Antosianin-Lebih Dari Warna Alam: Editor Tamu: Izabela Konczak Dan Wei Zhang

Machine Translated by Google
Jurnal Biomedis dan Bioteknologi
Antosianin—Lebih dari Warna Alam

Editor Tamu: Izabela Konczak dan Wei Zhang


Editor Tamu: Izabela Konczak dan Wei Zhang
Hak Cipta © 2004 Hindawi Publishing Corporation. Seluruh hak cipta.
Ini adalah edisi khusus yang diterbitkan dalam volume 2004 "Journal of Biomedicine and Biotechnology." Semua artikel adalah artikel akses
terbuka yang didistribusikan di bawah Lisensi Atribusi Creative Commons, yang mengizinkan penggunaan, distribusi, dan reproduksi tanpa batas
dalam media apa pun, asalkan karya asli dikutip dengan benar.
Redaktur Pelaksana Pendiri

Abdelali Haoudi, Sekolah Kedokteran Virginia Timur, AS
Pemimpin Redaksi
HN Ananthaswamy, AS Marc Fellous, Perancis Peter M. Gresshoff, Australia
Dewan Penasehat
Virander Singh Chauhan, India Francis Galibert, Prancis Pierre Tambourin, Perancis
Jean Dausset, Perancis Jean-Claude Kaplan, Perancis Michel Veron, Perancis
Koussay Dellagi, Tunisia Mohamed Saghi, Maroko
Ahmad Farouki, Maroko Naeem Shahrour, AS
Editor Asosiasi
Francois Amalric, Prancis Vladimir Larionov, AS David Annie J. Sasco, Prancis
Richard Bartlett, AS Halima Lightfoot, AS Khalid Meksem, Daniel Scherman, Prancis
Bensmail, AS Shyam K. AS Allal Ouhtit, AS Steffen O. John Semmes, AS Pierre-
Dube, AS Denise M. B. Petersen, Denmark Marie Sinet, Prancis Hongbin
Harmening, AS Dominique Job, Etienne Roux, Prancis Zhang, AS
Prancis
Dewan Redaksi
Kamran Abbassi, Inggris William N. Fishbein, AS James M. Mason, AS
Khalid A. Alali, Qatar Francis Galibert, Prancis Majid Mehtali, Prancis
Khaled Amiri, UEA Claude Gaillardin, Prancis Emile Miginiac, Prancis
Mahmoud M. Amr, Mesir William Gelbart, AS Mauro John V. Moran, AS Ali
Claude Bagnis, Prancis Giacca, Italia Andrea J. Ouaissi, Prancis Pamela
Claude Balny, Prancis Raj Gonzales, AS Marie T. Greally, M. Pollock, Australia Kanury VS
Bathnagar, India Lynn Bird, Bahrain Jau-Shyong Hong, Rao, India Laure Sabatier,
AS Marìa A. Blasco, Spanyol AS James Huff, AS Mohamed Prancis Abdelaziz Sefiani, Maroko
Dominique Bonneau, Prancis Iqbal, Arab Saudi Shahid James L. Sherley, AS Noel W.
Mohamed Boutjdir, AS Douglas Jameel, India Celina Janion, Solomons, Guatemala Thomas
Bristol, AS Georges Calothy, Polandia Jean-Claude Jardillier, R. Spitzer, AS Michel Tibayrenc,
Prancis Ronald E. Cannon, AS Prancis Gary M. Kasof, AS Prancis M'hamed Tijane, Maroko
Anne Cambon-Thomsen, Prancis Christian Trepo, Prancis Michel
Michel Lagarde, Prancis Louis Veron, Prancis Jean-Michel H. Vos,
Dallaire, Kanada Pierre Legrain, Prancis Martine Defais, Prancis Nan AS LisaWiesmüller, Jerman Leila
Liu, AS Luiz De Marco, Brasil Yan Luo, ASMacgregor,
John W. Drake,
PrancisASHatem
John Zahed, Lebanon Steven L. Zeichner,
El Shanti, Jordan Regis Mache, Prancis Thomas
Mohamed Fanning,
Marrakchi,
AS AS
Tunisia
Isi
Antosianin—Lebih dari Warna Alam, Izabela Konczak dan Wei Zhang

Volume 2004 (2004), Edisi 5, Halaman 239-240
Profiling LC/PDA/ESI-MS dan Aktivitas Pemulungan Radikal Anthocyanin di Berbagai Berries,

Jun-ichiro Nakajima, Ippei Tanaka, Shujiro Seo, Mami Yamazaki, and Kazuki Saito
Perubahan Total Antosianin pada Blueberry dan Efek Antioksidannya Setelah Pengeringan dan
Pembekuan, Virachnee Lohachoompol, George Srzednicki, dan John Craske
Sour Cherry (Prunus cerasus L) Antosianin sebagai Bahan Pangan Fungsional, Federica Blando,
Carmela Gerardi dan Isabella Nicoletti
Efek Cahaya pada Tingkat Antosianin pada Buah Cranberry yang Direndam dan Dipanen, Yu
Zhou dan Bal Ram Singh
Untuk Meregangkan Batas Produksi Metabolit Sekunder dalam Bioproses Berbasis Sel Tumbuhan:
Antosianin sebagai Studi Kasus, Wei Zhang, Chris Franco, Chris Curtin, dan Simon Conn
Efek Ekstrak Biji Anggur dan Quercetin pada Parameter Kardiovaskular dan Endotel pada Subyek
Berisiko Tinggi, Peter M. Clifton Volume 2004 (2004), Edisi 5, Halaman 272-278
Karakterisasi Antosianin Asilasi pada Kalus yang Diinduksi Dari Akar Simpanan Ubi Jalar Daging Ungu,
Kentang Ipomoea L, N. Terahara, I. Konczak, H. Ono, M. Yoshimoto, dan O. Yamakawa Halaman 279-2
Asam Caffeoylquinic Dihasilkan Secara In Vitro dalam Sel Ubi Jalar yang Mengumpulkan Antosianin Tinggi
Line, Izabela Konczak, Shigenori Okuno, Makoto Yoshimoto, and Osamu Yamakawa
Bioavailabilitas dan Biokinetik Antosianin Dari Jus Anggur Merah dan Anggur Merah, Roland Bitsch,
Michael Netzel, Thomas Frank, Gabriele Strass, dan Irmgard Bitsch
Keluarga Baru Pyranoanthocyanin Kebiruan, Nuno Mateus, Joana Oliveira, Mafalda Haettich-Motta, dan
Victor de Freitas
Antosianin dan Kesehatan Manusia: Pendekatan Investigasi In Vitro, Mary Ann Lila
Pisau Tentara Swiss Alam: Berbagai Peran Pelindung Antosianin dalam Daun, Kevin S. Gould Volume
2004 (2004), Edisi 5, Halaman 314-320
Mekanisme Molekuler Di Balik Efek Kemopreventif Anthocyanidins, De-Xing Hou,

Makoto Fujii, Norihiko Terahara, dan Makoto Yoshimoto
Kuantifikasi dan Pemurnian Antosianin Murbei dengan Resin Makropori, Xueming Liu,
Gengsheng Xiao, Weidong Chen, Yujuan Xu, and Jijun Wu
Pengaruh Dua Metode Ekstraksi Sari Buah Delima (Punica granatum L) Terhadap Mutu Selama
Penyimpanan di 4C, Graça Miguel, Susana Dandlen, Dulce Antunes, Alcinda Neves, dan Denise Martins
Konsentrasi Antosianin Buah Delima “Assaria” Selama Penyimpanan Dingin yang Berbeda
Kondisi, Graça Miguel, Catarina Fontes, Dulce Antunes, Alcinda Neves, dan Denise Martins
Ekskresi Glukosida Cyanidin dan Glucuronides dalam Urin pada Manusia Sehat Setelah Elderberry
Penelanan Jus, Roland Bitsch, Michael Netzel, Susanne Sonntag, Gabriele Strass, Thomas Frank, dan
Irmgard Bitsch
Jurnal Biomedik dan Bioteknologi • 2004:5 (2004) 239–240 • PII. S1110724304407013 • http://jbb.hindawi.com
TAJUK RENCANA

Izabela Konczak1ÿ dan Wei Zhang2†
1Food Science Australia, Pusat Penelitian Koperasi untuk Bioproduk, 16 Julius Avenue,
Riverside Corporate Park, North Ryde, NSW 2113, Australia
2Departemen Bioteknologi Medis, Pusat Penelitian Koperasi untuk Bioproduk, Universitas Flinders,
5E110, Pusat Medis Flinders, Bedford Park, SA 5042, Australia
Penelitian selama dekade terakhir telah menghasilkan bukti tak anthocyanin dapat memainkan peran penting dalam mencegah
terbantahkan untuk berbagai macam manfaat kesehatan yang timbul penyakit yang berhubungan dengan gaya hidup seperti kanker,
dari konsumsi buah dan sayuran. Dalam upaya untuk mengidentifikasi diabetes, dan penyakit diovaskular mobil dan neurologis.
bahan-bahan aktif yang meningkatkan kesehatan, banyak peneliti Masih banyak pertanyaan. Kami tidak tahu, misalnya, apakah
telah berfokus pada sifat-sifat flavonoid, kelas besar senyawa fenolik manfaat kesehatan yang nyata ini berasal dari antosianin saja, atau
yang berlimpah dalam makanan tersebut. Yang paling menonjol di dari interaksi sinergisnya dengan senyawa fenolik lainnya. Apakah
antara flavonoid adalah antosianin—pewarna tanaman universal yang kualitas peningkatan kesehatan dari campuran antosianin-fenolik
bertanggung jawab atas warna merah, ungu, dan biru yang terlihat dipertahankan di berbagai sistem pangan? Bagaimana nasib molekul
pada banyak buah, sayuran, biji-bijian sereal, dan bunga. antosianin setelah dikonsumsi? Laporan bioavailabilitas antosianin
menunjukkan bahwa kurang dari 1% antosianin yang dikonsumsi
Diwakili oleh lebih dari 600 struktur molekul seperti yang diidentifikasi terdeteksi dalam plasma dan urin manusia. Apakah kualitas
hingga saat ini, antosianin sangat menarik bagi industri pewarna perlindungan kesehatan yang diamati dalam studi in vitro juga
makanan karena kemampuannya untuk memberikan warna cerah ditampilkan secara in vivo? Jika ya, bagaimana mekanisme aktivitas
pada produk. Sekarang tampaknya sangat mungkin bahwa mereka biologis antosianin?
juga meningkatkan kualitas makanan yang meningkatkan kesehatan.
Lokakarya Internasional Ketiga tentang Anthocyanin yang
Antosianin dimasukkan ke dalam makanan manusia berabad- diselenggarakan oleh Cooperative Research Centre for Bio products
abad yang lalu. Mereka adalah komponen obat-obatan herbal and Food Science Australia di Sydney, Australia, 27-29 Januari 2004,
tradisional yang digunakan oleh orang Indian Amerika Utara, Eropa, menyediakan forum untuk membahas fungsi gizi, fisiologis, dan
dan Cina, dan biasanya berasal dari daun kering, buah (berry), akar terapeutik antosianin, dan peluangnya. untuk pengembangan makanan
penyimpanan, atau biji. Campuran dan ekstrak yang kaya antosianin fungsional berbasis antosianin baru sesuai dengan persyaratan
(walaupun bukan senyawa yang dimurnikan) telah digunakan secara peraturan. Melalui presentasi ilmiah dan dialog antara peneliti, pelaku
historis untuk mengobati kondisi yang beragam seperti hipertensi, industri, dan konsumen undangan, salah satu tujuan lokakarya adalah
pireksia, gangguan hati, disentri dan diare, masalah kencing termasuk mempopulerkan aplikasi antosianin sebagai pewarna makanan alami
batu ginjal dan infeksi saluran kemih, dan flu biasa. Mereka bahkan dengan kualitas nutraceutical. Kemajuan bioteknologi dalam memenuhi
diklaim menghasilkan perbaikan pada penglihatan dan sirkulasi darah. persyaratan industri pewarna makanan dan konsumen, seperti dalam
rekayasa genetika untuk produksi antosianin terpilih dengan stabilitas
yang ditingkatkan dan/atau ikatan yang bermanfaat bagi kesehatan,
Studi terbaru menggunakan antosianin murni atau ekstrak kaya telah dijelaskan. Kultur sel tumbuhan disarankan sebagai alat
antosianin pada sistem eksperimen in vitro telah mengkonfirmasi penelitian yang sangat baik untuk mengeksplorasi "anthocyanin
potensi potensi pigmen ini. enigma" di mana interaksi antara anthocyanin dan senyawa fenolik
Manfaat yang dapat dibuktikan termasuk perlindungan terhadap luka atau logam lainnya dapat memfasilitasi atau bahkan meningkatkan
hati; penurunan tekanan darah yang signifikan; im bukti penglihatan; aktivitas fisiologis ekstrak kaya antosianin. Memang, perbandingan
aktivitas anti-inflamasi dan antimikroba yang kuat; penghambatan mendalam ditarik antara efek anthocyanin pada sel hewan dan fungsi
mutasi yang disebabkan oleh mutagen dari makanan yang dimasak; asli mereka dalam sel tumbuhan. Display dan degustasi produk
dan penekanan proliferasi sel kanker manusia. Bersama dengan makanan berbasis antosianin disediakan oleh Wild
senyawa fenolik lainnya, mereka adalah pemulung radikal bebas yang
kuat, meskipun mereka juga dapat bertindak sebagai pro-oksidan.
Karena aktivitas fisiologisnya yang beragam, konsumsi
© 2004 Hindawi Publishing Corporation

240 I. Konczak dan W. Zhang 2004:5 (2004)
(Jerman), Nutrinova Australia Ltd, Kingfood Australia Ltd, Australia dan Cooperative Research Center for Bioproducts pada
Tarac Technologies Ltd (Australia), dan The Natural tahun 2000, ia memprakarsai dan mengkoordinir Lokakarya
Confectionery Co (Australia), dan berfungsi sebagai contoh Internasional tentang seri Antosianin yang bertujuan untuk
mempopulerkan pengetahuan tentang sifat pencegahan kesehatan
yang mendorong peneliti dan manajer industri melalui
dari ekstrak buah dan sayuran yang kaya antosianin dan aplikasinya
pencarian mereka untuk makanan berbasis antosianin baru
yang ditingkatkan sebagai pewarna makanan alami. dan bahan
produk yang mempromosikan kesehatan yang baik. produk pangan fungsional.
Program IWA2004 (Lokakarya Internasional Antosianin)
menawarkan 6 kuliah pleno dan 19 presentasi lisan dalam
Wei Zhang lahir pada 11 April 1969.
sesi yang mencakup antosianin dalam sel tumbuhan—fungsi, Dia telah menjadi Insinyur Biokimia sejak
biosintesis, dan regulasi; penerapan kultur sel tumbuhan tahun 1989 dan menerima gelar PhD di
dan bioproses untuk akumulasi antosianin dengan sifat bidang teknik biokimia dari Dalian Institute
komersial/kesehatan yang ditingkatkan; efek menguntungkan of Chemical Physics, Chinese Academy of
kesehatan dari antosianin; pengembangan pangan fungsional Sciences, pada tahun 1994. Dia memiliki
berbasis antosianin; dan anthocyanin dan misteri warna keahlian teoritis dan eksperimental yang
anggur merah. Presentasi disertai dengan 26 poster. Kami kuat di bidang bioproses terintegrasi,
ingin berterima kasih kepada 170 penulis dari 13 negara bioreaktor membran , kultur sel tanaman,
(Australia, Cina, Finlandia, Prancis, India, Jepang, Jerman, sistem sel amobil, pemodelan dan simulasi superkomputer dari
bioproses serta rekayasa bioproduk kelautan. Karier penelitian
Nepal, Selandia Baru, Portugal, Taiwan, Inggris, dan AS)
pascadoktoralnya telah membawanya bekerja di sejumlah
atas kontribusi mereka pada program IWA2004. universitas dan institusi terkemuka termasuk University of Tokyo
(Jepang), University of Cam bridge (UK), dan Cornell University
Edisi khusus Journal of Biomedicine and Biotechnology (USA). Hasilnya, dia telah menerbitkan total lebih dari 100 publikasi
ini menggabungkan karya-karya terpilih yang dipresentasikan di jurnal dan konferensi yang direferensikan (lebih dari 80% sebagai
di IWA2004. Ini mencerminkan keragaman dalam presentasi penulis pertama). Pengalaman internasionalnya antara lain bekerja
dan diskusi, dan bertujuan untuk menyebarluaskan informasi di China, Korea, Jepang, Australia, Inggris, dan Amerika Serikat
yang dikumpulkan selama lokakarya. Kami berterima kasih memberikan peluang besar untuk kolaborasi R&D internasional.
Dia telah terlibat dalam mengatur komite dari beberapa konferensi
kepada 63 penulis makalah yang dikirimkan atas kontribusi
mereka. Penyusunan edisi khusus ini tidak akan mungkin internasional sebagai anggota atau ketua. Dia telah memberikan
seminar dan presentasi di berbagai konferensi nasional dan
terjadi tanpa dukungan 40 ahli di berbagai bidang penelitian internasional dan re
thocyanin yang berasal dari 19 negara, yang secara ekstensif
laboratorium pencarian. Saat ini beliau adalah Dosen Senior di
mengevaluasi manuskrip yang diserahkan dan melalui bidang bioproses dan Kepala Laboratorium Kultur Sel Tumbuhan
pertanyaan dan saran konstruktif mereka berkontribusi di CRC for Bioproducts, Flinders University.
secara signifikan hingga saat ini. bentuk terbitan Journal of
Biomedicine and Biotechnology edisi ini.
ÿ Email: izabela.konczak@foodscience.afisc.csiro.au
Izabela Konczak † Email: wei.zhang@flinders.edu.au
Wei Zhang
Izabela Konczak adalah seorang Ilmuwan

Riset dengan tim Food Ingredients and
Functionality dari Food Science Australia,
Sydney. Proyeknya baru-baru ini berfokus
pada penerapan bioteknologi untuk
produksi metabolit sekunder terpilih dengan
aplikasi potensial dalam industri makanan
dan farmasi serta penemuan fitokimia
bioaktif baru, studi tentang aktivitas
fisiologisnya, bioavailabilitas, dan kemungkinan aplikasinya sebagai
nutraceuticals. Dengan pengalaman profesional selama 4 tahun di
Eropa (Polandia), diikuti oleh lebih dari 10 tahun penelitian
pascadoktoral di Jepang, Selandia Baru, Australia, dan AS, dia
telah mengembangkan keterampilan interdisipliner lintas
bioteknologi, termasuk pengembangan garis sel, percepatan
akumulasi metabolit sekunder spesifik dalam kultur sel tanaman,
biotransformasi, bioproses, dan modifikasi genetik. Dia adalah
penulis teknologi berbasis kultur sel tanaman yang diterapkan
secara komersial untuk perbanyakan cepat hibrida Sanderso nia
(Selandia Baru) dan Penemu teknologi untuk produksi anthocyanin
dalam kultur sel ubi jalar (paten di Jepang dan Australia). Setelah
bergabung dengan Food Science
ARTIKEL PENELITIAN
Pembuatan Profil LC/PDA/ESI-MS dan Pembersihan Radikal

Aktivitas Anthocyanin di Berbagai Berries
Jun-ichiro Nakajima, 1, 2 Ippei Tanaka,2 Shujiro Seo,2 Mami Yamazaki,1 and Kazuki Saito1ÿ
1Departemen Biologi Molekuler dan Bioteknologi, Sekolah Pascasarjana Ilmu Farmasi,

Universitas Chiba, Yayoi-cho 1-33, Inage-ku, Chiba 263-8522, Jepang
2Tokiwa Phytochemical Co, Ltd, Kinoko 158, Sakura-shi, Chiba 285-0801, Jepang
Diterima 2 April 2004; direvisi 23 Juni 2004; diterima 29 Juni 2004
Ekstrak antosianin dari dua buah blueberry, Vaccinium myrtillus (bilberry) dan Vaccinium ashei (rabbiteye blueberry), dan tiga buah beri
lainnya, Ribes nigrum (kismis hitam), Aronia melanocarpa (chokeberry), dan Sambucus nigra (elderberry), dianalisis dengan kinerja
kromatografi cair digabungkan dengan deteksi susunan fotodioda dan ionisasi elektrospray - spektrometri massa (LC/PDA/ESI-MS). Baik
bilberry dan blueberry rabbiteye mengandung 15 anthocyanin identik dengan pola distribusi yang berbeda.
Blackcurrant, chokeberry, dan elderberry masing-masing mengandung 6, 4, dan 4 jenis antosianin. Aktivitas penangkapan radikal dari ekstrak
berry ini dianalisis dengan menggunakan 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH). Semua ekstrak ini menunjukkan aktivitas antiradikal yang kuat.
PENGANTAR R1
OH
Antosianin (Gambar 1) adalah perwakilan pigmen
tumbuhan yang tersebar luas dalam buah dan bunga berwarna.
Mereka juga menunjukkan aktivitas antioksidan dan karena KE O+
R2
itu dapat berkontribusi pada pencegahan penyakit jantung,
kanker, dan penyakit radang [1, 2, 3, 4, 5, 6]. Buah beri
diketahui mengandung pigmen antosianin yang melimpah dan OH
karenanya telah digunakan secara global sebagai obat atau
sumber makanan kesehatan/suplemen diet. Jumlah dan OH
distribusi anthocyanin dalam buah berbeda tergantung pada
Gambar 1. Rumus struktur antosianidin. Sianidin, R1 = OH, R2 = H; delphinidin,
spesies tanaman, kondisi budidaya, dan daerah penghasil. R1 = R2 = OH; peonidin, R1 = OCH3, R2 = H; petunidin, R1 = OCH3, R2 = OH;
Akibatnya, aktivitas antioksidan mungkin berbeda di antara malvidin, R1 = R2 = OCH3.
berbagai ekstrak berry, khususnya ekstrak antosianin berry di
pasar komersial.
Meskipun sejumlah penelitian profil antosianin dan aktivitas
antioksidan dari berbagai buah beri telah dilaporkan [7, 8, 9, di Italia di bidang oftalmologi [11, 12]. Blueberry mata kelinci
10], perbandingan komprehensif dari berbagai ekstrak adalah spesies yang dibudidayakan untuk dimakan di daerah
antosianin buah beri yang beredar di pasar Jepang masih yang relatif hangat seperti Jepang. Asupan oral campuran
perlu diteliti. anthocyanin blackcurrant, dibuat dari buah blackcurrant, telah
Dalam penelitian ini, ekstrak dua buah blueberry, diklaim bermanfaat untuk fungsi visual [13]. Ekstrak Elderberry
Vaccinium myrtillus (bilberry) dan Vaccinium ashei (rabbiteye dilaporkan memiliki beberapa aktivitas anti-inflamasi [14] dan
blueberry), dan tiga buah beri lainnya, Ribes ni grum (kismis aktivitas antivirus terhadap virus influenza [15]. LC/PDA/ESI-
hitam), Aronia melanocarpa (chokeberry), dan Sambucus MS, alat yang ampuh untuk analisis anthocyanin [7, 16, 17],
nigra (elderberry) , dianalisis dengan kromatografi cair kinerja memungkinkan penentuan simultan semua thocyanin dalam
tinggi (HPLC) digabungkan dengan deteksi susunan fotodioda ekstrak tumbuhan. Kami menggunakan LC/PDA/ESI-MS
dan ionisasi elektrospray - spektrometri massa (LC/PDA/ESI- untuk pembuatan profil anthocyanin yang komprehensif dalam
MS). Bilberry adalah salah satu blueberry liar lowbush yang traktat ekstrak berry. Aktivitas pemulungan radikal juga
ditemukan di tali Uni Eropa Utara secara alami. Ekstraknya diperiksa dalam ekstrak berry tersebut.
telah diakui sebagai obat

242 Jun-ichiro Nakajima dkk 2004:5 (2004)
BAHAN DAN METODE 250–600 nm. Parameter MS adalah sebagai berikut: mode
ionisasi, positif; gas selubung, nitrogen; suhu kapiler, 320ÿC;
Reagen
tegangan kapiler, 5,0 kV; akuisisi pemindaian penuh, dari 50
Kimia dan pelarut HPLC dibeli dari Sigma-Aldrich, Wako hingga 1000 m/ z pada 2 pemindaian/dtk. Analisis Tandem MS
Pure Chemical Industries, Ltd, atau Kanto Kagaku, dan dilakukan dengan helium sebagai gas tumbukan.
setidaknya memiliki tingkat analitik. Standar tosianin (delphinidin
klorida, cyanidin chlo ride, cyanidin 3-glukosida klorida, peonidin Pengukuran aktivitas pemulungan radikal 2,2-
klorida, peonidin 3-glukosida klorida, malvidin klorida, mal vidin difenil-1-pikrilhidrazil Metode yang
3-glukosida klorida, dan malvidin 3-galaktosida klorida) dibeli dilaporkan oleh Blois [18] umumnya diikuti. Setiap serbuk
dari Extrasynthese. berry dilarutkan dan diencerkan dalam etanol dengan
konsentrasi 2,0, 1,0, 0,5, 0,2, dan 0,1 mg/mL. Lima puluh µL
ekstrak yang telah diencerkan ditambahkan ke dalam 1 mL
Persiapan ekstrak Buah
larutan 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) ethanol (100 µM)
beku komersial (300 g) bilberry, rab biteye blueberry, dan dan didiamkan selama 5 menit pada suhu kamar dilanjutkan
blackcurrant dibeli. Buah dihomogenisasi dalam 450 mL etanol dengan pengukuran absorbansi larutan yang dihasilkan. pada
90% ( H2SO4 0,1%) dan diaduk semalaman pada suhu kamar. 517 nm menggunakan spektrofotometer yang dijelaskan
Setelah sentrifugasi pada 3 000 rpm selama 5 menit, sebelumnya. Aktivitas pemulungan radikal DPPH yang
supernatan disaring dan diaplikasikan pada kolom penyerap diperoleh oleh masing-masing bubuk berry dibandingkan
polimer non ionik (Amberlite XAD-7, Rohm dan Haas, dengan Trolox, analog dari vitamin E.
Philadelphia, Pa) diikuti dengan pencucian dengan air.
HASIL DAN DISKUSI
Fraksi antosianin kemudian dikumpulkan dengan elusi dengan
etanol encer (asam sitrat 0,05%). Konsentrat jus komersial dari Kandungan antosianin dari lima ekstrak berry dianalisis
chokeberry dan elderberry juga dibeli dan diterapkan pada menggunakan LC/PDA/ESI-MS. Gambar 2 menunjukkan
langkah pemurnian seperti di atas. Fraksi murni yang diperoleh kromatogram khas antosianin pada PDA dengan panjang
dari lima buah beri yang mengandung antosianin dipekatkan gelombang selektif (penyerapan 500-550 nm). Ekstrak bil berry
dan dibekukan menjadi bubuk. dan blueberry rabbiteye menunjukkan 13 puncak yang identik,
meskipun intensitasnya berbeda (Gambar 2a dan 2b). Enam,
empat, dan dua puncak diperoleh dari ekstrak blackcurrant,
Kandungan antosianidin total dalam bubuk berry
chokeberry, dan elderberry, (Gambar 2c, 2d, dan 2e).
Bubuk dari setiap ekstrak berry yang mengandung
thocyanin yang dilarutkan dalam metanol (2% HCl) dihidrolisis Puncak juga dianalisis dan diidentifikasi secara terus
pada suhu 80ÿC selama 30 menit untuk mendapatkan menerus dengan spektrometri massa. Antosianin ekstrak
antosianidin yang sesuai. Nilai puncak absorbansi sekitar 500– bilberry dipastikan mengandung lima antosianin agly cons,
600 nm dari setiap larutan antosianidin dideteksi menggunakan yaitu delphinidin, cyanidin, petunidin, peonidin dan malvidin
spektrofotometer UV-1700 UV-Vis (Shimadzu, Ky oto, Jepang) (Gambar 1). Kromatogram massa dari masing-masing aglikon
untuk menentukan jumlah antosianidin sebagai ekuivalen (Gambar 3) menunjukkan bahwa bilberry dan blueberry mata
delphinidin. kelinci memiliki 15 antosianin; namun demikian, ekstrak hanya
menunjukkan 13 puncak pada kromatogram PDA.
LC/ PDA/ ESI-MS analisis anthocyanin dalam Hal ini disebabkan oleh koelusi dari dua lite metabo yang
ekstrak berry berbeda. Yaitu, angka puncak 16 dan 19 pada kromatogram
Serbuk masing-masing ekstrak dilarutkan dalam H2O PDA (Gambar 2a dan 2b) masing-masing terdiri dari dua
hingga konsentrasi 2 mg/mL dilanjutkan dengan filtrasi dengan anthocyanin independen, pceonidin 3-glukosida (16a) dan
membran nilon 0,45 µm dan diaplikasikan pada analisis LC/ malvidin 3-galactoside (16b) pada puncak 16, dan peonidin 3-
PDA/ESI-MS [17]. Analisis dilakukan pada HPLC seri Agilent arabinoside ( 19a) dan malvidin 3-glukosida (19b) pada puncak
1100 (Agilent Technologies, Palo Alto, California) menggunakan 19. Hasil serupa diamati dalam kasus ekstrak elderberry berry.
kolom Capcell Pak C18 UG120 5 mm (4,6 mm × 150 mm, Shi Pada kromatogram PDA, hanya dua puncak yang dapat
seido, Tokyo, Jepang) diikuti oleh spektrometer massa Finnigan dideteksi (Gambar 2e, puncak nomor 1 dan 7).
LCQDECA dengan sumber ionisasi semprotan elektron Namun, kromatogram massa mengungkapkan bahwa puncak
(Thermo Electron, San Jose, California). Kondisi HPLC adalah tersebut masing-masing terdiri dari dua antosianin independen,
sebagai berikut: pelarut A, 0,1% TFA/H2O; pelarut B, cyani din 3,5-diglucoside (1a) dan cyanidin 3-sambubioside-5-
50%CH3CN/0,1%TFA/50%H2O; gradien linier, persentase glucoside (1b) pada puncak 1, dan cyanidin 3-sambubioside
awal B (15%) hingga 60 menit (30%); suhu kolom, 40ÿC; laju (7) dan cyanidin 3-glucoside (8) pada puncak 7 (Gambar 4).
alir, 0,5 mL/menit. Spektra serapan sinar ultraviolet antosianin Satu puncak besar tambahan juga terdeteksi pada kromatogram
terdeteksi oleh photodiode array detector (PDA) dalam kisaran massa m/ z = 611 pada 58 menit (Gambar 4), meskipun puncak
tersebut mungkin mencerminkan beberapa flavonoid selain
antosianin karena senyawa tersebut tidak memiliki absorbansi.
2004:5 (2004) Anthocyanin dalam Berbagai Berries 243
×10 2
2 22.39
14 100
3 56 6
8 3 29,82
KE 25,48
12 1112 50
9 16 19
Kelimpahan
relatif
1415 20
10 0
10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
jam (menit) jam (menit)
(sebuah) (sebuah)
5
×10 28.83
100
11
14 8 37,12
16
50 32,89
KE
2
12 Kelimpahan
relatif
5968 19 20
3 1112 1415 0
10 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
jam (menit)
jam (menit)
(b)
(b)
9
×10 43,17
1538,10
34,61 12
4 100
10
14
50
3
KE
Kelimpahan
relatif
12
8
13 18 0
10 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
jam (menit)
jam (menit)
(c)
(c)
14
42.00
×10 5 100
11
16a 19a
14 46.58 50.64
50
KE Kelimpahan
relatif
12
8 17 0
10 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 jam (menit)
jam (menit)
(d)
(d)
20
16b 56,01 19b
47,16
51,24
100
×10 7
14 50
Kelimpahan
relatif
KE
12 1 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
10
10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 jam (menit)
jam (menit)
(dan)
(dan)
Gambar 3. Kromatogram massa ekstrak bilberry diseleksi m/z
tiap aglikon. Kromatogram massal mengungkapkan bahwa
Gambar 2. Kromatogram HPLC ekstrak berry pada PDA. ekstrak bil berry mengandung 15 antosianin; namun demikian,
Kromatogram diperoleh pada PDA dengan panjang gelombang ekstrak menunjukkan hanya 13 puncak pada PDA. Puncak 16
selektif (500 hingga 550 nm). Angka pada kromatogram dan 19 pada Gambar 2 tumpang tindih dengan masing-masing
menunjukkan angka puncak yang terdeteksi sesuai dengan 16a dan 16b, dan 19a dan 19b. (a) Delphinidin (m/ z = 303); (b)
angka pada Tabel 1. (a) Bilberry; (b) Mata kelinci; (c) Kismis sianidin (m/ z = 287); (c) petunidin (m/ z = 317); (d) peonidin (m/
hitam; (d) Chokeberi; (e) Elderberry. z = 301); (e) mal vidin (m/ z = 331).
57.92 100
100
80 1a
Kelimpahan
relatif
18.71
60
40
20
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
jam (menit)
(sebuah)
50
1b
19.35
100 pemulungan
Aktivitas
radikal
(%)
80
Kelimpahan
relatif
60
40
20
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
jam (menit)
0
(b) 0,0 1.0 2.0
Konsentrasi (mg/mL)
7
32.49 Trolox Kismis hitam
100
80 blueberry Chokeberry
mata kelinci Elderberry
Kelimpahan
relatif
60
40 Gambar 5. Aktivitas pemulungan radikal dari ekstrak berry. Ekstrak
20
berry diinkubasi dengan DPPH selama 5 menit, dan ditentukan
0 absorbansinya pada 517 nm akibat radikal DPPH.
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
Trolox digunakan sebagai kontrol positif.
jam (menit)
(c)
8 alents per 100 mg bubuk setelah hidrolisis ditentukan sebagai

32.79
100 berikut: 28,8 mg (bilberry), 24,8 (rabbiteye), 16,0 (blackcurrant),
80 19,1 (chokeberry), dan 30,4 ( elder berry).
Kelimpahan
relatif
60
40
20
Tabel 1 merangkum data LC/PDA/ESI-MS dan
0 komposisi antosianin dalam lima ekstrak berry. Antho cyanin
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
yang ditemukan pada bilberry dan blueberry rabbiteye terdiri dari
jam (menit) delphinidin, cyanidin, petunidin, peonidin, dan malvidin yang
berikatan dengan galaktosa, glukosa, atau arabinosa pada posisi
(d)
C-3 [7, 11]. Jumlah glikosida delphinidin dan cyanidin yang
Gambar 4. Kromatogram massa ekstrak elderberry dipilih m/z dari terdeteksi dari ekstrak bilberry lebih banyak daripada blueberry
masing-masing antosianin. Kromatogram massal mengungkapkan rabbiteye. Delphini din dan cyanidin 3-rutinosides merupakan
bahwa ekstrak elderberry mengandung 4 antosianin; namun demikian, pigmen utama yang ditemukan pada blackcurrant [7, 19]. Sejumlah
ekstrak hanya menunjukkan 2 puncak pada PDA. Puncak 1 dan 7 kecil petu nidin dan peonidin 3-rutinosida juga terdeteksi, meskipun
pada Gambar 2 saling tumpang tindih dengan 1a dan 1b, dan 7 dan
masih tentatif dan masih harus diidentifikasi. Chokeberry hanya
8. (a) Sianidin 3,5-diglukosida (m/ z = 611); (b) cyani din 3-
mengandung cyanidin sebagai agly con, yang melekat terutama
sambubiosida-5-glukosida (m/ z = 743); (c) cyanidin 3- sambubioside
(m/ z = 581); (d) cyanidin 3-glukosida (m/ z = 449). dengan galaktosa dan arabinosa [8, 20]. Banyak cyanidin 3-
sambubioside dan cyanidin 3-glucoside ditemukan dalam ekstrak
elderberry [21, 22]. Selain itu, beberapa dari 5-glukosida mereka
juga terdeteksi, menunjukkan bahwa hanya elderberry yang
memiliki aktivitas cyanidin 5-glukosiltransferase di antara buah
pada 500–550 nm pada PDA (Gambar 2). Hasil ini menyiratkan tersebut [23, 24].
bahwa dalam analisis LC-MS, pemisahan lengkap dengan HPLC
tidak selalu diperlukan karena kromatografi massa dapat Gambar 5 menunjukkan aktivitas pemulungan radikal dari
memisahkan senyawa secara akurat. ekstrak berry menggunakan DPPH. Kelima ekstrak berry
Total kandungan anthocyanidin bubuk berry yang disiapkan menunjukkan aktivitas pemulungan radikal yang kuat, meskipun
dalam penelitian ini dihitung sebagai delphinidin equiv lebih lemah dari pada Trolox. Mereka menunjukkan aktivitas yang relatif sama;
Tabel
1.
Pembuatan
profil
antosianin
pada
berbagai
buah
beri
dengan
HPLC/
PDA/
ESI-
MS.
Intensitas
puncak
(ditampilkan
sebagai
+)
ditentukan
dari
setiap
tinggi
puncak
pada
kromatogram
PDA.
Waktu
retensi
(Rt)
pada
kromatogram
PDA.
Tanda
plus
dan
minus
menunjukkan
hal
berikut:
(hampir
tidak
terdeteksi)
+/
ÿ<+
<+
<+<++
<++
(melimpah).
Nomor
puncak
20 19a
18 17 15 14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1b 1a
malvidin
3-
arabinosida cyanidin
3,5-
diglucoside
cyanidin
3-
sambubioside-5-
glucoside
delphinidin
3-
galactoside
delphinidin
3-
glucoside
delphinidin
3-
rutinoside
cyanidin
3-
galactoside
delphinidin
3-
arabinoside
cyanidin
3-
sambubioside
cyanidin
3-
glucoside
petunidin
3-
galactoside
cyanidin
3-
rutinoside
cyanidin
3-
arabinoside
petunidin
3-
glucoside
petunidin
3-
rutinoside
peonidin
3-
galactoside
petunidin
3-
arabinoside
cyanidin
3-
xyloside
peonidin
3-
rutinoside
peonidin
3-
arabinoside
16a
peonidin
3-
glucoside
16b
malvidin
3-
galactoside
19b
malvidin
3-
glucoside
Nama
senyawa
Rt
(menit)
55.91 51.07 50.47 49.72 46.66 42.93 41.78 41.75 38.21 36.99 36.89 34.33 32.89 32.51 29.79 28.83 28.51 25.35 22.27 19.27
Molekul
(m/
z)
463 493 433 609 419 493 463 449 463 625 479 419 595 479 449 581 435 449 611 465 465 743 611
Fragmen
(m/
z)
331 331 301 301 287 331 301 317 301 317 317 287 287 317 287 449,
287 303 287 303 303 303 449,
287 449,
287
blueberry
++
+ + + + + + +
+ +
+ + +
mata
kelinci
+
+ + + + +
+ + + + + + +
Kismis
hitam
++ ++
+/
ÿ +/
ÿ +
+
Chokeberi
Elderberry
++
++
+ +
++
+
245 Anthocyanin dalam Berbagai Berries 2004:5 (2004)
namun, aktivitas bilberry adalah yang tertinggi dan aktivitas [2] Ames BN, Shigenaga MK, Hagen TM. Oksidan,
elderberry sedikit rendah. Ekstrak kismis hitam dan chokeberry antioksidan, dan penyakit degeneratif penuaan. Proc
menunjukkan tingkat aktivitas pemulungan radikal yang hampir Natl Acad Sci USA. 1993;90(17):7915–7922.
sama dengan ekstrak bilberry; namun demikian, jumlah total
anthocyanidins dalam blackcurrant atau chokeberry hampir [3] Ames BN. Karsinogen makanan dan antikarsinogen.
setengah dari bilberry, menyiratkan bahwa aktivitas antioksidan Radikal oksigen dan penyakit degeneratif. Sains.
tidak harus sejajar dengan jumlah aglikon anthocyanidin. 1983;221(4617):1256–1264.
Seperti yang diketahui secara umum, buah beri mengandung [4] Anda DX. Mekanisme potensial pencegahan kemo
sejumlah besar senyawa fenolik yang berfungsi sebagai kanker oleh anthocyanin. Curr Mol Med. 2003;3(2):149–
antioksidan selain antosianin [8, 10, 25, 26]. Karena tidak 159.
hanya antosianin tetapi juga senyawa fenolik seperti itu [5] Bagchi D, Sen CK, Bagchi M, Atalay M. Sifat anti
kemungkinan besar akan diekstraksi dari setiap berry ke dalam angiogenik, antioksidan, dan anti karsinogenik dari
bubuk yang kami siapkan dalam penelitian ini, aktivitas formula ekstrak beri kaya antosianin baru. Biokimia
pemulungan radikal bubuk berry disumbangkan oleh antosianin (Mosk). 2004;69(1):75–80.
dan fenolik lainnya. [6] Katsube N, Iwashita K, Tsushida T, Yamaki K, Kobori M.
Sudah ada beberapa laporan tentang aktivitas antioksidan Induksi apoptosis pada sel kanker oleh bilberry (Vaccinium
ekstrak berry dengan beberapa metode seperti kapasitas myrtillus) dan anthocyanin. Kimia Makanan J Agric.
penyerapan radikal oksigen (ORAC) [8, 25] atau kapasitas 2003;51(1):68–75.
¨ ¨
pemulungan radikal DPPH [7], menunjukkan bahwa bilberry [7] Kahk¨ Onen MP, Hein am¨ Aki J, Ollilainen V, Heinonen
dan blackcurrant memiliki kemampuan yang hampir sama. M. Berry antosianin: isolasi, identifikasi dan aktivitas
kegiatan anti radikal. Chokeberry juga terbukti memiliki aktivitas Antioksidan. Pertanian Pangan J Sci. 2003;83(9):1403–
antioksidan yang kuat [8]. Selain itu, delphini din 3-glukosida 1411.
(ditemukan berlimpah di bilberry dan blackcurrant), delphinidin [8] Zheng W, Wang SY. Kapasitas penyerap radikal oksigen
3-rutinoside (ditemukan hanya di blackcurrant), dan cyanidin 3- dari fenolik dalam blueberry, cranberry, choke berry,
glukosida (ditemukan berlimpah di bilberry dan elderberry) dan lingonberry. Kimia Makanan J Agric. 2003;51(2):502–
dilaporkan memiliki antiradikal yang relatif kuat. aktivitas di 509.
antara berbagai antho cyani(di)ns [27]. Dari laporan ini dan [9] Hong V, Wrolstad RE. Karakterisasi pewarna dan jus
hasil kami, ekstrak bilberry, blackcurrant, dan chokeberry buah yang mengandung antosianin dengan deteksi
dapat dianggap sebagai kandidat yang bagus untuk bahan susunan HPLC/fotodioda. Kimia Makanan J Agric.
makanan fungsional yang bermanfaat bagi kesehatan dilihat 1990;38:698–708.
dari aktivitas pemulungan radikal.
[10] Vinson JA, Su X, Zubik L, Bose P. Phenol antioks
kuantitas dan kualitas dalam makanan: buah-buahan.
Karena berry yang berbeda mengandung pola thocyanin Kimia Makanan J Agric. 2001;49(11):5315–5321.
yang unik, berry ini adalah sumber yang baik dari gen baru
[11] Morazzoni P, Bombardelli E. Vaccinium myrtillus L.
yang terlibat dalam produksi anthocyanin. Gen dan enzim
Obat alami. 1996;67(1):3–29.
yang bertanggung jawab untuk modifikasi dan penyimpanan
[12] Canter PH, Ernst E. Anthocyanosides dari Vaccinium
sebagian besar tidak diketahui [28]. Studi molekuler pada
myrtillus (bilberry) untuk penglihatan malam—peninjauan
produksi anthocyanin berry akan mengidentifikasi gen baru
sistematis uji coba terkontrol plasebo. Surv Oftal mol.
yang diperlukan untuk pola unik dari setiap anthocyanin berry.
2004;49(1):38–50.
[13] Nakaishi H, Matsumoto H, Tominaga S, Hirayama M. Efek
PENGAKUAN asupan anthocyanoside kismis hitam pada adaptasi
gelap dan perubahan refraksi transien akibat kerja VDT
Pekerjaan ini sebagian didukung oleh Grants-in-Aid for
pada manusia sehat. Altern Med Rev. 2000;5(6):553–
Scientific Research, oleh Cooperation of Innovative Tech
562.
nology and Advanced Research in Evolutional Area (CITY
[14] Mascolo N, Autore G, Capasso G, Menghini A, Fa sulo
AREA) ke Chiba Industry Advancement Center, dari
MP. Skrining biologis tanaman obat Italia untuk aktivitas
Kementerian Pendidikan, Ilmu Pengetahuan, Olahraga dan
anti-inflamasi. Phytother Res. 1987;1(1):28–31.
Kebudayaan, Jepang; oleh Core Research for Evolutional
Science and Tech nology (CREST) dari Japan Science and
[15] Zakay-Rones Z, Varsano N, Zlotnik M, dkk. Inhibisi
Technology Corporation (JST); dan oleh Research for the beberapa strain virus influenza secara in vitro dan
Future Program (Grant 00L01605) dari Japan Society for the
pengurangan gejala oleh ekstrak elderberry (Sambucus
Promotion of Science, Jepang.
nigra L) selama wabah influenza B Panama. J Altern
REFERENSI Pelengkap Med. 1995;1(4):361–369.
[1] Harborne JB, Williams CA. Kemajuan penelitian flavonoid [16] Kong JM, Chia LS, Goh NK, Chia TF, Brouillard R.
sejak 1992. Fitokimia. 2000;55(6): 481–504. Analisis dan aktivitas biologis antosianin.
Fitokimia. 2003;64(5):923–933.
2004:5 (2004) Anthocyanin dalam Berbagai Berries 247
[17] Yamazaki M, Nakajima J, Yamanashi M, dkk.

