DETEKSI ANTIBODI TERHADAP VIRUS

NEWCASTLE DISEASE PADA AYAM PEDAGING

(Gallus domesticus Linnaeus, 1758) DI PETERNAKAN SMS
BEKASI DENGAN UJI HA-HI

NADINI NUR KHODIJAH

PROGRAM STUDI BIOLOGI

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
2023 M / 1444 H
v
 ABSTRAK

Nadini Nur Khodijah. Deteksi Antibodi Terhadap Virus Newcastle Disease

pada Ayam Pedaging (Gallus domesticus Linnaeus, 1758) di Peternakan SMS
Bekasi dengan Uji HA-HI. Program Studi Biologi. Fakultas Sains dan
Teknologi. Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. 2023.
Dibimbing oleh Narti Fitriana dan Fahri Fahrudin.
Virus Newcastle Disease (ND) meningkatkan angka kematian ayam pedaging
(Gallus domesticus Linnaeus, 1758) di Peternakan SMS Bekasi. Antisipasi
kematian ayam pedaging adalah dengan memberikan vaksin ND pada Day Old
Chicken (DOC) atau ayam umur 1 hari, namun kasus ND tetap terjadi di
peternakan dengan prevalensi ±10%. Penelitian ini bertujuan untuk mendeteksi
keberadaan antibodi ND pada ayam pedaging umur 14, 18 dan 21 hari. Penelitian
ini dilakukan pada bulan Maret-Mei 2022 menggunakan metode survei. Sampel
diambil dari 10% total populasi 1 flok di Peternakan SMS Bekasi. Total sampel
pada penelitian ini adalah 45 sampel yang terdiri dari masing-masing 15 sampel
umur 14, 18 dan 21 hari. Uji Haemagglutination Assay (HA) merupakan uji
pendahuluan yang menghasilkan nilai titer antigen 27, 27 dan 28. Titer HA
digunakan untuk menghitung jumlah antigen pada uji 4HA. Hasil uji
Haemagglutination Inhibition (HI) adalah nilai titer antibodi ayam pedaging.
Antibodi tidak terdeteksi pada ayam umur 14 dan 18 hari, dan terdeteksi sebanyak
2 sampel pada umur 21 hari. Nilai OR adalah 0, yaitu variabel berhubungan
negatif dengan titer antibodi. Kesimpulan dari penelitian ini adalah antibodi ND
terdeteksi pada ayam pedaging umur 21 hari sebesar 13,3% sedangkan pada umur
14 dan 18 hari antibodi ND tidak terdeteksi.
Kata kunci: Ayam pedaging; Titer antibodi; Virus Newcastle disease

vi
 ABSTRACT

Nadini Nur Khodijah. Antibody Detection Against Newcastle Disease Virus in

Broiler Chickens (Gallus domesticus Linnaeus, 1758) at SMS Bekasi Farm
with HA-HI Test. Department of Biology. Faculty of Sains and Technology.
State Islamic University Syarif Hidayatullah Jakarta. 2023. Advised by Narti
Fitriana and Fahri Fahrudin.
Newcastle Disease (ND) virus increase in the mortality rate of broiler chickens
(Gallus domesticus Linnaeus, 1758) in SMS Bekasi Farm. Anticipation of the
death of broiler chickens is by giving the ND vaccine to Day Old Chicken (DOC)
or chickens 1 day old, but cases of ND still occur in farms with a prevalence of
±10%. This study aims to detect the presence of ND antibodies in broilers aged 14,
18 and 21 days. This research was conducted in March-May 2022 using a survey
method. Samples were taken from 10% of the total population of 1 flock at SMS
Bekasi Livestock. The total sample in this study was 45 samples consisting of 15
each aged 14, 18 and 21 days. The Haemagglutination Assay (HA) test is a
preliminary test that produces antigen titer values of 27, 27 and 28. The HA titer
is used to calculate the amount of antigen in the 4HA test. The Haemagglutination
Inhibition (HI) test showed broiler antibody titer values. Antibodies were not
detected in chickens aged 14 and 18 days, and were detected in 2 samples at 21
days of age. The OR value is 0, that is, the variable is negatively related to the
antibody titer. The conclusion of this study was that ND antibodies were detected
in broilers aged 21 days by 13.3% while at 14 and 18 days of age ND antibodies
were not detected.
Keywords: Antibody titer; Broiler chicken; Newcastle disease Virus

vii
 KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum warahmatullahi wabarakatuh
Segala puji bagi Allah SWT atas rahmat dan karunia-Nya yang telah
memberikan kemudahan sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan
judul “Deteksi Antibodi Terhadap Virus Newcastle Disease Pada Ayam Pedaging
(Gallus domesticus Linnaeus, 1758) di Peternakan SMS Bekasi dengan Uji HA-
HI” sebagai syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Sains pada Program Studi
Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri Syarif
Hidayatullah Jakarta.

Penulis ingin mengucapkan terima kasih atas dukungan dari banyak pihak
yang terlibat dalam penulisan skripsi ini. Penulis berterima kasih kepada:

1. Ir. Nashrul Hakiem, S.Si., M.T., Ph.D. selaku Dekan Fakultas Sains dan
Teknologi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
2. Dr. Priyanti selaku Ketua Program Studi Biologi Fakultas Sains dan
Teknologi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
3. Narti Fitriana, M.Si. selaku Dosen Pembimbing I dan Sekretaris Program
Studi Biologi Fakultas Sains dan Teknologi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
4. Fahri Fahrudin, M.Si. selaku Dosen Pembimbing II.
5. Indri Garnasih, M.Si., dan drh. Novia Herwandi, MPH selaku Dosen Penguji
Seminar Proposal dan Hasil Penelitian.
6. Dr. Dasumiati dan Dr. Fahma Wijayanti selaku Dosen Penguji Sidang
Munaqosyah
7. Ernawati, S.P., Annissa Ambaryati Mahani, S.Pi., Luthfia Masykuroh, S.Si.,
dan pihak peternakan yang telah memberikan izin dan kesempatan untuk
melakukan penelitian di Pusat Pelayanan Kesehatan Hewan dan Peternakan
DKI Jakarta dan Peternakan SMS Bekasi.
8. Umi, Ayah, Abi serta semua pihak yang terlibat membantu penulis dalam
penyusunan skripsi.

Oleh karena itu, penulis ucapkan terima kasih kepada semua pihak yang
telah membantu.

Wassalamu’alaikum warahmatullahi wabarakatuh

Jakarta, Januari 2023

Penulis

viii
 DAFTAR ISI
Halaman
ABSTRAK ..............................................................................................................v
ABSTRACT .......................................................................................................... vi
KATA PENGANTAR ......................................................................................... vii
DAFTAR ISI ....................................................................................................... viii
DAFTAR TABEL ................................................................................................ ix
DAFTAR GAMBAR ..............................................................................................x
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xi

BAB I PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang .........................................................................................1
1.2. Rumusan Masalah ....................................................................................3
1.3. Tujuan Penelitian .....................................................................................3
1.4. Manfaat Penelitian ...................................................................................4
1.5. Kerangka Berpikir .................................................................................. 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Ayam Pedaging (Broiler).........................................................................5
2.2. Newcastle Disease (ND) ..........................................................................7
2.3. Sistem Imun (Antibodi dan Antigen) ....................................................10
2.4. Uji Haemagglutination Assay / Haemagglutination Inhibition ............ 11

BAB III METODE PENELITIAN

3.1. Waktu dan Tempat .................................................................................13
3.2. Alat dan Bahan ......................................................................................13
3.3. Rancangan Penelitian.............................................................................13
3.4. Cara Kerja ..............................................................................................14
3.5. Parameter Pengamatan...........................................................................17
3.6. Analisis Data ......................................................................................... 17

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Hasil Uji HA dan 4 HA .........................................................................18
4.2. Hasil Uji HI............................................................................................21
4.3. Hubungan Titer Antibodi dengan Perbedaan Umur Ayam .................. 25

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

5.1. Kesimpulan ............................................................................................32
5.2. Saran ..................................................................................................... 32

DAFTAR PUSTAKA ...........................................................................................33

LAMPIRAN ..........................................................................................................41

ix
 DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Parameter pengamatan titer antibodi....................................................... 17
Tabel 2. Hasil uji HA ayam pedaging umur 14, 18 dan 21 hari ........................... 19
Tabel 3. Hasil uji HI pada serum ayam pedaging umur 14, 18 dan 21 hari .......... 24

x
 DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Kerangka berpikir penelitian deteksi antibodi virus ND pada ayam
pedaging di Peternakan SMS Bekasi ................................................... 4
Gambar 2. Ilustrasi hasil uji HA pada microplate................................................. 15
Gambar 3. Ilustrasi hasil uji 4 HA pada microplate.............................................. 16
Gambar 4. Ilustrasi hasil uji HI pada microplate .................................................. 16
Gambar 5. Hasil uji HA ayam pedaging umur 14 hari pada microplate............... 18
Gambar 6. Hasil uji 4 HA ayam pedaging umur 14 dan 18 hari ........................... 20
Gambar 7. Hasil uji HI terhadap sampel serum ayam Pedaging (Gallus domesticus)
umur 14 hari ....................................................................................... 22

xi
 DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Titer antibodi ayam pedaging umur 14, 18 dan 21 hari.................... 41
Lampiran 2. Perhitungan 4 HA ............................................................................. 42
Lampiran 3. Perhitungan Odds Ratio (OR)........................................................... 43
Lampiran 4. Lembar hasil uji HA-HI di Laboratorium Diagnostik ...................... 43

xii
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Ayam pedaging (Gallus domesticus) merupakan salah satu jenis ayam
yang memiliki prospek ternak yang tinggi dengan perputaran modal yang cepat
baik dalam peternakan skala kecil maupun skala besar. Hal ini dikarenakan
jumlah permintaan ayam pedaging di pasar terus meningkat seiring dengan
peningkatan pendapatan dan jumlah penduduk. Berdasarkan data Survei Ekonomi
Nasional (SUSENAS) dalam 10 tahun terakhir terdapat peningkatan konsumsi
daging ayam ras pedaging sebanyak 5,64% pertahun. Pulau Jawa mendominasi
dengan total kontribusi daging ayam ras pedaging sebesar 69,79% dengan urutan
tertinggi dari Provinsi Jawa Barat sebesar 35,37% (Indarti, 2017).
Provinsi Jawa Barat memiliki kontribusi terbesar dalam produksi daging
ayam, hal ini dapat dibuktikan pada tahun 2020 terdapat 760.143.059 ekor ayam
ras pedaging siap potong (BPS, 2021). Provinsi Jawa Barat khususnya peternakan
di daerah Kabupaten Bekasi dinilai penting. Selain karena bisnis yang
menguntungkan, peternakan di Kabupaten Bekasi berperan sebagai penyangga
ketersediaan daging ayam di DKI Jakarta. Data ini menunjukkan bahwa DKI
Jakarta menjadi wilayah sentra konsumsi yang menerima pasokan daging ayam
dari wilayah penyangga (Indarti, 2017).
Perputaran perdagangan dan pemenuhan kebutuhan ini dapat terganggu
oleh faktor internal maupun eksternal. Salah satunya adalah penyebaran penyakit
seperti tetelo, gumboro, berak kapur dan flu (Retno et al., 2014). Kasus ini masih
sering terjadi di Indonesia khususnya tetelo atau Newcastle Disease (ND) yang
mewabah secara berulang di Jawa Barat sejak tahun 2009 (Putri et al., 2017).
Penyakit ini merupakan penyakit menular pada unggas yang menyebabkan
terjadinya morbiditas dan mortalitas tinggi sehingga dapat menjadi ancaman
terhadap industri peternakan (Brown & Bevins, 2017).
Penyakit ini disebabkan oleh virus ND atau Avian Paramyxovirus serotype
1 (APMV-1) yang bersifat sangat menular dan dapat menyerang berbagai jenis
unggas (Kencana et al., 2015). Penyebaran yang cepat dan belum ditemukannya

