau metoprolol untuk mengontrol
aritmia jantung. Pemberian diazepam 0,5-2 mg/
kg IV, fenobarbital 2-6 mg/kg IV atau preparat
barbiturat dapat digunakan untuk mengendalikan
gejala kejang yang muncul (Farbman, 2001).
Kovalkovicova et al. (2009) menggunakan cairan
infus 25–80 mg/kg IV sebagai terapi membantu
menstabilkan fungsi kardiovaskuler dan
membantu mempercepat ekskresi theobromine
melalui urin. Reddy et al. (2013) menambahkan
injeksi antibiotika amoksisilin dan kloksasilin
masing masing 25mg/kgBB IM untuk mencegah
munculnya infeksi sekunder karena penurunan
kondisi anjing. Meskipun demikian, Farbman
(2001) dan Kovalkovicova et al. (2009)
tidak menganjurkan pemberian antibiotika
eritromisin dan preparat kortikosteroid karena
akan menghambat ekskresi theobromine. Terapi
keracunan theobromine asal coklat menunjukkan
variasi yang cukup besar meskipun pada intinya
merupakan terapi simptomatis yang ditujukan
untuk mengatasi gejala gejala klinis yang muncul.
Pencegahan
Keracunan cokelat pada anjing sampai
saat ini belum ada antidota spesifik yang dapat
mengatasinya sehingga diperlukan strategi
untuk mencegah kejadian tersebut. Pencegahan
sederhana yang dapat dilakukan adalah
memberikan edukasi kepada pemilik maupun
perawat hewan tentang risiko pemberian minuman
atau makanan coklat atau berbahan dasar coklat
pada anjing peliharaannya. Hal tersebut mengingat
bahwa jenis coklat maupun volume yang masuk
dapat membahayakan anjing, termasuk ras kecil
yang jauh lebih peka jika dibandingkan dengan
anjing ras besar (Noble et al., 2017). Apapun
bentuk makanan dan minuman yang mengandung
coklat dan berapapun jumlah yang diberikan ke
anjing sebaiknya dihindari karena gejala klinis
kemungkinan bisa teramati atau tidak teramati
sama sekali sampai kondisi telah menjadi parah
dan berujung kematian anjing.
Kesimpulan
Produk produk makanan maupun minuman
berbasis coklat dapat menyebabkan keracunan
pada anjing. Kejadian keracunan kebanyakan
bersifat tidak sengaja akibat kalalaian atau ketidak
tahuan pemilik dalam memberikan makanan
ataupun minuman yang mereka konsumsi dan
tanpa disadari dapat membahayakan hewan
peliharaanya jika dimakan. Sifat racun coklat
tersebut disebabkan oleh alkaloid methylxanthines
seperti theobromine dan kafein yang terkandung
di dalamnya. Dosis lethal theobromine dan kafein
dalam coklat pada anjing sangatlah bervariasi
179
Yanuartono, et. al.
tergantung pada beberapa faktor seperti ukuran
anjing, kepekaan anjing terhadap coklat, konsumsi
coklat saat saluran pencernaan kosong dan setelah
makan serta jenis produk produk coklat buatan
sendiri maupun produk komersial. Karena
tidak ada antidota spesifik maka pengobatan
hanya bersifat simptomatis dan supportif untuk
memperbaiki kondisi anjing secara keseluruhan
dan pemberian makanan atau minuman yang
mengandung coklat sebaiknya dihindari.
Saran
Adanya edukasi terhadap pemikik hewan
kesayangan anjing untuk tidak memberikan coklat
atau makanan yang mengandung coklat untuk
menghindari keracunan. Jika terjadi keracunan
maka sebaiknya langsung dibawa ke dokter hewan
untuk dilakukan terapi simptomatis dan supportif
Daftar Pustaka
Ackar, D., Landic, K.V., Valek, M., Subaric,
D., Milicevic, B., Babic, J. and Nedic,
H. (2013). Cocoa polyphenols : can we
consider cocoa and chocolate as potential
functional food. Journal of Chemistry. 2013
( Article ID 289392): 1-7. http://dx.doi.
org/10.1155/2013/289392
Agudelo, C.F., Filipejova, Z. and Schanilec, P.
(2013). Chocolate ingestion-induced non-
cardiogenic pulmonary oedema in a puppy:
a case report. Veterinarni Medicina, 58 (2):
109–112. DOI:10.17221/6703-vetmed
Ahlawat, A.R., Ghodasara, S.N., Dongre, V.B. and
Gajbhiye, P.U. (2014). Chocolate Toxicity
In A Dog. Ind. J. Vet. & Anim. Sci. Res., 43
(6): 452 – 453.
Albretsen, J.C. (2004). Methylxanthines. In:
Plumlee KH (ed.): Veterinary Clinical
Toxicology. 1st ed. Mosby Inc., St. Louis,
MO. 322–326.
Aly, Z.H. 1981. Untersuchungenüber coffein und
theobromin bei schafen III. Mitteilung:
Verfütterung von Kakoschalen. Zbl. Vet.
Mrd. A 28 (9-10): 711-719. https://doi.
org/10.1111/j.1439-0442.1981.tb01242.x
Aregheore, E.M. (2002). Chemical evaluation adn
digestibilityt oc cocoa (Theobroma cacao)
180
bypbroducts fed to goats. Tropical Animal.
Health and Production. 34(4): 339-348.
DOI:10.1023/a:1015638903740
Atkinson, M. (2008). Suspected case of Angel’s
near ‘death by chocolate’ experience.
https://www.vettimes.co.uk › uploads › wp-
post-to-pdf-enhanced-cache › s.
Beasley, V. (1999). Toxicants associated with
stimulation or seizures. In: Veterinary
toxicology. Beasley V, editor. Ithaca NY:
International Veterinary information service
Berny, P., Caloni, F., Croubels, S., Sachana,
M., Vandenbroucke, V., Davanzo, F.
and Guitart, R. (2010). Animal poisoning
in Europe. Part 2: Companion animals.
Vet J.  183(3):255-9. doi: 10.1016/j.