Metabolomik dan ekspresi gen diferensial dalam bentuk
kemo-varietas antosianin dari Perilla frutescens. Fitokimia.
2003;62(6):987–995.
[18] Blois MS. Penentuan antioksidan dengan menggunakan
radikal bebas yang stabil. Alam. 1958;181:1199–1200.
[19] Matsumoto H, Hanamura S, Kawakami T, Sato Y, Hirayama
M. Isolasi skala preparatif dari empat komponen thocyanin
dari buah kismis hitam (Ribes dan Grum L). Kimia Makanan
J Agric. 2001;49(3):1541–2001.
1545.
[20] Harborne JB, Baxter H, eds. Buku Pegangan Flavonoid
Alami. Vol 2. Chichester: John Wiley & Sons; 1999.
[21] Wu X, Cao G, Sebelumnya RL. Penyerapan dan metabolisme

anthocyanin pada wanita lanjut usia setelah konsumsi
elderberry dan blueberry. J Nutr. 2002;132 (7):1865–1871.
[22] Kaack K, Austed T. Interaksi vitamin C dan flavonoid dalam

elderberry (Sambucus nigra L.) selama pemrosesan jus.
Makanan Tumbuhan Hum Nutr. 1998;52(3):187–198.
[23] Yamazaki M, Gong Z, Fukuchi-Mizutani M, dkk.

Kloning molekuler dan karakterisasi biokimia dari
anthocyanin 5-O-glucosyltransferase baru dengan tampilan
diferensial mRNA untuk bentuk tanaman terkait antosianin.
J Biol Kimia. 1999;274(11):7405–7411.
[24] Yamazaki M, Yamagishi E, Gong Z, dkk. Dua flavonoid
glucosyltransferases dari Petunia hybrida: kloning
molekuler, sifat biokimia dan ekspresi yang diatur secara
developmental. Tanam Mol Biol. 2002;48(4):401–411.
[25] RL sebelumnya, Cao G, Martin A, dkk. Kapasitas

antioksidan dipengaruhi oleh kandungan total fenolik dan
antosianin, kematangan, dan keragaman spesies Vaccinium .
Kimia Makanan
¨ J Agric. 1998;46(7):2686–2693.
[26] Kahk ¨ onen MP, Hopia AI, Vuorela HJ, dkk. Aktivitas
antioksidan ekstrak tanaman yang mengandung senyawa
fenolik. Kimia Makanan J Agric. 1999;47(10):3954– 3962.
¨
[27] Kahk ¨ onen MP, Heinonen M. Aktivitas antioksidan
antosianin dan aglikonnya. Kimia Makanan J Agric.
2003;51(3):628–633.
[28] Springob K, Nakajima J, Yamazaki M, Saito K. Kemajuan
terbaru dalam biosintesis dan akumulasi antosianin. Nat
Prod Rep.2003;20(3):288–303.
ÿ Penulis yang sesuai.

Email: ksaito@p.chiba-u.ac.jp
Faks: +81 43 290 2905; Telp: +81 43 290 2905
Jurnal Biomedis dan Bioteknologi • 2004:5 (2004) 248–252 • PII. S1110724304406123 • http://jbb.hindawi.com
ARTIKEL PENELITIAN
Perubahan Total Antosianin pada Blueberry dan

Efek Antioksidannya Setelah Pengeringan dan Pembekuan
Virachnee Lohachoompol, George Srzednicki,ÿ dan John Craske
Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknik Kimia dan Kimia Industri,
Universitas New South Wales, Sydney, NSW 2052, Australia
Penelitian ini menguji pengaruh pembekuan, penyimpanan, dan pengeringan kabinet terhadap kandungan antosianin dan aktivitas antioksidan
buah beri biru (Vaccinium corymbosum L). Sampel segar disimpan selama dua minggu pada suhu 5ÿC sementara sampel beku disimpan hingga
tiga bulan pada suhu -20ÿC. Ada dua perlakuan pengeringan, satu termasuk perlakuan awal osmotik diikuti dengan pengeringan kabinet dan yang
lainnya hanya melibatkan pengeringan kabinet. Total antosianin yang ditemukan dalam blueberry segar adalah 7,2 ± 0,5 mg/g bahan kering,
dinyatakan sebagai ekuivalen cyanidin 3-rutinosida. Dibandingkan dengan sampel segar, total anthocyanin dalam blueberry kering yang tidak diberi
perlakuan dan pretreatment berkurang secara signifikan menjadi 4,3 ± 0,1 mg/g kandungan padat, kehilangan 41%, dan 3,7 ± 0,2 mg/g kandungan
padat, masing-masing kehilangan 49%. Perlakuan osmotik yang diikuti dengan perlakuan termal memiliki efek yang lebih besar pada hilangnya
antosianin daripada perlakuan termal saja. Sebaliknya, sampel beku tidak menunjukkan penurunan kadar antosianin yang signifikan selama tiga
bulan penyimpanan. Pengukuran aktivitas antioksidan ekstrak antosianin dari blueberry menunjukkan tidak ada perbedaan yang signifikan antara
blueberry segar, kering, dan beku.
PENGANTAR Konsumsi blueberry liar, sumber makanan dengan sifat

antioksidan in vitro yang tinggi, dikaitkan dengan peningkatan
Antosianin, pigmen alami yang bertanggung jawab atas status antioksidan serum ex vivo yang diinduksi diet [6].
warna biru, ungu, violet, dan merah pada buah, merupakan Antosianin dalam jus anggur mengurangi oksidasi in vitro
salah satu kelas flavonoid utama [1]. Sumber utama antosianin lipoprotein densitas rendah manusia (LDL)
pada tumbuhan yang dapat dimakan adalah famili Vitaceae [7]. Bioavailabilitas potensial, pada manusia, dari beberapa
(anggur) dan Rosaceae (ceri, prem, raspberry, stroberi, an thocyanin dari anggur merah telah diuji. Dalam 12 jam
blackberry, apel, persik, dll.). setelah 300 mL konsumsi anggur, 1,5%–5,1% dari antosianin
Famili tumbuhan lain yang mengandung pigmen antosianin yang tertelan ditemukan dalam urin. Dua senyawa di antara
adalah Solanaceae (tamarillo dan terung), Sax ifragaceae anthocyanin anggur tidak berubah sementara yang lain, yang
(kismis merah dan hitam), Cruciferae (kubis merah), dan dianggap oleh penulis, tampaknya telah mengalami modifikasi
Ericaceae (blueberry dan cranberry). molekuler [8].
[2]. Blueberry mengandung anthocyanin berikut: malvidin 3- Beku, ekstrak cair, dan bubuk beku-kering, terbuat dari
galactoside, delphinidin 3-galactoside, del phinidin 3- blueberry liar, digunakan dalam studi tentang sifat bioaktif,
arabinoside, petunidin 3-galactoside, petuni din 3-arabinoside, yang meliputi aktivitas antioksidan, kapasitas pelindung
malvidin 3-arabinoside, cyanidin 3-glucoside, cyanidin 3- jantung, dan aktivitas kemoprevensi kanker.
galactoside, cyanidin 3-arabinoside, delphinidin 3-glucoside, Banyak fraksi ekstrak menunjukkan aktivitas antioksidan,
malvidin 3-glucoside, peonidin 3-glucoside, peonidin 3- terutama yang kaya akan antosianin dan proantosianidin [9].
galactoside, peonidin 3-arabinoside, dan peonidin 3-glucoside Anthocyanin telah ditemukan secara signifikan menekan
[3]. pertumbuhan sel tumor yang dikultur dan telah terbukti
Flavonoid seperti flavon, isoflavon, flavonon, antosianin, memiliki efek penghambatan yang lebih besar daripada
dan katekin memiliki kapasitas antioksidan yang kuat [4]. flavonoid lainnya [10, 11].
Senyawa ini dapat ditemukan pada biji-bijian sereal, umbi- Blueberry dikomersialkan dengan berbagai cara, terutama
umbian, teh, kopi, buah-buahan, dan sayur-sayuran. Berry, sebagai produk segar atau beku. Pembekuan dan pengeringan
seperti blueberry, merupakan sumber signifikan dari thocyanin. adalah dua metode yang mungkin untuk mengawetkan
Ekstrak metanol dari Vaccinium angusti folium L dan kultivar blueberry tetapi tingkat keparahan kedua proses tersebut
Fundy memiliki aktivitas antioksidan yang lebih tinggi dapat menghancurkan antosianin atau efek antioksidannya.
dibandingkan cherry manis, kentang (ungu), bibit gandum, Blueberry dikenal karena sifat bioaktifnya seperti aktivitas
dan akar ginseng [5]. antioksidan, perlindungan kardiovaskular, sifat antidiabetes, penglihatan

2004:5 (2004) Antosianin dalam Blueberry dan Efek Antioksidannya 249
sifat perbaikan, dan penghambatan karsinogenesis dan 1
mutagenesis [12]. Dengan demikian, tujuan dari penelitian ini 0,8

adalah untuk menentukan dan membandingkan total antosianin
dan efek antioksidannya pada blueberry beku atau kering dan 0,6
serap
Daya
538, 0,423
membandingkannya dengan nilai yang ditemukan pada buah beri segar. 0,4
0,2
BAHAN DAN METODE
Sampel 0 260 310 360 410 460 510 560 610
Panjang gelombang (nm)

blueberry segar (Vaccinium corymbosum L) dipasok oleh
Blueberry Farms of Australia P/L, Pantai Corindi, New South Gambar 1. Scan spektrum ekstrak blueberry dalam MeOH:HCl.
Wales, Australia.
Perawatan
Blueberry segar disimpan pada suhu 5ÿC hingga dua Penentuan total antosianin
minggu sebelum ekstraksi (FR2). Beberapa batch blueberry Residu diencerkan hingga volume 25 mL dengan
dibekukan dan disimpan pada suhu -20ÿC hingga 3 bulan. mencampurkan campuran metanol dan HCl 0,1 M dengan
Sampel diambil dan diperiksa pada penyimpanan 1 bulan perbandingan 85:15 (MeOH:HCl). Larutan antosianin diencerkan
(FZ1M) dan 3 bulan (FZ3M). Ada 2 ulangan untuk setiap titik ke konsentrasi yang sesuai untuk pengukuran absorbansi
sampling. dalam spektrofotometer UV Vis pemindaian Cary 100
Dua batch blueberry dengan berat masing-masing 1 kg menggunakan sel kuarsa panjang lintasan 1 cm pada 538 nm.
dikeringkan. Batch pertama, PT, telah diberi perlakuan dengan Total anthocyanin dinyatakan sebagai cyani din 3-rutinoside
gula 60% b/b dan larutan NaCl 1% b/b selama 4 jam dan ekuivalen [14]. Absorptivitas molar cyanidin 3-rutinoside sama
dikeringkan perlahan dalam lemari pengering pada suhu 90ÿC dengan 31085 pada 530 nm dalam MeOH:HCl. Absorptivitas
selama 90 menit, diikuti oleh 70ÿC selama 120 menit . , dan molar ini telah ditentukan secara eksperimental.
terakhir 50ÿC selama 120 menit. Batch kedua, UN, dikeringkan
langsung tanpa pretreatment menggunakan profil suhu yang sama.
Efek antioksidan
Bahan kering ditentukan dengan mengeringkan 5–10 g
sampel blue berry dalam oven vakum pada suhu 70ÿC, 85 kPa Aktivitas antioksidan ekstrak antosianin diukur menggunakan
selama 72 jam. Blueberry kering ditimbang kembali dan metode radikal bebas dari Brand Williams et al [15]. Radikal
ditentukan bahan kering yang tersisa. Total antosianin dan
bebas yang digunakan dalam penelitian ini adalah 2,2-difenil-1-
efek antioksidan dari sampel kering (UN dan PT) dibandingkan pikrilhidrazil (DPPH). Spektrofotometer UV-Vis UV 1601
dengan sampel beku dan segar. digunakan untuk menentukan konsentrasi DPPH. 3,9 mL 6 ×
10ÿ5 mol/L DPPH dalam metanol (kelas spektrofotometri)
dimasukkan ke dalam kuvet sekali pakai dengan 0,1 mL ekstrak
Ekstraksi antosianin
antosianin. Penurunan absorbansi diukur pada 0 menit, 1
Sampel dengan berat 20 g blueberry segar, beku, dan menit, dan setiap 5 menit pada 515 nm selama 2 jam atau
dikurangi secara proporsional (berdasarkan kehilangan sampai absorbansi stabil. Konsentrasi DPPH yang tersisa
kelembaban selama pengeringan) dicampur dalam food (CDPPH) dihitung menggunakan persamaan berikut [15]:
processor selama 1 menit dengan 150 mL campuran metanol,
asam asetat, dan air suling. (M:A:W) dengan rasio 25:1:24.
Blueberry beku dicairkan dalam lemari es (sekitar 5ÿC)
semalaman sebelum ekstraksi. Setengah dari larutan yang CDPPH = Abs515 + 2,58 × 10ÿ3 × 12509ÿ1. (1)
tercampur dengan baik disentrifugasi pada 21 900 g (12 000
rpm) selama 20 menit pada suhu 20ÿC. Residu yang tersisa Analisis statistik
dari sentrifugasi setelah supernatan dipindahkan kembali
Data dianalisis dengan metode analysis of variance
dicampur secara menyeluruh dengan 75 mL M:A:W, disen
(ANOVA) dan Duncan, uji rentang berganda pada taraf
trifugasi, dan supernatan dipisahkan. Setiap sampel dilakukan
signifikansi 5% menggunakan SPSS.
ekstraksi sebanyak 3 kali. Cairan bening dari 3 ekstraksi
diuapkan di bawah vakum pada suhu 35ÿC. Residu dari
penguapan vakum dilarutkan kembali dengan 5 mL asam HASIL DAN DISKUSI
format 3% (b/v) dalam air. Larutan berair ini diadsorpsi pada
Total antosianin
kartrid Sep-Pak C18. Kartrid dicuci dengan 5 mL asam format
3% (b/v) dalam air dan dielusi dengan 3,5 mL asam format 3% Spektrum ekstrak blueberry disajikan pada Gambar 1.
(b/v) dalam metanol. Pada ekstrak antosianin, puncak pada daerah tampak tercatat
Antosianin yang dielusi dari kartrid diuapkan di bawah vakum pada 538 nm sedangkan puncak pada rentang UV berada
pada suhu 35ÿC sampai kering [13]. pada 280 dan 320 nm. Kehadiran ini
250 Virachnee Lohachoompol dkk 2004:5 (2004)
Tabel 1. Kandungan antosianin pada sampel yang dievaluasi. 100

90
Jumlah antosianin mg/g 80

Sampel blueberry 70
bahan kering
60
blueberry segar (FR0) 7,2 ± 0,5aÿÿ Radikal
tersisa
DPPH
yang
(%)
50
Blueberry segar 2 minggu 40
5,7±0,5ab 30
penyimpanan pada 5ÿC (FR2)
20
Kering tanpa perlakuan (UN) 4,3 ± 0,1bc
10
Pretreatment kering (PT) 3,7 ± 0,2c 0
0 20 40 60 80 100 120
Disimpan beku selama 1 bulan (FZ1M) 8.1 ± 0.1a
jam (menit)
Disimpan beku selama 3 bulan (FZ3M) 7.9 ± 1.3a
FR0 PT
ÿTotal antosianin setara dengan cyanidin 3-rutinosida. FR2 FZ1M
ÿÿRata-rata ± standar deviasi sampel rangkap. Rata-rata yang DAN FZ3M
memiliki superskrip yang sama tidak berbeda nyata (P < 0,05). Gambar 2. Perilaku kinetik pengurangan radikal DPPH dari thocyanin yang
ditemukan dalam ekstrak blueberry setelah perlakuan berikut: FR0 : blueberry
segar; FR2: blueberry segar disimpan pada suhu 5ÿC selama dua minggu; UN :
blueberry yang tidak diolah dikeringkan dalam lemari pengering; PT : blueberry
puncak mencerminkan fakta bahwa blueberry mengandung
yang diolah secara osmotik dikeringkan dalam lemari pengering; FZ1M : blueberry
campuran anthocyanin dan senyawa fenolik lainnya.
beku disimpan pada suhu ÿ20ÿC selama 1 bulan; FZ3M : blueberry beku disimpan
Satu sampel blueberry segar, (FR0), diekstraksi segera pada suhu ÿ20ÿC selama 3 bulan.
setelah diterima dari penanam sementara sampel lain, (FR2),
disimpan pada suhu 5ÿC selama 2 minggu sebelum ekstraksi.
Total anthocyanin di FR2 sedikit lebih rendah dibandingkan di
FR0; yaitu, masing-masing 5,7 dan 7,2 mg/g bahan kering Kandungan antosianin sampel beku ditemukan stabil
(Tabel 1). Blueberry yang telah disimpan selama dua minggu selama 3 bulan penyimpanan (Tabel 1). Buah yang disimpan
pada suhu 5ÿC lebih lembut. Dalam sebuah studi oleh Sapers beku selama 1 bulan (FZ1M) dan 3 bulan (FZ3M) tidak
dan Phillips [16], kebocoran antosianin sebanding dengan menunjukkan perbedaan yang signifikan dari FR0.
persentase buah lunak di seluruh sampel. Dibandingkan dengan
buah-buahan lain seperti plum, konsentrasi antosianin yang
Efek antioksidan
ditemukan pada blueberry yang didinginkan selama 2 minggu
lebih tinggi (5,7 ± 0,5 mg/g bahan kering) daripada yang Hasil perilaku kinetika ekstrak blueberry ditunjukkan pada
ditemukan pada plum segar, yang berkisar antara 2,6–5,2 mg. / Gambar 2. Setelah penambahan ekstrak blueberry ke dalam
g bahan kering [14]. larutan DPPH, absorbansinya meningkat karena warna ekstrak.
Kandungan antosianin total pada sampel kering UN dan PT Kemiringan persamaan dapat menjadi parameter yang berguna
lebih sedikit dibandingkan pada buah beri segar (Tabel 1). untuk menentukan kapasitas antioksidan. Semakin curam
Persentase kehilangan antosianin di UN sebesar 41% kemiringannya, semakin rendah jumlah antioksidan yang
sedangkan di PT. Pengurangan sedikit lebih tinggi dalam diperlukan untuk menurunkan 50% konsentrasi DPPH awal [18].
kandungan antosianin diamati pada PT daripada di UN. Namun, Kemiringan paling curam adalah FZ3M (Tabel 2). Ini berarti
perbedaan itu tidak signifikan secara statistik. Perbedaan ini jumlah ekstrak yang lebih rendah diperlukan untuk menurunkan
disebabkan oleh langkah pretreatment selama 4 jam yang konsentrasi awal DPPH. FZ1M menunjukkan aktivitas
menghilangkan beberapa antosianin. Kebocoran antosianin antioksidan terendah (walaupun bukan kandungan antosianin
dapat terjadi karena dewaxing yang disebabkan oleh pengadukan terendah), sedangkan tidak ada perbedaan yang signifikan
dan perendaman selama pretreatment osmotik. dalam efek antioksidan antara FZ3M dan FR0.
Pengamatan ini sebanding dengan studi oleh Sapers dan
Phillips [16] yang menemukan bahwa dewaxing melemahkan Aktivitas antioksidan juga dapat dinilai dengan kapasitas
kutikula berry dan membiarkan kulit pecah. Hal ini menyebabkan penyerapan radikal oksigen (ORAC). Metode ORAC
beberapa kebocoran dari tepi terbuka atau permukaan bawah mengestimasi kapasitas antioksidan sampel dengan mengambil
kulit yang robek ke larutan osmotik yang menyebabkan reaksi oksidasi sampai selesai sedangkan DPPH memperkirakan
hilangnya tosianin sebelum tahap pengeringan. Juga, radikal bebas yang stabil dan dengan demikian lebih tepat untuk
pemrosesan termal menghancurkan beberapa antosianin. mengkarakterisasi aktivitas antioksidan dalam sampel makanan.
Sebuah studi tentang evolusi antosianin dalam raspberry selama Dalam sebuah studi tentang blueberry lowbush beku komersial,
pembuatan selai, di mana panas digunakan, menunjukkan yang mengandung tingkat "biru" yang lebih rendah (60% -80%)
bahwa 17%–40% antosianin hilang [17]. daripada sampel lainnya, ditemukan bahwa aktivitas antioksidan
Sedangkan untuk kenampakan, sampel PT menampilkan (ORAC) sebanding dengan buah-buahan segar . 19]. Hasil ini
aspek yang lebih mengkilat dibandingkan sampel UN. mendukung penelitian sebelumnya tentang variasi ORAC
Selanjutnya, kadar air setelah pengeringan PT (33,6% basis berdasarkan varietas, kematangan, dan sumber, yang dilakukan
basah) lebih rendah dibandingkan UN (36,9% basis basah). oleh Prior et al [20].
2004:5 (2004) Antosianin dalam Blueberry dan Efek Antioksidannya 251
Tabel 2. Nilai rata-rata kemiringan ekstrak blueberry. REFERENSI
Lerengÿ [1] Pigmen J. Kotor dalam Buah. London: Pers Akademik;

Ekstrak blueberry
1987.
(% DPPH/mnt)
[2] Jackman RL, Smith JL. Antosianin dan betalain.
FR0 -0,0110ab
Di dalam: Hendry GAF, Houghton JD, eds. Pewarna Makanan
FR2 ÿ0,01035ab Alami. edisi ke-2. London: Blackie Academic & Pro fessional;
DAN ÿ0,0103ab 1996:244–280.
PT ÿ0,0116ab [3] Mazza G, Miniati E. Antosianin dalam Buah, Vegeta bles, dan
FZ1M ÿ0,0076a Biji-bijian. edisi pertama. Florida, Fla:CRC Tekan; 1993.
FZ3M ÿ0,0145b [4] Wang H, Cao G, Sebelumnya RL. Kapasitas penyerapan

radikal oksigen antosianin. Kimia Makanan J Agric.
ÿLereng yang memiliki superskrip yang sama tidak berbeda nyata (P<.05). 1997;45(2):304–309.
[5] Velioglu YS, Mazza G, Gao L, Oomah BD. Aktivitas idant
antioksidan dan fenolat total pada buah-buahan, sayuran, dan
produk biji-bijian pilihan. Kimia Makanan J Agric. 1998;46:4113–
4117.
Sedangkan untuk produk kering, UN dan PT, sampel tidak
[6] Frankel EN, Bonasek CA, Meyer AS, Silliman K, Kirk LL. Jus
menunjukkan perbedaan aktivitas antioksidan yang signifikan dari anggur komersial menghambat oksidasi in vitro dari lipoprotein
buah beri segar meskipun kandungan antosianin yang ditunjukkan densitas rendah manusia. Kimia Makanan J Agric. 1998;46:834–
pada Tabel 1 lebih rendah daripada sampel segar. Menurut penelitian
838.
serupa [20, 21], koefisien korelasi antara ORAC dan fenolik total [7] Kay CD, Holub BJ. Pengaruh konsumsi blueberry liar (Vac
lebih tinggi daripada koefisien korelasi antara ORAC dan total
cinium angustifolium) pada status antioksidan serum
antosianin. Dalam sebuah studi tentang total fenolat dalam blue berry postprandial pada subyek manusia. Br J Nutr. 2002;88(4):389–
[22], asam klorogenat, fenolik utama blueberry yang tidak berwarna, 398.
ditemukan pada tingkat 60-100 mg/100 g buah beri segar dan secara [8] Lapidot T, Harel S. Ketersediaan hayati anggur merah dan
signifikan berkontribusi pada ORAC [23]. Produk pemecahan thocyanin seperti yang terdeteksi dalam urin manusia. Kimia
antosianin dari proses pengeringan dapat bertindak sebagai Makanan J Agric. 1998;46(10):4297–4302.
antioksidan tanpa terpengaruh oleh proses termal. [9] Smith MAL, Marley KA, Seigler D, Singletary KW, Meline B.
Sifat bioaktif buah blueberry liar. Jurnal Ilmu Pangan.
2000;65(2):352– 356.
KESIMPULAN [10] Mazza G. Aspek kesehatan dari warna alami. Di dalam: Lauro
GJ, Francis FJ, eds. Pewarna Makanan Alami. New York, NY:
Marcel Dekker; 2000:289–314.
Jumlah antosianin total dalam sampel beku, dinyatakan sebagai
ekuivalen cyanidin 3-rutinosida, tidak berbeda nyata dengan sampel [11] Kamei H, Kojima T, Hasegawa M, dkk. Penekanan pertumbuhan
segar. sel tumor oleh anthocyanin in vitro. Bisa cer Invest.

1995;13(6):590–594.
Sebaliknya, konsentrasi anthocyanin dalam blueberry kering (UN
[12] Camire, SAYA. Bilberry dan blueberry sebagai makanan
dan PT) berkurang secara signifikan dibandingkan dengan blueberry
fungsional dan nutraceuticals. Di dalam: Mazza G, Oomah BD,
segar sementara aktivitas antioksidan ekstrak tidak berbeda dengan
eds. Makanan Fungsional: Jamu, Botani, dan Teh.
buah segar. Pengeringan buah mengakibatkan penurunan kadar
antosianin total sebesar 41%. Ketika pengeringan didahului dengan Lancaster: Penerbitan Teknologi; 2000:289–319.
´ ´
dehidrasi osmotik, 49% antosianin hilang. [13] Garcia-Viguera C, Zafrilla P, Thomas-Barber dan FA.
Penentuan keaslian selai buah dengan analisis antosianin
Tidak ada perbedaan aktivitas antioksidan yang signifikan antara HPLC. Jurnal Ilmu Pangan dan Pertanian. 1997;73(2):207–213.
ekstrak antosianin sampel beku atau kering dengan buah segar.

Aktivitas antioksidan dalam buah beri biru merupakan karakteristik [14] Cinquanta L, Di Matteo M, Esti M. Perawatan fisik prem prem
yang menarik bagi konsumen. Metode pemrosesan apa pun yang (Prunus domestica). Bagian 2. Efek pada karakteristik kualitas
mempertahankan tingkat senyawa yang diketahui bermanfaat bagi kultivar pangkas yang berbeda. Kimia Pangan. 2002;79(2):233–
kesehatannya akan menarik bagi industri makanan. 238.
[15] Merek-Williams W, Cuvelier ME, Berset C. Penggunaan metode
radikal bebas untuk mengevaluasi aktivitas antioksidan. ilmu
dan teknologi pangan. 1995; 28:25-30.
PENGAKUAN
[16] Sapers GM, Phillips JG. Kebocoran anthocyanin dari kulit
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Blueberry Farms of blueberry highbush mentah dan matang (Vaccinium
Australia, Corindi Beach, New South Wales, Australia, yang telah corymbosum L.). Jurnal Ilmu Pangan. 1985;50(2):437–439,
menyediakan blueberry yang digunakan dalam penelitian ini. 443.
252 Virachnee Lohachoompol dkk 2004:5 (2004)
´
[17] Garcia-Viguera C, Zafrilla P, Seni F, Rosemary F, Abellan
´
P, Toms-Barber FA.
raspberry
Stabilitas
merah.
dan
warna
Pertanian.
Jurnal
dan antosianin
Ilmu
1998;78:565–
Pangan
selai
573.
´
[18] Sanchez-Moreno C, Larrauri JA, Saura-Calixto F. Prosedur
untuk mengukur efisiensi antiradikal polifenol. Jurnal Ilmu
Pangan dan Budaya Pertanian. 1998;76:270–276.
[19] Kalt W, McDonald JE, Donner H. Antosianin, fenolik, dan

kapasitas antioksidan dari produk olahan blueberry
lowbush. Jurnal Ilmu Pangan. 2000;65(3):390–393.
[20] RL sebelumnya, Cao G, Martin A, dkk. Kapasitas

antioksidan dipengaruhi oleh kandungan total fenolik dan
antosianin, kematangan, dan keragaman spesies
Vaccinium. Kimia Makanan J Agric. 1998;46(7):2686–2693.
[21] Moyer RA, Hummer KE, Finn CE, Frei B, Wrolstad RE.
Antosianin, fenolik, dan kapasitas antioksidan pada buah-
buahan kecil yang beragam: vaksinium, rubus, dan ribes.
Kimia Makanan J Agric. 2002;50(3):519–525.
[22] Gao L, Mazza G. Kuantisasi dan distribusi anthocyanin
sederhana dan terasilasi dan fenolik lainnya dalam
blueberry. Jurnal Ilmu Pangan. 1994;59(5):1057–1059.
[23] Sebelumnya RL, Lazarus SA, Cao G, Muccitelli H, Ham

merstone JF. Identifikasi prosianidin dan thosianin
dalam blueberry dan cranberry (Vac cinium spp.)
menggunakan kromatografi cair/spektrometri massa
kinerja tinggi. Kimia Makanan J Agric. 2001;49(3):1270–
1276.