1
 2

obat yang ampuh menyebabkan wabah ND menimbulkan kerugian besar bagi

peternak, salah satunya Peternakan Satwa Mandiri Sejahtera (SMS) di Kabupaten
Bekasi. Pada bulan Juni tahun 2021 dilaporkan sebanyak 2.840 ekor ayam ras
pedaging mati dengan kerugian ditaksir mencapai Rp 180.000.000,-. Wabah ini
juga berdampak pada penurunan tingkat produktifitas pengiriman daging, melihat
peternakan ini merupakan salah satu pemasok kebutuhan daging di DKI Jakarta.
Wabah ND dapat dicegah dengan melakukan vaksinasi unggas secara
efektif. Biosekuriti dan sanitasi yang ketat di wilayah peternakan juga menjadi
faktor pendukung yang baik untuk mencegah virus ND kembali menginfeksi
unggas (Su et al., 2018). Walaupun vaksin telah diterapkan ND masih menjadi
penyebab sebagian besar kematian ayam di Indonesia (Indriani & Dharmayanti,
2016b). Kematian ayam pedaging di Peternakan SMS didominasi oleh ayam
dengan rentang usia 18-21 hari. Pada beberapa kasus lain ditemukan ayam mati
pada usia 2-3 minggu (Alemneh, 2019).
Hal ini disebabkan oleh beberapa faktor, salah satunya antibodi maternal
yang mulai menurun sehingga ayam rentan terserang penyakit pada usia 11-20
hari (Wiedosari & Wahyuwardani, 2015). Kematian ayam di usia 2-3 minggu
sangat merugikan peternak karena rentang umur yang dekat dengan umur panen
yaitu 21-23 hari. Pada beberapa kasus ditemukan kematian lebih sering terjadi
pada umur 14 hari (Subedi et al., 2020). Penelitian terdahulu mengenai respon
imun ayam petelur pascavaksinasi ND dan Egg Drop Syndrome menyatakan
bahwa pada minggu ke-2 menuju minggu ke-3 pascavaksinasi, antibodi ayam
menurun sehingga dibutuhkan booster (Kencana et al., 2017).
Berdasarkan penelitian dan fakta diatas, maka pada penelitian ini
dilakukan uji untuk mengetahui titer antibodi ayam terhadap virus ND dengan
rentang umur 14, 18 dan 21 hari. Uji titer antibodi ini diharapkan dapat
memberikan data dan informasi mengenai keberadaan antibodi yang terbentuk
pascavaksinasi. Menurunnya antibodi pada umur tertentu dapat mengindikasikan
adanya penurunan tingkat keprotektifan vaksin terhadap virus. Sehingga
penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi tambahan kepada pihak
peternakan terkait titer antibodi yang terbentuk dari vaksin yang digunakan dan
 3

melakukan evaluasi terhadap proses vaksinasi, sanitasi, dan hal-hal yang berkaitan
dengan keberhasilan vaksinasi.
Salah satu cara untuk mengukur tingkat proteksi vaksin pascavaksinasi
adalah dengan uji Haemagglutination Assay (HA) dan Haemagglutination
Inhibition (HI). Uji HA dan HI merupakan uji serologi yang digunakan untuk
mendeteksi nilai antibodi dari suatu organisme. Keunggulan uji ini yaitu material
yang dibutuhkan mudah didapatkan, termasuk kedalam uji yang sederhana, cepat
dan murah. Prinsip uji HA adalah terjadi pengikatan atau penggumpalan antara
protein hemaglutinin dari antigen dengan reseptor pada Red Blood Cell (RBC).
Reaksi ini disebut sebagai reaksi hemaglutinasi yang akan terlihat seperti
kristal merata atau difusi pada microplate. Bentuk kristal merata merupakan hasil
positif yang akan dihitung sampai sumuran terakhir terjadinya aglutinasi
sempurna (end point) dan menghasilkan titer HA atau titer antigen. Uji HA akan
dilanjutkan pada uji 4 Haemagglutination Assay (4 HA) yang akan menentukan
ketepatan antigen yang digunakan yaitu 4 HA unit dan dilanjutkan pada uji HI.
Prinsip uji HI adalah terjadi hambatan hemaglutinasi antara antigen dan RBC oleh
antibodi yang terdapat di dalam serum darah uji pascavaksinasi.
Hambatan hemaglutinasi akan terlihat seperti aliran (tears drop) pada
microplate. Bentuk ini merupakan hasil positif yang akan dihitung sebagai nilai
titer HI atau titer antibodi. Analisis dilakukan pada hasil titer antibodi ketiga
kelompok ayam dan dihubungkan dengan faktor umur. Hasil titer akan menjadi
evaluasi peternak dalam proses vaksinasi selanjutnya. Nilai titer antibodi yang
protektif bagi ayam terhadap virus ND menurut standar ASEAN adalah 24 HI
(Kencana et al., 2015). Ayam dengan nilai titer di bawah 24 dinyatakan tidak
protektif atau rentan terinfeksi virus ND.
1.2. Rumusan Masalah
Umur berapakah antibodi ND pada ayam pedaging terdeteksi dengan uji
HA-HI berdasarkan kategori umur 14, 18 dan 21 hari?

1.3. Tujuan Penelitian

Tujuan penelitian ini adalah mendeteksi keberadaan antibodi ND pada
ayam pedaging umur 14, 18 dan 21 hari.
 4

1.4. Manfaat Penelitian

Hasil penelitian ini diharapkan dapat dijadikan sebagai bahan
pertimbangan pihak peternakan SMS dan sekitarnya untuk melakukan vaksinasi
ND atau booster pada umur ayam dengan antibodi rendah.

1.5. Kerangka Berpikir

Kerangka berpikir yang menjadi landasan dilakukannya penelitian ini
adalah sebagai berikut (Gambar 1).

Banyaknya kasus ND yang mewabah di Jawa Barat sejak tahun 2009

Peternakan SMS melakukan vaksinasi pada umur ayam 1 hari, namun pada tahun
2020 terdapat kasus ND dengan kematian sebanyak 2.840 ekor ayam

Produksi ayam pedaging terganggu dan menimbulkan kerugian yang cukup besar

Antibodi ayam di Peternakan SMS perlu dikaji sebagai indikator efektivitas

vaksin ND

Vaksin kedua perlu dilakukan pada kelompok umur ayam rentan penyakit

Gambar 1. Kerangka berpikir penelitian deteksi antibodi virus ND pada ayam

pedaging di Peternakan SMS Bekasi
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Ayam Pedaging (Broiler)

Ayam terbagi menjadi dua yaitu ayam ras pedaging dan ayam buras.
Ayam ras pedaging dijadikan sebagai salah satu sumber protein hewani oleh
masyarakat Indonesia. Hal ini dikarenakan dari segi ekonomi ayam pedaging
memiliki harga yang lebih terjangkau dan ketersediaan yang lebih banyak
dibandingkan dengan ayam buras (Ukmawati et al., 2018). Ayam pedaging
(Gallus domesticus) adalah ayam ras yang dikembangbiakkan untuk dimanfaatkan
dagingnya dan memiliki masa pertumbuhan yang cepat (Kikiyani et al., 2020).

Ayam pedaging disebut sebagai ayam broiler karena termasuk ke dalam

ayam strain unggul yang berasal dari daerah subtropis dan merupakan hasil
rekayasa genetik. Ayam tergolong sebagai binatang ternak yang memiliki banyak
manfaat dan perlu dikaji secara ilmiah. Al-Qur’an telah menginformasikan
beberapa hal terkait binatang ternak sebelum ilmuan biologi ada di muka bumi.
Allah berfirman dalam Al Qur’an surat Al-An’am ayat 142 sebagai berikut :

ٰ ‫شا ۗ ُكلُ ْوا ِم َّما َرزَ قَ ُك ُم‬

‫ّللاُ َو َل تَت َّ ِبعُ ْوا‬ ً ‫َو ِمنَ ْالَ ْن َع ِام َح ُم ْولَةً َّوفَ ْر‬
١٤٢‫عدُو ُّم ِبيْن‬ َ ‫شي ْٰط ِن اِنَّه لَ ُك ْم‬
َّ ‫ت ال‬ ُ ‫ُخ‬
ِ ‫ط ٰو‬
Artinya : “Dan di antara hewan-hewan ternak itu ada yang dijadikan pengangkut
beban dan ada (pula) yang untuk disembelih. Makanlah rezeki yang
diberikan Allah kepadamu, dan janganlah kamu mengikuti langkah-
langkah setan. Sesungguhnya setan itu musuh yang nyata bagimu,” (Q.S
Al-An’am /6:142)

Ayat ini menjelaskan bahwa terdapat 2 jenis binatang ternak berdasarkan

fungsinya, yaitu binatang ternak untuk transportasi seperti kuda dan ternak untuk
dikonsumsi seperti sapi. Kedua binatang dapat dijadikan sebagai Farsya atau
bahan makanan. Kata Farsya dapat diartikan sebagai ternak kecil yang tubuhnya
hampir menyentuh tanah seperti ayam. Ayam pedaging dihasilkan dari

5
 6

persilangan beberapa kelas ayam dengan produktivitas yang tinggi, seperti ayam
kelas Amerika, ayam kelas Inggris dan ayam Plymouth Rock (Mawarni, 2020).

Ayam pedaging termasuk ke dalam kingdom Animalia, filum Chordata,

kelas Aves, ordo Galliformes, famili Phasianidae, genus Gallus, spesies G. gallus
dan subspesies G. g. domesticus (Irawan et al., 2021). Karakteristik tubuh ayam
pedaging di antaranya memiliki bentuk badan yang besar, padat, dan berisi,
memiliki bulu berwarna putih yang merapat ke tubuh ternak, bersifat tenang, dan
produksi telur yang rendah (Mawarni, 2020). Ayam pedaging memiliki ciri khas
yaitu laju pertumbuhannya yang cepat pada umur 1-5 minggu dengan bobot
kisaran 1,3 kg (Susanti et al., 2016).

Konversi pakan yang tergolong sedikit, daging yang lebih besar, dan
waktu panen yang cepat merupakan salah satu kelebihan ayam pedaging.
Kelemahannya adalah memiliki sistem imunitas yang rendah sehingga sangat
rentan penyakit khususnya penyakit yang disebabkan oleh virus dari golongan
Orthomyxovirus dan Paramyxovirus (Puspitaningrum et al.,2021). Virus golongan
Orthomyxovirus akan menyebabkan penyakit Avian Influenza (AI), sedangkan
golongan Paramyxovirus menyebabkan penyakit ND pada ayam (Hosseini et al.,
2021). Selain itu ayam pedaging memiliki daya adaptasi yang rendah sehingga
membutuhkan pemeliharaan secara intensif.

Kelompok usia pada ayam pedaging terbagi menjadi 2 fase, yaitu fase
starter dan fase finisher. Fase starter adalah fase ayam pedaging dari Day Old
Chicken (DOC) hingga berumur 21 hari. Pada fase starter terdapat fase awal mula
ayam pedaging hidup yaitu dari DOC hingga umur 14 hari. Fase ini dinamakan
fase brooding yang perlu perhatian khusus karena kondisinya yang kritis. Fase
finisher adalah fase ayam pedaging yang berumur 22-35 hari atau sampai ayam
siap potong (Fatmaningsih et al., 2016). Kelompok usia pada fase brooding
khususnya pada umur 14 hari sangat rentan terhadap penyakit.

Ayam pada umur 14 hari belum mengembangkan sistem termoregulasi

sehingga rentan terhadap penyakit. Penelitian mengenai penyakit pada kelompok
usia ayam pedaging 1-14 hari telah dilakukan di Distrik Chitwan, Nepal.
Penelitian tersebut menjelaskan bahwa ayam pedaging pada usia 8-14 hari
 7

memiliki tingkat mortalitas yang tinggi yaitu sebesar 65,19% dibandingkan

dengan kelompok usia 1-7 hari. Kasus mortalitas tertinggi terjadi pada usia 14
hari (Subedi et al., 2020). Beberapa cara dapat dilakukan untuk melindungi ayam
pedaging dari serangan penyakit, salah satunya adalah dengan vaksinasi.
Vaksinasi yang baik dilakukan melalui 3 tahap di antaranya tahap pertama yaitu
vaksin ND, tahap kedua yaitu vaksin IBD, dan tahap ketiga yaitu vaksin ND II.

Tahap pertama dilakukan saat DOC atau usia 1 hari. Tahap kedua
dilakukan pada ayam berusia 12 hari, dan tahap ketiga pada usia 22 hari
(Biyatmoko & Rostini, 2020). Peternak dianjurkan untuk memberikan vaksin ND
kedua atau booster agar ayam pedaging tahan terhadap penyakit ND. Pengukuran
titer antibodi pada ayam pedaging diperlukan untuk dapat mengetahui tingkat
keberhasilan vaksin yang ditandai dengan nilai protektif atau nonprotektif. Ayam
dengan titer nonprotektif harus diberikan booster agar dapat terhindar dari
penyakit ND (Kurnianto et al., 2016).

2.2. Newcastle Disease (ND)

2.2.1. Sejarah Penyebaran
Newcastle Disease (ND) atau tetelo adalah penyakit endemik pada unggas
yang disebabkan oleh virus ND. Penyakit ini termasuk ke dalam daftar penyakit
menular pada Office International des Epizootica (OIE) sebagai notifiable disease
atau penyakit yang merugikan secara ekonomis (Lijung et al., 2020). Penyakit ini
menyebabkan angka mortalitas, morbiditas, penurunan produksi dan kerugian
ekonomi yang tinggi di negara Asia Tenggara, Timur Tengah, Eropa, Afrika dan
Amerika. Seperti wabah ND pada tahun 2003 di Amerika yang menyebabkan 3,16
juta burung mati dengan kerugian mencapai 121 juta USD (Brown & Bevins,
2017).

Virus ND termasuk ke dalam ordo Mononegavirales, famili

Paramyxoviridae, subfamili Paramyxovirinae, genus Paramyxovirus, serotipe
Paramyxovirus type I (PMV-I) (Perdana, 2016). Sebelumnya ND identik dengan
Avian parmyxovirus type 1 (APMV-1), namun karena ada perubahan taksonomi
diganti dengan Avian avulavirus 1 (Sina et al., 2017). Penyakit ND juga
merupakan salah satu penyakit penting pada unggas yang ditemukan 90 tahun
 8

yang lalu. Setelah identifikasi awal, pada tahun 1926 virus ini menyebar ke negara
Korea, India, Filipina, Australia, Kenya, Inggris dan Indonesia khususnya Pulau
Jawa (Brown & Bevins, 2017).

Penyakit ini kemudian menyebar ke negara Palestina, Suriah, Gabon,

Republik Kongo, Eropa, dan Amerika Serikat pada tahun 1952. Pada tahun 1960-
an penyakit ND menjadi panzootik yang telah menyebar ke seluruh wilayah di
antaranya Amerika Tengah, Cina, kecuali wilayah Antartika. Penyebaran ini
dipengaruhi oleh pengawasan industri peternakan yang kurang baik, wilayah
geografis, migrasi global dan adanya perdagangan burung dari ordo
Psittaciformes tanpa karantina yang tepat (Dimitrov et al., 2017). Keberlanjutan
endemik pada unggas khususnya ayam terjadi akibat kelompok virus ND genotipe
VII yang merupakan strain dengan penyebaran dan perkembangan yang cepat.

