GAMBARAN SENSITIVITAS BERBAGAI ANTIBIOTIK DAN

PROFIL PLASMID Escherichia coli ISOLAT AIR SUMUR

GALI DESA NGEMPLAK KABUPATEN PATI

SKRIPSI

Diajukan sebagai salah satu syarat menyelesaikan

Pendidikan Diploma IV Kesehatan

Program Studi Analis Kesehatan

Proposal Skripsi
Analis Kesehatan

Diajukan Oleh :
Erla Farikatun Nisa
G1C012017

PROGRAM STUDI DIV ANALIS KESEHATAN

FAKULTAS ILMU KEPERAWATAN DAN KESEHATAN
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAHSEMARANG
2016

http://lib.unimus.ac.id
i
 GAMBARAN SENSITIVITAS BERBAGAI ANTIBIOTIK DAN PROFIL
PLASMID Escherichia coli ISOLAT AIR SUMUR GALI
DESA NGEMPLAK KABUPATEN PATI

Erla Farikatun Nisa1, Sri Darmawati2, Muhammad Evy Prastiyanto3

1.
Program Studi D IV Analis Kesehatan Fakultas Ilmu Keperawatan dan Kesehatan
Universitas Muhammadiyah Semarang.
2.
Laboratorium Biologi Molekuler Fakultas Ilmu Keperawatan dan Kesehatan Universitas
Muhammadiyah Semarang.
3.
Laboratorium Bakteriologi Fakultas Ilmu Keperawatan dan Kesehatan Universitas
Muhammadiyah Semarang.

ABSTRAK

Pemberian antibiotik merupakan cara pencegahan atau pengobatan untuk

menghambat pertumbuhan bakteri, seringnya penggunaan antibiotik secara terus
menerus dapat menimbulkan terjadinya resistensi bakteri terhadap antibiotik.
DNA Plasmid yang dimiliki oleh bakteri dapat mempengaruhi sifat resistensi
bakteri terhadap antibiotik. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui gambaran
sensitivitas E. coli terhadap berbagai antibiotik dan profil plasmid E. coli isolat air
sumur gali asal Desa Ngemplak Kabupaten Pati. Metode uji sensitivitas bakteri
yang digunakan adalah metode Kirby-Bauer dengan empat jenis antibiotik
(kloramfenikol, siprofloksasin, gentamisin dan ampisilin) dan metode isolasi
Plasmid menggunakan metode lisis alkali. Hasil uji sensitivitas dari 10 strain E.
coli menunjukkan hasil sensitif terhadap antibiotik kloramfenikol dan
siprofloksasin, pada antibiotik gentamisin terdapat empat strain dengan hasil
resisten (SG.04C, SG.07C, SG.08C, SG.09C) dan 10 strain E. coli menunjukkan
resistensi pada antibiotik ampisilin. Plasmid hasil isolasi dari 10 strain E. coli
menunjukkan empat strain E. coli memiliki plasmid 8000 bp dan enam strain yang
lainnya memiliki plasmid 5000 bp yang masing masing strain E. coli
mempunyai satu jenis plasmid.
Kata kunci : Escherichia coli, profil plasmid, sensitivitas antibiotik

http://lib.unimus.ac.id
iv
describe the sensitivity of Escherichia coli to various antibiotics and plasmid
profiles of E. coli isolates from the village water wells Ngemplak Pati regency
Erla Farikatun Nisa1, Sri Darmawati2, Muhammad Evy Prastiyanto3

1.
Program Studi D IV Analis Kesehatan Fakultas Ilmu Keperawatan dan Kesehatan
Universitas Muhammadiyah Semarang.
2.
Laboratorium Biologi Molekuler Fakultas Ilmu Keperawatan dan Kesehatan Universitas
Muhammadiyah Semarang.
3.
Laboratorium Bakteriologi Fakultas Ilmu Keperawatan dan Kesehatan Universitas
Muhammadiyah Semarang.

ABSTRACT

Giving antibiotics is a way of prevention or treatment to inhibit the growth of bacteria,

the frequent use of antibiotics continuously may cause the occurrence of bacterial
resistance to antibiotics. Plasmid DNA possessed by the bacterium may affect the nature
of bacterial resistance to antibiotics. The purpose of this study to describe the sensitivity
of E. coli to various antibiotics and plasmid profiles of E. coli isolates from the village
water wells Ngemplak Pati regency. Bacterial sensitivity test method is the method of
Kirby-Bauer dengan four types of antibiotics (chloramphenicol, ciprofloxacin, gentamicin
and ampicillin) and the plasmid isolation method using the alkali lysis method. The test
results of 10 strain E. coli shows the results of sensitivity to the antibiotic
chloramphenicol and ciprofloxacin, the antibiotic gentamicin with the results, there are
four strains resistant (SG.04C, SG.07C, SG.08C, SG.09C) and 10 strain E. coli showed
resistance to the antibiotic ampicillin. Plasmid isolated from 10 strain E. coli showed four
strainE. coli plasmid of 8000 bp and six other strains had a 5,000 bp plasmid that each
each strain strain E. coli has one type of plasmid.

Keywords: Escherichia coli, Plasmid profile, Antibiotic sensitivity.

http://lib.unimus.ac.id
iv
 Kata Pengantar

Assalammualaikum warohmatullahi wabarokatuh

Segala puji syukur atas kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan

segala rahmat, hidayah dan Inayah-Nya, Sholawat dan salam kepada

junjungan kita Baginda Rasulullah SAW beserta keluarga dan para Sahabat-

Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan tugas akhir yang berjudul

Gambaran Sensitivitas Berbagai Antibiotik dan Profil Plasmid Escherichia

coli Isolat Air Sumur Gali Desa Ngemplak Kabupaten Pati.

Penyusunan skripsi ini merupakan salah satu syarat untuk

menyelesaikan pendidikan Diploma IV Analis Kesehatan di Universitas

Muhammadiyah Semarang 2016.

Penulis menyadari bahwa terselesaikannya tugas akhir ini tidak lepas

dari bimbingan, dukungan dan bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu

pada kesempatan ini, penulis ingin menyampaikan ucapan terimakasih

kepada:

1. Ibu Dr. Sri Darmawati, M.Si selaku dosen pembimbing I beserta Bapak M.

Evy Prastiyanto, M.Sc selaku dosen pembimbing II yang telah

memberikan bimbingan, arahan, izin penelitian, kritik dan saran serta

memotivasi selama penyusunan skripsi.

2. Ibu Dra. Sri Sinto Dewi, M.Si, Med selaku Ketua Program Studi D IV

Analis Kesehatan Fakultas Ilmu Keperawatan dan Kesehatan Universitas

Muhammadiyah Semarang.

http://lib.unimus.ac.id
iv
3. Bapak Suhari, Ibu Sumiyati dan keluarga tercinta yang telah memberikan

doa, dukungan moral, dan material.

Penulis menyadari masih banyak ketidak sempurnaan dan kekurangan

dalam penulisan tugas akhir ini. Penulis mengharapkan kritik dan saran yang

membangun. Semoga proposal penelitian ini dapat bermanfaat bagi para

pembaca. Amin

Wassalammualaikum warohmatullahi wabarokatuh

Semarang, September 2016

Erla Farikatun Nisa

G1C012017

http://lib.unimus.ac.id
iv
 DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ...........................................................................................i
HALAMAN PERSETUJUAN ...........................................................................ii
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................iii
ABSTRAK ...........................................................................................................iv
SURAT PERNYATAAN ORIGINALITAS .....................................................vi
KATA PENGANTAR.........................................................................................vii
DAFTAR ISI........................................................................................................ix
DAFTAR TABEL ...............................................................................................xi
DAFTAR GAMBAR...........................................................................................xii
DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................xii
BAB I. PENDAHULUAN................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ......................................................................................... 1
1.2 Rumusan Masalah .................................................................................... 3
1.3 Tujuan Penelitian ..................................................................................... 4
1.4 Manfaat Penelitian ................................................................................... 4
1.5 Orisinalitas Penelitian .............................................................................. 5
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA........................................................................ 6
2.1 Sumur Gali disekitar Limbah Tepung Tapioka Kabupaten Pati .............. 6
2.2 Escherichia coli ....................................................................................... 7
2.2.1 Morfologi Escherichia coli ................................................................... 8
2.2.2 Patogenitas Escherichia coli ................................................................. 9
2.3 Uji Sensitivitas Bakteri ............................................................................10
2.4 Resistensi Escherichia coli Terhadap Antibiotik.....................................11
2.5 DNA Plasmid ...........................................................................................12
2.6 Elektroforesis Gel Agarosa ......................................................................13
2.7 Kerangka Teori ........................................................................................15
BAB III. METODE PENELITIAN ...................................................................16
3.1 Desain Penelitian .....................................................................................16
3.2 Variabel Penelitian...................................................................................16
3.3 Definisi Operasional ................................................................................16
3.4 Populasi dan Sampel Penelitian ...............................................................16
3.5 Alat dan Bahan.........................................................................................17
3.5.1. Alat ......................................................................................................17
3.5.2. Bahan ..................................................................................................17
3.6 Cara Kerja ................................................................................................17
3.6.1 Uji Sensitivitas Bakteri .........................................................................17
3.6.2 Isolasi DNA Plasmid Escherichia coli..................................................18
3.6.3 Separasi Profil Plasmid Escherichia coli .............................................19
3.7 Alur Penelitian .........................................................................................20
3.8 Teknik Pengumpulan Data.......................................................................20
3.9 Pengolahan Data dan Analisis Data .........................................................20
3.10 Waktu dan Tempat Penelitian ................................................................21
3.10.1 Tempat Penelitian ...............................................................................21