tvjl.2009.03.034.
Black, D.J.G. and Barron, N.S. (1943).
Observations on the feeding of a cacao
waste product to poultry. The Veterinary
Record. 55: 166-167.
Bonati, M., Latini, R., Sadurska, B., Riva, E.,
Galletti, F., Borzelleca, J. F., Tarka, S.M.,
Arnaud, M.J. and Garattini, S, (1984).
Kinetics and metabolism of theobromine in
male rats. Toxicology 30(4): 327–341. doi:
10.1016/0300-483X(84)90143-4
Buchweitz, J.P., Raverty, S.A.,  Johnson, M.B. and 
Lehner, A.F. 2014. Fatal diphenhydramine
poisoning in a dog. Can Vet J. 55(11):
1089–1092. PMCID: PMC4204843
Caloni, F., Berny, P., Croubels, S., Sachana, M. and
Guitart, R. (2012). Epidemiology of animal
poisonings in Europe. 2nd ed In: Gupta RC,
editor., editor. Veterinary Toxicology: Basic
and Clinical Principles. San Diego, CA:
Elsevier Inc. pp. 88–97
Campbell, A. (2007). Grapes, raisins and
sultanas, and other foods toxic to dogs.
UK Vet Companion Animal 12(1): 77-79.
https://doi.org/10.1111/j.2044-3862.2007.
tb00121.x
Carson, T.L. (2006). Methylxanthines. In:
Peterson ME, Talcott PA (eds.) Small
Animal Toxicology. 2nd ed. Saunders, St.
Louis, MO. 845–852
 Keracunan Coklat (Theobroma Cacao) pada Anjing: Manajemen Terapi dan Pencegahan
Chin, E., Miller, K.B., Payne, M.J., Hurst, W.J.
and Stuart, D.A. (2013). Comparison of
antioxidant activity and flavanol content
of cocoa beans processed by modern
and traditional Mesoamerican methods.
Heritage Science 1(1) : 1-7. http://dx.doi.
org/10.1186/2050-7445-1-9
Cortinovis, C. and Caloni, F. (2016). Household
Food Items Toxic to Dogs and Cats.
Front. Vet. Sci. 3 (26): 1-7. doi: 10.3389/
fvets.2016.00026
Craft, E.M. and Powell, L.L. (2010). Chocolate
and caffeine. In: Osweiler GD, Hovda LR,
Brutlag AG, Lee JA, editors. Blackwell’s
Five-Minute Veterinary Consult Clinical
Companion: Small Animal Toxicology.
Ames, IA: Wiley-Blackwell p. 421–428.
Cruz, J.F.M., Leite, P.B., Soares, S.E. and da Silva
Bispo, E. (2015). Bioactive compounds
in different cocoa (Theobroma cacao, L)
cultivars during fermentation. Food Sci.
Technol, Campinas. 35(2): 279-284. DDOI:
http://dx.doi.org/10.1590/1678-457X.6541
Hanington, E.  and Bell, H. (1972). Suspected
chocolate poisoning of calves. Vet. Rec. 90
(14): 408-409. DOI:10.1136/vr.90.14.408
Decker, R.A. and Myers, G.H. (1972). Theobromine
poisoning in a dog. J Am Vet Med Assoc.  high-perfomance liquid chromatography/
161(2):198-199. PMID:5036186
Diniz, P.P., Sousa, M.G, Gerardi, D.G. and Tinucci-
Costa, M. (2003). Amphetamine poisoning
in a dog: Case report, literature review and
veterinary medical perspectives. Vet hum
toxicol. 45(6):315-317. PMID:14640484
Dolder, L.K. (2013). Methylxanthines: caffeine,
theobromine, theophylline. 3rd ed. In:
Petersen ME, Talcott PA, editors. Small
Animal Toxicology. St. Louis, MO.
Saunders p. 647–52.
Erling, P. and Mazzaferro, E.M. (2008). Left-sided
congestive heart failure in dogs: treatment
and monitoring of emergency patients.
Compendium on Continuing Education for
the Practicing Veterinarian 30: 94–104.
Eteng, M.U., Eyong, E.U., Akpanyung,
E.O., Agiang, M.A. and  Aremu, C.Y.
(1997). Recent advances in caffeine
and theobromine toxicities: a review.
Plant Foods Hum Nutr. 51(3):231–243.
DOI:10.1023/a:1007976831684
Farbman, D.B. (2000). 10 Common toxicant expo­
sures in animals, part I. Champaign, IL,
Parkland Coll Fall Conf Proc, October 7.
Farbman, D.B. (2001). Death by Chocolate ?
Methylxanthine Toxicosis. Vet Tech 146-
147
Finlay, F. (2005). Chocolate poisoning. BMJ.
331(7517): 633. PMCID: PMC1215566
Gans, J.H., Korson, R., Cater, M.R. and
Ackerly, C.C. (1980). Effects of short-
term and longterm theobromine
administration to male dogs. Toxicol Appl
Pharmacol. 53(3):481-496. https://doi.
org/10.1016/0041-008X(80)90360-9
Gwaltney-Brant, S.M. 2001. Chocolate
intoxication. Vet Med. 96:108-111.
Gwaltney-Brant S.M. 2012. Toxicology V.
Epidemiology of animal poisonings in the
United States: Elsevier: 80–87.
Hammerstone, J.F., Lazarus, S.A., Mitchell, A.E.,
Rucker, R. and Schmitz, H.H. (1999).
Identification of procyanidins in cocoa
(Theobroma cacao) and chocolate using
mass spectrometry. J. Agric. Food Chem.
47(2): 490-496. DOI:10.1021/jf980760h
Hansen, S., Trammel, H., Dunayer, E., Gwaltney,
S., Farbman, D. and Khan, S. (2003). Cocoa
bean mulch as a cause of methylxanthine
toxicosis in dogs. Journal of toxicology
Clinical toxicology.41: 720. doi:10.1081/
CLT-120024368
Hensel, M., Pashmakova, M. and Porter, B.F.
(2017). Fatal caffeine intoxication in a dog.
Braz J Vet Pathol. 10(2): 65 – 68. DOI:
10.24070/bjvp.1983-0246.v10i2p65-68
Hooser, S.B. and Beasley, V.R. (1986).
Methylxanthine poisoning (chocolate and
caffeine toxicosis). In: Current Veterinary
Therapy small animal practice IX, R.W:
Kirk (Ed.), W.B. Saunders, Philadelphia,
Pennsylvania, pp. 191-192.
181
Yanuartono, et. al.

