EFEK PEMBERIAN PROPOLIS TERHADAP PENINGKATAN

EKSPRESI mRNA PRDM16, PGC 1 ALPHA DAN UCP1 PADA

JARINGAN LEMAK PUTIH TIKUS JANTAN WISTAR YANG
DIINDUKSI DENGAN DIET TINGGI LEMAK

Oleh
Try Intan Kartini
131620210004
USULAN RISET

Untuk memenuhi salah satu syarat ujian

Guna memperoleh gelar Magister Kesehatan Anti-Aging and Aesthetic Medicine
Program Pendidikan Magister Kesehatan Anti-Aging and Aesthetic Medicine

PROGRAM MAGISTER
ANTI-AGING AND AESTHETIC MEDICINE
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS PADJADJARAN
BANDUNG
2022
EFEK PEMBERIAN PROPOLIS TERHADAP PENINGKATAN
EKSPRESI mRNA PRDM16, PGC 1 ALPHA DAN UCP1 PADA
JARINGAN LEMAK PUTIH TIKUS JANTAN WISTAR YANG
DIINDUKSI DENGAN DIET TINGGI LEMAK

Oleh
Try Intan Kartini
131620210004
USULAN RISET

Untuk memenuhi salah satu syarat ujian

Guna memperoleh gelar Magister Kesehatan Anti-Aging and Aesthetic Medicine
Program Pendidikan Magister Kesehatan Anti-Aging and Aesthetic Medicine

PROGRAM MAGISTER
ANTI-AGING AND AESTHETIC MEDICINE
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS PADJADJARAN
BANDUNG
2022
EFEK PEMBERIAN PROPOLIS TERHADAP PENINGKATAN
EKSPRESI mRNA PRDM16, PGC 1 ALPHA DAN UCP1 PADA
JARINGAN LEMAK PUTIH TIKUS JANTAN WISTAR YANG
DIINDUKSI DENGAN DIET TINGGI LEMAK

Oleh
Try Intan Kartini
131620210004

USULAN RISET

Untuk memenuhi salah satu syarat ujian

Guna memperoleh gelar Magister Kesehatan Anti-Aging and Aesthetic Medicine
Program Pendidikan Magister Kesehatan Anti-Aging and Aesthetic Medicine

Telah disetujui oleh Tim Pembimbing pada tangga seperti tertera di bawah ini

Bandung, 7 September 2022

Hanna Goenawan, dr., M.Kes., AIFO., Ph.D Dr. Yuni Susanti Pratiwi, dr., M.Kes., AIFO

Ketua Tim Pembimbing Anggota Pembimbing

 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan yang Maha Esa, atas segala
limpahan rahmat serta karunia-Nya, usulan riset yang berjudul “efek pemberian
propolis terhadap peningkatan ekspresi mRNA PRDM16, PGC 1 alpha dan UCP1
pada jaringan lemak putih tikus jantan wistar yang diinduksi dengan diet tinggi
lemak” dapat diselesaikan dengan baik.
Usulan riset dapat tersusun dengan baik atas arahan, bantuan dan bimbingan
dari berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis mengucapkan Terima Kasih kepada:

1. Prof. Dr. Rina Indiastuti, S.E., M.SIE. selaku Rektor Universitas Padjadjaran
atas kesempatan dalam menimba ilmu di program magister Universitas
Padjadjaran.
2. Dr. Yudi Mulyana Hidayat, dr., Sp.OG(K). selaku Dekan Fakultas Kedokteran
Universitas Padjadjaran atas kesempatan dan arahan dalam menimba ilmu di
Fakultas Kedokteran Universitas Padjadjaran.
3. Astrid Feinisa Khairani, dr., M.Kes., Ph.D. sebagai Ketua Program Studi
Magister Anti-aging and Aesthetic Medicine, Fakultas Kedokteran, Universitas
Padjadjaran yang senantiasa memberikan arahan kepada anak didiknya.
4. Hanna Goenawan, dr., M.Kes., AIFO., Ph.D. sebagai Ketua Tim Pembimbing
yang telah memberikan bimbingan dan pengarahan selama penyusunan usulan
riset ini.
5. Dr. Yuni Susanti Pratiwi, dr., M.Kes., AIFO sebagai Anggota Pembimbing
yang telah memberikan bimbingan dan pengarahan selama penyusunan usulan
riset ini.
6. Kepada keluarga besar yang telah memberikan dukungan dan doa dalam
penyelesaian usulan tesis ini.

Akhir kata, penulis berharap usulan riset ini dapat bermanfaat bagi
perkembangan ilmu kedokteran di kemudian hari.
Pekanbaru,

Penulis

ii
 DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR ............................................................................................ ii

DAFTAR ISI .......................................................................................................... iii
DAFTAR TABEL ................................................................................................... v
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. vi
DAFTAR SINGKATAN ....................................................................................... vi
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... iix
BAB I ...................................................................................................................... 1
PENDAHULUAN .................................................................................................. 1
1.1. Latar Belakang ......................................................................................... 1
1.2. Rumusan Masalah .................................................................................... 5
1.3. Tujuan Penelitian ...................................................................................... 5
1.4. Manfaat Penelitian .................................................................................... 6
1.5. Luaran Riset dan Tingkat Kesiapterapan Teknologi (TKT)………………………7

BAB II ..................................................................................................................... 8
KAJIAN PUSTAKA, KERANGKA PEMIKIRAN, HIPOTESIS ......................... 8
2.1. Kajian Pustaka .......................................................................................... 8
2.1.1. Obesitas ............................................................................................. 8
2.1.2. Browning dari WAT........................................................................ 10
2.1.3. Propolis ........................................................................................... 16
2.1.4. Penggunakan Model Hewan Tikus untuk Penelitian Browning ....... 20
2.2. Kerangka Pemikiran dan premis ............................................................ 21
2.3. Diagram Konsep Riset ............................................................................ 22
2.4. Hipotesis………………………………………………………………..24
BAB III ................................................................................................................. 25
METODE PENELITIAN ...................................................................................... 25
3.1. Desain Riset ............................................................................................ 25
3.2. Populasi, Besar Sampel, dan Teknik Pengambilan Sampel ................... 25
3.3. Definisi Operasional dan Pengukuran Variabel ..................................... 29
3.4. Instrumen Riset....................................................................................... 30

iii
 3.5. Lokasi dan Waktu Riset ......................................................................... 31
3.6. Teknik Pengumpulan Data ..................................................................... 31
3.7. Alur Penelitian ........................................................................................ 34
3.8. Analisis Data .......................................................................................... 34
3.9. Etik Riset ................................................................................................ 35
3.10. Dummy Table ......................................................................................... 36
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 38

iv
 DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Perkiraan usia relatif tikus dikonversikan dengan usia manusia
berdasarkan fase kedewasaan secara sosial ........................................................... 20
Tabel 3.1 Komposisi asam lemak dalam pelet tikus HFD .................................... 27
Tabel 3.2 Variabel Penelitian ................................................................................ 29
Tabel 3.3 Asumsi Alokasi Waktu Penelitian ........................................................ 31
Tabel 3.4 Primer yang digunakan untuk RT-PCR ................................................ 33
Tabel 3.5 Rencana Penyajian Hasil Riset ............................................................. 36

v
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Lokasi WAT dan BAT pada manusia dan hewan pengerat .............. 12
Gambar 2.2 Peran PRDM16 dalam induksi browning WAT. .............................. 14
Gambar 2.3 Klasifikasi jenis propolis ................................................................... 18
Gambar 2.4 Diagram konsep riset ......................................................................... 22
Gambar 3.1 Skema Rancangan Penelitian ............................................................ 25
Gambar 3.2 Bagan Alur Penelitian ....................................................................... 34
Gambar 3.3 Contoh Penyajian Grafik Hasil Penelitian mRNA PRDM16, PGC1-α
dan UCP1 jaringan lemak putih ............................................................................ 37

vi
 DAFTAR SINGKATAN

ADRB3 adrenoreseptor beta 3

ATP Adenosine Triphosphate
BAT Brown Adipose Tissue
BBT bahan biologi tersimpan
BMP7 Bone Morphogenetic Protein 7
cAMP Cyclic Adenosine Monophosphate
CAPE caffeic acid phenethyl ester
CD36 cluster of differential 36
CIDEA cell death inducing DFFA like effector
Cox8b cytochrome C oxidase subunit VIIIb
CREB cAMP Response Element-Binding Protein
CPT1 carnitine palmitoyltransferase 1
D2 Iodothyronine Deiodinase
ERK extracellular-regulated kinase
Elovl3 elongation of very long chain fatty acids-like 3 protein
EWS Ewing Sarcoma
FABP fatty acid binding protein
HFD High Fat Diet
IMT indeks massa tubuh
LPL lipoprotein lipase
Myof5 myogenic factor 5
NCD Normal Chow Diet
NRF1 nuclear respiratory factor 1
NST non-shivering thermogenesis
PCR Polymerase Chain Reaction
PKB Protein Kinase B

vii
PGC Peroxisome Proliferator-Activated Receptor-Gamma Coactivator
PPAR Peroxisome Proliferator-Activated Receptor
PRDM16 PR Domain Containing 16
RT-PCR Real-Time Polymerase Chain Reaction
TAG Triasilgliserol
TNF-α tumor necrosis factor alpha
UCP Uncoupling Protein
WAT White Adipose Tissue
WHO World Health Organization
YBX1 Y-box complex binding protein

viii
 DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Daftar Riwayat Hidup ....................................................................... 40

ix
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Hiperlipidemia adalah kelainan metabolisme lipid yang ditandai dengan

peningkatan kolesterol total, trigliserida, dan low density lipoprotein-cholesterol