http://lib.unimus.ac.id
iv
 3.10.2 Waktu Penelitian .................................................................................21
3.11 Skema Uji Sensitivitas ..........................................................................22
3.12 Skema Isolasi DNA Plasmid..................................................................23
3.13 Skema Separasi DNA Plasmid...............................................................25
BAB IV. PEMBAHASAN...................................................................................26
4.1 Hasil Penelitian ........................................................................................26
4.1.1 Hasil Uji Sensitivitas.............................................................................26
4.1.2 Hasil Elektroforesis Profil Plasmid E. coli ...........................................27
4.2 Pembahasan..............................................................................................28
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN .............................................................33
5.1 Kesimpulan ..............................................................................................33
5.2 Saran ........................................................................................................33
DAFTAR PUSTAKA
LAMPIRAN

http://lib.unimus.ac.id
iv
 DAFTAR TABEL

Halaman
Tabel 1. Orisinalitas Penelitian .............................................................................5
Tabel 2. Standart Hasil Uji Sensitivitas ................................................................10
Tabel 3. Definisi Operasional ...............................................................................26
Tabel 4. Hasil Uji Sensitivitas E. coli terhadap Antibiotik ..................................28

http://lib.unimus.ac.id
iv
 DAFTAR GAMBAR

Nomor Halaman
Gambar 1. Gambar Plasmid Pada Sel Bakteri ............................................ 12
Gambar 2. Skema Kerangka Teori ............................................................. 15
Gambar 3. Alur Penelitian .......................................................................... 20
Gambar 4. Skema Uji Sensitivitas .............................................................. 22
Gambar 5. Skema Isolasi DNA Plasmid..................................................... 23
Gambar 6. Skema Separasi DNA Plasmid ................................................. 25
Gambar 7. Hasil Elektroforesis Agarosa DNA Plasmid............................. 27

http://lib.unimus.ac.id
iv
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman
Lampiran 1. Pembuatan Media ..................................................................... 38
Lampiran 2. Gambar Penelitian..................................................................... 41

http://lib.unimus.ac.id
iv
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Air merupakan kebutuhan pokok yang tidak dapat dipisahkan dalam

kehidupan manusia. Air dimanfaatkan manusia untuk kebutuhan hidup salah

satunya kebutuhan rumah tangga dan industri. Penyediaan air bersih sekarang ini

menjadi prioritas dalam perbaikan derajat kesehatan masyarakat. Seiring

meningkatnya kepadatan penduduk dan pesatnya pembangunan, maka kebutuhan

air pun semakin meningkat sehingga dituntut tersedianya air yang sehat yang

meliputi pengawasan dan penetapan kualitas air untuk berbagai kebutuhan dan

kehidupan manusia yang bertujuan untuk menjamin tercapainya air minum

maupun air bersih yang memenuhi syarat kesehatan bagi masyarakat (Alwi &

Maulina, 2012). Masih banyak masyarakat yang memanfaatkan air sumur gali

untuk kebutuhan hidupnya yang masih belum jelas kualitasnya, untuk

mengetahui kualitas air perlu dilakukan pemeriksaan berdasarkan sifat fisika,

kimia maupun biologi.

Adanya bakteri Coliform dalam air merupakan salah satu indikator

mikrobiologi yang dapat menentukan kualitas air. Coliform merupakan bakteri

yang terkandung dalam jumlah banyak pada kotoran manusia dan hewan (Fadilah

et al. 2014). Menurut Peraturan Menteri Kesehatan

No.492/MENKES/Per/IV/2010 dan No.907/MENKES/SK/VII/2002 Syarat

kualitas air bersih yang dapat digunakan sehari-hari memiliki standar maksimum

total bakteri Coliform yaitu 0 AMP/100 mL air, sehingga adanya Coliform dalam

http://lib.unimus.ac.id
iv
air menunjukkan bahwa air tersebut sudah tercemar. Bakteri Coliform tidak dapat

menimbulkan penyakit tertentu secara langsung, tetapi semakin tinggi

kontaminasi bakteri ini, maka resiko adanya bakteri lain yang dapat menimbulkan

gangguan kesehatan semakin tinggi (Alwi & Maulina, 2012).

Desa Ngemplak Kecamatan Margoyoso Kabupaten Pati terdapat pabrik

tepung tapioka yang banyak menghasilkan limbah, salah satunya limbah cair yang

dialirkan ke sungai dan pemukiman penduduk. Kandungan dari limbah cair yang

merupakan proses dari produksi pembuatan tepung tapioka tersebut adalah bahan

organik yang meliputi karbohidrat, lemak, serat dan protein (Robby et al. 2013).

Kandungan limbah cair tersebut merupakan nutrient bagi bakteri yang dapat

menyebabkan suburnya pertumbuhan bakteri antara lain Coliform, kemungkinan

adanya Coliform dalam air dapat ditemukan di sumber air yang dipakai untuk

keperluan rumah tangga seperti sumur gali atau sungai yang ada disekitar limbah

tersebut (Munfiah et al. 2013).

Salah satu bakteri dari kelompok Coliform adalah Escherichia coli (E.

coli). E. coli merupakan anggota dari famili Enterobactericeae yang berbentuk

batang, bersifat gram negatif dan dalam keadaan normal berada di usus manusia,

E.coli menjadi patogen jika mencapai jaringan di luar habitat normalnnya

(Winarno, 2008). Manusia dapat terinfeksi E. coli karena makan dan minum yang

terkontaminasi bakteri tersebut sehingga dapat menyebabkan diare dan kram pada

abdomen (Juliantina, 2008). Infeksi yang disebabkan E. coli dapat dihambat

pertumbuhannya dengan pemberian antibiotik.

http://lib.unimus.ac.id
iv
 Menurut penelitian (Martha & Tejasari, 2014) saat ini diketahui banyak

resistensi E. coli terjadi terhadap berbagai jenis antibiotik, seperti antibiotik

ampisilin 100%, siprofloksasin 74,19%, kloramphenikol 29,03% dan gentamisin

32,26% hal ini disebabkan karena kemungkinan seringnya pemberian antibiotik.

Selain itu, bakteri gram negatif seperti E. coli menghasilkan plasmid yang dapat

memindahkan gen resistensi dan menghasilkan enzim beta laktamase yang dapat

menghambat mekanisme kerja antibakteri (Endriani et al. 2010).

Meskipun sudah diketahui banyak resistensi bakteri terhadap antibiotik

dan mengingat perbedaan tempat dan waktu penelitian yang dilakukan

kemungkinan pola resistensi bakteri terhadap berbagai jenis antibiotik juga

berubah, sehingga peneliti ingin mengetahui pola resistensi E. coli isolat air sumur

gali terhadap berbagai antibiotik dan profil plasmid pada E. coli.

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang di atas dapat dirumuskan suatu permasalahan

bagaimanakah gambaran sensitivitas berbagai antibiotik dan profil plasmid

Escherichia coli isolat air sumur gali Desa Ngemplak Kabupaten Pati ?

1.3 Tujuan Penelitian

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui gambaran sensitivitas berbagai

antibiotik dan profil plasmid Escherichia coli isolat air sumur gali Desa

Ngemplak Kabupaten Pati

http://lib.unimus.ac.id
iv
1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Bagi peneliti

Menambah pengetahuan dan keterampilan peneliti khususnya dibidang

biologi molekuler.

1.4.2 Bagi Ilmu Pengetahuan

Hasil ini diharapkan dapat menambah ilmu pengetauan khususnya dalam

bidang biologi molekuler.

http://lib.unimus.ac.id
iv
1.5 Orisinilitas

Penelitian penelitian yang pernah dilakukan terkait dengan uji

sensitivitas bakteri dan profil plasmid pada bakteri Escherichia coli, dapat dilihat

pada tabel 1:

No Nama/tahun/ Judul Hasil

jurnal

1 Fery Indradewi A, Deteksi DNA plasmid Hasil pengujian menunjukkan bahwa

2006 pada Lactobacillus sp. Lactobacillus sp. tidak mengandung
dengan metode DNA plasmid, kecuali Citrobacter
elektroforesis gel agarosa freundii yang dipakai kontrol jelas
adanya band DNA plasmid.

2 Michael Haryadi Profil plasmid Hasil sensitivitas 8 isolat bakteri

Wibowo, Escherichia coli resistsen terhadap ketiga jenis antibiotik yaitu:
Widagdo Sri terhadap beberapa ampisilin, streptomisin dan enrofloksasin
Nugroho, antibiotika yang diisolasi menunjukkan sifat resisten.
Widya Asmara, dari peternakan ayam Hasil DNA plasmid terhadap 8 isolat E.
2011, jurnal sain komersial coli yaitu isolat 1,6 dan 3 masing-masing
veteriner mempunyai 2 jenis plasmid, satu plasmid
berukuran diantara 5148 bp sampai
dengan 21.226 bp dan plasmid lain
berukuran 5148 bp, isolat 2 teramati
memiliki 3 plasmid yaitu 2 plasmid
terletak pada posisi antara 5.148 bp
sampai dengan 21.266 bp dan 5.148 bp,
isolat 4 memiliki 3 plasmid yaitu 2
plasmid terletak diantara 5.148 21.266
bp dan satu plasmid sedikit diatas 5.148
bp, isolat 7 memiliki 2 plasmid yang
terletak di 4973 bp dan 4268 bp, isolat 5
dan 8 masing-masing memiliki 1 plasmid
yang terletak pada 5148 bp.