Penyebaran virus ini dibuktikan dengan penelitian terdahulu yang

menyatakan virus ND genotipe VII bermigrasi ke Asia Selatan dari Asia
Tenggara, dan penyebaran di Timur Tengah dari Asia Timur. Tingkat migrasi
terbesar yang dipengaruhi oleh faktor geografis terjadi pada Timur Tengah dari
Asia Timur dengan persentase sebesar 95%. Penyebaran virus ND yang
disebabkan oleh perdagangan burung ordo Psittaciformes terbukti berpengaruh
terhadap ordo Galliformes (Hicks et al., 2019). Wilayah geografis distribusi yang
luas dan strain virus yang lebih ganas menyebabkan pandemi ke-5 sangat
diantisipasi dalam beberapa tahun ke depan (Bello et al., 2018).

2.2.2. Penularan dan Gejala Klinis

Penularan virus ND dapat terjadi secara langsung maupun tidak langsung

seperti melalui inhalasi, sekret respiratori yang terinfeksi atau pakan yang
terkontaminasi lalu tertelan (Novryantoro, 2019). Pada ayam kecepatan penularan
juga dipengaruhi oleh galur virus. Galur virus ND dikelompokkan menjadi 4
patotipe, yaitu non-virulent, lentogenik, mesogenik, dan velogenik.
Pengelompokan ini didasarkan atas kecepatan virulensi virus ND, seperti
lentogenik (virulensi rendah), mesogenik (virulensi sedang) dan velogenik
(virulensi sangat ganas) (Putri et al., 2021).
 9

Virus ND memiliki kemampuan untuk menularkan penyakit dari hewan ke

manusia atau disebut zoonosis (Farn et al., 2020). Gejala klinis yang timbul jika
seseorang terinfeksi virus ND di antaranya influenza, demam dan sakit kepala
(CFSPH, 2016). Infeksi paling umum terjadi pada orang yang bekerja di rumah
pemotongan hewan atau peternakan unggas (Brown & Bevins, 2017). Gejala
klinis juga akan timbul pada unggas yang terinfeksi virus ND. Ayam pedaging
yang telah terinfeksi dapat menularkan virus melalui pernapasan pada hari ke 1-2,
bergantung pada masa inkubasi virus ND (Indriani & Dharmayanti, 2016b).

Ayam yang terinfeksi virus ND khususnya strain velogenik viscerotropik

akan menimbulkan gejala klinis, di antaranya hilang nafsu makan, diare berdarah,
sesak nafas, paralysis partialis, dan batuk. Pada strain velogenik-neurotropik
(VNND) ayam akan mengalami kelumpuhan. Ayam pada strain lentogenik akan
mengalami gangguan pernapasan ringan (Pudjiatmoko, 2014). Gejala yang cukup
parah dengan penyebaran yang cepat menyebabkan virus ini wajib dikendalikan.
Salah satu cara efektif untuk mencegah penyebaran virus ND khususnya strain
velogenik adalah dengan vaksinasi (Putri et al., 2021).

2.2.3. Vaksin

Vaksin merupakan salah satu usaha untuk mengurangi gejala dari infeksi
dan mencegah penyebaran virus ND. Vaksin ND yang digunakan di Indonesia
terbagi menjadi 2 tipe, yaitu vaksin aktif dan inaktif. Vaksin aktif memiliki biaya
produksi yang lebih murah, dan dapat diberikan melalui cairan (minum) (Indriani
& Dharmayanti, 2016b). Vaksin aktif di Indonesia umumnya menggunakan strain
lentogenik dan mesogenik, sedangkan vaksin inaktif menggunakan strain
velogenik. Vaksin inaktif lebih direkomendasikan untuk diterapkan di Indonesia
karena kesesuaiannya dengan strain velogenik genotipe VII yang mendominasi
dibandingkan strain lainnya (Kurnianingtyas et al., 2017).

Penelitian lain menyatakan bahwa vaksin inaktif genotipe VII terbukti

mampu memberikan perlindungan 100% dari penyakit ND di wilayah Indonesia
(Indriani & Dharmayanti, 2016a). Beberapa kasus kematian mendadak di
peternakan diduga karena keterlambatan pemberian vaksin. Dosis yang
direkomendasikan untuk vaksinasi ayam pedaging adalah 1 tetes mata dan
 10

diberikan pada Day Old Chicken (DOC) atau ayam berumur 1 hari (Badruzzaman
et al., 2020). Vaksinasi kedua atau booster dapat dilakukan setelah ayam berumur
12-21 hari untuk mengantisipasi adanya penurunan antibodi yang menyebabkan
ayam rentan penyakit (Masum et al., 2014).

Terdapat beberapa metode vaksinasi ND di antaranya tetes mata, oral,

suntikan, dan tetes hidung. Keempat metode memiliki dampak yang berbeda
terhadap efektivitas vaksin. Metode vaksinasi yang efektif adalah dengan tetes
mata. Hal ini didukung oleh penelitian yang menyatakan bahwa ayam pedaging
dengan metode vaksinasi tetes mata menunjukan respon imun yang lebih tinggi
dibandingkan metode oral (Balqis et al., 2019).

2.3. Sistem Imun (Antibodi dan Antigen)

Sistem imun adalah sistem kekebalan tubuh makhluk hidup yang
melindungi diri dari paparan benda asing seperti bakteri dan virus. Sistem imun
terbagi menjadi dua, yaitu sistem imun spesifik (acquired adaptive immunity) atau
imun buatan dan sistem imun nonspesifik (innate immunity) atau imun bawaan
(Fitri & Putra, 2021). Sistem imun nonspesifik adalah sistem imun yang telah ada
sejak lahir seperti pertahanan fisik (kulit, bersin dan batuk), biokomia (pH asam
dari keringat dan HCl pada lambung) dan seluler (fagosit dan sel natural killer).
Sistem imun ini merupakan bentuk pertahanan awal tubuh dengan mendeteksi zat
asing yang tidak mampu diingat oleh sistem imun nonspesifik (Wijayanto, 2020).

Sistem imunitas spesifik atau adaptif adalah imunitas dengan respon

lambat dan melibatkan mekanisme pengenalan spesifik terhadap patogen atau
antigen yang terlibat (Aripin, 2019). Sistem imun ini akan bekerja setelah patogen
berhasil melewati sistem imun nonspesifik. Sistem ini juga memiliki komponen
memori seperti limfosit (sel B dan sel T), sehingga dapat mengenali patogen
selanjutnya. Sel limfosit B (imunitas humoral) memiliki fungsi untuk
pembentukan antibodi yang beredar didalam darah (Dina et al., 2019).

Sel limfosit T (imunitas seluler) tidak berfungsi untuk membentuk

antibodi, namun bertanggung jawab atas penghancuran sel penghasil antigen
(Suciyani et al., 2017). Antigen adalah senyawa asing yang bersifat multivalen
dan dapat menginduksi pembentukan antibodi sebagai bentuk respon imun. Sifat
 11

multivalen adalah sifat antigen yang memiliki lebih dari satu macam titik
pengenalan sehingga antigen dapat bereaksi dengan antibodi. Struktur antigen
akan mempengaruhi kemampuan antigen untuk dapat bereaksi dengan antibodi,
seperti keberadaan epitop yaitu bagian dari molekul antigen yang berikatan
bereaksi dengan antibodi pada limfosit T (Antari, 2017).

Antigen yang masuk akan memicu tubuh ayam untuk memberikan respon
yaitu dengan pembentukan antibodi selama 1 minggu (Mufidah et al., 2020).
Antibodi disebut sebagai protein imunoglobulin (Ig) yang disekresi oleh plasma
darah dan dapat digolongkan ke dalam 5 golongan, yaitu Ig D, Ig M, Ig A, Ig G,
dan Ig E (Ahmad et al., 2018). Antibodi telah ada sejak minggu pertama ayam
menetas dan berasal dari induknya. Antibodi ini disebut antibodi maternal.
Antibodi terbentuk ketika induk mentransfer antibodi ke dalam kuning telur
dengan melewati 2 tahap, yaitu transfer imun menuju kuning telur dan transfer
antibodi menuju embrio yang sedang berkembang (Mufidah et al., 2020).

Antibodi maternal akan melindungi ayam dari serangan virus dan bakteri
pada waktu tertentu. Antibodi ini akan menurun drastis pada ayam berumur 10
hari. Hal ini didukung dengan penelitian yang menyatakan nilai antibodi ayam
pada minggu ke 2 menurun hingga 22 (Putra et al., 2020). Maka sebagai tindakan
pencegahan, peternak memberikan vaksin agar ayam mampu terhindar dari
penyakit jika antibodi maternal sudah tidak ada. Untuk mengetahui keberadaan
antibodi pada tubuh ayam pedaging, dilakukan uji serologi titer antibodi yaitu uji
Haemagglutination Assay (HA) / Haemagglutination Inhibition (HI).

2.4. Uji Haemagglutination Assay / Haemagglutination Inhibition

Uji Haemagglutination Assay (HA) dan Haemagglutinaton Inhibition (HI)
merupakan uji serologi yang umum digunakan untuk diagnosis penyakit ND pada
unggas (Chaichana et al., 2018). Haemagglutination Assay adalah tes diagnostik
yang dilakukan untuk mendeteksi jaringan embrio supernatan, cairan kultur sel
atau allantoic fluid dari telur ayam dan mengukur titer antigen. Beberapa virus
seperti ND atau dari kelompok Paramyxovirus dapat terdeteksi karena memiliki
sifat hemaglutinasi. Virus yang memiliki sifat ini akan bereaksi dan membentuk
endapan homogen yang dinyatakan sebagai HA positif (+).
 12

Prosedur pengujian HA pada tes diagnostik dan vaksin untuk hewan

terestrial telah digunakan oleh National Veterinary Services Laboratory (NVSL)
dan The World Organization for Animal Health (OIE) (Spackman, 2020).
Haemagglutinaton Inhibition adalah salah satu metode yang diandalkan untuk
mengukur titer antibodi terhadap virus karena merupakan cara yang cepat dan
mudah untuk diterapkan di laboratorium (Truelove et al., 2016). Uji ini
merupakan teknik utama untuk mengukur titer antibodi virus influenza, dan
dijadikan sebagai landasan keputusan strategi vaksinasi. Antibodi dapat
memblokir penggumpalan eritrosit dengan mengikat glikoprotein permukaan
virus dengan sialic acid pada permukaan eritrosit.

Ketika virus dan antibodi berada pada konsentrasi yang seimbang,

keduanya akan membentuk matriks yang akan mencegah eritrosit tenggelam ke
dasar sumur pelat atau tabung mikrotiter. Proses ini akan terlihat dan diamati,
sehingga titer dapat dihitung sesuai dengan hasil pengikatan antibodi yang
ditandai dengan “aliran” (Spackman, 2020). Uji serologis menggunakan uji HA-
HI berkaitan dengan keberadaan antigen dan antibodi yang ada didalam serum
darah ayam pedaging. Antibodi yang terdeteksi menandakan bahwa ayam
pedaging sudah pernah terpapar dengan virus ND, baik terkena secara alami atau
karena vaksinasi (Yesica, 2013).
 BAB III

METODE PENELITIAN

3.1. Waktu dan Tempat

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Maret-Mei 2022 di Peternakan
Ayam Satwa Mandiri Sejahtera (SMS), Kabupaten Bekasi, Jawa Barat. Sampel
darah ayam pedaging akan diuji di Laboratorium Diagnostik Pusat Pelayanan
Kesehatan Hewan dan Peternakan (Pusyankeswannak), Ragunan, DKI Jakarta.

3.2. Alat dan Bahan

Alat yang digunakan yaitu sarung tangan, masker, micropipette
multichannel 25-50 µL, micropipette singlechannel, microtip 1000 µL, microtip
10-100 µL, microplate v bottom 96 wells, reservoir, eppendorf, parafilm, rak
tabung, tisu, centrifuge, gelas piala, titer plate shaker, vortex, timer, syringe
disposable 3 cc, cooling box, wadah plastik, tabung reaksi, gelas ukur, wadah
sampah, pulpen, buku catatan dan spidol. Bahan yang digunakan yaitu sampel
darah ayam umur 14, 18 dan 21 hari, Red Blood Cell (RBC) 1%, akuabides,
alkohol 70%, Phosphate Buffered Saline (PBS) 10x, dan antigen ND 4 HA unit.

3.3. Rancangan Penelitian

Metode penelitian ini adalah metode survei dengan teknik pengambilan
sampel menggunakan metode random sampling. Sampel diambil sebanyak 10%
dari total populasi 1 flok di peternakan mengikuti teori pada penelitian deskriptif
(Yanestria, 2015). Total populasi ayam pedaging pada 1 flok adalah sebanyak 150
ekor. Sampel yang diambil pada penelitian ini adalah 15 ekor ayam. Total sampel
darah pada penelitian ini adalah 45 sampel yang terdiri dari 15 sampel ayam umur
14 hari, 15 sampel umur 18 hari dan 15 sampel umur 21 hari.

Peternakan SMS Bekasi mendapatkan ayam pedaging yang telah diberikan

vaksin ND pada umur 1 hari atau Day Old Chicken (DOC) oleh petugas tempat
penetasan telur ayam (hatchery). Serum darah ayam diperoleh dari ayam di
Peternakan SMS Bekasi. Serum darah akan diambil pada ayam umur 14, 18 dan
21 hari. Keberadaan antibodi pascavaksinasi akan terlihat dari hasil uji HI yaitu
nilai titer antibodi.