Email: g.srzednicki@unsw.edu.au
Faks: +61 2 9385 5931; Telp: +61 2 9385 4355
ARTIKEL PENELITIAN
Sour Cherry (Prunus cerasus L) Antosianin

sebagai Bahan Pangan Fungsional
Federica Blando,1ÿ Carmela Gerardi,1 dan Isabella Nicoletti2
1Institut Ilmu Produksi Pangan, CNR, 73100 Lecce, Italia

2Institut Metodologi Kimia, CNR, Area Penelitian Roma 1, 00015 Montelibretti, Roma, Italia
Dalam beberapa tahun terakhir banyak penelitian tentang antosianin telah mengungkapkan aktivitas antioksidannya yang kuat dan
kemungkinan penggunaannya sebagai apeutik kemoterapi. Penemuan bahwa ceri asam (Prunus cerasus L) (juga disebut ceri tart)
mengandung anthocyanin tingkat tinggi yang memiliki sifat antioksidan dan anti-inflamasi yang kuat telah menarik banyak perhatian
pada spesies ini. Berikut ini kami laporkan hasil awal induksi biosintesis antosianin pada kultur sel kalus kersen. Evaluasi dan
karakterisasi pigmen yang dihasilkan secara in vitro dibandingkan dengan antosianin yang ditemukan secara in vivo pada buah beberapa
kultivar ceri asam. Menariknya, profil antosianin yang ditemukan pada ekstrak buah utuh serupa pada semua genotipe yang diuji tetapi
berbeda terhadap ekstrak kalus. Evaluasi aktivitas antioksidan, yang dilakukan dengan uji ORAC dan TEAC, mengungkapkan kapasitas
antioksidan yang relatif tinggi untuk ekstrak buah (dari 1145 hingga 2592 µmol TE/100 g FW) dan lebih rendah untuk ekstrak kalus (688 µmol TE/100 g). FW
PENGANTAR tion anthocyanin yang diekstraksi dari buah ceri dibatasi untuk
produksi musiman mereka; Selain itu, buah tersebut memiliki
Anthocyanin, salah satu kelompok utama pigmen milik nilai yang terlalu tinggi sebagai buah segar untuk digunakan
kelompok metabolit sekunder flavonoid, sering bertanggung dalam ekstraksi thocyanin. Sel tanaman / kultur jaringan
jawab untuk warna oranye, merah, dan biru pada buah-buahan, menawarkan kesempatan untuk produksi lite metabo tanaman
sayuran, bunga, dan jaringan penyimpanan lainnya pada secara terus menerus. Selain itu, kultur sel tanaman merupakan
tanaman. Dengan demikian, mereka menjadi penting sebagai sumber produksi yang menarik, karena dapat disesuaikan dengan
bahan tambahan makanan. Namun, minat antosianin baru-baru kebutuhan spesifik [7] dan juga memberikan potensi yang lebih
ini meningkat karena kemungkinan manfaat kesehatannya. besar untuk manipulasi kualitas antosianin [8, 9].
Salah satu sifat flavonoid yang paling dikenal secara umum Berikut kami laporkan hasil awal induksi biosintesis
adalah aktivitas antioksidannya yang kuat dalam reaksi antosianin pada kultur sel kalus kersen (P cerasus L). Evaluasi
metabolisme karena kemampuannya mengais radikal oksigen dan karakterisasi pigmen antosianin yang diproduksi secara in
dan spesies reaktif lainnya. Fitur ini membuat flavonoid sebagai vitro serta yang diekstraksi dari buah utuh dari beberapa kultivar
alat yang potensial untuk digunakan dalam studi tentang stres telah dilaporkan. Profil pigmen antosianin dalam buah-buahan
oksidatif, proses penuaan, dan kanker [1], terutama karena telah dan dalam kultur kalus yang menghasilkan antosianin
dilaporkan bahwa anthocyanin menghambat pertumbuhan sel dikarakterisasi dengan kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik
kanker [2] dan bertindak sebagai kemoterapi untuk berbagai penyakit .(RP-HPLC).
[3]. Teknik ini ditambah dengan detektor array fotodioda
Penemuan bahwa ceri asam (Prunus cerasus L) mengandung telah menjadi metode pilihan untuk memantau profil antosianin
kadar antosianin yang signifikan [4] telah menarik banyak [4, 10, 11].
perhatian terhadap spesies ini. Anthocyanin dari ceri asam telah
terbukti memiliki aktivitas antioksidan dan anti inflamasi yang Uji kapasitas penyerapan radikal oksigen (ORAC) dan uji
kuat [5] dan menghambat perkembangan tumor pada tikus kapasitas antioksidan setara Trolox (TEAC) pada ekstrak buah
ApcMin dan pertumbuhan garis sel kanker usus besar manusia dan kalus juga telah dilakukan untuk mengevaluasi aktivitas
[6]. Selain itu, cyanidin, aglikon antosianin, telah menunjukkan antioksidan ekstrak.
aktivitas antiinflamasi yang lebih efisien daripada aspirin [5].
Meskipun jaringan buah kersen baru-baru ini digunakan dalam
BAHAN DAN METODE
produk daging untuk meningkatkan kualitas gizi (mengurangi
ketengikan dan penghambatan pembentukan amina aromatik Bahan kimia
heterosiklik), penggunaan antosianin murni yang diekstrak dari
sel kersen yang dibudidayakan secara in vitro merupakan Semua reagen (dari Carlo Erba, Milan, Italia, jika tidak
alternatif untuk dipertimbangkan. Produk dinyatakan lain) adalah kelas reagen analitis atau

254 Federica Blando dkk 2004:5 (2004)
kelas HPLC, sesuai kebutuhan. Standar antosianin dipasok dan detektor susunan fotodioda UV-Vis, Model SPD 10AVP,
oleh Extrasynthese (Lyon, Prancis). bersama dengan stasiun kerja LC Model Kelas VP 5.3
(semuanya dari Shimadzu, Milan, Italia). Pemisahan senyawa
Bahan tanaman
antosianin secara analitik dilakukan pada kolom Polaris C18A
Buah ceri asam (P cerasus L) cv Amarena Mattarello (150 × 2,0 mm, id 5 µm, Varian, Palo Alto, California) yang
(AM), Visciola Ninno (VN), dan Visciola San nicandro (VS) dilengkapi dengan kolom pelindung C18. Sampel dimasukkan
(genotipe dari plasma nutfah lokal) diambil pada bulan Juni ke dalam kolom melalui katup injeksi bukan logam Rheodyne
2003 di lahan percobaan lokal (Bari, Italia). Ceri disiram Model 9125 dengan sampel puncak volume 5 µL. Suhu oven
dengan nitrogen dalam kantong freezer sebelum disimpan kolom diatur pada 30 ± 0,1ÿC. Pelarut A adalah air : asam
pada suhu ÿ20ÿC. format (9 : 1 v/v); pelarut B adalah asetonitril : air : asam
format (5 : 4 : 1 v/v). Persentase pelarut B meningkat secara
Induksi kalus dan produksi antosianin Kultur
linier dari 8% menjadi 18% dalam 12 menit, diikuti oleh elusi
pucuk in vitro P cerasus L, cv AM, sebelumnya telah dalam kondisi isokratik selama 5 menit berikutnya, dan
dilakukan [12]. segmen gradien linier kedua dari 18% menjadi 35% B dalam
Kultur kalus diinduksi dari ruas daun pada media induksi 13 menit. Kolom direkondisi dengan eluen awal selama
kalus (CIM), yang mengandung garam mineral dan vitamin sekitar 20 menit. Laju aliran pelarut adalah 0,2 mL/menit.
Murashige dan Skoog (MS), 30 g Lÿ1 sukrosa, 1 mg Lÿ1 Rentang akuisisi ditetapkan antara 240 dan 600 nm dengan
asam ÿ-naftalenaasetat (NAA), dan 0,1 mg Lÿ1 N6- periode pengambilan sampel 0,32 detik dan konstanta waktu
benziladenin (BA). Eksplan daun diambil dari tanaman yang 0,64 detik. Kromatogram dipantau pada 518 nm. Kemurnian
ditanam secara in vitro pada media perbanyakan tanaman puncak juga dipantau menggunakan sistem uji kemurnian
(PMM) [12]. Eksplan diinkubasi dalam ruang pertumbuhan larik dioda yang disertakan dalam perangkat lunak.
pada suhu 25 ± 2ÿC dalam gelap. Kultur kalus dipertahankan
pada CIM yang sama di tempat gelap dan dipindahkan ke
CIM baru setiap tiga minggu.
Pada akhir siklus pertumbuhan, kultur kalus dipindahkan Identifikasi antosianin
ke beberapa jenis media, yang kemudian disebut sebagai Identifikasi antosianin pada ekstrak kersen dibuat dari
media induksi antosianin (AIM) [13], kemudian dikuba di pencocokan spektrum UV-Vis dan waktu retensi dengan
bawah cahaya (Philips TLD/83, 125 µmol mÿ2sÿ 1), dengan standar otentik. Jumlah anthocyanin yang berbeda dinilai dari
fotoperiode 16 jam. Kalus penghasil antosianin dipanen daerah puncak dan dihitung sebagai ekuivalen cyanidin 3-
setelah dua minggu inkubasi di bawah cahaya, dibilas dengan glukosida. Kurva standar senyawa ini menunjukkan linieritas
nitrogen, dan disimpan pada suhu -20ÿC untuk analisis lebih yang sangat baik pada rentang konsentrasi 4–50 mg/mL
lanjut. dengan koefisien korelasi lebih baik dari 0,9999 dan hampir
melewati titik asal. Standar deviasi relatif kurang dari 2%.
Ekstraksi antosianin Sampel ceri asam dianalisis dalam rangkap tiga, dan luas
Ceri yang diadu dan beku (10 g) dari masing-masing cv puncak rata-rata dari semua antosianin digunakan untuk
ditumbuk dua kali selama 30 detik dalam blender Waring menentukan jumlah yang ada dalam kultivar yang berbeda
(Waring, Conn, USA) dengan adanya N2 cair, sehingga dan dalam kultur sel kalus.
menghasilkan sampel bubuk yang seragam. Kalus beku
dihaluskan dengan alu dan mortar dan kemudian diperlakukan
sebagai buah yang dihomogenkan. Sampel serbuk (1 g) uji ORAC
disentrifugasi (sentrifus Allegra 21 R, Beckman Coulter, Tes ORAC untuk jus buah dan kalus dilakukan mengikuti
Fullerton, Calif) pada 10.000 g selama 10 menit pada suhu prosedur modifikasi dari metode yang sebelumnya dijelaskan
4ÿC. Jus pernatan disimpan pada suhu ÿ20ÿC sebagai larutan oleh Ou et al [14]. Hal ini mengukur kemampuan komponen
stok untuk analisis aktivitas antioksidan. Sampel lain dari antioksidan dalam bahan uji untuk menghambat penurunan
serbuk yang sama (3 g) diekstraksi dengan volume ganda disodium flu orescein (FL) (Sigma-Aldrich, St Louis, Mo)
metanol yang diasamkan (0,01% HCl) (v/v), pada suhu 4ÿC, fluoresensi yang diinduksi oleh radikal peroxyl gen 2 -Azobis
dengan pengadukan semalaman. Setelah ekstraksi, cairan (2-amidinopropane ) dihidroklorida, 2 (AAPH) (Wako
berwarna dipisahkan dari matriks padat dan dipekatkan pada , Chemicals,
terkandung dalam campuran
Richmond,uji akhir
Va). Campuran
( total volume
reaksi
0,7yang
mL)
suhu 35ÿC dalam vakum dan kemudian dilarutkan dalam fase FL (6,3×10ÿ8 M) dan AAPH (1,28×10ÿ2 M). Semua reagen
gerak yang digunakan untuk analisis HPLC. disiapkan dengan buffer fosfat 75 mM, pH 7,4. Volume akhir
digunakan dalam kuvet ter fluorome selebar 10 mm. FL,
analisis HPLC/ DAD
dapar fosfat, dan sampel diinkubasi terlebih dahulu pada
Profil antosianin ditentukan dengan menggunakan suhu 37ÿC selama 15 menit. Reaksi dimulai dengan
Sistem HPLC yang terdiri dari pengontrol sistem Model penambahan AAPH. Fluoresensi diukur dan dicatat setiap 1
SCL-10AVP, dilengkapi dengan Model unit pengiriman pelarut menit pada panjang emisi 515 nm
LC-10ADVP; degasser membran vakum online,
Model DGU-14A; bagian atas kolom, Model CTO-10ASVP;
2004:5 (2004) Sour Cherry Anthocyanin sebagai Bahan Pangan Fungsional 255
1.2 antara konsentrasi Trolox dan persentase penghambatan

absorbansi pada 734 nm setelah 6 menit dan dinyatakan
1
sebagai TE sebagai mikromole (µmol) per 100 g FW.
0,8
0,6 HASIL DAN DISKUSI

fluoresensi
Intensitas
relatif
0,4
Ceri asam (P cerasus L) adalah buah beriklim sedang
dengan kepentingan marjinal, meskipun sejak 1980-an
0,2
tanaman ini menjadi lebih dihargai daripada tanaman ceri
0
manis karena alasan seperti kebutuhan agrobiologis kecil,
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 kemudahan pemanenan mekanis yang lebih besar, dan
Min banyak kegunaannya. dalam industri makanan. Ceri asam
mungkin mendapatkan minat baru, terutama karena fakta
Troloks 12 µM Troloks 1 µM bahwa itu dapat dianggap sebagai "makanan fungsional"
Troloks 5 µM Kosong
karena kandungan senyawa antioksidannya yang tinggi. Studi
terbaru telah mengungkapkan bahwa anthocyanin dari ceri
Gambar 1. Efek konsentrasi Trolox pada kurva peluruhan fluoresensi asam menunjukkan secara in vitro aktivitas antioksidan yang
FL. Data dikumpulkan dari dua proses.
sebanding dengan produk komersial, seperti butylated
hydroxyanisole (BHA) dan butylated hydroxytoluene (BHT),
dan lebih unggul dari vitamin E pada konsentrasi 2 mM [5].
dan panjang eksitasi 493 nm menggunakan Shimadzu RF Dalam anti-inflamasi misalnya, cyanidin (aglikon dari antho
5301PC (Columbia, Md) hingga fluoresensi pembacaan cyanins ceri asam utama) menunjukkan aktivitas anti-inflamasi
terakhir menurun ke nilai kurang dari atau sama dengan 5% yang lebih baik daripada aspirin [5]. Dengan demikian, produksi
“aspirin alami” bisa menjadi alternatif farmasi untuk orang
dari pembacaan pertama. Ini biasanya memakan waktu sekitar 30 menit.
Buffer fosfat digunakan sebagai blanko dan 1, 5, 12,5 µM dengan ulkus saluran pencernaan atau alergi terhadap aspirin
Trolox (Sigma-Aldrich, Steinheim, Jerman) digunakan sebagai dan senyawa anti-inflamasi non-teroid.
standar kontrol. Sampel dan larutan kalibrasi Trolox dianalisis Ketertarikan pada antosianin ceri asam telah mendorong
dalam rangkap dua. Nilai ORAC akhir dihitung dengan kami ke dalam proyek penelitian baru yang berkaitan dengan
menggunakan persamaan regresi antara konsentrasi Trolox produksi antosianin in vitro dari spesies dan karakterisasi
dan area bersih di bawah kurva peluruhan FL (Gambar 1) dan metabolit sekunder, dibandingkan dengan produk in vivo dari
dinyatakan sebagai ekuivalen Trolox (TE) sebagai mikromol buah kultivar yang berbeda.
(µmol) per 100 g berat segar (FW). Eksplan daun yang dikultur di tempat gelap menghasilkan
kultur kalus yang tumbuh aktif dalam waktu singkat. Produksi
anthocyanin diamati pada tingkat yang berbeda di sebagian
Uji dekolorisasi kation radikal ABTS besar AIM yang diuji. Bahkan dalam CIM (media kontrol)
Pengujian TEAC untuk jus buah dan kalus dilakukan produksi antosianin terlihat jelas, menegaskan bahwa faktor
mengikuti prosedur yang dijelaskan sebelumnya oleh Re et al penting untuk induksi antosianin adalah cahaya.
[15]. 2, 2 -azino-bis (3-ethylbenzothiazoline 6-sulfonic acid; Takeda [16] melaporkan bahwa, dalam kultur sel wortel,
(ABTS) (Sigma-Aldrich, St Louis, Mo) dilarutkan dalam air penyinaran cahaya menginduksi ekspresi enzim jalur
hingga konsentrasi 7 mM. Kation radikal ABTS (ABTS•+) metabolisme fenilpropanoid, seperti fenilala sembilan amonia-
dihasilkan oleh mereaksikan larutan stok ABTS dengan 2,45 lisase dan sintase chalkon, pada tingkat transkripsi.
mM kalium persulfat (konsentrasi akhir) dan membiarkan
campuran tersebut didiamkan dalam gelap pada suhu kamar Selama beberapa subkultur (hampir sepuluh), pemilihan
selama 12–16 jam sebelum digunakan.Untuk penelitian jus kultur kalus bertahap memungkinkan isolasi garis sel dengan
buah dan kalus, larutan ABTS•+ diencerkan dengan PBS, pH produksi antosianin yang tinggi dan homogen (Gambar 2).
7,4, hingga absorbansi 0,70 (±0,02) pada 734 nm Jus buah
dan kalus diencerkan sehingga, setelah memasukkan 10 µL Kultur kalus berpigmen serta ekstrak buah dari kultivar
aliquot dari setiap ekstrak ke dalam pengujian, dihasilkan lokal yang berbeda digunakan untuk evaluasi dan kuantifikasi
antara 20%–80 % penghambatan absorbansi blangko Setelah antosianin.
penambahan 1,0 mL larutan ABTS•+ encer ke dalam 10 µL Gambar 3 menunjukkan profil antosianin yang terdapat
ekstrak atau standar Trolox (konsentrasi akhir 0–15 µM) dalam pada ekstrak AM kersen dan ekstrak kalus. Spektrum
PBS, pembacaan absorbansi dilakukan hingga 6 menit. makan antosianin yang terpisah dalam sampel ceri asam sangat mirip
kosong PBS dijalankan di setiap pengujian Semua penentuan dengan cyanidin 3-glukosida, standar yang digunakan untuk
dilakukan dua kali Dekolorisasi TEAC akhir seperti yang kuantifikasinya (Gambar 4). Cyanidin 3-glucosylrutinoside,
dikatakan nilai dihitung dengan menggunakan persamaan cyanidin 3-sophoroside, cyanidin 3-rutinoside, dan cyanidin 3-
regresi glucoside diidentifikasi sebagai
1000 1000
11.300
800 800
600 600
saya
400 12.200 400

13.967
200 200
10.133 13.133
SEBUAH
0 B 0
0 2.557,5 10 12,5 15 17,5 20 22,5 25 27,5 30
Waktu retensi (menit)
Gambar 3. Profil HPLC kersen asam (P cerasus L) cv ekstrak

Gambar 2. Kultur kalus ceri asam (P cerasus L) cv Amarena buah Amarena Mattarello (A) dan ekstrak kalus (B).
Mattarello pada media induksi kalus, setelah sepuluh hari Kondisi kromatografi seperti yang dilaporkan dalam pengujian.
penyinaran. Puncak identifikasi: cyanidin 3-sophoroside (tr 10,133); cyanidin
3-glucosylrutinoside (tr 11.300), cyanidin 3-glucoside (tr 12.200),
cyanidin 3-rutinoside (tr 13.967).
komponen utama dalam sampel yang dianalisis sesuai dengan
temuan yang sebelumnya dilaporkan dalam literatur [4].
Hasil kromatografi menunjukkan bahwa pada ceri asam yang
dianalisis, senyawa yang sama terdapat pada semua kultivar tetapi
pada kadar yang berbeda. Kandungan antosianin total berkisar
antara 27,8 hingga 80,4 mg/100 g (Tabel 1).
Seperti yang dilaporkan pada Tabel 1, kandungan total
antosianin pada ekstrak buah jauh lebih tinggi dibandingkan ekstrak saya
kalus. Sistem in vitro kami berada pada tahap awal pengembangan

dan penting untuk menyiapkan kondisi lingkungan mikro sebaik
mungkin untuk meningkatkan produksi antosianin. Kultur kalus yang
kami pilih mampu menghasilkan antosianin 20 kali lipat lebih sedikit
daripada buah dari kultivar yang ditanam di lapangan (AM) yang 250 300 350 400 450 500 550 600
sama (Tabel 1). Tujuan kami sekarang adalah untuk lebih nm
meningkatkan produksi pigmen, untuk membuat proses in vitro layak
secara ekonomi dan menjadi alternatif untuk bahan yang ditanam di Gambar 4. Tumpang tindih spektra cyanidin 3-glucoside chlo
lapangan. Untuk meningkatkan efisiensi, penting untuk menginduksi ride standar dengan spektra puncak terelusi pada waktu 10,133;
produksi antosianin tidak hanya di permukaan tetapi bahkan di 11.300; 12.200; 13.133; 13,967 menit.
dalam kalus.
Meskipun kandungan antosianin total dalam kultivar kami
bervariasi, tergantung pada genotipe, setiap profil kultivar kemudahan, dan penyakit serebrovaskular dikaitkan dengan
mengandung senyawa yang sama dalam proporsi yang cukup mirip. berbagai senyawa antioksidan yang terkandung dalam makanan ini,
Cyanidin 3-glucosylrutinoside merupakan anto cyanin utama yang dan bahwa aktivitas biologis antosianin juga dapat disebabkan oleh
ditemukan, diikuti oleh cyanidin 3-rutinoside, cyani din 3-sophoroside, sifat antioksidannya, evaluasi kapasitas antioksidan buah yang
dan cyanidin 3-glucoside. Profil antosianin yang ditemukan pada mengandung antosianin atau ekstrak antosianin adalah suatu
ekstrak buah sama pada semua genotipe yang diuji dan cukup parameter penting untuk formulasi makanan fungsional yang sesuai.
berbeda dengan yang ditemukan pada ekstrak kalus. Pada ekstrak
kalus hanya terdapat cyanidin 3-glucoside dan cyanidin 3-rutinoside, Beberapa metode telah dikembangkan untuk mengukur
yang pertama dengan proporsi yang sangat tinggi (72,14%) (Tabel kapasitas antioksidan total dari berbagai sampel biologis.
1). Aspek ini mengungkapkan kemampuan sel in vitro untuk Di antara mereka, ORAC dan TEAC adalah yang paling penting.
memodulasi metabolisme antosianin menuju struktur molekul yang Kami menggunakan uji ORAC yang ditingkatkan menggunakan
kurang berkembang. Dilaporkan bahwa fluks metabolisme sistem in FL sebagai probe fluoresen, karena telah ditunjukkan bahwa probe
vitro sering disederhanakan tetapi dapat didorong ke arah akumulasi yang digunakan sebelumnya, ÿ-Phycoerythrin, memberikan masalah
senyawa spesifik dengan karakteristik yang menarik [9, 17], dalam hal photostability dan reproducibility [18].
sehingga menyediakan alat yang ampuh untuk aplikasi bioteknologi. Kapasitas antioksidan total ekstrak buah, diukur sebagai
ORACFL, berkisar antara 1145 hingga 1916 µmol TE/100 g FW
(Gambar 5). Nilai-nilai ini tidak sebanding dengan yang dilaporkan
Karena telah ditunjukkan bahwa peran buah dan sayur dalam di beberapa makalah di mana ÿ-Phycoerythrin digunakan sebagai
perlindungan terhadap kanker, gangguan kardiovaskular probe fluoresen, seperti
2004:5 (2004) Sour Cherry Anthocyanin sebagai Bahan Pangan Fungsional 257
Tabel 1. Kandungan antosianin total dan komposisi ekstrak buah kersen (P cerasus L) kultivar Visciola Ninno, Amarena Mattarello, dan Visciola Sannicandro
serta ekstrak kultur kalus. Komposisi antosianin ditentukan sebagai persentase antosianin total yang dihitung dari luas puncak pada 518 nm; nd = tidak
terdeteksi.
Total Area puncak pada 518 nm (%)

Ekstrak antosianin (mg/ Cyanidin Sianidin Cyanidin Sianidin 3-
100 g) 3-sophoroside 3-glukosilrutinosida 3-glukosida rutinosida
VN 27,8 ± 0,010 2.58 62.23 1.87 33.32
SAYA 80,4 ± 0,100 2.91 64,54 1.13 31.42
VS 74,6 ± 0,050 3.87 67.58 1.71 26.84
Kalus 4,2 ± 0,001 t t 72.14 27.86
ORAC ekstrak buah menggunakan prosedur TEAC [19]. Nilai yang

2500 ditemukan dalam buah ceri asam sebanding dengan yang
ditemukan pada beberapa buah berry, misalnya stroberi, dan
2000
lebih tinggi daripada apel dan buah kiwi [20]. Total kapasitas
1500 antioksidan dari ekstrak kalus lebih rendah daripada buah-
buahan, baik pada uji ORAC maupun TEAC (630–746 µmol
µmol
FW
100
TE/
g
1000 TE/100 g FW) (Gambar 5 dan 6). Namun, jika kita

500
membandingkan total kapasitas antioksidan kalus dengan
buah, nilainya hampir 4 kali lipat lebih sedikit, sedangkan
0 kandungan antosianinnya 20 kali lipat lebih sedikit. Kapasitas
VS SAYA VN KALUS antioksidan tersebut bahkan dapat didukung oleh senyawa
Gambar 5 Nilai ORAC ekstrak buah dan kalus kersen (P cerasus L) polifenol lainnya yang terkandung dalam buah kersen asam,
Hasilnya dinyatakan sebagai setara mikromol Trolox per gram berat segar. seperti dilansir Wang et al, [21]. Senyawa ini dapat berada
Data dinyatakan sebagai rata-rata ± SD dari dua pengujian per ekstrak.
pada tingkat tinggi dalam kultur kalus, sehingga berkontribusi
Buah diambil dari kultivar Amarena Mattarello, Visciola Ninno, dan Visciola
Sannicandro.
terhadap kapasitas antioksidan total.
Kalus telah dihasilkan secara in vitro dari daun ceri asam cv Amarena Nilai yang ditemukan untuk ceri asam dalam tes ORAC
Mattarello. dan TEAC sangat mirip, meskipun kedua metode tersebut
didasarkan pada mekanisme reaksi yang berbeda.
TEAC didasarkan pada penghambatan absorbansi kation
radikal ABTS oleh antioksidan. Antioksidan dioksidasi oleh
ABTS
3000 oksidan ABTS•+, dengan reaksi transfer elektron tunggal
(SET) dari molekul antioksidan ke oksidan. Uji ORAC
2500 didasarkan pada reaksi transfer atom hidrogen (HAT), dengan
radikal peroksil ROO• yang memisahkan atom hidrogen dari
2000
antioksidan, sehingga memperlambat atau menghambat
µmol
FW
100
TE/
g
1500 reaksi antara ROO• dan probe molekul target. Mekanisme

reaksi yang berbeda dari kedua pengujian tersebut dapat
1000
menjelaskan urutan peringkat yang berbeda dari ketiga kultivar
tersebut. Nilai ORAC untuk cv VN berbeda dengan nilai TEAC,
500
sedangkan nilai untuk bahan lain sebanding.
0
VS SAYA VN KALUS Uji aktivitas antioksidan menggunakan ekstrak jus
Gambar 6. Nilai TEAC buah kersen (P cerasus L) dan ekstrak kalus. sedangkan analisis antosianin menggunakan ekstrak metanol
Hasilnya dinyatakan sebagai setara mikromol Trolox per gram berat segar. untuk melakukan kedua uji pada sampel yang diekstraksi
Data dinyatakan sebagai rata-rata ± SD dari dua pengujian per ekstrak. dengan pelarut yang paling sesuai untuk masing-masing
Buah diambil dari kultivar Amarena Mattarello, Visciola Ninno, dan Visciola
Sannicandro.
metode. Oleh karena itu, adalah mungkin untuk membandingkan
Kalus telah dihasilkan secara in vitro dari daun ceri asam cv Amarena kandungan antosianin dengan nilai yang ditemukan dalam uji
Mattarello. kapasitas antioksidan. Kecenderungan yang ditunjukkan oleh
uji ORAC cocok dengan kandungan antosianin terutama untuk
buah-buahan. Kandungan antosianin yang lebih tinggi adalah
untuk cv AM dan cv VS, yang menunjukkan nilai ORAC yang
dijelaskan oleh Ou et al [14]. Dalam uji TEAC, nilai lebih tinggi. Untuk kalus, kita bahas di atas kemungkinan
menunjukkan kisaran 2000–2600 µmol TE/100 g FW (Gambar kontribusi senyawa antioksidan selain antosianin. Selain itu,
6). Beberapa laporan berurusan dengan evaluasi aktivitas antioksidan
melatonin antioksidan baru-baru ini diidentifikasi dalam dua kultivar (Balaton dan
Montmorency) dari tart cherry [22]. Temuan ini memberikan (Prunus cerasus L) produksi menuju pemanfaatan untuk
hubungan yang menarik dengan anekdot konsumsi ceri sebagai abad baru. Dalam: Prosiding Kongres Hortikultura Internasional
makanan yang mempromosikan kesehatan, dan merupakan alasan ke-26. Toronto: IHS ed;2002:180.
lebih lanjut untuk mempelajari spesies buah ini.
[14] Ou B, Hampsch-Woodill M, Sebelumnya RL. Pengembangan
REFERENSI dan validasi uji kapasitas penyerapan radikal oksigen yang
ditingkatkan menggunakan fluorescein sebagai probe
[1] Rice-Evans C. Skrining fenolik dan flavonoid untuk aktivitas fluoresensi. Kimia Makanan J Agric. 2001;49(10):4619– 4626.
antioksidan. Dalam: Packer L, Hiramatsu M, Yoshikawa T,
eds. Suplemen Makanan Antioksidan dalam Kesehatan [15] Re R, Pellegrini N, Proteggente A, Pannala A, Yang M, Rice-
Manusia. San Diego, California: Academic Press;1999:239– Evans C. Aktivitas antioksidan menerapkan uji dekolorisasi
253. kation radikal ABTS yang ditingkatkan.
[2] Kamei H, Kojima S, Hasegawa M, Umeda T, Ter abe K, Free Radic Biol Med. 1999;26(9-10):1231–1237.
Yukawa T. Efek penekan ekstrak flavonoid dari kelopak [16] Takeda J. Sintesis antosianin yang diinduksi cahaya dalam sel
bunga pada sel ganas manusia yang dikultur. J Clin Exp wortel dalam suspensi. J Exp Bot. 1991;41:749– 755.
Med. 1993;164:829–830.
[3] Bomser J, Madhavi DL, Singletary K, Smith MA. Aktivitas [17] Konczak-Islam I, Nakatani M, Yoshinaga M, Ya makawa O.
antikanker in vitro ekstrak buah dari spesies Vac cinium . Pengaruh ion amonium dan suhu pada komposisi antosianin
Planta Med. 1996;62(3):212–216. dalam kultur suspensi sel ubi jalar. Bioteknologi Tumbuhan.
[4] Wang H, Nair MG, Iezzoni A, GM Strasburg, Booren AM, Gray 2001;18(2): 109–117.
JI. Kuantifikasi dan karakterisasi antosianin dalam ceri tart
Balaton. Kimia Makanan J Agric. 1997;45(7):2556–2560. [18] Huang D, Ou B, Hampsch-Woodill M, Flanagan JA, Sebelumnya
RL. Uji throughput tinggi kapasitas serapan radikal oksigen
[5] Wang H, Nair MG, GM Strasburg, dkk. Aktivitas antioksidan (ORAC) menggunakan sistem penanganan cairan multisaluran
dan antiinflamasi antosianin dan aglikonnya, cyanidin, dari yang digabungkan dengan pembaca fluoresensi pelat mikro
ceri asam. J Nat Prod. 1999;62(2):294–296. dalam format 96-sumur. Kimia Makanan J Agric.
2002;50(16):4437–4444.
[6] Kang SY, Seeram NP, Nair MG, Bourquin LD. Tart cherry [19] Proteggente AR, Pannala AS, Paganga G, dkk. Aktivitas
anthocyanin menghambat perkembangan tumor pada tikus antioksidan buah dan sayuran yang dikonsumsi secara teratur
ApcMin dan mengurangi proliferasi sel kanker usus besar mencerminkan komposisi fenolik dan vitamin C mereka. Radik
manusia. Surat Kanker. 2003;194(1):13–19. Bebas Res. 2002;36(2):217–233.
´
[7] Smith MA, Pepin M. Stimulasi produksi flavonoid bioaktif dalam [20] Lister CE, Wilson PE, Sutton KH, Morrison SC.
kultur sel berbasis suspensi dan bioreaktor. Dalam: Altman Memahami manfaat kesehatan dari blackcurrant.
A, Ziv M, Izhar S, eds. Bioteknologi Tumbuhan dan Biologi In Bertindak Hort. 2002;585:443–449.
Vitro di Abad ke-21. Dordrecht: Penerbit Akademik [21] Wang H, Nair MG, GM Strasburg, Booren AM, Gray JI.
Kluwer;1999:333–336. Senyawa antioksidan baru dari ceri asam (Prunus cerasus). J
Nat Prod. 1999;62(1):86–88.
[8] Curtin C, Zhang W, Franco C. Memanipulasi komposisi antho [22] Burkhardt S, Tan DX, Manchester LC, Hardeland R, Reiter RJ.
cyanin dalam kultur suspensi Vitis vinifera dengan elisitasi Deteksi dan kuantifikasi melatonin antioksidan dalam ceri tart
dengan asam jasmonat dan iradiasi cahaya. Bioteknologi Montmorency dan Balaton (Prunus cerasus). Kimia Makanan
Lett. 2003;25(14):1131–1135. J Agric. 2001;49(10):4898–4902.
[9] Plata N, Konczak-Islam I, Jayram S, McClelland K, Woolford
T, Franks P. Pengaruh metil jasmonat dan asam p-coumaric
pada komposisi antosianin dalam kultur suspensi sel ubi jalar.
Jurnal Rekayasa Biokimia. 2003;14(3):171–177.
Email: federica.blando@ispa.cnr.it Faks:
+39 832 420000; Telp: +39 832 420000
[10] Hong V, Wrolstad RE. Karakterisasi pewarna dan jus buah
yang mengandung antosianin dengan deteksi susunan HPLC/
fotodioda. Kimia Makanan J Agric. 1990;38(3):698–708.
[11] Goiffon JP, Mouly PP, Gaydou EM. Penentuan pigmen

antosianik pada sari buah merah, sari buah pekat dan sirup
menggunakan kromatografi cair. Anal Chim Acta.
1999;382(1-2):39–50.
[12] Blando F. Perbanyakan Prunus cerasus L secara in vitro.
Taman Italia. 2002;9(3):16–17.
[13] Blando F, Gala R, Gerardi C, Druart P. Ceri asam
ARTIKEL PENELITIAN
Pengaruh Cahaya terhadap Kadar Antosianin pada Perendaman,

Buah Cranberry yang Dipanen
Yu Zhou dan Bal Ram Singhÿ
Departemen Kimia dan Biokimia, Universitas Massachusetts Dartmouth,

285 Old Westport Road, Dartmouth Utara, MA 02747, AS
Diterima 3 Maret 2004; direvisi 17 Mei 2004; diterima 15 Juni 2004
Anthocyanin adalah sekelompok antioksidan tanaman yang dikenal untuk penggunaan terapeutiknya. Efek cahaya alami, lampu merah, dan
lampu merah jauh pada individu serta kandungan antosianin total dalam buah cranberry (Vaccinium macrocarpon Ait) diperiksa dalam
pengaturan eksperimental yang dirancang untuk meniru kondisi pemanenan air. Metode kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) fase terbalik
digunakan untuk memisahkan dan menganalisis antosianin. Berbeda dengan sampel kontrol yang disimpan di tempat gelap, cahaya alami
meningkatkan kadar antosianin total masing-masing sebesar 75,3% dan 87,2% setelah 24 dan 48 jam perendaman air.
Lampu merah dan lampu merah jauh meningkatkan kadar antosianin total masing-masing sebesar 41,5% dan 34,7%. Jumlah antosianin
setiap individu meningkat secara berbeda di bawah cahaya alami, lampu merah, dan lampu merah jauh, menunjukkan bahwa ekspresi enzim
yang mengkatalisis biosintesis antosianin diatur secara berbeda oleh lingkungan.
PENGANTAR peka cahaya [12]. Fitokrom adalah salah satu fotoreseptor yang
paling banyak diteliti yang merasakan cahaya, dan diketahui
Kualitas dan nilai komersial buah cran berry Amerika terlibat dalam biosintesis antosianin [13, 14, 15]. Fitokrom
(Vaccinium macrocarpon Ait) ditentukan oleh warnanya [1]. merespons cahaya merah (660 nm) dan merah jauh (730 nm),
Warna merah buah cranberry disebabkan oleh adanya dan mengarahkan ekspresi gen tanaman dengan beralih antara
anthocyanin. Anthocyanin memiliki nilai terapeutik yang penting, bentuk penyerap merah (Pr) dan bentuk penyerap merah jauh
termasuk antitumor [2, 3], antiulcer [4], antioksidan, dan aktivitas (Pfr). Sebelumnya, kami telah meneliti pengaruh berbagai
anti-inflamasi [5]. Enam antosianin telah dilaporkan dalam panjang gelombang cahaya terhadap perkembangan tanaman
cranberry berdasarkan analisis kromatografi cair kinerja tinggi cranberry dan biosintesis antosianin pada cranberry yang masih
(HPLC) dari ekstrak buah asam-alkohol pada kolom C18 fase menempel pada tanaman. Kami telah mengamati bahwa lampu
terbalik. Ini adalah cyanidin 3-galactoside, cyanidin 3-glucoside, merah masing-masing merangsang pembungaan dan biosintesis
cyanidin 3-arabinoside, peonidin 3-galactoside, peonidin 3- antosianin pada tanaman dan buah cranberry [16].
glucoside, dan peoni din 3-arabinoside [6, 7]. Proporsi
anthocyanin individu dalam buah cranberry dapat mempengaruhi Secara umum, daun dan batang mengurangi paparan
stabilitas warna produk cranberry seperti jus dan saus [8, 9]. cahaya karena beri lebih rendah pada tanaman. Kandungan
Yan et al [10] melaporkan bahwa cyanidin 3-galactoside antosianin prapanen cranberry di bagian bawah dan atas
menunjukkan aktivitas antioksidan yang lebih unggul dari enam tanaman sangat bervariasi, terutama karena perbedaan dalam
monoglikosida quercetin dan myricetin lainnya yang diisolasi aksesibilitas cahaya [17].
dari buah cran berry serta vitamin E dengan mengevaluasi Pemanenan air telah menjadi praktik umum dalam industri
senyawa untuk radikal 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl- aktivitas cranberry, dan dilakukan dengan membanjiri rawa cranberry
pemulungan dan kemampuan untuk menghambat oksidasi dengan air untuk mengapungkan buah yang mengapung agar
lipoprotein densitas rendah secara in vitro. mudah dikumpulkan. Namun, efek potensial pada buah karena
teknik panen air belum dipelajari secara sistematis. Satu
penelitian memang menunjukkan bahwa perendaman buah
Cahaya telah terbukti menjadi faktor lingkungan yang yang terlalu lama meningkatkan pembusukan jamur pada buah
paling penting yang mempengaruhi biosintesis antosianin pada beri [18]. Selama pemanenan air, cranberry di permukaan air
tumbuhan [11], meskipun pada beberapa spesies, seperti Vitis menerima cahaya yang sama atau lebih banyak daripada buah
vinifera cv. Akumulasi antosianin Shiraz tampaknya tidak terjadi yang masih menempel di tanaman. Dalam makalah ini, kami mengevaluasi efekny

260 Y. Zhou dan BR Singh 2004:5 (2004)
cahaya alami, lampu merah, dan lampu merah jauh pada Tabel 1. Pengaruh cahaya pada kadar antosianin total dalam buah cranberry
individu serta tingkat antosianin total dalam buah cranberry yang dipanen dan terendam.
dalam kondisi yang menyerupai pemanenan air.

