DETEKSI ANTIBODI TERHADAP VIRUS AVIAN

INFLUENZA PADA AYAM PEDAGING (Gallus domesticus

Linnaeus, 1758) DI PETERNAKAN SMS BEKASI
DENGAN UJI HA-HI

DENISA MAHARANI PERMATA PUTRI

PROGRAM STUDI BIOLOGI

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH

JAKARTA

2023 M / 1444 H
v
 ABSTRAK

Denisa Maharani Permata Putri. Deteksi antibodi terhadap virus Avian

Influenza pada Ayam Pedaging (Gallus domesticus Linnaeus, 1758) di
Peternakan SMS Bekasi dengan Uji HA-HI. Skripsi. Program Studi Biologi.
Fakultas Sains dan Teknologi. Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah
Jakarta. 2023. Dibimbing oleh Narti Fitriana dan Fahri Fahrudin.

Salah satu kendala pada produksi ayam pedaging adalah kematian akibat virus
Avian Influenza (AI) yang semakin meningkat. Langkah antisipasi yang dapat
dilakukan seperti pemberian vaksin. Peternakan melakukan vaksinasi semenjak
umur ayam pedaging menginjak 1 hari, namun kasus AI tetap terjadi di peternakan
dengan prevalensi ±20% dari total populasi yang menyebabkan kerugian. Penelitian
ini bertujuan untuk mendeteksi antibodi setelah vaksin yang terbentuk pada ayam
pedaging umur 14, 18 dan 21 hari. Penelitian telah dilakukan menggunakan metode
survei dengan mengamati munculnya antibodi pada sampel darah yang diambil dari
15 ekor ayam di Peternakan SMS Bekasi. Uji HA (Haemagglutination Assay)
merupakan uji pendahuluan, Hasil analisis uji HA diperoleh hasil titik akhir titrasi
yaitu 27, lalu dilakukan perhitungan untuk uji lanjutan yaitu Uji 4HA dengan dosis
antigen sebanyak 160 𝜇 l/5mL PBS. Uji HI (Haemagglutination Inhibition)
diperoleh hasil bahwa terdapat 91,1% sampel nonprotektif dan 8,8% sampel negatif
terhadap antigen AI H5N1. Berdasarkan penelitian ini dapat disimpulkan bahwa
hasil uji HI kurang dari standar, tidak terdapat antibodi spesifik terhadap virus AI
H5N1 dalam sampel darah ayam pada umur 14, 18, dan 21 hari. Proses vaksinasi
AI sebaiknya dilakukan pada saat rentang umur ayam 5-7 hari dan dilakukan
vaksinasi kedua (booster) pada rentang umur ayam 14 sampai 21 hari untuk
mencegah adanya paparan virus AI.

Kata Kunci: Antibodi; Antigen; Avian Influenza; HA-HI; Pedaging

vi
 ABSTRACT

Denisa Maharani Permata Putri. Detection of antibodies against Avian

Influenza virus in Pedaging Chicken (Gallus domesticus Linnaeus, 1758) at
SMS Livestock Bekasi with HA-HI Test. Undergraduate Thesis. Departement
of Biology. Faculty of Science and Technology. Syarif Hidayatullah State
Islamic University Jakarta. 2023. Advised by Narti Fitriana and Fahri
Fahrudin.

One of the obstacles in pedaging production is the increasing mortality due to Avian
Influenza (AI) virus. Anticipatory steps that can be taken such as administering
vaccines. Farms carry out vaccinations since pedaging chickens are 1 day old, but
AI cases still occur in farms with a prevalence of ±20% of the total population
which causes losses. This study aims to detect post-vaccine antibodies formed in
pedagings aged 14, 18 and 21 days. The study was carried out using a survey
method by observing the appearance of antibodies in blood samples taken from 15
chickens at SMS Bekasi Farm. The HA test (Haemagglutination Assay) is a
preliminary test. The results of the analysis of the HA test obtained the results of
the titration endpoint of 27, then calculations were carried out for the follow-up test,
namely the 4HA test with an antigen dose of 160 μl/5mL PBS. The HI
(Haemagglutination Inhibition) test showed that 91.1% of the samples were non-
protective and 8.8% of the samples were negative for AI H5N1 antigen. Based on
this study, it can be concluded that the HI test results were below than standard,
there were no specific antibodies against AI H5N1 virus in blood samples of
chickens at 14, 18, and 21 days of age. The AI vaccination process should be carried
out when the chickens are 5-7 days old and a second vaccination (booster) is carried
out in the chickens between 14 and 21 days old to restrain exposure to the AI virus.
Keywords: Antibody; Antigen; Avian Influenza; Broiler; HA-HI

vii
 KATA PENGANTAR

Bismillahirrahmanirrahim
Assalamu’alaikum warrahmatullah wabarakaatuh
Segala puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT dan Rasulullah
SAW yang telah melimpahkan rahmat dan hidayah-Nya kepada kita semua
sehingga Skripsi dengan judul “Deteksi Antibodi terhadap Virus Avian
Influenza pada Ayam Pedaging (Gallus domesticus Linnaeus, 1758) di
Peternakan SMS Bekasi dengan Uji HA-HI” dapat diselesaikan. Pada
kesempatan ini penulis ingin menyampaikan terima kasih kepada semua pihak yang
telah membantu dalam menyelesaikan Skripsi ini, antara lain kepada:
1. Ir. Nashrul Hakiem, S. Si., M. T., Ph.D. Selaku Dekan Fakultas Sains dan
Teknologi, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta beserta jajarannya.
2. Dr. Priyanti M. Si. Selaku Ketua Program Studi Biologi, Fakultas Sains dan
Teknologi, Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.
3. Narti Fitriana, M. Si. Selaku Sekretaris Program Studi Biologi, Fakultas Sains
dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta dan selaku
Dosen Pembimbing I.
4. Fahri Fahrudin, M. Si. Selaku Dosen Pembimbing II.
5. Indri Garnasih, M. Si. dan drh. Novia Herwandi, MPH Selaku Dosen Penguji I
dan dosen Penguji II pada Seminar Proposal dan Seminar Hasil.
6. Dr. Dasumiati, M. Si. dan Dr. Agus Salim, S. Ag., M. Si. Selaku Dosen Penguji
I dan II pada Sidang Skripsi Munaqosah.
7. Ernawati, S.P., Annisa Ambaryati Mahani, S. Pi., Luthfia Masykuroh, S. Si., dan
pihak peternakan yang telah memberikan izin dan kesempatan melakukan
penelitian di Pusat Pelayanan Kesehatan Hewan dan Peternakan DKI Jakarta dan
Peternakan SMS Bekasi.

viii
8. Papah, mamah, keluarga dan teman-teman yang selalu memberikan dukungan
dan semangat maupun do’a untuk penulis.
Kepada semua pihak yang telah membantu penulis baik secara moral maupun
materil, penulis mengucapkan terima kasih dan semoga Allah membalas semua
amal baik yang telah diberikan. Penulis mengharapkan kritik dan saran yang
membangun demi kesempurnaan skripsi ini. Semoga skripsi ini dapat berguna dan
bermanfaat bagi para pembaca.

Wassalamu’alaikum warahmatullah wabarakaatuh

Jakarta, Januari 2023

Penulis

ix
 DAFTAR ISI
Halaman
ABSTRAK ........................................................................................................... VI
ABSTRACT ....................................................................................................... VII
KATA PENGANTAR ...................................................................................... VIII
DAFTAR ISI ......................................................................................................... X
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... XII
DAFTAR TABEL............................................................................................. XIII
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... XIV

BAB I PENDAHULUAN ...................................................................................... 1

1.1. Latar Belakang ............................................................................................ 1
1.2. Rumusan Masalah ....................................................................................... 3
1.3. Tujuan ......................................................................................................... 3
1.4. Manfaat ....................................................................................................... 4
1.5. Kerangka Berpikir ....................................................................................... 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ........................................................................... 5

2.1. Ayam Pedaging atau Pedaging.................................................................... 5
2.2. Avian Influenza ........................................................................................... 6
2.3. Uji Haemagglutination Assay (HA) dan Haemagglutination Inhibition
(HI) ...................................................................................................... 11

BAB III METODE PENELITIAN .................................................................... 13

3.1. Waktu dan Tempat .................................................................................... 13
3.2. Alat dan Bahan .......................................................................................... 13
3.3. Rancangan Penelitian ................................................................................ 13
3.4. Teknik Pengambilan Sampel..................................................................... 14
3.5. Prosedur Kerja ........................................................................................... 14
3.6. Parameter Pengamatan .............................................................................. 17
3.7. Analisis Data ............................................................................................. 17

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN............................................................. 19

4.1. Hasil titer antibodi Avian Influenza pada ayam pedaging ........................ 19
4.2. Hubungan antara umur ayam dan keberhasilan vaksin ............................. 22