Hornfeldt, C.S. (1987). Chocolate toxicity in dogs. Hudd, A.  (1997). Chocolate Poisoning in the
Mod Vet Pract. 68:552-554. Dog. Veterinary Nursing Journal. 12(2): 54-
Hovda, L.R. and Kingston, R.L. (1994). Cacao
bean mulch poisoning in dogs. Vet Muman
Toxicol. 36:3.

182
 Jurnal Sain Veteriner, Vol. 38. No. 2. Agustus 2020, Hal. 183-108
DOI: 10.22146/jsv.51882
ISSN 2443-1583 (Print), ISSN 2407-3733 (Online)
Tersedia online di https://jurnal.ugm.ac.id/jsv

Profil Reseptor Gonadotropine Releasing Hormone (GnRH)

dari Hipothalamus Sapi

Gonadotropine Releasing Hormone (GnRH) Receptor Profile from Cow’s Hypothalamus

Irma Dian Nurani1*, Claude Mona Airin2, Pudji Astuti2, Khrisdiana Putri3, Bambang Sutrisno4

Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta

1

2
Departemen Fisiologi, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
3
Departemen Kesehatan Masyarakat Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan,
Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
4
Departemen Patologi, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
Email : nurani_vet07@yahoo.com

Naskah diterima: 26 Nopember 2019, direvisi: 1 Juni 2020 , disetujui: 30 Juli2 Juni 2020

Abstract

Gonadotropine Releasing Hormone (GnRH) is one of the recommended hormones to overcome

ovulation problems and it can increase pregnancy rate so that it is used in government programs to increase
cattle population in Indonesia, although the results are not yet optimal. Hormone and receptor compatibility
is the main key to succesful hormone application while data on the composition of the Indonesian cow GnRH
receptors is not yet known. The purpose of this study was to obtain the composition of GnRH receptors cattle
in Indonesia and compare them to the GenBank sequence reference so that is known whether genetic diversity
occurs at GnRH receptors cattle in Indonesia. Samples in the form of 3 female cow hypothalamus stored at
-800C temperatue freezer. The methods used are mRNA isolation, cDNA synthesis, amplification of GnRH gene
using Polymerase Chain Reaction (PCR) process by Promoter F and Exon 1 R primers and then elektrophoresis
and sent for sequencing. Sequencing product were further aligned with the reference sequences of Bos Taurus
GnRHR mRNA GenBank using the MEGA X program. The results of the analysis found the presence of Single
Nucleotide Polymorphism (SNP) in the coding region of 1st cow position 38(A> T), 261(C > T), 342(C >T),
411(C >T) and 495(C > T) and 2nd cow positions 261(C >T). Changes in amino acids were also detected in 1st cow
position 13 (H> L). The presence of SNP was found to indicate genomic variation between individuals at GnRH
receptors cattle in Indonesia.