Perawatan ringan Total antosianin (mg)/100 g buah segar 35,47ÿ
Cahaya alami (48 jam)a ± 2,39
BAHAN DAN METODE Cahaya alami (24 jam)b 33,24ÿ ± 1,47
Gelap 18,95 ± 0,88
Tanaman
Lampu merah 26,82ÿ ± 1,6
Cranberry (Vaccinium macrocarpon Ait, cv “Early Black”) Cahaya merah jauh 25,53ÿ ± 2,89
yang digunakan dalam penelitian ini diperoleh dari rawa Stasiun Nilai dinyatakan sebagai rata-rata ± SE (n = 3). a:
Eksperimen Cranberry, University of Mas sachusetts, East waktu perendaman air adalah 48 jam.
Wareham, Mass, pada bulan Oktober 1999. b: waktu perendaman air adalah 24 jam.
ÿP < .02.
Sumber cahaya
Lampu merah, dengan laju fluence foton 12 µmole mÿ2sÿ1,

diperoleh dari enam tabung neon 40-w (F48T12/R-660/H2O, antosianin semalaman pada suhu 4ÿC. Ekstrak sampel disaring
melalui filter 0,2 µm sebelum diinjeksikan ke dalam kolom HPLC.
Red, General Electric Company, USA) yang disaring melalui
lembaran plastik merah ( Filter warna Roscolux # 27,
Laboratorium ROSCO, Port Chester, NY). Cahaya merah jauh, analisis HPLC
dengan laju fluence foton 5 µmole mÿ2sÿ1, diperoleh dari bola
lampu FCL kuarsa ujung ganda halogen cahaya putih cemerlang Analisis HPLC anthocyanin dilakukan pada sistem Waters
500 watt (Osram Sylvania Prod ucts Inc, Winchester, Ky) yang 515 Dual Pump HPLC, dilengkapi dengan detektor 996-
disaring melalui jarak 3 mm -plastik merah (tipe FRF700, West photodiode-array dan kolom C18 (4,6 × 150 mm) dengan ukuran
Lakes Plastics, Lenni, Pa). partikel 5 µm (Waters Corporation, Milford, Mass). Perangkat
Sumber cahaya dalam setiap kotak disimpan pada jarak 0,8 lunak yang digunakan untuk mengontrol sistem HPLC dan
meter dari buah beri. Semua pengukuran cahaya dilakukan analisis data adalah Millennium 32 (Waters Corporation, Milford,
dengan Radiometer/Fotometer Model IL1400A (In ternational Mass). Elusi dilakukan dengan menggunakan fase gerak yang
Light, Inc, Newburyport, Mass). dibentuk oleh gradien linier (A) H2O asam asetat (10 : 1) dan
(B) metanol-asam asetat (10 : 1), dengan 100% (A) pada 0
Pengaturan menit sampai 40 % (A) dan 60% (B) pada 20 menit. Laju alir
ditetapkan pada 0,2 mL/menit. Pemisahan dan elusi thocyanin
Eksperimental Cranberry diambil dari rawa yang tergenang
setelah mesin panen telah menjatuhkan buah dari tanaman dideteksi dengan memantau absorbansi pada 535 nm.
merambat dan dipilih dengan ukuran dan warna yang kira-kira Kandungan antosianin dihitung dalam jumlah absolut
sama untuk percobaan untuk menghindari variabilitas dalam menggunakan koefisien kepunahan (ÿ
1%
1 cm) pada 535 nm sebagai 982 [19].
kandungan thocyanin. Buah secara acak dibagi menjadi lima
kelompok dan disimpan dalam gelas berisi air. Dua ukuran
gelas kimia (1000 mL dan 250 mL) digunakan. Gelas kimia HASIL DAN DISKUSI
1000 mL (diameter: 11,6 cm) berisi 800 mL air, dan kira-kira 34
buah beri yang hanya membentuk satu lapisan pada permukaan Komposisi antosianin berperan dalam efek terapeutiknya
air ditempatkan di dalam gelas kimia. Gelas kimia 250 mL [20]. Meskipun enam anthocyanin telah diidentifikasi dalam
(diameter: 7,5 cm) berisi 200 mL air, dan kira-kira 17 buah beri cranberry [21, 22, 23], biosintesis anthocyanin individu tersebut
yang hanya membentuk satu lapisan pada permukaan air dalam menanggapi kondisi lingkungan seperti cahaya tidak
ditempatkan di dalam gelas kimia. dipahami. Dalam upaya untuk menjelaskan biosintesis
Dua kelompok dalam gelas kimia 1000 mL ditempatkan di area antosianin, kami mengukur kandungan antosianin total dan
pembibitan di luar laboratorium dan menerima siklus siang hari individu dalam buah cranberry di bawah kondisi cahaya yang
masing-masing selama 24 dan 48 jam. Tiga kelompok yang berbeda dalam pengaturan percobaan yang dirancang untuk
tersisa dalam gelas kimia 250 mL ditempatkan di kamar gelap meniru kondisi pemanenan air.
dengan suhu terkontrol pada 20ÿC. Salah satu dari gelas kimia
250 mL ini disimpan di kamar gelap dan digunakan sebagai Analisis statistik (Student t test) dilakukan untuk mendeteksi
sampel kontrol. Dua lainnya, juga disimpan di kamar gelap, perbedaan statistik antara kandungan antosianin total di bawah
masing-masing menerima 30 menit lampu merah atau lampu kondisi cahaya alami (48 jam dan 24 jam), lampu merah, dan
merah jauh per hari, selama dua hari. Buah beri dari dua lampu merah jauh dengan kondisi gelap. Tabel 1 menunjukkan
kelompok yang ditempatkan di luar dikumpulkan masing-masing bahwa kadar antosianin total bervariasi secara signifikan (>
setelah 24 dan 48 jam, dan buah dari tiga kelompok yang 98% tingkat kepercayaan (P < 0,02)) ketika cranberry yang
ditempatkan di ruang pemantauan suhu dikumpulkan secara dipanen terendam terkena berbagai kondisi cahaya. Kandungan
individual setelah 48 jam. Delapan gram buah beri dari masing- antosianin total buah beri sebelum terpapar kondisi cahaya
masing kelompok ditimbang dan dihomogenkan dalam 10 mL eksperimental adalah 18,95 ± 0,88, dan sama dengan
etanol: HCl 1,5 N (85 : 15, v/v) untuk diekstrak.
2004:5 (2004) Cahaya pada Anthocyanin dalam Buah Cranberry yang Dipanen dan Direndam 261
Tabel 2. Persentase antosianin meningkat pada cranberry yang terendam dan dipanen yang terpapar pada kondisi cahaya yang berbeda dibandingkan dengan
kontrol, yang disimpan dalam gelap.
Cahaya alami (48 jam) Cahaya alami (24 jam) Lampu Lampu merah
Cyanidin 3-galactoside 89,3ÿ 69,0ÿ merah 29.1ÿÿÿ jauh 17.0ÿÿÿ
Sianidin 3-glukosida 53.8ÿÿÿ 38.5ÿÿÿ 71.8ÿÿÿ 92.3ÿÿÿ
Sianidin 3-arabinosida 77,5ÿ 68.2ÿ 30.6ÿÿ 30.3ÿÿ
Peonidin 3-galactoside 99,6ÿ 92,5ÿ 43,5ÿ 35.1ÿ
Peonidin 3-glukosida 100.0ÿ 80,7ÿ 54.4ÿ 45.6ÿ

Peonidin 3-arabinosida 72,4ÿ 72,4ÿ 72,4ÿ 69,8ÿ
Total antosianin 87.2ÿ 75,3ÿ 41,5ÿ 34.7ÿ
ÿP < .02; ÿÿ.05 <P < .1; ÿÿÿ.1 < P < .5
kontrol yang disimpan dalam gelap. Dibandingkan dengan kontrol, untuk menjadi dekat dengan efek lampu merah, tidak mirip dengan
cranberry yang terpapar pada satu siklus siang-malam 24 jam memiliki kontrol gelap. Paparan bibit normal Brassica rapa yang teretiolasi pada
kandungan antosianin 75,3% lebih tinggi, dan buah beri yang terpapar lampu merah dan lampu merah jauh menunjukkan bahwa iluminasi
pada siklus siang-malam 48 jam hanya mencatat peningkatan kecil merah jauh meningkatkan sintesis antosianin lebih banyak daripada
lebih lanjut (87,2%). Cahaya merah dan merah jauh memiliki efek lampu merah [25]. Studi fitokrom berbeda dalam fotomorfogenesis
yang jauh lebih kecil pada biosintesis antosianin total dibandingkan Arabidopsis telah menunjukkan bahwa phytokrom A mengatur respon
cahaya alami (75–87% vs. 35–42%). Lampu merah meningkatkan tanaman terhadap radiasi sinar merah jauh, sedangkan fitokrom B
kandungan antosianin total (41,5%) lebih banyak dibandingkan lampu memainkan peran dominan dalam respon terhadap iradiasi cahaya
merah jauh (34,7%). merah [26]. Oleh karena itu, dianggap bahwa koaksi antara reseptor
Pemisahan anthocyanin cranberry dengan fase terbalik HPLC fotoreseptor berbeda yang terlibat dalam efek cahaya merah dan
mengungkapkan enam anthocyanin yang dijumlahkan menjadi cahaya merah jauh pada kandungan antosianin dalam buah cranberry
cyanidin 3-galactoside, cyanidin 3-glucoside, cyanidin 3-arabinoside, adalah sebagai koaksi antara fotoreseptor yang terlibat dalam
peonidin 3-galactoside, peonidin 3-glucoside, dan peonidin 3- biosintesis flavonoid [27].
arabinoside (Tabel 2 ) menurut laporan sebelumnya [6, 24]. Jumlah
relatif dari enam antosianin dalam sampel kontrol yang disimpan Selain itu, antosianin mengandung dua bagian dalam strukturnya:
dalam gelap (Gambar 1) konsisten dengan laporan sebelumnya [6, aglikon dan gula. Biosintesis thocyanin dikatalisis oleh beberapa enzim
24]. Variasi anthocyanin individu yang berbeda dalam kondisi cahaya dari PLA (phenylalanine ammonia-lyase), C4H (cinnamic acid 4-
yang berbeda juga menjadi sasaran analisis statistik (Student-test), hydroxylase), 4CL (4-coumarate:CoA ligase), CHS (chal cone
yang menunjukkan perbedaan yang signifikan kecuali untuk cyanidin synthase), CHI (chalcone isomerase) , F3H (fla vanone 3 ÿ-
3-glucoside di bawah setiap kondisi cahaya, dan untuk cyanidin 3- hydroxylase), DFR (dihydroflavonol 4-reductase), AS (anthocyanin
galactoside di bawah lampu merah dan jauh. kondisi lampu merah, synthase) melalui 3GT (UDP-glukosa:flavonoid 3-O-glikosil transferase).
seperti yang ditunjukkan pada Tabel 2. Dibandingkan dengan kondisi CHS adalah enzim biosintesis flavonoid pertama yang berkomitmen.
gelap, kondisi cahaya alami meningkatkan semua antosianin secara
substansial, 72%–100% (dalam siklus 48 jam), kecuali untuk cyanidin
3-glukosida, yang meningkat sebesar 54% (Tabel 2), sedangkan AS adalah enzim yang berkomitmen pertama dari tesis biosintesis
lampu merah dan merah jauh memiliki efek paling menonjol pada antosianin. Ekspresi enzim di atas diatur secara berbeda oleh
cyanidin 3-glucoside dan peonidin 3-arabinoside, menunjukkan lingkungan seperti cahaya dan suhu. Hal ini menyebabkan peningkatan
peningkatan 70-92% (Tabel 2). Biosintesis cyanidin 3-galactoside yang tidak proporsional dari anthocyanin yang berbeda seperti peonidin
paling sedikit dipengaruhi oleh cahaya merah dan merah jauh, masing- 3-glucoside dibandingkan dengan cyanidin 3-glucoside, karena
masing hanya menunjukkan peningkatan 29 dan 17% (Tabel 2). perbedaan aglikon di gula yang sama; atau cyanidin 3-galactoside
dibandingkan dengan cyanidin-3-glucoside, karena gula yang berbeda
meskipun aglikon yang sama.
Biosintesis antosianin yang tergantung cahaya secara signifikan Studi ini menunjukkan bahwa selama kondisi pemanenan air, di
tergantung pada spesies tanaman dan kondisi percobaan [13]. mana buah tidak lagi menempel pada tanaman, pemaparan buah
Meskipun kondisi eksperimental dalam penelitian kami sebelumnya terhadap cahaya masih menghasilkan peningkatan kadar antosianin.
[16] berbeda (perawatan cahaya 30 menit per hari selama delapan Studi ini juga menunjukkan bahwa kadar antosianin individu meningkat
hari), hasilnya menunjukkan bahwa cahaya merah dan sinar matahari secara berbeda mengikuti paparan cahaya yang berbeda seperti
meningkatkan biosintesis antosianin lebih banyak daripada cahaya cahaya alami, cahaya merah, dan cahaya merah jauh. Variasi
merah jauh, konsisten dengan kesimpulan. dari penelitian ini. Namun, komposisi anthocyanin dapat dimanipulasi untuk mendapatkan produk
pada dua kasus di atas—buah cranberry yang masih menempel pada antioksidan yang lebih berharga dari cranberry. Studi ini juga
tanaman dan buah cranberry yang tidak lagi menempel pada tanaman, memberikan kontribusi untuk pemahaman kita tentang biosintesis
efek penyinaran merah jauh muncul. antosianin cranberry dalam kondisi pemanenan air.
262 Y. Zhou dan BR Singh 2004:5 (2004)
14 14
12 12
10 10
8 8
6 6
Antosianin
(mg/
100
g)
4 Antosianin
(mg/
100
g)
4
2 2
0 0
Cyanidin 3-galactoside Peonidin 3-galactoside
Gelap Gelap
jam)
(48 jam)
(24 Lampu
merah jam)
(48 jam)
(24 Lampu
merah
Cahaya
alami Cahaya
alami
Cahaya
merah
jauh Cahaya
alami Cahaya
alami
Cahaya
merah
jauh
(sebuah) (b)
2 1.4
1.2
1.5
1
0,8
1
0,6
Antosianin
(mg/
100
g) Antosianin
(mg/
100
g)
0,4
0,5
0,2
0 0
Sianidin 3-glukosida Peonidin 3-glukosida
Gelap Gelap
jam)
(48 jam)
(24 Lampu
merah jam)
(48 jam)
(24 Lampu
merah
Cahaya
merah
jauh Cahaya
merah
jauh
Cahaya
alami Cahaya
alami Cahaya
alami Cahaya
alami
(c) (d)
7 5
6
4
5
4 3
3 2
Antosianin
(mg/
100
g)
2 Antosianin
(mg/
100
g)
1
1
0 0
Sianidin 3-arabinosida Peonidin 3-arabinosida
Gelap Gelap
Lampu
merah Lampu
merah
jam)
(48 jam)
(24 jam)
(48 jam)
(24
Cahaya
merah
jauh Cahaya
merah
jauh
Cahaya
alami Cahaya
alami Cahaya
alami Cahaya
alami
(dan) (f)
Gambar 1. Pengaruh cahaya pada kadar antosianin individu dalam buah cranberry yang dipanen dan terendam. Cranberry terkena kondisi
cahaya yang berbeda dan kandungan antosianin individu dianalisis. Kondisi cahaya yang berbeda, cahaya alami (48 jam), cahaya alami (24
jam), gelap, cahaya merah, dan cahaya merah jauh, ditunjukkan di bagian bawah. Nilai rata-rata dari kembar tiga dengan bilah kesalahan standar.
2004:5 (2004) Cahaya pada Anthocyanin dalam Buah Cranberry yang Dipanen dan Direndam 263
UCAPAN TERIMA KASIH [14] Quail PH, Boylan MT, Parks BM, Short TW, Xu Y, Wagner D.
Phytochromes: persepsi fotosensori dan transduksi sinyal.
Pekerjaan ini didukung oleh Kantor Presiden, Universitas
Sains. 1995;268 (5211):675–680.
Massachusetts. Kami ingin berterima kasih kepada Cranberry
Experiment Station, University of Mas sachusetts, East Wareham,
[15] Lange H, Shropshire W, Mohr H. Analisis sintesis antosianin yang
Mass, yang telah menyediakan buah cranberry. Kami berterima kasih
dimediasi fitokrom.
kepada Nona Elizabeth Winiarz (Pustakawan Sains) di University of
Fisik Tumbuhan. 1971;47:649–655.
Massachusetts Dartmouth atas bantuannya dalam pengeditan
[16] Zhou Y, Singh BR. Lampu merah merangsang pembungaan dan
manuskrip.
biosintesis antosianin di cranberry Amerika. J Peraturan
Pertumbuhan Tanaman. 2002;38(2):165–171.
[17] Boulanger RR Jr, Singh BR. Regulasi biosintesis antosianin yang
REFERENSI
dimediasi fitokrom pada tanaman cranberry. Tinjauan Sarjana
[1] Craker LE. Promosi warna pascapanen dalam cran berry dengan Persemakmuran. 1997; 2:19–21.
etilen. HortScience. 1971;6:137–139.
[2] Kamei H, Kojima T, Hasegawa M, dkk. Penekanan pertumbuhan [18] Ceponis MJ, Peregangan AW. Pengaruh waktu perendaman air
sel tumor oleh anthocyanin in vitro. Bisa cer Invest. saat panen terhadap kerusakan fisiologis cranberry "Early
1995;13(6):590–594. Black" dalam penyimpanan. HortScience. 1981; 16:60–61.
[3] Koide T, Kamei H, Hashimoto Y, Kojima T, Hasegawa M. Efek
antitumor antho cyanin terhidrolisis dari kulit anggur dan beras [19] Fransiskus FJ. Analisis antosianin. Dalam: Markakis P, ed.
merah. Cancer Biother Radiopharm. 1996;11(4):273–277. Antosianin sebagai Pewarna Makanan. New York: Aca demic
Press; 1982:181–207.
[4] Cristoni A, Magistretti MJ. Aktivitas antiulcer dan penyembuhan [20] Rossi A, Serraino I, Dugo P, dkk. Efek perlindungan anthocyanin
Vaccinium myrtillus anthocyanosides. Jauh maco [Prat]. dari blackberry pada model tikus radang paru-paru akut. Radik
1987;42(2):29–43. Bebas Res. 2003;37(8):891–900.
[5] Wang H, Nair MG, GM Strasburg, dkk. Aktivitas antioksidan dan
antiinflamasi antosianin dan aglikonnya, cyanidin, dari ceri [21] Sakamura S, Francis FJ. Anthocyanin dari cranberry Amerika.
asam. J Nat Prod. 1999;62(2):294–296. Ilmu Makanan J. 1961;26:318–321.
[22] Zapsalis C, Francis FJ. anthocyanin cranberry. J
[6] Hong V, Wrolstad RE. Penggunaan pemisahan HPLC / Ilmu Makanan. 1965;30:396–399.
photodiode array deteksi untuk karakterisasi anthocyanin. Kimia [23] Fuleki T, Francis FJ. Kemunculan bersama monoglu cosides
Makanan J Agric. 1990;38:708– 715. dan monogalactosides cyanidin dan pe onidin dalam cranberry
Amerika, Vaccinium macro carpon. Fitokimia. 1967;6(12):1705–
[7] Madhavi DL, Smith MAL, Berber-Jimenez MD. Ekspresi 1708.
antosianin pada kultur kalus cran berry (Vaccinium macrocarpon [24] Saper GM, Hargrave DL. Proporsi antosianin individu dalam buah
Ait). Ilmu Makanan J. 1995;60(2):351–355. kultivar cranberry. J Am Soc Hortic Sci. 1987;112(1):100–104.
[8] Bintang MS, Francis FJ. Efek oksigen dan asam askorbat pada [25] Devlin PF, Rood SB, Somers DE, Quail PH, White lam GC.
stabilitas relatif empat pigmen antosianin dalam jus cranberry. Fotofisiologi mutan ode (ein) memanjang dari Brassica rapa.
Teknologi Pangan. 1968;22:1293–1295. Fisik Tumbuhan. 1992;100:1442–1447.
[9] Fransiskus FJ. Cranberry: efek produksi dan pemrosesan pada
kualitas sensorik. Dalam: Pattee HE, ed. [26] Whitelam GC, Devlin PF. Peran berbagai phy tochromes dalam
Evaluasi Mutu Buah dan Sayur. Pelabuhan Barat, Connecticut: fotomorfogenesis Arabidopsis.
AVI Publishing; 1985:199–216. Lingkungan Sel Tumbuhan. 1997;20:752–758.
[10] Yan X, Murphy BT, Hammond GB, Vinson JA, Neto CC. Aktivitas [27] Beggs CJ, Wellmann E. Fotokontrol biosintesis flavonoid. Dalam:
antioksidan dan skrining antitumor dari ekstrak buah cranberry Kendrick RE, Kronenberg GHM, eds. Fotomorfogenesis pada
(Vaccinium macro carpon). Kimia Makanan J Agric. Tumbuhan. edisi ke-2. Dor drecht: Penerbit Akademik Kluwer;
2002;50(21):5844–5849. 1994:733–751.
[11] Grisebach H. Biosintesis antosianin. Dalam: Markakis P, ed.

Antosianin sebagai Pewarna Makanan. New York: Pers ÿ Penulis yang sesuai.
Akademik; 1982:67–92. Email: bsingh@umassd.edu Faks:
[12] Downey MO, Harvey JS, Robinson SP. Pengaruh naungan +1 508 999 8451; Telp: +1 508 999 8588
tandan terhadap perkembangan berry dan akumulasi flavonoid
pada anggur Shiraz. AJGWR. 2004;10(1):55–73.
[13] Mancinelli AL, Rossi F, Moroni A. Cryptochrome, phytochrome,

dan produksi anthocyanin. Fisik Tumbuhan. 1991;96:1079–1085.
ARTIKEL PENELITIAN
Untuk Meregangkan Batas Metabolit Sekunder

Produksi dalam Bioproses Berbasis Sel Tumbuhan:
Antosianin sebagai Studi Kasus
Wei Zhang,1,2ÿ Chris Franco,1 Chris Curtin,1 dan Simon Conn1
1CRC untuk Bioproduk dan Departemen Bioteknologi Medis, Fakultas Kedokteran,

Pusat Medis Flinders, Universitas Flinders, SA 5042, Adelaide, Australia
2Kelompok Rekayasa Bioproduk Laut, Institut Fisika Kimia Dalian,
Akademi Ilmu Pengetahuan Tiongkok, Dalian 116023, Tiongkok
Diterima 19 April 2004; direvisi 27 Mei 2004; diterima 15 Juni 2004
Sel tanaman dan kultur jaringan sangat menjanjikan untuk mengendalikan produksi segudang metabolit sekunder yang berguna sesuai permintaan.
Hasil dan produktivitas saat ini tidak dapat memenuhi tujuan komersial dari bioproses berbasis sel tumbuhan untuk produksi sebagian besar metabolit sekunder. Untuk
memperluas batas, kemajuan terkini, arah dan peluang baru dalam pemrosesan bio berbasis sel tanaman telah diperiksa secara kritis selama 10 tahun dari 1992 hingga
2002. Tinjauan literatur menunjukkan bahwa sebagian besar pekerjaan R&D dikhususkan terutama untuk studi pada tingkat empiris. Pendekatan rasional untuk
bioproses sel tanaman molekuler berdasarkan pemahaman mendasar tentang jalur metabolisme dan pengaturannya sangat diperlukan untuk merangsang kemajuan
lebih lanjut; namun, strategi dan kerangka teknisnya masih dikembangkan. Ini adalah tujuan dari tinjauan ini untuk mengambil langkah maju dalam membingkai strategi
dan teknologi yang bisa diterapkan untuk bioproses berbasis sel tumbuhan molekuler. Menggunakan biosintesis antosianin sebagai studi kasus, pendekatan postgenomik
terintegrasi telah diusulkan. Ini menggabungkan analisis fungsional jalur metabolisme untuk biosintesis metabolit tertentu dari pembuatan profil ekspresi gen dan
ekspresi protein hingga pembuatan profil metabolik. Korelasi global tidak hanya dapat ditetapkan pada tiga tingkat molekuler, tetapi juga menekankan pada interaksi
antara metabolisme primer dan metabolisme sekunder; antara jalur bersaing dan/atau pelengkap; dan antara peristiwa biosintetik dan pasca-biosintesis.
PENGANTAR sistem model. Penekanan ditempatkan pada korelasi global pada

tiga tingkat molekuler—transkrip gen, enzim, dan metabolit—serta
Tumbuhan mungkin merupakan pabrik sel terbaik di planet ini pada interaksi antara jalur biosintesis dan peristiwa pasca-biosintesis.
dari mana lebih dari 100.000 metabolit sekunder molekuler rendah
telah ditemukan, dengan perkiraan jumlah total pada tumbuhan Yang terakhir sebagian besar telah diabaikan di masa lalu.
melebihi 500.000 [1]. Berfokus pada pemahaman mendasar tentang jalur metabolisme
Metabolit tanaman tidak hanya digunakan untuk tujuan makanan kompleks dan pengaturan metabolisme sekunder dalam kultur sel
tetapi juga berfungsi sebagai sumber sejarah obat-obatan yang penting. tumbuhan, kami mengembangkan pengetahuan lanjutan tentang
Bioproses berbasis sel tumbuhan adalah penggunaan jalur biosintesis serta jalur pasca biosintesis antosianin dari tingkat genetik
biosintesis sel/jaringan tumbuhan untuk produksi metabolit yang ke tingkat metabolit [2, 4, 5, 6 , 7]. Cara jalur metabolisme dicirikan
berharga dan untuk biotransformasi. Terlepas dari upaya di seluruh secara dinamis menggunakan teknik seperti pemberian makanan
dunia selama 40 tahun, "potensial" masih merupakan kata yang prekursor, elisitasi, penghambatan metabolisme dan analisis strain,
paling sering digunakan untuk menggambarkan teknologi ini karena ekspresi mRNA, aktivitas enzim, dan profil antosianin. Informasi
telah bertemu dengan kesuksesan komersial yang sangat terbatas yang diperoleh pada identifikasi, regulasi, dan manipulasi pembatasan
[2, 3]. Untuk memajukan pengetahuan dan alat kami dalam dan langkah-langkah kunci yang terlibat dalam jalur jalur antosianin
menerjemahkan "potensi" menjadi "kesuksesan komersial," makalah membawa kita ke jalan baru untuk optimalisasi rekayasa bioproses
ini menguji kemajuan terbaru di bidang ini dan bermaksud untuk yang rasional dari produksi antosianin pada tingkat molekuler dan
menetapkan strategi dan kerangka kerja teknis untuk pendekatan seluler. Salah satu tujuan kami saat ini adalah untuk mengembangkan
bioproses molekuler rasional. Untuk mengilustrasikan pendekatan proses terintegrasi yang secara rasional menggabungkan strategi
ini, kami menyajikan beberapa data tentang analisis fungsional jalur peningkatan yang berbeda untuk peningkatan produktivitas lebih
metabolisme untuk biosintesis anthocyanin: dari profil ekspresi gen lanjut dalam produksi antosianin di
dan ekspresi protein hingga profil metabolik dalam kultur sel Vitis
vinifera sebagai

2004:5 (2004) Bioproses Metabolit Sekunder pada Tumbuhan: Antosianin 265
Saluran seluler Studi empiris dari setiap kasus

Sedang
Suhu pH Kultur sel/jaringan tumbuhan
Efek pada
serapan
Lampu Memasukkan Keluaran
Sebuah kotak hitam nutrien pertumbuhan
Inokulum
sel produk sintesis
Fase gas
ekonomi produktivitas
Agitasi
Pemilih
Bioreaktor Apa yang terjadi
Proses pada tingkat molekuler?
.
.
.
Studi rasional
Gambar 1. Beralih dari pendekatan empiris ke pendekatan rasional untuk memahami bioproses berbasis sel tumbuhan pada tingkat molekuler (tingkat
genetik, enzimatik, dan metabolisme) yang tetap menjadi kotak hitam pada umumnya.
Kultur sel V vinifera [3]. Strategi lain yang menarik adalah untuk memilih untuk mengkarakterisasi gen jalur, enzim, fisiologi sel,
menjelaskan mekanisme pengangkutan dan penyimpanan dan profil metabolit. Kalau tidak, itu dianggap sebagai studi
antosianin dalam sel tumbuhan dengan tujuan memanipulasi empiris. Dari hampir 600 publikasi selama periode ini, rata-rata
pengangkutan dan penyimpanan untuk meningkatkan produksi 37% berkontribusi pada pendekatan rasional, meninggalkan
antosianin. sebagian besar masih dalam domain studi empiris (Gambar 2).
Pergerakan menuju pemahaman rasional cukup konsisten, tidak
PENDEKATAN RASIONAL: HARAPAN DAN REALITAS ada kecenderungan yang meningkat (Gambar 2). Selain itu,
sebagian besar studi rasional difokuskan pada segelintir metabolit
Pendekatan empiris telah digunakan untuk pengembangan sekunder, seperti alkaloid (ajmalicine, vin cristine, dan vinblastine)
dan optimalisasi bioproses berbasis sel tanaman sejak dan flavonoid (anthocyanin).
permulaannya. Fitur khas dari pendekatan empiris adalah untuk
mengoptimalkan sistem kultur sel tanaman dengan memperhatikan Oleh karena itu timbul pertanyaan: mengapa upaya R&D menuju
faktor inputnya (garis sel, media, parameter kultur, bioreaktor, pendekatan rasional dalam bioproses sel tanaman tetap stagnan
operasi proses, dll) dan faktor output (pertumbuhan sel, serapan mengingat cepatnya masuk ke era pasca genomik selama 10
nutrisi, produktivitas). , hasil, dll). Seperti yang diilustrasikan pada tahun terakhir?
Gambar 1, apa yang terjadi pada tingkat seluler dan molekuler
sebagian besar masih belum diketahui, sebagai “kotak hitam”. PENDEKATAN RASIONAL: TANTANGAN
DAN POTENSI
Pendekatan empiris “brute-force” ini harus diterapkan pada
setiap proses kultur sel tanaman, yang memakan waktu, biaya, Tugas utama dari pendekatan rasional untuk bioproses sel
dan seringkali kurang optimal [8, 9]. Seperti yang ditunjukkan oleh tumbuhan adalah untuk mengidentifikasi gen biosintetik, enzim,
keberhasilan komersial yang terbatas hingga saat ini, Mungkin dan jalur untuk metabolit sekunder spesifik.
ada sedikit harapan dalam mengembangkan kemampuan Ini pada dasarnya adalah analisis fungsional setelah penemuan
biosintesis metabolit sekunder dalam bioproses sel tumbuhan. genom. Meskipun dianjurkan sejak pertengahan 1980-an, baru
Pendekatan rasional, sebaliknya, yang telah diajukan sejak belakangan ini analisis fungsional berskala besar dari metabolisme
pertengahan tahun 1980-an, diarahkan untuk memahami kotak sekunder menjadi layak dengan penyelesaian pengurutan genom
hitam dengan pesatnya perkembangan teknologi genetika modern Arabidopsis dan beras [11]. Secara teknis, pergeseran paradigma
[10]. Dengan harapan peningkatan radikal dalam kemampuan dari empiris ke rasional lahir selama dekade terakhir dan sekarang
biosintetik melalui rekayasa metabolisme sekunder dalam sel berada pada tahap awal pertumbuhan pesat yang diharapkan
tumbuhan, tantangan utama untuk pendekatan rasional adalah dalam dekade berikutnya. Dengan kesuksesan berkelanjutan dari
mendapatkan informasi tentang identifikasi dan pengaturan gen berbagai proyek pengurutan, kami telah memasuki era baru
dan jalur biosintetik. bioproses berbasis sel tumbuhan. Pertama, kita memiliki sumber
daya gen yang sangat besar, untuk analisis fungsional peran
Untuk mendapatkan gambaran yang jelas tentang apa yang mereka, produk protein, dan jalur jalur dan biosintesis kelas
telah dilakukan dalam pengembangan pendekatan rasional, maka tertentu dari metabolit sekunder. Kedua, akumulasi informasi
dilakukan survei literatur tentang kultur sel/jaringan tanaman dari dalam studi empiris bioproses sel tumbuhan akan memberikan
tahun 1992 hingga 2002 dengan menggunakan Biological petunjuk/kondisi penting untuk analisis fungsional semacam itu.
Abstracts. Meski tidak dimaksudkan sebagai survei menyeluruh, Ketiga, analisis berskala besar, global, dan dinamis
hasilnya yang disajikan pada Gambar 2 mengungkapkan beberapa
informasi menarik. Karya itu dianggap sebagai studi rasional ketika itu de
266 Wei Zhang dkk 2004:5 (2004)
60 100
90
50
80
70
40
60
30 50
publikasi
Tidak
ada 40 Publikasi
di
20
30 pendekatan
rasional
(%)
20
10
10
0 0
1992 1994 1996 1998 2000 2002
Tahun
Empiris
Rasional
Rasional %
Gambar 2. Jumlah publikasi tentang pendekatan empiris dan kajian rasional kultur sel/jaringan tumbuhan, dan persentase kajian
rasional dari tahun 1992 hingga 2002. Pencarian didasarkan pada Abstrak Biologis.
metabolisme sekunder akan menjadi layak dengan kemajuan PENDEKATAN RASIONAL: STRATEGI DAN
pesat dalam alat pasca-genomik, seperti transkriptomik, KERANGKA TEKNIS
proteomik, dan metabolomik di era baru ini. Analisis ini akan
Manipulasi rasional dari "jalur primer linier" seperti
membahas interaksi pada tingkat dinamis dan global antara
biosintesis pati sangat mudah dan ternyata berhasil [12].
metabolisme primer, jalur biosintesis untuk metabolisme
Namun, jalur biosintesis metabolit sekunder tumbuhan
sekunder, dan peristiwa pasca biosintesis metabolit spesifik.
seringkali sangat rumit seperti yang diilustrasikan pada
Akibatnya, insinyur bioproses sel tumbuhan akan diberdayakan
Gambar 3.
dengan kemampuan yang lebih besar untuk meregangkan
Dalam merumuskan strategi untuk pendekatan rasional,
batas jalur biosintesis alami sel tumbuhan dengan memobilisasi
kompleksitas perlu dipertimbangkan dalam hal menghubungkan
gen yang diminati ke dalam sel tumbuhan transgenik untuk
metabolisme primer dengan metabolisme sekunder,
melakukan fungsi yang berharga bagi industri, kedokteran,
menghubungkan jalur biosintetik dengan peristiwa pasca
dan lingkungan.
ment. biosintesis, serta menghubungkan jalur biosintesis yang
ditargetkan dengan jalur yang bersaing dan/atau saling
Meski masa depan terlihat cemerlang, strategi dan
melengkapi. (Gambar 3). Beberapa strategi telah diusulkan
kerangka kerja teknis untuk pendekatan rasional masih terus
baru-baru ini untuk mengatasi tantangan dan kompleksitas [2,
dikembangkan. Berikut adalah beberapa tantangan besar
yang harus dihadapi: 11, 13].
Tiga tugas utama pendekatan rasional adalah (i)
(1) kompleksitas ekstrem dari metabolisme sekunder akan karakterisasi semua gen yang terlibat, produk proteinnya, dan
menuntut strategi dan alat baru; (2) keragaman, produk metabolismenya dalam jalur biosintesis tertentu; (ii)
karakterisasi fungsi dan peran regulasi masing-masing; (iii)
spesifisitas, dan variabilitas metabolit sekunder di dalam
manipulasi jalur biosintetik untuk aplikasi tertentu melalui
dan di antara famili atau spesies tumbuhan telah
rekayasa metabolisme. Di sini, kami mengusulkan kerangka
menjadi hambatan utama dalam penjelasan banyak
kerja teknis untuk menerapkan pendekatan ini.
jalur sekunder; (3) sifat pengatur dalam metabolisme
sekunder, seperti lokalisasi spesifik tipe sel dan ekspresi Pertama, alat genomik, proteomik, dan metabolomik harus
sementara, dapat memperumit potensi biosintesis diintegrasikan untuk memperoleh pemahaman global tentang
sebenarnya dari sel tumbuhan; (4) banyak spesies metabolisme sekunder pada tiga tingkat molekuler.
tumbuhan memiliki genom yang kompleks; interaksi Karakterisasi apa pun pada satu tingkat mungkin gagal
antara metabolisme yang kompleks dan beragam dapat diterapkan untuk perbaikan bioproses yang rasional.
mencegah manipulasi rekayasa genetik dan metabolisme Oksman-Caldentey et al [11] telah mengusulkan pendekatan
yang efisien. yang menggabungkan metabolomik dan transkriptomik.
Menggunakan profiling cDNA-AFLP transkrip lebar genom [14] di
Ekstraseluler Intraseluler
Metabolisme primer Jalur pra- Prekursor Jalur

Media biosintesis biosintesis
nutrisi punggung
metabolit
Tulang
Metabolit akhir Jalur pasca-

Melepaskan
biosintesis
Penyimpanan
Modifikasi Transportasi Akumulasi Degradasi
Gambar 3. Peristiwa jalur yang terlibat dalam biosintesis metabolit dalam sel tanaman: metabolisme primer dan metabolisme
sekunder (jalur pra-biosintesis, biosintesis, dan pasca-biosintesis).
kombinasi dengan analisis alkaloid GC-MS-SIM, deteksi lingkungan pertumbuhan dengan sel sebagai kotak hitam,
simultan dari onset genetik dari berbagai jalur metabolisme dengan demikian melewati keadaan fisiologis sel sebagai
sekunder dan pemrograman ulang genetik dari metabolisme tujuan kontrol jangka menengah. Dalam pendekatan rasional,
primer untuk mempertahankan metabolisme sekunder keterbatasan ini harus diatasi melalui pemantauan dan
dicapai dalam kultur sel tembakau BY-2 yang dihasilkan pengendalian fisiologi seluler secara eksplisit. Konstantinov
oleh jasmonat. Keuntungan dari pendekatan ini adalah [16] telah mengusulkan metodologi umum untuk desain
kemampuan mendeteksi sebagian besar transkrip tanpa sistem yang mampu melakukan fungsi pemantauan dan
pengetahuan urutan sebelumnya. kontrol lanjutan ini. Keadaan fisiologis dihitung oleh vektor
Kedua, analisis luas genom sangat penting untuk yang terdiri dari beberapa variabel proses yang dipilih di
memahami interaksi antara jalur biosintetik dari metabolit antara kelas yang berbeda, termasuk laju metabolisme
yang ditargetkan dan jalur terkaitnya (jalur komplementer spesifik, rasio laju metabolisme, derajat keterbatasan, dan
dan bersaing). Regulasi dan manipulasi jalur pelengkap lain-lain. Ini ditunjukkan dengan menggunakan kultur sel
menyediakan sarana untuk mempertahankan jalur yang tanaman Perilla frutescens untuk produksi antosianin
ditargetkan, sedangkan pemblokiran jalur bersaing sangat sebagai contoh. Lamboursain dan Jolicoeur [17] menyoroti
penting untuk mengarahkan aliran metabolisme. Salah satu pengaruh kuat status nutrisi sel tumbuhan terhadap
contoh dari strategi ini diilustrasikan oleh kombinasi pertumbuhan sel dan kapasitas produksi metabolit sekunder
mutagenesis penandaan aktivasi dengan skrining throughput sel. Mereka mendefinisikan status nutrisi sebagai konsentrasi
tinggi untuk metabolisme aktif biologis, yang memungkinkan nutrisi intra dan ekstraseluler, total nitro gen, fosfat, dan
isolasi materi genetik yang relevan dengan sintesis produk karbohidrat. Kurangnya informasi dan kontrol status gizi sel
alami tertentu [13]. Pendekatan ini melibatkan pembuatan mungkin bertanggung jawab atas rendahnya reproduktifitas
perpustakaan kalus melalui mutagenesis sel tanaman yang bioproses sel tumbuhan.
disiapkan dengan aktivasi penandaan T-DNA [15], Terakhir, peristiwa pasca-biosintesis perlu dicirikan dan
pengembangan pengujian layar throughput tinggi untuk ditargetkan untuk manipulasi teknik [2, 6]. Seperti yang
metabolit yang ditargetkan, dan analisis genomik fungsional diilustrasikan pada Gambar 3, metabolisme sekunder dapat
dari garis sel yang diekspresikan secara berlebihan. . mencakup jalur pra-biosintesis untuk menghasilkan
Strategi ini memiliki keuntungan bahwa tidak diperlukan prekursor, jalur biosintetik untuk menghasilkan struktur
pengetahuan sebelumnya tentang jalur metabolisme—hanya metabolit inti, dan peristiwa pasca-biosintesis. Peristiwa
metode penyaringan untuk produk metabolit. pasca-biosintesis ini — modifikasi kimia dan enzimatik,
Ketiga, metabolisme primer untuk mempertahankan transportasi, penyimpanan / sekresi, dan katabolisme /
metabolisme sekunder masing-masing harus dicirikan. degradasi — sebagian besar belum dijelajahi di masa lalu.
Respons metabolisme sekunder tumbuhan terhadap Zhang et al [2] telah menunjukkan signifikansi dalam
manipulasi genetik/metabolik apa pun akan sangat karakterisasi dan manipulasi peristiwa pasca-biosintesis ini
bergantung pada keadaan fisiologis dan nutrisi sel, sebagai dalam meregangkan kemampuan biosintesis sel tumbuhan.
indikator metabolisme primer. Pendekatan empiris mengoptimalkan
268 Wei Zhang dkk 2004:5 (2004)
L-fenilalanin Piruvat / asetat

Lignin
PAL, C4H, 4CL MP, AC
Kumarin
p-kumaroil-CoA Malonil-CoA
Kaki baja CHS, CHI
Auron
Naringenin OH
Flavon OH
F3H, F3H
Iso-flavonoid +
KE HAI
Dihidro-flavonol OH
Flavonol OH
DFR, LDOX(ANS),
Tanin UFGT OH
Antosianin
Gambar 4. Skema jalur biosintetik antosianin dan enzim kunci yang terlibat. Jalur bercabang yang mengarah ke metabolit
lain juga ditunjukkan. Phenylalanine ammonia lyase (PAL); sinamat-4-hidroksilase (C4H); 4-coumarate-CoA ligase (4CL);
asetil-KoA sintetase (AS); asetil-KoA karboksilase (AC); chalcone synthase (CHS); chalcone isomerase (CHI); flavanon 3ÿ
hidroksilase (F3H); flavonoid 3-hidroksilase (F3H); dihidroflavonol 4-reduktase (DFR); leucoanthocyanidin dioxygenase
(LDOX (ANS)); UDP-glukosa: cyanidin 3-O-glucosyltransferase (UFGT).
PENDEKATAN RASIONAL: ANTHOCYANIN sion, aktivitas enzim, dan metabolit antosianin dari jalur
SEBAGAI STUDI KASUS biosintetik dalam kultur sel V vinifera dikarakterisasi. Salah
satu contohnya adalah analisis fungsional kultur sel V vinifera
Di laboratorium kami, kami tertarik pada pemahaman yang dimunculkan dengan asam jasmonat, cahaya, dan
dasar tentang jalur biosintetik dan pengaturan metabolisme sukrosa saja dan dalam kombinasi [3, 4].
sekunder dalam kultur sel tanaman dengan tujuan akhir Semua kondisi tunggal ini meningkatkan produksi antosianin
pengembangan rasional bioproses sel tanaman komersial. dan menunjukkan peningkatan sinergis ketika digabungkan
Pembentukan pendekatan rasional adalah upaya [3, 4]. Studi transkripsi awal dilakukan dengan Northern
berkelanjutan menuju pengetahuan lanjutan biosintesis dan blotting, dan kemudian RT-PCR kuantitatif, dengan sampel
jalur pasca-biosintesis antosianin dalam kultur sel V vinifera hasil yang ditunjukkan pada Gambar 5. Hasil menunjukkan
sebagai sistem model dari tingkat genetik ke tingkat metabolit korelasi yang kuat antara ekspresi transkripsi dan peningkatan
[2, 3, 4, 5, 6, 7]. biosintesis antosianin dan peran asam jasmonat dalam
Antosianin, bertanggung jawab atas berbagai warna meningkatkan DFR [4] .
menarik pada tumbuhan, menjadi alternatif penting bagi Profil metabolik juga dilakukan secara substantif untuk
banyak pewarna sintetis dan memiliki aplikasi potensial kondisi ini. Hasil berimplikasi persaingan antara jalur
dalam pengembangan nutraceutical [9]. Ada banyak informasi antosianin dan stilben, dan pentingnya spesies antosianin
yang tersedia di jalur biosintetik antosianin seperti yang termetilasi dan terasilasi dalam peningkatan produksi [5].
ditunjukkan pada Gambar 4. Seperti dibahas di atas, Karakterisasi penuh sedang berlangsung setelah selesainya
pendekatan kami dimulai dengan pembentukan alat pasca pengembangan metodologi.
genom terintegrasi untuk mengkarakterisasi metabolisme
antosianin pada tingkat transkripsi, enzimatik, dan
metabolisme. Karena jalur stilben bersaing secara langsung Karakterisasi peristiwa pasca-
untuk prekursor untuk biosintesis antosianin, karakterisasi biosintesis antosianin
jalur biosintesis stilben dilakukan secara bersamaan. Antosianin disintesis dalam sitoplasma dan diangkut ke
Selain itu, transportasi dan penyimpanan antosianin awalnya dalam vakuola di mana mereka berikatan dengan matriks
ditargetkan untuk penjelasan pasca-biosintetik protein dan membentuk inklusi vakuolar antosianik (AVI)
acara.
(Gambar 6a) [6]. AVI dianggap sebagai tempat penyimpanan
antosianin. Sebagai pengakuan bahwa langkah-langkah
Karakterisasi transkripsional, enzimatik, dan
pasca-biosintesis dapat memainkan peran yang sama
metabolik dari jalur antosianin
pentingnya dalam peningkatan hasil, kami telah menyelidiki
Menggunakan teknik seperti pemberian makanan karakteristik dan peran glutathione S-transferase (GST) dan
prekursor, elisitasi, penghambatan metabolisme, transpor AVI dalam transportasi dan penyimpanan antosianin, masing-
terarah, dan anal ysis strain, profil dinamis mRNA diekspresikan masing, dalam sel anggur. Kami telah mengisolasi AVI dan
100% 100%
80% 80%
60% 60%
40% 40%
20% 20%
0% 0%
0 5 10 15 20 25 0 5 10 15 20 25
Waktu setelah induksi (h) Waktu setelah induksi (h)
Cahaya + DAN Cahaya + DAN