dan/atau penurunan high density lipoprotein cholesterol dimana homeostasis

kolesterol berperan penting dalam menjaga tingkat lipid darah.1 Hiperlipidemia

merupakan faktor risiko penyakit kardiovaskular yang menjadi penyebab nomor

satu dari kematian didunia. Di Amerika Serikat, di antara individu berusia >20

tahun, sekitar 37,4% pria dan 35,9% wanita didiagnosis penyakit kardiovaskuler

dan secara global >75% kematian akibat penyakit kardiovaskuler terjadi di negara

berkembang.2 Abnormalitas profil lipid seringkali tidak diketahui atau tidak

disadari oleh pasien dan juga lebih sering terjadi pada individu usia lanjut.3

Hiperlipidemia dapat dipicu oleh pola hidup tidak sehat, salah satu contohnya

seperti mengkonsumsi makanan tinggi lemak yang dapat menyebabkan

peningkatan konsumsi energi. Ketika asupan energi secara kronis melebihi

pengeluaran energi dapat mengakibatkan akumulasi jaringan lemak putih (white

adipose tissue/WAT) yang berlebihan.4

Pada penuaan terjadi proses pemutihan pada jaringan lemak coklat (brown

adipose tissue/BAT) yang meningkat sehingga seiring bertambahnya usia dikaitkan

dengan massa WAT yang lebih tinggi serta massa BAT yang lebih rendah.5-7 WAT

bertanggung jawab untuk penyimpanan energi dan mengatur homeostasis

metabolik dan sistem kekebalan. Berbeda dengan BAT yang memiliki mitokondria

1
yang lebih banyak dengan tetesan lipid yang banyak, WAT mengandung sedikit

mitokondria dan satu tetes lipid besar.2 Depot subkutan dari WAT merupakan

lokasi yang paling umum untuk pencoklatan dan memiliki potensi yang lebih besar

untuk berdiferensiasi.3 Studi yang dilakukan oleh Duta-Mare dkk menunjukkan

bahwa BAT mampu menurunkan asam lemak bebas, gliserol bebas, trigliserida dan

glukosa darah kemungkinan akibat aktivasi protein UCP1 yang sangat berkurang

serta mobilisasi substrat yang rusak.4 Thermogenesis BAT melalui reseptor β-

adrenergik dan mengarah pada aktivasi uncoupling protein (UCP1) yang terletak di

membran mitokondria bagian dalam.2 Aktivasi reseptor β-adregenergik kemudian

menstimulasi konversi jaringan lemak putih menjadi jaringan lemak beige dan

proses pencoklatan melibatkan banyak ekspresi faktor transkripsi, seperti PR

domain containing 16 (PRDM16) dan peroksisom proliferator-activated receptor

(PPAR)-γ, Peroxisome Proliferator-Activated Receptor-Gamma Coactivator

(PGC-1α) dan Uncoupling Protein 1 (UCP-1) yang merupakan ciri dari

thermogenesis dan dimediasi oleh aktivasi protein kinase A dan PPARα/γ.3,8 P

Pada hiperlipidemia terjadi gangguan pada proses pencoklatan di jaringan lemak

putih sehingga diperlukan pengembangan strategi terapi baru seperti modifikasi

gaya hidup yang efektif untuk menghilangkan peradangan pada jaringan lemak.

Disisi lain, penggunaan agen farmakologis telah menunjukkan efek samping yang

tidak menyenangkan.9 Oleh karena itu dibutuhkan pemberian neutraceutikal yang

berfungsi untuk merangsang termogenesis pada deposit lemak.

Beberapa komponen bioaktif dapat mempengaruhi metabolisme lipid. Salah

satu komponen bioaktif yang berpotensi untuk pencegahan hiperlipidemia adalah

2
caffeic acid phenethyl ester (CAPE). CAPE merupakan senyawa polifenol

hidrofobik yang memiliki struktur mirip flavonoid dan banyak terdapat pada

tanaman.9,10 CAPE memiliki gugus hidroksil dalam cincin katekol yang berperan

dalam banyak aktivitas biologis.11 CAPE mengurangi produksi dan sekresi

adipokin serta faktor transkripsi yang terkait dengan adipogenesis di sel 3T3-L1

preadiposit seperti leptin, tumor necrosis factor alpha (TNF-α), amino pektin,

interleukin dan resistin.10,12 CAPE ditemukan untuk menekan diferensiasi adiposit.

CAPE memblokir fosforilasi extracellular-regulated kinase (ERK) dan

Akt/Protein kinase B (PKB), dan menyebabkan kegagalan untuk meningkatkan

cyclin D dalam sel 3T3-L1 sebagai respons terhadap stimulus diferensiasi.9 Studi

yang dilakukan oleh Kim SH dkk pada tikus C57BL/6 yang diberi makan diet tinggi

lemak menunjukkan bahwa CAPE berguna untuk memperbaiki penyakit metabolik

dengan menginduksi aktivitas PPARγ dan remodeling jaringan lemak serta

membantu menyimpan kelebihan energi secara stabil sehingga mencegah

terjadinya hiperlipidemia, perlemakan hati, peradangan dan resistensi insulin.12,13

Propolis merupakan produk sarang lebah memiliki kadar CAPE yang tinggi,

berasal dari campuran air liur lebah madu, ekstrak dari biji, daun, dan eksudat flora

tumbuhan. Karena bahan utama propolis berasal dari tumbuhan, komposisi kimia

propolis sangat bergantung pada asal geografisnya.10,14 Propolis sebagian besar

dikumpulkan oleh lebah dari resin tanaman dan eksudat tanaman. Seperti propolis

berasal dari Sumatera Utara-Indonesia yang merupakan produk turunan sarang

lebah tanpa sengat yaitu jenis Geniotrigona thoracica yang menggunakan

resin/propolis tanaman sebagai bahan utama pembuatan sarang untuk melindungi

3
diri dengan cara merekatkan resin langsung ke tubuh penjajah untuk melumpuhkan

mereka. Propolis dari jenis lebah ini telah diidentifikasi memiliki kandungan

flavonoid yang tinggi, memiliki aktivitas sitotoksik terhadap sel kanker payudara

MCF-7, menghambat xantin oksidase dan menunjukkan aktivitas antiemetik yang

kuat.15

Aktivitas biologis yang dimiliki propolis dapat memberikan manfaat

kesehatan bagi manusia.15 Penelitian yang dilakukan oleh Nishikawa S et al

melaporkan bahwa senyawa turunan propolis Brasil yaitu Artepillin C dapat

mengurangi akumulasi lemak tubuh pada tikus dan secara signifikan penanda

adiposit coklat yang diinduksi, termasuk uncoupling protein 1 (UCP1), cell death

inducing DFFA like effector A (CIDEA), cytochrome C oxidase subunit VIIIb

(Cox8b), dan elongation of very long chain fatty acids-like 3 protein (Elovl3) dalam

sel C3H10T1/2 mirip adiposit dan adiposit turunan WAT pada inguinal tikus dan

menstabilkan faktor transkripsi PRDM16, yang menyebabkan peningkatan kadar

PRDM16 intraseluler dan tidak bergantung pada jalur pensinyalan B3-adrenergik

melalui saraf simpatis.16 Meskipun pada penelitian tersebut tidak ada induksi high

fat diet (HFD), terkait hasil browning dari jaringan lemak pada penelitian ini

menjanjikan untuk mencegah dan mengatasi obesitas. Hingga saat ini penelitian

tentang efek propolis terhadap ekspresi kadar PRDM16, PGC1-α dan UCP1 dari

jaringan lemak putih serta penggunaan propolis sebagai agen anti-hiperlipidemia

masih terbatas.

Uraian diatas dapat dituangkan menjadi tema sentral sebagai berikut:

Hiperlipidemia dapat dipicu oleh pola hidup tidak sehat, salah satu contohnya
seperti mengkonsumsi makanan tinggi lemak. Ketika asupan energi secara

4
 kronis melebihi pengeluaran energi dapat mengakibatkan akumulasi jaringan
lemak putih (WAT) yang berlebihan. Aktivasi reseptor β-adregenergik
menstimulasi konversi WAT menjadi adiposit beige dan proses pencoklatan
melibatkan banyak ekspresi faktor transkripsi, seperti PR domain containing 16
(PRDM16) dan peroksisom proliferator-activated receptor (PPAR)-γ,
Proliferator-Activated Receptor-Gamma Coactivator (PGC-1α) dan
Uncoupling Protein 1 (UCP-1) yang merupakan ciri dari thermogenesis dan
dimediasi oleh aktivasi protein kinase A dan PPARα/γ. Propolis merupakan
produk sarang lebah memiliki kadar CAPE yang tinggi dimana CAPE dapat
menginduksi aktivitas PPARγ, remodeling jaringan lemak, mengurangi
produksi dan sekresi adipokin serta faktor transkripsi. Penelitian ini bertujuan
untuk menganalisis pengaruh pemberian propolis terhadap peningkatan
ekspresi mRNA PRDM16, PGC1-α dan UCP1 pada jaringan lemak putih tikus
wistar jantan yang yang mendapatkan diet tinggi lemak.

1.2. Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan, dapat diidentifikasi beberapa

rumusan permasalahan dalam penelitian ini, meliputi:

1) Apakah terdapat pengaruh pemberian propolis terhadap peningkatan ekspresi

mRNA PRDM16 pada jaringan lemak putih kelompok tikus jantan wistar yang

mendapatkan diet tinggi lemak?

2) Apakah terdapat pengaruh pemberian propolis terhadap peningkatan ekspresi

mRNA PGC 1 alpha pada jaringan lemak putih kelompok tikus jantan wistar

yang mendapatkan diet tinggi lemak?

5
3) Apakah terdapat pengaruh pemberian propolis terhadap peningkatan ekspresi

mRNA UCP1 pada jaringan lemak putih kelompok tikus jantan wistar yang

mendapatkan diet tinggi lemak?

1.3. Tujuan Penelitian

Berdasarkan rumusan masalah yang telah diuraikan, tujuan dari penelitian ini

adalah untuk:

1) Menganalisis pengaruh pemberian propolis terhadap peningkatan ekspresi

mRNA PRDM16 pada jaringan lemak putih kelompok tikus jantan wistar yang

mendapatkan diet tinggi lemak.