Key words: Bos Taurus; GnRH; receptors; hypothalamus

Abstrak

Gonadotropine Releasing Hormone (GnRH) adalah salah satu hormon yang direkomendasikan untuk
mengatasi masalah ovulasi serta mampu meningkatkan tingkat kebuntingan sehingga dipakai dalam program
pemerintah untuk meningkatkan populasi sapi di Indonesia, walaupun demikian hasilnya belum optimal.
Kesesuaian hormon dan reseptor adalah kunci utama keberhasilan aplikasi hormon, sedangkan data tentang
susunan reseptor GnRH sapi Indonesia belum diketahui. Tujuan penelitian ini adalah mendapatkan susunan
reseptor GnRH sapi di Indonesia dan membandingkannya dengan sekuens referensi GenBank sehingga diketahui
apakah keragaman genetik terjadi pada reseptor GnRH sapi di Indonesia. Sampel berupa 3 hipothalamus
sapi betina yang disimpan dalam suhu -800C. Metode yang digunakan adalah isolasi mRNA, sintesis cDNA,
amplifikasi gen GnRHR dengan proses Polymerase Chain Reaction (PCR) menggunakan primer Promotor F dan
Exon 1 R kemudian dilakukan elektroforesis dan dikirimkan untuk sekuensing. Produk sekuensing disejajarkan