Kontrol Kontrol
(sebuah) (b)
120 % 100%
100% 80%
80%
60%
60%
40%
40%
20%
20%
0%
0%
0 10 20 0 5 10 15 20 25

Kontrol Kontrol
(c) (d)
120 % 120 %
100% 100%
80% 80%
60% 60%
40% 40%
20% 20%
0% 0%
0 5 10 15 20 25 0 5 10 15 20 25

Kontrol Kontrol
(dan) (f)
Gambar 5. Kuantifikasi level mRNA untuk enam gen biosintesis antosianin dalam kultur sel V vinifera tumbuh di bawah kegelapan (kontrol),
dan di bawah cahaya 8000 Lux dengan elisitasi JA pada hari ke 0. RNA diperiksa dengan klon cDNA V vinifera untuk (a) CHS, (b) CHI, (c)
F3H, (d) DFR, (e) LDOX, dan (f) UFGT. RNA ribosom digunakan sebagai kontrol internal. Gambar Northern blot divisualisasikan oleh
Phosphorimager, dikoreksi dengan rRNA masing-masing, dan dikuantifikasi menggunakan perangkat lunak ImageQuant.
mengkarakterisasi mereka menggunakan pendekatan pasca- selektivitas untuk antosianin terasilasi (Gambar 6b dan 6c).
genomik terintegrasi seperti yang disebutkan di atas. Hasil awal Diharapkan penelitian ini akan memberikan tambahan tar get
menunjukkan AVI dapat terdiri dari beberapa spesies protein dan memiliki
untuk rekayasa metabolisme yang rasional [2].
270 Wei Zhang dkk 2004:5 (2004)
PENGAKUAN
OCH3 Penelitian ini didukung secara finansial oleh CRC for

OH Bioproducts, Australia, dan National Natural Science Foundation
+
of China (No 20176058).
KE HAI
OH
Dari Glc REFERENSI

OH Coum
[1] Hadacek F. Metabolit sekunder sebagai sifat tanaman:
Transportasi (GST) antosianin
penilaian saat ini dan perspektif masa depan. CRC Crit
POMPA Rev Plant Sci. 2002;21(4):273–322.
Penyimpanan
[2] Zhang W, Curtin C, Franco C. Menuju manipulasi
(AVI) peristiwa pasca-biosintesis dalam metabolisme sekunder
kultur sel tumbuhan. Teknologi Mikrob Enzim.
2002;30(6):688–696.
Degradasi
[3] Zhang W, Curtin C, Kikuchi M, Franco C. Integrasi asam
(kimia, enzimatik)
jasmonat dan iradiasi cahaya untuk peningkatan
biosintesis antosianin dalam kultur suspensi Vitis vinifera .
Tanaman Sci. 2002;162(3): 459–468.
(sebuah)
[4] Kikuchi M. Regulasi transkripsi enzim yang terlibat dalam

biosintesis antosianin dalam kultur suspensi sel Vitis
vinifera. Tesis master, Universitas Flinders, Adelaide,
Australia Selatan, Australia, 2001.
43% 57% Asilasi
[5] Curtin C, Zhang W, Franco C. Memanipulasi komposisi
10 Nonasilasi
antho cyanin dalam kultur suspensi Vitis vinifera dengan
elisitasi dengan asam jasmonat dan iradiasi cahaya.
5 Bioteknologi Lett. 2003; 25(14):1131–1135.
saya
[6] Conn S, Zhang W, Franco C. Inklusi vakum antosianik

0 (AVI) secara selektif mengikat antosianin terasilasi
dalam kultur suspensi Vitis vinifera L (selentingan).
Bioteknologi Lett. 2003;25(11):835–839.
5 10 15 20 25 30
[7] Springob K, Nakajima J, Yamazaki M, Saito K. Kemajuan
Min
terbaru dalam biosintesis dan akumulasi antosianin. Nat
(b) Prod Rep.2003;20(3):288–303.
[8] Roberts SC, Shuler ML. Kultur sel tumbuhan skala besar.
Curr Opin Biotechnol. 1997;8(2):154–159.
[9] Zhang W, Furusaki S. Produksi anthocyanin oleh kultur sel
tanaman. Bioteknologi Bioproses Eng. 1999;4 (4):231–
13,9% 86,1% Asilasi
6 252.
Nonasilasi ¨
[10] Dornenburg H, Knorr D. Strategi untuk peningkatan
4
saya
produksi metabolit sekunder dalam kultur sel tumbuhan.
2 Teknologi Mikrob Enzim. 1995;17(8): 674–684.
0
¨
[11] Oksman-Caldentey K, Hakkinen S, Goossens A, dkk.
Metabolit sekunder di era pasca-genomik.
Dalam: Vasil IK, ed. Bioteknologi Tumbuhan 2002 dan Selanjutnya.
5 10 15 20 25 30
Dordrecht: Penerbit Akademik Kluwer; 2003:465– 468.
Min
(c) [12] Willmitzer L. Tentang garis lurus dan persimpangan jalan

yang rumit: metabolisme adalah jaringan. Dalam: Vasil
IK, ed. Bioteknologi Tumbuhan 2002 dan Selanjutnya.
Gambar 6. (a) Skema peristiwa pasca-biosintesis antosianin. Dordrecht: Penerbit Akademik Kluwer; 2003:81.
(b) profil HPLC seluruh sel. (c) Profil HPLC dari ekstrak AVI
dari garis sel anggur pada 520 nm. Spesies yang tidak diasilasi [13] Falcone DL, Rogers DT, Yun KY, dkk. Strategi genomik
dan dialasi (p-coumaroylated) dikelompokkan dan persentase fungsional untuk mengidentifikasi gen yang mengatur
usia rata-rata dari total luas puncak ditunjukkan (n = 4). mAU = produksi metabolit aktif secara biologis pada tanaman.
mili unit serapan. Dalam: Vasil IK, ed. Bioteknologi Tumbuhan 2002
dan seterusnya. Dordrecht: Penerbit Akademik

Kluwer; 2003:469–472.
ÿ
[14] Goossens A, Hakkinen ST, Laakso I, dkk. Pendekatan

genomik fungsional menuju pemahaman metabolisme
sekunder dalam sel tumbuhan. Proc Natl Acad Sci
USA. 2003;100(14):8595–8600.
[15] Fritze K, aktivasi Walden R. Gene dengan penandaan
T-DNA. Metode Mol Biol. 1995;44:281–294.
[16] Konstantinov KB. Pemantauan dan kontrol keadaan
fisiologis kultur sel. Bioteknologi Bioeng. 1996;52(2):271–
289.
[17] Lamboursain L, Jolicoeur M. Produksi in vitro metabolit
sekunder oleh sel tanaman yang dibudidayakan: peran
penting dari status gizi sel. Dalam: Vasil IK, ed.
Bioteknologi Tumbuhan 2002 dan Selanjutnya.
Dordrecht: Penerbit Akademik Kluwer; 2003:491–495.

Email: wei.zhang@flinders.edu.au
Faks: +61 8 8204 4101; Telp: +61 8 8204 5053
ARTIKEL PENELITIAN
Pengaruh Ekstrak Biji Anggur dan Quercetin

pada Kardiovaskular dan Endotel
Parameter pada Subyek Berisiko Tinggi
Peter M. Cliftonÿ
Ilmu Kesehatan dan Gizi CSIRO, CSIRO, PO Box 10041, Adelaide BC, SA 5000, Australia
Ekstrak biji anggur (GSE) memiliki aktivitas antioksidan in vitro tetapi apakah bekerja secara in vivo atau tidak tidak jelas. Dalam percobaan crossover
yang sepenuhnya acak dengan periode pengobatan 4 minggu pada 36 pria dan wanita dengan risiko vaskular di atas rata-rata, kami bertujuan untuk
menunjukkan bahwa 2 g/hari GSE (1 g polifenol) saja, atau dengan 1 g/hari quercetin tambahan dalam yoghurt, secara menguntungkan mengubah
fungsi vaskular, fungsi en dothelial, dan tingkat kerusakan oksidatif dibandingkan dengan yoghurt kontrol. GSE sendiri meningkatkan dilatasi yang
dimediasi aliran yang ditentukan secara ultrasonik sebesar 1,1% mutlak dibandingkan dengan kontrol. Tidak ada efek kombinasi GSE dengan quercetin.
Tidak ada ukuran darah atau urin lain yang diubah. Dengan demikian polifenol yang cukup dari GSE tampaknya diserap untuk mempengaruhi
produksi oksida nitrat endotel, dan GSE memiliki potensi untuk mempengaruhi fungsi vaskular.
LATAR BELAKANG dalam dosis 50-100 mg dengan anjuran minum 1 kapsul/hari.

Bahan ini telah tersedia selama bertahun-tahun dan dianggap
Polifenol anggur telah didalilkan memiliki banyak efek aman dan tidak beracun.
menguntungkan [1, 2, 3, 4] tetapi sebagian besar data ini Quercetin, sebuah flavanoid yang menonjol pada bawang
diperoleh secara in vitro [5, 6]. Ekstrak biji anggur (GSE) merah dan apel, secara epidemiologis dikaitkan dengan
mengandung konsentrasi tinggi dari banyak polifenol dalam kulit perlindungan dari penyakit arteri koroner dan kanker [13, 14]
anggur, khususnya proanthocyanidins, yang juga ditemukan dan sekarang tersedia tanpa resep dalam bentuk dosis 300-500
dalam anggur merah. Teh hijau juga mengandung polifenol, mg, dengan dosis harian hingga 1500mg. Tidak ada uji klinis di
khususnya katekin, yang diyakini memediasi banyak efek area kardiovaskular yang telah dilakukan dengan quercetin
kemopreventif kanker [7]. Teh hijau secara epidemiologis meskipun telah terbukti menghambat adhesi monocyte ke sel
dikaitkan dengan perlindungan dari kanker dan penyakit jantung endotel [15]. Ini diyakini sebagai langkah pertama dalam proses
[8]. Meskipun ada banyak bukti in vitro bahwa polifenol memiliki aterosklerosis. Satu percobaan menggunakan 4 g/hari tidak
efek antioksidan dan antikanker, ada kelangkaan percobaan menunjukkan efek pada lipid, tekanan darah, atau aktivasi
pada hewan dan manusia [9]. trombosit pada sukarelawan normal [16].
Dalam studi ini kami berhipotesis bahwa 2 g/hari GSE akan
Data CSIRO (tidak dipublikasikan) menunjukkan bahwa GSE meningkatkan flow-mediated dilatation (FMD) dan ini mungkin
menghambat oksidasi low-density lipoprotein (LDL) dan dimediasi oleh perubahan produksi NO.
mengurangi penyempitan cincin aorta secara in vitro. Ekstrak Kami juga berhipotesis bahwa GSE dan quercetin akan
oligomer proan thocyanidins dari sumber lain seperti Pycnogenol berfungsi sebagai antioksidan dalam plasma, mengurangi
dari kulit kayu pinus meningkatkan produksi oksida nitrat (NO) tingkat F2 isoprostane dalam urin, dan mungkin mempengaruhi
dari endotelium vaskular secara in vitro [10]. Ekstrak proantho tingkat LDL teroksidasi dalam plasma dan, sekundernya,
cyanidin biji anggur (GSPE, kadar 0,1%) telah terbukti mengurangi aktivasi endotelium. Ini akan dinilai dengan
mengurangi aterosklerosis pada kelinci yang diberi makan perubahan adhesi, pembekuan, dan molekul fibrinolitik.
kolesterol sebesar 30% - 50% mungkin dengan menghambat
oksidasi LDL karena kadar lipid tidak berubah sementara kadar
METODE
malondialdehida di aorta (indeks oksidasi lipid) berkurang
sebesar 25% [11]. Proanthocyanidins plasma tidak terdeteksi,
Subyek
menunjukkan bahwa penyerapannya sangat rendah. Tikus yang
Empat
diberi dosis sebagai bolus tunggal memang memiliki kadar yang rendah (0,5 µM) puluh
tetapi tiga
dapatpria dan wanita dengan risiko pembuluh
dideteksi.
Dosis GSPE setara dengan dosis 3,5 g untuk manusia seberat darah di atas rata-rata karena kolesterol tinggi, merokok, atau
70 kg [12]. Sebagian besar bentuk GPSE yang dijual bebas tekanan darah tinggi direkrut oleh iklan publik

2004:5 (2004) GSE dan Fungsi Endotel 273
dan disaring di Unit Riset Klinis, Ilmu Kesehatan dan Nutrisi Semua tes lainnya adalah enzyme linked immunosorbent
CSIRO, Adelaide. Tidak ada kriteria eksklusi atas dasar assays (ELISA): VWF (Helena Laboratories, Melbourne Australia),
pengobatan atau konsumsi alkohol. Subjek dikeluarkan jika Coaliza tPA (Chromogenix, Swedia), Coaset tPA (Chromogenix),
massa tubuh dalam dex (BMI) mereka lebih besar dari 35 atau Coaliza PAI-1 (Chromogenix), Coatest PAI-1 (Chromogenix) ,
jika mereka menderita diabetes mellitus, gangguan metabolisme LDL teroksidasi: LDL teroksidasi Mercodia ELISA (Mercodia,
yang tidak diobati seperti penyakit tiroid atau adrenal, penyakit Swedia), SVCAM1 (Im munokontact, Swedia), ICAM1
hati atau ginjal, atau penyakit arteri koroner yang tidak stabil. (Immunokontact), CRP (Alpha Diagnostic International, Texas),
Semua subjek memberikan persetujuan tertulis dan terinformasi 8-isoprostane (8- iso PGF2ÿ) (Cayman Chemical), alat uji nitrat/
dan protokol disetujui oleh Komite Etika Manusia CSIRO. nitrit (Cayman Chemical).
Uji coba berlangsung selama 12 minggu dan terdiri dari 3

periode empat minggu dari crossover acak tersamar ganda Analisis statistik
dengan kontrol dan bahan aktif (1 g GSE dari Tarac +/ ÿ 0,5 g Analisis varian ukuran berulang dihitung dengan jenis
quercetin) dalam 240 g yoghurt yang diminum dua kali sehari. yoghurt sebagai faktor dalam subjek dan dengan jenis kelamin
Sampel darah dan tindakan kepatuhan vaskular diambil pada dan ketertiban sebagai faktor antara subjek.
awal dan pada akhir setiap periode. Diet latar belakang adalah Di mana ada efek pengobatan yang signifikan yang terdeteksi
diet rendah polifenol, rendah quercetin. Ini dicapai dengan oleh pengukuran berulang, uji t Student berpasangan digunakan
membatasi teh dan kopi hingga maksimal 2 cangkir per hari, untuk mencari perbedaan. Korelasi bivariat dilakukan dengan
membatasi apel menjadi satu cangkir per hari, dan melarang menggunakan koefisien korelasi Pearson. Analisis dilakukan
anggur merah dan bawang merah selama 12 minggu. Langkah- dengan SPSS 10.0 untuk Windows (SPSS Inc, Chicago, Ill).
langkah termasuk PMK menggunakan ul trasound, kepatuhan Signifikansi ditetapkan pada P<.05.
vaskular menggunakan analisis pulsa radial (Hypertension
Diagnostics Inc/PulseWave CR-2000), lipid puasa, LDL
HASIL DAN DISKUSI
teroksidasi, nitrat (untuk menilai efek antioksidan), protein reaktif
C (CRP), von Willebrand faktor (VWF), aktivator plasminogen
Dua belas wanita dan dua puluh empat pria menyelesaikan
tipe jaringan (tPA), penghambat aktivator plasminogen 1 (PAI-1),
penelitian dan satu wanita tambahan melewatkan fase terakhir
molekul adhesi sel vaskular (VCAM1), dan molekul adhesi antar
sel 1 (ICAM-1). Urin dua puluh empat jam dikumpulkan untuk pengobatan. Enam subjek mengundurkan diri setelah dimulainya
dan 6 mengundurkan diri sebelum dimulainya.
mengukur lipid teroksidasi isoprostan F2ÿ.
Profil risiko subjek adalah sebagai berikut: 6 subjek memiliki
tekanan darah tinggi (5 dalam pengobatan), 3 adalah perokok,
FMD dinilai di arteri brakialis setelah penyumbatan aliran
dan 31 memiliki kolesterol tinggi (lebih dari 5 mmol/L pada
darah di lengan bawah dengan manset tekanan darah 200 mmHg
tusukan jari). Dua sukarelawan yang menggunakan atorvastatin
selama 5 menit. Respon pembuluh darah 5 menit setelah
untuk menurunkan kolesterol menghentikan pengobatan sebelum
pemberian 100 µg gliseril trinitrat (GTN) secara sublingual juga
memulai uji coba. Kolesterol rata-rata adalah 6,5 mmol/L (kisaran
dinilai [17].
4,68 hingga 8,63), usia rata-rata 58 tahun (kisaran 34–70), berat
badan 83,1 Kg (63,1 kg hingga 118,7 kg), IMT 28,4 (19,8–37,5).
Lipid serum
Tekanan darah rata-rata adalah 127 mm Hg sistolik dan 74 mm
Lipid serum (kolesterol total, trigliserida, kolesterol HDL) Hg di astolik.
diukur pada 2 hari berturut-turut pada garis dasar dan pada akhir
setiap periode intervensi 3 minggu. Sampel darah vena (20 mL) Tekanan darah / kepatuhan vaskular
dimasukkan ke dalam tabung polos setelah puasa semalam
Ada kecenderungan yang lemah (P<0,05) untuk menurunkan
selama 12 jam. Serum dipisahkan dengan sentrifugasi kecepatan
tekanan darah sistolik selama masa percobaan dengan
rendah pada 600 g selama 10 menit pada suhu 5ÿC (sentrifugal
penurunan dari 127 mm Hg pada awal menjadi 124 mm Hg pada
GS-6R; Beckman, Fullerton, Calif) dan dibekukan pada suhu
minggu ke-12. Hal ini biasa terjadi pada uji klinis di tekanan
ÿ20ÿC. Di akhir penelitian, semua sampel dari setiap subjek
darah mana yang diukur. Tidak ada perubahan parameter
dianalisis dalam rangkaian analitik yang sama.
vaskular dengan pengobatan (lihat Tabel 1).
Kolesterol total dan triasilgliserol diukur pada penganalisis
sentrifugal Cobas-Bio (Roche Diagnostica, Basel, Swiss)
Dilatasi yang dimediasi aliran setelah pelepasan
menggunakan kit enzimatik (Hofmann-La Roche Diagnostica, kompresi dan dilatasi GTN
Basel, Swiss) dan sera kontrol standar. Konsentrasi plasma HDL-
kolesterol diukur setelah presipitasi apoB yang mengandung GSE saja menghasilkan dilatasi 1,1% lebih besar mutlak
lipoprotein dengan PEG 6000. Koefisien variasi untuk masing- dibandingkan dengan kontrol (P<0,05) tetapi penambahan
masing lipid kurang dari 5%. Modifikasi persamaan Friedewald quercetin tampaknya meniadakan ini sepenuhnya.
berikut untuk konsentrasi molar digunakan untuk menghitung Dilatasi yang diinduksi GTN tidak dipengaruhi oleh GSE tetapi
kolesterol LDL dalam mmol/L: kolesterol total—(triasilgliserol/ quercetin lagi tampaknya mengurangi respon dibandingkan
2,18)—kolesterol HDL. dengan baseline (P<0,05), tetapi tidak dibandingkan dengan
kontrol.
274 Peter M. Clifton 2004:5 (2004)
Tabel 1. Ukuran kardiovaskular yang dihasilkan oleh instrumen kepatuhan HDI; rata-rata 35 ukuran lengkap ± SD.
Garis dasar GSE GSE/kuersetin Kontrol
Tekanan darah sistolik (mmHg) 127 ± 15 124 ± 14 125 ± 11 124 ± 13

Tekanan darah diastolik (mmHg) 74 ± 9 73 ± 8 73 ± 10 73 ± 9
Rata-rata BP (mmHg) 94 ± 13 91 ± 18 94 ± 12 91 ± 12
Tekanan nadi (mmHg) 53 ± 9 51 ± 8 51 ± 7 51 ± 8
Denyut nadi (detak/menit) 58 ± 8 59 ± 8 58 ± 7 57 ± 7
Perkiraan waktu ejeksi jantung (ms) 335 ± 25 337 ± 24 336 ± 23 333 ± 36
Taksiran stroke volume (mL) 93 ± 13 92 ± 12 93 ± 12 94 ± 12
Estimasi stroke volume index (mL/m2) 47 ± 5 47 ± 4 47 ± 4 47 ± 6
Perkiraan curah jantung (L/menit) 5,4 ± 0,7 5,5 ± 0,7 5,5 ± 0,7 5,4 ± 0,7
Estimasi indeks curah jantung (L/min/m2) 2,8 ± 0,2 2,7 ± 0,3 2,8 ± 0,3 2,7 ± 0,2
Indeks elastisitas arteri besar 17,5 ± 4,6 18,4 ± 4,8 18,7 ± 6,1 18,2 ± 4,7
Indeks elastisitas arteri kecil 7,4 ± 3,8 7,4 ± 3,4 7,9 ± 3,9 7,4 ± 3,2
Resistensi vaskular sistemik 1364 ± 275 1345 ± 229 1364 ± 221 1352 ± 209
Total impedansi vaskular 131 ± 32 124 ± 33 125 ± 35 127 ± 35
Tabel 2. Dilatasi yang dimediasi aliran yang diukur dengan ultrasonografi. N = 35, berarti SD. Perlakuan dengan superskrip berbeda berbeda pada P<.05.
Garis dasar GSE GSE/kuersetin Kontrol
Prekompresi cmÿ2 44,3 ± 6,3 45,1 ± 6,4 45,9 ± 7,2 45,5 ± 7,3
Postkompresi 46,2 ± 5,8 47,4 ± 6,5 47,6 ± 7,5 47,3 ± 7,3
(n = 30) (n = 35) (n = 32) (n = 36)
Mengubah 1,91,2 ± 1,3 2,31 ± 1,4 1,72 ± 1,0 1,82 ± 1,3
(4,3%) (5,1%) (3,7%) (4,0%)

Pra-GTN 44,8 ± 7,1 45,8 ± 7,1 46,9 ± 7,5 46.2 ± 7.1
Pasca-GTN 52,1 ± 6,8 52,7 ± 6,9 52,9 ± 7,3 52,8 ± 7,0
(n = 38) (n = 30) (n = 29) (n = 31)
Mengubah 7,31 ± 2,4 6.91,2 ± 2.3 6,02 ± 3,0 6.51,2 ± 1.8
(16,3%) (15,1%) (12,8%) (14,1%)
Tabel 3. Pengaruh GSE dan GSE/quercetin pada rata-rata lipid serum (mmol/L) ± SD.
Periode 1 dasar Periode 2 Periode 3 Periode 4 GSE GSE/kuersetin Kontrol

Total kolesterol 6,57 ± 1,07 6,63 ± 1,06 6,59 ± 0,99 6,58 ± 1,06 6,63 ± 0,93 6,64 ± 1,10 6,64 ± 1,05
Trigliserida 1,80 ± 0,80 1,98 ± 1,06 1,90 ± 0,83 1,73 ± 0,88 1,88 ± 0,92 1,88 ± 0,85 1,92 ± 1,03
kolesterol HDL 1,18 ± 0,31 1,18 ± 0,31 1,19 ± 0,34 1,16 ± 0,33 1,18 ± 0,33 1,16 ± 0,34 1,15 ± 0,31
LDL kolesterol 4,59 ± 0,98 4,56 ± 0,93 4,55 ± 0,93 4,65 ± 0,98 4,61 ± 0,83 4,62 ± 1,00 4,63 ± 0,99
Ini menunjukkan bahwa GSE secara menguntungkan Protein C-reaktif

memengaruhi en dothelium yang meningkatkan produksi NO,
CRP adalah protein fase akut yang diproduksi oleh hati sebagai
melepaskan atau memperlambat penghancuran oksidatifnya, tetapi
respon terhadap kerusakan jaringan atau inflamasi dan dapat
quercetin tampaknya mengganggu hal ini. Diketahui bahwa quercetin
meningkat 500 kali lipat secara akut [22]. Itu juga meningkat tetapi
menghambat pelepasan NO yang diinduksi LPS dalam makrofag
ke tingkat rendah oleh kondisi peradangan tingkat rendah seperti
RAW 264.7 [18] dan dapat bertindak sebagai prooksidan dalam aterosklerosis dan dapat digunakan untuk memprediksi kejadian
sistem lain [19, 20, 21] pada level rendah dan tinggi (lihat Tabel 2).
klinis [23]. Statin yang menurunkan kolesterol dengan menghambat
sintesis di hati juga menurunkan CRP dan mekanismenya tampaknya
Lipid serum
tidak berhubungan dengan tingkat penurunan kolesterol [24]. Ini
Tidak ada perubahan yang dicatat tetapi tidak ada yang mungkin terkait dengan aktivitas antioksidannya atau aktivitas
diharapkan. Subjek berisiko tinggi terkena penyakit kardiovaskular antiinflamasi langsung. Jadi dalam penelitian ini digunakan untuk
berdasarkan kolesterol rata-rata yang tinggi (lihat Tabel 3). memeriksa potensi efek toksik dan untuk
Tabel 4. Pengaruh GSE dan GSE/quercetin pada CRP plasma, nitrat/nitrit, dan molekul adhesi. N = 35, berarti SD.
Periode 1 dasar Periode 2 Periode 3 Periode 4 GSE GSE/kuersetin Kontrol

— 3,63 ± 5,01 3,48 ± 4,19 3,69 ± 4,17 3,40 ± 3,53 3,63 ± 5,10 3,73 ± 4,64
CRP (mg/L)
Nitrat (µmol/L) 31.1 ± 12.7 28,0 ± 11,0 36,9 ± 36,7 30,0 ± 13,2 35,6 ± 36,7 30,5 ± 12,4 28,4 ± 12,7
— 0,49 ± 0,10 0,49 ± 0,11 0,48 ± 0,11 0,49 ± 0,11 0,48 ± 0,11 0,49 ± 0,11
ICAM1 (µg/mL)
— 0,99 ± 0,28 0,99 ± 0,22 1,00 ± 0,24 0,98 ± 0,20 0,98 ± 0,26 1,02 ± 0,27
VCAM1 (µg/mL)
Tabel 5. Pengaruh GSE dan GSE/quercetin pada faktor pembekuan dan fibrinolitik. N = 35, berarti SD.
Garis dasar Periode 2 Periode 3 Periode 4 GSE GSE/kuersetin Kontrol
VWF (%) — 115,58 ± 39,12 101,66 ± 35,82 102,37 ± 35,55 109,11 ± 36,06 104,50 ± 39,58 106,00 ± 36,40
PAI-1 ng/mL — 50,47 ± 33,51 45,22 ± 21,41 49,27 ± 31,72 50,47 ± 35,77 48,58 ± 29,24 45,90 ± 21,41
Aktivitas PAI-1 16,45 ± 9,72 16.27 ± 9.08 16.28 ± 8.05 16.28 ± 10.37 15.39 ± 9.30 16,78 ± 10,05 16,76 ± 8,13
tPA (ng/mL) — 7.235 ± 3.396 6.636 ± 2.350 6.857 ± 2.378 6.929 ± 2.686 6.908 ± 2.835 6.891 ± 2.766
Aktivitas tPA 1,432 ± 1,204 1,295 ± 0,865 1,140 ± 0,715 1,269 ± 1,011 1,261 ± 0,822 1,146 ± 0,764 1,297 ± 1,011
Aktivitas tPA/PAI-1 20,37 ± 21,63 20,91 ± 21,15 24,46 ± 24,06 27,11 ± 32,45 24,12 ± 27,75 26,05 ± 29,90 23,04 ± 21,3 tPA/PAI-1 massa — 0,205 ± 0,348 0,188
± 0,483 0,194 ± 0,648 0,187 ± 0,119 0,206 ± 0,179 0,195 ± 0,138
menunjukkan potensi GSE untuk bertindak seperti statin di dinding rusak oleh aterosklerosis, diabetes, resistensi insulin, atau hipertensi
pembuluh darah. Tidak ada perbedaan yang ditemukan antara [36, 37, 38]. Aktivator plasminogen tipe jaringan dilepaskan dari sel
periode atau perawatan. Satu orang dikeluarkan karena ia memiliki endotel untuk menginisiasi proses penguraian bekuan dalam
infeksi pernapasan yang membutuhkan antibiotik yang menyebabkan pembuluh dengan mengaktifkan plasminogen menjadi plasmin yang
peningkatan tajam kadar CRP (lebih dari 100 kali lipat) (lihat Tabel 4). kemudian memecah fibrin.
Disfungsi endotel mengganggu pelepasan tPA aktif [39] dan dikaitkan
Nitrat/ Nitrit
dengan peningkatan pelepasan PAI 1 [40]. GSE dan GSE/quercetin
Nitrat plasma diukur sebagai pengganti dalam dex produksi tidak berpengaruh pada VWF, tPA, atau PAI-1 dan tidak ada efek
NO [25, 26]. NO adalah vasodilator endogen yang diproduksi oleh waktu. Dalam [41] de Maat et al tidak menemukan efek teh hitam
sel endotel. Polifenol anggur merah meningkatkan vasorelaksasi atau hijau pada salah satu penanda yang kami ukur, tetapi polifenol
dan produksi NO in vitro [27, 28]. Etanol sendiri juga meningkatkan anggur telah ditunjukkan pada sel endotel manusia yang dikultur
produksi NO [29]. Tidak ada perbedaan yang ditemukan baik [42] untuk meningkatkan produksi tPA (lihat Tabel 5).
berdasarkan periode maupun dengan perlakuan dengan atau tanpa
outlier yang nilainya naik 6 kali lipat pada periode GSE. Namun, diet
Isoprostan urin
nitrit dan nitrat dapat mengacaukan ukuran ini dengan mudah
sehingga tidak adanya perubahan tidak berarti bahwa produksi NO 8-Isoprostane (8-iso PGF2ÿ) adalah produk akhir stabil yang
tidak meningkat (lihat Tabel 4). terbentuk dari asam arakidonat melalui aksi radikal bebas dan dapat
diukur dalam plasma dan urin. Tingkat diyakini mewakili tingkat stres
oksidatif dalam lipid [43, 44].
Molekul adhesi
Dalam percobaan ini, kami melihat tidak ada perubahan dalam
ICAM1 dan VCAM1 adalah molekul yang mengikat sel darah iso prostan urin baik absolut atau dinyatakan dalam kaitannya
putih ke endotelium dan mencerminkan keadaan kesehatan dengan kreatinin untuk menyesuaikan pengumpulan urin yang tidak
endotelium, terutama dalam hubungannya dengan aterosklerosis lengkap (lihat Tabel 6). Nilai yang diukur dalam penelitian ini berada
[30, 31]. Jika endotel rusak oleh lipid teroksidasi, asap rokok, atau dalam kisaran yang dijelaskan untuk subjek dengan diabetes tipe 2.
tekanan darah tinggi, penanda ini meningkat [32]. Antioksidan Vita min E telah terbukti mengurangi prostan iso plasma dan urin
mungkin diharapkan untuk menurunkan tingkat penanda ini (vitamin dalam beberapa penelitian [45, 46] tetapi tidak pada yang lain [47].
E dalam beberapa penelitian [33]) seperti halnya statin yang Subjek dengan diabetes tipe 2 mengalami peningkatan (dua kali
menurunkan tingkat lipid plasma [34]. Polifenol dari beri biru dan lipat) kadar isoprostan urin dibandingkan dengan kontrol dan turun
merah mengurangi molekul adhesi dalam sel endotel secara in vitro sebesar 32% dengan pengobatan dengan vitamin E [48]. Ide et al
[35]. [49] menemukan bahwa pada pria muda yang sehat vitamin E dapat
GSE dan GSE/quercetin tidak berpengaruh, juga tidak ada efek menurunkan kadar isoprostan urin sebesar 48%. Biji-bijian utuh
waktu (lihat Tabel 4). telah ditemukan menurunkan isoprostan sebesar 28% dalam satu
penelitian [50], seperti halnya buah dan sayuran dalam penelitian
Faktor pembekuan dan fibrinolitik
lain [51], meskipun van den Berg tidak menemukan efek buah dan
VWF memediasi pengikatan trombosit ke pembuluh darah sayuran [52]. Polifenol teh tidak mengubah isoprostan [53] sementara
yang cedera dan melindungi faktor koagulasi VIII. Ini diproduksi di anggur merah yang di-dealkohol mengurangi kadar dalam plasma
endotelium dan dilepaskan ketika endotelium dengan kecenderungan dalam urin [54].
276 Peter M. Clifton 2004:5 (2004)
Tabel 6. Pengaruh GSE dan GSE/quercetin pada isoprostan urin (iso PGF2ÿ). N = 35, berarti SD.
Periode 2 Periode 3 Periode 4 GSE GSE/kuersetin Kontrol
Isoprostan (pg/mL) 617 ± 348 713 ± 507 709 ± 578 668 ± 407 741 ± 644 630 ± 362
Kreatinin (mmol/L) 11,59 ± 4,92 11,37 ± 5,51 12,72 ± 5,46 11,59 ± 4,92 11,69 ± 5,23 12,72 ± 5,46
Isoprostan/kreatinin pg/mg 529 ± 392 561 ± 327 519 ± 328 534 ± 362 562 ± 416 513 ± 254
Ekskresi isoprostan ng/hari 1178 ± 986 1243 ± 1220 1107 ± 743 1147 ± 407 1270 ± 1348 1112 ± 694
Tabel 7. Pengaruh GSE dan GSE/quercetin pada kadar LDL teroksidasi U/L; N = 35, berarti SD.
Periode 2 Periode 3 Periode 4 GSE GSE/kuersetin Kontrol