2) Menganalisis pengaruh pemberian propolis terhadap peningkatan ekspresi

mRNA PGC-1 alpha pada jaringan lemak putih kelompok tikus jantan wistar

yang mendapatkan diet tinggi lemak.

3) Menganalisis pengaruh pemberian propolis terhadap peningkatan ekspresi

mRNA UCP1 pada jaringan lemak putih kelompok tikus jantan wistar yang

mendapatkan diet tinggi lemak.

1.4. Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memiliki manfaat sebagai berikut:

1.4.1 Manfaat Teoritis

1. Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah terbaru

mengenai pengaruh pemberian propolis terhadap peningkatan ekspresi

6
 mRNA PRDM16, PGC1-α dan UCP1 pada jaringan lemak putih kelompok

tikus jantan wistar yang mendapatkan diet tinggi lemak.

2. Memberikan kazhanah keilmuan terkait efek potensial propolis sebagai anti-

hiperlipidemia pada proses termogenesis dan dengan demikian meningkatkan

pengeluaran energi.

1.4.2 Manfaat Praktis

Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi, sumbangan

praktis yang bermanfaat dan menjadi rujukan dasar penelitian lanjutan

mengenai pemberian propolis sebagai kandidat anti-hiperlipidemia.

1.5. Luaran Riset dan Tingkat Kesiapterapan Teknologi (TKT)

Penelitian ini merupakan penelitian dengan TKT -3, yaitu konsep fungsi

dan/atau karakteristik penting dari suatu teknologi yang telah dibuktikan secara

analitis dan eksperimental. Studi laboratorium pada penelitian ini dilakukan untuk

memvalidasi potensi penggunaan propolis sebagai kandidat anti-hiperlipidemia.

7
 BAB II

KAJIAN PUSTAKA, KERANGKA PEMIKIRAN, HIPOTESIS

2.1. Kajian Pustaka

2.1.1. Obesitas

Obesitas merupakan penumpukan lemak yang berlebihan akibat

ketidakseimbangan asupan energi (energy intake) dengan energi yang digunakan

(energy expenditure) dalam waktu lama. Hal itu bisa dapat disebabkan peningkatan

asupan makanan padat energi yang tinggi lemak dan aktivitas yang menetap.15

Berdasarkan pengukuran indeks massa tubuh (IMT) [berat badan (kg)/tinggi badan

(m2)], yang, seseorang dikatakan memiliki kelebihan berat badan dengan hasil IMT

25 dan bila hasil IMT 30 atau lebih sebagai obesitas. Namun, IMT tidak menghitung

persentase lemak atau rasio lemak terhadap otot sehingga hanya dapat digunakan

untuk skrining obesitas.16-18 Lemak yang berada di sekitar perut memberikan risiko

kesehatan yang lebih tinggi dibandingkan lemak di daerah bagian tubuh lain. Suatu

metode yang sederhana namun cukup akurat untuk mengetahui hal tersebut adalah

dengan pengukuran lingkar pinggang. Indikator ini baik untuk menentukan lemak

perut (abdominal) sebagai prediktor peningkatan risiko penyakit. Risiko meningkat

pada hasil pengukuran lingkar pinggang 90 cm pada pria dan 80 cm pada wanita

terlepas dari IMT.19

Sejak tahun 1975, prevalensi obesitas meningkat tiga kali lipat di seluruh

dunia dan masih terus meningkat.17,20 World Health Organization (WHO)

menyatakan pada tahun 2016 sebanyak 39% orang dewasa berusia 18 tahun ke atas

8
mengalami kelebihan berat badan dan 13% diantaranya mengalami obesitas yang

diperkirakan akan terus meningkat setiap tahunnya. Peningkatan IMT merupakan

faktor risiko utama untuk penyakit tidak menular seperti penyakit kardiovaskular

yang merupakan penyebab kematian utama pada tahun 2012.17 Di Indonesia,

berdasarkan data dari Riset Kesehatan Dasar (RISKESDAS) tahun 2018, prevalensi

obesitas meningkat 10,5% pada tahun 2007 menjadi 21,8% tahun 2018.20

Organ adiposa adalah sekitar 20% dari total berat badan pada manusia

yang sehat.18 Tergantung pada derajat, durasi dan distribusi jaringan adiposa

berlebih, risiko kesehatan yang dapat terjadi yaitu dislipidemia, diabetes tipe 2,

hipertensi, penyakit kardiovaskular, non-alcoholic fatty liver disease, gagal ginjal

kronis, obstructive sleep apne dan sindrom hipoventilasi, gangguan mood, dan

gangguan fisik disabilitas. Salah satu penyebabnya yaitu resistensi insulin yang

dipicu oleh obesitas di WAT, hati, dan otot rangka, dikombinasikan dengan

gangguan sekresi insulin oleh sel pankreas untuk mengatasi resistensi ini.21

Obesitas ditandai dengan akumulasi lemak tubuh yang berlebihan di

WAT, sebagian besar disebabkan oleh ketidakseimbangan antara asupan dan

pengeluaran energi. Oleh karena itu, peningkatan massa jaringan lemak

menyebabkan peningkatan IMT, yang dikaitkan dengan perkembangan

komorbiditas terkait obesitas.22

Pada obesitas, WAT dapat menjadi sangat disfungsional dan tidak

berkembang dengan baik untuk menyimpan kelebihan energi. Ini menginduksi

deposisi lemak ektopik di jaringan lain yang mengatur homeostasis glukosa

kemudian menyebabkan lipotoksisitas.23-25 Banyak efek merusak telah dikaitkan

9
dengan perluasan WAT yang tidak sehat, termasuk peradangan, fibrosis, hipoksia,

perubahan sekresi adipokin, dan disfungsi mitokondria, yang masing-masing dapat

mewakili target terapi baru dalam pengobatan obesitas. Dalam kondisi

keseimbangan energi positif yang berkepanjangan, adiposit memperluas ukuran

dan jumlah sel untuk mengkompensasi kebutuhan peningkatan penyimpanan lipid.

Sel-sel ini pasti mencapai batas di mana tekanan anabolik tambahan tidak dapat

diakomodasi, karena keterbatasan ekspansi sel dan jaringan. Mencapai ambang

batas ini menyebabkan stres pada adiposit dan memulai proses inflamasi sebagai

respons terhadap stres ini.24,26

2.1.2. Browning dari WAT

Organ adiposa memiliki dua jenis jaringan yaitu, jaringan adiposa putih

(WAT) dan jaringan adiposa coklat (BAT) melakukan fungsi tubuh yang berbeda.

Fungsi WAT adalah untuk bertindak sebagai reservoir molekul energi tinggi (asam

lemak) dan memasoknya sebagai bahan bakar saat dibutuhkan. Sementara BAT

menggunakan molekul energi tinggi yang sama untuk menghasilkan panas dalam

termogenesis untuk menjaga suhu tubuh. Oleh karena itu harus ada keseimbangan

antara akumulasi asam lemak dalam WAT dan penggunaannya dalam berbagai

fungsi metabolisme. Jika keseimbangan ini diubah, metabolisme WAT akan

terganggu. WAT selain sebagai sumber energi juga berperan penting dalam regulasi

metabolisme lipid dan glukosa. Energi diperoleh dari makanan disimpan oleh WAT

dalam bentuk triasilgliserol (TAG). Mobilisasi lemak dan penyimpanannya juga

10
diatur oleh WAT dan berbagai hormone lainnya. Jaringan ini juga memproduksi

hormon leptin yang sangat penting, yang mengontrol perilaku asupan makanan.19,27

Sel adiposa berasal dari sel induk multipotent kemudian berkembang

menjadi sel adiposa coklat, sel adiposa putih atau myosit. Sel adiposa coklat dan

myosit berasal dari sel myogenic factor 5 positif (Myof5+) sedangkan sel adiposa

putih dan krem berkembang dari sel myogenic factor 5 negatif (Myof5-). Jaringan

adiposa terutama terdiri dari adiposit, yang didominasi adiposit putih di WAT, dan

adiposit coklat di BAT sehingga WAT dan BAT memiliki struktur dan peran

biologis yang berbeda. Adiposit putih memiliki satu tetes lipid besar yang

menempati sebagian besar volume sel dengan sedikit mitokondria, menyebabkan

dislokasi nukleus di perifer. WAT ditemukan di seluruh tubuh, dibagi menjadi

depot visceral (di sekitar organ – mesenterika, perigonadal, omental) dan subkutan

(di bawah kulit – inguinal). Sementara BAT adalah sel polygonal yang

mengandung beberapa tetesan lipid kecil (oleh karena itu, disebut jaringan adiposa

multilokular), dengan inti pusat dikelilingi oleh sitoplasma yang jelas dan sejumlah

besar mitokondria.7,28 Ukuran dan komposisi BAT hewan pengerat berbeda

menurut usia, jenis kelamin, dan strain dengan depot terbesar di daerah

interskapular dan depot yang lebih kecil di daerah serviks, supraklavikula, dan peri-

aorta. Adiposit beige termogenik dapat terbentuk di depot WAT tertentu seperti

suprascapular, subkutan anterior dan inguinal (Gambar 2.1).4

11
 Gambar 2.1 lokasi WAT dan BAT pada manusia dan hewan pengerat.4

Jaringan lemak beige atau brite merupakan WAT yang dapat

bertransformasi menjadi jaringan yang menyerupai BAT yang disebut sebagai

proses browning dan mempunyai marker jaringan lemak yang mirip dengan WAT

seperti adiponektin, adipsin, dan PPAR-γ, serta memiliki ekspresi gen UCP1 yang

rendah pada kondisi basal.27 Ciri khas pencoklatan jaringan adiposa adalah induksi

adiposit yang aktif secara termogenik dalam depot lemak putih, mengekspresikan

sejumlah besar faktor termogenik uncoupling protein 1 (UCP1). UCP1 terletak di

membran mitokondria bagian dalam dan melepaskan gaya penggerak proton dari

fosforilasi oksidatif yang mengarah ke energi sebagai panas. Selain UCP1,

transformasi WAT menjadi jaringan yang menyerupai BAT ditandai dengan

peningkatan ekspresi gen yang spesifik pada BAT seperti PRDM16, dan ADRB3

(adrenoreseptor beta 3) yang juga berperan dalam fungsi thermogenesis.