BAB V PENUTUP ............................................................................................... 26

5.1. Kesimpulan ............................................................................................... 26
5.2. Saran .......................................................................................................... 26

x
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 27

LAMPIRAN ......................................................................................................... 32

xi
 DAFTAR GAMBAR

Halaman
Gambar 1. Kerangka berpikir penelitian…...……………………….…………...4
Gambar 2. Ilustrasi hasil Pengujian HA ……………………………..…….…...15
Gambar 3. Ilustrasi hasil Pengujian 4HA………………....…………..………..16
Gambar 4. Hasil Pengujian HA………………...………....…………..………..19
Gambar 5. Hasil Pengujian 4HA………………....…………..………….……..20

xii
 DAFTAR TABEL

Halaman
Tabel 1. Parameter hasil nilai titer antibodi ayam pedaging ………...…….....….. 17
Tabel 2. Hasil Uji HA pada ayam pedaging umur 14, 18 dan 21 hari …………... 19
Tabel 3. Perhitungan 4HA pada ayam pedaging umur 14, 18 dan 21 hari …....… 20
Tabel 4. Hasil Uji HI pada ayam pedaging umur 14, 18 dan 21 hari .…….…...... 20
Tabel 5. Hubungan antar umur ayam pedaging 14, 18 dan 21 hari ……….……. 22

xiii
 DAFTAR LAMPIRAN

Halaman
Lampiran 1. Hasil Laboratorium umur 14 hari…………………………………..32
Lampiran 2. Hasil Laboratorium umur 18 hari………………………………..…33
Lampiran 3. Hasil Laboratorium umur 21 hari…………………..……………....34
Lampiran 4. Alat dan Bahan...…………………………………………………...35
Lampiran 5. Perhitungan 4HA…………………………………………………...35

xiv
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Ayam pedaging atau ayam ras pedaging merupakan jenis ayam ras yang unggul
dari hasil persilangan, dan memiliki daya produktivitas tinggi dalam memproduksi
daging. Ayam pedaging memiliki peningkatan permintaan seiring dengan
meningkatnya jumlah penduduk di Indonesia yang menyebabkan kebutuhan protein
juga meningkat. Peluang yang dimiliki ayam pedaging sangat tinggi untuk
dikembangkan, karena proses produksi ayam pedaging ini memiliki siklus yang
cukup singkat, pada hari ke-40 ayam pedaging sudah dapat dipanen (Sutarto, 2019).
Berbagai cara telah diberikan Allah SWT agar manusia dimudahkan dalam segala
hal. Allah SWT telah menurunkan Al-Qur’an kepada Nabi Muhammad SAW, Surat
an-Nahl ayat 5 sebagai pengingat kepada umat manusia dalam Q.S an-Nahl ayat 5.

“Dan hewan ternak telah diciptakan-Nya untuk kamu, padanya ada (bulu) yang
menghangatkan dan berbagai manfaat, dan sebagiannya kamu makan.” (Q.S an-
Nahl/16:5).
Ayat di atas menjelaskan bahwa binatang ternak dapat dimanfaatkan dengan
berbagai cara seperti bulu dan kulitnya dapat dibuat pakaian sebagai penghangat
tubuh, dagingnya digunakan sebagai konsumsi, air susunya dan dapat dijadikan
sebagai kendaraan. Hal ini menunjukkan bahwa hewan ternak memiliki manfaat
yang sangat banyak dan sebaiknya kita sebagai manusia memanfaatkannya dengan
bijaksana agar tidak sia-sia yaitu dengan merawat dan menggunakannya dengan
cermat. Ayam pedaging memiliki kekurangan yang dapat menghambat proses
produksi seperti mudah terserang penyakit, bahan pakan yang mengalami
peningkatan harga dan obat-obatan yang tidak murah, perlu ditemukan cara untuk
meminimalisir terjadinya penyakit seperti infeksi virus.
Virus AI yang menyerang ayam merupakan kelompok orthomyxovirus tipe A
H5N1 (Fadilah et al, 2013). Ayam pedaging yang terkena virus AI H5N1 memiliki
ciri-ciri yang bervariasi, seperti sakit ringan, bulu-bulu yang kusut, menurunnya

1
 2

produksi telur dan bahkan pada kasus dengan tingkat keganasan yang tinggi dapat
terjadi kematian pada hari pertama gejala mulai muncul (Fadillah, 2013). Penelitian
terdahulu mengenai respon imun ayam petelur pasca vaksinasi ND-AI sudah
mampu memicu titer antibodi protektif, terjadi peningkatan titer antibodi AI ayam
pasca vaksinasi kedua dari minggu ke-0 sampai minggu ke-3 (Bhakty, et al., 2018).
Namun, beberapa ayam membutuhkan vaksinasi ulang atau booster untuk
merangsang respon imun protektif, perbedaan tingkat respons imun dapat
disebabkan oleh beberapa faktor diantaranya adalah perbedaan respons individu,
perbedaan kemampuan antigenik dari antigen vaksin, dan komposisi adjuvant
(Kencana, et al., 2016).
Penelitian dilakukan di Peternakan Satwa Mandiri Sejahtera (SMS) Bekasi,
Bekasi merupakan salah satu wilayah pemasok komoditas ayam pedaging untuk
wilayah DKI hal ini berdasarkan Peraturan Daerah (PERDA) No. 4 Tahun 2007
yang berisi tentang pengendalian, pemeliharaan, dan peredaran unggas, sehingga
Pemerintah melarang Provinsi DKI melakukan pembudidayaan ayam pedaging.
Pada tahun 2016 Provinsi Jawa Barat mencapai kasus tertinggi yaitu sebanyak 72
kasus dengan jumlah unggas yang tertular sebanyak ± 22.043 ekor (Yuyun et al,
2018). Peternakan SMS merupakan peternakan yang berisi ayam pedaging dengan
tiga perbedaan umur yaitu, 0 hari yang mana merupakan ayam yang baru datang
dari produsen, 14 hari, 18 hari, dan 21 hari. Peternakan SMS memiliki kandang
yang tersusun atas 2 kandang, kandang atas dan bawah untuk memisahkan ayam
dengan perbedaan umur ayam seperti 7 hari dan 10 hari. Total populasi perflok
yaitu 150 Ekor. Kandang difasilitasi oleh kipas yang menyedot angin dari dalam
kandang keluar kandang untuk menjaga kelembapan udara, kelembaban udara dan
suhu di dalam kandang diperiksa setiap 2 jam dengan menggunakan termometer,
proses produksi dimulai saat ayam berumur mulai dari 21 hari dan apabila bobot
sudah mencukupi. Sebelum dipanen, penyortiran ayam dilakukan untuk dipilih
kembali ayam dengan kondisi yang sehat.
Peternakan SMS melakukan vaksinasi sejak umur ayam 0 hari. Vaksinasi
diaplikasikan melalui air minum atau tetes mata dengan 1 dosis per ekor ayam,
namun peternakan mengalami kerugian besar yang disebabkan oleh Virus Avian
 3

Influenza dan Newcastle disease. Sekitar 2 tahun yang lalu peternakan ini
mengalami kasus Avian Influenza dengan prevalensi ±20% dari total populasi, pada
bulan mei 2020 peternakan juga mengalami kasus Newcastle disease yang mana
terdapat 2.840 ekor kematian ayam dari total 20.000 populasi. Kasus ini
menyebabkan kerugian sebesar Rp. 180 Juta. Hal ini berbahaya bagi konsumen
ayam pedaging yang beresiko terjadinya penularan virus Avian Influenza.
Peternakan SMS perlu melakukan antisipasi agar hal ini tidak terjadi lagi yaitu
dengan memberikan vaksin dosis 2 pada rentang umur ayam 14-18 hari karena
umur ayam yang terinfeksi virus sebagian besar terjadi pada kelompok umur
tersebut. Penelitian yang dilakukan oleh Subedi menyatakan bahwa ayam pedaging
lebih rentan terkena virus pada kelompok umur 8-14 hari, pada kelompok umur
tersebut, antibodi yang ada didalam tubuh ayam telah menurun (Subedi et al, 2020).

Hal ini menjadi dasar untuk dilakukannya penelitian mengenai deteksi

keberadaan antibodi Avian Influenza. Penelitian ini bertujuan untuk mendeteksi

keberadaan antibodi Avian Influenza pada ayam pedaging dengan uji HA-HI

berdasarkan 3 kategori umur ayam yaitu 14, 18, dan 21 hari. Uji HA

(Haemagglutination Assay) dan HI (Haemagglutination Inhibition) adalah

pengujian yang bertujuan untuk mendeteksi antibodi terhadap virus AI di dalam

tubuh ayam.

1.2. Rumusan Masalah

Rumusan masalah pada penelitian ini adalah umur berapakah antibodi Avian

Influenza pada ayam pedaging terdeteksi dengan uji HA-HI berdasarkan kategori

umur 14, 18 dan 21 hari?

1.3.Tujuan

Tujuan penelitian ini adalah mendeteksi keberadaan antibodi Avian Influenza

pada ayam pedaging dengan uji HA-HI berdasarkan 3 kategori umur ayam yaitu 14,

18, dan 21 hari.