13
 14

3.4. Cara Kerja

3.4.1. Koleksi sampel darah
Pengambilan sampel berupa serum darah dilakukan pada ayam umur 14,
18 dan 21 hari. Serum darah didapatkan dengan mengambil darah ayam
menggunakan syringe sebanyak 1 cc dari 1 ekor ayam merujuk pada teori
pengambilan sampel 1-3 cc. Pengambilan darah dilakukan dari bagian vena
pectoralis menggunakan syringe disposable (Martoenus & Djatmikowati, 2015).
Darah didiamkan selama 30 menit - 1 jam lalu diputar dengan centrifuge
berkecepatan 2500 rpm selama 5 menit untuk mendapatkan serum darah.

3.4.2. Pembuatan Red Blood Cell (RBC) dan Phosphate Buffer Saline (PBS)

Sel darah merah atau RBC diambil dari ayam Spesifik Antibodi Negatif
(SAN) di Pusat Pelayanan Kesehatan Hewan dan Peternakan (Pusyankeswannak)
DKI Jakarta. Ayam yang dihasilkan dari telur SAN telah terjamin bebas dari
penyakit pathogen sehingga digunakan sebagai RBC standar di laboratorium
(Kencana et al., 2014). Sampel darah diambil dari vena pectoralis, didiamkan
selama 30 menit – 1 jam lalu diputar dengan centrifuge. Supernatan yang
diperoleh kemudian dipisahkan.

Proses ini dilakukan sebanyak 3x pengulangan. Pembuatan RBC 10%

dilakukan dengan menambahkan PBS. PBS yang digunakan adalah PBS 1% yang
dibuat dari PBS 10% dengan perbandingan PBS dan akuabides sebesar 1 : 9.
Kemudian RBC dibuat menjadi 1% dengan perbandingan RBC dan PBS yaitu 1 :
9 dalam wadah plastik. Larutan dihomogenkan menggunakan mikropipet.

3.4.3. Uji Haemagglutination Assay (HA)

Diambil sebanyak 25 µL PBS, dimasukkan ke dalam setiap sumuran dari

microplate v bottom 96 wells sampai sumuran ke-11. Sumuran ke-12 berisi 50 µL
PBS. Antigen ND sebanyak 25 µL dimasukkan pada lubang pertama untuk uji
HA. Perlakuan ini dilakukan sebanyak 2x (duplo). Pengenceran kelipatan dua
dengan volume 25 µL dibuat dari lubang pertama sampai sumuran ke-11
kemudian sisa di dalam pipet tip dibuang.
 15

PBS dimasukkan kembali sebanyak 25 µL ke dalam setiap lubang, lalu

dihomogenkan di atas shaker. Sebanyak 25 µL RBC 1% dimasukkan ke dalam
setiap sumuran. Plate akan terhomogenisasi secara sempurna pada shaker lalu
didiamkan selama 40 menit pada suhu ruangan atau 60 menit pada suhu 4℃.
Hasil akhir HA dibaca pada pengenceran tertinggi yang memperlihatkan
aglutinasi sempurna (end point) seperti pada Gambar 2.

Gambar 2. Ilustrasi hasil uji HA pada microplate

Microplate dimiringkan 90o sehingga hasil uji HA dapat terlihat seperti
kristal merata (difusi) dan aliran (tears drop) pada lubang sumuran. Hasil positif
pada uji HA yaitu bentuk kristal merata (difusi), sedangkan hasil negatif pada uji
HA yaitu bentuk aliran (tears drop). Titer HA diketahui dengan menghitung hasil
positif sampai end point dan menjadi nilai n pada pangkat 2n. Pada Gambar 2.
terlihat end point pada sumuran ke-7 sehingga nilai titer HA yaitu 27.

3.4.4. Uji 4 Haemagglutination Assay (4 HA)

Antigen yang dibutuhkan adalah 4 HA unit/25 µL, dibuat dengan

melakukan pengenceran menggunakan PBS sesuai perhitungan dari hasil yang
diperoleh pada uji HA. Berikut proses perhitungan dari pangkat hasil uji HA :

Permisalan hasil uji HA sebagai berikut,

Hasil titer 29 = 512 : 4 = 128 1:127
Kebutuhan / Plate = 2,5 mL PBS
2 plate = 5 mL
Kebutuhan 2 plate = 5 mL : 127
= 40 µL antigen dalam 5 mL PBS (OIE, 2021)
Setelah diperoleh perhitungan titer, antigen sebanyak 40 µL diencerkan di
dalam 5 mL PBS. Lalu PBS sebanyak 25 µL dimasukkan ke-4 sumuran secara
duplo. Antigen ND sebanyak 25 µL diencerkan sampai sumuran ke-4
 16

menggunakan mikropipet lalu buang sisanya. Sebanyak 25 µL PBS dimasukkan

lalu diletakkan pada shaker selama 2-3 menit. Sebanyak 25µL RBS 1%
dimasukkan pada plate, lalu dihomogenkan kembali.

Gambar 3. Ilustrasi hasil uji 4 HA pada microplate

Sampel ditunggu selama 30-40 menit, lalu hasil akan dapat dibaca seperti
pada Gambar 3. Apabila diperoleh 2 mengikat dan 2 mengalir, maka uji 4 HA
telah berhasil. Uji HA dan 4 HA merupakan uji pendahuluan sebelum melakukan
uji HI. Setelah uji 4 HA berhasil maka pengujian dapat dilanjutkan ke uji
Haemagglutination Inhibition (HI).

3.4.5. Uji Haemagglutination Inhibition (HI)

Sebanyak 25 µL PBS dimasukkan ke dalam tiap sumuran pada microplate

v bottom 96 wells. Sebanyak 25 µL serum yang akan diuji diteteskan ke dalam
sumuran pertama. Pengenceran dibuat berkelipatan dua dari sumuran pertama
dengan volume 25 µL sampai sumuran 8. Antigen ND sebanyak 25 µL
ditambahkan (4 HA unit / 25 µL) ke sumuran 1-8 (sumuran ke-12 dengan PBS).
Sumuran didiamkan selama 30-40 menit pada suhu kamar untuk terjadi reaksi
antigen dan antibodi. Suspensi RBC 1% kemudian ditambahkan sebanyak 25 µL
ke dalam setiap sumuran.

Gambar 4. Ilustrasi hasil uji HI pada microplate

Pengocokan dilakukan secara perlahan lalu didiamkan pada suhu ruang
30-40 menit sampai sel darah merah mengendap atau 60 menit pada suhu 4°C.
Hasil dapat diamati dengan menghitung aliran darah yang terjadi pada setiap
sumuran. Bentuk aliran (tears drop) dihitung sebagai nilai n pada pangkat 2n.
Pada Gambar 4. terlihat nilai titer HI yaitu 23.
 17

3.5. Parameter Pengamatan

Titer antibodi dinyatakan positif jika terjadi hambatan pada proses
hemaglutinasi dengan 4 HA unit pada pengenceran ≥24 (OIE, 2021).

Tabel 1. Parameter pengamatan titer antibodi

Nilai titer Keterangan

4
≥2 Protektif
4
<2 Nonprotektif

20 Negatif

3.6. Analisis Data

Data hasil penelitian uji serum darah ayam akan disajikan dalam bentuk
deskriptif, dan dengan menghitung persentase ayam pedaging yang mengandung
antibodi ND. Rumus perhitungan persentase ayam yang mengandung antibodi ND
adalah sebagai berikut :

Jumlah sampel protektif

x 100% (Perdana, 2016)
Jumlah seluruh sampel

Rumus perhitungan untuk mengetahui ada tidaknya hubungan antar ketiga

fase umur ayam dalam pembentukan titer antibodi ND adalah sebagai berikut :
axd
Odds Ratio (OR) = (Akbar et al., 2017)
bxc
Keterangan :
a : Titer antibodi protektif umur pertama
b : Titer antibodi non protektif umur pertama
c : Titer antibodi protektif umur kedua
d : Titer antibodi non protektif umur kedua
 BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Hasil Uji HA dan Uji 4 HA

Penelitian deteksi antibodi virus Newcastle Disease (ND) pada ayam
pedaging (Gallus domesticus) dilakukan melalui 3 tahap yaitu uji
Haemagglutination Assay (HA), uji 4 Haemagglutination Assay (4 HA) dan uji
Haemagglutinaton Inhibition (HI). Pada uji HA akan terjadi reaksi penggumpalan
antara Red Blood Cell (RBC) 1% dan antigen ND. Hasil dari reaksi tersebut akan
terlihat dalam 2 bentuk yaitu bentuk kristal merata dan bentuk aliran (tears drop).
Hasil yang didapat akan menunjukkan nilai titer antigen (Erina et al., 2021).

Gambar 5. Hasil uji HA ayam pedaging umur 14 hari pada microplate

Keterangan :

(a) Baris a yaitu sumuran pertama sampai ke-11 berisi Phosphat Buffer Saline
(PBS), antigen ND, dan RBC 1%
(b) Baris b merupakan perlakuan duplo atau pengulangan uji
(c) Kolom c adalah end point atau sumuran terakhir aglutinasi sempurna
(d) k adalah kontrol
Pada Gambar 5. terlihat bahwa uji HA yang dilakukan secara duplo
menunjukkan hasil end point yang sama. Hasil positif terlihat pada kolom pertama
hingga kolom ke-7 yaitu end point sehingga dinyatakan nilai titer sebesar 27 atau
128 HA unit. Nilai positif ditandai dengan bentuk kristal dan terlihat merata
(difusi) tanpa adanya aliran. Hal ini menandakan bahwa terjadi proses aglutinasi
antara hemaglutinin dengan RBC 1% (Cahyani et al., 2020). Pada kolom
setelahnya yaitu kolom ke-8 sudah mulai terlihat sedikit aliran sehingga
dinyatakan tidak terjadi aglutinasi secara sempurna atau bukan merupakan end
point.

18
 19

Endapan eritrosit yang terbentuk disertai dengan aliran (tears drop)

menunjukkan hasil negatif. Hal ini terjadi karena tidak terdapat aglutinasi antara
RBC 1% dengan protein hemaglutinin (Reid et al., 2022). Pada Gambar 5. terlihat
bahwa aliran yang terjadi dari sumuran kolom ke-8 sampai ke-11 mengalami
pemanjangan. Hal ini disebabkan oleh perbedaan konsentrasi antigen akibat
pengenceran sehingga mempengaruhi proses aglutinasi.

Pengenceran antigen pada uji HA dilakukan dari sumuran kolom pertama

sampai sumuran kolom ke-11. Pengenceran antigen menyebabkan perbedaan
konsentrasi, sehingga semakin ke kanan konsentrasi antigen akan semakin
berkurang. Hal ini menyebabkan sumuran kolom ke-8 dan ke-9 mengalami
pengendapan dengan aliran yang pendek dan masih terjadi aglutinasi sebagian.
Pada sumuran kolom ke-10 dan ke-11 tidak terjadi aglutinasi dan aliran terlihat
lebih panjang.

Tabel 2. Hasil uji HA ayam pedaging umur 14, 18 dan 21 hari

Kelompok Umur (hari) Nilai Titer (HA unit)
14 27
18 27
21 28
Uji HA dilakukan untuk mengetahui jumlah partikel virus yang dapat
mengaglutinasi RBC. Hal ini diperlukan agar uji HI yang dilakukan untuk 45
sampel ayam pedaging pada microplate yang berbeda dapat dikatakan sebanding.
Pada Tabel 2. terlihat ketiga kelompok umur menghasilkan nilai titer antigen yang
ditandai dengan end point seperti yang terlihat pada Gambar 5. end point
menandakan terdeteksinya jumlah partikel virus yang dibutuhkan untuk
mengaglutinasi RBC. Titer HA yang bernilai 27 memiliki arti jumlah virus yang
dapat mengaglutinasi RBC adalah 27 atau 128 HA unit.

Titer dengan nilai 28 HA unit memiliki arti bahwa pengenceran ke-8

merupakan pengenceran tertinggi dan menjadi batas akhir yang mampu
mengaglutinasi RBC secara sempurna. Ketiga nilai titer HA akan berpengaruh
terhadap konsentrasi antigen yang digunakan pada uji selanjutnya yaitu uji 4 HA
(Erina et al., 2021). Perbedaan titer HA menghasilkan perhitungan yang berbeda
untuk uji 4 HA seperti pada Lampiran 2. Namun titer HA tidak berpengaruh
 20

terhadap hasil akhir yaitu titer antibodi dari uji HI. Jika pada uji 4 HA
menunjukkan hasil yang sesuai dengan ketentuan yaitu 2 sumuran terlihat bulat
kancing dan 2 sumuran setelahnya terlihat aliran (tears drop) maka jumlah
antigen yang digunakan tepat.

Pada uji HA, RBC yang digunakan ketiga kelompok umur merupakan
suspensi RBC standar laboratorium yang didapatkan dari ayam di Pusat Pelayanan
Kesehatan Hewan dan Peternakan DKI Jakarta. Uji HA menjadi uji prasyarat
untuk memastikan antigen yang digunakan sudah sesuai dengan standar. Pada
Tabel 2. tercantum hasil titer yang diperoleh dari uji HA secara berurutan yaitu 27,
27 dan 28 HA unit akan dilanjutkan pada tahap uji 4 HA. Antigen ND akan dibuat
dalam konsentrasi 22 atau 4 HA unit/25 µL menggunakan perhitungan titer (OIE,
2021).

Perhitungan uji 4 HA terdapat pada Lampiran 2. Perhitungan titer HA

menghasilkan komposisi pengenceran antara antigen dan PBS yang akan
digunakan pada uji 4 HA. Uji 4 HA dilakukan dengan memasukkan antigen, PBS
dan RBC 1% sesuai dengan perhitungan. Sampel umur 14 dan 18 hari
menggunakan komposisi 160 µL antigen dalam 5 mL PBS sedangkan untuk
sampel umur 21 hari menggunakan komposisi 80 µL antigen dalam 5 mL PBS.