Peningkatan energy expendicture dan metabolic rate dalam proses termogenesis

dapat mencegah obesitas, resistensi insulin dan sindrom metabolik.27-29

12
 Suhu hangat memberikan program lemak putih pada adiposit krem dan

coklat, sebuah proses yang disebut pemutihan (whitening). Namun, hanya adiposit

beige yang menjalani pemrograman ulang kromatin yang bergantung pada suhu

dari coklat menjadi putih, sambil mempertahankan memori epigenomik dari

paparan dingin sebelumnya. Dengan kata lain, sel-sel beige mengingat ketika

mereka sebelumnya terkena dingin dan karena itu dapat dengan cepat menyalakan

ulang termogenik ketika dipapar kembali. Temuan ini juga menekankan plastisitas

molekuler dan metabolik yang hebat dari adiposit beige dan menggambarkan

mengapa pencoklatan jaringan adiposa telah dikaitkan dengan peningkatan

metabolisme energi.27,30,31

PRDM16 penginduksi kuat fenotipe termogenik dalam sel lemak dan

memiliki peran penting dalam mempertahankan struktur dan fungsi jaringan dan

sepanjang perjalanan diferensiasi serta melanjutkan fungsi koaktivator yang

memungkinkan dan mempertahankan ekspresi gen termogenik. Aktivasi PRDM16

berpotensi untuk merangsang thermogenesis WAT manusia dan mungkin

pengobatan yang menjanjikan untuk penyakit metabolik.8 PRDM16 adalah 140kDa

zinc-finger protein yang awalnya diidentifikasi pada kromosom sel leukemia

myeloid akut pada manusia. PRDM16 bertindak sebagai sakelar molekuler untuk

menginduksi pengembangan lemak coklat dari Myf5-, sel prekursor mirip myoblast

selama perkembangan embriologis. Ia melakukan ini melalui interaksi dengan

beberapa faktor transkripsi, seperti cAMP Response Element-Binding Protein

(CREB), Peroxisome Proliferator Activator Receptor γ. PGC-1a/b, dan C-terminal

13
binding proteins. PRDM16 memainkan peran penting dalam pengembangan sel

beige / brite di subkutan WAT (gambar 2.2).30-34

Gambar 2.2 Peran PRDM16 dalam induksi browning WAT.34

PRDM16 merangsang diferensiasi adiposit coklat melalui diferensiasi

myoblast melalui interaksi dengan reseptor yang diaktifkan PPARγ. PRDM16

bersama dengan PPARγ berperan sinergis dalam proses browning. Selain

menginduksi gen BAT, mekanisme dari PRDM16 adalah dengan merepresi gen

WAT. Ewing Sarcoma (EWS)/Y-box complex binding protein 1 (YBX1)

mempromosikan bone morphogenetic protein 7 (BMP7) yang juga menentukan

garis keturunan adiposit coklat selama perkembangan. Sel-sel prekursor coklat

kemudian berdiferensiasi menjadi adiposit coklat matang melalui rangkaian proses

transkripsi. ZFP516 merangsang ekspresi gen termogenik seperti UCP1, DIO2 dan

CIDEA untuk mempromosikan diferensiasi adiposit coklat. ZFP516 berinteraksi

14
tidak hanya dengan PRDM16, tetapi juga dengan LSD1 dalam mengaktifkan

program gen termogenik. ZC3H10 meningkatkan transkripsi gen untuk biogenesis

mitokondria, seperti nuclear respiratory factor 1 (NRF1) dan TFAM. EBF2

mengaktifkan transkripsi PPARγ,yang mempromosikan ekspresi banyak gen

metabolisme lipid, seperti fatty acid binding protein (FABP4/aP2), cluster of

differential 36 (CD36) dan lipoprotein lipase (LPL). Selain itu, EBF2 dan PPARγ

mengaktifkan transkripsi PRDM16. CREB juga mengaktifkan ranskripsi PPARγ

untuk mempromosikan ekspresi gen adipogenik dan termogenik.30-34

PPARγ mengontrol ekspresi gen yang terlibat dalam diferensiasi jaringan

lemak, mediator penting untuk metabolisme lipid jaringan adiposa dan beberapa

konstituen yang berasal dari tumbuhan seperti isoflavon, genistein, dan naringenin

menginduksi lipolisis di jaringan adiposa. Lebih lanjut, ditunjukkan bahwa

konstituen yang berasal dari tumbuhan ini menurunkan akumulasi lipid dengan

represi PPARγ di adiposit. PPARγ coactivator alpha (PGC1 alpha) adalah co-

regulator transkripsi lain yang berinteraksi dengan banyak protein termasuk PPARγ

dan PRDM16 untuk mempromosikan pengembangan BAT, berperan dalam

aktivasi transkripsi gen pada oksidasi lipid dan metabolisme oksidatif mitokondria

serta menstimulasi ekspresi UCP1. PPAR-γ mengatur transkripsi UCP1 selama

diferensiasi adiposit coklat, tetapi ditekan pada adiposit coklat matang yang

diaktifkan. Setelah diferensiasi, PPAR-α mengontrol kadar UCP1 pada adiposit

coklat matang. Meskipun PPAR-γ berperan dalam pencoklatan, PPAR- α

tampaknya sangat diperlukan dalam mengaktifkan transkripsi gen yang terkait

dengan oksidasi lipid carnitine palmitoyltransferase 1 (CPT1), yang memicu

15
oksidasi dan memungkinkan adiposit unilocular berubah menjadi adiposit

multilocular. PPARα dan PPARγ menginduksi biogenesis mitokondria dengan

demikian berperan dalam termogenesis melalui pengendalian transkripsi PGC-1α

dan ekspresi gen PRDM16 yang berperan dalam perkembangan jaringan lemak

coklat.30-34

Uncoupling protein 1 (UCP1), awalnya disebut thermogenin karena

perannya dalam non-shivering thermogenesis (NST), berada di dalam membran

mitokondria bagian dalam. Ketika diaktifkan, UCP1 memungkinkan konduktansi

proton membran dalam yang signifikan, melepaskan oksidasi sebagai bahan bakar

mitokondria dan respirasi dari produksi Adenosine Triphosphate (ATP). Sesuai

dengan hukum termodinamika, potensi elektro-kimia yang dihasilkan oleh oksidasi

bahan bakar di mitokondria BAT sebagian besar dihamburkan sebagai panas

dibandingkan digunakan untuk fosforilasi ADP. Oleh karena itu, ketika UCP1

diaktifkan akan mengubah mitokondria BAT menjadi radiator kecil yang

diinternalisasi yang dapat membantu menjaga suhu inti endotermik, sehingga UCP1

berperan penting dalam aktivasi termogenesis pada BAT.35,36

2.1.3. Propolis

Propolis merupakan produk sarang lebah, campuran air liur lebah madu,

ekstrak dari biji dan daun, dan eksudat flora tumbuhan. Sejauh ini, lebih dari 500

senyawa kimia telah diisolasi dari propolis. Karena bahan utama propolis berasal

dari tumbuhan, komposisi kimia propolis sangat bergantung pada asal geografisnya.

Secara umum propolis dapat diklasifikasikan menjadi dua jenis, yaitu jenis poplar

16
yang kaya akan flavonoid dan jenis Baccharis yang banyak mengandung turunan

asam sinamat. Propolis jenis poplar terutama diproduksi di Eropa, Amerika Utara,

dan daerah non-tropis Asia, sedangkan propolis jenis Baccharis diproduksi di

Brasil.14

Secara umum, ada upaya untuk mengklasifikasikan sampel dari seluruh

dunia sesuai dengan komposisi kimia dan asal bunga. Poplar, Birch, Tropis,

Mediterania dan Pasifik adalah kelas propolis yang diakui. Didaerah tropis,

beberapa jenis propolis berasal dari banyak sumber yang berbeda telah

diidentifikasi. Sebagai contoh, di Brazil, ada 13 jenis propolis termasuk yang hijau,

merah, dan coklat, yang sumber utamanya adalah Baccharis dracunculifolia,

Dalbergia ecastaphyllum, dan Hyptis divaricata. Yang paling populer adalah warna

hijau yang warnanya pada klorofil terjadi pada jaringan muda dan daun

B.dracunculifolia dan dikumpulkan oleh lebah. Jenis ini propolis kaya akan turunan

fenilpropanoid (misalnya, artepillin C), sedangkan flavonoid dalam jumlah kecil.

Propolis merah ditandai dengan adanya banyak flavonoid (formononetin,

liquiritigenin, pinobanksin-3-asetat, pinobanksin, luteolin, rutin, quercetin,

pinocembrin, daidzein, dan isoliquiritigenin), yang ditemukan dalam eksudat resin

dari permukaan D. ecastaphyllum dimana jenis propolis ini juga khas Kuba dan

Meksiko. Propolis coklat terutama diproduksi di timur laut Brasil dari H.

divaricata. Contoh lain dari propolis tropis termasuk yang berasal dari getah yang

dikeluarkan oleh bunga Clusia sp. ditemukan di Kuba dan Venezuela dengan

turunan benzofenon dan propolis “Pasifik” yang berasal dari pohon tropis

Macaranga tanarius yang ditemukan di pulau-pulau tropis laut pasifik seperti

17
Taiwan, Okinawa, dan Indonesia yang pembuat kimianya adalah C-

prenylflavanones.8,37,39 Klasifikasi jenis propolis secara umum berdasarkan

komposisi kimia dari zona geografis yang berbeda terdapat pada gambar 2.3.