Penelitian yang dilakukan sama dengan penelitian sebelumnya

menggunakan metode Elektroforesis gel agarosa. Penelitian ini untuk mengetahui

sensitivitas bakteri terhadap antibiotik yang diberikan dan Profil plasmid pada

bakteri Escherichia coli dari isolat air sumur gali disekitar limbah tepung tapioka.

http://lib.unimus.ac.id
iv
 BAB II

KAJIAN PUSTAKA

2.1 Sumur gali disekitar limbah tepung tapioka Kabupaten Pati

Air merupakan senyawa kimia yang penting bagi kehidupan makhluk

hidup di bumi. Fungsi air bagi kehidupan tidak dapat digantikan oleh senyawa

lain. jadi air memegang peranan penting dalam setiap aktivitas manusia terutama

kebutuhan air bersih (Rahayu & Dwi, 2010). Kebutuhan air bersih di indonesia

pada umumnya dapat dipenuhi dari air hujan, air permukaan dan air tanah

(Chandra, 2006). Air tanah yang masih banyak digunakan oleh masyarakat

khususnya di Desa Ngemplak Kabupaten Pati adalah air sumur gali. Sumur gali

menurut Departemen Kesehatan Tahun 1997 adalah salah satu sarana penyediaan

air bersih dengan cara menggali tanah sampai mendapatkan lapisan air dengan

kedalaman tertentu.

Desa Ngemplak Kecamatan Margoyoso Kabupaten Pati merupakan

penghasil tepung tapioka, untuk produksi tepung tapioka sampai saat ini Desa

Ngemplak masih memanfaatkan air sumur gali untuk kegiatan industri. Hasil dari

kegiatan industri tepung tapioka salah satunya adalah limbah cair. Limbah cair

yang dihasilkan dari pabrik tepung tapioka tersebut dibuang langsung ke aliran

sungai penduduk. Dampak dari pembuangan limbah tersebut dapat beresiko

terhadap terjadinya pencemaran sumber air tanah dan sumur gali yang berada

disekitar sungai (Munfiah et al. 2013).

http://lib.unimus.ac.id
iv
 Pencemaran air yang terjadi akan meresap ke dalam air tanah dan

menyerap ke sumber air masyarakat yang ada disekitar sungai (Widiyanto et al.

2015). Sehingga kebutuhan air bersih yang digunakan masyarakat dari sumur gali

harus memenuhi syarat kesehatan air bersih dan air minum berdasarkan kualitas

air untuk mengetahui adanya bakteri Coliform dan bahan kimia berbahaya bagi

kesehatan. Menurut (Agustiningsih et al. 2012) adanya pemeriksaan kualitas air

bersih berdasarkan parameter fisik meliputi (bau, suhu, warna, rasa dan

kekeruhan), parameter kimia meliputi (pH, klorida, nitrit, nitrat dan magnesium),

paremeter mikrobiologi (adanya Coliform dalam air).

Pemeriksaan air secara mikrobiologi digunakan untuk mengetahui ada

tidaknya bakteri Coliform dalam air. Bakteri Coliform merupakan indikator

pencemaran dalam air karena banyak ditemukan hidup di dalam air yang

terkontaminasi oleh kotoran manusia atau hewan. Salah satu bakteri yang

termasuk kedalam kelompok Coliform adalah E.coli (Tururaja & Mogea, 2010).

2.2 Escherichia coli

Escherichia coli merupakan bakteri anaerob fakultatif, tumbuh baik

hampir pada semua media yang bisa dipakai di laboratorium yang digunakan

untuk isolasi bakteri enterik, pertumbuhan yang baik pada suhu optimal 370C pada

media yang mengandung pepton (Jawetz, 2007). Pada media Mac Conkey (MC)

menghasilkan koloni berwarna merah muda, karena mampu memfermentasi

laktosa dan pada media Eosin Methylen Blue Agar (EMBA) koloni menghasilkan

warna hijau metalik (Iswara, 2015). Karakteristik taksonomi E. coli dalam buku

http://lib.unimus.ac.id
iv
Bergeys Manual of Systematic Bacteriology sebagai berikut : (Brinner et al.

1932).

Domain : Bacteria
Kingdom : Bacteria
Phylum : Proteobacteria
Class : Gamma proteobacteria
Order : Enterobacteriales
Family : Enterobacteriaceae
Genus : Escherichia
Species : Escherichia coli

2.2.1 Morfologi Escherichia coli

Escherichia coli merupakan bakteri batang gram negatif, motil atau non

motil, tidak berspora dengan ukuran 0,4 - 1,0 m x 1,3 m, koloni berbentuk

bulat, cembung, halus dan beberapa strain mempunyai kapsul (Ikmalia, 2008).

Bakteri E. coli merupakan flora normal usus pada manusia dan hewan yang dapat

ditemukan diusus besar (Jawetz, 2007). Bakteri E. coli disebut sebagai bakteri

oportunis karena dapat bersifat patogen jika dapat memasuki jaringan tubuh lain

diluar habitat normalnya sehingga dapat menyebabkan penyakit pada manusia.

Bakteri E. coli bergerak menggunakan flagel peritrik. Morfologi kapsula

atau mikrokapsula terbuat dari asam-asam polisakarida. Kadang-kadang mukoid

memproduksi pembuangan ekstraseluler yaitu sebuah polisakarida dari spesifitas

antigen K tertentu atau terdapat pada asam polisakarida yang dibentuk oleh

banyak E. coli seperti pada Enterobacteriaceae (Jawetz, 2005).

http://lib.unimus.ac.id
iv
 Bakteri E. coli memproduksi macam-macam fimbria atau pili yang

berbeda, banyak macamnya pada struktur dan speksitifitas antigen, antara lain

filamentus, proteinaceus, seperti rambut appendages disekeliling sel dalam variasi

jumlah. Fimbria merupakan rangkaian hidrofobik dan mempunyai pengaruh

panas atau organ spesifik yang bersifat adhesi. Hal itu merupakan faktor virulensi

yang penting (Brooks, 2007).

2.2.2 Patogenitas Escherichia coli

Bakteri E coli pada umumnya tidak menyebabkan penyakit tetapi dapat

menjadi patogen bila bakteri dapat memasuki bagian tubuh lainnya, sehingga

menimbulkan infeksi pada jaringan tubuh lain di luar usus normal. seperti saluran

air kemih, saluran empedu dan selaput otak yang menyebabkan peradangan pada

tempat tersebut (Winarno, 2008).

Infeksi paling umum yang disebabkan E coli adalah infeksi saluran kemih

(ISK) yaitu antigen K yang dimiliki E coli menyebabkan terjadinya perlekatan

pada sel epitel, hal tersebut dapat dimungkinkan terjadinya invasi ke dalam

gastrointestinal atau saluran air kemih sehingga mengakibatkan infeksi pada

saluran kemih (ISK). Adanya infeksi saluran kemih dapat menyebabkan penyakit

lain yaitu sepsis (Jawetz, 2005). Pemberian antiobiotik merupakan cara

pengobatan atau pencegahan untuk menghambat pertumbuhan bakteri, seringnya

penggunaan antibiotik kemungkinan terjadinya resistensi sehingga perlu adanya

uji sensitivitas antibiotik terlebih dahulu sebelum memberikan suatu antibiotik.

http://lib.unimus.ac.id
iv
2.3 Uji sensitivitas bakteri

Uji sensitivitas bakteri adalah suatu metode untuk menentukan tingkat

kerentanan bakteri terhadap zat antibakteri atau antibiotik dan untuk mengetahui

daya kerja dari suatu antibiotik dalam membunuh bakteri (Waluyo, 2009).

Kandungan dari antibiotik merupakan senyawa kimia yang dihasilkan oleh

mikroorganisme atau dihasilkan secara sintetik yang bersifat toksik. Senyawa

yang terbentuk dapat membunuh atau menghambat perkembangan bakteri dan

organisme lain yang kontak dengan bakteri tersebut (Nur et al. 2013).

Uji sensitivitas bakteri terhadap antibiotik dapat dilakukan dengan metode

Kirby-Bauer yaitu dengan menggunakan difusi cakram (disk diffusion method)

dengan mengukur diameter zona bening yang menunjukkan adanya respon

penghambatan pertumbuhan bakteri oleh senyawa antibiotik. Hasil uji sensitivitas

bakteri dibaca berdasarkan Clinical and Laboratory Standart Institute (CLSI)

yang digolongkan ke dalam tiga kriteria yang dapat dilihat pada tabel 2.

Tabel 2. Standart hasil uji sensitivitas pada antibiotik kloramfenikol, gentamisin,

ampisilin dan siprofloksasin
Jenis antibiotik Resisten Intermediet Sensitif

Kloramfenikol ( C30 ) 12 13 17 18

Gentamisin (CN 10 ) 12 13 14 15

Ampisilin ( Amp 10 ) 13 14 16 17

Siprofloksasin ( CIP 5 ) 15 16 20 21

Hasil dari uji sensitivitas, bakteri yang memiliki plasmid dapat menunjukkan

adanya resistensi bakteri terhadap beberapa jenis antibiotik.

http://lib.unimus.ac.id
iv
2.4 Resistensi Escherichia coli terhadap antibiotik

Di negara- negara berkembang seperti Indonesia penyakit infeksi masih

menempati urutan pertama dari penyebab sakit di masyarakat, untuk pengobatan

biasanya masyarakat dengan cara pemberian antibiotik (Noviana, 2004).