Gambar 6. Hasil uji 4 HA ayam pedaging umur 14 dan 18 hari

Keterangan :

(a) Sampel 1 merupakan uji 4 HA ayam umur 14 hari

 21

(b) Sampel 2 merupakan uji 4 HA ayam umur 18 hari

(c) k adalah kontrol

Pada Gambar 6. kolom 1 dan 2 terlihat membentuk bulat kancing

sedangkan kolom 3 dan 4 terlihat mengalir (tears drop). Sesuai dengan ketetapan
bahwa uji 4 HA akan menunjukkan hasil ketepatan antigen 4 HA unit yang
ditandai dengan terjadi aglutinasi pada lubang pertama dan kedua (OIE, 2021).
Aglutinasi pada kolom 1 dan 2 menandakan bahwa terjadi pengikatan antara
antigen 4 HA unit dan RBC 1%. Setelah ketepatan antigen 4 HA unit sudah
dinyatakan valid, maka dapat dilanjutkan dengan uji HI.

4.2. Hasil Uji HI

Pada uji HI dibutuhkan RBC 1%, antigen ND dan serum darah ayam
pedaging umur 14, 18 dan 21 hari. Serum darah diambil dari ayam pedaging yang
sudah divaksin ND saat Day Old Chicken (DOC). Serum darah ayam yang sudah
divaksin akan mengandung antibodi terhadap agen virus ND dan akan
menghambat proses hemaglutinasi pada uji HI (Tille, 2022). Pada microplate akan
terlihat bentuk aliran (tears drop), kristal merata (difusi) dan bulat titik yang
menandakan terjadi aglutinasi sebagian. Titer antibodi dapat diketahui dengan
menghitung jumlah aliran yang terlihat pada microplate.

(a)
 22

(b)
Gambar 7. Hasil uji HI terhadap sampel serum ayam pedaging (Gallus
domesticus) umur 14 hari
Keterangan :

(a) Kode sampel 1-8 merupakan sampel serum darah ayam umur 14 hari
(b) Kode sampel 9-15 merupakan sampel serum darah ayam umur 14 hari
(c) k adalah kontrol
Uji HI merupakan uji untuk mengetahui titer antibodi sehingga dapat
dijadikan sebagai informasi mengenai jumlah antibodi yang terbentuk pada tubuh
ayam pascavaksinasi. Pada uji ini terjadi reaksi antara antigen ND, serum darah
ayam dan RBC 1%. Hasil positif terlihat pada Gambar 7. (a) dan (b) dengan
sumuran yang tampak seperti aliran (tears drop). Sumuran yang terlihat mengalir
akan dihitung dan menjadi nilai n pada pangkat 2n. Pada Gambar 7. (a) kode
sampel 1, terlihat sumuran kolom ke-1 dan ke-2 mengalir. Hal ini menandakan
terjadi hambatan hemaglutinasi sehingga nilai titer antibodi kode sampel 1 adalah
22.
Pada sumuran kolom ke-3 hasil uji terlihat sedikit mengalir. Hal ini
menandakan terjadinya aglutinasi sebagian antara antigen ND dengan RBC 1%
yang terdapat pada serum ayam kode sampel 1. Aglutinasi sebagian dapat terjadi
karena jumlah antibodi spesifik pada serum darah menurun atau berada dalam
jumlah yang sedikit. Hambatan hemaglutinasi yang terjadi menunjukkan terdapat
antibodi spesifik terhadap virus ND (OIE, 2018). Hambatan hemaglutinasi terjadi
ketika terdapat antibodi terhadap virus ND di dalam serum darah ayam.
Hasil uji HI yang terlihat pada Gambar 7. (a) dari kode sampel 1-8 secara
berturut-turut adalah 22, 22, 22, 21, 20, 22, 22, 22. Nilai titer pada kode sampel 9-15
 23

tercantum pada Lampiran 1. Pada Gambar 7. (a) terlihat bahwa kolom ke-1 kode
sampel 5 tidak tampak aliran (tears drop). Keberadaan antibodi pada serum darah
kode sampel 1 menyebabkan virus ND tidak dapat mengaglutinasi RBC,
melainkan akan berikatan dengan antibodi spesifik yang telah terbentuk
pascavaksinasi. Hal ini selaras dengan teori bahwa interpretasi hasil positif pada
uji HI adalah ketika terjadi aliran (tears drop) yang menandakan tidak terjadi
hemaglutinasi (Rozi et al., 2020).
Titer antibodi kode sampel 5 adalah 20, hal ini menandakan bahwa
antibodi terhadap virus ND pada kode sampel 5 belum terbentuk sehingga tidak
terdeteksi sama sekali. Nilai titer kode sampel 5 mengalami kenaikan dari umur
14, 18 dan 21 hari. Pada Lampiran 1. terlihat bahwa nilai titer antibodi ayam pada
umur 14, 18 dan 21 hari secara berturut-turut adalah 20, 23 dan 25. Pada umur 14
hari, tubuh ayam kode sampel 5 terlihat belum menunjukkan respon positif dalam
proses pembentukan antibodi atau titer antibodi belum terbentuk.
Hal ini dapat dilihat dari nilai titer 20, sedangkan diumur 14 hari titer
sampel lain sudah mulai terdeteksi atau antibodinya sudah terbentuk. Hal ini
selaras dengan teori bahwa antibodi spesifik dari vaksin ND akan terbentuk secara
optimal pada minggu ke-2 pascavaksinasi (Kencana et al., 2017). Proses
pembentukan antibodi yang belum optimal pada sampel 5 dapat dipengaruhi oleh
beberapa faktor, seperti kondisi vaksin dan kondisi fisiologis ayam yang
dipengaruhi oleh lingkungan. Cekaman suhu pada kandang ayam umur 14 hari
dapat menyebabkan antibodi belum terbentuk.
Pada umur 18 dan 21 hari titer antibodi mulai terbentuk dan protektif pada
minggu ke-3 pascavaksinasi. Hal ini tidak sesuai dengan teori yang menyatakan
bahwa titer antibodi terbentuk secara efektif pada umur 14 hari dan mulai
menurun pada umur 21 hari (Kencana et al., 2017). Antibodi protektif diumur 21
hari yang terdeteksi pada 2 sampel ayam pedaging dapat disebabkan oleh faktor
metabolisme tubuh ayam yang lambat, sehingga proses pembentukan antibodi
pascavaksinasi memerlukan waktu yang lebih lama. Proses pembentukan antibodi
pascavaksinasi dapat dipengaruhi oleh keberadaan antibodi maternal pada tubuh
ayam.
 24

Reaksi netralisasi antara antibodi maternal dengan antigen ND akan terjadi

jika vaksinasi dilakukan saat antibodi maternal dalam kadar tinggi. Hal ini sesuai
dengan penelitian mengenai efek antibodi maternal terhadap vaksinasi ND yaitu
terjadi keterlambatan pencapaian titer protektif selama 1-2 minggu pada ayam
yang divaksin saat DOC dan menggunakan vaksin aktif (live). Pada penelitian
tersebut, titer antibodi protektif tercapai diumur 21 hari. Hasil tersebut selaras
dengan penelitian ini, seperti yang tercantum pada Tabel 3. bahwa terdapat 2
sampel yang protektif pada umur 21 hari.
Keterlambatan pembentukan antibodi diakibatkan oleh kadar antibodi
maternal yang tinggi saat ayam divaksinasi, namun dengan terbentuknya antibodi
protektif diumur 21 hari dapat disimpulkan vaksin aktif (live) tetap memberikan
proteksi terhadap ayam pedaging. Selain itu terdapat faktor lain seperti ayam
terinfeksi virus ND pada umur 18-21 hari, sehingga antibodi ND terbentuk pada
umur 21 hari. Pada Gambar 7. (a) terlihat kolom ke-4 sampai kolom ke-8
menunjukkan hasil negatif yang terlihat berbentuk seperti kristal merata (difusi)
tanpa aliran. Hal ini menandakan telah terjadi aglutinasi antara antigen dan RBC
1%.
Pada beberapa kasus, hasil negatif dapat disebabkan oleh beberapa hal
seperti virus yang diisolasi bukan merupakan virus ND. Pada penelitian ini
antigen yang digunakan adalah antigen spesifik ND sehingga aglutinasi yang
terjadi merupakan reaksi antibodi spesifik dengan antigen. Faktor lain penyebab
hasil negatif adalah virus yang ada pada sampel merupakan virus ND namun
memiliki strain yang berbeda (Martinez et al., 2021). Kriteria hasil pemeriksaan
4
dinyatakan protektif apabila titer antibodi mencapai nilai ≥2 (OIE, 2021).
Tabel 3. Hasil uji HI pada serum ayam pedaging umur 14, 18 dan 21 hari

Kelompok Hasil
Umur Odds Ratio
Jumlah Sampel
Protektif (+) Nonprotektif (-) (OR)
(hari)
14 0 15 15
18 0 15 15
0
21 2 13 15
Total 2 43 45
 25

Berdasarkan hasil pemeriksaan serum darah ayam di Peternakan Satwa

Mandiri Sejahtera (SMS) Bekasi didapatkan 2 dari 45 sampel (4,4%) dinyatakan
protektif dan 43 dari 45 sampel (95,6%) dinyatakan nonprotektif. Dua sampel
protektif (13,3%) berasal dari ayam pedaging kelompok umur 21 hari. Hasil ini
menunjukkan antibodi sudah mulai terbentuk, namun belum dapat melindungi
ayam pedaging dari penyakit ND. Hasil protektif diperoleh dari sampel umur 21
hari dengan titer masing-masing 25 dan 24. Titer antibodi protektif terdeteksi pada
pada umur 21 hari, namun karena persentase yang sangat kecil yaitu (4,4%) dari
total sampel maka perlu diadakan vaksinasi kedua (booster) agar antibodi ayam
meningkat.
Hasil nonprotektif diperoleh dari seluruh sampel umur 14 hari, 18 hari,
dan 13 sampel umur 21 hari. Titer antibodi nonprotektif memiliki nilai (<24). Hal
ini menunjukkan ayam sudah divaksin atau pernah terinfeksi virus ND, namun
antibodi yang terbentuk masih sedikit. Jumlah antibodi yang terbentuk tidak
4
mencapai standar seperti pada Tabel 1. yaitu ≥2 , sehingga tidak mencapai batas
nilai titer protektif. Ayam pedaging yang sudah terpapar virus ND dapat
menunjukkan keberadaan antibodi spesifik pada serum darah. Sampel serum yang
dinyatakan nonprotektif menunjukkan bahwa pada serum darah belum terbentuk
antibodi terhadap penyakit ND.
Hal ini dapat terjadi karena vaksin yang diberikan belum bekerja secara
optimal. Nilai titer negatif yaitu 20 pada Lampiran 1. dapat disebabkan oleh ayam
belum pernah terinfeksi virus ND sehingga tidak terbentuknya antibodi spesifik
secara alami. Hal ini didukung dengan penelitian yang menyatakan bahwa hasil
nonprotektif memiliki arti bahwa antibodi spesifik pada tubuh ayam belum
terbentuk (Sutarto, 2020). Kemungkinan lain bahwa ayam tersebut pernah
terinfeksi virus ND, namun kejadiannya sudah lama sehingga antibodi didalam
tubuh sudah menurun (Perdana, 2016).
4.3. Hubungan Titer Antibodi Ayam Pedaging dengan Perbedaan Umur
Ayam
Perbedaan hasil titer pada ketiga kelompok sampel dapat disebabkan oleh
beberapa faktor seperti faktor umur, hormon dan imun tubuh ayam. Faktor ini
 26

dapat menjadi penyebab vaksin tidak bekerja secara optimum (Widiastuti et al.,
2022). Selain itu siklus metabolisme yang terjadi pada umur yang berbeda dapat
mempengaruhi respon imun pada tubuh ayam. Nilai Odds Ratio (OR) dihitung
untuk mengetahui ada tidaknya hubungan dari masing-masing kelompok umur
dalam pembentukan titer antibodi ND (Akbar et al., 2017).