 4

1.4.Manfaat

Hasil dari penelitian ini diharapkan dapat dijadikan sebagai bahan

pertimbangan untuk pihak pengelola peternakan dalam perbaikan penanganan

kasus Avian Influenza terhadap ayam, dan juga sebagai informasi ilmiah yang dapat

digunakan sebagai acuan dalam pengembangan peternakan bagi ayam agar

terhindar dari kasus Avian Influenza.

1.5. Kerangka Berpikir

Kerangka berpikir yang menjadi landasan dilakukannya penelitian ini adalah

sebagai berikut (Gambar 1).

Gambar 1. Kerangka berpikir penelitian deteksi antibodi terhadap virus Avian

Influenza bagi ayam pedaging di Peternakan SMS
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Ayam Pedaging

Ayam pedaging merupakan ayam yang berasal dari hutan liar yang dijinakkan

sekitar 8000 tahun yang lalu (Dahlan & Hudi, 2011). Ayam pedaging adalah jenis

ayam yang dipelihara untuk dimanfaatkan dagingnya (Tamalluddin, 2014). Ayam

pedaging (Gallus gallus) termasuk ke dalam kingdom Animalia, filum Chordata,

kelas Aves, ordo Galliformes, famili Phasianidae, genus Gallus, spesies G. gallus

dan subspesies G. g. domesticus (Irawan et al., 2021). Peternakan ayam pedaging

mulai berkembang sejak tahun 1960 saat mulainya program Bimas Ayam, yang

mana merupakan program pengembangan ayam ras secara besar-besaran

(Tamalluddin, 2014). Tujuan pokok dari beternak ayam pedaging adalah

menghasilkan daging dengan waktu yang singkat (Fadillah et al., 2013).

Beternak ayam pedaging memiliki resiko yang cukup besar karena ayam

pedaging rawan terkena penyakit baik berasal dari luar maupun dalam kandang.

Penyakit yang mudah muncul dapat disebabkan oleh kotoran yang menumpuk pada

pupuk, hal ini dapat menginfeksi ayam besar yang mana sangat merugikan bagi

peternak (Tamalludin, 2012). Bibit ayam yang masih berumur satu hari biasa

disebut DOC atau Day Old Chick. Bibit ayam yang dikeluarkan oleh perusahaan

pembibit harus sudah memenuhi standar SNI. Bibit yang baik memiliki berbagai

kriteria yaitu, memiliki kondisi fisik yang sehat, kaki normal tanpa kecacatan dan

dapat berdiri tegak, paruh normal, tidak dehidrasi, tubuh gemuk, bulu bersih dan

mengkilap, tidak memiliki kelainan bentuk dan bersih di seluruh bagian hidung,

pusar, dan anus. Syarat terakhir yang dimiliki DOC yaitu menetas pada saat bobot

mencapai 35 gram/ekor (Umiarti, 2020). Ayam pedaging merupakan pilihan ternak

5
 6

yang paling tepat dalam memenuhi permintaan dan kebutuhan masyarakat karena

ayam pedaging merupakan ayam yang diproduksi secara cepat. Ayam pedaging

memiliki berbagai kelebihan yang menguntungkan yaitu dapat memproduksi

daging secara cepat, laju pertumbuhan yang sangat cepat, menghasilkan daging

berserat, bobot badan yang mudah naik, dan kulit yang licin (Setiadi et al, 2013).

Pemilihan kendang dan peralatannya sangat mempengaruhi kesehatan ayam

pedaging, ayam pedaging yang diproduksi pada lingkungan yang kurang bersih

akan menurunkan kualitas dari ayam tersebut. Oleh karena itu, kebersihan

lingkungan sekitar sangat berperan besar dalam menghasilkan ayam pedaging

dengan kualitas tinggi. Kandang memberikan ruang antara ayam pedaging dan

melindungi ayam pedaging terkena virus. Vaksinasi pada ayam pedaging sangat

dibutuhkan agar ayam tidak terkena virus. Vaksin memiliki sifat immunogenic yang

mampu membuat tubuh inang dapat membentuk sistem kekebalan tubuh terhadap

penyakit yang disebabkan oleh mikroorganisme serupa (Umiarti, 2020).

Berdasarkan data BPS (Badan Pusat Statistik) Kota Bekasi memiliki populasi

ayam pedaging sebanyak 2.143.574 ekor pada tahun 2020. Ayam pedaging yang

berasal dari Bekasi, Bogor, Depok dan Tangerang akan didistribusikan ke provinsi

DKI Jakarta karena berdasarkan Peraturan Daerah (PERDA) No.4 Tahun 2007

berisi tentang pengendalian, pemeliharaan, dan Peredaran Unggas, Sehingga

Pemerintah melarang Provinsi DKI melakukan pembudidayaan ayam pedaging.

Ayam pedaging harus dijaga kualitasnya karena akan didistribusikan (Badan Pusat

Statistik, 2020).

2.2. Avian Influenza

Avian Influenza adalah penyakit infeksius unggas yang disebabkan oleh strain

virus influenza tipe A. Virus AI sangat menular di antara populasi unggas dan

mudah ditularkan antar peternakan melalui pergerakan unggas hidup, manusia, dan
 7

area yang terkontaminasi (Scoones, 2010). Avian Influenza atau yang biasa disebut

flu burung mengacu pada influenza yang disebabkan oleh virus yang beradaptasi

secara alami dengan unggas (Haugan & Bjornson, 2010). Virus AI masuk ke dalam

kelompok orthomyxovirus dengan 3 tipe yaitu tipe A, B, dan C. Tipe yang

menyerang ayam masuk ke dalam tipe A (Fadilah et al, 2013).

Virus AI merupakan virus zoonosis pada manusia yang akan terus terjadi. Virus

influenza tipe A memiliki kemampuan menginfeksi yang dapat menyebabkan

pandemi influenza. Hal ini menyebabkan virus AI disebut sebagai Highly

pathogenic Avian Influenza (HPAI). Virus H5N1 telah berkembang terus menerus

sejak tahun 1977, dengan perubahan rekombinasi genetic. Jangkauan inang yang

terus berkembang dan virus yang mulai mampu menginfeksi hewan dari famili

Felidae. Patogenitas virus ini meningkat pada tikus dan musang yang menyebabkan

infeksi pada hewan ini. Evolusi yang terjadi menghasilkan jangkauan inang yang

semakin meluas, seperti peningkatan patogenitas dan stabilitas, dan perubahan

genetik dan antigen, sehingga menyebabkan munculnya kasus infeksi terhadap

manusia yang tidak kunjung berhenti (Chen et al, 2021).

2.2.1. Sejarah dan Penyebaran Virus Avian Influenza

Avian Influenza menjadi kejadian luar biasa (KLB) dengan tingkat patogenitas

yang tinggi mulai menyebar pada 11 juni 2008 di Hongkong. Virus flu burung

H5N1, famili Orthomyxoviridae, secara alami bertahan di unggas air dan reservoir

burung domestik dengan wabah sporadis dari galur yang sangat patogen. Beberapa

kasus manusia dilaporkan selama epidemi unggas H5N1 1997 di Hongkong,

menunjukkan penularan langsung dari unggas domestik dan kejadian pertama

subtipe influenza H5 pada manusia (Haugan & Bjornson, 2010). Kasus yang

pertama kali dilaporkan mengalami kematian karena Avian Influenza yaitu pada

tahun 1997, kasus ini terjadi karena infeksi yang langsung berasal dari unggas ke
 8

manusia selama 10 tahun kedepan virus AI menyebar ke berbagai benua seperti

Asia, Eropa, dan Afrika. Hal ini menjadikan pandemi virus AI sebagai kasus krisis

Kesehatan hewan lintas batas terbesar dalam 100 tahun terakhir (Swayne, 2009).

Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) dan beberapa negara telah

memprioritaskan peningkatan dan pengembangan kebijakan alternatif terhadap

potensi wabah influenza. Sementara vaksin yang disetujui telah berhasil melawan

virus influenza dari subtipe yang sama, namun perlindungan silang lengkap belum

tercapai. Tujuan penelitian vaksin influenza adalah untuk mengembangkan

kandidat vaksin tunggal universal yang mampu melakukan proteksi silang lengkap

terhadap subtipe influenza yang berbeda (Haugan & Bjornson, 2010). HPAI

(Highly Pathogenic Avian Influenza) Flu burung yang sangat patogen terjadi secara

alami antara burung. Burung liar di seluruh dunia membawa virus dan tidak sengaja

menyebarkannya, flu burung sangat menular di antara unggas seperti ayam, bebek,

dan kalkun yang dapat menyebabkan penyakit. Burung yang terinfeksi dapat

mengeluarkan virus AI melalui air liur, hidung dan fesesnya.