94973±26906 94637±24862 94359±31705 95284 ± 24563 99142 ± 22728 98383 ± 22973
Meskipun hasilnya negatif kecuali untuk perubahan FMD, pada angiografi [58]. Statin meningkatkan mortalitas dan salah
namun tidak sesuai dengan literatur saat ini yang hasilnya tidak satu mekanismenya mungkin melalui peningkatan PMK [59].
seragam. Mereka juga kompatibel dengan kurangnya perubahan Subjek dengan vasodilatasi lengan bawah yang diinduksi
yang diamati pada tingkat LDL teroksidasi (lihat Tabel 7) dalam asetilkolin rendah lebih cenderung mengalami kejadian akut [60].
penelitian ini. Tidak ada data yang dipublikasikan tentang
pengukuran LDL teroksidasi dalam plasma menggunakan metode
REFERENSI
ini.
Tidak ada perubahan dalam kimia urin, hematologi,
[1] St Leger AS, Cochrane AL, Moore F. Faktor-faktor yang
pembekuan, atau biokimia dengan GSE atau GSE/quercetin.
terkait dengan kematian jantung di negara maju dengan
Ada beberapa perubahan terkait waktu pada urea dan kreatin
referensi khusus untuk konsumsi anggur. Lanset.
klorida dan bikarbonat yang mungkin disebabkan oleh cuaca yang 1979;1(8124):1017–1020.
lebih hangat (data tidak ditampilkan).
[2] Renaud S, de Lorgeril M. Anggur, alkohol, trombosit, dan
paradoks Prancis untuk penyakit jantung koroner.
KESIMPULAN Lanset. 1992;339(8808):1523–1526.
[3] Aviram M, Fuhrman B. Flavonoid polifenol dalam menghambat
Kami telah menunjukkan bahwa polifenol antioksidan yang oksidasi LDL yang dimediasi makrofag dan melemahkan
cukup dari GSE diserap untuk memengaruhi FMD tetapi tidak ada aterogenesis. Aterosklerosis. 1998;137 (suppl):S45–S50.
fungsi endotel lain yang terpengaruh. Diketahui dari penelitian tikus
dan kelinci bahwa penyerapan proanthycyanidins dari GSE sangat [4] Das DK, Sato M, Ray PS, dkk. Kardioproteksi anggur merah:
terbatas. Dalam satu studi tikus [55], setelah memberi makan 0,25 peran antioksidan polifenol. Obat Exp Klinik Res.
g/kg GSE (setara dengan memberi makan lebih dari 20 g untuk 1999;25(2-3):115–120.
manusia), tingkat dimer 18 µg/mL dicapai setelah 1 jam. Pada [5] Frankel EN, Kanner J, JB Jerman, Taman E, Kin sella JE.
kelinci, meskipun dosis setara tersebar sepanjang hari, tidak ada Penghambatan oksidasi lipoprotein densitas rendah
thocyanidins proan yang terdeteksi, meskipun dalam model manusia oleh zat fenolik dalam anggur merah. Lanset.
peroksidasi lipid dan aterosklerosis aorta berkurang [11]. Studi in 1993;341(8843):454–457.
vitro sering menggunakan kadar 10–50 µg/mL [6] yang 10–20 kali [6] Corder R, Douthwaite JA, Lees DM, dkk.
lebih tinggi daripada yang mungkin dicapai dalam studi manusia. Sintesis endotelin-1 dikurangi dengan anggur merah.
Quercetin diketahui dapat diserap dan 1 g/hari dapat menghasilkan Alam. 2001;414(6866):863–864.
kadar 23 kali lebih tinggi daripada kapsul kontrol. Meskipun tingkat [7] Chung FL, Schwartz J, Herzog CR, Yang YM. Teh dan
ini dan tindakan antioksidan in vitro yang dapat dibuktikan, tidak pencegahan kanker: studi pada hewan dan manusia. J Nutr.
memiliki efek pada trombosit atau lipid [56]. Meskipun ekstrak 2003;133(10):3268S–3274S.
anggur merah menghambat produksi endotelin (ET-1), baik [8] Hollman PC, Feskens EJ, Katan MB. Flavonol teh dalam
polifenol anggur merah terisolasi (quercetin, resveratrol, D-, L- penyakit kardiovaskular dan epidemiologi kanker.
catechin, D-, L-epicatechin) maupun anthocyanin delphinidin, Proc Soc Exp Biol Med. 1999;220(4):198–202.
pelargonidin, cyanidin, peonidin, petunidin, atau malvidin [9] Higdon JV, Frei B. Teh katekin dan polifenol: efek kesehatan,
mempengaruhi produksi ET-1 [6]. metabolisme, dan fungsi antioksidan. Crit Rev Food Sci Nutr.
2003;43(1):89–143.
[10] Fitzpatrick DF, Bing B, Rohdewald P. Endothelium tergantung
Meskipun belum ada data yang menghubungkan gangguan efek vaskular Pycnogenol. J Cardio vasc Pharmacol.
PMK dengan kejadian jantung pada subjek tanpa penyakit koroner, 1998;32(4):509–515.
pasien dengan penyakit koroner yang memiliki PMK yang sangat [11] Yamakoshi J, Kataoka S, Koga T, Ariga T.
erat memiliki lebih banyak kejadian [57]. Subjek dengan PMK Ekstrak kaya proanthocyanidin dari biji anggur melemahkan
berpasangan lebih cenderung memiliki penyakit koroner perkembangan aterosklerosis aorta
pada kelinci yang diberi makan kolesterol. Aterosklerosis. kadar nitrat dalam plasma dan urin—apa yang
1999;142 (1):139–149. ditunjukkan oleh pengukuran ini tentang aktivitas sistem
[12] Baba S, Osakabe N, Natsume M, Terao J. Absorpsi dan oksida nitrat endogen? Curr Opin Nephrol Hypertens.
ekskresi procyanidin B2 [epicatechin-(4beta-8)- 1998;7(1):59–62.
epicatechin] melalui urin pada tikus. Free Radic Biol [27] Stoclet JC, Kleschyov A, Andriambeloson E, Diebolt M,
Med. 2002;33(1):142–148. Andriantsitohaina R. Pelepasan NO endotel disebabkan
[13] Hertog MG, Feskens EJ, Hollman PC, Katan MB, oleh polifenol anggur merah. J Physiol Pharma col.
Kromhout D. Flavonoid antioksidan makanan dan risiko 1999;50(4):535–540.
penyakit jantung koroner: Zutphen Elderly Study. Lanset. [28] Martin S, Andriambeloson E, Takeda K, Andriantsi
1993;342(8878):1007–1011. tohaina R. Polifenol anggur merah meningkatkan kalsium
[14] Knekt P, Kumpulainen J, Jarvinen R, dkk. Asupan dalam sel endotel aorta sapi: dasar untuk menjelaskan
flavonoid dan risiko penyakit kronis. Am J Clin Nutr. jalur pensinyalan yang mengarah ke produksi oksida
2002;76(3):560–568. nitrat. Br J Pharmacol. 2002;135(6):1579–1587.
[15] Koga T, Meydani M. Pengaruh metabolit plasma (+)- [29] Venkov CD, Myers PR, Tanner MA, Su M, Vaughan DE.
catechin dan quercetin pada adhesi monosit ke sel Etanol meningkatkan produksi nitrit oksida endotel
endotel aorta manusia. Am J Clin Nutr. 2001;73(5):941– melalui modulasi ekspresi nitrit oksida sintase. Trombus
948. Haemost. 1999;81(4):638–642.
[16] Feri DR, Smith A, Malkhandi J, dkk. Uji klinis fase I dari [30] Harapan SA, Meredith IT. Molekul adhesi seluler dan
flavonoid quercetin: farmakokinetik dan bukti penyakit kardiovaskular. Bagian I. Ekspresi dan peran
penghambatan tirosin kinase in vivo. mereka dalam aterogenesis. Intern Med J. 2003;33(8):380–
Klinik Kanker Res. 1996;2(4):659–668. 386.
[17] Faulx MD, Wright AT, Hoit BD. Deteksi disfungsi en [31] De Caterina R, Basta G, Lazzerini G, dkk. Molekul adhesi
dothelial dengan pemindaian suara ultra arteri brakialis. sel vaskular terlarut-1 sebagai korelasi biohumoral
Am Heart J. 2003;145(6):943–951. aterosklerosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol.
[18] Wadsworth TL, Koop DR. Efek quercetin polifenol anggur 1997;17(11):2646–2654.
dan resveratrol pada ekspresi sitokin pro inflamasi pada [32] Mazzone A, Cusa C, Mazzucchelli I, dkk. Merokok dan
makrofag RAW 264.7. Farmasi Biokimia. 1999;57(8):941– hipertensi memengaruhi pelepasan oksida nitrat dan
949. kadar molekul adhesi plasma. Klinik Kimia Lab Med.
2001;39(9):822–826.
[19] Anderson D, Dhawan A, Yardley-Jones A, Ioannides C, [33] Theriault A, Chao JT, Gapor A. Tocotrienol adalah vitamin
Webb J. Pengaruh flavonoid antioksidan dan mutagen E yang paling efektif untuk mengurangi ekspresi endotel
makanan pada limfosit pasien thalassemia tanpa terapi molekul adhesi dan adhesi monosit. Aterosklerosis.
khelasi dalam uji Comet. 2002;160(1):21–30.
Karsinog Mutagen Teratogen. 2001;21(2):165–174. [34] Mueck AO, Seeger H, Wallwiener D. Bukti lebih lanjut
[20] Sahu SC, Gray GC. Aktivitas pro-oksidan flavonoid: efek untuk tindakan vaskular langsung dari statin: efek pada
pada glutathione dan glutathione S-transferase dalam sintase nitrat oksida endotel dan molekul adhesi. Exp
inti hati tikus yang terisolasi. Surat Kanker. Klinik Endocrinol Diabetes. 2001;109 (3):181–183.
1996;104(2):193–196.
[21] Stadler RH, Markovic J, Turesky RJ. Efek anti dan [35] Youdim KA, McDonald J, Kalt W, Joseph JA. Peran
prooksidatif in vitro dari polifenol alami. potensial flavonoid makanan dalam mengurangi
Biol Trace Elem Res. 1995;47(1–3):299–305. kerentanan endotelium mikrovaskuler terhadap oksidatif
[22] Baja DM, Whitehead AS. Reaktan fase akut utama: dan peradangan. J Nutr Biochem. 2002;13(5):282– 288.
protein C-reaktif, komponen serum amiloid P dan
protein serum amiloid A. Immunol Untuk hari ini. [36] Preston RA, Ledford M, Materson BJ, Baltodano NM,
1994;15(2):81–88. Memon A, Alonso A. Efek hipertensi berat yang tidak
[23] Danesh J, Collins R, Appleby P, Peto R. Sebagai terkendali pada aktivasi endotel: molekul adhesi sel
asosiasi fibrinogen, protein C-reaktif, albu min, atau vaskular yang larut-1, larut dalam molekul adhesi
jumlah leukosit dengan penyakit jantung koroner: meta- terseluler-1 dan von Faktor Willebrand. J Hipertensi.
analisis studi prospektif. JAMA. 1998;279(18):1477– 2002;20(5):871–877.
1482. [37] CD Stehouwer, Gall MA, Twisk JW, Knudsen E, Emeis
[24] Balk EM, Lau J, Goudas LC, dkk. Efek statin pada JJ, Parving HH. Peningkatan ekskresi albumin urin,
penanda serum nonlipid yang terkait dengan penyakit disfungsi endotel, dan peradangan tingkat rendah kronis
kardiovaskular: tinjauan sistematis. Ann Intern Med. pada diabetes tipe 2: progresif, saling terkait, dan terkait
2003;139(8):670–682. secara independen dengan risiko kematian. Diabetes.
[25] Moshage H, Kok B, Huizenga JR, Jansen PL. Penentuan 2002;51(4):1157–1165.
nitrit dan nitrat dalam plasma: evaluasi kritis. Klinik [38] Weyer C, Yudkin JS, Stehouwer CD, Schalkwijk CG,
Kimia. 1995;41(6 poin 1):892–896. Pratley RE, Tataranni PA. Penanda humoral peradangan
[26] Baylis C, Vallance P. Pengukuran nitrit dan dan disfungsi endotel dalam kaitannya
278 Peter M. Clifton 2004:5 (2004)
untuk adipositas dan aksi insulin in vivo di Pima Indi ans. [51] Thompson HJ, Heimendinger J, Haegele A, dkk. Pengaruh
Aterosklerosis. 2002;161(1):233–242. peningkatan konsumsi sayur dan buah terhadap penanda
[39] Newby DE, McLeod AL, Uren NG, dkk. Pelepasan aktivator kerusakan sel oksidatif. Karsinogenesis. 1999;20(12):2261–
plasminogen jaringan koroner berpasangan terkait dengan 2266. [52] van den Berg R, van Vliet T, Broekmans WM, dkk.
aterosklerosis koroner dan merokok: hubungan langsung
antara disfungsi endotel dan aterotrombosis. Sirkulasi. Konsentrat sayur/buah dengan kapasitas antioksidan tinggi
2001;103(15):1936–1941. tidak berpengaruh pada biomarker status antioksidan pada
perokok pria. J Nutr. 2001;131(6):1714– 1722.
[40] Huvers FC, De Leeuw PW, Houben AJ, dkk.
Vasodilatasi yang bergantung pada endotelium, penanda [53] Hodgson JM, Croft KD, Mori TA, Burke V, Beilin LJ, Puddey
plasma fungsi endotel, dan respons vasokonstriktor IB. Konsumsi teh secara teratur tidak menghambat
adrenergik pada diabetes tipe 1 di bawah kondisi yang peroksidasi lipid in vivo pada manusia. J Nutr. 2002;132(1):55–
mendekati normoglikemik. Diabetes. 1999;48 (6):1300–1307. 58.
[41] de Maat MP, Pijl H, Kluft C, Princen HM. Konsumsi teh [54] Abu-Amsha Caccetta R, Burke V, Mori TA, Beilin LJ, Puddey
hitam dan teh hijau tidak berpengaruh terhadap inflamasi, IB, Croft KD. Polifenol anggur merah, dengan tidak adanya
hemostasis dan penanda endotel pada individu sehat alkohol, mengurangi stres peroksida lipid pada subjek
perokok. Eur J Clin Nutr. 2000;54(10):757–763.
merokok. Free Radic Biol Med. 2001;30(6):636–642.
[55] Koga T, Moro K, Nakamori K, dkk. Peningkatan potensi

[42] Abou-Agag LH, Aikens ML, Tabengwa EM, dkk.
oksidatif plasma tikus dengan pemberian oral ekstrak kaya
Polifenol meningkatkan transkripsi gen t-PA dan u-PA
proanthocyanidin dari biji anggur. Kimia Makanan J Agric.
dalam kultur sel endotel manusia. Alco hol Clin Exp Res.
1999;47(5):1892–1897.
2001;25(2):155–162.
[56] Taklukkan JA, Maiani G, Azzini E, Raguzzini A, Holub BJ.
[43] Morrow JD, Hill KE, Burk RF, Nammour TM, Badr KF, Roberts
Suplementasi dengan quercetin nyata meningkatkan
LJ. Serangkaian senyawa mirip prostaglandin F2 diproduksi
konsentrasi quercetin plasma tanpa efek pada faktor risiko
in vivo pada manusia melalui mekanisme non-siklooksigenase, tertentu untuk penyakit jantung pada subyek sehat. J Nutr.
katalis radikal bebas. Proc Natl Acad Sci USA.
1998;128(3):593–597.
1990;87(23):9383– 9387.
[57] Gokce N, Keaney JF Jr, Hunter LM, Watkins MT, Menzoian
` JO, Vita JA. Stratifikasi risiko untuk kejadian kardiovaskular
[44] Pratico D. Pengukuran in vivo dari keadaan redoks.
pasca operasi melalui penilaian fungsi endotel noninvasif:
Lemak. 2001;36(suppl):S45–S47.
studi prospektif.
[45] Huang HY, Appel LJ, Croft KD, Miller ER 3rd, Mori TA, Puddey
Sirkulasi. 2002;105(13):1567–1572.
IB. Efek vitamin C dan vitamin E pada peroksidasi lipid in
[58] Furumoto T, Fujii S, Saito N, Mikami T, Kitabatake A.
vivo: hasil uji coba terkontrol secara acak. Am J Clin Nutr.
2002;76(3):549–555. Hubungan antara aliran arteri brakialis yang diperantarai
[46] Dietrich M, Blok G, Hudes M, dkk. Suplementasi antioksidan pelebaran dan ketebalan intima-media arteri karotis pada
menurunkan biomarker peroksidasi lipid F(2)-isoprostan pasien dengan dugaan penyakit arteri koroner. Jpn Heart J.
dalam plasma perokok. 2002;43(2):117–125.
Biomarker Epidemiol Kanker Sebelumnya. 2002;11(1):7–13. [59] Dupuis J, Tardif JC, Cernacek P, Theroux P. Pengurangan
[47] Meagher EA, Barry OP, Lawson JA, Rokach J, FitzGerald terol choles dengan cepat meningkatkan fungsi endotel
GA. Efek vitamin E pada peroksidasi lipid pada orang sehat. setelah sindrom koroner akut. Percobaan RECIFE
JAMA. 2001;285(9):1178– 1182. (pengurangan kolesterol pada iskemia dan fungsi
endotelium). Sirkulasi. 1999;99(25): 3227–3233.
[48] Davi G, Ciabattoni G, Consoli A, dkk. Formasi in vivo 8-iso-
prostaglandin f2alpha dan aktivasi trombosit pada diabetes [60] Perticone F, Ceravolo R, Pujia A, dkk. Signifikansi prognostik
mellitus: efek peningkatan kontrol metabolik dan suplementasi disfungsi endotel pada pasien hipertensi. Sirkulasi.
vitamin E. 2001;104(2):191–196.
Sirkulasi. 1999;99(2):224–229.
[49] Ide T, Tsutsui H, Ohashi N, dkk. Stres oksidatif lebih besar
pada pria muda yang sehat dibandingkan dengan wanita
Email: peter.clifton@csiro.au Faks:
pra menopause. Arterioscler Thromb Vasc Biol. +61 8 8303 8899; Telp: +61 8 8303 8826
2002;22(3):438–442.
[50] Jang Y, Lee JH, Kim OY, Park HY, Lee SY. Konsumsi biji-
bijian utuh dan bubuk legum mengurangi permintaan sulin,
peroksidasi lipid, dan konsentrasi homosistein plasma pada
pasien dengan penyakit arteri koroner: uji coba klinis
terkontrol secara acak. Arterioscler Thromb Vasc Biol.
2001;21(12): 2065–2071.
ARTIKEL PENELITIAN
Karakterisasi Antosianin Asilasi pada Kalus

Diinduksi Dari Penyimpanan Akar Berdaging Ungu
Ubi Jalar, Ipomoea batatas L
N. Terahara,1ÿ I. Konczak,2 H. Ono,3 M. Yoshimoto,4 dan O. Yamakawa5
1Departemen Ilmu Pangan untuk Kesehatan, Fakultas Kesehatan dan Gizi, Universitas Minami-Kyushu,
5-1-2 Kirishima, Miyazaki 880-0032, Jepang
2 Ilmu Pangan Australia, CRC untuk Bioproduk, 16 Julius Avenue, Riverside Corporate Park,
Ryde Utara, NSW 2113, Australia
3Lembaga Penelitian Pangan Nasional, Tsukuba, Ibaraki 305-8642, Jepang
4Pusat Penelitian Pertanian Nasional Wilayah Kyushu Okinawa, Miyakonojo, Miyazaki 885-0091, Jepang
5Pusat Penelitian Pertanian Nasional untuk Wilayah Kyushu Okinawa, Nishigoshi, Kikuchi, Kumamoto 861-1192, Jepang
Diterima 4 Juni 2004; direvisi 8 Juni 2004; diterima 15 Juni 2004
Empat antosianin diisolasi dari kalus berpigmen tinggi yang diinduksi dari akar simpanan ubi jalar ungu (Ipomoea batatas L) kultivar Ayamurasaki.
Antosianin masing-masing diidentifikasi sebagai cyanidin 3-O-(2-O-(6-O- (E)-caffeoyl-ÿ-D-glucopyranosyl)-ÿ-D-glucopyranoside)-5-O-ÿ-D-
glucopyranoside , cyanidin 3-O-(2-O-(6-O-(E)-p-coumaroyl-ÿ D-glucopyranosyl)-6-O-(E)-caffeoyl-ÿ-D-glucopyranoside)-5-O -ÿ-D-glucopyranoside,
cyanidin 3-O-(2-O-(6-O-(E)-p-coumaroyl ÿ-D-glucopyranosyl)-6-O-(E)-p-coumaroyl-ÿ- D-glucopyranoside)-5-O-ÿ-D-glucopyranoside, dan peonidin
3-O-(2-O-(6-O-(E)- p-coumaroyl-ÿ-D-glucopyranosyl)-6-O- (E)-p-coumaroyl-ÿ-D-glucopyranoside)-5-O-ÿ-D-glucopyranoside dengan analisis kimia
dan spek troskopik. Antosianin ini diperiksa sehubungan dengan stabilitas dalam larutan berair netral serta aktivitas pemulungan radikal terhadap
radikal 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH). Antosianin terasilasi ini menunjukkan stabilitas yang lebih tinggi dan aktivitas pemulungan radikal DPPH
yang lebih tinggi daripada cyanidin nonasilasi dan glukosida peonidin 3-O-sophoroside-5-O yang sesuai .
PENGANTAR struktur dari dua antosianin, di mana salah satunya adalah

antosianin yang dikenal, cyanidin 3-sophoroside-5-glucoside,
Ubi jalar berdaging ungu, Ipomoea batatas L kultivar
dan yang lainnya adalah yang baru, cyanidin 3-(p-coumaroyl)
Ayamurasaki, mengakumulasi pigmen antosianin dalam jumlah sophoroside-5-glucoside [5]. Secara berurutan, kami telah
yang tinggi pada akar simpanan [1]. Antosianin utama adalah mengisolasi empat antosianin kalus lagi. Tujuan dari penelitian
cyanidin dan peonidin 3-O sophoroside-5-O-glucosides diasilasi ini adalah untuk mengkarakterisasi struktur dan stabilitas dalam
dengan asam caffeic, ferulic, atau p-hydroxybenzoic [2, 3, 4]. Ubi larutan berair netral dan aktivitas antioksidan untuk memanfaatkan
jalar dan thocyanin tidak hanya memiliki stabilitas moderat dalam pigmen untuk makanan atau bahan lainnya.
larutan berair netral [5] dan termostabilitas tinggi [6] tetapi juga
berbagai manfaat kesehatan seperti aktivitas antioksidan [7, 8,
BAHAN DAN METODE
9], antimutagenisitas [10, 11], dan antidiabetes ac. [ 12, 13, 14].
Oleh karena itu, pigmen Ayamurasaki digunakan sebagai Bahan kimia
pewarna makanan alami berkualitas tinggi dengan fungsi
pencegahan potensial terhadap penyakit yang berhubungan Semua reagen dan pelarut yang digunakan adalah kelas
dengan gaya hidup. analitik dan digunakan tanpa pemurnian lebih lanjut. 1,1- difenil-2-
mereda. pikrilhidrazil (DPPH, Bahan Kimia Murni Wako, Jepang), ÿ-
Baru-baru ini, dari akar penyimpanan kultivar Aya murasaki tokoferol (Kishida Bahan Kimia, Jepang), dan 2,6- di-tert-butil-4-
kami telah membentuk garis sel akumulasi antosianin tinggi. metilfenol (BHT, Bahan Kimia Murni Wako ) digunakan untuk uji
Dalam ekstrak pigmen mentah, beberapa antosianin spesifik pemulungan radikal DPPH. Kromatografi kolom terbuka dilakukan
garis sel telah terdeteksi yang berbeda dari yang ada di akar pada resin Amberlite XAD-2000 (Rohm dan Haas, AS) dan ODS
penyimpanan asli [15]. Sebelumnya, kami telah mengisolasi dan (Silica Gel Chromatorex, Fuji Silysia Chemical Ltd, Jepang).
menentukan molekulnya

280 N. Terahara dkk 2004:5 (2004)
metode HPLC media pemeliharaan (MM). pH sedang telah disesuaikan

Pelarut A (1,5% H3PO4 dalam H2O) dan pelarut B menjadi 5,8 sebelum diautoklaf. Subkultur telah dilakukan
(1,5% H3PO4, 20% CH3COOH, 25% MeCN dalam H2O) dalam interval 7 hari. Kultur diinkubasi pada rotary shaker
digunakan untuk kromatografi cair kinerja tinggi analitik (130 rpm) pada suhu 25ÿC dalam gelap. Untuk tujuan
(HPLC), dan pelarut A (15% CH3COOH dalam H2O) dan analisis ini, kultur suspensi telah diproduksi di bawah dua
pelarut B (15% CH3COOH, 30% MeCN dalam H2O) kondisi media yang berbeda: MM dan media penghasil
digunakan untuk HPLC preparatif. HPLC analitik dijalankan antosianin tinggi (APM).
APM adalah media MS yang dimodifikasi dengan 9,4
pada pompa cerdas LC-10AD (Shimadzu, Jepang) dengan
elusi gradien linier pelarut A : B = 75 : 25 hingga 15 : 85 mM KNO3, tanpa NH4NO3, dengan sukrosa 5% dan zat
selama 40 menit pada kolom Luna (4,6 id × 100 mm, pengatur tumbuh nihil [17]. pH media telah disesuaikan
Phenomenex, USA) pada suhu 35ÿC dengan laju aliran 1,0 menjadi 5,8 sebelum autoklaf dan kultur suspensi diinkubasi
mL/menit pemantauan pada 520 nm dilengkapi dengan dalam labu 250 mL. Lima ratus mg agregat sel ditempatkan
detektor susunan dioda SPD 10A (Shimadzu). Untuk dalam labu yang berisi media 50 mL. Kultur dipanen setelah
pemeriksaan kemurnian antosianin, HPLC analitik lain pertumbuhan 7 hari pada MM (200 g) dan setelah 14 hari
dilakukan pada sistem pompa cerdas L-6200 (Hitachi, pada APM (199 g).
Jepang) dengan elusi gradien linier pelarut A : B = 75 : 25
sampai 45 : 55 selama 60 menit pada kolom Inertsil ODS-3 Ekstraksi dan isolasi antosianin
(4,6 id × 250 mm, GL Sciences, Jepang) pada suhu 30ÿC Agregat dikeluarkan dari media kultur, dibilas dengan air
dengan laju aliran 1,0 mL/menit pemantauan pada 520, 310, suling, dipisahkan dari cairan dengan filtrasi vakum, dan
atau 280 nm yang dilengkapi dengan detektor panjang gelombangditimbang.
multi MD-1510 (Jasco,
Sebanyak 399Jepang).
g jaringan segar direndam dalam
HPLC preparatif dijalankan pada sistem pompa cerdas 15% CH3COOH (1 L) selama satu hari dan disaring. Operasi
L-6200 dengan elusi isokratik pelarut A : B = 80 : 20 untuk ini diulang tiga kali lagi (1, 1, dan 0,5 L). Ekstrak kasar
1, 75 : 25 untuk 2, 60 : 40 untuk 3, dan 50 : 50 untuk 4 pada gabungan (3,5 L) mengandung sembilan belas atau lebih
kolom Inert sil ODS ( 20 id × 250 mm, GL Sciences) pada antosianin [18].
suhu kamar dengan laju alir 7,0 mL/menit pemantauan pada Larutan ekstrak diaplikasikan pada dua kolom resin
310 nm dengan detektor UV-Vis L-4200 dan integrator XAD-2000 (30 id × 385 mm), kolom dicuci dengan air (3 L),
D-2000 (Hitachi). dielusi bertahap dengan 10%, 20%, 30%, 40%, 60%, atau
70% EtOH semuanya dengan 1% CH3COOH (1 L).
Analisis spektral
Pigmen yang mengandung fraksi EtOH 30%, 40%, 60%,
Spektra UV-Vis direkam pada spektrofotometer V-550 dan 70% digabungkan dan diuapkan hingga kering di bawah
(Jasco) dalam 0,01% HCl-MeOH untuk determinasi struktur tekanan rendah. Selanjutnya, residu dipisahkan menggunakan
dan untuk pengukuran kolorimetri uji aktivitas tioksidatif. Uji kolom ODS (60 id × 320 mm) dengan 10%, 20%, 30%, 40%,
pergeseran batokromik dilakukan dengan penambahan 5% 60%, atau 70% EtOH semuanya dengan 1% CH3COOH (1
AlCl3-MeOH. L). Analisis HPLC mengkonfirmasi bahwa 1 terkandung
Spektrum percobaan ionisasi waktu elektrospray ionisasi dalam fraksi EtOH 20%, 2 dan 3 dalam fraksi EtOH 60%,
massa (ESI-TOFMS) direkam pada sistem Mariner dan 4 dalam fraksi EtOH 70%, dan setiap fraksi diuapkan
Workstation (Applied Biosystems, USA) dalam 1% hingga kering di bawah tekanan rendah. Akhirnya, 1, 2, 3,
CH3COOH-50% MeCN dengan mode positif melalui infus- dan 4 diisolasi pada pemurnian masing-masing fraksi dengan
injeksi. Spektrometri ion elektrospray beresolusi tinggi pemantauan HPLC preparatif pada 310 nm. Elusi diuapkan
Fourier-transform ion-cyclotron resonance mass spectrometry sampai kering, dilarutkan dalam jumlah minimum TFA,
(ESI/FT-ICRMS) spektra direkam pada APEX II 70e (Bruker diendapkan dengan eter berlebih, dan dikeringkan dalam
Daltonics, Jerman) dalam MeOH berair yang mengandung desikator silika gel di bawah tekanan rendah.
CH3COOH dengan mode positif. Spektra 1H (800 MHz) dan
13C (200 MHz) NMR diukur pada spektrometer Avance 800 Analisis kimia
(Bruker BioSpin, Ger many) dalam DMSO-d6 : TFA-d1 = 9 :
Hidrolisis basa dari pigmen terisolasi dilakukan sebagai
1 dengan jalur tetramethylsi (TMS) sebagai standar internal
berikut. Serbuk pigmen (3 mg) dilarutkan dalam 2N NaOH,
pada 30ÿC.
dibiarkan selama 15 menit dengan tutup tertutup, dan
Bahan tanaman kemudian diasamkan dengan CH3COOH. Komponen dalam
campuran reaksi diidentifikasi dengan HPLC analitik.
Kultur kalus dengan akumulasi antosianin tinggi yang
dihasilkan dari akar simpanan kultivar ubi jalar Ayamurasaki
telah digunakan untuk penelitian ini [15]. Kultur sel Cyanidin
tersuspensi dimulai dengan memindahkan sekitar 1,0 g 3-O-(2-O-(6-O-(E)-caffeoyl-ÿ-D-glucopyranosyl)-ÿ-D
(berat segar) kalus ke dalam 50 mL medium cair dalam labu glucopyranoside)-5-O-ÿ-D-glucopyranoside(1)
Erlenmeyer 250 mL. Media Basal Murashige dan Skoog UV-Vis ÿmax (0,01% HCl-MeOH) nm: 526 (pergeseran
(MS) [16] ditambah dengan 1,0 mg/L 2,4-D, dan sukrosa 3% batho chromic dengan AlCl3 menjadi 39 nm), 331, 281,
telah digunakan sebagai E440/Evis.max = E440/E526 = 0,14, Eacyl.max/Evis.max =
2004:5 (2004) Antosianin dalam Kalus Ubi Jalar Berdaging Ungu 281
E331/E526 = 0,49; ESI-TOFMS: m/z 935 (M+ = C42H47O24+),

287 (Cy+ = C15H11O6 +); ESI/FT-ICRMS beresolusi tinggi: m/z
3
935,24620 (dihitung 935,24518 untuk M+ = C42H47O24+); Data
4
13C dan 1H NMR tercantum pada Tabel 1. 2
(sebuah)
1
Absorbansi
pada
520
nm
Cyanidin 3-O-(2-O-(6-O-(E)-p-coumaroyl-ÿ-D
glucopyranosyl)-6-O-(E)-caffeoyl-ÿ-D
glucopyranoside)-5-O-ÿ -D-glukopiranosida (2)
1
UV-Vis ÿmax (0,01% HCl–MeOH) nm: 528 (pergeseran (b)
batho chromic dengan AlCl3 menjadi 44 nm), 320, 297, 283, E440/ 0 10 20 30 40
Evis.max = E440/E528 = 0,14, Eacyl.max/Evis.max = E330/E528 Waktu retensi (menit)
= 1,02; ESI-TOFMS: m/z 1081 (M+ = C51H53O26+), 287 (Cy+ =
Gambar 1. (a) Kromatogram HPLC pigmen kasar kalus ubi
C15H11O6 +); ESI/FT-ICRMS beresolusi tinggi: m/z 1081.28241
jalar ungu, dan (b) Akar simpanan ubi jalar (Ipomoea batatas
(dihitung 1081.28196 untuk M+ = C51H53O26+); Data 13C dan
L), cv Ayamurasaki. HPLC analitik dijalankan dengan elusi
1H NMR tercantum pada Tabel 1. gradien linier pelarut A : B = 85 : 15 sampai 65 : 35 selama
100 menit pada kolom Luna pada suhu 35ÿC dengan laju
alir 1,0 mLminÿ1 pemantauan pada 520 nm.
Cyanidin 3-O-(2-O-(6-O-(E)-p-coumaroyl-ÿ-D
glucopyranosyl)-6-O-(E)-p-coumaroyl-ÿ-D
glucopyranoside)-5-O -ÿ-D-glukopiranosida (3) dapat dievaluasi berdasarkan waktu paruh (t1/2), didefinisikan
sebagai waktu yang diperlukan untuk mencapai 50% warna sisa.
UV-Vis ÿmax (0,01% HCl–MeOH) nm: 529 (pergeseran
batho chromic dengan AlCl3 menjadi 48 nm), 315, 299, E440/ Pengujian aktivitas pemulungan radikal DPPH
Evis.max = E440/E529 = 0,15, Eacyl.max/Evis.max = E315 /E529
Aktivitas pemulungan radikal 1, 2, 3, dan 4 diuji menurut
= 1,21; ESI-TOFMS: m/z 1065 (M+ = C51H53O25+), 287 (Cy+ =
metode kolorimetri DPPH yang dikembangkan oleh Yamaguchi et
C15H11O6 +); ESI/FT-ICRMS beresolusi tinggi: m/z 1065.28613
al [20] dan dibandingkan dengan Cy3S5G, Pn3S5G, dan ÿ-
(dihitung 1065.28704 untuk M+ = C51H53O25+); Data 13C dan
tokoferol sebagai antioksidan alami dan BHT sebagai antioksidan
1H NMR tercantum pada Tabel 1.
sintetik. Setiap sampel dilarutkan dalam EtOH hingga konsentrasi
500 µM. Larutan sampel (25 µL) ditambahkan 375 µL EtOH, 350
µL larutan buffer HCl Tris (pH 7,4, 0,1 M), dan 250 µL larutan
Peonidin 3-O-(2-O-(6-O-(E)-p-coumaroyl-ÿ D- DPPH-EtOH 500 µM (untuk mendapatkan konsentrasi sampel
glucopyranosyl)-6-O-(E)-p-coumaroyl-ÿ-D akhir adalah 12,5 µM ), dan segera dikocok lalu didiamkan selama
glucopyranoside)-5-O -ÿ-D-glukopiranosida (4) 20 menit di tempat gelap pada suhu kamar. Absorbansi sisa DPPH
UV-Vis ÿmax (0,01% HCl–MeOH) nm: 528 (tanpa pergeseran dalam larutan sampel diukur pada 520 nm. Awal dan kosong
batokromik dengan AlCl3), 315, 297, E440/Evis.max = E440/E528 masing-masing diukur tanpa substrat dan tanpa DPPH.
= 0,13, Eacyl.max/Evis.max = E315/E528 = 1,25; ESI-TOFMS: m/
z 1079 (M+ = C52H55O25+), 301 (Pn+ = C16H16O6 +); ESI/FT-
ICRMS beresolusi tinggi: m/z 1079,30256 (dihitung 1079,30269 Aktivitas pembersihan radikal DPPH (RS%) dihitung sebagai
untuk M+ = C52H55O25+); Data 13C dan 1H NMR tercantum RS% = 100(Ai ÿ As + Ab)/ Ai, di mana Ai, As, dan Ab adalah
pada Tabel 1. absorbansi pada 520 nm dari larutan awal, sampel, dan blanko ,
masing-masing. Percobaan dilakukan dengan empat ulangan.
Tes stabilitas
Stabilitas antosianin 1, 2, 3, dan 4 dalam larutan air netral HASIL DAN DISKUSI
dibandingkan dengan antosianin nonasilasi cyanidin 3-O-
sophoroside-5-O-glucoside (Cy3S5G) dan peonidin 3-O- Kalus berwarna ungu tua yang diinduksi dari akar simpanan
sophoroside-5-O-glucoside (Pn3S5G) diisolasi dari root ubi jalar daging ungu kultivar Ayamurasaki diekstraksi dengan
penyimpanan asli sesuai dengan metode yang dilaporkan CH3COOH 15%. Ekstrak kasar mengandung 19 atau lebih
sebelumnya [19]. Setiap garam TFA antosianin dilarutkan dalam anthocyanin seperti yang terdeteksi oleh HPLC analitik (Gambar
larutan penyangga McIlvaine (pH 7,0, 0,1 M sitrat–0,2 M fosfat) 1(a)) [18]. Ekstrak kasar berhasil dimurnikan dengan resin
untuk membuat larutan uji 50 µM, dan spektrum Vis (400–700 nm) penyerap dan kromatografi kolom ODS dan kemudian HPLC
diukur secara otomatis pada interval waktu yang sesuai. preparatif untuk menghasilkan empat antosianin 1, 2, 3, dan 4
Berdasarkan absorbansi pada ÿvis.max masing-masing spektrum, (dinamakan sebagai YGM-0d, -3 -7a, dan -7e, resp) sebagai ,
sisa warna (%) dihitung sebagai persen dari absorbansi awal (= serbuk merah garam TFA yang masing-masing diperoleh dalam
100%). stabilitas antosianin jumlah 46, 28, 114, dan 22 mg (rendemen 0,0115%, 0,007%,
0,0286%, dan 0,006%, resp).
282 N. Terahara dkk 2004:5 (2004)
Tabel 1. Pergeseran kimiawi NMR antosianin kalus ubi jalar berdaging ungu 1, 2, 3, dan 4 dari tetrametilsilana dalam DMSO d6/TFA-d1 (9/1), 800 MHz.
12 3 4
Posisi
C ÿH C ÿH C ÿH C ÿH
Aglikon
2 162.57 — 162.58 — 162.55 — 162.69 —
3 144.59 — 144.36 — 144.28 — 144.39 —
4 133.65 8,92 dtk 133.35 8,27 dtk 133.35 8,84 dtk 135.62 8,95 dtk
5 155.31 — 155.41 — 155.37 — 155.63 —
6 104.32 6,99 hari (1,8) 105.02 6,95 hari (2,0) 105.12 6,95 hari (1,6) 104.89 6,98 hari (1,9)
7 167.80 — 167.92 — 167.91 — 168.24 —
9 111.74 — 111.88 — 111.87 — 112.00 —
10 155.20 — 155.24 — 155.29 — 155.54 —
1 119.66 — 119.64 — 119.63 — 119.42 —
3 146.41 — 146.46 — 146.48 — 148.60 —
4 155.48 — 155.41 — 155.42 — 155,99 —
5 117.18 7,13 hari (8,7) 117.16 7,11 d (8,7) 117.15 7,11 hari (8,7) 116.84 7,10 d (8,7)
6 127,87 8,31 dd (2,3, 8,7) 127,79 8,27 dd (2,3, 8,7) 127,80 8,27 dd (2,3, 8,7) 129,40 8,36 dd (2,1, 8,7)
OM — — — — — — 56.19 3,90 dtk
Glukosa-a
1 99,85 5,59 d (7,6) 99.67 5,67 hari (7,4) 99,50 5,68 d (7,4) 100,65 5,64 d (7,3)
2 81.54 4,02 t (8,3) 81.86 4,05 t (8,1) 81.84 4,06 t (8,0) 81.74 3,95 t (7,6)
3 76.56 3,69 t (8,9) 76.06 3,76 t (8,8) 76.05 3,76 t (8,8) 75,95 3,75 t (8,7)
4 69.43 3,39 t (8,9) 69,94 3,49 t (9,3) 69,98 3,48 t (9,3) 69.83 3,47 t (9,2)
5 77.65 3,56 m 74.27 3,93 m 74.26 3,94 m 74.44 3,87 m
6a 60,65 3,57 m 63,20 4,32 dd (6,8, 12,2) 63,24 4,31 dd (7,1, 12,1) 63,16 4,27 dd (6,8, 12,6) 4,42 brd (10,0)
6b 60.65 3,74 brd (10,1) 63.20 63.24 4,42 brd (12,1) 63.16 4,40 brd (11,3)
Glukosa-b
2 74,75 3,14 t (8,4) 74,85 3,15 t (8,7) 74.86 3,15 t (8,4) 74.65 3,19 t (8,4)
3 76.26 3,27 t (9,1) 76.23 3,26 t (8,7) 76.24 3,27 t (8,7) 76.28 3,29 t (8,9)
4 69,55 3,24 t (8,8) 69.61 3,25 t (8,7) 69.66 3,26 t (8,8) 69,77 3,26 t (9,4)
5 74.18 3,14 m 74.20 3,18 m 74.21 3,19 m 74.30 3,30 m
6a 62.58 3,99 dd (6,2, 12,5) 62,66 3,99 dd (4,3, 11,8) 62,67 4,00 dd (4,3, 11,7) 63,23 4,03 dd (5,4, 11,6)
6b 62.58 3,92 brd (10,1) 62.66 3,95 brd (10,0) 62.67 3,96 brd (10,4) 63.23 4,13 brd (10,1)
Glukosa-c
1 101.59 5,12 d (7,7) 102.24 5,07 d (7,7) 102.35 5,05 d (7,7) 102.01 5,10 d (7,7)
2 73.19 3,51 t (8,5) 73.39 3,56 t (8,5) 73.41 3,56 t (8,9) 73.35 3,56 t (8,5)
3 76.02 3,41 t (8,9) 76.29 3,41 t (9,0) 76.30 3,41 t (9,0) 76.37 3,42 t (9,0)
4 69,70 3,31 t (9,2) 69.88 3,29 t (9,2) 69,94 3,30 t (9,3) 69.83 3,31 t (9,4)
5 77.65 3,49 m 77.86 3,50 m 77,85 3,48 m 77.82 3,50 m
6a 60,74 3,58 dd (5,7, 12,3) 61,08 3,59 dd (6,2, 12,3) 61,04 3,58 dd (5,8, 12,0) 60,93 3,59 dd (5,7, 12,2)
6b 60.74 3,78 brd (11,8) 61.08 3,83 brd (10,1) 61,04 3,81 dd (1,9, 11,9) 60,93 3,80 dd (2,0, 10,0)
Tabel 1. Lanjutan.
Ga-Acid I
1— — 125.74 — 125.20 — 125.19 —
2— — 115.40 130.35 130.30
6,94 hari (2,0) 7,33 hari (8,6) 7,28 hari (8,7)
3— — 145.70 — 115.98 115.95
6,78 hari (8,7) 6,76 hari (8,7)
4— — 148.53 — 160.08 — 160,05 —
5— — 115.88 115.98 115.95
6,77 hari (8,7) 6,78 hari (8,7) 6,76 hari (8,7)
6— — 121.61 6,86 dd (2,0, 8,7) 130.35 7,33 hari (8,6) 130.30 7,28 hari (8,7)
sebuah — — 113.98 6,02 hari (15,8) 113.96 6,026 hari (15,9) 113.79 5,96 hari (15,9)
— 145.53 144.82 144.76
b— 7,24 hari (15,8) 7,24 hari (15,8) 7,23 hari (15,8)
— 166.77 — 166.78 — 166,68 —
karbonil —
Gb-Asam II
1 125.72 — 125.19 — 125.17 — 125.12 —
3 145.25 — 116.03 116.03 115.97
6,78 hari (8,7) 6,79 hari (8,7) 6,80 hari (8,7)
4 148.48 — 160.08 — 160.08 — 160,08 —
6 121.39 6,83 dd (2,0, 8,3) 130.36 7,33 hari (8,6) 130.58 7,38 hari (8,6) 130.52 7,38 hari (8,7)
sebuah 113.94 6,00 hari (15,8) 113.86 6,17 hari (15,8) 113.86 6,23 hari (15,9) 113.79 6,18 hari (15,9)
ÿ 145.65 7,22 hari (15,8) 144.83 7,32 hari (15,8) 145.30 7,37 hari (15,8) 145.24 7,36 hari (15,7)
— 166.48 — 166.49 — 166,47 —
Karbonil 166.46
ÿNilai dalam tanda kurung menunjukkan konstanta kopling