Berdasarkan perhitungan yang dapat dilihat di Lampiran 5, nilai Odds

Ratio (OR) pada Tabel 3 adalah 0. Jika OR<1 maka faktor risiko berhubungan
negatif dengan variabel. Jika OR=1 maka tidak ada hubungan antara faktor risiko
dan variabel. Jika OR>1 maka terdapat hubungan positif antara faktor risiko
dengan variabel (Akbar et al., 2017). Nilai OR pada sampel ini menunjukkan
faktor risiko yang berpengaruh terhadap pembentukan titer antibodi ayam
berhubungan negatif dengan variabel umur ayam.
Berdasarkan uji tersebut, ketiga kelompok umur tidak berpengaruh
terhadap pembentukan titer antibodi ayam. Namun secara teori, umur ayam
berkaitan dengan keberadaan antibodi maternal. Antibodi maternal yang
diturunkan dari induk ayam akan menurun jumlahnya secara linier seiring dengan
bertambahnya umur ayam. Keberadaan antibodi maternal dapat menetralisasi
virus pada vaksin yang diinjeksikan pada ayam pedaging (Rahmawati et al.,
2018).
Hal ini akan menyebabkan titer antibodi yang terdeteksi pada umur muda
rendah. Terdapat beberapa faktor yang berperan terhadap keberhasilan vaksinasi
yaitu inang, vaksin, dan lingkungan (Akbar et al., 2017). Berdasarkan data dari
pihak peternakan kondisi inang dalam 1 kandang relatif sama dan DOC yang
digunakan berasal dari tempat penetasan (hatchery) yang sama. Peternakan SMS
Bekasi mendapatkan DOC yang sudah divaksin ND dari salah satu hatchery di
Bogor dan Cibarusah dengan harga Rp 2.250.
Peraturan Menteri Pertanian (Permentan) No. 26 Tahun (2016) tentang
penyediaan, pengawasan dan peredaran ayam ras mengatur harga standar DOC
sebesar Rp 4.800 per ekor. Harga DOC yang dibeli oleh pihak peternakan lebih
rendah dari harga standar yang ditetapkan pemerintah, sehingga memungkinkan
kualitas DOC dan vaksinasi yang didapat kurang optimal. Penurunan kualitas
DOC dan vaksinasi dapat mengakibatkan sebagian besar sampel uji terdeteksi
 27

nonprotektif. Vaksin yang diberikan pada DOC merupakan vaksin ND (live) merk
“CEVA New L”.
Vaksin ini menggunakan strain La Sota yang tergolong kedalam genotipe
2 virus ND lentogenik. Vaksin dengan strain La Sota sudah teregristrasi dan
umum digunakan oleh peternak di Indonesia. Vaksin ini termasuk kedalam vaksin
homolog dengan efektivitas yang lebih baik dalam membentuk titer jika
dibandingkan dengan vaksin heterolog (Wibowo et al., 2017). Hasil titer
nonprotektif dapat disebabkan oleh kualitas vaksin dan ketidaksesuaian antara
strain vaksin dan antigen yang digunakan saat uji HA-HI. Penelitian ini
menggunakan antigen ND strain Ishii, berbeda dengan strain vaksin yang
digunakan yaitu La Sota.
Beberapa penelitian menyatakan bahwa antigen strain Ishii menunjukkan
hasil yang baik untuk mendeteksi titer antibodi ayam yang telah divaksin ND
strain lentogenik, sehingga antigen ini tetap dapat digunakan pada vaksin strain La
Sota dan B1 (Mase, 2022). Terdapat kemungkinan bahwa virus yang ada di
sekitar wilayah Peternakan SMS Bekasi adalah virus dengan strain dan genotipe
yang berbeda seperti genotipe VII yang banyak terdeteksi beberapa tahun terakhir
(Adi et al., 2020). Perbedaan genotipe virus vaksin yang digunakan dengan virus
yang berada di lapangan menyebabkan respon kekebalan yang dihasilkan kurang
optimal (Kim et al., 2013). Hal ini dapat menyebabkan titer antibodi yang
terdeteksi berada pada nilai nonprotektif (<24) seperti pada Tabel 3. Besarnya nilai
titer HI menunjukkan jumlah titer antibodi yang terbentuk pascavaksinasi
(Kencana et al., 2015).
Proses vaksinasi pada penelitian ini dianggap kurang optimal. Hal ini
dapat terjadi karena vaksinasi yang dilakukan hanya satu kali. Vaksinasi yang
dilakukan satu kali akan menghasilkan titer yang lebih rendah sehingga harus
diikuti dengan tahapan booster atau vaksinasi kedua. Vaksinasi kedua akan
membentuk antibodi dengan fase lag yang lebih pendek dari antibodi primer,
sehingga saat terpapar virus ND respon akan menjadi lebih cepat (Dahlia et al.,
2019). Vaksinasi dianjurkan menggunakan vaksin ND aktif (live).
Secara efisiensi waktu, vaksin ND (live) yang diberikan melalui tetes mata
lebih praktis dibandingkan dengan vaksin ND (killed) yang diberikan melalui
 28

injeksi subkutan. Vaksin ND (live) akan bekerja lebih cepat dibandingkan dengan
vaksin ND (killed) yang mengandung oil adjuvant. Zat ini berfungsi sebagai depo
antigen dan menyebabkan antigen vaksin keluar secara perlahan, sehingga
memerlukan waktu yang lebih lama untuk membentuk antibodi (Widiastuti et al.,
2022). Vaksin aktif dapat dijadikan sebagai vaksin pertama pada DOC untuk hasil
yang lebih cepat, sedangkan vaksin booster dapat dilakukan pada ayam umur 14
hari.
Hal ini dapat dipertimbangkan dari titer antibodi pada umur ke-14 pada
Tabel 3. yang masih belum protektif terhadap virus ND. Vaksin booster dapat
dilakukan pada ayam pedaging umur 12-21 hari (Masum et al., 2014). Vaksin ini
dapat dilakukan dengan vaksin inaktif (killed). Hal ini didukung oleh penelitian
bahwa vaksin inaktif (killed) akan memiliki ketahanan antibodi yang lebih lama
(Santoso et al., 2019). Penelitian mengenai pengembangan vaksin
merekomendasikan untuk menggunakan vaksin bivalen ND-LaSota yang terbukti
mampu memberikan proteksi terhadap virus ND dengan persentase 100%
(Cahyani et al., 2020).
Selain vaksinasi, untuk menjaga daya tahan tubuh, pihak peternakan dapat
memberikan tambahan vitamin atau ekstrak pegagan (Centela asiatica). Ekstrak
pegagan memiliki kandungan triterpenoid yang mengandung senyawa
asiatiscoside. Senyawa ini merupakan senyawa antibiotik alami dan juga dapat
berfungsi sebagai immunomodulator. Pemberian 1,5% dan 4,5% ekstrak pegagan
mampu menaikan titer antibodi ND pada ayam pedaging (Noor et al., 2018).
Selain itu, penambahan ekstrak kulit dan jus buah delima putih (Punica granatum
L.) dapat meningkatkan titer antibodi ND karena terdapat senyawa flavonoid yang
meningkatkan proliferasi dan diferensiasi limfostit T dan limfosit B (Rahmawati
et al., 2018).
Penelitian lebih lanjut mengenai jenis virus yang menyerang ayam
pedaging di Peternakan SMS Bekasi perlu dilakukan. Hal ini bertujuan agar strain
virus yang mewabah dapat diketahui dan vaksin ND yang digunakan dapat
disesuaikan untuk mendapatkan ketahanan tubuh yang optimal (Wibowo et al.,
2017). Menurut penelitian vaksin ND dari genotipe VII
(chicken/Indonesia/GTT/11) memberikan respon titer antibodi yang baik sesuai
 29

dengan genotipe yang tersebar di Indonesia. Vaksin ND genotipe VII

direkomendasikan untuk digunakan sebagai seed vaksin secara global (Indriani &
Dharmayanti, 2016b).
Titer HI pada Tabel 3. didominasi oleh hasil nonprotektif terutama pada
kelompok umur 14 dan 18 hari. Hal ini berkaitan dengan respon pembentukan
antibodi pascavaksinasi yang dipengaruhi oleh kesehatan ayam dan kondisi
lingkungan seperti suhu kandang (Hamidun et al., 2022). Suhu kandang ayam
pedaging yang optimal berkisar antara 20-25°C (Rini et al., 2019). Suhu kandang
ayam pedaging di Peternakan SMS Bekasi pada umur 14, 18 dan 21 hari adalah
34°C, 33°C dan 29°C. Pada suhu 34°C ayam akan mengalami kesulitan untuk
mengeluarkan panas sehingga suhu tubuh akan meningkat (Risna et al., 2022).
Perubahan suhu diperkirakan akibat dari perubahan cuaca dan faktor
mesin kipas (fan) di dalam kandang. Peternakan SMS Bekasi memiliki sistem
manajemen kandang close house dengan tujuan menjamin keamanan secara
biologi seperti kontaminasi virus dan pengaturan ventilasi yang baik (Adistana
Sandyawan & Putra, 2019). Pada umur 14 dan 18 hari, hanya 3 mesin kipas yang
aktif akibat kerusakan mesin, sedangkan pada umur 21 hari terdapat 4 mesin kipas
aktif. Hal ini selaras dengan penelitian mengenai jumlah mesin kipas (fan) akan
mempengaruhi suhu kandang dan mortalitas ayam pedaging (Kasim et al., 2019).
Suhu yang tidak sesuai dengan suhu optimum ayam pedaging akan
menjadi faktor utama heat stress. Kondisi heat stress pada ayam umur 14 dan 18
hari dapat menyebabkan titer antibodi yang terbentuk tidak optimal dan
dinyatakan nonprotektif pada semua sampel darah. Hal ini terjadi karena heat
stress akan memicu syaraf mengeluarkan Corticotropic Relasing Hormon (CRH)
yang akan mengaktifkan sekresi Adrenocorticotropic Hormone (ACTH) dalam
jumlah banyak. Meningkatnya ACTH akan merangsang korteks adrenal untuk
mengeluarkan kortikosteroid dan menyebabkan glukokortikoid meningkat
(Febryantono et al., 2020).
Hal ini akan menyebabkan terjadinya imunosupresi yang akan
mengganggu kesehatan ayam pedaging. Imunosupresi adalah efek yang
menghambat proses fagositosis dan menghambat pengenalan Ag oleh sel limfosit.
Sel plasma penghasil antibodi atau sel T menjadi tidak terbentuk. Selain itu, kadar
 30

glukokortikoid dan kortikosteroid yang tinggi akan menyebabkan atropi pada

bursa fabricus sehingga pembentukan antibodi akan terganggu (Febryantono et
al., 2020). Agar dapat meminimalisir heat stress maka dapat dilakukan kontrol
mesin kipas dan penanaman tanaman pelindung disekitar kandang dan area
peternakan.
Pada ayam umur 21 hari temperatur kandang ayam adalah 29°C. Suhu
kandang yang optimum pada ayam umur 21 hari adalah 28°C (Lestari et al.,
2020). Selisih suhu yang sedikit memungkinkan ayam pada umur 21 hari
terhindar dari kondisi heat stress dan menghasilkan titer antibodi yang lebih baik
seperti pada 2 sampel ayam dengan nilai titer protektif. Selain suhu kandang,
pemeliharaan kandang atau biosekuriti sangat berpengaruh terhadap tingkat
keberhasilan vaksinasi.
Biosekuriti meliputi beberapa program seperti sanitasi, penanganan ayam
sakit dan ayam mati serta penanganan limbah kandang. Pada penelitian
sebelumnya terdeteksi virus ND pada feses ayam pedaging. Virus ND yang ada
pada feses ayam dalam bentuk kering dapat bertahan lebih lama yaitu lebih dari
dua bulan (Suardana & Putra, 2016). Biosekuriti yang kurang optimal seperti
sekam kandang yang tidak diganti, kebersihan tempat makan dan minum yang
kurang baik, serta buruknya kualitas sterilisasi kandang pascapanen akan
menyebabkan penyebaran virus di dalam kandang.
Peternakan SMS Bekasi sudah melakukan pembersihan rutin alat makan,
pengontrolan air minum serta sterilisasi kandang selama 5-7 hari. Namun, pihak
peternakan tidak melakukan desinfeksi terhadap manusia seperti petugas kandang
dan dokter yang akan masuk ke dalam kandang. Hal ini dapat menyebabkan virus
yang terbawa dari lingkungan luar atau kandang lain masuk ke dalam kandang
dan menyebar ke seluruh ayam pedaging, sehingga wabah ND dapat kembali
terjadi. Selain itu, pihak peternakan belum menerapkan sistem penanganan pada
ayam yang mati.
Beberapa ayam yang sakit dipindahkan ke sudut flok namun masih dalam
kandang yang sama, sedangkan ayam mati dipisahkan di depan kandang dalam
keadaan terbuka. Penanganan ayam sakit dan mati tersebut dapat menyebabkan
virus pada tubuh ayam sakit atau mati menyebar dan mengakibatkan ayam yang
 31

sehat terkena penyakit. Ayam yang sakit harus dipisahkan di kandang yang
berbeda dan jauh dari ayam sehat, sedangkan untuk penanganan ayam mati dapat
dilakukan pembakaran dengan segera (Mare, 2019). Biosekuriti menjadi faktor
penting yang akan mengurangi proses penyebaran virus ND.
Hal ini didukung oleh penelitian yang menyatakan bahwa keberhasilan
vaksinasi dipengaruhi oleh sistem pemeliharaan kandang yang baik dan faktor
lingkungan (Rahmawati et al., 2018). Pada penelitian lain di tahun 2020
ditemukan kematian ayam akibat virus ND sebesar 60% (Putra et al., 2020). Pada
kasus ini di tahun 2021 kematian ayam di Peternakan SMS Bekasi sebesar 35%.
Hal ini menunjukkan bahwa kasus ND merupakan wabah dengan mortalitas dan
nilai kerugian yang cukup tinggi. Penanganan kasus ND secara serius dapat
dilakukan dengan meningkatkan biosekuriti di lingkungan peternakan.
 BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1. Kesimpulan
Antibodi ND terdeteksi pada ayam pedaging umur 21 hari sebesar
13,3% sedangkan pada umur 14 dan 18 hari antibodi ND tidak terdeteksi.

5.2. Saran
1) Pemberian vaksin kedua (booster) untuk ayam pedaging umur 14
sampai 21 hari.
2) Peningkatan kualitas biosekuriti dan penanaman tanaman pelindung di
sekitar kandang peternakan.
3) Peningkatan pengawasan terhadap kipas (fan) kandang secara rutin.