Penyebaran virus AI dapat terjadi melalui kontak langsung, udara, air minum,

pakan ayam, peralatan, karyawan atau unggas lain yang telah terinfeksi virus AI

(Fadilah et al., 2013). Penyebaran virus AI dapat terjadi sangat cepat, apabila di

suatu tempat ditemukan unggas yang terkena virus AI tidak menutup kemungkinan

bahwa ayam disekitar telah terpapar virus, hal ini mengharuskan peternak bertindak

cepat dalam menangani unggas yang terpapar agar unggas lainnya tidak terpapar

virus AI. Strain virus AI H5N1 sangat mudah menular dan menginfeksi unggas dan

juga manusia. Salah satu cara terbaik dalam mengatasi penyebaran virus ini yaitu

dengan mengawasi unggas dan melakukan vaksinasi secara teratur. Unggas yang

menjadi inang tempat virus berevolusi diberantas agar virus tidak menyebar ke

unggas lainnya.
 9

2.2.2. Sistem Imun (Antibodi dan Antigen)

Respon imun menggambarkan interaksi antara antigen (imunogen) dan

antibodi (imunoglobulin). Antibodi mengikat antigen melalui ikatan nonkovalen

dan interaksinya sangat bergantung pada jarak antara dua molekul yang bereaksi.

Sementara setiap ikatan individu lemah, ikatan nonkovalen kolektif antara antibodi

dan antigen dapat menjadi kuat ketika semua molekul yang berinteraksi bekerja

sama secara sinergis, karena interaksi ini sangat banyak jumlahnya dan antigen dan

antibodi adalah molekul yang besar, fleksibel, dan dinamis, pengikatan antara

antibodi dan antigen adalah proses yang sangat kompleks. Interaksi pengikatan

mungkin juga bergantung pada waktu, karena pembentukan kompleks antibodi-

antigen mungkin melibatkan serangkaian interaksi berurutan yang menginduksi

perubahan konformasi yang menghasilkan beberapa ikatan sambil memutuskan

ikatan lainnya. Karena keadaan interaksi antibodi-antigen yang dinamis dan

sementara, pengukuran interaksi antigen-antibodi bisa sangat rumit dan tidak

konsisten, dan hasilnya dapat bervariasi tergantung pada kondisi perlakuan sampel

dan teknik yang digunakan (Yang G, 2014).

Respon imun dapat bersifat spesifik yaitu khusus pada patogen yang

menginfeksi, dan respon imun juga mampu bertahan lama di dalam tubuh atau

justru dapat menetap seumur hidup (Saraswati, 2017). Sistem imun tidak hanya

melawan ancaman dari luar namun ancaman yang muncul dari dalam, sistem imun

dapat dianggap sebagai sistem untuk mempertahankan kestabilan tubuh yang

disebut homeostasis (Klenerman, 2017). Meningkatkan sistem imun salah satunya

yaitu dengan vaksin, Vaksin memiliki dampak besar pada kesehatan dan prinsip

imunologi yang mendasarinya semakin dipahami dengan baik seperti vaksin

influenza yang cenderung tidak menimbulkan infeksi persisten pada unggas yang

sehat dan memiliki kekebalan yang kuat sehingga pendekatan vaksin yang
 10

menghasilkan antibodi tingkat tinggi dapat memberikan hasil kekebalan yang

protektif. Vaksin influenza saat ini menyediakan protein yang diturunkan dari jenis

virus yang relevan yang bersirkulasi pada musim tersebut bersamaan dengan

adjuvant sehingga meningkatkan respon imun bawaan, hal ini dapat menaikkan

tingkat protektif dari antibodi penetralisir (Klenerman, 2017).

2.2.3. Vaksin

Vaksinasi merupakan proses inokulasi patogen yang telah dilumpuhkan ke

dalam tubuh individu yang sehat (Saraswati, 2017). Vaksin dapat membantu sistem

imunitas untuk membentuk zat kekebalan tubuh (antibodi) yang bertahan untuk

melawan antigen dari patogen spesifik yang masuk ke dalam tubuh makhluk hidup

tersebut (World Health Organization, 2021). Antibodi yang diproduksi untuk

vaksinasi harus efektif terutama pada mikroba ekstraseluler dan produknya (toksin),

karena reaksi yang efektif baru muncul kurang lebih beberapa minggu setelah

proses vaksinasi dilakukan (Marliana & Widhyasih, 2018).

Antibodi yang terkandung dalam serum akan berikatan dengan glikoprotein

pada permukaan virus/antigen lalu mencegah glikoprotein tersebut mengikat

molekul reseptor pada permukaan sel darah merah dan membentuk titik endapan

yang menandakan bahwa pada sumuran tersebut merupakan titik akhir titrasi. Hal

ini merupakan tanda bahwa nilai titer sampai pada pangkat sebelumnya. Perbedaan

tingkat respons imun ayam petelur pasca vaksinasi dapat dipengaruhi oleh beberapa

faktor diantaranya adalah kemungkinan karena perbedaan respons individu,

perbedaan kemampuan antigenik dari antigen vaksin yang digunakan serta

komposisi adjuvant (Kencana et al., 2016). Metode terbaik untuk melindungi

unggas dari infeksi virus Avian Influenza hingga kini adalah vaksinasi. Mengingat

akibat dari infeksi Avian Influenza yang tidak terelakkan membuat pengembangan

vaksin terhadap flu universal harus diberikan prioritas tinggi.

 11

2.3. Uji Haemagglutination Assay (HA) dan Haemagglutination Inhibition

(HI)

Uji HA (Haemagglutination Assay) dan HI (Haemagglutination Inhibition)

adalah pengujian yang bertujuan untuk mendeteksi antibodi terhadap virus AI di

dalam tubuh ayam. Prinsip dari uji HA yaitu aglutinasi untuk mengukur titer

antigen, sedangkan prinsip dari uji HI adalah hemaglutinasi yang bertujuan untuk

mendeteksi titer antibodi (Nugraha, 2021). Uji HI merupakan reaksi ikatan antara

antibodi. Pada uji HA terjadi reaksi antara antigen dengan reseptor eritrosit.

Sedangkan pada uji Hambatan hemaglutinasi (HI) antibodi berikatan langsung

dengan hemaglutinin sehingga akan terjadi hemaglutinasi sel darah merah oleh sel

virus AI.

Aglutinasi eritrosit adalah dasar pengujian hemaglutinasi (HA) dan dasari

pengujian HI adalah hambatan hemaglutinasi dengan menggunakan antiserum

subtipe HA yang spesifik. Prinsip dari pengujian HI adalah antibodi yang

terkandung didalam tubuh unggas terhadap virus akan mencegah pengikatan virus

dengan sel darah merah. Hal ini menyebabkan hemaglutinasi dihambat Ketika

terdapat antibodi dalam serum unggas (Marliana & Widhyasih, 2018). Pengenceran

tertinggi dari serum yang mencegah terjadinya hemaglutinasi disebut titer HI

serum. Keberadaan antibodi AI pada serum dapat terdeteksi dengan uji HI setelah

tujuh hari post infeksi atau vaksinasi dilakukan (Pedersen, 2014).

Organisme tertentu mampu mengaglutinasi eritrosit unggas. Organisme yang

melakukan hemaglutinasi salah satunya adalah virus famili Orthomyxoviridae,

Virus influenza termasuk virus Orthomyxoviridae 11 memiliki protein pada amplop

yang disebut hemaglutinin yang mengikat reseptor sialic acid pada sel.

Hemaglutinin berperan di awal infeksi yang sangat menentukan kemampuan

menginfeksi virus AI ke permukaan sel inang. HA bersifat imunogenik karena

 12

mampu menginduksi antibodi protektif dan menghambat infeksi virus ke

permukaan sel inang sehingga mampu mencegah terjadinya infeksi. Virus ini juga

akan berikatan dengan eritrosit yang dapat menyebabkan hemaglutinasi dan

merupakan dasar untuk menentukan tingkat virus yang ada dalam sampel. Aktivitas

ini diperankan oleh protein HA yang merupakan glikoprotein permukaan (Wibawan

et al., 2006).

Titer adalah pengenceran serum tertinggi yang masih menyebabkan aglutinasi.

Terdapat 2 macam hasil yang diperoleh dari titer yaitu Prozone effect dan Postzone

effect. Prozone effect adalah suatu keadaan dimana serum memiliki konsentrasi

antibodi yang tinggi dan tidak terjadi aglutinasi (antibodi ekses = kelebihan

antibodi). Postzone effect adalah suatu keadaan dimana terjadi kelebihan antigen

sehingga tidak terjadi aglutinasi (antigen ekses). Zona equivalence adalah suatu

daerah dimana terjadi keseimbangan antara antigen-antibodi sehingga terjadi

aglutinasi (Marliana & Widhyasih, 2018).

 BAB III
METODE PENELITIAN

3.1. Waktu dan Tempat

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Maret sampai April 2022, Sampel darah

ayam pedaging berasal dari Peternakan SMS, Bekasi akan diuji di Laboratorium

Diagnostik Serologi Pusat Pelayanan Kesehatan Hewan dan Peternakan

(Pusyankeswannak), Ragunan, Jakarta Selatan.