Gambar 2.3 Klasifikasi jenis propolis secara umum berdasarkan komposisi

kimia dari zona geografis.38

Propolis terdiri dari resin (50%), lilin (30%), minyak esensial (10%), serbuk

sari (5%), dan senyawa organik lainnya (5%). Dua belas jenis flavonoid yaitu,

pinocembrin, acacetin, chrysin, rutin, luteolin, kaempferol, apigenin, myricetin,

catechin, naringenin, galangin, dan quercetin; dua asam fenolik, asam caffeic dan

asam sinamat, dan satu turunan stilben yang disebut resveratrol telah terdeteksi

dalam ekstrak propolis dengan elektroforesis zona kapiler. Propolis juga

mengandung vitamin penting, seperti vitamin B1, B2, B6, C, dan E serta mineral

bermanfaat seperti magnesium (Mg), kalsium (Ca), kalium (K), natrium (Na),

tembaga (Cu), seng. (Zn), mangan (Mn), dan besi (Fe). Beberapa enzim, seperti

18
suksinat dehidrogenase, glukosa-6- fosfatase, adenosin trifosfatase, dan asam

fosfatase, juga terdapat dalam propolis.39,40

Propolis telah diteliti memiliki efek antimikroba, antioksidan, antikanker,

antinematoda, antidiabetik, kesehatan gigi, perawatan dermatologi dan memiliki

efek menguntungkan untuk gangguan metabolisme seperti obesitas.39,40 Obesitas

disebabkan oleh berbagai faktor lingkungan dan genetik. Salah satu faktor

lingkungan utama yang menyebabkan obesitas adalah asupan diet tinggi lemak.

Model hewan obesitas yang diinduksi diet telah dikembangkan untuk menyelidiki

obesitas manusia, mereplikasi efek obesitas manusia lebih akurat daripada obesitas

genetic. Tikus yang diberi diet tinggi lemak, mengalami obesitas, hiperglikemia,

dan hiperlipidemia, dan berbeda dari yang diberi makan diet normal di tingkat

ekspresi transkripsi gen tertentu.40 Penelitian yang dilakukan oleh Zheng Y et all

pada tikus betina dan jantan tipe C57BL/6 usia 6-8 minggu yang diberikan diet

tinggi lemak (60% kkal lemak, D12492) menunjukkan bahwa propolis dapat

membantu untuk mengontrol berat badan, sensitivitas insulin yang lebih baik, dan

tingkat metabolisme yang lebih rendah dan memodulasi mikrobiota usus dengan

mengurangi kelimpahan Alistipes dan meningkatkan Lactobacillus dimana kedua

bakteri ini berperan penting dalam efek pencegahan dari obesitas dan diabetes tipe

2, sehingga propolis dapat menjadi metode alternatif untuk mengontrol berat badan,

mencegah obesitas, sindrom metabolik dan propolis juga memiliki potensial untuk

menginduksi pembentukan adiposit beige.13,36,41 Dalam hal ini, propolis

menstabilkan faktor transkripsi PRDM16, yang menyebabkan peningkatan kadar

19
PRDM16 intraseluler sehingga secara signifikan dapat meningkatkan jumlah sel

yang mengekspresikan UCP1 dalam jaringan lemak pada proses browning.14

2.1.4 Penggunakan Model Hewan Tikus untuk Penelitian Browning

Di antara berbagai model hewan, hewan pengerat seperti tikus paling sering

digunakan untuk model hewan percobaan karena karakteristik biologisnya. Tikus

dengan cepat mencapai kematangan seksual (kurang dari 8 minggu setelah lahir)

dan memiliki siklus reproduksi dan periode kehamilan yang relatif singkat (3

minggu). Rentang hidup yang pendek pada tikus sekitar 2-3 tahun adalah manfaat

lain untuk menggunakan model hewan pengerat ini untuk menyelidiki gangguan

metabolism seperti penyakit metabolik sehingga data tentang proses patogenik

gangguan metabolisme dapat diperoleh dalam jangka waktu yang relatif singkat

(beberapa bulan hingga satu tahun).14,42 Pada tabel 2.1 memperkirakan usia relatif

tikus dikonversikan usia manusia berdasarkan fase kedewasaan secara sosial.42

Tabel 2.1 Perkiraan usia relatif tikus dikonversikan dengan usia manusia
berdasarkan fase kedewasaan secara sosial.42
Usia tikus (bulan) Usia manusia (tahun)
6 18
12 30
18 45
24 60
30 75
36 90
42 105
45 113
48 120

20
 Tikus sebagai model hewan penelitian tidak bisa dimaknai sebagai manusia

mini karena perbedaan anatomi, fisiologi dan fenomena biologis harus

dipertimbangkan ketika menganalisis hasil dari setiap penelitian pada tikus.

Ukuran tubuh yang kecil merupakan kelebihan penggunaan model tikus berkaitan

dengan biaya percobaan, memungkinkan ruang berkembang biak, volume obat

yang disuntikkan dan beberapa protokol intervensi eksperimental, seperti kontrol

kalori, perawatan bedah dan kimia, dan manipulasi gen juga telah dikembangkan.

Oleh karena itu, percobaan menggunakan hewan pengerat adalah standar global

dalam validasi penelitian untuk gangguan metabolisme sehingga selanjutnya

berguna untuk menyelidiki peristiwa molekuler pada individu obesitas dan

memberikan pengetahuan tentang efek agen anti-obesitas di beberapa jaringan pada

tingkat individu.14,42

2.2. Kerangka Pemikiran

Jaringan lemak beige merupakan WAT yang dapat bertransformasi menjadi

jaringan yang menyerupai BAT yang disebut sebagai proses browning.

Transformasi WAT menjadi jaringan yang menyerupai BAT ditandai dengan

peningkatan ekspresi gen yang spesifik pada BAT seperti PRDM16 dan UCP1

yang juga berperan dalam fungsi thermogenesis. PRDM16 bertindak sebagai

sakelar molekuler untuk menginduksi dan merangsang diferensiasi adiposit

coklat melalui interaksi dengan reseptor yang diaktifkan PPARγ. PRDM16

bersama dengan PPARγ berperan sinergis dalam proses browning. Ia melakukan

proses ini melalui interaksi dengan beberapa faktor transkripsi seperti PGC1 alpha

21
yang merupakan co-regulator transkripsi yang berinteraksi dengan banyak

protein untuk mempromosikan pengembangan BAT, berperan dalam aktivasi

transkripsi gen pada oksidasi lipid dan metabolisme oksidatif mitokondria serta

menstimulasi ekspresi UCP1. Induksi adiposit yang aktif secara termogenik

dalam depot lemak putih mengekspresikan sejumlah besar faktor termogenik

uncoupling protein 1 (UCP1). Peningkatan energy expendicture dan metabolic

rate dalam proses termogenesis dapat mencegah obesitas, resistensi insulin dan

sindrom metabolik. Propolis dapat menginduksi pembentukan adiposit beige

dengan menstabilkan faktor transkripsi PRDM16, yang menyebabkan

peningkatan kadar PRDM16 intraseluler sehingga secara signifikan dapat

meningkatkan jumlah sel yang mengekspresikan UCP1 dalam jaringan lemak

pada proses browning.

2.3. Diagram Konsep Riset

Gambar 2.4 Diagram Konsep Riset

Keterangan: cara kerja propolis ditandai dengan panah biru Parameter yang akan
dianalisis pada penelitian terdapat pada kotak kuning.

22
 Berdasarkan bukti-bukti ilmiah yang telah diuraikan, maka secara

selektif dapat dirumuskan beberapa premis sebagai berikut :

Premis 1 : Intake makanan yang berlebih memiliki risiko terjadinya

dislipidemia.21

Premis 2 : Pemberian diet tinggi lemak menyebabkan akumulasi jaringan lemak

putih berlebihan.22

Premis 3 : Jaringan lemak putih merupakan tempat lokasi pencoklatan.27-29

Premis 4 : Ciri khas pencoklatan jaringan adiposa adalah induksi adiposit yang

aktif secara termogenik dalam depot lemak putih, mengekspresikan sejumlah

besar faktor termogenik.26,28

Premis 5 : Propolis menginduksi browning jaringan lemak dengan menstabilkan

faktor transkripsi PRDM16, yang menyebabkan peningkatan kadar PRDM16

intraseluler dan tidak bergantung pada jalur pensinyalan B3-adrenergik melalui

saraf simpatis 40

Premis 6 : PRDM16 bersama dengan PPARγ berperan sinergis dalam proses

browning.30-35

Premis 7 : PGC1 alpha adalah co-regulator transkripsi yang berinteraksi dengan

banyak protein termasuk PPARγ dan PRDM16 untuk mempromosikan konversi

WAT ke beige.30-31

Premis 8 : Proses browning terjadi melalui peningkatan ekspresi PGC1-α,

PPARα/γ, dan PRDM16, yang selanjutnya meningkatkan UCP1 yang berperan

dalam thermogenesis.30-35

23
Premis 9 : Peningkatan energy expendicture dan metabolic rate dalam proses

thermogenesis mencegah obesitas, resistensi insulin dan sindrom metabolik.27,29

2.3 Hipotesis

Berdasarkan premis dan kerangka pemikiran yang telah dikemukakan, maka

dapat dirumuskan hipotesis sebagai berikut :

1. Terdapat pengaruh pemberian propolis terhadap peningkatan ekspresi

mRNA PRDM16 pada jaringan lemak putih kelompok tikus jantan wistar yang

mendapatkan diet tinggi lemak.

2. Terdapat pengaruh pemberian propolis terhadap peningkatan ekspresi

mRNA PGC 1 alpha pada jaringan lemak putih kelompok tikus jantan wistar

yang mendapatkan diet tinggi lemak.

3. Terdapat pengaruh pemberian propolis terhadap peningkatan ekspresi

mRNA UCP1 pada jaringan lemak putih kelompok tikus jantan wistar yang

mendapatkan diet tinggi lemak.