32
 DAFTAR PUSTAKA

Adi, Anak, Agung, Ayu, M., Astawa, I. Nyoman, M., Putra, I. Gusti, Agung, A.,
Kardena, I. M., & Suarsana, I. N. (2020). The evaluation of anti-NDV
hyperimmune sera for serotherapy in chickens infected with Newcastle
disease virus field isolate. International Journal of Veterinary Science and
Animal Husbandry, 5(4), 125–131.
Adistana, Sandyawan, & Putra, Ary, Bachtiar, K. (2019). Studi numerik pengaruh
peletakan cooling pad terhadap distribusi temperatur dan pola aliran udara
ventilasi kandang ayam broiler close house tipe ventilasi lorong. Jurnal
TeknikITS,8(2),102–106.
http://www.ejournal.poltektedc.ac.id/index.php/tedc/article/view/588
Ahmad, W., Al-qaisi, W., & Al-razem, F. (2018). Production and purification of
IgY antibodies from chicken egg yolk. Journal of Genetic Engineering and
Biotechnology, 16(1), 99–103. https://doi.org/10.1016/j.jgeb.2017.10.003
Akbar, S., Bagus, I., Ardana, K., Bagus, I., & Suardana, K. (2017). Perbandingan
titer antibodi Newcastle Disease pada ayam petelur fase layer I dan II.
Indonesia Medicus Veterinus, 6(4), 327–333.
https://doi.org/10.19087/imv.2017.6.4.327
Alemneh, T. (2019). Epidemiology, diagnosis & prevention of Newcastle disease
in poultry. American Journal of Biomedical Science & Research, 3(1), 50–
59. https://doi.org/10.34297/ajbsr.2019.03.000632
Antari, A. L. (2017). Imunologi Dasar (1st ed.). Yogyakarta: Deepublish
Publisher.
Aripin, I. (2019). Pendidikan nilai pada materi konsep sistem imun. Jurnal Bio
Educatio, 4(1), 1–12.
Badruzzaman, M. Z., Santriagung, M. A., & Setiyono, A. (2020). Vaksinasi
Newcastle Disease pada peternakan ayam buras di Kabupaten Agam
Sumatera Barat. Jurnal Pusat Inovasi Masyarakat, 2(2), 240–245.
Balqis, U., Budiman, H., Iskandar, C. D., & Hasan, M. (2019). Histopathological
of fabricius bursa in the broiler chicken after vaccination with Newcastle
Disease Virus vaccine. Jurnal Medika Veterinaria, 13(1), 55–64.
https://doi.org/https://doi.org/10.21157/j.med.vet.v1 1i1.4178
Bello, M. B., Yusoff, K., Ideris, A., Hair-Bejo, M., Peeters, B. P. H., & Omar, A.
R. (2018). Diagnostic and vaccination approaches for Newcastle Disease
Virus in poultry: the current and emerging perspectives. BioMed Research
International, 4(1), 1–18. https://doi.org/10.1155/2018/7278459
Biyatmoko, D., & Rostini, T. (2020). Peningkatan ekonomi masyarakat melalui
intensifikasi budidaya ayam pedaging Desa Haur Gading Kabupaten Hulu
Sungai Tengah. Jurnal Pengabdian Al-Ikhlas, 6(2), 249–259.

33
 34

Badan Pusat Statistik. (2021). Populasi Ternak Unggas di Jawa Barat 2018-2020.
https://jabar.bps.go.id/indicator/158/258/1/populasi-ternak-unggas-di-jawa-
barat.html diakses pada 13 Maret 2022
Brown, V. R., & Bevins, S. N. (2017). A review of virulent Newcastle disease
viruses in the United States and the role of wild birds in viral persistence and
spread. Veterinary Research, 48(1), 1–15. https://doi.org/10.1186/s13567-
017-0475-9
Cahyani, J., Wibowo, M. H., & Widyarini, S. (2020). Perbandingan efikasi dan
keamanan vaksin bivalen Newcastle disease LaSota-Avian Influenza H9N2
isolat sidrap dengan dua adjuvan minyak berbeda dan ditantang virus
Newcastle Disease virulen. Tesis. Fakultas Kedokteran Hewan Universitas
Gadjah Mada
Cahyani, N. L. R., Suardana, I. B. K., & Nindhia, T. S. (2020). Seroprevalensi
tetelo pada peternakan itik di Desa Takmung Kabupaten Klungkung.
Indonesia Medicus Veterinus, 9(4), 641–649.
https://doi.org/10.19087/imv.2020.9.4.641
CFSPH. (2016). Newcastle Disease. Institute for International Cooperation in
Animal Biologics, Iowa State University. https://www.cfsph.iastate.edu/
diakses pada 26 Juni 2022
Chaichana, P., Jenjaroen, K., Amornchai, P., Chumseng, S., Langla, S., Rongkard,
P., Sumonwiriya, M., Jeeyapant, A., Chantratita, N., Teparrukkul, P.,
Limmathurotsakul, D., Day, N. P. J., Wuthiekanun, V., & Dunachie, S. J.
(2018). Antibodies in melioidosis : The role of the indirect hemagglutination
assay in evaluating patients and exposed populations. The American Society
of Tropical Medicine and Hygiene, 99(6), 1378–1385.
https://doi.org/10.4269/ajtmh.17-0998
Dahlia, Santosa, P. E., Siswanto, & Hartono, M. (2019). Pengaruh pemberian
imunomodulator Echinacea pupurea (radix) terhadap titer antibodi Avian
Influenza (AI) dan Newcastle Disease (ND) pada broiler betina. Jurnal Riset
Dan Inovasi Peternakan, 3(3), 1–7. https://doi.org/10.23960/jrip.2019.3.3.1-
7
Dimitrov, K. M., Afonso, C. L., Yu, Q., & Miller, P. J. (2017). Newcastle Disease
vaccines — A solved problem or a continuous challenge?. Veterinary
Microbiology, 206, 126–136. https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2016.12.019
Dina, Yahya, Y., & Zaini, M. (2019). Gambaran pemeriksaan hapusan darah tepi
difficount (sel limfosit) pada penderita TBD di Puskesmas Kelayan Timur
Banjarmasin. Jurnal Kajian Ilmiah Kesehatan Dan Teknologi, 1(2), 34–38.
Erina, E., Aninaidu, H., Zuhrawaty, Z., Etriwati, E., Hamzah, A., Abrar, M., &
Daud AK, M. (2021). Deteksi antibodi terhadap virus Newcastle Disease
pada Burung Trucukan (Pycnonotus goiavier). Acta Veterinaria Indonesiana,
9(3), 173–178. https://doi.org/10.29244/avi.9.3.173-178
Farn, O., Gelaye, E., Trabelsi, K., Bernier, A., & Subramani, K. (2020).
 35

Establishing a robust manufacturing platform for recombinant veterinary

vaccines : An adenovirus-vector vaccine to control Newcastle Disease Virus
infections of poultry in Sub-Saharan Africa. Vaccines, 8(338), 1–24.
Fatmaningsih, R., Riyanti, & Nova, K. (2016). Performa ayam pedaging pada
sistem brooding konvensional dan thermos. Jurnal Ilmiah Peternakan
Terpadu,4(3),222–229.
https://doi.org/http://dx.doi.org/10.23960/jipt.v4i3.p%25p
Febryantono, H., Siswanto, Santosa, P. E., & Hartono, M. (2020). Pengaruh
pemberian dosis ekstrak meniran (Phyllanthus niruri L) terhadap titer
antibodi Newcastle Disease dan Avian Influenza pada broiler jantan. Jurnal
Riset Dan Inovasi Peternakan, 4(1), 52–58.
Fitri, W. E., & Putra, A. (2021). Peranan senyawa flavonoid dalam meningkatkan
sistem imun di masa pandemi COVID-19. Prosiding Seminar Nasional
STIKES Syedza Saintika, 61–72.
Hamidun, S., Solang, M., & Uno, W. D. (2022). Profil titer antibodi Avian
Influenza (AI) melalui uji haemaglutination inhibition (HI) dan identifikasi
penerapan biosecurity di Peternakan Ayam Filiphine Kota Gorontalo.
Biospecies, 15(1), 16–22.
Hicks, J. T., Dimitrov, K. M., Afonso, C. L., Ramey, A. M., & Bahl, J. (2019).
Global phylodynamic analysis of avian paramyxovirus-1 provides evidence
of inter-host transmission and intercontinental spatial diffusion. BMC
Evolutionary Biology, 19(108), 1–15. https://doi.org/10.1186/s12862-019-
1431-2
Hosseini, S. S., Kolyani, K. A., Tabatabaei, R. R., & Goudarzi, H. (2021). In
silico prediction of B and T cell epitopes based on NDV fusion protein for
vaccine development against Newcastle Disease Virus. Veterinary Research,
12(2), 157–165. https://doi.org/10.30466/vrf.2019.98625.2351
Indarti, D. (2017). Outlook daging ayam ras. Pusat Data dan Sistem Informasi
Pertanian Sekretariat Jenderal Kementerian Pertanian.
http://epublikasi.setjen.pertanian.go.id/ diakses pada 15 Maret 2022
Indriani, R., & Dharmayanti, N. L. P. (2016a). Pengembangan vaksin inaktif
tetelo genotipe VII isolat lokal pada kondisi laboratorium. Jurnal Veteriner,
17(15), 322–330. https://doi.org/10.19087/jveteriner.2016.17.3.322
Indriani, R., & Dharmayanti, N. L. P. I. (2016b). Respon titer antibodi dan
proteksi Virus Newcastle Disease genotype I, II, VI dan VII sebagai vaksin
terhadap infeksi isolat virus Newcastle disease chicken/Indonesia/GTT/11.
Jurnal Biologi Indonesia, 12(2), 211–218.
Irawan, D. W. P., Indraswati, D., & Prihastini, L. (2021). Kajian aspek fisik serta
mikrobiologi pada daging ayam broiler sehat dan daging ayam broiler
glonggongan (1st ed.). Surabaya: Insan Cendekia Mandiri.
Kasim, A. A., Maulana, R., & Setyawan, G. E. (2019). Implementasi otomasi
kandang dalam rangka meminimalisir heat stress pada ayam broiler dengan
 36

metode fuzzy sugeno. Jurnal Pengembangan Teknologi Informasi Dan Ilmu

Komputer, 3(2), 1403–1410. http://j-ptiik.ub.ac.id
Kencana, G. A. Y., Suartha, I. N., Nainggolan, D. R. B., & Tobing, A. S. L.
(2017). Respons imun ayam petelur pascavaksinasi Newcastle Disease dan
Egg Drop Syndrome. Jurnal Sain Veteriner, 35(1), 81–90.
Kencana, G. A. Y., Suartha, I. N., Nurhandayani, A., & Ramadhan, M. (2014).
Kepekaan telur spesific pathogen free dan clean egg terhadap Virus Flu
Burung. Jurnal Vet, 15(1), 87–93.
Kencana, G. A. Y., Suartha, N., Simbolon, M. P., Handayani, A. N., Ong, S.,
Syamsidar, & Kusumastuti, A. (2015). Respons antibodi terhadap penyakit
tetelo pada ayam yang divaksin tetelo dan tetelo-flu burung. Jurnal
Veteriner, 16(2), 283–290.
Kencana, Suartha, Bonar, & Lumban. (2017). Respons imun ayam petelur
pascavaksinasi Newcastle Disease. JSV, 35(1), 34–52.
Kikiyani, N., Siswanto, Santosa, P. E., & Hartono, M. (2020). The effect of giving
immunomodulator of black jintan (Nigella Sativa L .) in drinking water on
antibody titter of Avian Influenza (AI) and Newcastle Disease (ND) in
female broilers. Riset Dan Inovasi Peternakan, 4(3), 171–187.
https://doi.org/https://doi.org/10.23960//jrip.2020.4.3.171-187
Kim, Wanasen, Palduri, S, X., Collins, & Samal. (2013). Newcastle Disease virus
fusion protein is the major contributor to protective immunity of genotipe-
matched vaccine. Plos One, 8(8), 1–10.
Kurnianingtyas, E., Setiyaningsih, S., & Indrawati, A. (2017). Penentuan patotipe
molekuler virus Newcastle Disease : Isolat lapang di tiga wilayah Kabupaten
Jawa Timur. Acta Veterinaria Indonesiana, 5(1), 8–15.
Kurnianto, A., Kencana, G., & Astawa, N. (2016). Respons antibodi sekunder
terhadap penyakit tetelo pada ayam petelur pascavaksinasi ulangan dengan
vaksin tetelo aktif. Jurnal Veteriner, 17(3), 331–336.
https://doi.org/10.19087/jveteriner.2016.17.3.331
Lestari, R., Darmawan, A., & Wijayanti, I. W. (2020). Suplementasi mineral Cu
dan Zn dalam pakan terhadap organ dalam dan lemak abdomen Ayam
Broiler. Jurnal Ilmu Nutrisi Dan Teknologi Pakan, 18(3), 74–80.
https://doi.org/10.29244/jintp.18.3.74-80
Lijung, D., Suardana, I. B. K., & Nindhia, T. S. (2020). Seroprevalensi penyakit
tetelo pada peternakan itik di Desa Baha,Kecamatan Mengwi, Kabupaten
Badung, Provinsi Bali. Indonesia Medicus Veterinus, 9(5), 787–796.
https://doi.org/10.19087/imv.2020.9.5.787
Mare, N. (2019). Hubungan pelaksanaan biosekuriti dengan mortalitas pada usaha
peternakan ayam ras petelur di Desa Cipotakari Kecamatan Panca Rijang
Kabupaten Sidrap. Universitas Hasanuddin Makassar. Skripsi. Fakultas
Peternakan Universitas Hasanuddin Makassar.
 37