Seringnya pemberiaan antibiotik dapat meningkatkan resistensi bakteri terhadap

antibiotik tersebut. Adanya resistensi E coli terhadap berbagai jenis antibiotik

(ampisilin, kotrimoksasol, kloramfenikol dan gentamisin) sebagai antibiotik

generasi pertama, karena memiliki R-plasmid yang membawa satu atau lebih gen

yang mengkode enzim yang dapat merusak antibiotik. Bakteri yang resisten.

terhadap dua atau lebih antibiotik disebut MDR (Multiple drug resistance)

[Darmawati et al. 2015].

Terjadinya MDR terhadap antibiotik sehingga digunakannya antibiotik

generasi ketiga golongan fluorokuinolon (siprofloksasin) karena memiliki aktifitas

yang lebih kuat dari generasi sebelumnya terhadap bakteri gram negatif

(Warganegara &Apriliana, 2014). Namun demikin pemberiaan antibiotik secara

berlebihan dapat menyebabkan kepekaan bakteri terhadap antibiotik menurun,

namun mulai berkembang pesat dengan tambahan integron pada plasmid atau

kromosom DNA. Tambahan plasmid yang mengkode -laktamase mempunyai

kemampuan untuk menghidrolisis antibiotik berspektrum luas (Yenny &

Herwana, 2007).

Resistensi bakteri terhadap antibiotik generasi ketiga ini terjadi mutasi

gen yang berada pada kromososm mengkode enzim DNA gyrase. Jadi resistensi

bakteri terhadap antibiotik ampisilin, kotrimoksasol, kloramfenikol dan

http://lib.unimus.ac.id
iv
gentamisin sebagai generasi pertama disebabkan adanya faktor R plasmid

sedangkan resistensi terhadap antibiotik siprofloksasin sebagai generasi ketiga

dikode oleh gen yang ada pada kromosom (Darmawati et al. 2015).

2.5 DNA Plasmid

Pada sel bakteri terdapat kromosom sebagai pembawa informasi genetik

berupa Molekul DNA kromosom berbentuk supercoil yang berukuran besar yang

terletak di daerah inti. Selain kromosom bakteri juga memiliki DNA

ekstrakromosomal yaitu plasmid. Plasmid merupakan molekul DNA yang

melingkar (sirkuler) yang berada di luar kromosom atau ekstra kromosom.

Plasmid dianggap baik berukuran kecil, sebagai bahan genetik tambahan, dapat

melakukan replikasi sendiri secara otonom, terkadang dapat bersatu dengan

kromosom bakteri dan dapat berpindah atau dipindahkan dari satu spesies ke

spesies lain (Fery, 2006).

Gambar 1. Plasmid didalam sel bakteri [http://www.thefullwiki.org/plasmid]

Sifat resistensi bakteri tehadap antibiotik dapat terjadi karena dipengaruhi oleh

unsur yang bersifat genetik seperti plasmid. Gen pada plasmid untuk resistensi

http://lib.unimus.ac.id
iv
antibiotik berfungsi mengontrol pembentukan enzim yang mampu merusak

antibiotik. Adanya plasmid dapat dilihat apabila gen yang dikandungnya

memberikan sifat-sifat baru pada inang. Pada umumnya plasmid tersebut dinamai

sesuai dengan sifat plasmid seperti plasmid resistensi, plasmid virulensi, plasmid

degradatif, seks plasmid dan kol- plasmid (Michael, 2011). Sel bakteri dapat

mempunyai satu jenis atau lebih DNA ekstrakromosom atau plasmid. Plasmid

mempunyai ukuran dan berat sekitar 1 300 kb, untuk mengetahui ukuran dari

plasmid dapat dilakukan dengan cara elekroforesis gel agarosa (Snustad dan

Simmons, 2003).

2.6 Elektroforesis Gel Agarosa

Elektroforesis merupakan proses bergeraknya molekul bermuatan dalam

suatu medan listrik. Kecepatan molekul yang bergerak pada medan listrik

tergantung pada muatan, bentuk dan ukuran molekul. Elektroforesis digunakan

untuk pemisahan makromolekul seperti protein dan asam nukleat. Hasil

elektroforesis yang terlihat adalah terbentuknya band yang merupakan fragmen

DNA dan menunjukkan potongan-potongan jumlah pasang basanya (Widyarti,

2011).

Elektroforesis gel agarose adalah suatu metode pemisahan molekul DNA

dan RNA menurut muatan, ukuran dan bentuk. Metode ini merupakan suatu

teknik yang sederhana, cepat terbentuk dan mampu memisahkan campuran

potongan DNA sesuai dengan ukurannya. Saat arus listrik diaplikasikan pada gel,

molekul bermuatan negatif akan bermigrasi melalui matriks gel menuju kutub

positif (anoda). Migrasi struktur molekul yang besar akan lebih lambat

http://lib.unimus.ac.id
iv
dibandingkan struktur molekul yang kecil dalam proses melewati pori-pori gel

(Fatchiyah, 2011).

Migrasi elektroforesis DNA melalui gel agarosa dipengaruhi oleh faktor

ukuran dan bentuk molekul DNA, konsentrasi agarosa, arus listrik dan suhu.

Pewarna Etidhium brimid digunakan untuk alat identifikasi dan mengukur

fragmen DNA yang terpisah dalam gel (Fatchiyah, 2011). Etidhium bromid akan

menginterkalasi atau menyisip ke dalam DNA. Penggunaan Etidhium bromid

dimaksudkan untuk membantu visualisasi karena Etidhium bromid akan

memendarkan sinar ultraviolet, jika gel di sinari dengan ultraviolet dari bawah

akan terlihat pita-pita pada gel yang merupakan molekul-molekul DNA yang

bergerak sepanjang gel setelah elektroforesis (Triwibowo, 2005). Berat molekul

suatu fragmen DNA dapat dilihat dengan membandingan laju migrasi fragmen

molekul DNA standar (DNA marker).

http://lib.unimus.ac.id
iv
2.7 Kerangka Teori

Air sumur gali

Patogenitas

Antibiotik
Escherichia coli DNA plasmid
Sensitivitas

Resistensi

Elektroforesis gel agarosa

Profil plasmid E. coli

Gambar 2. Kerangka teori Gambaran sensitivitas berbagai antibiotik dan profil plasmid E.
coli isolat air sumur gali Desa Ngemplak Kabupaten Pati.

http://lib.unimus.ac.id
iv
 BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Desain Penelitian

Penelitian yang digunakan merupakan penelitian Deskriptif

3.2 Variabel Penelitian

Variabel yang diamati adalah sensitivitas E. coli terhadap antibiotik dan

profil DNA plasmid E. coli.

3.3 Definisi Operasional

Tabel 3. Definisi Operasional

Subjek Penelitian Definisi

Sensitivitas antibiotik Sensitivitas antibiotik merupakan suatu metode untuk
menentukan tingkat kerentanan bakteri terhadap antibiotik
dan mengetahui daya kerja suatu antibiotik dalam
membunuh bakteri dengan mengukur zona hambat disekitar
disk antibiotik.
Profil Plasmid E. coli Profil plasmid E. coli adalah profil sub-sub unit plasmid
yang menyusun DNA plasmid yang diperoleh dengan cara
Elektroforesis Gel Agarosa.

3.4 Populasi dan Sampel Penelitian

Populasi yang digunakan adalah air sumur gali di Desa Ngemplak

Kabupaten Pati yang letaknya dekat dengan limbah tepung tapioka. Sampel yang

diambil dari 12 air sumur gali di Desa Ngemplak. Spesimen dari penelitian ini

adalah 10 strain E. coli isolat air sumur gali Desa Ngemplak Kabupaten Pati.

http://lib.unimus.ac.id
iv
3.5 Alat dan Bahan

3.5.1 Alat

Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu Chamber elektroforesis,

power supplay, vortex, waterbath (Memmert), sentrifuge (Hettich), microwave

(Electrolux), UV Transiluminator, jangka sorong.

3.5.2 Bahan

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu bakteri E. coli, media

Muller Hinton Agar (MHA, OXOID), Disk antibiotik (kloramfenikol,

siprofloksasin, gentamisin, ampisilin), Lysing solution I (Glukosa, EDTA, Tris),

Lysing solution II (NaOH, SDS), Lysing solution III (Kalium asetat, Asam

asetat), TAE (Tris, Acetid Acid, EDTA), Ethanol 70%, Ethanol absolute, RNAse,

Agarosa, dH2O steril, Ethidium bromid (EtBr), loading buffer.