24
 BAB III

METODE PENELITIAN

3.1. Desain Riset

Penelitian ini menggunakan objek penelitian yaitu bahan biologi tersimpan

(BBT) berupa jaringan lemak putih/WAT tikus jantan galur wistar. Desain ini
menggunakan BBT WAT dari empat kelompok tikus, yaitu kelompok kontrol yang
diberikan normal chow diet (NCD), kelompok high fat diet (HFD), NCD dengan
pemberian propolis, dan HFD dengan pemberian propolis.

BBT WAT
Outcome
NCD
BBT WAT
Outcome
Rancangan HFD
Sampel
Acak BBT WAT
Outcome
NCD + Propolis
BBT WAT
Outcome
HFD + Propolis
Gambar 3.1 Skema Rancangan Penelitian

NCD: kelompok tikus wistar jantan diberi diet kontrol normal; HFD: kelompok
tikus wistar jantan diberi diet tinggi lemak; NCD+Propolis: kelompok tikus wistar
jantan diberi diet kontrol normal dan perlakuan propolis; HFD+Propolis: kelompok
tikus wistar jantan diberi diet tinggi lemak dan perlakuan propolis; O: outcome
(hasil perlakuan).

3.2. Populasi, Besar Sampel, dan Teknik Pengambilan Sampel

3.2.1. Kriteria Inklusi

1) BBT jaringan lemak putih berasal dari tikus jantan galur wistar berusia

8 minggu dengan berat 220 – 400 gram.

25
 2) BBT jaringan lemak putih tersimpan dengan baik pada freezer suhu

-80oC

3.2.2. Kriteria Eksklusi

BBT jaringan lemak putih mengalami kerusakan selama penyimpanan

pada freezer suhu -80oC.

3.2.3. Pembagian Kelompok Perlakuan

Sampel penelitian dibagi menjadi empat kelompok perlakuan secara acak, yaitu:

1) BBT jaringan lemak putih kelompok NCD (tikus wistar jantan yang

mendapatkan diet kontrol normal tanpa pemberian propolis).

2) BBT jaringan lemak putih kelompok HFD (tikus wistar jantan yang

mendapatkan diet tinggi lemak tanpa pemberian propolis).

3) BBT jaringan lemak putih kelompok NCD + Propolis (tikus wistar jantan yang

mendapatkan diet kontrol normal dan pemberian propolis).

4) BBT jaringan lemak putih kelompok HFD + Propolis (tikus wistar jantan yang

mendapatkan diet tinggi lemak dan pemberian propolis).

3.2.4 Perlakuan Tikus Semasa Hidup

BBT yang digunakan berasal dari tikus-tikus yang selama hidup

ditempatkan di kamar di bawah siklus terang-gelap 12 jam dengan suhu sekitar 22-

24°C, dan memungkinkan akses ke air secara ad libitum. Kelompok NCD diberi

normal chow diet yang mengandung 65,5% karbohidrat, 25% protein, 7% lemak,

dan sekitar 5% mikronutrien serta mineral, sedangkan kelompok HFD diberikan

standar diet tinggi lemak dengan pelet tikus diet tinggi lemak dengan pellet HFD

26
(lemak 34,9gm%, protein 26,2 gm%, karbohidrat 26,3 gm%).38,42-45 Rincian

komposisi asam lemak dapat dilihat pada tabel 3.1

Tabel 3.1 Komposisi asam lemak dalam pelet tikus HFD

Rantai Karbon: Ikatan Asam lemak Persentase

Ganda
Asam lemak jenuh
C14:0 Asam miristat 0 – 3%
C16:0 Asam palmitat 70 – 80%
C18:0 Asam stearate 5 – 10%
Asam Lemak Tak Jenuh
C18:1 > Asam oleat dan lebih tinggi 8 – 12%

Setelah 12 minggu induksi diet tinggi lemak, dilakukan pemeriksaan profil

lipid pada minggu 0. Selanjutnya pemberian propolis diberikan secara oral sekali

sehari untuk kelompok NCD+propolis dan HFD+propolis. Setiap tikus ditimbang

setiap hari menggunakan timbangan elektronik dan asupan harian makanan masing-

masing kelompok tikus juga diukur dengan mengurangkan berat sisa diet dari diet

awal. Selanjutnya pemeriksaan profil lipid juga dilakukan pada minggu ke 4 dan 8

perlakuan. Pemberian perlakuan dilakukan hingga 12 minggu dengan dosis 300

mg/kgBB berdasarkan penelitian sebelumnya.41 Tikus dikorbankan pasca perlakuan

sesuai protokol etik hewan coba dan sampel utama jaringan lemak putih akan

dikumpulkan kemudian disimpan pada freezeer suhu -80 oC.

27
3.2.5 Besar Sampel

Penentuan jumlah sampel berdasarkan rumus Federer dengan perhitungan

sebagai berikut.

(t-1)(n-1) ≥15

Keterangan :

t : Jumlah kelompok

n : Jumlah sampel tiap kelompok

Perhitungan untuk jumlah minimal sampel yang digunakan pada tiap kelompok

sebagai berikut.

(t-1)(n-1) ≥15

(4-1)(n-1) ≥15

3n-3 ≥15

3n ≥15 + 3

n≥6

Berdasarkan perhitungan didapatkan jumlah sampel minimal adalah 6

sampel untuk tiap kelompok. Jumlah sampel ditambah 10% dari jumlah sampel

minimal untuk mengantisipasi kemungkinan loss to follow up atau drop out

sehingga menjadi 7 BBT tikus tiap kelompok. Dengan demikian, jumlah BBT

jaringan lemak putih secara keseluruhan adalah 28.

28
3.3. Definisi Operasional dan Pengukuran Variabel

3.3.1. Variabel Bebas

BBT jaringan lemak putih berasal dari tikus dengan jenis diet, yaitu diet

kontrol normal, diet kontrol normal dan pemberian propolis, diet tinggi

lemak, diet tinggi lemak dan pemberian propolis.

3.3.2. Variabel Terikat

Ekspresi PRDM16, PGC1-α dan UCP1 dari jaringan lemak putih pada BBT

jaringan lemak putih tikus wistar jantan.

Tabel 3.2 Variabel Penelitian

Variabel Definisi Operasional Alat Ukur Skala
Jenis diet • diet kontrol normal (normal Kategorik
tikus chow diet) tanpa pemberian
propolis
• diet tinggi lemak (high fat
diet) tanpa pemberian
propolis
• diet kontrol normal (normal
chow diet) dan pemberian
propolis
• diet tinggi lemak (high fat
diet) dan pemberian propolis
PRDM16 Ekspresi mRNA PRDM16 RT-PCR Numerik
sebagai indikator browning
jaringan lemak.
PGC1-α Ekspresi mRNA PGC-1 alpha RT-PCR Numerik
sebagai indikator browning
jaringan lemak.
UCP1 Ekspresi mRNA UCP1 sebagai RT-PCR Numerik
indikator browning jaringan
lemak.

29
3.4. Instrumen Riset

3.4.1. Alat dan Bahan Ekstraksi dan Isolasi RNA

1) TRIzol™ Reagen

2) Water bath / heat block at 55-60°

3) Isopropanol

4) Etanol 75%

5) Air bebas RNase 0,5% SDS

6) Glikogen bebas RNase

7) Kloroform

8) 50 – 100 mg jaringan lemak per 1 mL TRIzol™ Reagen

9) Homogenizer

10) Alat sentrifugal

11) Inkubator

12) Pipet

13) Vorteks

3.4.2. Alat dan Bahan Polymerase Chain Reaction (PCR)

1) Real Time PCR Machine AriaMX

2) PCR kit

3) GAPDH primer

4) PRDM16 primer

5) PGC1-α primer

6) UCP1 primer

30
3.5. Lokasi dan Waktu Riset

Penelitian ini dilaksanakan di Science Lab kampus pascasarjana Universitas

Padjadjaran, Dipatiukur, Bandung dan laboratorium sentral Universitas

Padjadjaran, Jatinangor. Waktu penelitian dilakukan selama enam bulan yaitu bulan

September−Februari 2023.

Tabel 3.3 Asumsi Alokasi Waktu Penelitian

Tahap ke-
No Kegiatan
Jun Jul Ags Sep Okt Nov Des Jan Feb
1 Pembuatan
Proposal
2 Sidang Proposal
3 Revisi Proposal
4 Persiapan
Penelitian
5 Penelitian
• Pemberian
perlakuan
• Terminasi
• Ekstraksi
mRNA
• Pemeriksaan
PCR
6 Analisis Data
7 Interpretasi Hasil
8 Persiapan Sidang
9 Sidang dan lulus

3.6 Teknik Pengumpulan data

3.6.1 Ekstraksi RNA

Metode ekstraksi RNA dilakukan berdasarkan protokol ekstraksi RNA oleh

GENEzol™:

31
1) Homogenisasi sampel

a. Tambahkan 1 mL reagen GENEzol™ pada 50-100 mg sampel jaringan.

b. Homogenisasi sampel jaringan menggunakan Teflon kaca atau

homogenizer Polytron.

c. Inkubasi sampel yang sudah dihomogenisasi selama 5 menit pada suhu

ruang.

d. Pindahkan sampel ke tabung microcentrifuge 1.5 mL.

2) Pemisahan Fase

a. Tambahkan 200 μL kloroform pada sampel per 1 mL reagen GENEzol™

yang digunakan pada homogenisasi sampel.

b. Kocok tabung microcentrifuge selama 10 detik.

c. Sentrifugasi sampel pada rpm 12000-16000 selama 15 menit pada suhu 4

o
C untuk memisahkan fase.

d. Pindahkan fase aqueous atas pada tabung microcentrifuge 1.5 mL baru.