183
Yanuartono, et. al.
berganda dengan sekuens referensi Bos Taurus GnRHR mRNA GenBank menggunakan program MEGA X.
Hasil analisis ditemukan adanya Single Nucleotide Polymorphism (SNP) pada coding region yaitu sapi 1 posisi
38(A>T), 261(C>T), 342(C>T), 411(C>T) dan 495(C>T) dan sapi 2 posisi 261(C>T) . Perubahan asam amino
juga terdeteksi pada sapi 1 posisi 13 H>L. Adanya SNP yang ditemukan mengindikasikan adanya variasi genom
antar individu pada reseptor GnRH sapi di indonesia.
Kata kunci : Bos Taurus; GnRH; hipothalamus; reseptor
Pendahuluan
Di Indonesia berbagai manipulasi hormonal
dilakukan untuk memicu terjadinya estrus,
salah satu caranya yaitu dengan penyuntikan
Gonadotrophine releasing hormone (GnRH).
Hal ini menjadi sangat penting ketika aplikasi
hormonal dijadikan sarana untuk mendukung
keberhasilan program pemerintah secara nasional
yaitu program swasembada daging sapi untuk
memenuhi kebutuhan masyarakat terhadap daging
sapi. Program ini pada awalnya diharapkan
tercapai pada tahun 2010 kemudian direvisi
menjadi menjadi tahun 2014. Karena belum
memenuhi target, pemerintah memperpanjang
program dengan harapan mampu memenuhi
kecukupan daging sapi tahun pada tahun 2026.
Kendala utama dalam pengembangan sapi adalah
masih rendahnya laju peningkatan populasi.
Hal ini terutama disebabkan kekurangan dan
ketidakseimbangan hormonal sehingga terjadi
anestrus atau berahi tenang dan estrus tidak disertai
ovulasi setelah melahirkan (Afriani et al., 2014).
Persilangan sapi dilakukan dilakukan untuk
meningkatkan produktivitas ternak Indonesia.
Program persilangan ini dilakukan melalui
sistem perkawinan inseminasi buatan (IB) dan
menghasilkan banyak sapi persilangan populer
antaralain sapi Limpo (Limousin dengan
Peranakan Ongole) dan Simpo (Simmental dengan
Peranakan Ongole) (Agung et al., 2017; Trifena
et al., 2011). Sapi hasil silangan menunjukkan
kinerja yang lebih baik dibanding sapi lokal,
sehingga banyak disenangi oleh peternak, namun
perlu diketahui bahwa setiap bangsa sapi memiliki
keunggulan dan kekurangan yang terkadang bisa
membawa risiko yang kurang menguntungkan
(de Carvalho et al., 2010). Keragaman genetik
menimbulkan variasi genom antar individu,
apabila sampai terjadi mutasi maka perubahan
genetik (gen atau kromosom) akan diturunkan
184
kepada generasi selanjutnya (Aisah et al., 2015).
Apabila mutasi terjadi pada reseptor GnRH,
maka dapat menyebabkan gangguan aksi GnRH
sehingga penggunaan GnRH menjadi tidak efektif
(Beat et al., 2012).
Polymerase Chain Reaction (PCR) adalah
teknik biologi molekuler untuk mengamplifikasi
sekuen DNA spesifik menjadi ribuan sampai
jutaan copy sekuen DNA. Teknik ini menggunakan
metode enzimatis yang diperantarai primer.
Prinsip dasar PCR adalah pelipatgandaan sekuen
DNA menggunakan enzim spesifik yang dikenal
dengan polimerase. Polimerase adalah enzim yang
mampu menggabungkan DNA cetakan tunggal,
membentuk untaian molekul DNA yang panjang.
Enzim ini membutuhkan primer serta DNA
cetakan seperti nukleotida yang terdiri dari empat
basa yaitu Adenine (A), Thymine (T), Cytosine (C)
dan Guanine (G). Reaksi amplifikasi ini dimulai
dengan melakukan denaturasi DNA cetakan yang
berantai ganda menjadi rantai tunggal, kemudian
suhu diturunkan sehingga primer akan menempel
(annealing) pada DNA cetakan yang berantai
tunggal. Setelah proses annealing, suhu dinaikkan
kembali sehingga enzim polimerase melakukan
proses polimerase rantai DNA yang baru. Rantai
DNA yang baru tersebut selanjutnya sebagai
cetakan bagi reaksi polimerase berikutnya Metode
PCR dapat digunakan untuk mengamplifikasi
DNA atau RNA. Untuk mengamplifikasi RNA,
proses PCR didahului dengan reverse transcriptase
terhadap molekul mRNA sehingga diperoleh
molekul complementary DNA (cDNA). Molekul
cDNA tersebut kemudian digunakan sebagai