Martinez, N. W. I., Kencana, G. A. Y., & Dibia, I. N. (2021). Deteksi virus Avian
Influenza subtipe H5N1 pada itik di Pasar Hewan Beringkit dan Pasar
Galiran, Bali. Jurnal Veteriner, 22(3), 442–449.
https://doi.org/10.19087/jveteriner.2021.22.3.442
Martoenus, A., & Djatmikowati, T. F. (2015). Teknik pengambilan darah pada
beberapa hewan. Diagnosa Veteriner, 14(1), 6–12.
Mase, M. (2022). Hemagglutinin-neuraminidase gene of genotype VII Newcastle
Disease virus strains isolated in Japan. J Vet Med Schi, 84(1), 1–5.
https://doi.org/10.1292/jvms.21-0490
Masum, A., Zahirul, M., Khan, I., Nasrin, M., Hassan, M. N., Zubayer, M., Khan,
I., & Islam, N. (2014). Detection of immunoglobulins containing plasma
cells in the thymus , bursa of fabricius and spleen of vaccinated broiler
chickens with Newcastle Disease Virus vaccine. International Journal of
Veterinary Science and Medicine, 2(2), 103–108.
https://doi.org/10.1016/j.ijvsm.2014.06.001
Mawarni, E. (2020). Efektivitas ransum pakan ternak dengan penambahan ampas
tahu dan eceng gondok (Eichhornia crassippes) terfermentasi sebagai pakan
alternatif ayam broiler (Gallus domesticus). Skripsi. Fakultas Tarbiyah dan
Keguruan Universitas Islam Negeri Raden Intan Lampung.
Mufidah, T., Purwaningsih, U., Nafiqoh, N., Lusiastuti, M., & Lusiastuti, A. M.
(2020). Imunoglobulin yolk anti (Streptococcus agalactiae) untuk
imunoterapi penyakit Streptococcosis pada ikan nila (Oreochromis niloticus).
Jurnal Riset Akuakultur, 15(2), 103–110.
Noor, P. S., Amir, Y. S., Dewi, M., & Malvin, T. (2018). Pengaruh pemberian
pegagan (Centela asiatica) terhadap titer antibodi dan berat badan ayam
broiler.INA-Rxiv Paper, 6(2), 176–185. https://doi.org/10.31227/osf.io/8ck97
Novryantoro, V. (2019). Karakteristik biologis virus Newcastle Disease isolat
lapang burung dara (Columba livia). Skripsi. Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Airlangga.
OIE. (2018). Manual emerging infectious diseases of diagnostic test and vaccines
for terrestial animals. Office International Des Epizooties.
https://doi.org/10.3201/eid1612.100402 diakses pada 26 Maret 2022.
OIE. (2021). Newcastle Disease. OIE Terrestrial Manual 2021.
https://www.woah.org/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/3.03.04_
AI.pdf. diakses pada 13 Desember 2022.
Perdana, Z. (2016). Deteksi antibodi virus Newcastle Disease (ND) pada ayam
buras (Gallus domesticus) di Desa Gayaman Kecamatan Mojoanyar
Kabupaten Mojokerto dengan Uji Haemaglutination Inhibition (HI). Skripsi.
Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.
Peraturan Menteri Pertanian. (2016). Peraturan Menteri Pertanian Nomor
26/Permentan/PK.230/5/2016 Tahun 2016.
 38

Pudjiatmoko. (2014). Manual penyakit unggas (2nd ed.). Jakarta: Direktorat

Jendral Peternakan dan Kesehatan Hewan, Kementrian Pertanian.
Puspitaningrum, T., Mahfudz, L. D., & Nasoetion, M. H. (2021). Potensi bawang
putih (Alium sativum) dan (Lactobacillus acidophilus) sebagai sinbiotik
untuk meningkatkan performans ayam broiler. Jurnal Sain Peternakan
Indonesia,16(2),210–214.
https://doi.org/https://doi.org/10.31186/jspi.id.16.2.210-214
Putra, H. H., Purnomowati, E., Fatie, Y., & Ratna. (2020). Kasus kematian ayam
petelur di Desa Bulo, Kecamatan Panca Rijang, Kabupaten Sidenreng
Rappang pada Februari 2020. Bulletin Diagnosa Veteriner, 1(1), 26–36.
http://repository.pertanian.go.id/handle/123456789/11684
Putra, I. P. C., Wasito, R., & Wuryastuty, H. (2020). Penambahan water additive
kimchi dapat mencegah infeksi alami flu burung (Avian influenza) pada
ayam pedaging. Jurnal Veteriner, 21(36), 75–82.
https://doi.org/10.19087/jveteriner.2020.21.1.75
Putri, Handharyani, E., Soejoedono, R. D., Setiyono, A., Mayasari, N. L. P. I., &
Poetri, O. N. (2017). Pathotypic characterization of Newcastle disease virus
isolated from vaccinated chicken in West Java, Indonesia. Veterinary World,
10(4), 438–444. https://doi.org/10.14202/vetworld.2017.438-444
Putri, N., Wulandari, I., Ernawati, R., & Rantam, F. A. (2021). Multi-epitope
peptide vaccine prediction against Newcastle disease virus using immuno-
informatics approaches. Bulgarian Journal of Veterinary Medicine, 1(1),
136–143. https://doi.org/10.15547/bjvm.2019-0074
Rahmawati, A., Wijaya, N. S., Purnama, M. T. E., Rahmahani, J., Yudhana, A., &
Yunita, M. N. (2018). Pengaruh ekstrak kulit dan jus buah delima putih
(Punica granatum L.) terhadap titer antibodi ayam kampung super yang
divaksin Newcastle Disease. Jurnal Medik Veteriner, 1(3), 68–73.
https://doi.org/10.20473/jmv.vol1.iss3.2018.68-73
Reid, T., Fore, F., Chidzwondo, F., Kashangura, C., Stray-Pedersen, B., &
Mduluza, T. (2022). Screening of mushrooms from the woodlands of
Zimbabwe: Occurrence of lectins and partial purification of a mucin specific
lectin from Boletus edulis. Plos One, 17, 1–12.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0265494
Retno, D., Larasati, D. N., & R, R. F. (2014). Analisis rumah tangga usaha
peternakan di Indonesia (16th ed.). Jakarta: Badan Pusat Statistik.
Rini, S. R., Sugiharto, S., & Mahfudz, L. D. (2019). Pengaruh perbedaan suhu
pemeliharaan terhadap kualitas fisik daging Ayam Broiler periode finisher.
Jurnal Sain Peternakan Indonesia, 14(4), 387–395.
https://doi.org/10.31186/jspi.id.14.4.387-395
Risna, Jamili, A., & Syam, J. (2022). Sistem perkandangan ayam broiler di closed
house Chandra Munard Kabupaten Takalar. Jurnal Sains Dan Teknologi
IndustriPeternakan,2(1),16–22.
 39

https://doi.org/https://doi.org/10.55678/jstip.v2i1.606
Rozi, F., Rahmahani, J., Purnama, M. T. E., Hamid, I. S., Yudhana, A., & Praja,
R. N. (2020). Seroprevalensi antibodi Newcastle Disease (ND) pada itik di
Desa Temuasri, Sempu, Banyuwangi. Jurnal Medik Veteriner, 3(1), 108–
113. https://doi.org/10.20473/jmv.vol3.iss1.2020.108-113
Santoso, K., Widyadhari, A. S., Poetri, O. N., & Jumadin, L. (2019). Profil
leukosit puyuh ( Coturnix coturnix japonica ) yang mendapat ekstrak daun
singkong dalam mengatasi dampak cekaman panas. Jurnal Veteriner, 20(4),
519–525. https://doi.org/10.19087/jveteriner.2019.20.4.519
Sina, F. B., Martin, B., Du, R., Lamb, R. A., Lee, B., Leroy, E. M., Kurath, G.,
Mu, E., Nowotny, N., Patterson, J. L., Maisner, A., Pearson, M. N., Randall,
R. E., Revill, P. A., Payne, S. L., Smither, S. J., & Walker, P. J. (2017).
Taxonomy of the order Mononegavirales. Arch Virol, 162, 2493–2504.
https://doi.org/10.1007/s00705-017-3311-7
Spackman, E. (2020). Animal influenza virus (Methods in molecular biology) (3rd
ed.). Humana Press. https://doi.org/doi:10.1007/978-1-0716-0346-8
Su, Q., Li, Y., Zhang, Y., Zhang, Z., Meng, F., Cui, Z., Chang, S., & Zhao, P.
(2018). Newcastle disease virus-attenuated vaccine LaSota played a key role
in the pathogenicity of contaminated exogenous virus. Veterinary Research,
49(1), 1–11. https://doi.org/10.1186/s13567-018-0577-z
Suardana, Ida, Bagus, K., & Putra, I. Putu, C. (2016). Isolasi dan identifikasi
Newcastle Disease pada ayam buras. Skripsi. Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Udayana.
Subedi, D., Kandel, M., Khanal, S., Mahato, P. L., & Acharya, R. (2020).
Prevalence of diseases in broilers age group 1-14 days at Chitwan district.
International Journal of Applied Sciences and Biotechnology, 8(1), 102–107.
https://doi.org/10.3126/ijasbt.v8i1.28251
Suciyani, Naim, N., & Armah, Z. (2017). Analisis kuantitas dan hitung jenis
leukosit pada petugas radiologi di Balai Besar Kesehatan Paru Masyarakat
(BBKPM) Makassar. Jurnal Poltekkes Kemenkes Makassar, 12(1), 59–65.
Susanti, E. D., Dahlan, M., & A, D. W. (2016). Perbandingan produktivitas ayam
broiler terhadap sistem kandang terbuka (open house) dan kandang tertutup
(closed house) di UD Sumber Makmur Kecamatan Sumberrejo Kabupaten
Bojonegoro. Jurnal Ternak, 7(6), 1–6.
Sutarto. (2020). Pemberian ekstrak temulawak dan kunyit untuk meningkatkan
produktivitas dan sebagai immunostimulator Avian Influenza pada Ayam
Broiler. Jurnal Peternakan Nusantara, 45(1), 65–72.
https://doi.org/10.31602/zmip.v45i1.2137
Tille, P. M. (2022). Diagnostic Microbiology (15th ed.). Elsevier.
https://evolve.elsevier.com/cs/product/9780323681056?role=student&CT=I
D. diakses pada 23 Juni 2022.
 40

Truelove, S., Zhu, H., Lessler, J., Riley, S., Read, J. M., Wang, S., On, K., Yi, K.,
Qiang, C., & Derek, J. (2016). A comparison of hemagglutination inhibition
and neutralization assays for characterizing immunity to seasonal influenza
A. Influenza and Other Respiratory Viruses, 10, 518–524.
https://doi.org/10.1111/irv.12408
Ukmawati, S., Atna, R., & Ahrizal, A. H. F. (2018). Analisis cemaran mikroba
pada daging ayam broiler di Kota Makassar. Scripta Biologica, 5(1), 51–53.
https://doi.org/HTTPS://DOI.ORG/10.20884/1.SB.2018.5.1.799
Wibowo, S. E., Wibowo, M. H., & Sutrisno, B. (2017). Penentuan patogenesitas
molekuler virus Newcastle Disease yang diisolasi dari ayam komersial tahun
2013-2016. Acta Veterinaria Indonesiana, 5(2), 105–119.
https://doi.org/10.29244/avi.5.2.105-119
Widiastuti, L. K., Santosa, P. E., Hartono, M., & Siswanto. (2022). Uji efektivitas
Echinacea purpurea (Radix) sebagai imunomodulator terhadap titer antibodi
Avian Influenza (AI) dan Newcastle Disease (ND) pada broiler jantan.
Jurnal Riset Dan Inovasi Peternakan, 6(2), 118–122.
https://doi.org/https://doi.org/10.23960/jrip.2022.6.2.118-122
Wiedosari, E., & Wahyuwardani, S. (2015). Studi kasus penyakit ayam pedaging
di Kabupaten Sukabumi dan Bogor. Jurnal Kedokteran Hewan, 9(1), 9–13.
Wijayanto, A. (2020). Bunga rampai : kolaborasi multidisiplin ilmu dalam
menghadapi tantangan di era new normal (S. Zulfiqar (ed.); 1st ed.).
Akademia Pustaka. https://doi.org/10.31219/osf.io/pyvzj
Yanestria, S. M. (2015). Tingkat cemaran Escherichia coli pada susu segar dari
peternakan sapi perah di Surabaya. Vitek:Bidang Kedokteran Hewan, 5(1),
2–5.
Yesica, R. (2013). Deteksi antibodi Avian influenza (Subtipe H5) dengan uji HI
(Hemagglutination inhibition) pada serum merpati (Columba livia) yang
diambil dari Pasar Banjaran Kota Kediri. Skripsi. Fakultas Kedokteran
Hewan Universitas Airlangga.
 LAMPIRAN

Lampiran 1. Titer antibodi ayam pedaging umur 14, 18 dan 21 hari

Pascavaksinasi Umur (hari)

Kode Sampel
14 18 21
1 22 22 22
2 22 22 23
3 22 22 22
4 21 21 20
5 20 23 25
6 22 21 24
7 22 21 22
8 22 22 22
9 23 21 20
10 22 21 23
11 22 21 23
12 22 21 22
13 22 21 22
14 23 21 22
15 21 21 21

41
 42

Lampiran 2. Perhitungan 4 HA

Hasil titer kelompok umur 14 dan 18 hari adalah 27 = 128

Hasil titer/4 HA unit = 128/4 = 32, menghasilkan perbandingan (1:31)
Kebutuhan / Plate = 2,5 mL PBS
2 plate = 5 mL
Kebutuhan 2 plate adalah 5 mL : 31
Maka 160 µL antigen dalam 5 mL PBS

Hasil titer kelompok umur 21 hari adalah 28 = 256

Hasil titer/4 HA unit = 256/4 = 64, menghasilkan perbandingan (1:63)
Kebutuhan / Plate = 2,5 mL PBS
2 plate = 5 mL
Kebutuhan 2 plate adalah 5 mL : 63
Maka 80 µL antigen dalam 5 mL PBS
 43

Lampiran 3. Perhitungan Odds Ratio (OR)

Odds Ratio (OR) = (0 x 15) ÷ (15 x 0) = 0
Odds Ratio (OR) = (0 x 13) ÷ (15 x 2) = 0
Odds Ratio (OR) = (0 x 13) ÷ (15 x 2) = 0
 44

Lampiran 4. Lembar hasil uji HA-HI di Laboratorium Diagnostik