3.2. Alat dan Bahan

Alat yang digunakan yaitu sarung tangan, masker, micropipette multichannel

25-50 µl, micropipette single channel, microtip 1000µl, microtip 10-100µl,

microplate v bottom 96 wells, reservoir, eppendorf, parafilm, rak tube, tisu,

sentrifuge, gelas piala, shaker, vortex, timer, wadah plastik, tabung reaksi, gelas

ukur, wadah sampah, pulpen, buku catatan dan spidol. Bahan yang digunakan yaitu

sampel darah merah ayam 0,5%, akuabides, Phospate Buffered Saline PBS 10X,

dan Antigen Avian Influenza (AI) 4 HAU (Lampiran 5).

3.3. Rancangan Penelitian

Penelitian ini menggunakan metode survei dengan Teknik pengambilan sampel

menggunakan metode random sampling. Terdapat total 3 kelompok umur ayam

yaitu, 14 hari, 18 hari, dan 21 hari yang telah divaksinasi pada umur ayam 0 hari.

Penelitian dilakukan pada 1 flok peternakan dengan perkelompok umurnya

menggunakan 15 ekor ayam pedaging yang diambil dari total populasi perflok yaitu

150 ekor, sehingga total sampel yang digunakan adalah 45 ekor. Pengambilan

sampel dilakukan secara acak yaitu 10% dari total populasi (Arikunto, 2010).

Peternakan SMS Bekasi mendapatkan ayam pedaging yang telah diberikan

vaksin Avian Influenza (AI) pada umur 1 hari atau Day Old Chick (DOC) oleh

13
 14

petugas penetasan telur ayam (hatchery). Peternakan SMS tidak memiliki

perbedaan perlakuan pada setiap kandangnya, sehingga digunakan 1 flok untuk

sampling pada peternakan. Serum darah akan diambil berdasarkan 3 kategori umur

ayam yaitu 14, 18, dan 21 hari, kemudian dilakukan pengujian HA-HI untuk

mendeteksi keberadaan antibodi.

3.4. Teknik Pengambilan Sampel

Pengambilan 45 sampel darah ayam pedaging dengan cara diambil pada bagian

vena pectoralis menggunakan syringe disposable 3 cc dan diambil minimal 1 cc

(Martoenus & Djakmikowati, 2015). Sampel darah didiamkan selama 30 menit - 1

jam lalu disentrifugasi dengan kecepatan 2500 rpm selama 5 menit. Pengambilan

darah untuk RBC dan sampel menggunakan teknik yang sama.

3.5. Prosedur Kerja

3.5.1. Pembuatan Red Blood Cell (RBC) dan Phospate Buffered Saline

(PBS)

Darah ayam steril yang berasal dari Pusat Pelayanan Kesehatan Hewan dan

Peternakan (Pusyankeswannak) DKI Jakarta merupakan ayam yang dihasilkan dari

telur Spesifik Antibodi Negatif (SAN) yang telah terjamin bebas dari pathogen.

Darah ayam diambil sebanyak 2-3 ekor ayam dan dijadikan satu tabung lalu di

sentrifugasi dengan kecepatan 2500 rpm selama 5 menit, lalu supernatan dibuang.

Proses ini dilakukan sebanyak 3x pengulangan. Dilakukan pembuatan RBC 10%

dengan menambahkan PBS. Lalu RBC dibuat menjadi 1% dengan perbandingan

RBC dan PBS yaitu 1:9 dalam wadah plastik dan dihomogenkan menggunakan

mikropipet. Untuk PBS digunakan PBS 1%, dibuat dari PBS 10% yaitu dengan

perbandingan PBS dan akuabides sebesar 1:9 (OIE, 2021)

 15

3.5.2. Uji HA Antigen AI

Sebanyak 25 µl PBS dimasukkan ke dalam setiap sumuran dari microplate

dengan dasar bentuk V sampai sumuran ke-11 sedangkan sumuran ke-12 berisi 50

µl, Kemudian 25 µl antigen yang akan dipakai dimasukkan untuk menguji HI pada

lubang pertama. Pengenceran kelipatan dua dengan volume 25 µl dibuat dari lubang

pertama sampai sumuran ke-11 kemudian sisa didalam pipet tip dibuang. PBS

dimasukkan kembali sebanyak 25 µl ke dalam setiap lubang, lalu plate disimpan di

mesin shaker. Sel darah merah ayam 1% sebanyak 25 µl dimasukkan ke dalam

setiap sumuran, plate dihomogenkan menggunakan mesin shaker kembali agar

terhomogenisasi secara sempurna, biarkan selama 40 menit pada suhu ruangan

(Gambar 2). Apabila suhu ambient terlalu tinggi, kontrol sel darah merah hingga

mengendap sempurna pada dasar sumuran (OIE, 2021).

Gambar 2. Ilustrasi hasil dari pengujian Uji HA

Cara menetapkan hasil uji HA yaitu HA dibaca pada pengenceran tertinggi

yang memperlihatkan aglutinasi sempurna (End point dimana terjadi 50%

aglutinasi), dengan cara memiringkan plate 90o dan adanya aliran sel darah merah

dilihat pada lubang sumuran.

Perhitungan:

Misal

Hasil titer 28 = 256:4 = 64, maka 1:63

Kebutuhan /plate = 2,5 mL antigen, 2 plate = 5 mL

Kebutuhan 2 plate = 5 mL: 63

 16

= 80 µl antigen dalam 5 mL PBS

3.5.3. Uji 4HA

Antigen yang dibutuhkan pada Hi test adalah 4HA unit/25 µl. Untuk

mendapatkan antigen 4 HA unit/25 µl adalah antigen yang diencerkan

menggunakan PBS sesuai perhitungan dari hasil yang diperoleh pada uji HA.

Setelah diperoleh perhitungan titer, antigen sebanyak 120 µl diencerkan dalam 5

mL PBS. PBS 25 µl dimasukkan ke 4 sumuran duplo, kemudian 25 µl antigen Avian

Influenza dimasukkan dan diencerkan sampai ke sumuran ke-4 lalu sisanya

dibuang. PBS 25 µl dimasukkan lagi lalu shaker plate selama 2-3 menit, Kemudian

RBC 1% 25µl dimasukkan lalu dihomogenkan menggunakan shaker lagi. Plate

dibiarkan selama 30-40 menit, lalu hasil dibaca, apabila hasil diperoleh 2 mengikat

dan 2 mengalir (Gambar 3), maka uji 4HA telah berhasil dan dapat dilanjutkan ke

uji HI (OIE, 2021).

Gambar 3. Ilustrasi hasil dari pengujian Uji 4HA

3.5.4. Uji HI

Uji HI dilakukan di Laboratorium Diagnostik Serologi. PBS dimasukkan

sebanyak 25 µl ke tiap sumuran microplate plastik yang memiliki dasar berbentuk

V. Serum 25 µl yang akan diuji diteteskan ke dalam sumuran pertama, untuk

pengenceran kelipatan dua dari sumuran pertama dengan volume 25 µl sampai

sumuran 11 lalu sisa dibuang. Antigen AI 4 HAU / 25 ul ditambahkan ke setiap

sumuran (kecuali sumuran ke 12 dengan PBS) diamkan selama 35 menit pada suhu
 17

kamar untuk terjadi reaksi antigen–antibodi. Suspensi sel darah merah ayam 1%

sebanyak 25 ul ditambahkan ke dalam setiap sumuran kemudian kocok slow agar

tercampur rata, biarkan pada suhu ruangan sekitar 35 menit sampai sel darah merah

mengendap atau 60 menit pada suhu 4° C. Hasil dapat diamati dengan menghitung

aliran darah yang terjadi di setiap sumuran. Hasil dinyatakan protektif apabila nilai

titer antibodi yang diperoleh ≥24 (OIE, 2021).

3.6. Parameter Pengamatan

Hasil yang diperoleh mengacu pada tabel berikut:

Tabel 1. Parameter hasil nilai titer antibodi ayam pedaging (OIE, 2021).

Hasil Keterangan

≥24 Protektif

<24 Nonprotektif

20 Negatif

Keterangan:
Protektif : Menunjukkan bahwa titer antibodi masih banyak ditemukan
di dalam serum.
Nonprotektif : Menunjukkan bahwa titer antibodi yang terbentuk sudah
menurun jumlahnya.
Negatif : Menunjukkan bahwa titer antibodi sudah tidak ditemukan
atau sudah dalam jumlah sedikit di dalam serum.