(J dalam Hz). ÿÿSingkatan: s = singlet, d = doublet, t = triplet, m = multiplet, dd = doublet, dan brd = broad doublet.
Pada hidrolisis basa, 1, 2, dan 3 memberikan cyanidin 3-O- Cy3S5G, 2 sebagai caffeoyl-p-coumaroyl Cy3S5G, 3 sebagai di-
sophoroside-5-O-glucoside (Cy3S5G) [19], sedangkan hanya 4 p coumaroyl Cy3S5G, dan 4 sebagai di-p-coumaroyl Pn3S5G.
yang memberikan peonidin 3-O-sophoroside-5-O-glucoside Struktur lengkap 1, 2, 3, dan 4 dibuat dengan analisis 13C
(Pn3S5G). Selain itu, dalam hidrolisat 1, 2, 3, dan 4, asam caffeic dan 1H NMR yang berisi eksperimen pulsa 2D seperti spektroskopi
dari 1, asam caffeic dan asam p-coumaric dari 2, asam p-coumaric korelasi tersaring kuantum ganda homonuklir (DQF-COSY),
dari 3, dan asam p-coumaric dari 4 terdeteksi sebagai asam spektroskopi hubungan korelasi total (TOCSY), korelasi kuantum
asilasi ( s) dengan analisis kromatografi bersama HPLC dengan tunggal heteronuklir (HSQC), Overhauser nuklir dan spektroskopi
asam sinamat asli. pertukaran (NOESY), dan teknik spektroskopi korelasi ikatan
Pada spektrum UV-Vis, serapan sekitar 331 dan 320 nm dari 1 ganda heteronuklir (HMBC). Penetapan sinyal 13C- dan 1H
dan 2, 315 nm dari 3 dan 4 juga masing-masing mendukung dirangkum dalam Tabel 1. Sinyal 1H dalam medan magnet rendah
keberadaan residu caffeoyl dan p-coumaroyl dalam molekulnya. (ÿH 6–9 ppm) menunjukkan karakteristik aglikon dan asam
Jumlah asam aromatik masing-masing diperkirakan satu untuk 1, sinamat.
dan dua untuk 2, 3, dan 4, berdasarkan nilai Eacyl.max/Evis.max
(absorbansi pada ÿacyl.max/absorbance pada ÿvis.max) sebesar Antosianin 1, 2, dan 3 dan 4 masing-masing memiliki gugus Cy
0,49 untuk 1, dan 1,02–1,25 untuk masing-masing 2, 3, dan 4. dan Pn, karena sinyal yang sesuai dari inti benzopy rylium dan
cincin-B aromatik 1, 3, 4-trisubstitusi.
Karena maksima serapan ( ÿvis.max) 1, 2, dan 3 menunjukkan Hanya 4 yang memiliki sinyal metoksil tambahan pada medan
pergeseran batokromik dengan penambahan AlCl3, tetapi tidak magnet tinggi (ÿH 3,90 ppm, ÿC 56,19 ppm). Adanya residu trans
pada 4, 1, 2, dan 3 dapat dielusidasi sebagai antosianin berbasis (E)-caffeoyl pada spektra 1 dan 2 dan residu (E) -p-coumaroyl
cyanidin-(Cy) dan 4 sebagai berbasis peonidin-(Pn). pada spektra 2, 3, dan 4 dikonfirmasi dengan 1, 3, 4-trisubstitusi
Pengukuran ESI–TOFMS 1, 2, 3, dan 4 menunjukkan puncak dan 1, 4-disubstitusi ben zenes, masing-masing memiliki sinyal
ion molekuler pada m/z 935, 1081, 1065, dan 1079 sesuai proton (E)-olefinik dengan konstanta kopling yang besar (sekitar
dengan masing-masing C42H47O24+, C51H53O26+, Jÿ,ÿ = 16 Hz). Dalam medan magnet tinggi (ÿH 3–6 ppm),
C51H53O25+, dan C52H55O25+, dan juga menunjukkan puncak spektrum juga menunjukkan semua gula 1, 2, 3, dan 4 menjadi
ion fragmen Cy+ pada m/z 287 in 1, 2, dan 3 dan Pn+ pada m/z konfigurasi ÿ-D-glukopiranosil karena resonansi pada medan
301 in 4. Rumus molekul 1, 2, 3, dan 4 dikonfirmasi oleh ESI/FT- magnet rendah (ÿH 4,78–5,68 ppm ) dari semua proton anomerik
ICRMS beresolusi tinggi pada m /z 935.24620, 1081.28241, dan nilai J yang besar ( J = 7.2–9.4 Hz ) dari proton anomerik dan
1065.28613, dan 1079.30256, masing-masing. Semua temuan ini proton cincin. Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 1,
menunjukkan 1 sebagai mono-caffeoyl
284 N. Terahara dkk 2004:5 (2004)
OH
ATAU1
3
OH
OH 2
+ 4
+ 8 B
B
KE 7 9 HAI 12 5
KE HAI
SEBUAH C 6
AC 6 3
H 10
6 5 4O
HAI HAI
HAI KE HAI 1 H
KE HAI 5 1
4 2 H
H H
HAI HAI Gc 2 H HAI
Gc OH KE ATAU3 KE OH 5
KE 3 H KE
CEPAT HAI
H
Di Sini
KE Untuk 6 3 4
5
32 12
Gb HAI
KE GB 6 HAI
KE 4 1 b 3
R2O Ohhh HAI KE OH
KE KE Saya
KE 4 HH sebuah
56 sebuah
b
HAI
1
6 2
II
5 3
4
(sebuah)
(b) OH
korelasi HMBC
1 (YGM-0d): R1 = R2 = H, R3 = Kafe
2 (YGM-3): R1 = H, R2 = Caf, R3 = pC BEBERAPA korelasi

3 (YGM-7a): R1 = H, R2 = R3 = pC
4 (YGM-7e): R1 = Saya, R2 = R3 = pC
Gambar 2. Antosianin kalus ubi jalar ungu. (a) Struktur 1, 2, 3, dan 4; Caf = asam caffeic dan pC = asam p-coumaric, (b)
korelasi NOE dan HMBC tipikal dari anthocyanin caffeoyl-p-coumaroylated 2.
Ga-2H (pada ÿ H 3.95–4.06 ppm) dan Ga-2C (ÿ C 81.54– asam dan Gc-6OH [3]. Kesimpulannya, 1, 2, 3, dan 4 secara
81.86 ppm) jelas bergeser ke downfield lebih dari Gb-2H (pada jelas ditentukan sebagai cyanidin 3-O-(2-O-(6-O- (E)-caffeoyl-
ÿ H 3.14–3.19 ppm) dan Gb-2C (ÿ C 74.65 –74,86 ppm) atau ÿ-D-glucopyranosyl)-ÿ-D-glucopyranoside)
Gc ÿ 2H (pada ÿ H 3,51–3,56 ppm) dan Gc-2C (ÿ C 73,19– -5-O-ÿ-D-glucopyranoside, cyanidin 3-O-(2-O-(6-O-(E) -p-
73,39 ppm). Berdasarkan data ini, kami menyimpulkan bahwa coumaroyl-ÿ-D-glucopyranosyl)-6-O-(E)-caffeoyl -ÿ D-
glukosa b (Gb ) berikatan dengan glukosa a (Ga)-20H. glucopyranoside)-5-O-ÿ-D-glucopyranoside, cyanidin 3-O-(2-O-
Di sisi lain, spektrum NOESY dan HMBC memberikan data (6-O-(E)-p-coumaroyl-ÿ-D-glucopyranosyl)- 6-O -(E)-p-coumaroyl-
yang lebih langsung dan pasti tentang keberadaan ÿ-D-Gb (1 ÿ 2) ÿ-D-glucopyranoside)-5-O-ÿ-D glucopyranoside, dan peonidin
Ikatan Ga dari residu sophorosyl. 3-O-(2-O-(6-O-(E)-p coumaroyl-ÿ- D-glucopyranosyl)-6-O-(E)-p-
Hubungan penghubung antara aglikon, tiga gula, dan coumaroyl ÿ-D-glucopyranoside)-5-O-ÿ-D-glucopyranoside,
gugus asil dalam 1, 2, 3, dan 4 dikonfirmasi oleh pengukuran masing- masing, dengan analisis kimia dan spektroskopi
NOESY dan HMBC, misalnya, antosianin 2 ditunjukkan pada (Gambar 2(a)). Hanya antosianin 4 yang merupakan senyawa
Gambar 2(b). Dalam spektrum NOESY 1, 2, 3, dan 4, tiga baru, sedangkan 1, 2, dan 3 sudah dikenal. Antosianin 1 dan
sinyal NOE intensif antara aglikon-4H dan Ga-1H (aglikon-4H/ 2 telah diidentifikasi pada bunga Ipomoea cairica [21], tetapi
Ga-1H), Ga-2H/Gb-1H, dan aglikon-6H/Gc -1H menunjukkan tempat pengikatan yang tepat dari residu asil tidak ditetapkan.
bahwa Ga, Gb, dan Gc masing-masing terhubung pada Demikian pula, anthocyanin 2 dan 3 telah diidentifikasi dalam
aglikon-3-OH, pada Ga-2OH, dan pada aglikon-5OH melalui pigmen bunga Ipomoea asarifolia [22], dan dalam pigmen
ikatan glikosil. Dalam spektrum HMBC 1, 2, 3, dan 4, puncak bunga Ajuga reptans dan kultur sel yang sesuai [23], masing-
silang 1H-13C yang jelas antara sinyal Ga-1H dan aglikon-3- masing. Pigmen 1 juga ditemukan pada akar simpanan ubi
karbon (Ga-1H/aglikon-3C), Gb-1H/Ga-2C, Ga-2H/Gb-1C, dan jalar berdaging ungu asli (Gambar 1(b)) atau pigmen daun ubi
Gc-1H/aglikon-5C masing-masing memverifikasi koneksi Ga/ jalar sebagai komponen minor, sedangkan p-coumaroylated
aglikon-3OH, Gb/Ga-2OH, dan Gc/aglikon-5OH. Selain itu, 2, 3, dan 4 dipastikan spesifik garis sel. pigmen.
puncak korelasi yang berbeda antara Gb-6H dan sinyal karbon
asil-karbonil (sekitar ÿC 166,5 ppm) memberikan bukti yang
menentukan bahwa asam asilasi dihubungkan pada Gb-6OH. Stabilitas 1, 2, 3, dan 4 dibandingkan dengan Cy3S5G
Pada 2, 3, dan 4, puncak silang antara Gc-6H dan sinyal dan Pn3S5G yang tidak diasilasi dalam larutan berair netral
karbon asil-karbonil (sekitar ÿC 166,8 ppm) juga menunjukkan pada suhu kamar. Stabilitas dievaluasi berdasarkan waktu
hubungan langsung aromatik paruh (t1/2) yang didefinisikan sebagai waktu yang dibutuhkan
untuk mencapai 50% warna residu. Seperti yang ditunjukkan di
100
Antosianin ini dievaluasi aktivitas antioksidannya
sebagai scavenging ability terhadap radikal DPPH. Seperti
yang ditunjukkan pada Gambar 4, aktivitas tersubstitusi
secara identik tetapi berbasis Cy 3 menunjukkan aktivitas
pemulungan yang lebih tinggi daripada berbasis Pn 4.
4
Caffeoyl-p-coumaroylated 2 dan monocaffeoylated 1
2
menunjukkan aktivitas yang lebih tinggi daripada di-p
3
Warna
sisa
(%)
50 coumaroylated 3. Oleh karena itu, antosianin dengan gugus

katekol dalam aglikon dan/atau gugus asil dianggap sangat
efektif dalam pembersihan radikal. Terlebih lagi, karena
asilasi asam hidroksisinamat meningkatkan aktivitas (1, 2, 3
> Cy3S5G, dan 4 > Pn3S5G), asilasi mungkin secara
1
intramolekul dan sinergis mencapai aktivitas pemulungan
Cy3S5G
Pn3S5G radikal aglikon selain aktivitas mereka sendiri [26].
0
Garis sel yang dihasilkan dari akar penyimpanan
0 100 200 300 400 500 600 Ayamurasaki mengakumulasi pigmen antosianin tingkat
jam (menit)
tinggi. Tergantung pada kondisi media di mana jaringan
diproduksi, jumlah total antosianin sama dengan akar
Gambar 3. Stabilitas antosianin kalus ubi jalar ungu 1, 2, penyimpanan asli pada MM [15] atau 2,5 kali lipat lebih tinggi
3, dan 4 dalam larutan air netral pada suhu kamar. pada media penghasil antosianin tinggi [27].
Dengan demikian pigmen kalus memiliki potensi untuk dimanfaatkan
sebagai pewarna makanan alami berkualitas tinggi/makanan alami
dalam bahan dengan tindakan perlindungan terhadap kerusakan
1 40
oksidatif [18].
2 52
REFERENSI
3 23
[1] Yoshinaga M. Kultivar baru “Ayamurasaki” untuk
produksi pewarna. Front Riset Ubi Jalar (KNAES).
4 12
1995;2
[2] Odake K, Terahara N, Saito N, Toki K, Honda T.
14
Cy3S5G Struktur kimia dua antosianin dari ubi jalar ungu,
Ipomoea batatas. Fitokimia. 1992;31:2127–2130.
Pn3S5G 8
[3] Goda Y, Shimizu T, Kato Y, dkk. Dua sianin antho

ÿ-Toc 22 asilasi dari ubi ungu. Fitokimia. 1997;44(1):183–186.
BHT 20 [4] Terahara N, Kato Y, Nakamura M, Maitani T, Ya

maguchi M, Goda Y. Enam anthocyanin diacylated dari
0 30 60 akar penyimpanan ubi ungu, kentang Ipomoea. Biosci
Aktivitas penangkapan radikal DPPH (%) Biotechnol Biochem. 1999;63(8):1420–1424.
Gambar 4. Aktivitas penangkapan radikal DPPH (%) [5] Terahara N, Konczak-Islam I, Nakatani M, Ya makawa
antosianin kalus ubi jalar ungu 1, 2, 3, dan 4 (pH 7,4 pada O, Goda Y, Honda T. Antosianin dalam kalus yang
suhu kamar). ÿ-Toc = ÿ-tokoferol dan BHT = 2,6-di-tert- diinduksi dari akar penyimpanan ungu Ipomoea batatas
butil-4- metilfenol. Setiap nilai adalah rata-rata (RS%) ± L. Fitokimia. 2000;54(8):919–922.
standar deviasi (n= 4).
[6] Odake K. Karakteristik pigmen warna makanan berasal
dari Ayamurasaki. Di dalam: LaBonte DR, Yamashita
Gambar 3, anthocyanin diacylated (t1/2 dari 2: 266 menit, 3: M, Mochida M, eds. Prosiding Lokakarya Internasional
180 menit, dan 4: 337 menit) lebih stabil daripada Sistem Produksi Ubi Jalar Menuju Abad 21. Jepang:
monoacylated 1 (t1/2 = 37 menit), dan Cy3S5G nonacylated KNAES; 1997:303–309.
(t1/2 = 15 menit) dan Pn3S5G (t1/2 = 19 menit). Pengaruh [7] Furuta S, Suda I, Nishiba Y, Yamakawa O. Kegiatan
struktur pada stabilitas antosianin menunjukkan bahwa dua pemulungan radikal butylperoxyl tert tinggi dari kultivar
asam aromatik melindungi inti aglikon dengan mekanisme ubi jalar dengan daging ungu. Ilmu dan Teknologi
penumpukan hidrofobik tipe sandwich dan menghambat Pangan Internasional. 1998; 4:33–35.
serangan molekul air yang menyebabkan hilangnya warna [8] Terahara N. Struktur dan aktivitas antioksidan dari
[24, 25] . antosianin terasilasi stabil. Dalam: Proc 2nd
286 N. Terahara dkk 2004:5 (2004)
Konferensi Internasional tentang Faktor Pangan—Kimia drazyl. Biosci Biotechnol Biochem. 1998;62(6):1201–
dan Promosi Kesehatan; Kyoto, Jepang 1999. Didukung 1204.
oleh The Commemorative Association for The Japan World [21] Pomilio AB, Spproviero JF. Antosianin terasilasi dari Ipomoea
Exposition (1970). cairica. Fitokimia. 1972;11: 1125–1128.
[9] Oki T, Masuda M, Furuta S, Nishiba Y, Terahara N, Suda I.
Keterlibatan antosianin dan senyawa fenolik lainnya dalam [22] Pale E, Nacro M, Vanhaelen M, Vanhaelen-Fastre R, Ottinger
aktivitas pemulungan radikal kultivar ubi jalar berdaging R. Antosianin terasilasi dari bunga Ipomoea asarifolia.
ungu. Ilmu Makanan J. 2002;67(5):1752–1756. Fitokimia. 1998;48(8): 1433–1437.
[10] Yoshimoto M, Okuno S, Yoshinaga M, Yamakawa O, [23] Terahara N, Callebaut A, Ohba R, Nagata T, Ohnishi-
Yamaguchi M, Yamada J. Antimutagenisitas akar ubi jalar Kameyama M, Suzuki M. Acylated an thocyanidin 3-
( Ipomoea batatas) .Biosci Biotech nol Biochem.1999 sophoroside-5-glucosides dari bunga Ajuga reptans dan
;63(3):537–541. kultur sel yang sesuai.
[11] Yoshimoto M, Okuno S, Yamaguchi M, Yamakawa O. Fitokimia. 2001;58(3):493–500.
Antimutagenisitas anthocyanin terdeasilasi dalam ubi jalar [24] Brouillard, R. Ekspresi in vivo warna antosianin pada
berdaging ungu Biosci Biotechnol Biochem 2001;65(7):1652– tumbuhan. Fitokimia. 1983; 22:1311– 1323.
1655.
[12] Matsui T, Ueda T, Oki T, Sugita K, Terahara N, Mat sumoto [25] Goto T, Kondo T. Struktur dan susunan molekul antosianin
K. Tindakan penghambatan alfa-glukosidase dari antosianin - variasi warna bunga. Angew Chem Int Ed Engl.
terasilasi alami. 1. Survei pigmen alami dengan aktivitas 1991;30(1):17–33.
penghambatan yang kuat. Kimia Makanan J Agric. [26] Tamura H, Yamagami A. Aktivitas antioksidan dari antosianin
2001;49(4):1948–1951. monoasilasi yang diisolasi dari anggur Muscat Bailey A.
[13] Matsui T, Ueda T, Oki T, Sugita K, Terahara N, Mat sumoto Kimia Makanan J Agric. 1994;42(8):1612–
K. Tindakan penghambatan alfa-glukosidase dari antosianin 1615.
terasilasi alami. 2. Penghambatan alfa-glukosidase oleh [27] Konczak-Islam I, Okuno S, Yoshimoto M, Yamakawa O.
antosianin terasilasi terisolasi. Kimia Makanan J Agric. Komposisi fenolik dan antosianin dalam kultur suspensi sel
2001;49(4):1952–1956. ubi jalar. Biochem Light J. 2003;14(3):155–161.
[14] Matsui T, Ebuchi S, Kobayashi M, dkk. Efek anti-hiperglikemik
dari antosianin terdiasilasi yang berasal dari kultivar Ipomoea
batatas Ayamurasaki dapat dicapai melalui aksi
penghambatan Alfa-glukosidase. Kimia Makanan J Agric.
Email: terahara@nankyudai.ac.jp Faks:
2002;50(25):7244–7248. +81 985 83 3527; Telp: +81 985 83 3527
[15] Konczak-Islam I, Yoshinaga M, Nakatani M, Ter ahara N,
Yamakawa O. Pembentukan dan karakteristik garis sel
penghasil antosianin dari akar penyimpanan ubi jalar. Rep
Sel Tumbuhan 2000;19(5):472–477.
[16] Murashige T, Skoog F. Media yang direvisi untuk pertumbuhan

cepat dan bioassay dengan kultur jaringan tembakau.
Tumbuhan Fisiol. 1962;15:473–497.
[17] Konczak-Islam I, Nakatani M, Yoshinaga M, Ya makawa O.
Pengaruh ion amonium dan suhu terhadap komposisi
antosianin dalam kultur suspensi sel ubi jalar. Bioteknologi
Tumbuhan. 2001; 18:109–117.
[18] Konczak-Islam I, Yoshimoto M, Hou DX, Terahara N,

Yamakawa O. Sifat kemopreventif potensial dari ekstrak air
kaya antosianin dari jaringan ubi jalar yang diproduksi
secara in vitro (Ipomoea batatas L.). Kimia Makanan J
Agric. 2003;51(20):5916–5922.
[19] Terahara N, Callebaut A, Ohba R, Nagata T, Ohnishi-

Kameyama M, Suzuki M. Triacylated anthocyanins from
Ajuga reptans flowers and cell cul tures. Fitokimia.
1996;42(1):199–203.
[20] Metode Yamaguchi T, Takamura H, Matoba T, Terao J.
HPLC untuk evaluasi aktivitas pemulungan radikal bebas
dari makanan dengan menggunakan 1,1-diphenyl-2-picrylhy
ARTIKEL PENELITIAN
Asam Caffeoylquinic Dihasilkan In

Vitro dalam Akumulasi Antosianin Tinggi
Garis Sel Ubi Jalar
Izabela Konczak,1,2ÿ Shigenori Okuno,2 Makoto Yoshimoto,2 and Osamu Yamakawa2
1Food Science Australia, CRC untuk Bioproduk, 16 Julius Avenue, Riverside Corporate Park,
Ryde Utara, NSW 2113, Australia
2Departemen Pertanian Dataran Tinggi, Pusat Penelitian Pertanian Nasional Kyushu Okinawa,
Miyakonojo, Miyazaki 885-0091, Jepang
Diterima 2 April 2004; direvisi 27 Mei 2004; diterima 15 Juni 2004
Akumulasi senyawa fenolik telah dipantau dalam kultur suspensi garis sel ubi jalar yang mengakumulasi antosianin yang tumbuh di bawah
kondisi media produksi antosianin tinggi (APM) Murashige dan Skoog yang dimodifikasi selama periode 24 hari. Sampel jaringan yang
diekstraksi dengan asam asetat 15% dianalisis menggunakan HPLC pada panjang gelombang deteksi 326 nm. Antara lain, turunan asam
caffeoylquinic berikut terdeteksi: asam 4,5-dicaffeoylquinic, asam 3,5-dicaffeoylquinic, asam 3,4-dicaffeoylquinic, dan asam 3,4,5-tricaffeoylquinic.
Jumlah totalnya mencapai maksimum 110 mg/gFW antara hari ke-4 dan ke-15 pertumbuhan biakan pada APM. Senyawa utama campuran
fenolik adalah asam 3,5-dikafeoilkuinat dengan tingkat akumulasi maksimum 80 mg/100 gFW. Efek potensial dari senyawa fenolik yang
ditargetkan pada kualitas nutraceutical dari ekstrak kaya antosianin yang diproduksi secara in vitro dibahas.
PENGANTAR anthocyanin kentang termasuk ke dalam diet tikus juga telah

dilaporkan [14].
Radikal bebas dihasilkan terus menerus dalam tubuh Kultur sel tumbuhan telah berhasil diterapkan untuk
manusia sebagai produk sampingan dari metabolisme normal menghasilkan metabolit sekunder yang menarik, di antaranya
[1]. Mereka terlibat dalam beberapa penyakit seperti penyakit antosianin [15, 16]. Kami telah menetapkan garis sel
Alzheimer [2], kanker [3], dan gangguan pembuluh darah pengakumulasi antosianin (garis ungu (PL)) dari akar
(aterosklerosis, diabetes, hipertensi) [4] dan mempercepat penyimpanan ubi jalar ungu (Ipo moea batatas Lam cv
proses penuaan [5]. Meningkatkan kadar senyawa pemulung Ayamurasaki, Convolvulaceae) [17].
radikal yang sangat aktif dalam makanan penting untuk Di bawah kondisi media penghasil antosianin (APM) tinggi,
menjaga keseimbangan antara oksidan dan antioksidan garis sel ubi jalar mengakumulasi 3 kali lebih banyak pigmen
dalam tubuh dan untuk menghilangkan stres oksidatif. daripada akar penyimpanan kultivar Ayamurasaki yang
Kemampuan senyawa fenolik untuk mengais radikal bebas tumbuh di lapangan [18] dan dipertimbangkan untuk produksi
dan berkontribusi secara signifikan terhadap aktivitas komersial pewarna makanan alami. Evaluasi sifat kemopreventif
antioksidan ekstrak sayuran dan/atau buah didokumentasikan potensial dari garis sel ekstrak air yang kaya antosianin dalam
dengan baik [6, 7] dan metode penyaringan cepat untuk pengujian in vitro menunjukkan peningkatan aktivitas
aktivitas antioksidan relatif flavonoid dan fenolat telah dikembangkan. [8].
pemulungan radikal, antimutagenik, dan antiproliferasi
Aplikasi pewarna makanan alami berbasis antosianin telah dibandingkan dengan ekstrak akar penyimpanan Ayamurasaki
diusulkan [9] untuk meningkatkan aktivitas antiradikal bahan yang tumbuh di lapangan [19]. Peningkatan akumulasi
makanan. anthocyanin dalam kultur sel PL disarankan untuk berkontribusi
Ekstrak yang dibuat dari akar simpanan ubi jalar terhadap aktivitas ini. Jalur biosintetik fenolat terkait erat
berdaging ungu menampilkan serangkaian sifat yang dengan jalur thosianin [20] dan dalam garis sel yang
bermanfaat bagi kesehatan dalam studi in vitro seperti mengakumulasi antosianin, keberadaan senyawa fenolik
aktivitas pemulungan radikal [10, 11] dan antimutagenik [12] lainnya dapat diharapkan. Akumulasi dua fenolik umum, asam
dan pengurangan karbon tetraklorida yang diinduksi hati pada caffeic (CA) dan asam klorogenat (caffeoylquinic, CH), pada
juri [ 13]. Asam fenolik dan antosianin diidentifikasi memainkan tingkat rendah maksimum 10 mg/100 gFW dalam kultur sel
peran utama dalam sifat ekstrak ubi jalar ini. Efek PL telah terdeteksi [21]. Kami juga telah mengamati itu
antihiperglikemik (antidiabetes) manis

288 Izabela Konczak dkk 2004:5 (2004)
degradasi CH bersamaan dengan munculnya senyawa Industri Kimia (Osaka, Jepang). Karena turunan asam
utama baru dalam campuran fenolik [21]. caffeoylquinic tidak tersedia secara komersial, asam 4,5-
Oleh karena itu tujuan dari penelitian ini adalah untuk dicaffeoylquinic (4,5-DCQA), asam 3,5-dicaffeoylquinic (3,5-
memantau pembentukan dan degradasi turunan asam DCQA), asam 3,4-dicaffeoylquinic (3,4-DCQA) ), dan standar
caffeoylquinic yang diinduksi dalam kondisi APM tinggi. 3,4,5-tricaffeoylquinic acid (3,4,5-TCQA) dimurnikan dari
Cochromatography dengan standar telah digunakan untuk daun ubi jalar seperti yang dijelaskan sebelumnya [22]. Kurva
mengidentifikasi senyawa fenolik utama. Kontribusi mereka standar disiapkan untuk perhitungan konsentrasi absolut
yang mungkin terhadap sifat kemopreventif dari ekstrak garis senyawa berdasarkan luas puncak. Puncak terdeteksi pada
sel PL telah dibahas. panjang gelombang 326 nm dan diidentifikasi dengan
kromatografi ko.
BAHAN DAN METODE
HASIL DAN DISKUSI
Bahan tanaman dan kondisi budidaya
Kultur kalus telah dikembangkan dari umbi simpanan ubi Ekstrak kultur suspensi garis sel PL, dikalikan dengan
jalar, cv Ayamurasaki, seperti yang telah dijelaskan MS standar yang diperkaya dengan 1,0 mg/L 2,4-D (media
sebelumnya [17]. Kultur sel tersuspensi diawali dengan multiplikasi), kaya akan antosianin [17]. Transfer jaringan
memindahkan sekitar 1 g (berat segar) kalus ke dalam 25 menjadi APM tinggi menghasilkan peningkatan lebih lanjut
mL media cair dalam labu Erlenmeyer 100 mL. Media Basal dalam akumulasi antosianin bersamaan dengan peningkatan
Murashige dan Skoog (MS) yang dilengkapi dengan 1,0 mg/ 3 kali lipat dalam total kadar fenolat [21]. Pemantauan
L asam 2,4-diklorofenoksiasetat (2,4-D) digunakan sebagai pembentukan fenolik dalam jaringan garis sel selama satu
media multiplikasi (MM). Kultur diinkubasi pada rotary shaker periode pertumbuhan 24 hari menunjukkan campuran sekitar
(130 rpm) pada suhu 25ÿC dalam gelap. 30 senyawa berbeda (Gambar 1). Kromatogram HPLC fase
Media diganti setiap minggu. terbalik dalam perubahan dinamis yang dicat dalam pola
Untuk percobaan, subkultur berumur tujuh hari fenolik dari waktu ke waktu (Gambar 1).
dipindahkan ke cairan APM tinggi yang merupakan MS yang
dimodifikasi dengan 9,4 mM KNO3, tanpa NH4NO3, dengan Selanjutnya deteksi sebelumnya dari dua komponen
sukrosa 5% dan tanpa zat pengatur tumbuh [18]. Seratus mg minor, CA dan CH, yang akumulasinya meningkat tajam
agregat sel ditempatkan dalam labu Erlenmeyer 50 mL yang dari jumlah jejak menjadi 10 mg/100 gFW selama dua hari
berisi 10 mL media (pH 5,8 sebelum autoklaf). pertama pertumbuhan kultur dan diikuti dengan penurunan
Sampel (6 ulangan per setiap hari pengambilan sampel) bertahap dari waktu ke waktu [21], kami telah memantau
dipanen dalam interval 2-3 hari selama 24 hari (periode peningkatan akumulasi senyawa utama yang diwakili oleh
pertumbuhan). puncak yang menunjukkan waktu retensi 47,2 menit (puncak
4, Gambar 1). Melalui perbandingan dan kokromatografi
Ekstraksi fenolat dan antosianin Agregat sel dengan standar turunan CH4 (asam feoylquinic caf) yang
dipisahkan dari media biakan dengan filtrasi vakum diisolasi dari daun ubi jalar, puncak ini diidentifikasi sebagai
digiling dan direndam dalam asam asetat 15% selama 16 3,5-DCQA. Akumulasi 3,5-DCQA seiring dengan penurunan
jam. Volume larutan asam asetat dihitung dalam proporsi 20 kadar CH (Tabel 1). Antara hari ke-2 dan ke-4 kultur setelah
mL/gfw jaringan. Sampel disentrifugasi pada 10.000 rpm transfer ke APM tinggi, konsentrasi relatif 3,5-DCQA dalam
selama 10 menit dan senyawa fenolik dalam supernatan campuran meningkat dari 0,1% menjadi 15,8% dan tetap
diidentifikasi. konstan hingga hari ke-15 (Tabel 1). Jumlah total 3,5-DCQA
meningkat selama 4 hari pertama setelah transfer ke APM
Identifikasi fenolik dan analisis HPLC Supernatan tinggi menjadi 80 mg/100 gFW dan menurun antara hari
disaring melalui membran penyaring 0,2 µm ke-15 dan ke-18 menjadi 20 mg/100 gFW (Gambar 2a). 3,5-
(DISMIC-13cp, Advantec, Jepang), disuntikkan (10 µL) ke DCQA adalah senyawa utama dari campuran fenolik yang
dalam kolom YMC-Pack ODS-AM AM-302 (150 × 4,6 mm, 5 diproduksi oleh garis sel PL dan dianalisis dalam kondisi
µm; YMC, Kyoto, Jepang) pada 40ÿC. yang dijelaskan (Tabel 1).
Sistem HPLC terdiri dari dua pompa LC-10AT, autoinjektor
SIL-10AXL, oven kolom CTO-10AC, dan detektor fotodioda Perjalanan waktu akumulasi untuk tiga senyawa lain
array fotodioda SPD-M10AVP UV-VIS (Shimadzu, Kyoto, yang diwakili oleh puncak dengan waktu retensi 46,7, 50,4,
Jepang) yang dikendalikan oleh workstation CLASS-LC10 dan 57,1 menit (Gambar 1) juga dipantau. Melalui
( Shimadzu). Fase gerak terdiri dari campuran asam format kokromatografi dengan standar asam caffeoylquinic, senyawa
0,2% (v/v) dalam air (pelarut A) dan metanol (pelarut B). ini diidentifikasi masing-masing sebagai 4,5-DCQA, 3,4-
Profil elusi adalah gradien linier yang dimulai dengan 2% B DCQA, dan 3,4,5-TCQA (Gambar 3). Data menunjukkan
dari 0 hingga 15 menit, 2% hingga 45% B dari 15 hingga 50 bahwa akumulasi aktif 4,5-DCQA dan 3,4-DCQA tertunda
menit, dan 45% B dari 50 hingga 65 menit. Laju alir adalah 1 dibandingkan dengan 3,5-DCQA dan berada pada level yang
mL/menit [21]. jauh lebih rendah (Gambar 2b dan 2c). Konsentrasi maksimum
Standar CH dan CA dibeli dari Wako Pure 4,5-DCQA
2004:5 (2004) Asam Quinic Dihasilkan In Vitro 289
Tabel 1. Konsentrasi relatifÿ (%) dari senyawa fenolik terpilih dalam ekstrak jaringan garis sel PL yang ditumbuhkan pada media penghasil antosianin tinggi
selama 24 hari. (T: konsentrasi kurang dari 0,1%; ND: tidak terdeteksi.)
Hari CA CH 3,5-DCQA 4,5-DCQA 3,4-DCQA 3,4,5-TCQA Total conc Jumlah total (mg/gFW) 1,2 ± 0,0
0 4,7 ± 0,0 0,6 ± 0,0 8,7 ± 0,0 0,4 ± 0,0 ND 15.2 20,2 ± 0,0
2 6,0 ± 1,4 3,2 ± 0,3 0,1 ± 0,1 0,1 ± 0,1 ND ND 9.4 21 ± 3,8
4 3,8 ± 1,3 1,2 ± 0,4 15,8 ± 5,2 1,8 ± 0,1 0,6 ± 0,1 ND 23.2 117 ± 17,6
6 5.1 ± 2.6 1,1 ± 0,5 13,0 ± 7,4 1,7 ± 0,6 0,7 ± 0,1 T 21.6 109 ± 29,5
15 4.1 ± 1.6 1,5 ± 0,7 13,5 ± 5,9 2,9 ± 0,8 1,4 ± 0,1 0,1 ± 0,01 23.5 102 ± 36,6
18 6,7 ± 3,0 0,9 ± 0,1 3,0 ± 0,2 1,6 ± 0,6— 0,1 ± 0,01 12.3 40 ± 9,4
21 8.2 ± 5.4 1,1 ± 0,4 4,4 ± 1,5 2,0 ± 0,9 1,2 ± 0,1 0,12 ± 0,01 17.0 52 ± 11.2
24 9.1 ± 1.7 0,8 ± 0,1 3,9 ± 0,6 1,3 ± 0,2 1,1 ± 0,1 0,13 ± 0,01 16.33 48 ± 8,5
ÿKonsentrasi relatif dihitung berdasarkan total luas puncak fenolat yang terdeteksi pada 326 nm (100%) dan luas puncak yang diinginkan (%).
Standar deviasi dari 6 penentuan independen untuk setiap titik pengambilan sampel.
Hari 0 senyawa pada hari ke-6 periode pertumbuhan diikuti dengan

peningkatan yang stabil dari waktu ke waktu (Gambar 2d).
mAb
12 34 5 Tingkat akumulasi tertinggi (1,2 mg/100 gFW) dicapai pada
50 fase stasioner. Menurut konsentrasi relatif yang dihitung
berdasarkan luas puncak, tingkat akumulasi fenolik terpilih
ini dalam jaringan garis sel PL yang ditumbuhkan pada APM
0 adalah 3,5-DCQA > CA > 4,5-DCQA > CH > 3, 4-DCQA >
4 Hari 9 3,4,5-TCQA.
Son et al [23] melaporkan bahwa asam fenolat utama
12 3 5 6 yang diidentifikasi dalam berbagai kultivar ubi jalar adalah
100
CA, CH, dan dua isomer DCQA. Identifikasi rinci isomer
mAb DCQA dalam ekstrak daun ubi jalar lebih dari 1389 varietas
telah dilakukan oleh Islam et al [22].
50 Penulis ini mengidentifikasi tiga isomer DCQA: 4,5-DCQA,
3,5-DCQA, 3,4-DCQA, dan 3,4,5-TCQA. Di- dan asam
tricaffeoylquinic biosintesis melalui konversi CH, dan isolasi
0 enzim yang mengkatalisis konversi CH menjadi 3,5-DCQA
1 dari akar ubi jalar telah dilaporkan [24]. Identifikasi turunan
Hari 21
CH dalam kultur kalus yang terbentuk dari akar simpanan
2 34 5 6
ubi jalar ungu menunjukkan bahwa jalur biosintesis untuk
50
pembentukan senyawa tersebut aktif dalam kultur kalus dan
mAb
biosintesisnya dapat ditingkatkan melalui modifikasi media