cetakan dalam proses PCR. Proses PCR untuk
mengamplifikasi RNA dikenal dengan Reverse
Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-
PCR) (Hewajuli dan Dharmayanti, 2014).
Aplikasi GnRH untuk gertak birahi tidak
selalu berhasil. Sapi hasil persilangan di
Indonesia semakin banyak jumlahnya dan data
 Keracunan Coklat (Theobroma Cacao) pada Anjing: Manajemen Terapi dan Pencegahan
tentang susunan reseptor GnRH sapi Indonesia
belum tersedia. Oleh karena itu, perlu dilakukan
pemetaan terhadap susunan reseptor GnRH
sapi di Indonesia. Tujuan penelitian ini adalah
mendapatkan susunan reseptor GnRH sapi di
Indonesia dan membandingkannya dengan
referensi reseptor GnRH GenBank sehingga
diketahui apakah keragaman genetis terjadi pada
reseptor GnRH sapi di Indonesia. Adanya penelitian
ini diharapkan bermanfaat untuk menjadi sarana
evaluasi penyebab kegagalan aplikasi GnRH untuk
gertak birahi, menjadi masukan bagi pemerintah
agar mampu menentukan langkah yang tepat
sehingga terapi hormon GnRH lebih tepat sasaran
dan membuka penelitian-penelitian selanjutnya
tentang hormon GnRH sehingga memberikan
dukungan bagi kemajuan bidang endokrinologi
reproduksi.
Materi dan Metode
Semua metode di dalam penelitian ini
telah mendapat persetujuan oleh Komisi Ethical
Clearance LPPT-UGM dengan No. Sertifikat
00006/04/LPPT/II/2018.
Desain Penelitian
Alat dan Bahan. Alat yang akan digunakan
adalah gergaji, sarung tangan, timbangan,
micropipet, tube rak, freezer, microwave, vortex
mixer (Thermo Scientific), sentrifus (Mini spin
Eppendorf) , Thermal cycler (Bio Rad T 100),
mesin elektroforesis (Mupid® Exu Advance),
alat pencetak agar (plat dan sisir pencetak
sumuran), gel documentation system (Wisedoc).
Bahan yang akan digunakan dalam penelitian ini
yaitu 3 otak sapi betina yang didapat dari Rumah
Potong Hewan, kertas alumunium foil, filter
tips 10µL, 100µL, 200µL , 1000µL (Tarsons),
microcentrifuge tube (0,2 dan 1,5 mL), 100µL PCR
tube, 1,5 ml Rnase Dnase free-tube, Chloroform,
Ethanol 70%, RNAeasy Lipid Tissue Mini Kit
(Qiagen), Buffer RLT (Qiagen) , Go Taq® Flexi
DNA polimerase (Promega), ExcelRTTM Reverse
Transcription Kit II (Smobio), RNAse DNAse
free water, UltraPureTM Agarose Low Melting
Point Agarose (Thermo Fishers), ExactMark
100bp DNA ladder (100 – 1.500 bp) (1st base) ,
FloroSafe DNA stain (1st base), Platinum Taq
DNA Polimerase (Thermo Fisher), TrackIT DNA
Loading Buffer (Thermo Fisher) UltraPureTM TBE
10X (Thermo Fisher).
Koleksi Sampel. Sampel berupa tiga otak
sapi betina tidak produktif yang didapatkan dari
Rumah Potong Hewan Giwangan Kota Yogyakarta
dan telah dilakukan perizinan terlebih dahulu dari
Dinas Pertanian dan Pangan Kota Yogyakarta
untuk mendapatkan akses sampling. Sampel
disimpan dalam freezer bersuhu -800C sampai
dilakukan pengujian berikutnya.
Isolasi mRNA. mRNA total diekstraksi dari
hipothalamus yang telah di thawing sebelumnya
sebanyak 25 mg. Prosedur yang digunakan untuk
isolasi mRNA dilakukan berdasarkan petunjuk
RNeasy® Lipid Tissue Qiagen . Total mRNA
yang telah dikoleksi akan diubah menjadi cDNA
agar dapat digunakan sebagai cetakan proses
amplifikasi dengan metode PCR.
Sintesis cDNA. Sintesis cDNA dilakukan
menggunakan reagen ExcelRTTM Reverse
Transcription Kit II (Smobio). cDNA hasil sintesis
disimpan pada suhu -200C.
Amplifikasi cDNA dengan teknik PCR.
Hasil isolasi cDNA digunakan sebagai cetakan
untuk proses amplifikasi menggunakan tehnik
PCR. Pereaksi PCR menggunakan Go Taq® Flexi
DNA polimerase (Promega) dengan komposisi
total 50µl untuk masing masing sampel yang
terdiri dari Green Buffer 10µl, MgCL2 6µl, dNTPs
8µl, DEPC 17,75µl, primer forward 2µl, primer
reverse 2µl, Go Taq polimerase 0,25µl, dan
template cDNA 4µl sehingga volume satu reaksi
adalah 50µl. Kondisi PCR untuk amplifikasi
fragmen DNA adalah predenaturasi pada suhu