3) Presipitasi RNA

a. Tambahkan 1 volume isopropanol pada fase aqueous, kemudian campurkan

dengan membalikkan tabung beberapa kali.

b. Inkubasi sampel campuran selama 10 menit pada suhu ruang.

c. Sentrifugasi sampel pada rpm 12000-16000 selama 10 menit pada suhu 4

o
C untuk membentuk pellet DNA.

d. Secara hati-hati, lepaskan dan buang supernatan.

32
4) RNA Wash

a. Tambahkan 1 mL dari etanol 70% untuk mencuci pellet RNA kemudian

putar perlahan.

b. Sentrifugasi sampel pada rpm 12000-16000 selama 5 menit pada suhu 4 oC.

c. Secara hati-hati agar tidak mengenai pellet RNA, lepaskan supernatan

dengan pipet.

d. Keringkan RNA pellet di udara selama 5-10 menit pada suhu ruang.

5) Resuspensi RNA

a. Tambahkan 20-50 μL air bebas RNAse untuk meresuspensi pellet RNA.

b. Inkubasi pada suhu 55-60 oC selama 10-15 menit untuk melarutkan pellet

RNA.

3.6.2 Real Time-PCR

Pengukuran ekspresi mRNA dilakukan dengan teknik real time PCR satu Langkah

menggunakan mesin AriaMX Real Time PCR. Pada Tabel 3.4 menunjukkan daftar

urutan primer yang akan digunakan dalam penelitian ini.

Tabel 3.4 Primer yang digunakan untuk RT-PCR

mRNA Gene bank Primer sequence Product Tm GC% Ref

Fwd : 5’-3’ length Annea
Primer sequence ling
Rev: 5’-3’
PRDM16 XM_039111366 CACGAACACGAAGTGAGCCA 161 60.87 55.00 47
.1 TTCATCTCGCTGTTGGCGAT 60.11 50.00

PGC 1 NM_03134 GTGCAGCCAAGACTCTGTATGG 121 61.25 54.55 48

alpha 7.1 GTCCAGGTCATTCACATCAAGTTC 59.85 45.83

UCP1 NM_012682.2 GACTCGGATCCTGGAACGTC 140 59.90 60.00 49

AGCATAGGAGCCCAATGGTG 59.82 55.00

33
3.7 Alur Penelitian

Tikus putih galur Wistar jantan

usia dewasa dibagi menjadi 4 Pengukuran
kelompok : NCD, NCD + berat badan dan
Propolis, HFD, HFD + Propolis panjang badan
selama 9 minggu

Persetujuan Etik

BBT WAT BBT WAT BBT WAT BBT WAT

NCD HFD NCD+ Pr HFD + Pr

Pemeriksaan ekspresi mRNA PRDM16, PGC1 alpha, UCP1

Analisis Statistik dan kesimpulan

Gambar 3.2 Bagan Alur Penelitian

3.8 Analisis Data

Data diolah dan dianalisis menggunakan program IBM Statistical

Package for Social (SPSS) 26.0. dengan signifikansi statistik didesain pada

p<0.05. Data diekspresikan sebagai mean ± standard error minimum

(SEM).

34
3.8.1 Menentukan Distribusi Data

Untuk menentukan apakah analisis statistik dilakukan dengan uji

parametrik atau non parametrik akan dilakukan uji Shapiro-Wilk untuk

mengetahui distribusi dari rerata hasil penelitian dengan perkiraan bahwa

H0 adalah populasi dengan distribusi normal.50 Oleh karena itu pada

penelitian ini, data dinyatakan terdistribusi normal apabila p>0.05 karena

signifikansi yang digunakan adalah 5%.

3.8.2 Uji Hipotesis

Uji hipotesis pada data akan dianalisis menggunakan one way

ANOVA dilanjutkan dengan uji post hoc Bon Feronni. Bila distribusi data

tidak normal akan dianalisis menggunakan metode Kruskal Wallis

dilanjutkan dengan uji post hoc Dunn test.51,52 Data dinyatakan signifikan

bila p<0,05.

3.9 Aspek Etik Penelitian

Penelitian ini dilakukan setelah mendapat ethical clearance dari

Komisi Etik Penelitian Kesehatan (KEPK) Fakultas Kedokteran Universitas

Padjadjaran, dengan menerapkan prinsip 3R dalam penelitian: replacement,

reduction, dan refinement.53 Replacement yaitu dalam melakukan suatu

penelitian hewan coba atau subjek penelitian yang digunakan adalah yang

paling rendah dalam skala filogenetik. Pada penelitian ini, hewan coba yang

dipilih adalah tikus jantan galur wistar yang memiliki kemiripan struktur

35
 dengan manusia. Reduction artinya penggunaan jumlah hewan coba

seminimal mungkin namun masih memberikan informasi yang adekuat dan

hasil penelitian yang optimal. Dalam penelitian ini, telah dilakukan

penghitungan besar sampel minimal dengan rumus Federer dan didapatkan

total sampel 28 ekor tikus jantan galur wistar. Refinement artinya dilakukan

upaya untuk meminimalkan rasa ketidaknyamanan, rasa sakit dan

penderitaan pada hewan coba dengan prinsip dasar bahwa hewan coba harus

terbebas dari lapar dan haus, rasa nyeri dan penyakit, rasa tidak nyaman,

dan stress. Pada penelitian ini suhu lingkungan, jauh dari kebisingan dan

kebersihan dijaga serta Penerangan diatur sehingga hewan coba dapat

beraktivitas seperti biasa.

3.10 Dummy Table

Tabel 3.5 Perbandingan ekspresi mRNA PRDM16, PGC-1α, dan UCP1

pada kelompok propolis dan kelompok kontrol.
Kelompok BBT
Variabel
NCD HFD NCD+Pr HFD+Pr
Ekspresi mRNA PRDM16
Mean±SEM … … … …
Nilai p … … … …
Ekspresi mRNA PGC1-α
Mean±SEM … … … …
Nilai p … … … …
Ekspresi mRNA UCP1
Mean±SEM … … … …
Nilai p … … … …

36
 PRDM16
5

Kadar mRNA 4

0
NCD HFD NCD+Pr HFD+Pr

PGC-1 α
5

4
Kadar mRNA

0
NCD HFD NCD+Pr HFD+Pr

UCP 1

4
Kadar mRNA

0
NCD HFD NCD+Pr HFD+Pr

Gambar 3.3 Contoh Penyajian Grafik Hasil Penelitian mRNA PRDM16, PGC1-α
dan UCP1 jaringan lemak putih tikus wistar jantan

37
DAFTAR PUSTAKA

1. El-Tantawy WH, Temraz A. Natural products for controlling

hyperlipidemia: review. Arch Physiol Biochem [Internet]. 2019;125(2):128–
35. Available from: https://doi.org/10.1080/13813455.2018.1441315.
2. Libby P, Buring JE, Badimon L, Hansson GK, Deanfield J, Bittencourt MS,
et al. Atherosclerosis. Nat Rev Dis Prim. 2019;5(1):1–18.
3. Guo H, Yu Y, Ye Y, Zhou S. Accuracy of self-reported hypertension,
diabetes, and hyper-lipidemia among adults of Liwan, Guangzhou, China.
Iran J Public Health. 2020;49(9):1622–30.
4. Suchacki KJ, Stimson RH. Nutritional regulation of human brown adipose
tissue. Nutrients. 2021;13(6).
5. Heeren J, Scheja L. Brown adipose tissue and lipid metabolism. Curr Opin
Lipidol. 2018;29(3):180–5.
6. Duta-Mare M, Sachdev V, Leopold C, Kolb D, Vujic N, Korbelius M, et al.
Lysosomal acid lipase regulates fatty acid channeling in brown adipose tissue
to maintain thermogenesis. Biochim Biophys Acta - Mol Cell Biol Lipids
[Internet]. 2018;1863(4):467–78. Available from:
https://doi.org/10.1016/j.bbalip.2018.01.011.
7. Bargut TCL, Souza-Mello V, Aguila MB, Mandarim-De-Lacerda CA.
Browning of white adipose tissue: Lessons from experimental models. Horm
Mol Biol Clin Investig. 2017;31(1):1–13.
8. Ishibashi J, Seale P. Functions of Prdm16 in thermogenic fat cells.
Temperature. 2015;2(1):65–72
9. Scarano F, Gliozzi M, Zito MC, Guarnieri L, Carresi C, Macrì R, et al.
Potential of nutraceutical supplementation in the modulation of white and
brown fat tissues in obesity-associated disorders: Role of inflammatory
signalling. Int J Mol Sci. 2021;22(7).
10. Shin SH, Seo SG, Min S, Yang H, Lee E, Son JE, et al. Caffeic acid phenethyl
ester, a major component of propolis, suppresses high fat diet-induced
obesity through inhibiting adipogenesis at the mitotic clonal expansion stage.
J Agric Food Chem. 2014;62(19):4306–12.