3.6 Cara Kerja

3.6.1 Uji sensitivitas bakteri

Sebanyak 10 strain E. coli isolat air sumur gali di Desa Ngemplak kabupaten

Pati diuji resistensinya terhadap antibiotik dengan metode disk diffusion (Kirby

Bauer) pada media Muller Hinton Agar (MHA). Dibuat suspensi dengan cara satu

koloni bakteri diinokulasi kedalam 5 ml media BHI cair, diinkubasi dengan suhu

37oC selama 18 jam kemudian kekeruhannya disetarakan dengan standar

Mc.Farland 0,5. Selanjutnya 100 l suspensi bakteri diinokulasikan pada media

MHA secara merata dengan menggunakan triangle, tunggu selama 5 - 10 menit

supaya bakteri bakteri meresap ke dalam agar, lalu letakkan disk antibiotik pada

permukaan media dengan sedikit ditekan supaya disk antibiotik tidak terlepas.

http://lib.unimus.ac.id
iv
Setelah itu diinkubasi pada suhu 37oC selama 18 24 jam. Diamati penghambatan

pertumbuhan bakteri dan diukur zona hambatnya disekitar disk dengan

menggunakan jangka sorong.

3.6.2 Isolasi DNA Plasmid Escherichia coli

Diambil 1 koloni bakteri dari lempeng agar dan dipindahkan ke dalam

tabung yang berisi 5 ml media LB. Inkubasi pada suhu 370C dalam waterbath

selama semalam, setelah itu bakteri dipanen dengan cara disentrifuge 12000 rpm

pada suhu 40C selama 10 menit. Supernatan dibuang, setelah itu dalam tabung

yang berisi pellet di tambahkan 100 l Lysing Solution I disuspensikan lalu

simpan ke dalam es selama 5 menit, kemudian ditambah 200 l Lysing Solution II

homogenkan dengan cara membolak balik tabung lalu simpan ke dalam es selama

5 menit, selanjutnya ditambahkan 150 l Lysing Solution III homogenkan dengan

cara membolak balik tabung lalu simpan ke dalam es selama 5 menit, kemudian di

sentrifuge 12.000 rpm pada suhu 40C selama 10 menit. Supernatan diambil lalu di

pindahkan ke dalam tube yang baru dan ditambahkan kloroform 1:1 lalu gojok

dengan shaker selama 15 menit, kemudian di sentrifuge 12.000 rpm pada suhu

40C selama 10 menit, setelah itu pindahkan lapisan atas kedalam tube baru dan

ditambahkan Ethanol absolut dingin 1:1 kemudian ditambahkan Na. Asetat

sebanyak 40 l (untuk membantu presipitasi). Setelah itu disimpan dalam freezer

(-200C) selama 1 jam. Selanjutnya sentrifuge 12.000 rpm pada suhu 40C selama

10 menit, pellet dicuci dengan ethanol 70% kemudian di sentrifuge 12.000 rpm

pada suhu 40C selama 10 menit, setelah itu pellet di keringkan anginkan selama

1 jam selanjutnya pellet dilarutkan dengan TE 50 l, setelah itu tambahkan 10 l

http://lib.unimus.ac.id
iv
RNAse dan inkubasi dalam waterbath selama 1 jam. Kemudian cek DNA plasmid

dengan elektroforesis gel agarosa 1,5%.

3.6.3 Separasi Profil Plasmid Escherichia coli Metode Elektroforesis Agarose

Separasi Profil Plasmid Escherichia coli dengan Elektroforesis Agarose

menyiapkan sisir dan pencetak gel yang sudah dibersihkan dengan alkohol 70%.

Setelah alat pencetak gel disiapkan, gel agarose dibuat dengan ditimbang 1,5 gram

agarose dan dilarutkan ke dalam 150 ml TAE, kemudian larutan agarose

dipanaskan menggunakan microwave selama 3 menit (setiap menit dikelurkan dan

digoyang- goyang agar cepat larut), selanjutnya larutan agarose ditambah

Ethidiumbromid (EtBr) sebanyak 4 l di homogenkan kemudian larutan agarose

di tuang ke dalam cetakan gel agarose, dan pasang sisir diatas larutan agarose.

Larutan di diamkan sampai berubah menjadi gel yang padat kemudian sisir

diambil dari atas gel secara perlahan (Annisa et al. 2011).

Cetakan yang telah berisi gel agarose dimasukkan ke dalam tangki

elektroforesis dan masukkan buffer TAE hingga gel terendam seluruhnya.

Dimasukkan 18 l sampel DNA plasmid (15 l sampel + 3 l loading buffer) ke

dalam sumuran gel. Setelah semua sumuran terisi kemudian alat dihubungkan

dengan power supplay dan dielektroforesis pada tegangan 100 volt selama 60

menit. Setelah elektroforesis selesai gel hasil elektroforesis diambil dari cetakan

dan band DNA plasmid dapat diamati dibawah sinar ultraviolet (UV).

http://lib.unimus.ac.id
iv
3.7 Alur Penelitian

Air sumur gali Desa Ngemplak

10 Strain E. coli isolat air sumur gali Desa Ngemplak

Uji Sensitivitas Antibiotik (Kloramfenikol, Gentamisin,

Ampisilin, Siprofloksasin) metode Kirby Bauer

Isolasi DNA plasmid E. coli

Elektroforesis metode Gel Agarosa 1,5%

Gambaran profil plasmid E. coli

Gambar 3. Alur penelitian gambaran sensitivitas berbagai antibiotik dan profil

plasmid E. coli isolat air sumur gali Desa Ngemplak Kabupaten Pati

3.8 Teknik Pengumpulan Data

Data yang digunakan dalam penelitian ini merupakan data primer dan hasil

penelitian disajikan dalam bentuk narasi.

3.9 Pengolahan Data dan Analisis Data

Data diolah dan dianalisis secara deskriptif

http://lib.unimus.ac.id
iv
3.10 Tempat dan Waktu Penelitian

3.10.1 Tempat Penelitian

Penelitian gambaran kepekaan berbagai antibiotik dan profil plasmid E.

coli isolat air sumur gali di Desa Ngemplak Kabupaten Pati dilakukan di

laboratorium Mikrobiologi Analis Kesehatan Universitas Muhammadiyah

Semarang dan laboratorium Rekayasa genetik Bioteknologi Universitas Gadjah

Mada Yogyakarta

3.10.2 Waktu Penelitian

Waktu penelitian dilaksanakan mulai bulan Maret 2016 sampai dengan

bulan Juli 2016.

http://lib.unimus.ac.id
iv
3.11 Skema Uji Sensitivitas

10 Strain E. coli isolat air sumur gali Desa Ngemplak

Uji sensitivitas antibiotik metode Kirby Bauer

Ampisilin Kloramfenikol Siprofloksasi Gentamisin

Resisten Sensitif

Gambar 4. Skema Uji Sensitivitas terhadap berbagai jenis antibiotik

http://lib.unimus.ac.id
iv
 3.12 Skema Isolasi DNA plasmid

Koloni yang sudah murni ditumbuhkan dalam 5 ml LB

Inkubasi 370C selama 48

Gojok kuat-kuat pada suhu 370C dalam shaker inkubator selama semalam
Inkubasi 370C selama 48 jam

Sentrifuge 3000 rpm pada suhu 40C selama 15

Buang supernatan, Pellet di tambah 100 l lysing solution I ink. dalam es 5 menit

Di tambah 200 l lysing solution II, homogenkan ink. dalam es 5 menit

Di tambah 150 l lysing solution III, homogenkan ink. dalam es 5 menit

Sentrifuge 12.000 rpm pada suhu 40C selama 10 menit

Ambil supernatan, pindahkan dalam tube baru dan ditambah kloroform 1:1
homogenkan

Gojok dengan shaker selama 15 menit

Sentrifuge 12.000 rpm pada suhu 40C selama 10 menit

Pindahkan lapisan atas kedalam tube baru, dan ditambahkan ethanol absolut dingin 1:1

Tambahkan Na. Asetat sebanyak 40 l (untuk membantu presipitasi)

Simpan dalam freezer (-200C) selama 1 jam

Sentrifuge 12.000 rpm pada suhu 40C selama 10 menit

Pellet dicuci dengan ethanol 70%

http://lib.unimus.ac.id
iv
 Sentrifuge 12.000 rpm pada suhu 40C selama 10 menit

Pellet dikering anginkan 1 jam kemudian pellet dilarutkan dengan

TE 50 l dan ditambah Rnase stock 10 l, inkubasi selama 1 jam

Cek DNA plasmid dengan elektroforesis agarosa

Gambar 5. Skema isolasi DNA Plasmid Escherichia coli

http://lib.unimus.ac.id
iv
 3.13 Skema separasi DNA plasmid metode Elektroforesis Agarose

Siapkan sisir dan baki gel yang telah disterilkan dengan alkohol

Larutan Agarose (1,5 gr + 100 ml TAE dipanaskan sampai

larut sempurna menggunakan microwave

Larutan Agarose ditambah EtBr sebanyak 2 l dihomogenkan, tunggu sampai dingin

Masukkan larutan agarose ke dalam baki gel agarose dan sisir diatasnya tunggu sampai polimerasi

Angkat sisir secara perlahan, lalu baki yang berisi gel dimasukkan ke dalam tangki elektroforesis

Masukkan buffer TAE ke dalam tangki elektroforesis sampai gel terendam

Masukkan 18 l sampel yang sudah ditambah loading buffer ke dalam masing-masing sumuran

Hubungkan alat dengan aliran listrik 100 volt tunggu selama 45 60 menit

Aliran listrik dimatikan lalu keluarkan gel dari baki gel agarose

Gel hasil elektroforesis diamati di bawah sinar UV

Gambaran profil plasmid Escherichia coli

Gambar 6. Skema Separasi DNA plasmid Escherichia coli

http://lib.unimus.ac.id
iv
 BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Penelitian

4.1.1 Hasil UjiSensitivitas 10 Strain Escherichia coli

Gambaran hasil uji sensitivitas 10 strain E. coli dari isolat air sumur gali asal

DesaNgemplak Kabupaten Pati terhadap antibiotik Kloramfenikol, Siprofloksasin,

Gentamisin dan Ampisilin yang disajikan pada Tabel 4.