3.7. Analisis Data

Hasil nilai titer antibodi ayam pedaging akan dianalisis secara deskriptif

berdasarkan parameter yang mengacu pada Office International Epizootes (OIE)

dan Akumulasi data untuk menghitung persentase ayam pedaging yang

mengandung titer antibodi AI menggunakan rumus perhitungan sebagai berikut:

!"#$%& (%#)*$ )+,-*.-/0
x 100% (Perdana, 2016).
!"#$%& (%#)*$
 18

Rumus perhitungan untuk mengetahui hubungan antara ketiga umur ayam

pedaging atas hasil titer antibodi AI menggunakan rumus sebagai berikut:

!#$
Odds Ratio (OR) = (Akbar et al., 2017).
%#&

Keterangan:

a : Titer antibodi protektif umur pertama

b : Titer antibodi nonprotektif umur pertama

c : Titer antibodi protektif umur kedua

d : Titer antibodi nonprotektif umur kedua

 BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Hasil titer antibodi Avian Influenza pada ayam pedaging

Uji HA bertujuan untuk mengetahui adanya virus yang bereaksi dengan RBC.
RBC yang digunakan berasal dari darah ayam steril di Laboratorium Diagnostik.
Hasil Uji HA yang diperoleh berasal dari RBC yang direaksikan dengan antigen,
sehingga diperoleh angka untuk menetapkan jumlah antigen pada uji lanjut yaitu
uji 4HA. Hasil tersebut dapat dilihat pada Tabel 2

Gambar 4. Hasil pengujian Uji HA

Tabel 2. Hasil Uji HA pada ayam pedaging umur 14, 18 dan 21 hari
Umur Ayam (Hari) Hasil Titer Antigen
14 27
18 27
21 27
Hasil Uji HA (Gambar 4) yang diperoleh adalah sama yaitu 27 untuk semua

umur ayam. Reaksi yang terjadi pada uji HA yaitu antara antigen dengan reseptor

eritrosit (Marliana & Widhyasih, 2018). Titrasi dibaca hingga pengenceran tertinggi

yang menghasilkan HA lengkap, dengan kata lain terdapat 1 unit HA (HAU) dan

dapat dihitung secara akurat (OIE, 2021). Angka ini (Tabel 2) digunakan untuk

menentukan jumlah antigen yang digunakan pada uji 4HA. Hasil pengujian tersaji

pada Tabel 3

19
 20

Gambar 5. Hasil pengujian Uji 4HA

Tabel 3. Perhitungan 4HA pada ayam pedaging umur 14, 18 dan 21 hari
Umur Ayam (Hari) Hasil Uji 4HA/ (2,5 antigen)
14 160 𝜇l
18 160 𝜇l
21 160 𝜇l
Perhitungan yang dihasilkan (Tabel 3) kemudian dilakukan uji 4HA, apabila

pada 4 sumuran tersebut hasil sudah menunjukkan 2 sumur mengikat dan 2 sumur

mengalir maka uji 4HA sudah berhasil dan bisa melanjukan ke uji selanjutnya yaitu

uji HI. Uji 4HA dilakukan untuk mengetahui ketepatan dari antigen 4HA yang

digunakan yaitu dengan uji back titrasi dan ditandai dengan terjadinya aglutinasi

pada sumuran 1 dan 2 (Haryanto et al., 2012). Hasil ini kemudian dilanjutkan

dengan uji lanjutan yaitu uji HI, berikut adalah hasil uji HI:

Tabel 4. Hasil uji HI pada ayam pedaging umur 14, 18 dan 21 hari
Umur Ayam Tingkat kekebalan Jumlah
(Hari) Protektif Nonprotektif Negatif sampel
14 0 13 2 15
18 0 15 0 15
21 0 13 2 15
Total 0 41 4 45
Persentase 0 91,1 8,8 100
n=15 ekor/umur

Hasil uji HI (Tabel 4) diperoleh 91,1% sampel nonprotektif, hal ini

menunjukkan bahwa titer antibodi yang terbentuk sangat sedikit sehingga tidak

terdeteksi. Hasil negatif ditemukan pada serum darah umur 14 dan 21 yang

menunjukkan bahwa titer antibodi yang terbentuk tidak ditemukan atau dalam
 21

jumlah sedikit di dalam serum sehingga sulit untuk dideteksi. Menurut OIE (2021),

hasil uji HI dikategorikan positif/protektif apabila terjadi aglutinasi titer antibodi

pada angka 24 atau lebih. Hasil ini menunjukkan bahwa vaksin memiliki tingkat

kekebalan yang tidak cukup terhadap infeksi penyakit AI.

Terjadinya perubahan hasil pada ayam umur 18 hari dari nonprotektif menjadi

negatif pada umur 21 hari dapat disebabkan oleh beberapa faktor. Faktor yang

pertama adalah paparan virus AI. Berdasarkan kondisi di peternakan selama 2 tahun

terakhir tidak terdapat kasus AI, paparan yang terjadi mampu menstimulasi

pembentukan antibodi pada tubuh unggas. Hasil negatif dari umur 14 yang

mengalami perubahan menjadi nonprotektif pada umur 18 dapat terjadi dikarenakan

pada umur 18 hari, antibodi terbentuk namun pada umur 21 terjadi penurunan

antibodi sehingga pada saat pengujian menunjukkan hasil negatif kembali.

Perubahan yang terjadi berkaitan dengan respon tubuh ayam yang dapat disebabkan

oleh kondisi lingkungan (Setiawan, 2015).

Antigen yang digunakan pada penelitian ini adalah antigen AI Clade 2.3.2.1,

Clade pada antigen AI merupakan individu yang memiliki jarak kekerabatan yang

dekat antara clade lainnya dan berfungsi sebagai penyandi protein permukaan virus

AI (Eagle et al., 2009). Pengujian HA-HI membutuhkan antigen yang sesuai dengan

antibodi yang terkandung dalam vaksin, Antigen dan antisera (kontrol positif dan

negatif) yang digunakan pada penelitian ini berasal dari Pusat Veteriner Farma yaitu

antigen AI Clade 2.3.2.1 dan serum positif AI Clade 2.3.2.1 dan sudah memiliki

sertifikasi SNI dalam Sistem Manajemen Mutu pada tahun 2015. Hal ini merupakan

salah satu faktor hasil titer antibodi, karena antigen yang kurang spesifik dengan

clade virus yang ada di dalam vaksin dapat mempengaruhi hasil titer antibodi yang

seharusnya (Fransisca, 2015). Namun, berdasarkan Laboratorium Serologi

Pusyankeswannak, penggunaan antigen dengan perbedaan clade tidak memberikan

 22

perbedaan hasil yang spesifik. Hal ini didukung oleh Indriani (2017), melakukan

pengamatan terhadap uji reaksi silang antara virus AI H5N1 Clade 2.1.3 dan antigen

clade 2.3.2 dengan uji HI menunjukkan bahwa serum ayam yang divaksinasi

dengan vaksin AI H5N1 clade 2.1.3 menunjukkan reaksi silang yang tinggi

terhadap antigen AI H5N1 clade 2.3.2 (Indriani et al., 2017). Pada penelitian ini

menunjukan bahwa antigen yang digunakan oleh Laboratorium dan antibodi yang

terkandung dalam vaksin sudah sesuai sehingga tidak mempengaruhi hasil titer

antibodi.

4.2. Hubungan antara umur ayam dan keberhasilan vaksin

Keberhasilan vaksin dapat dipicu oleh banyak faktor, salah satunya adalah

umur ayam. Penggunaan Odds ratio (OR) bertujuan untuk mengetahui adanya

korelasi antara umur ayam dan keberhasilan vaksin yang digunakan, Hasil tersebut

dapat dilihat pada Tabel 5.

Tabel 5. Hubungan antar umur ayam pedaging 14, 18, dan 21 hari.
Umur Ayam Tingkat kekebalan Jumlah Odds Ratio
(Hari) Protektif Nonprotektif
14 0 15 15 0
18 0 15 15 0
21 0 15 15 0
Total 0 45 45
*
Keterangan: Odds ratio = Perkalian silang antar hasil ((0x15) ÷ (0x15) = 0)

Nilai OR yang diperoleh yaitu 0 (Tabel 5, 6, dan 7), hal ini menunjukkan

bahwa kedua faktor tersebut adalah protektif, dengan kata lain terdapat hubungan

negatif antara faktor risiko dengan kedua umur ayam tersebut (Akbar et al., 2017).

Perbedaan hasil yang diperoleh dapat disebabkan oleh beberapa faktor seperti,

kondisi kesehatan ayam pedaging, kondisi kandang, proses vaksinasi, jenis

vaksinasi, dan pemeliharaan. Hal ini didukung oleh Tarigan (2018), bahwa

keberhasilan vaksinasi lapangan sangat bervariasi dan bergantung pada peternakan.

 23

Hasil titer menunjukkan perbedaan secara signifikan pada setiap kelompok unggas

yang berbeda (Tarigan et al., 2018). Tingkat keberhasilan vaksin sebagian besar

disebabkan oleh kegagalan dalam proses vaksinasi, berdasarkan penelitian yang

dilakukan oleh Swayne (2014), kegagalan dalam memberikan vaksin yang baik

kepada unggas beresiko mengakibatkan penurunan kekebalan dalam suatu

populasi, sementara kegagalan yang lebih sedikit disebabkan oleh penyimpangan

antigen virus lapangan dari virus vaksin. Vaksin yang digunakan menunjukkan

perlindungan terhadap virus penyakit unggas termasuk AI.

Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Indriani (2006), ayam dengan

vaksin inaktif AI A/Chicken/West Java/67-2/2003 dan vaksin inaktif AI H5N1

komersial menunjukkan hasil uji HI positif antibodi virus AI H5N1 (Indriani &

Dharmayanti, 2006). Vaksin medivac merupakan vaksin inaktif, vaksin ini relatif

lambat dengan capaian kekebalan bisa mencapai 2 minggu, namun memiliki

kekebalan bisa mencapai 3 bulan(Suwanto & Saparinto, 2012). Berdasarkan

penelitian yang dilakukan oleh Marson (2020), Vaksin Medivac juga belum

menghasilkan hasil yang positif, pengambilan sampel dilakukan sebanyak tiga kali

dengan jarak yang sama yaitu 2 minggu. Pada pengambilan sampel pertama dan

kedua tidak ditemukan sampel positif, sedangkan pada pengambilan sampel ketiga

ditemukan hasil positif yang menunjukkan bahwa antibodi terbentuk bukan

dikarenakan proses vaksin namun berasal dari infeksi alami dengan patogenitas

yang rendah, hal ini dapat terjadi melalui pakan saat proses distribusi atau melalui

air pada daerah persawahan (Marson et al., 2020). Namun, pada penelitian ini tidak

terdapat infeksi alami yang terjadi karena daerah sekitar peternakan tidak banyak

ditemukan unggas lain dan peternakan juga menggunakan kandang close sehingga

menurunkan interaksi yang mungkin terjadi, sehingga tidak terdapat antibodi yang

terbentuk sampai umur ayam sudah menginjak 21 hari.

 24

Harga vaksin medivac untuk penggunaan 500 ekor ayam yaitu Rp285.000.-

sedangkan harga untuk vaksin inaktif AI A/Chicken/West Java/67-2/2003 dan

vaksin inaktif AI H5N1 komersial belum dipublikasikan dan masih dalam tahap

penelitian lebih lanjut oleh Balai Besar Penelitian Veteriner. Vaksin Vaksimune

NDL AI pada penelitian yang dilakukan oleh Santosa dan Sutrisna (2017),

menunjukkan bahwa vaksin tersebut menyebabkan kenaikan titer antibodi yang

melebihi standar minimum yaitu (<24). Hasil protektif pada penelitian ini juga

dipicu oleh teknik vaksinasi dengan cara menginjeksikan antigen dan

adjuvant(Santosa & Sutrisna, 2017). Vaksin ini memiliki harga sekitar

Rp1.625.000-Rp2.275.000.- untuk 1000 dosis dengan berat 500 ml/botol.

Berdasarkan hasil dari penelitian masing-masing vaksin, Vaksin Vaksimune NDL

AI mampu meningkatkan hasil protektifitas ayam terhadap virus AI sehingga,

peternakan disarankan menggunakan vaksin ini untuk mencegah infeksi virus AI.

Hal terpenting dalam keberhasilan vaksin ialah penanganan vaksin agar

vaksin tersebut tidak rusak atau menurun fungsinya. Penyimpanan vaksin

merupakan hal yang menunjang keberhasilan vaksin, vaksin harus disimpan dalam

keadaan dingin dengan suhu 2-7°C, sedangkan pelarut vaksin dapat disimpan di

dalam freezer atau sehari sebelum digunakan dimasukkan ke dalam lemari es.

Pengangkutan vaksin berfungsi untuk mempertahankan kualitas vaksin selama

dalam rantai angkut hingga sampai pada kegiatan pemvaksinan, penanganan harus

dilakukan sebaik mungkin. Pengangkutan vaksin membutuhkan suhu dingin maka

minimal harus disediakan termos yang diisi pecahan es batu, lalu vaksin

dimasukkan ke dalam termos di antara pecahan es, pada proses ini sering terjadi

kelalaian yang mengakibatkan terjadinya kerusakan vaksin (Suwanto & Saparinto,

2012). Kerusakan vaksin dapat menyebabkan denaturasi protein pada vaksin,

sehingga vaksin tidak bisa digunakan lagi. Pencegahan agar unggas terhindar dari
 25

infeksi virus AI yaitu dengan meningkatkan kekebalan vaksin ayam pedaging

dengan minimal 80% populasinya menunjukkan tingkat kekebalan yang protektif,

hal ini dapat melindungi populasi unggas (Ikhsan, 2021).

Faktor lain yang dapat mempengaruhi hasil vaksinasi adalah Maternal

antibodi. Maternal antibodi adalah antibodi yang diperoleh dari induk dan tahan

kurang lebih 10-20 hari setelah unggas menetas, apabila pada umur 0 hari ayam

sudah diinjeksi dengan antibodi spesifik (Vaksin) maka antibodi yang seharusnya

menjaga ayam agar terhindar dari infeksi virus justru akan diserang oleh maternal

antibodi yang sudah terkandung di dalam tubuh ayam tersebut. Penelitian yang

dilakukan oleh Deka (2020) menunjukkan bahwa ayam memiliki tingkat maternal

antibodi yang dipertahankan sampai usia 5-7 hari, maternal antibodi yang

terkandung dalam setiap ayam dapat mempengaruhi proses vaksinasi. Penelitian ini

lebih lanjut menyatakan bahwa meskipun pemberian vaksin aktif dan inaktif pada

ayam pedaging dapat menginduksi respon imun yang sedikit lebih baik namun,

sepertinya terdapat fenomena interferensi karena adanya maternal antibodi (Deka

et al, 2020). Hal yang dapat dilakukan untuk mencegah ayam terinfeksi virus selain

vaksinasi adalah meningkatkan biosecurity di lapangan. Meningkatkan biosecurity

di lapangan dapat menurunkan biaya protokol kesehatan bagi peternakan, karena

ayam pedaging merupakan ayam yang sangat cepat proses produksinya yaitu

kurang lebih 25-35 hari apabila bobot telah terpenuhi. Vaksinasi sebaiknya

dilakukan setelah ayam menginjak umur 7 hari untuk menghindari fenomena

interferensi dari maternal antibodi.

 BAB V
PENUTUP

5.1. Kesimpulan
Berdasarkan penelitian yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa tidak

terkandung antibodi spesifik pada sampel umur ayam 14, 18, dan 21 hari. Hubungan

antar umur ayam menunjukkan bahwa terdapat hubungan negatif antara faktor

risiko dengan kedua umur ayam tersebut.

5.2. Saran

Berdasarkan data penelitian yang telah diperoleh, saran yang dapat

diberikan yaitu:

1) Penelitian sebaiknya dilakukan pada saat terdapat kasus Avian Influenza

atau tidak jauh dari kasus AI terjadi.

2) Proses vaksinasi sebaiknya dilakukan pada saat umur ayam menginjak 5-7

hari dan dilakukan vaksin kedua (booster) setelah umur ayam menginjak 14

sampai 21 hari.

3) Peternakan SMS sebaiknya meningkatkan biosecurity di lapangan.

26
 DAFTAR PUSTAKA

Akbar, S., Ardana, I. B. K., & Suardana, I. B. K. (2017). Perbandingan Titer

Antibodi Newcastle Disease pada Ayam Petelur Fase Layer I dan II.
Indonesia Medicus Veterinus, 6(4), 328–332.

Akbar, S., Bagus, I., Ardana, K., Suardana, K., Profesi, M., & Hewan, D.
(2017). Perbandingan Titer Antibodi Newcastle Disease pada Ayam
Petelur Fase Layer I dan II (Comparison of Newcastle Disease antibodies
titer in layer phase I and II). Indonesia Medicus Veterinus Agustus, 6(4),
2477–6637. https://doi.org/10.19087/imv.2017.6.4.327

Arikunto, S. (2010). Prosedur penelitian suatu pendekatan Praktek. Jakarta:

Rineka Cipta.

Badan Pusat Statistik. (2020). Populasi Ternak Unggas di Jawa Barat (ekor)
Tahun 2018-2020. Bekasi. Retrieved from
https://jabar.bps.go.id/indicator/158/258/1/populasi-ternak-unggas-di-
jawa-barat.html

Bhakty, Z. W., Kencana, G. A. Y., & Suartha, I. N. (2018). Titer Antibodi

Ayam Petelur Pascavaksinasi Avian Influenza Pada Peternakan
Komersial Di Desa Denbantas, Kecamatan Tabanan. Indonesia Medicus
Veterinus, 7(2), 124–129. https://doi.org/10.19087/imv.2018.7.2.123

Chen, Q., Yu Xin, S., & Pu Xuan, L. (2021). Avian Influenza in Human (1st
ed.; W. Shi pin & Y. Gui lin, Eds.). Guangzhou: Springer.

Dahlan, M., & Hudi, N. (2011). Studi Manajemen perkandangan Ayam

Pedaging di Dusun Wangket Desa Kaliwates Kecamatan Kembang Bahu
Kabupaten Lamongan. Jurnal Ternak, 2(1), 10–13.