38
11. Murtaza G, Karim S, Akram MR, Khan SA, Azhar S, Mumtaz A, et al.
Caffeic acid phenethyl ester and therapeutic potentials. Biomed Res Int.
2014;2014.
12. Kim SH, Park HS, Hong MJ, Hur HJ, Kwon DY, Kim MS. Caffeic Acid
Phenethyl Ester Improves Metabolic Syndrome by Activating PPAR-γ and
Inducing Adipose Tissue Remodeling in Diet-Induced Obese Mice. Mol Nutr
Food Res. 2018;62(10):1–31.
13. Hallajzadeh J, Milajerdi A, Amirani E, Attari VE, Maghsoudi H, Mirhashemi
SM. Effects of propolis supplementation on glycemic status, lipid profiles,
inflammation and oxidative stress, liver enzymes, and body weight: a
systematic review and meta-analysis of randomized controlled clinical trials.
J Diabetes Metab Disord. 2021;20(1):831–43.
14. Models A. Effects of Propolis Extract and Propolis-Derived Compounds on
Obesity and Diabetes : Knowledge. 2019;(Il):1–53.
15. Zulhendri F, Perera CO, Chandrasekaran K, Ghosh A, Tandean S, Abdulah
R, et al. Propolis of stingless bees for the development of novel functional
food and nutraceutical ingredients: A systematic scoping review of the
experimental evidence. J Funct Foods [Internet]. 2022;88(December
2021):104902. Available from: https://doi.org/10.1016/j.jff.2021.104902.
16. Nishikawa S, Aoyama H, Kamiya M, Higuchi J, Kato A, Soga M, et al.
Artepillin C, a typical brazilian propolis-derived component, induces brown-
like adipocyte formation in C3H10T1/2 cells, primary inguinal white adipose
tissue-derived adipocytes, and mice. PLoS One. 2016;11(9):1–12.
17. World Health Organization (WHO). Obesity and overweight [Internet]. 2021
[cited 2022 Agt 8]. Available from: https://www.who.int/news-room/fact-
sheets/detail/obesity-and-overweight.
18. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Overweight & obesity
[Internet]. 2021 [cited 2022 Agt 8]. Available from:
https://www.cdc.gov/obesity/adult/defining.html.
19. Dhawan D, Sharma S. Abdominal Obesity, Adipokines and Non-
communicable Diseases. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2022; 105737.

39
20. Ministry of Health. Laporan nasional Riskesdas 2018 [Internet]. 2018 [cited
2022 Agt 8]. Available from: https://dinkes.kalbarprov.go.id/wp-
content/uploads/2019/03/Laporan-Riskesdas-2018-Nasional.pdf.
21. Schetz M, De Jong A, Deane AM, Druml W, Hemelaar P, Pelosi P, et al.
Obesity in the critically ill: a narrative review. Intensive Care Med [Internet].
2019;45(6):757–69. Available from: https://doi.org/10.1007/s00134-019-
05594-1.
22. Reyes-Farias M, Fos-Domenech J, Serra D, Herrero L, Sánchez-Infantes D.
White adipose tissue dysfunction in obesity and aging. Biochem Pharmacol.
2021;192(August).
23. Blüher M. Metabolically healthy obesity. Endocr Rev. 2020;41(3):405–20.
24. Longo M, Zatterale F, Naderi J, Parrillo L, Formisano P, Raciti GA, et al.
Adipose tissue dysfunction as determinant of obesity-associated metabolic
complications. Int J Mol Sci. 2019;20(9).
25. Heymsfield SB, Wadden TA. Mechanisms, pathophysiology, and
management of obesity. N Engl J Med. 2017;376(3):254–66.
26. Montanari T, Pošćić N, Colitti M. Factors involved in white-to-brown
adipose tissue conversion and in thermogenesis: a review. Obes Rev.
2017;18(5):495–513.
27. Herz CT, Kiefer FW. Adipose tissue browning in mice and humans. J
Endocrinol. 2019;241(3):R97–109.
28. Verduci E, Calcaterra V, Di Profio E, Fiore G, Rey F, Magenes VC, et al.
Brown adipose tissue: New challenges for prevention of childhood obesity.
A narrative review. Nutrients. 2021;13(5).
29. Bargut TCL, Souza-Mello V, Aguila MB, Mandarim-De-Lacerda CA.
Browning of white adipose tissue: Lessons from experimental models. Horm
Mol Biol Clin Investig. 2017;31(1):1–13.
30. Tabuchi C, Sul HS. Signaling Pathways Regulating Thermogenesis. Front
Endocrinol (Lausanne). 2021;12(March):1–8.
31. Frontini A, Vitali A, Perugini J, Murano I, Romiti C, Ricquier D, et al. White-
to-brown transdifferentiation of omental adipocytes in patients affected by

40
 pheochromocytoma. BBA-MOL CELL BIOL L. 2013;1831(5):950–9.
32. Marlatt KL, Ravussin E, Biomedical P, Rouge B. Brown Adipose Tissue: An
Update on Recent Findings. HHS Public Access. 2018;6(4):389–96.
33. Montanari T, Pošćić N, Colitti M. Factors involved in white-to-brown
adipose tissue conversion and in thermogenesis: a review. Obes Rev.
2017;18(5):495–513.
34. Ohno H, Shinoda K, Spiegelman BM, Kajimura S. PPARγ agonists induce a
white-to-brown fat conversion through stabilization of PRDM16 protein.
Cell Metab [Internet]. 2012;15(3):395–404. Available from:
http://dx.doi.org/10.1016/j.cmet.2012.01.019.
35. Porter C. Quantification of UCP1 function in human brown adipose tissue.
Adipocyte [Internet]. 2017;6(2):167–74. Available from:
https://doi.org/10.1080/21623945.2017.1319535.
36. Bartesaghi S, Hallen S, Huang L, Svensson PA, Momo RA, Wallin S, et al.
Thermogenic activity of UCP1 in human white fat-derived beige adipocytes.
J Mol Endocrinol. 2015;29(1):130–9.
37. Kocot J, Kiełczykowska M, Luchowska-Kocot D, Kurzepa J, Musik I.
Antioxidant potential of propolis, bee pollen, and royal jelly: Possible
medical application. Oxid Med Cell Longev. 2018;2018.
38. Kasote D, Bankova V, Viljoen AM. Propolis: chemical diversity and
challenges in quality control. Phytochem Rev [Internet]. 2022;1. Available
from: https://doi.org/10.1007/s11101-022-09816-1
39. Pasupuleti VR, Sammugam L, Ramesh N, Gan SH. Honey, Propolis, and
Royal Jelly: A Comprehensive Review of Their Biological Actions and
Health Benefits. Oxid Med Cell Longev. 2017;2017.
40. Koya-Miyata S, Arai N, Mizote A, Taniguchi Y, Ushio S, Iwaki K, et al.
Propolis prevents diet-induced hyperlipidemia and mitigates weight gain in
diet-induced obesity in mice. Biol Pharm Bull. 2009;32(12):2022–8.
41. Zheng Y, Wu Y, Tao L, Chen X, Jones TJ, Wang K, et al. Chinese propolis
prevents obesity and metabolism syndromes induced by a high fat diet and
accompanied by an altered gut microbiota structure in mice. Nutrients.

41
 2020;12(4).
42. Andreollo NA, Santos EF dos, Araújo MR, Lopes LR. Rat’s age versus
human’s age: what is the relationship? Arq Bras Cir Dig. 2012;25(1):49–51.
43. Zakerkish M, Jenabi M, Zaeemzadeh N, Hemmati AA, Neisi N. The Effect
of Iranian Propolis on Glucose Metabolism, Lipid Profile, Insulin Resistance,
Renal Function and Inflammatory Biomarkers in Patients with Type 2
Diabetes Mellitus: A Randomized Double-Blind Clinical Trial. Sci Rep.
2019;9(1):1–11.
44. Oršolić N, Jurčević IL, Đikić D, Rogić D, Odeh D, Balta V, et al. Effect of
propolis on diet-induced hyperlipidemia and atherogenic indices in mice.
Antioxidants. 2019;8(6).
45. Ray HRD, Patriasih R, Sulastri A, Lesmana R. The potential of moringa
oleifera on mitochondrial biogenesis through increases total oxphos units
expression. J Eng Sci Technol. 2020;15(6):4214–22.
46. Malafaia AB, Nassif PAN, Ribas CAPM, Ariede BL, Sue KN, Cruz MA.
Obesity induction with high fat sucrose in rats. Arq Bras Cir Dig.
2013;26(Suplemento 1):17–21.
47. Becerril S, Rodríguez A, Catalán V, Sáinz N, Ramírez B, et al. Deletion of
Inducible Nitric-Oxide Synthase in Leptin-Deficient Mice Improves Brown
Adipose Tissue Function. 2010. PLOS ONE 5(6): e10962.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0010962
48. Sutherland, L. N., Bomhof, M. R., Capozzi, L. C., Basaraba, S. A. U. &
Wright, D. C. Exercise and adrenaline increase PGC-1α mRNA expression
in rat adipose tissue. J. Physiol. 587, (2009).
49. Wang, L. et al. Ellagic acid promotes browning of white adipose tissues in
high-fat diet-induced obesity in rats through suppressing white adipocyte
maintaining genes. Endocr. J. 66, (2019).
50. Kwak SG, Park S-H. Normality Test in Clinical Research. J Rheum Dis.
2019;26(1):5.
51. Gosselin RD. Guidelines on statistics for researchers using laboratory
animals: the essentials. Lab Anim. 2019;53(1):28–42.

42
52. Lee S, Lee DK. What is the proper way to apply the multiple comparison
test? Korean J Anesth. 2018;71(5):353–60.
53. Hubrecht RC, Carter E. The 3Rs and humane experimental technique:
Implementing change. Animals. 2019;9(10):1–10.

43
Lampiran 1. DAFTAR RIWAYAT HIDUP
1. Nama : Try Intan Kartini

2. Tempat/Tanggal Lahir : Pekanbaru/21 April 1994

3. Jenis Kelamin : Perempuan

4. Agama : Islam

5. Alamat Rumah : Jl. Penerbangan, Pekanbaru

6. Nomor Telepon/WA : 082391636090

7. Email : try21001@mail.unpad.ac.id

8. Riwayat Pendidikan Formal :

Tahun Tahun
Jenjang Institusi Bidang Ilmu / Jurusan
Masuk Keluar
SD Negeri 038 2001 2006
SD -
Pekanbaru
SMP SMP Negeri 8 Pekanbaru - 2006 2009
SMA Negeri 8 2009 2012
SMA IPA
Pekanbaru
S1 Universitas Riau Pendidikan Dokter 2012 2016
Profesi Universitas Padjadjaran Dokter Umum 2016 2018
Anti-aging and
S2 Universitas Padjadjaran 2021
Aesthetic Medicine

9. Riwayat Pekerjaan :

Pekerjaan Tahun
Internship Dokter RS Indrasari Rengat-Riau 2019
Internship Dokter Puskesmas Air Molek-Riau 2019

44
45