940C selama 1 menit, denaturasi pada suhu
940C selama 30 detik, annealing atau proses
penempelan primer pada suhu 610C selama 60
detik, elongation atau proses pemanjangan pada
suhu 720C selama 60 detik dan post elongation
yaitu fase untuk memastikan pemanjangan
sempurna pada suhu 720C selama 10 menit.
Reaksi denaturasi, annealing, dan elongation
dalam mesin PCR dilakukan sebanyak 30 kali.
Produk PCR dideteksi dengan cara dimigrasikan
pada gel agarosa 1,5% dengan menggunakan 1X
TBE dalam mesin elektroforesis. Pengamatan
dilakukan dengan bantuan sinar UV setelah gel
diwarnai dengan florosafe (1st base). Penanda
185
Yanuartono, et. al.
DNA dengan ukuran 100 pb digunakan sebagai
petunjuk berat molekul.
Sekuensing DNA. Sekuensing produk PCR
dilakukan untuk menentukan urutan nukleotida
dikirim ke PT. Indolab Utama. Sampel dan primer
yang disiapkan untuk dikirim masing masing 20µl
dengan konsentrasi sampel DNA minimal 20ng/µl
dan konsentrasi primer minimal 10 pmol. Setelah
dikirim, selanjutnya analisis dilakukan oleh PT
Macrogen Korea dengan metode Sanger
Gambar 1 (metode
terminasi rantai). Kondisi untuk reaksi sekuensing
yaitu predenaturasi predenaturasi pada suhu 940C
selama 1 menit, denaturasi pada suhu 940C selama
30 detik, annealing atau proses penempelan
primer pada suhu 610C selama 60 detik, elongation
atau proses pemanjangan pada suhu 720C selama
60 detik dan post elongation yaitu fase untuk
memastikan pemanjangan sempurna pada
suhu 720C selama 10 menit. Reaksi denaturasi,
annealing, dan elongation dilakukan sebanyak 30
kali.
Analisis Data. Hasil sequensing dianalisa
menggunakan Software MEGA X. Analisis
mutasi reseptor GnRH dilakukan berdasarkan
perubahan sekuens nukleotida dan asam amino
sampel dibandingkan dengan sequense referensi
yang tersedia di GenBank.
Hasil dan Pembahasan
Amplifikasi Gen Bovine GnRHR dengan
Teknik PCR
Amplifikasi gen Bovine GnRHR
menggunakan primer Promotor F dan Exon1.
Primer yang digunakan disajikan dalam Tabel 1.
Gen Bovine GnRHR berhasil diamplifikasi
dengan teknik PCR menggunakan primer
Promotor F dan Exon 1 R. Produk yang dihasilkan
dari visualisasi elektroforesis menggunakan gel
agarose disajikan pada Gambar 1.
Tabel 1. Primer yang digunakan untuk amplifikasi gen bovine GnRHR mencakup wilayah gen penyandi
Posisi pada sekuen
Primer Sekuen Primer
GnRHR-Prom-F 5´-ACCAggCCATCTgCTgAgA-3´
GnRHR-E1-R 5´-CTgTggTCCAgCAAAgATgC-3´
* Sekuen referensi : Bos taurus chromosome 6 genomic contig (NW_001495209.1/ Bt6_WGA699_4).
186
M S1 S2 S3
1000 bp
802 bp
Gambar 1. Elektroforesis hasil amplifikasi gen Bovine GnRHR
menggunakan primer Promotor F dan Exon1 R.
Marker DNA ladder (M), Sapi 1 (S1), Sapi 2 (S2),
Sapi 3 (S3).
Pita yang tampak dari visualisasi elektroforesis
menunjukkan ukuran produk yang dihasilkan dari
proses amplifikasi PCR. Gambar 1 menunjukkan
bahwa Sapi 1 (S1), Sapi 2 (S2), dan Sapi 3 (S3)
menghasilkan panjang produk berukuran kurang
lebih 802 basepair (bp). Hal ini menunjukkan
bahwa panjang produk yang dihasilkan telah
sesuai dengan Liron et al (2011).
Analisis Sekuen Nukleotida dengan Program
Mega X
Setelah dilakukan proses sekuensing, dan
dianalisis dengan program Mega X maka hasil
yang diperoleh disajikan dalam Tabel 2 dan Tabel
3.
Data Tabel 2 menunjukkan bahwa pada
sapi pertama mengalami 5 perubahan nukleotida
yaitu 38(A>T), 261(C>T), 342 (C>T), 411 (C>T)
dan 495 (C>T). Pada sapi 2 hanya mengalami
perubahan nukleotida pada posisi 261 (C>T),
sedangkan sapi 3 tidak mengalami perubahan
nukleotida. Perubahan yang ditemukan menunutut
dilakukannya analisis lebih lanjut untuk
mengidentifikasi adanya perubahan asam amino.
Data perubahan asam amino dapat dilihat dari
Tabel 3.
802 bp protein dari GnRHr
Estimasi panjang
Wilayah Gen
referensi produk
884723 to 884705 Promoter, 5´UTR
802 bp
883922 to 883941 and exon 1