Tabel.4 Hasil ujisensitivitas bakteri E. coli terhadap antibiotik kloramfenikol,

siprofloksasin, gentamisin dan ampisilin
Jenis Antibiotik

No Kode Kloramfenikol Kepekaan Siprofloksasin Kepekaan Gentamisin Kepekaan Ampisilin Kepekaan

Sampel (C 30) (CIP 5) (CN 10) (Amp 10)
mm Mm mm mm

1 SG.02C 20,2 S 19,3 I 18,3 S 12,2 R

2 SG.03C 21,2 S 24,2 S 13,4 I 12 R

3 SG.04C 17 I 24,2 S 11,2 R 10,3 R

4 SG.05B 19,4 S 25,3 S 13 I 0 R

5 SG.07C 19,2 S 23 S 11,2 R 0 R

6 SG.08C 16,3 I 24,4 S 10,4 R 2 R

7 SG.09C 21,4 S 21,4 S 10,2 R 2 R

8 SG.10C 18,3 S 16,2 I 13,2 I 0 R

9 SG.11C 19,2 S 15,2 I 13,2 I 12,4 R

10 SG.12C 17,3 I 30,4 S 15,4 S 12,2 R

Keterangan: S: sensitive; I: Intermediate; R: resistensi

Berdasarkan hasil uji sensitivitas bahwa dari 10 strain E. coli yang

diisolasi dari air sumur gali Desa Ngemplak Kabupaten Pati terhadap keempat

jenis antibiotik yang digunakan, yaitu kloramfenikol, siprofloksasin, gentamisin

dan ampisilin. Hasil penelitian menunjukkan tujuh strain sensitif terhadap

http://lib.unimus.ac.id
iv
antibiotik kloramfenikol dan siprofloksasin. Empat strain resisten terhadap

antibiotik gentamisin dan 10 strain resistensi pada antibiotik ampisilin.

4.1.2 Hasil Elektroforesis Profil Plasmid Escherichia coli

Hasil elektroforesis DNA plasmid dari 10 strain E. coli setelah diseparasi

menggunakan Elektroforesis Gel Agarosa 1,5 % diamati dibawah sinar ultraviolet

menunjukkan hasil :

Gambar 7. Elektroforesis Gel Agarosa DNA plasmid Escherichia coliberturut turut , M =

Marker, 1) SG.02C, 2) SG.03C, 3) SG.04C, 4) SG.05B, 5) SG.07C, 6) SG.08C, 7)
SG.09C, 8) SG.10C, 9) SG.11C, 10) SG.12C

Gambar 7 diatas pada 10 strain E. coliteramati bahwa masing masing strain

mempunyai satu jenis plasmid dan menunjukkan profil plasmid dengan ukuran

yang berbeda beda, 4 diantaranya memiliki plasmid yang berukuran 8.000 bp

pada nomer 1,3,8 dan 10, sedangkan 6 lainnya memiliki plasmid dengan ukuran

5.000 bp yang ditunjukkan pada nomer 2,4,5,6,7 dan 9

4.2 Pembahasan

Hasil uji sensitivitas 10 strain E. Coli isolat air sumur gali Desa Ngemplak

Kabupaten Pati terhadap antibiotik kloramfenikol, siprofloksasin, gentamisin dan

http://lib.unimus.ac.id
iv
ampisilin diketahui pada antibiotik kloramfenikol dan siprofloksasin 10 strain E.

coli menunjukkan hasil sensitif dan intermediet, sedangkan pada antibiotik

gentamisin terdapat 6 strain diantaranya menunjukkan hasil sensitif dan

intermediet serta 4 strain lainnya resisten dan pada 10 strain E. coli semua

menunjukkan resistensi terhadap antibiotik ampisilin. Dilihat dari hasil uji

sensitivitas tersebut, hal ini sesuai dengan penelitian (Krisnaningsih et al. 2005)

yang menunjukkan adanya variasi sensitivitas dalam satu spesies bakteri E. coli

terhadap berbagai antibiotik.

Hasil sensitif pada antibiotik kloramfenikol disebabkan adanya ikatan

dengan subunit 50S dari ribosom dan akan mempengaruhi pengikatan asam amino

yang baru pada rantai peptida sehingga kloramfenikol menghambat enzim peptidil

transferase. Hal ini menyebabkan sintesis protein terhenti seketika. Kloramfenikol

bersifat bakteriostatik dan pertumbuhan mikroorganisme akan berlangsung lagi

apabila antibiotik ini menurun (Krisnaningsih et al. 2005). Jadi penggunaan

antibiotik kloramfenikol masih mampu digunakan secara efektif terhadap

pengobatan E. coli, namun masih perlu diwaspadai dalam penggunaannya.

Siprofloksasin merupakan antibiotik golongan fluorokuinolon generasi

pertama. Hasil sensitif pada 7 strain E. coli secara umum terjadi pada saat

perkembangbiakan bakteri dimana terjadi pemisahan double helix dari DNA

bakteri menjadi 2 utas DNA. Hambatan ini dapat diatasi bakteri dengan bantuan

enzim DNA girase. Peranan antibiotika golongan fluorokuinolon menghambat

kerja enzim DNA girase pada bakteri dan bersifat bakterisidal, sehingga bakteri

mati (Martha & Tejasari, 2014).

http://lib.unimus.ac.id
iv
 Gentamisin merupakan antibiotik golongan aminoglikosida. dua strain

bakteri yang sensitif terhadap aminoglikosida karena menghambat sistesis protein

bakteri. Antibiotik dengan golongan aminoglikosida juga dapat terikat pada

reseptor protein spesifik yaitu subunit 30S pada ribosom bakteri yang akan

mengakibatkan kode genetik pada mRNA tidak terbaca dengan baik sehingga

mengakibatkan biosintesis protein dari bakteri dapat terganggu (Kelanit et al.

2016).

Resistensi yang terjadi terhadap antibiotik gentamisin karena kegagalan

penetrasi kedalam sel bakteri, rendahnya afinitas obat pada ribosom atau

inaktivasi obat oleh enzim bakteri. Enzim inaktivator aminoglikosida yang dikenal

yaitu enzim adenilat, fosforilat dan asetilat. Informasi genetik untuk sintesis

enzim terutama didapat melalui konjugasi, transfer DNA sebagai plasmid dan

transfer faktor resisten. Plasmid pembawa faktor resistensi yang tersebar luas

terutama pada suatu lingkungan tertentu bertanggung jawab terhadap penyempitan

spektrum kenamisin, gentamisin dan tobramisin (Refdanita et al. 2004).

Resistensi dari 10 strain E. coli terhadap antibiotik ampisilin menunjukkan

tingkat resistensi yang tinggiterhadap antibiotik golongan penicilin yang

mempunyai sifat spektrum luas dengan toksisitas rendah (Nur et al. 2013).

Resistensi E. coli terhadap antibiotik ampisilin dapat disebabkan oleh kemampuan

bakteri menghasilkan enzim beta-laktamase yang disandi oleh gen dalam plasmid.

Enzim tersebut menyebabkan terbukanya cincin beta-laktam pada penisilin

sehingga dapat merusak aktivitas antimikroba. Hal ini dapat juga disebabkan

karena ampisilin merupakan antibiotik yang banyak ditemukan pada unit-unit

http://lib.unimus.ac.id
iv
pelayanan kesehatan untuk pengobatan terhadap berbagai penyakit infeksi ringan

(Tenover, 2006). Selain itu antibiotik ampisilin digunakan juga untuk makanan

hewan ternak yang hanya dilakukan oleh petani dan kurang diawasi oleh tenaga

ahli hal ini merupakan salah satu bentuk penyalah gunaan antibiotik yang dapat

menyebabkan terpaparnya bakteri patogen oleh antibiotik yang kemudian menjadi

resisten (Refdanita et al. 2004).

Mekanisme resistensi dapat menyebar pada E. coli lain yang belum

memiliki mekanisme tersebut melalui plasmid. Plasmid dapat dikelompokkan

berdasarkan sifat yang disandi oleh gen yang dikandungnya antara lain plasmid R

yang membawa gen resistensi terhadap antibiotik yang dapat menularkan pada

bakteri lain dari satu sel ke sel lain. Transfer plasmid R terjadi tidak hanya dalam

satu spesies tetapi dapat terjadi dalam satu genus dengan cara konjugasi sehingga

dapat meningkatkan populasi resistensi bakteri dialam dan mengurangi efektifitas

pengobatan terhadap antibiotik (Michael,2011).

Data molekuler yang mendasari sifat resistensi E. coli adalah plasmid.

Hasil isolasi dan analisis Elektroforesis DNA plasmid terhadap 10 strain E.

coliplasmid yang teramati akan terlihat sebagai pita DNA yang berpendar

berwarna orange fluoresence oleh sinar ultra violet yang dapat dilihat pada

Gambar 6.DNA Plasmid E. coliterlihat bahwa masing masing strain teramati

mempunyai satu jenis plasmid. Hal tersebut sama dengan penelitian yang

dilakukan (Al-Bahry, 2006) terhadap isolat yang diperiksa teramati 100%

mempunyai R-plasmid dan mempunyai berat molekul yang bervariasi pula dan

menurut data penelitian tersebut bakteri resisten terhadap satu jenis antibiotik

http://lib.unimus.ac.id
iv
mempunyai satu plasmid namun demikian tidak digunakan sebagai acuan karena

ditemukan bakteri resisten tetrasiklin mempunyai 2 plasmid.