Deka, P., Das, S., & Deka, P. (2020). Influence of Maternal Antibody on the
Efficacy of Newcastle Disease Vaccination in Pedagings. Current
Journal of Applied Science and Technology, 108–114.
https://doi.org/10.9734/cjast/2020/v39i730581

Eagle, D., Siregar, E. S., Dung, D. H., Weaver, J., Wong, F., & Daniels, P. W.
(2009). H5N1 highly pathogenic Avian Influenza in Southeast Asia.
Revue Scientifique et Technique de l’OIE, 28(1), 343–348.
https://doi.org/10.20506/rst.28.1.1864

27
 28

Fadilah, R., Iswandari, & Polana, A. (2013). Mencegah dan mengendalikan

flu burung pada itik dan ayam (Y. Tetty, Ed.). Jakarta: AgroMedia
Pustaka.

Fadillah, R. (2013). Beternak Ayam Pedaging (Arie Liliyah, Ed.). Jakarta

Selatan: PT Agromedia Pustaka.

Fransisca, D. A. W. (2015). Uji HI serum ayam pasca vaksinasi AI H5N1 clade

2.3.2. menggunakan antigen AI clade 2.3.2 dan 2.1.3. Universitas
Airlangga, Surabaya.

Haryanto, A., Krisanti, B., Irianingsih, S. H., & Yudianingtyas, D. W. (2012).

Diagnosis molekuler Virus Flu Burung-A Subtipe H5 berdasarkan
Amplifikasi Gen M dan H5 dengan Metode Onestep Simplex RT-PCR.
Jurnal Veteriner, 13(2), 95–96.

Haugan, S., & Bjornson, W. (2010). Avian Influenza: Etiology, Pathogenesis

and Interventions. New York: Nova Science Publishers, Inc.

Ikhsan, M. H. (2021). Avian Influenza Antibody Titer of Laying Hens in

Production Phase at District Penebel Tabanan Regency. Journal of
Applied Veterinary Science and Technology, 02, 27–30.

Indriani, R., & Dharmayanti, N. I. (2006). Deteksi antibody Avian Influenza

dalam kuning telur Ayam Pascavaksinasi (AI) Subtipe H5N1. Media
Kedokteran Hewan, 22(2), 85–87.

Indriani, R., Dharmayanti, N. I., & Martindah, E. (2017). Cross-Reaction of

Duck and Chicken Sera against Avian Influenza H5N1 Virus Clades 2.1.3
and 2.3.2 Antigens by Hemagglutination Inhibition Test. Jurnal Biologi
Indonesia, 13(2), 327–328.

Irawan, D. W., Indraswati, D., & Prihastini, lilies. (2021). Kajian aspek fisik
serta mikrobiologi pada daging ayam pedaging sehat dan daging ayam
pedaging glonggongan (1st ed.; N. BE, Ed.). Kabupaten Solok: Insan
Cendekia Mandiri.

Kencana, G., Suartha, I., Paramita, N., & Handayani, A. (2016). Vaksin
kombinasi Newcastle Disease dengan Avian Influenza memicu imunitas
protektif pada Ayam Petelur terhadap Penyakit Tetelo dan Flu Burung.
Jurnal Veteriner, 17(2), 257–264.
 29

Klenerman, P. (2017). The Immune System (1st ed., Vol. 544). New York:
Oxford University Press.

Marliana, N., & Widhyasih, R. M. (2018). Imunoserologi (1st ed.; A. Susilo,

Ed.). Jakarta Selatan: Kementrian Kesehatan Republik Indonesia.

Marson, F. G. S., Suardana, I. B. K., & Nindhia, T. S. (2020). Titer antibodi

pascavaksinasi Flu Burung Subtipe H5N1 pada Ternak Itik di Baha,
Mengwi, Badung, Bali. Indonesia Medicus Veterinus, 9(5), 799–804.

Nugraha, R. (2021). Deteksi Virus Avian Influenza dengan Uji HI pada Sampel
Darah Ayam di Balau Karantina Pertanian Kelas 1 Jambi. Jambi.

Office International des Epizooties (OIE). (2021). Avian Influenza (Including

infection with high pathogenicity Avian Influenza Viruses) Chapter
3.3.4. OIE Terrestrial Manual, 12–13. Retrieved from
https://www.woah.org/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/3.03
.04_AI.pdf

Pedersen, J. C. (2014). Hemagglutination-inhibition assay for influenza virus

subtype identification and the detection and quantitation of serum
antibodies to influenza virus. Methods in Molecular Biology, 1161, 11–
25.

Perdana, Z. (2016). Deteksi Antibodi virus Newcastle disease (ND) pada Ayam
Buras (Gallus domesticus) di Desa Gayaman Kecamatan Mojoanyar
Kabupaten Mojokerto dengan Uji Haemaglutination inhibition (HI).
surabaya.

Santosa, P. E., & Sutrisna, R. (2017). Titer Antibodi Avian Influenza dan
Newcastle Disease dalam serum darah Itik Grower yang diberi Ransum
berbeda Kadar Protein Kasar dan divaksin dengan Vaksimune NDL AI®.
Jurnal Penelitian Pertanian Terapan, 17(1), 12–15.

Saraswati, H. (2017). Modul Imunologi (H. Saraswati, Ed.). Jakarta Barat:

Universitas Esa Unggul.

Scoones, I. (2010). Avian Influenza (first; Scoones Ian, Ed.). london:

Earthscan.

Setiadi, D., Nova, K., & Tantalo, S. (2013). Perbandingan bobot hidup, karkas,
giblet, dan lemak abdominal ayam jantan tipe medium dengan strain
 30

berbeda yang diberi ransum komersial pedaging. Jurnal Ilmiah

Peternakan Terpadu, 1(2), 2–4.

Setiawan, N. R. (2015). Studi Seroprevalensi Avian Influenza pada Unggas

Peliharaan Masyarakat di Kecamatan Lore Utara Kabupaten Poso
Sulawesi Tengah. IPB, Bogor.

Subedi, D., Kandel, M., Khana, S., Mahato, P. L., & Acharya, R. (2020).
Prevalence of Diseases in Pedagings Age Group 1-14 Days at Chitwan
District, Nepa. International Journal of Applied Sciences and
Biotechnology (IJASBT), 8(1), 103–106.

Sutarto. (2019). Pemberian ekstrak temulawak dan kunyit untuk meningkatkan

Produktivitas dan sebagai immunostimulator Avian Influenza pada ayam
Pedaging. Jurnal Peternakan Nusantara, 5(No. 2), 1–8.

Suwanto, & Saparinto, C. (2012). Usaha Ayam Kampung Pedaging secara

intensif (1st ed.; H. P, Ed.). Yogyakarta: Lily publisher.

Swayne, D. E. (2009). Avian Influenza (First; David E. Swayne, Ed.). athens:

Wiley.

Tamalluddin, F. (2014). Panduan Lengkap Ayam Pedaging. Tasikmalaya:

Penebar Swadaya Grup.

Tamalludin, F. (2012). Ayam Pedaging 22 hari panen lebih untung (1st ed.;
W. Prasetya, Ed.). Depok: Penebar Swadaya.

Tarigan, S., Wibowo, M. H., Indriani, R., Sumarningsih, S., Artanto, S., Idris,
S., … Ignjatovic, J. (2018). Field effectiveness of highly pathogenic
Avian Influenza H5N1 vaccination in commercial layers in Indonesia.
PloS One, 13(1), 9–12.

Umiarti, A. T. (2020). Management Pemeliharaan Pedaging (1st ed.; S.

Trisila, Ed.). Denpasar: Pustaka larasan.

Wibawan, I. W. T., Mahardika, & G. Ngurah. (2006). Mekanisme Kekebalan

terhadap Avian Influenza pada Unggas. Hemera Zoa, 83(1), 7–17.

World Health Organization. (2021). Vaccine Safety Basics (Dasar-dasar

keamanan vaksin). In WHO.

Yang G, V. S. B. S. S. MR. (2014). Probing antibody-antigen interactions.

Microbiol Spectrum, 2(1), 381–395.
 31

Yuyun, I., Sudarnika, E., & Supriyanto. (2018). Gambaran dan sebaran kasus
suspek HPAI di Jawa Barat tahun 2015-2017 dalam mendukung roadmap
Indonesia bebas AI tahun 2020 (Studi kasus data iskhnas). Direktorat
Kesehatan Hewan, 45–48. Retrieved from
http://repository.pertanian.go.id/handle/123456789/8770
 LAMPIRAN

Lampiran 1. Hasil Laboratorium Umur 14 Hari

32
 33

Lampiran 2. Hasil Laboratorium

 34

Lampiran 3. Hasil Laboratorium Umur 21 Hari

 35

Lampiran 4. Alat dan Bahan

Lampiran 5. Perhitungan 4HA

Hasil Titer 27 = 128 : 4

= 32, maka 1:31

Kebutuhan/plate = 2,5 mL PBS, 2 plate = 5 mL

= 5 mL : 31

= 160 𝜇l antigen dalam 5 mL PBS