Tabel 2. Lokasi perubahan nukleotida sapi sampel dengan sekuens referensi GenBank. Nukleotida yang diberi
penanda warna kuning merupakan nukleotida yang berbeda dengan referensi
Sampel
Referensi (Bos taurus GNRHR mRNA NM 177514.2:80-1066)
Sapi 1
Sapi 2
Sapi 3
Keterangan : *Bos taurus GNRHR mRNA NM 177514.2:80-1066
Tabel 3. Lokasi perubahan asam amino sapi sampel dengan
sekuens referensi GenBank. Sapi 1 menunjukkan asam
amino
yang tidak homolog dengan referensi (highlight kuning).
Urutan sekuen asam amino
Referensi (Bos taurus GNRHR mRNA NM
177514.2:80-1066)
Sapi 1
Sapi 2
Sapi 3
Data Tabel 3 menunjukkan adanya perubahan
asam amino ditemukan pada sapi 1 dengan asam
amino urutan ke 13 yaitu asam amino histidin
menjadi asam amino leusin. Pola perubahan
nukleotida pada sapi 1 dan sapi 2 dibandingkan
dengan sekuens referensi GenBank Bos taurus
GnRHR mRNA menunjukkan adanya Single
Nucleotide Polymorphism (SNP) di dalam
susunan genetik reseptor GnRH. Single Nucleotide
Polymorphism (SNP) merupakan perubahan
susunan basa nukleotida tunggal pada lokus
genetik tertentu dari urutan DNA individu yang
menyebabkan adanya variasi genetik di antara
anggota spesies (Lonneti et al, 2016). Hal ini
dimungkinkan karena adanya transisi, transversi,
delesi, atau insersi. Transisi merupakan perubahan
basa purin yang digantikan oleh basa purin, dan
basa pirimidin digantikan oleh basa pirimidin,
sedangkan transversi merupakan perubahan basa
purin digantikan basa pirimidin dan basa pirimidin
digantikan oleh basa purin (Putri dan Syubbanul,
2018). Pada sapi 1 posisi 38 (A>T) mengalami
transversi karena basa Purin (A) digantikan oleh
basa Pirimidin (T) sedangkan posisi 261 (C>T),
342 (C>T), 411 (C>T) dan 495 (C>T) mengalami
transisi karena basa Pirimidin (C) digantikan oleh
basa Pirimidin (T). Begitu pula dengan sapi 2
posisi 261 (C>T) mengalami transisi.
Keracunan Coklat (Theobroma Cacao) pada Anjing: Manajemen Terapi dan Pencegahan
Urutan sekuen nukleotida*
38 261 342 411 495
A C C C C
T T T T T
A T C C C
A C C C C
Hasil dari penjajaran berganda tidak
ditemukan variasi gen pada wilayah upstream,
artinya seluruh variasi nukleotida yang ditemukan
terdapat pada wilayah exon 1. Menurut Lonetti
13 et al (2016), SNP dapat ditemukan baik pada
H
coding region maupun non coding region sekuens
DNA, apabila berada pada non coding region
L
maka mayoritas SNP tidak memiliki konsekuensi
H
biologis sedangkan hanya sebagian kecil SNP
H yang terletak pada coding region akan memiliki
dampak fungsional yang signifikan. Putri dan
Syubbanul (2018) juga menambahkan bahwa SNP
yang terletak pada coding region memiliki peluang
untuk mempengaruhi fungsi gen karena dapat
mengubah urutan asam amino dan mempengaruhi
struktur protein sehingga menyebabkan gangguan
monogenik resesif maupun dominan.
Melalui data analasis perubahan protein,
walaupun adanya SNP yang ditemukan pada
coding region mampu mengubah 1 macam jenis
protein, namun belum dapat disimpulkan apakah
perubahan asam amino tersebut merupakan mutasi
karena masih harus dilakukan penelitian lebih
lanjut. Hal ini didukung oleh Sadewa (2015) yang
menyatakan bahwa adanya SNP berbeda dengan
variasi genetik akibat mutasi titik (point mutation)
yang bersifat patologis, karena variasi SNP dapat
pula ditemukan pada individu normal.
Kesimpulan
Setelah membandingkan susunan
nukleotida reseptor GnRH sapi dengan sekuens
referensi GenBank Bos Taurus GNRHR
mRNA diidentifikasi adanya Single Nukleotide
Polymorphism (SNPs) pada sapi 1 posisi 38(A>T),
261(C>T), 342(C>T), 411(C>T) dan 495(C>T)
serta sapi 2 posisi 261(C>T). Perubahan asam
amino ditemukan pada sapi 1 urutan ke 13(H>L).
187
Yanuartono, et. al.
Adanya Single Nukleotide Polymorphism (SNP)
yang ditemukan merupakan petunjuk keragaman
genetik yang terjadi pada susunan reseptor GnRH
sapi di Indonesia
Ucapan Terimakasih
Ucapan terimakasih disampaikan kepada
Drs. Sugeng Darmanto selaku Kepala Dinas
Pertanian dan Pangan Kota Yogyakarta yang
telah memberikan izin dan akses pengambilan
sampel di RPH Giwangan Kota Yogyakarta dan
drh. Herjuno Ari yang telah membantu selama
penelitan berlangsung.
Daftar Pustaka
Afriani, T., Jaswandi., Defrinaldi., dan Y.E.Satria.
(2014). Pengaruh Waktu Pemberian
Gonadotropin Releasing Hormone (GnRH)
terhadap Jumlah Korpus Luteum dan
Kecepatan Timbulnya Berahi pada Sapi
Pesisir. Jurnal Peternakan Indonesia1. 6(3)
: 2-3.
Agung, P.P., Saiful, A., Widya, P.B.P., dan
Syahruddin, S. (2017). Keragaman gen
Growth Hormone (GH) pada beberapa
rumpun sapi lokal Indonesia. Pros Sem Nas
Masy Biodin Indon. 3(3) : 304-308.
Aisah, I., Edi, K., Ema, C., dan Nurul, U. (2015).
Representasi Mutasi Kode Genetik Standar
Berdasarkan Basa Nukleotida. Jurnal
Matematika Integratif. (11)1: 25 – 34.
Beate, K., Neulen, J., de Roux, N., dan
Karges, W. (2012). Genetics of Isolated
Hypogonadotropic Hypogonadism: Role
of GnRH Receptor and Other Genes.
International Journal of Endocrinology.
(10): 1-3.
De, Carvalho., Mateus, da C., Soeparno., dan
Nono, N. (2010). Pertumbuhan dan
Produksi Karkas Sapi Peranakan Ongole
dan Simental Peranakan Ongole Jantan
yang Dipelihara secara Feedlot. Buletin
Peternakan. 34(1): 38-46
188
Hewajuli dan Dharmayanti. (2014).
Perkembangan Teknologi Reverse
Transcriptase-Polymerase Chain Reaction
dalam Mengidentifikasi Genom Avian
Influenza dan Newcastle Diseases. Bogor.
Balai Besar Penelitian Veteriner : 16-17.
Liron, J.P., A. Prando., M.V. Ripoli., A. Rogberg-
Munoz., D.M. Posik., A. Baldo., P. Peral
Gracia., dan G. Giovambattista. (2011).
Characterization and validation of bovine
Gonadotrophin Releasing Hormone receptor
(GnRHr) Polymorphisms. Argentina :
Elsevier. 1-5.
Lonneti, Annalisa., Maria Chiara Fontana.,
Giovanni Martinelli., dan Ilaria Iacobucci.
(2016). Single Nucleotide Polymorphisms
as Genomic Markers for High-Throughput
Pharmacogenomic Studies. In Microarray
Technology . New York : Humana Press.
143.
Putri, Alfin., dan Syubbanul Wathon. (2018).
Aplikasi Single Nucleotide Polymorphism
(SNP) dalam Studi Farmakogenomik untuk
Pengembangan Obat. Bio Trends 9(2) : 69-
70.
Sadewa, AH. (2015). Peran Single Nucleotide
Polymorphisms (Snps) Pada Metabolisme
Mikronutrien Dan Enzim Antioksi
dan Sebagai Predisposisi Terhadap
Kanker,Prosiding Anual Scientific Meetng,
1-11.
Trifena., I Gede, S.B., dan Tety, H. (2011).
Perubahan Fenotip Sapi Peranakan Ongole,
Simpo, dan Limpo pada Keturunan Pertama
dan Keturunan Kedua (Backcross). Buletin
Peternakan. 35(1): 11-16.