Ukuran DNA plasmid tersebut dapat dibandingkan dengan marker DNA

yang sudah diketahui nilainya dan hasilnya menunjukkan satu plasmid berukuran

8.000 bp dan plasmid lain berukuran 5.000 bp. Plasmid pada kode sampel SG.02,

SG.04, SG.10 dan SG.12 terletak pada posisi 8.000 bp sedangkan plasmid pada

kode sampel SG.03, SG.05, SG.07, SG.08, SG.09, SG.11 terletak pada posisi

5.000 bp.

Kondisi tersebut sesuai dengan pernyataan (Islam et al. 2008)yang dapat

mengisolasi plasmid resistensi ganda pada 10 isolat E. coli di Bangladesh

menunjukkan profil plasmid yang berbeda-beda, 7 diantaranya mempunyai

plasmid dengan ukuran yang besar, 3 sisanya memiliki ukuran yang kecil, namun

demikian tidak disebutkan secara pasti ukuran plasmid tersebut. Hasil

elektroforesis tersebut juga teramati bahwa masing-masing isolat yang diteliti

hanya mempunyai satu jenis plasmid.

Jadi data yang diperoleh dari uji kepekaan dan elektroforesis DNA

plasmid bahwa E. coli menunjukkan resistensi dengan tingkatan yang berbeda-

beda terhadap ke empat jenis antibiotik yakni kloramfenikol, siprofloksasin,

gentamisin dan ampisilin yang diisolasi dari air sumur gali Desa Ngemplak di

Kabupaten Pati dan menunjukkan profil plasmid E. coli yang diamati dibawah

sinar ultra violet plasmid yang terisolasi mempunyai ukuran 8000 bp dan 5000 bp.

Perbedaan ukuran DNA plasmid dapat dipengaruhi karena adanya perbedaan

http://lib.unimus.ac.id
iv
genetik pada plasmid sehingga penelitian tersebut menunjukan ukuran DNA

plasmid yang samabelum tentu membawa gen resistensi yang sama.

http://lib.unimus.ac.id
iv
 BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian mengenai Gambaran sensitivitas terhadap

berbagai antibiotic dan Profil plasmid Escherichia coli isolat air sumur gali Desa

Ngemplak KabupatenPati menunjukkan, dari 10 strain E. coli terdapat 3 strain

intermediet dan 7 strain sensitive terhadap antibiotik kloramfenikol. Terhadap

antibiotik siprofloksasin menunjukkan 3 strain intermediet dan 7 strain sensitif.

Terhadap antibiotik gentamisin menunjukkan 4strain dengan hasil resisten serta 6

strain lainnya menunjukkan hasil sensitif dan intermediet. Terhadap 10 strain E.

coli semuanya menunjukkan resistensi pada antibiotic ampislin. Hasil

elektroforesis gel agarosa DNA plasmid menunjukkan 4 strain memiliki plasmid

dengan ukuran 8000 bp yakni (SG.02, SG.04, SG.10 dan SG.12), sedangkan 6

strain lainnya memiliki plasmid dengan ukuran 5000 bp yakni (SG.03, SG.05,

SG.07, SG.08, SG.09 dan SG.11).

5.2 Saran

Berdasarkan hasil penelitian disarankan perlu dilakukan analisis molekuler

Gambaran profil DNA plasmid E. coli dari beberapa tempat yang lain dari

berbagai daerah khususnya di Jawa sehingga dapat diketahui gambaran profil

DNA plasmid dari berbagai tempat.

http://lib.unimus.ac.id
iv
 DAFTAR PUSTAKA

Agustiningsih, D., Sasongko, B.S & Sudarno. 2012. Analisis Kualitas Air dan
Strategi Pengendalian Pencemaran Air Sungai Blukar Kabupaten Kendal.
Jurnal Presipitasi. Vol 9(2). Pp. 64-71

Al-Bahry, S.N., Al-Mashany, B.M., Elshafie, A.E., Pathare, N., AL-Harthy, A.H.
2006. Plasmid Profile of Antibiotic Resistant Escherichia coli Isolated from
Chicken Intestine. J. of Ala. Acad. Of Sci. 77(3-4): 152-159.

Alwi, M & Maulina, S., 2012. Pengujian Bakteri Coliform dan Escherichia coli
Pada Beberapa Depot Air Minum Isi Ulang di Kecamatan Palu Timur Kota
Palu. Jurnal Biocelebes, Vol 6(1), pp. 40-47

Annisa, A. N., Ria, S.P & Aminin, L.N., 2011. Pemurnian DNA Plasmid Puc19
Menggunakan Kolom Silika dengan Denaturan Urea. Jurnal Sains dan
Matematika. Vol 19(2). pp. 47-53

Brooks GF. 2007. Mikrobiologi Kedokteran jawetz, Melnick & Adelberg. EGC,
Jakarta

Brinner, D.J., Krieg, N.R. & Staley, J.T., 1932. Bergeys Manual of Systematic
Bacteriology. USA

Chandra, B. 2006. Pengantar Kesehatan Lingkungan. Penerbit Buku Kedokteran.

EGC, Jakarta.

Darmawati, S., Sembiring, L., Asmara, W., Artama, W.T., 2015. Identifikasi
bakteri batang gram negatif pada darah widal positif berdasarkan karakter
fenotipik. pp.8996.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2002. Syarat syarat Pengawasan

Kualitas Air Minum PerMenkes RI No.907/Menkes/SK/VII/2002. DepKes RI.
Jakarta.

Endriani, R., Andrini, F. & Alfina, D., 2010. Pola Resistensi Bakteri Penyebab
Infeksi Saluran Kemih ( ISK ) Terhadap Antibakteri di Pekanbaru. Jurnal
Natur Indonesia. Vol 12(2). pp.130135.

Fadilah, R. et al., 2014. Studi Kualitas Bakteriologis Air Sumur Gali pada
Kawasan Permukiman Menggunakan Biosensor TECTA TM B16 ( Studi
Kasus: Dusun Blimbingsari dan Dusun Wonorejo , Kabupaten Sleman
Yogyakarta ). Jurnal Sains dan Teknologi Lingkungan. Vol 6(1). pp.3847.

http://lib.unimus.ac.id
iv
Fatchiyah. Arumingtyas, E L. Widyarti, S. rahayu, S. 2011. Biologi molekular;
Prinsip dasar analisis. Penerbit Erlangga. Jakarta.

Fery, I.A., 2006. Deteksi DNA Plasmid Pada Lactobacillus sp. Dengan Metode
Elektroforesis Gel Agarosa. WARTA-WIPTEK. Vol 14(2). p.02.

Ikmalia. 2008.Analisa profil protein isolat escherichia coli S1 hasil iradiasi sinar
gamma. Fakultas sains teknologi universitas islam negeri syarif hidayatullah.
Jakarta

Islam, M.J., Sultana, S., Das, K.K., Sharmin, N., Hasan, M.N. 2008. Isolation of
plasmid mediated Multidrug Resistant Escherichia coli from Poultry. Int. J.
Sustain. Crop. Prod. 3 (5): 46-50.

Iswara, A.I., 2015. Pola Sensitivitas Eschericia coli Terhadap Antibiotik pp.273
277.

Jawetz, M dan Adelbergs. 2005. Mikrobiologi kedokteran. Salemba Medika.

Jakarta

Jawetz, M dan Adelbergs. 2007. Mikrobiologi Kedokteran. Buku Kedokteran

EGC, Jakarta

Juliantina, F., D.A. Citra, B. Nirwani. 2008. Manfaat Sirih Merah (Piper
crocatum) sebagai Agen Anti Bakterial Terhadap Bakteri Gram Positif dan
Gram Negatif. UII Press. Yogyakarta

Kelanit, S.R., Runtuboi, Y.P. Dirky., Gunaedi T., 2016. Uji Resistensi dan
Deteksi Gen Plasmid IncHI1 Salmonella typhi Isolat Jayapura. Jurnal Biologi
Papua, Vol 8(1), pp. 48-56.

Krisnaningsih, M.M. Firdiana., Asmara, W., Wibowo, H.M. 2005. Uji

Sensitivitas Isolat Escherichia coli Patogen Pada Ayam Terhadap Beberapa
Jenis Antibiotik. Jurnal Sain Veteriner, Vol (1), pp. 16-17

Martha, D & Tejasari, M. 2014. Escherichia coli Resisten terhadap Seftriskson

dan Siprofloksasin. Prosiding Penelitian Sivitas Akademika Unisba
(Kesehatan). Bandung, Indonesia. Hal.586-587.

Michael, H.W., Nugroho, S.W & Asmara, W., 2011. Profil Plasmid Escherichia
coli Resisten Terhadap Beberapa Antibiotika yang Diisolasi Dari Peternakan
Ayam Komersial. Jurnal Sain Veteriner, Vol 29(1), pp. 43-50.

http://lib.unimus.ac.id
iv
Munfiah, S., Nurjazuli & Setiani, O., 2013. Kualitas Fisik dan Kimia Air Sumur
Gali dan Sumur Bor di Wilayah Kerja Puskesmas Guntur II Kabupaten
Demak Physical and Chemical Water Quality of Dug and Bore Well in the
Working Area of Public Health Center II Guntur Demak Regency. Jurnal
Kesehatan Lingkungan Indonesia, Vol 12(2), pp.154159.

Noviana, H., 2004. Pola kepekaan antibiotika Escherichia coli yang diisolasi dari
berbagai spesimen klinis. Jurnal Kedokteran Trisakti, Vol 23(4), pp.122
126.

Nur, I., Musjaya, M.G. & Muhammad, A., 2013. Uji Resistensi dan Sensitivitas
Bakteri Salmonella thypi Pada Orang Yang Sudah Pernah Menderita Demam
Tifoid Terhadap Antibiotik. Jurnal Biocelebes.Vol 7(1), pp.2734.

Rahayu, S.P. & Dwi, O.P., 2010. Pengaruh jarak sumur gali dengan septic tank
terhadap kandungan bakteri coliform pada air sumur gali. Jurnal IKESMA.
Vol6(1), pp.2533.

Refdanita, Maksum R, Nurgani A, Endang P. 2004. Pola Kepekaan Kuman

Terhadap Antibiotika di ruang intensif Rumah Sakit Fatmawati Jakarta
Tahun 2001-2002. Jakarta: makara kesehatan vol.8(2)

Robby, R.H. et al., 2013. Produksi Biogas dari Limbah Cair Industri Tepung
Tapioka dengan Reaktor Anaerobik 3.000 Liter Berdistributor. Jurnal Teknik
Pomits. Vol 2(1), pp.15.

Snustad DP & MJ Simmons. 2003.Principles of Genetic. Hoboken (US): Wiley &

Sons Inc.
Tenover, F.C. 2006. Mekanisme Resistensi Antimikroba pada Bakteri. Amerika J.
of Med. 199(6A):S3-S10

Tururaja, T. & Mogea, R., 2010. Bakteri Coliform di Perairan Teluk Doreri,
Manokwari Aspek Pencemaran Laut dan Identifikasi Species. Ilmu kelautan,
Vol 15(1), pp.47-52.

Waluyo, L., 2009. Mikrobiologi Lingkungan. UMM PRESS, Malang.

Warganegara, E. & Apriliana, E., 2014. AD. The Determining type of Extended-
Spectrum -Lactamase Enzyme ( ESBL ) from Escherichia coli resistance
Cephalosporine of third Generation in RSUD Abdoel Moeloek Bandar
Lampung. JUKE. Vol 4(7), pp.8796.

Widiyanto, A.F., Yuniarno, S & Kuswanto, 2015. Polusi Air Tanah Akibat
Limbah Industri Dan Limbah Rumah Tangga. Jurnal Kesehatan Masyarakat.
Vol 10(2). pp.246254.

http://lib.unimus.ac.id
iv
Widyarti, S. 2011. Prinsip dasar analisis-biologi molekuler. penerbit erlangga.
Jakarta

Winarno FG. 2008. Kimia Pangan dan Gizi. MBrio Press. Bogor

Yenny & Herwana, E., 2007. Resistensi dari bakteri enterik : aspek global
terhadap antimikroba. UNIVERSA MEDICINA. Vol 26(1). Pp. 46-56.

http://lib.unimus.ac.id
iv
LAMPIRAN 1 : Pembuatan Media

1. Sterilisasi Alat dan Bahan

Peralatan dan bahan yang digunakan penelitian seperti cawan petri, tabung

reaksi, erlenmeyer dan aquades disterilisasi terlebih dahulu agar tidak

terkontaminasi oleh mikroba. Alat-alat dicuci hingga bersih kemudian dibungkus

dengan kertas, selanjutnya alat yang terbungkus dimasukkan ke dalam autoclave

yang bersuhu 121oC dengan tekanan 1 atmosfer selama 15 menit. Alat

dimasukkkan ke dalam oven pada suhu 100oC selama 1 jam agar kering sebelum

digunakan.

2. Pembuatan Media :

a. Media Mueller Hinton Agar (MHA)

Cara pembuatan: ditimbang stok media 95 gram dilarutkan dengan

aquadest 2000 ml dihomogenkan dan dimasak sampai mendidih, setelah

itu dipindah pada erlenmeyer dan disumbat dengan kapas dan dibungkus

dengan kertas, diautoclave suhu 121 C selama 15 menit pada tekanan 1-2

atm kemudian angkat media dan dibagi pada cawan petri kira-kira 32 ml

dinginkan, lalu masukkan ke kulkas.

b. Media Mac Concey (MC) OXOID

Komposisi: pepton 8,5 gram, laktosa 5 gram, NaCl 1,5 gram, netral red

0,015 gram, agar 6,75 gram, aquadest 500 ml, PH 7,2 0,2.

Cara pembuatan: ditimbang stok media 25 gram dilarutkan dengan

aquadest 500ml dalam erlenmeyer 1000 ml dihomogenkan dan dipanaskan

sampai mendidih, disumbat dengan kapas dan dibungkus dengan kertas,

http://lib.unimus.ac.id
iv
 diautoclave suhu 121 C selama 15 menit pada tekanan 1-2 atm kemudian

angkat media dan dibagi pada cawan petri kira-kira 8-10ml dinginkan, di

bungkus dengan kertas lalu masukkan ke kulkas.

c. Media Lauria Bertani

Bahan : 0,25 gram ekstrak yeast, 1 gram tryptone, 1 gram Nacl dan 50 ml

dH2O.

Cara Membuat : Campurkan semua bahan tersebut kedalam 50 ml dH2O

kemudian diautoclave suhu 121 C selama 15 menit setelah itu angkat

media dan dinginkan kemudian dibagi pada tabung konical masing-masing

5 ml.

d. Pembuatan Lysing Solution I

Bahan : 50 mM Glukosa (2M) dari stock 1 gr, 10 mM EDTA (0,5M)

0,3846 gr, 25 mM Tris (1M) 0,30 gr, Aquadest 100 ml

Cara Membuat : diambil labu ukur 100 ml, kemudian dihomogenkan

semua bahan dan ditepatkan dengan aquadest hingga volume 100 ml

e. Pembuatan Lysing Solution II

Bahan : 0,4 M NaoH 1,6 gr, SDS 2% 1 gr, Aquadest 50 ml

Cara Membuat : dibuat satu persatu dengan menggunakan labu ukur 50

ml, saat akan digunakan baru dihomogenkan keduanya dengan

perbandingan 1:1

f. Pembuatan Lysing solution III

Cara Membuat : 5 M Kalium Asetat (pH 4,8) 60 ml, Asam asetat 11,5 ml

dan Aquadest 100 ml

http://lib.unimus.ac.id
iv
 Cara Membuat : diambil labu ukur 100 ml, kemudian dihomogenkan

semua bahan dan ditepatkan dengan aquadest hingga volume 100 ml.

g. Pembuatan TAE 1x sebanyak 1 Liter

Bahan : Stok TAE 5x, Aquadest 800 ml

Cara pembuatan : diambil 200 ml TAE 5x kemudian ditambah 800 ml

dH2O steril dan homogenkan.

h. Pembuatan Gel Agarosa 1,5%

Bahan : serbuk agarosa 1,5 gram, Ethidium Bromide 2 ul, TAE 1x 150 ml

Cara Membuat : Melarutkan agarosa yang telah ditimbang kedalam 150 ml

TAE 1x kemudian homogenkan dan larutkan menggunakan microwave

selama 3 menit (setiap menit dikeluarkan dan digoyang-goyang agar cepat

larut), setelah itu ditambah 2 ul EtBr homogenkan, biarkan dingin lalu

tuang kedalam baki gel agarosa.

i. Pembuatan Standar Mac.Farland 0,5

Larutan Asam Sulfat (H2SO4) 1% dari larutan BaCl2 1% yang dicampur

dalam tabung reaksi dengan perbandingan tertentu sehingga mencapai volume

10 ml, tabung ditutup lalu dihomogenkan. Suspensi BaSO4 yang terdapat dalam

tabung dibandingkan dengan kekeruhan suspensi kuman.

Komposisi : H2SO4 1% 9,95 ml

BaCl2 1% 0,05 ml

Prosedur :

1. Dicampur semua bahan dalam tabung reaksi steril

2. Dihomogenkan larutan tersebut

http://lib.unimus.ac.id
iv
LAMPIRAN 2 : Gambar Penelitian

.Inkubasi E. coli pada media LB Sentrifuge isolasi DNA plasmid

Pembuatan gel agarosa Bahan yang digunakan elektroforesis

http://lib.unimus.ac.id
iv
LAMPIRAN 3

Running elektroforesis gel agarosa Penanaman bakteri pada media

Penanaman disk antibiotik pada media MHA

http://lib.unimus.ac.id
iv
LAMPIRAN 4

Gambar hasil diameter zona hambat antibiotik: a) Antibiotik gentamisin resisten,

b) kloramfenikol intermediet, c) ampisilin resisten, d) siprofloksasin sensitif.

Gambar hasil diameter zona hambat antibiotik: a) Antibiotik kloramfenikol

sensitif, b) ampisilin resisten, c) siprofloksasin intermediet, d) gentamisin resisten.

http://lib.unimus.ac.id
iv
http://lib.unimus.ac.id
iv