kultur. Level tertinggi CH dan turunannya dalam kultur garis
0 sel PL sekitar 110 mg/100 gFW diperoleh antara hari ke-4
dan ke-15 pertumbuhan pada APM (Tabel 1). Kandungan
20 40 60
isomer DCQA sendiri adalah 93,0 mg/100 gFW dengan
kontribusi CA dan CH masing-masing menjadi 10,0 dan 6,0
mg/gFW. Walter et al [25] melaporkan bahwa kandungan
Gambar 1. Kromatogram HPLC dari senyawa fenolik yang dipantau dalam fenolik total dari akar umur simpan ubi jalar (dikupas kulitnya)
ekstrak mentah kultur suspensi garis sel PL selama satu periode
berkisar di antara kultivar dari 14 hingga 51 mg/100 g FW,
pertumbuhan 24 hari dalam media produksi antosianin tinggi. 1: asam
yang 8 hingga 2 kali lipat lebih rendah daripada yang
caffeic (CA); 2: asam klorogenat (CH); 3: 3,4- asam dicaffeoylquinic (3,4-
DCQA); 4: asam 3,5-dicaffeoylquinic (3,5-DCQA); 5: asam 4,5- diperoleh dalam percobaan kami. Namun, fenolat pada akar
dicaffeoylquinic (4,5-DCQA); 6: 3,4,5-asam tricaffeoylquinic (3,4,5-TCQA). simpanan ubi jalar tidak terdistribusi secara merata tetapi
terlokalisasi pada beberapa jaringan, termasuk periderm dan
jaringan di bawahnya sebagai sisi akumulasi yang dipilih [26].
adalah 14,7 mg/100 gFW pada hari ke-15 kultur. Kadar 3,4- Sebuah studi tentang komposisi kimia dari korteks luar akar
DCQA tertinggi sebesar 4,0 mg/100 gFW diamati pada fase penyimpanan mengungkapkan bahwa dalam lapisan 3 mm
stasioner periode pertumbuhan (hari ke-21). Jejak turunan eksternal konsentrasi isomer DCQA bervariasi antara kultus
CH dengan struktur molekul yang paling berkembang, 3,4,5- 168-638 mg/100 gFW, CA 33-138 mg/gFW , dan CH dari 22
TCQA, terdeteksi di antara fenolik menjadi 173 mg/gFW [27].
120 20
100
16
80
12
100gFW)
DCQA
(mg/
3,5-
60 100gFW)
DCQA
(mg/
4,5-
8
40
4
20
0 0
0 10 20 0 10 20
Masa pertumbuhan (d) Masa pertumbuhan (d)
(sebuah) (b)
1.6
4
1.2
3
100gFW)
DCQA
(mg/
3,4-
100gFW)
TCQA
3,4,5-
(mg/
0,8
2
0,4
1
0 0
0 10 20 0 10 20
Masa pertumbuhan (d) Masa pertumbuhan (d)
(c) (d)
Gambar 2. Akumulasi (a) asam 3,5-dicaffeoylquinic (3,5-DCQA), (b) asam 4,5- dicaffeoylquinic (4,5-DCQA), (c) asam 3,4-
dicaffeoyl quinic ( 3,4-DCQA), (d) 3,4,5-tricaffeoylquinic acid (3,4,5-TCQA) dalam kultur suspensi PL selama satu periode
pertumbuhan dalam media penghasil antosianin tinggi (APM). Bar mewakili standar deviasi dari enam ulangan.
Fungsi turunan asam caffeoylquinic yang terdapat pada Seperti yang dijelaskan dalam makalah ini, akumulasi asam
korteks luar akar simpanan ubi jalar adalah sebagai pelindung caffeoylquinic oleh kultur suspensi PL di bawah kondisi APM
terhadap serangan penyakit jamur [27]. Yoshimoto et al [28] mungkin bertanggung jawab atas hasil ini.
menemukan bahwa 3,4,5-TCQA, diikuti oleh isomer DCQA,
menunjukkan aktivitas antimutagenik yang unggul terhadap Asam caffeoylquinic menunjukkan beberapa hubungan
CH terhadap mutagen makanan matang Trp-P-1. Kami telah medis yang tepat: Zhu et al [29] melaporkan bahwa DCQA
mengevaluasi aktivitas antimutagenik dari ekstrak encer yang secara spesifik dan ireversibel menghambat replikasi virus
kaya antosianin dari garis sel PL yang diproduksi di bawah imunodefisiensi manusia, HIV-1. Berbeda dengan DCQA,
kondisi MM dan medium APM tinggi dan mengamati bahwa kemungkinan prekursornya, CH, CA, dan asam quinic, tidak
ekstrak yang diproduksi di bawah kondisi APM tinggi aktif melawan HIV-1. Para penulis berpendapat bahwa DCQA
menunjukkan aktivitas antimutagenik yang lebih kuat adalah senyawa timbal yang menjanjikan untuk
(penghambatan 73% dari Trp P Mutasi terbalik yang diinduksi mengembangkan obat antiretroviral baru. Di bawah kondisi
-1 dari Salmonella typhimurium TA98) dibandingkan dengan APM yang tinggi, garis sel ubi jalar mengakumulasi tingkat
ekstrak garis sel yang diproduksi di bawah kondisi media MM DCQA yang relatif tinggi dan oleh karena itu dapat dianggap
(54%) dan ekstrak akar simpanan ubi jalar yang tumbuh di sebagai sumber produksi berkelanjutan melalui teknologi
lapangan, yang dipilih sebagai jaringan donor untuk garis sel pembangunan (36%)sel
berbasis kultur [19].
tanaman.
2004:5 (2004) Asam Quinic Dihasilkan In Vitro 291
KE COOH HAI
idation: ROS dalam transduksi sinyal vaskular. Free
Radic Biol Med. 2003; 35(2):117–132.
[5] Szweda PA, Friguet B, Szweda LI. Proteolisis, radikal
KE bebas, dan penuaan. Free Radic Biol Med.
R3O 2002;33(1):29–36.
ATAU1
OH [6] Wang H, Cao G, Sebelumnya RL. Kapasitas penyerapan
ATAU2 radikal oksigen antosianin. Kimia Makanan J Agric.
OH
1997;45(2):304–309.
Asam kuinat Asam kafein [7] Chu YH, Chang CL, Hsu HF. Kandungan flavonoid
beberapa sayuran dan aktivitas antioksidannya.
Pertanian Pangan J Sci. 2000;80(5):561–566.
Senyawa fenolik R1 R2 R3
[8] Pannala AS, Rice-Evans C, Metode penyaringan cepat
Asam klorogenat Caffeic H H untuk aktivitas antioksidan relatif dari flavonoid dan
3,5-DCQA Caffeic H Caffeic
fenolat. Dalam: Packer L, ed. Flavonoid dan Polifenol
3,4-DCQA Caffeic Caffeic H
Lainnya, vol. 335 Metode dalam Enzimologi. New York,
4,5-DCQA H Caffeic Caffeic
NY: Elsevier; 2001:266–272.
3,4,5-TCQA Caffeic Caffeic Caffeic
[9] Espin JC, Soler-Rivas C, Wichers HJ, Garcia-Viguera C.
Pewarna alami berbasis antosianin: sumber aktivitas
Gambar 3. Struktur molekul senyawa fenolik pada garis sel PL antiradikal baru untuk bahan makanan. Kimia Makanan
yang dihasilkan dari ubi jalar ungu, cv Ayamurasaki. J Agric. 2000;48(5):1588–1592.
[10] Cevallos-Casals BA, Cisneros-Zevallos L. Stoichio studi
metrik dan kinetik antioksidan fenolik dari jagung ungu
Andean dan ubi jalar merah. Kimia Makanan J Agric.
Laporan tentang sifat antioksidan dan antimutagenik 2003;51(11):3313–3319.
yang kuat dari senyawa fenolik yang ditargetkan, CA, CH, [11] Oki T, Masuda M, Furuta S, Nishiba Y, Terahara N,
dan turunannya, oleh peneliti lain [28, 30] dan data kami Suda I. Keterlibatan antosianin dan senyawa fenolik
sebelumnya tentang evaluasi sifat kemopreventif dari ekstrak lainnya dalam aktivitas pemulungan radikal kultivar ubi
garis sel PL [19] menunjukkan bahwa menginduksi akumulasi jalar berdaging ungu. Ilmu Makanan J. 2002;67(5):1752–
asam caffeoylquinic dalam garis sel ubi jalar dapat 1756.
meningkatkan sifat nutraceutical dari kompleks asam [12] Yoshimoto M, Okuno S, Yamaguchi M, Yamakawa O.
antosianin-fenolat yang dihasilkan oleh jaringan garis sel PL. Antimutagenisitas anthocyanin terdeasilasi dalam ubi
Namun kualitas nutraceutical kompleks ini akan sepenuhnya jalar berdaging ungu Biosci Biotechnol Biochem
bergantung pada bioavailabilitas dan/atau degradasi selama 2001;65(7):1652–1655.
proses pencernaan. Telah dilaporkan bahwa CA dan CH [13] Suda I, Furuta S, Nishiba Y, Yamakawa O, Matsugano
diserap pada tingkat tinggi di usus halus manusia: masing- K, Sugita K. Aktivitas perlindungan hepato dari jus ubi
masing 97% dan 33% [31]. Kepentingan kami lebih lanjut jalar berwarna ungu. Bagian Depan Pencarian Ubi Jalar.
untuk mengevaluasi stabilitas senyawa fenolik yang dihasilkan 1997;(4):3.
dalam sistem makanan dan bioavailabilitasnya pada manusia. [14] Matsui T, Ebuchi S, Kobayashi M, dkk. Efek anti
hiperglikemik dari antosianin diasilasi yang diturunkan
dari kultivar Ipomoea batatas Ayamurasaki dapat
PENGAKUAN dicapai melalui ÿ-glukosidase dalam aksi penghambatan.
Kimia Makanan J Agric. 2002;50(25): 7244–7248.
Pendirian proyek ini melalui JSPS postdoctoral fellowship
to Izabela Konczak oleh Japan International Science and [15] Do CB, Cormier F. Pengaruh konsentrasi amonium
Technology Exchange Center untungnya diakui. tinggi pada pertumbuhan dan pembentukan antosianin
dalam suspensi sel anggur (Vitis vinifera L.) yang
dikultur dalam media produksi. Kultus Organ Tiss Sel
REFERENSI Tumbuhan. 1991;27:169–174.
[16] Kobayashi Y, Akiita M, Sakamoto K, dkk. Produksi
[1] Fridovich I. Radikal superoksida dan dismutase anthocyanin skala besar oleh kultur suspensi sel Aralia
superoksida. Annu Rev Biochem. 1995;64:97–112. cordata . Appl Mikrobiol Bioteknol. 1993;40(2-3):215–
[2] Perry G, Tunai AD, Smith MA. Penyakit Alzheimer dan 218.
stres oksidatif. J Biomed Biotechnol. 2002;2(3):120– [17] Konczak-Islam I, Yoshinaga M, Nakatani M, Ya makawa
123. O, Terahara N. Pembentukan dan karakteristik garis
[3] Stres oksidatif Athar M. dan asal mula karsinoma sel penghasil antosianin dari akar simpanan ubi jalar.
eksperimental. India J Exp Biol. 2002;40(6):656–667. Laporan Sel Tumbuhan. 2000;19(5):472–477.
[4] Chen K, Thomas SR, Keaney JF Jr. Di luar LDL lembu
[18] Konczak-Islam I, Nakatani M, Yoshinaga M, Yamakawa [31] Olthof MR, Hollman PC, Katan MB. Asam klorogenat
O. Pengaruh ion amonium dan suhu pada komposisi dan asam caffeic diserap pada manusia. J Nutr.
antosianin dalam kultur suspensi sel ubi jalar. 2001;131(1):66–71.
Bioteknologi Tumbuhan. 2001;18(2):109–117.
[19] Konczak-Islam I, Yoshimoto M, Hou DX, Terahara N, Email: izabela.konczak@csiro.au
Yamakawa O. Sifat kemopreventif potensial dari ekstrak Faks: +642 9 490 8563; Telp: +642 9 490 8563
air yang kaya antosianin dari jaringan ubi jalar yang
diproduksi secara in vitro (Ipomoea batatas L.). Kimia
Makanan J Agric. 2003;51(20):5916–
5922.
[20] Haslam E. Polifenol Praktis. Dari Struktur ke Pengenalan
Molekuler dan Tindakan Fisiologis.
Cambridge, Mass, AS: Cambridge University Press;
1998.
[21] Konczak-Islam I, Okuno S, Yoshimoto M, Yamakawa O.
Komposisi fenolat dan antosianin dalam kultur suspensi
sel ubi jalar. Biochem Light J. 2003;14(3):155–161.
[22] Islam MS, Yoshimoto M, Yahara S, Okuno S, Ishig uro

K, Yamakawa O. Identifikasi dan karakterisasi
komposisi polifenol daun pada genotipe ubi jalar
(Ipomoea batatas L.). Kimia Makanan J Agric.
2002;50(13):3718–3722.
[23] Son KC, Severson RF, Snook ME, Kays SJ. Karbohidrat
akar, asam organik dan kimia fenolik dalam kaitannya
dengan ketahanan kumbang ubi jalar.
HortScience. 1991;26:1305–1308.
[24] Kojima M, Kondo T. Enzim dalam akar ubi jalar yang
mengkatalisis konversi asam klorogenat, asam 3-
caffeoylquinic, menjadi asam isochlorogenic, 3, 5-
dicaffeoylquinic acid. Kimia Biol Pertanian. 1985;49:2467–
2469.
[25] Walter WM Jr. Purcell AE, McCollum GK. Penggunaan
kromatografi cair tekanan tinggi untuk analisis fenolik
ubi jalar. Kimia Makanan J Agric. 1979;27(5):938–941.
[26] Naungan KAMI, Walter WM. Lokalisasi fenol dan

polifenol oksidase pada ubi jalar 'jewel' (ipomoea
batatas 'jewel'). Bisakah J Bot. 1981;59:1961–1967.
[27] Stange RR Jr. Midland SL, Holmes GJ, Sims JJ, Mayer
RT. Konstituen dari periderm dan korteks luar Ipomoea
batatas dengan aktivitas antijamur terhadap Rhizopus
stolonifer. Biol Technol pascapanen. 2001;23(2):85–92.
[28] Yoshimoto M, Yahara S, Okuno S, Islam MS, Ishig uro

K, Yamakawa O. Antimutagenisitas turunan asam
mono-, di-, dan tricaffeoylquinic yang diisolasi dari daun
ubi jalar (Ipomoea batatas L.). Biosci Biotechnol
Biochem. 2002;66(11):2336–2341.
[29] Zhu K , Lamb ML , Atienza J , Robinson WE Jr .
Chow SA. Penghambatan ireversibel dari human
immunodeficiency virus tipe 1 integrase oleh asam
dicaffeoylquinic. J Virol. 1999;73(4):3309–3316.
[30] Yamada J, Tomita Y. Aktivitas antimutagenik asam caf
feic dan senyawa terkait. Biosci Biotechnol Biochem.
1996;60(2):328–329.
ARTIKEL PENELITIAN
Bioavailabilitas dan Biokinetik Antosianin

Dari Jus Anggur Merah dan Anggur Merah
Roland Bitsch,1ÿ Michael Netzel,1 Thomas Frank,2 Gabriele Strass,1 and Irmgard Bitsch3
1Institut Ilmu Gizi, Universitas Friedrich-Schiller Jena, Dornburgerstrasse 29, 07743 Jena, Jerman
2IMFORM GmbH International Clinical Research, Birkenweg 14, 64295 Darmstadt, Jerman
3Institut Ilmu Gizi, Justus-Liebig-University Giessen, Wilhelmstrasse 20, 35392 Giessen, Jerman
Dalam studi komparatif, 9 sukarelawan sehat menelan satu dosis oral 400 mL jus anggur merah atau anggur merah dengan
kandungan antosianin yang disesuaikan dengan dosis (283,5 mg atau 279,6 mg, resp) dalam crossover. Kandungan glukosida
antosianin terdeteksi dalam plasma dan ekskresi urin. Selain itu, aktivitas antioksidan plasma dinilai setelah asupan. Berdasarkan
kandungan plasma, kriteria biokinetik antosianin tunggal dihitung, seperti AUC, cmax, tmax, dan laju eliminasi t1/2. Ekskresi
anthocyanin total urin berbeda secara signifikan dan sebesar 0,18% (anggur merah) dan 0,23% (jus anggur merah) dari dosis yang
diberikan. Selain itu, aktivitas antioksidan plasma meningkat ke tingkat yang lebih tinggi setelah konsumsi jus dibandingkan dengan
anggur. Penyerapan usus antosianin jus anggur merah tampaknya lebih baik dibandingkan dengan anggur merah, menunjukkan
kemungkinan efek sinergis dari kandungan glukosa jus. Peningkatan penyerapan menghasilkan peningkatan bioaktivitas plasmatik.
PENGANTAR studi satu pusat di bawah kondisi yang terkontrol, vol unteers
tertelan setelah puasa semalam satu porsi baik 400 mL anggur
Efek perlindungan kesehatan dari antosianin sudah dikenal merah (varietas Lemberger, Jerman) atau volume yang sama
luas seperti yang terungkap dari studi epidemiologi [1, 2, 3]. dari konsentrat jus anggur merah encer yang diperoleh secara
Aktivitas antioksidatif yang terbukti secara in vitro adalah komersial dengan dosis anto sianin total identik. 283,5 mg (jus
karakteristik antosianin yang paling dominan seperti fenolik anggur merah) atau 279,6 mg (anggur merah). Fase uji
tanaman lainnya dan mungkin terkait dengan manfaat dipisahkan oleh interval 4 minggu. Setiap orang berfungsi
kesehatan, sehingga melindungi jaringan tubuh terhadap sebagai kontrolnya sendiri. Urutan konsumsi minuman tidak
kerusakan oksidatif oleh radikal bebas oksigen, yang mungkin diacak. Anggur dan jus dicerna bersama dengan gulungan
berperan dalam penyakit kronis. .
putih dan 30 g keju. Para relawan diinstruksikan untuk tidak
Terlepas dari indikasi aktivitas biologisnya, hingga saat ini mengonsumsi makanan atau jus yang mengandung antosianin
hanya ada sedikit informasi tentang bioavailabilitas dan atau alkohol 24 jam sebelum dan selama penelitian.
bioaktivitas in vivo. Selain itu, data biokinetik tentang
penyerapan, distribusi, metabolisme, dan eliminasi mereka Sampel darah vena diambil pada awalnya (predosis
pada manusia sejauh ini masih kurang tetapi merupakan sebagai awal) dan pada 0,25, 0,50, 1,0, 1,5, 2, dan 3 jam
prasyarat untuk penilaian kemanjuran mereka dalam organisme. setelah minum jus atau anggur. Sampel urin dikumpulkan
Selain itu, diperdebatkan secara kontroversial apakah alkohol secara predosis dan kuantitatif dalam interval jam selama
dapat mempengaruhi ketersediaanhayati dan ekskresi ginjal periode 7 jam. Rancangan penelitian telah disetujui oleh Komisi
dari kelompok fenolat tanaman ini. Etika Universitas Giessen, Jerman.
Tujuan dari penelitian ini adalah perbandingan sebagai
penilaian bioavailabilitas dan bioaktivitas antosianin jus anggur Dalam plasma dan urin, kandungan antosianin dianalisis
merah versus anggur merah setelah konsumsi. dengan metode HPLC biasa [4, 5, 6, 7]. Dalam penjelasan
singkat, setelah ekstraksi dari plasma dengan menggunakan
BAHAN DAN METODE cartridge ekstraksi fase padat ODS dan elusi dengan 5 mL
asam trifluoruacetic (TFA) 0,44 M dalam metanol, anthocyanin
Kami merekrut untuk penelitian 9 sukarelawan sehat (4 laki- dipisahkan menggunakan kolom Prontosil Eurobond RP-18
laki dan 5 perempuan) dalam rentang usia 24 sampai 34 tahun yang dilindungi oleh LiChrospher 100 Kolom pelindung RP-18
dengan indeks massa tubuh 19,7-26,3 kg / m2. Sebagai dan elusi isokratik dengan air/asetonitril/asam format (81/10/9,
minuman, anggur merah Jerman (Lemberger) dan konsentrat pH 1,6) sebagai fase gerak. Zat tunggal terdeteksi pada 520
jus anggur merah komersial disediakan. Di tempat terbuka, nm dengan detektor susunan fotodioda

294 Roland Bitsch dkk 2004:5 (2004)
Tabel 1. Senyawa bioaktif yang tertelan.
Konsentrat jus anggur

Komponen/parameter Anggur merah (400 mL)
merah. diencerkan (400 mL)
Kapasitas antioksidan oleh

6.0 8.6
Uji TRAP (mmol)
Total antosianin (mg) 283.5 279.6
Flavan-3-ols (mg) 15.2 74.8
Flavonol (mg) 5.6 2.4
Resveratrol (mg) 9.2 6.8
Asam fenolik (mg) 16.8 23.2
Total fenolik (mg) 330.3 386.8
dan detektor UV-VIS. Identitas zat yang dipisahkan uji perbedaan intraindividual yang diubah log dalam data
dipastikan dengan membandingkan waktu retensi dan yang dinormalisasi dosis. Asumsi distribusi dikonfirmasi oleh
spektrum UV-VIS dengan standar yang tersedia secara uji Shapiro-Wilk sebelum melakukan uji t , yang didasarkan
komersial. Batas deteksi antosianin yang dianalisis adalah pada asumsi log perbedaan intraindividual yang terdistribusi
antara 0,65 ng/mL (sianidin-3-glukosida) dan 5,2 ng/mL normal. Perbedaan signifikan diterima dengan nilai P kurang
(malvidin-3-glukosida) di semua matriks. Untuk kalibrasi dari atau sama dengan 0,05.
( nilai rata-rata r2 0,998), urin kosong dan sampel plasma
dibubuhi larutan standar dengan konsentrasi yang diketahui. Bioaktivitas fenolik dalam jus dan anggur diperkirakan
dengan mengukur aktivitas antioksidan dalam sampel
Kondisi kromatografi identik untuk minuman, plasma, plasma dengan bantuan uji TRAP yang umum digunakan
dan urin. Sampel jus dan anggur merah diencerkan 1:50 menurut [10]. Total fenolat yang tertelan ditunjukkan pada
dengan fase gerak HPLC dan disentrifugasi sebelum Tabel 1.
diinjeksikan ke dalam kolom HPLC. Profil antosianin yang
dianalisis dalam jus anggur sedikit berbeda dari anggur HASIL
dalam kandungan glukosida petunidin yang lebih rendah (42
berbanding 91 µg/mL) dan malvidin (327 versus sus 461 µg/ Farmakokinetik dari anthocyanin tunggal dalam plasma
mL) dan kandungan glukosida del phinidin yang lebih tinggi setelah jus anggur merah dan asupan anggur merah
( 124 berbanding 95 µg/mL) dan peonidin (208 berbanding ditunjukkan pada Tabel 2. Patut dicatat bahwa anthocyanin
45 µg/mL). Pada sampel predosis plasma dan urin para dalam plasma dan urin hampir secara eksklusif terdeteksi
relawan, kadar antosianin berada di bawah batas deteksi. sebagai glukosida, seperti yang juga ditunjukkan oleh orang
lain [ 11, 12, 13, 14]. Tidak ada bentuk terkonjugasi atau
Total polifenol ditentukan menurut [8] dengan modifikasi bebas lain yang dapat diidentifikasi dalam plasma; hanya,
metode Folin-Ciocalteau. Polifenol terkonjugasi dihidrolisis dalam ekskresi urin, dua puncak kecil tambahan dari
dengan 1 M asam hidroklorat (HCl) dan ikatan polifenol-lipid metabolit tak dikenal muncul setelah asupan jus dan anggur.
diputus dengan 2 M NaOH dalam metanol 75% diikuti Oleh karena itu, data berikut terkait dengan glukosida
dengan pengendapan protein plasma dengan asam antosianin. Setelah konsumsi jus anggur, cmaks rata-rata
metafosfat 0,75 M. Polifenol, setelah sentrifugasi, diekstraksi geometris dari total antosianin sekitar 100 ng/mL diperkirakan
dari supernatan dengan aseton/air (1/1) dan diuji dengan pada waktu puncak tmaks setengah jam, sedangkan setelah
reagen Folin-Ciocalteau. Hasil diberikan sebagai mil ligram anggur merah, ambil cmaks yang lebih rendah sekitar 43 ng/
gallic acid equivalents (GAE) per liter. Nilai antosianin mL hanya tercapai pada tmax waktu puncak rata- rata 1,5
glukosida dalam plasma dan urin didasarkan pada jam. AUC plasmatik rata-rata geometris yang dicapai, setelah
perhitungan farmakokinetik/biokinetik, seperti konsentrasi asupan anggur, hanya 60% dari level setelah jus anggur.
maksimal cmax, waktu puncak tmax, area di bawah kurva Tetapi karena variabilitas antar individu yang lebih tinggi dari
AUC, dan waktu paruh eliminasi t1/2 [ 4]. Evaluasi farmakok AUC dan cmax setelah jus anggur merah, tidak ada
netik nonkompartemen menurut metode standar dilakukan perbedaan yang signifikan secara statistik dari kadar
[9] dengan menggunakan perangkat lunak WinNonlin antosianin total plasmatik antara kedua minuman yang dapat
Professional (versi 3.3, Pharsight Co, Mountain View, Calif). dipastikan. Hanya nilai glukosida cyanidin dan del phinidin
yang tidak diragukan lagi meningkat setelah minum jus
anggur karena konsentrasi kedua anthocyanin setelah
Tingkat dan bioavailabilitas relatif (anggur versus jus) diuji konsumsi anggur berada di bawah batas deteksi.
kesetaraannya dengan menghitung interval kepercayaan Profil plasma dari zat yang diserap juga tercermin dalam
(CI) 90% berdasarkan t satu sampel. pola ekskresi urin
2004:5 (2004) Bioavailabilitas Antosianin pada Manusia Dari Jus Anggur dan Anggur 295
Tabel 2. Parameter farmakokinetik plasma antosianin setelah pemberian jus anggur merah dan anggur merah.
Antosianin cmmaks (ng/ tmax (h)a AUC(0–3) (ngÿhÿmLÿ1) 0,60 t1/2
Cya-3-gluk mL) 0,42 0,5 (0,5–0,5) (82,9) 11,9 (55,0) (jam) 1,61
Del-3-gluk (118) 6,12 0,5 (0,5–1,0) 71,7 (60,4) 49,7 (22,7) 1,72
Malv-3-gluc (66,7) 48,8 0,5 (0,5–1,0) (36,2) 31,5 (30,5) (26,6) 1,50
Jus anggur merah
Peo-3-gluc (87,6) 27,3 0,5 (0,5–0,5) 168,4 (42,3) (34,4) 1,63
Pet-3-gluc (51,0) 16,1 0,5 (0,5–0,5) (19,4) 1,68
Antosianin total (40,5) 100,1 (64,2) 0,5 (0,5–1,0) (48,8) 1,83 (28,5)
Cya-3-gluk ITU ITU ITU ITU
Del-3-gluk ITU ITU ITU ITU
Malv-3-gluc 18,5 (24,0) 1,5 (1,0–1,5) 40,4 (21,2) 1,80 (31,9)

Anggur merah
Peo-3-gluc 12,6 (16,1) 1,5 (1,0–1,5) 30,7 (17,7) 1,83 (40,1)
Pet-3-gluc 12,3 (16,2) 1,5 (0,5–1,5) 29,1 (15,1) 2,15 (22,9)
Antosianin total 42,9 (16,0) 1,5 (1,0– 1,5) 100,8 (14,4) 1,99 (28,1)
aMedian (kisaran).
gJumlah cyanidin 3-glukosida, delphinidin 3-glukosida, malvidin 3-glukosida, peonidin 3-glukosida, dan petunidin 3-glukosida.
NA = tidak berlaku (konsentrasi di bawah LOQ).
Data adalah rata-rata geometris (dengan koefisien variasi geometris (%) dalam tanda kurung).
26
glukosida antosianin (Tabel 3). Tingkat ekskresi maksimal 24
Rmax dapat dideteksi antara 1,5 dan 2,5 jam setelah asupan. 22
Hal ini sesuai dengan pengamatan Miyazawa et al [5] dan 20
18
Matsumoto et al [11]. Meskipun variasi yang tinggi juga terlihat
16
dengan pola ekskresi antosianin jus anggur, perbedaan antara 14
kedua minuman dalam jumlah total yang diekskresikan secara
Lplasma)
GAE
(mg/
12
statistik signifikan, mencapai 0,23% dari dosis yang diberikan 10
setelah jus anggur dan 0,18% setelah konsumsi anggur

dengan glukosida petunidin dan pe onidin sebagai tingkat
tertinggi dan sisi gluko cyanidin sebagai tingkat ekskresi
persentase terendah dalam kedua kasus.
Namun harus disebutkan bahwa jumlah ekskresi kumulatif 8 6 4 2 0 0 15 30 45 60 75 90 105 120 135 150 165 180
jam (menit)
tidak sesuai persis dengan tingkat penyerapan. Sekresi
empedu, misalnya, juga dapat berkontribusi pada proses
Jus anggur merah
eliminasi beberapa zat. Anggur merah
Kandungan polifenol total dalam plasma meningkat Signifikan; P < .05
setelah asupan kedua minuman dengan cmmax setelah
Gambar 1. Total fenolat dalam plasma.
sekitar 30 menit (Gambar 1). Berbeda dengan plasmatic
anthocyanin, nilai cmax setelah asupan jus anggur secara
signifikan melebihi nilai analog setelah asupan anggur, dalam
menandai bahwa flavonoid selain anthocyanin dapat lebih baik
diserap. Perlu dicatat bahwa peningkatan ini terjadi atas dasar aktivitas antioksidan, memuncak antara 50 dan 63 menit dan
tingkat puasa GAE yang relatif tinggi yang dapat dijelaskan turun ke nilai awal lagi setelah 2 jam. Seperti polifenol
oleh zat pereduksi lainnya (senyawa SH, asam askorbat dan plasmatik, biokinets nilai TRAP dari waktu ke waktu setelah
asam urat, dll) yang bereaksi juga dengan metode Folin- asupan jus anggur melampaui tingkat setelah asupan anggur
Ciocalteau yang dimodifikasi sebagai dijelaskan oleh penulis dengan signifikansi statistik, menunjukkan bioaktivitas yang
lain [8]. unggul dari anthocyanin dan polifenol lainnya dan / atau
Selain kadar antosianin dalam plasma dan urin, kami metabolitnya dari jus anggur merah dibandingkan dengan
mengukur kapasitas antioksidan plasmatik sebagai biomarker anggur merah.
untuk efisiensi fisiologis semua polifenolat yang diserap setelah
konsumsi minuman. DISKUSI
Nilai TRAP yang dinilai disesuaikan dengan kandungan asam
askorbat dan asam urat plasma untuk menghindari kesalahan Dalam studi komparatif ini, kami menguji bioavailabilitas
interpretasi. Seperti yang terlihat dari Gambar 2 dan Tabel 4, antosianin sebagai komponen berharga dalam jus anggur
kedua minuman tersebut mampu meningkatkan plasmatik merah dan anggur merah pada manusia. Dari
Tabel 3. Parameter farmakokinetik urin antosianin setelah pemberian jus anggur merah dan anggur merah. (Rmax = tingkat ekskresi maksimal yang diamati;
Ae (0–7) = jumlah total antosianin yang diekskresikan; Xe (0–7) = persentase dosis yang diekskresikan.)
Antosianin Rmaks (µg/jam) tmax, R (h)a Ya (0-7) (µg) Kendaraan (0-7) (%)
Cya-3-gluk 1,26 (75,8) 0,5 (0,5–1,5) 2.88 (72.1) 0,09
Del-3-gluk 39,6 (91,1) 0,5 (0,5–1,5) 101,9 (72,5) 0,20
Mal-3-gluk 86,7 (126) 0,5 (0,5–1,5) 236,3 (95,7) 0,18

Jus anggur merah
Peo-3-gluc 86,0 (79,1) 0,5 (0,5–1,5) 240,5 (65,8) 0,29
Pet-3-gluc 20,2 (45,8) 0,5 (0,5–1,5) 53,4 (31,1) 0,32
Total antosianin 241,4 (82,3) 0,5 (0,5-1,5) 653,6 (66,6) 0,23
Cya-3-gluk 0,66 (117) 2,5 (1,5–4,5) 1,45 (67,3) 0,06
Del-3-gluk 14,9 (51,5) 0,5 (0,5–1,5) 47,7 (26,9) 0,12
Mal-3-gluk 60,2 (33,4) 1,5 (1,5–2,5) 206,8 (31,7) 0,11

Anggur merah
Peo-3-gluc 44,1 (43,7) 0,5 ( 0,5–1,5) 151,5 (31,5) 0,84
Pet-3-gluc 20,5 (52,5) 1,5 (1,5–1,5) 66,4 (47,5) 0,18
Total antosianin 137,6 (29,2) 1,5 (1,5–2,5) 491,0 (19,8) 0,18
aMedian (kisaran).
Data adalah rata-rata geometris (dengan koefisien variasi geometris (%) dalam tanda kurung).
1500
dosis mengalami metabolisme yang cepat. Juga dekomposisi
1300 anthocyanin tidak dapat dikesampingkan, karena Tsuda et al
Lplasma)
µmol/ 1100 [13] mendeteksi asam protocatechuic dalam plasma tikus yang
900 diberi cyanidin-3-glucoside tetapi dalam dosis 100 kali lipat lebih
Troloks
(
tinggi per kg berat badan daripada dalam penelitian ini. Karena
700
persentase glukosida cyanidin yang diekskresikan dalam
500
0 15 30 45 60 75 90 105 120 135 150 165 180
penelitian ini jauh lebih rendah daripada anthocyanin lainnya,
ini mungkin menunjukkan bahwa cyanidin in vivo berfungsi
jam (menit)
sebagai prekursor dan dimetilasi menjadi peonidin seperti yang
Jus anggur merah
telah dibuktikan pada tikus [13] (Tabel 3, Xe (0–7)). Jumlah total
Anggur merah anthocyanin yang diekskresikan berbeda dengan nilai Lapidot
Mereka berarti; P < 0,05 et al [21] yang menilai tingkat ekskresi lebih dari 10 kali lipat
Gambar 2. Nilai TRAP plasma setelah konsumsi jus anggur merah dan setelah asupan anggur merah dengan dosis anthocyanin yang
anggur merah. sebanding tetapi dalam waktu 12 jam. Bub et al [20], di sisi lain,
menemukan kurang dari 0,03% dari dosis yang tertelan dalam urin.
Meskipun biokinetik plasma mengungkapkan tidak ada
paradoks Prancis yang terkenal, efek perlindungan kesehatan perbedaan statistik antara minuman, nilai analog dalam ekskresi
dari anggur merah yang kaya polifenol telah disarankan, dengan urin (Tabel 3, Rmax, Ae (0–7) dan Xe (0–7)) menunjukkan
asumsi bahwa penyerapan usus antosianin dapat dikurangi bioavailabilitas anthocyanin yang lebih tinggi dari warna merah.
dengan kandungan alkohol dari anggur [15]. Tapi informasi pasti jus anggur dibandingkan dengan anggur merah. Mungkin
tentang bioavailabilitas antosianin dari minuman beralkohol dan periode pengamatan relatif singkat untuk mengenali bioekivalensi
nonalkohol sejauh ini masih kurang. Selain itu, data kinetik pada dalam kinetika plasma juga. Namun demikian, juga dianggap
tingkat penyerapan dan eliminasi polifenol tersebut mungkin bahwa karena penyerapan pada protein plasma, tingkat
juga relevan, dalam hal perlindungan kesehatan yang disarankan. pemulihan analitik anthocyanin dapat diturunkan. Murkovic et
al [14] menghitung, dari sampel plasma berduri, tingkat
Bukti pertama bahwa anthocyanin muncul dalam plasma pemulihan antosianin elderberry menjadi hanya 20%.
sebagai glukosida utuh setelah konsumsi oral telah dilengkapi
oleh Tsuda et al pada hewan [13]. Sementara itu, dapat Laju eliminasi identik (t1/2) dari plasma cor merespons
ditunjukkan oleh kelompok kami dan penulis lain bahwa selain dengan kecenderungan (nonstatistik) untuk menurunkan cmax
monoglukosida, bentuk glikosilasi terkondensasi yang lebih dan nilai tmax yang lebih tinggi setelah asupan anggur merah
tinggi dalam jus buah juga dimasukkan dari usus ke dalam mengarah pada kesimpulan bahwa penyerapan antosianin dari
darah tikus dan manusia dan diekskresikan dalam urin [4, 5, 6, anggur merah dihambat atau serapan usus dari jus anggur
11, 12, 14, 16, 17, 18, 19, 20]. merah ditingkatkan (Tabel 2). Hingga saat ini, terdapat temuan
Konsentrasi plasma dan urin yang umumnya rendah dalam yang kontradiktif mengenai pengaruh alkohol terhadap fungsi
penelitian ini menunjukkan bahwa antosianin yang diserap kecil gastrointestinal dan penyerapan flavonoid.
2004:5 (2004) Bioavailabilitas Antosianin pada Manusia Dari Jus Anggur dan Anggur 297
Tabel 4. Biokinetik TRAP dalam plasma 9 relawan.
cmmax cmax/Dose AUC (0-180) AUC (0-180)/Dosis

tmaks min
µmolÿ Lÿ1 µmolÿ Lÿ1ÿ µmolÿ1 mmolÿ minÿ1ÿ Lÿ1 mmolÿ minÿ1ÿ mmolÿ1
Anggur merah 1233 ± 85 0,143 ± 0,010 50 ± 15 192 ± 8 22,31 ± 0,95
Jus anggur merah 1333 ± 62 0,222 ± 0,010 63 ± 10 202 ± 11 33,72 ± 1,86
S P = 0,013 P < .0001 — P = 0,016 P < .0001
Data adalah sarana aritmatika ± SD.
Levanon et al [22] menyarankan bahwa anggur putih dapat data yang lebih akurat tentang metabolisme in vivo dari
menghambat kontraksi postprandial dan dengan demikian antosianin yang terikat glukosidi dan konjugat lainnya dapat
menunda penyerapan gula dan glukosida. Bub et al [20] tidak mendukung efek perlindungan kesehatannya.
menemukan perbedaan dalam penyerapan malvidin-3-glukosida
antara red wine dan dealcoholized red wine, tetapi menemukan REFERENSI
bioavailabilitas tertunda setelah asupan jus anggur merah.
Temuan terakhir ini berbeda dengan hasil kami. Gee et al [23] [1] Steinmetz KA, Potter JD. Sayuran, buah, dan pencegahan
dan Hollman [24] dapat menunjukkan bahwa quercetin glu cer kaleng: review. J Am Diet Assoc. 1996;96 (10):1027–
cosides dapat berinteraksi dengan trans porter glukosa usus 1039.
SGLT-1, menghasilkan peningkatan penyerapan usus. Baru- [2] RL sebelumnya. Buah dan sayuran dalam pencegahan
baru ini, telah ditunjukkan bahwa laktase-phlorizin hidrolase kerusakan oksidatif seluler. Am J Clin Nutr. 2003;78 (sup
(LPH) usus di membran apikal sel epitel usus dan ÿ-glukosidase 3):570S–578S.
sitosolik tampaknya memainkan peran penting dalam penyerapan [3] Hertog MG, Feskens EJ, Hollman PC, Katan MB, Kromhout
dan metabolisme flavonoid [25, 26]. Mempertimbangkan D. Flavonoid antioksidan makanan dan risiko penyakit
kandungan gula dari jus anggur merah yang diberikan dan fitur jantung koroner: studi lansia Zutphen. Lanset.
struktural yang mirip dengan quercetin, dapat dibayangkan 1993;342(8878):1007–1011.
bahwa anthocyanin diserap melalui cotransport dengan brush [4] Frank T, Netzel M, Strass G, Bitsch R, Bitsch I.
border usus SGLT-1, sehingga meningkatkan serapan Ketersediaan hayati antosianidin-3-glukosida setelah
anthocyanin dibandingkan dengan anggur merah [27 ]. konsumsi anggur merah dan jus anggur merah.
Bisakah J Physiol Pharmacol. 2003;81(5):423–435.
Asumsi ini dikuatkan oleh biokinetik yang meningkat secara [5] Miyazawa T, Nakagawa K, Kudo M, Muraishi K, Someya
signifikan dari polifenol plasmatik setelah asupan jus anggur K. Penyerapan usus langsung anthocyanin buah merah,
(Gambar 1). Bioaktivitas superior jus anggur merah dibandingkan cyanidin-3-glucoside dan cyanidin 3, 5-diglucoside, pada
dengan anggur merah setidaknya tidak terlihat dalam kapasitas tikus dan manusia. Kimia Makanan J Agric. 1999;47(3):1083–
antioksidan plasma. Cmax serta AUC dari nilai TRAP yang 1091.
diukur dalam plasma setelah konsumsi jus anggur secara [6] Netzel M, Strass G, Janssen M, Bitsch I, Bitsch R.
signifikan melebihi nilai setelah asupan anggur ( Tabel 4). Anthocyanin bioaktif terdeteksi dalam urin manusia
setelah konsumsi jus blackcurrant. J Environ Pathol Toxicol
Oncol. 2001;20(2):89–95.
KESIMPULAN [7] Netzel M, Strass G, Kaul C, Bitsch I, Dietrich H, Bitsch R.
Kapasitas antioksidan in vivo dari jus berry komposit.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa antosianin anggur Makanan Res Int. 2002;35(2-3):213–216.
merah diserap dalam jumlah kecil dan diekskresikan melalui [8] Serafini M, Maiani G, Ferro-Luzzi A. Anggur merah bebas
ginjal sebagai glukosida utuh. Jus anggur merah mungkin cukup alkohol meningkatkan kapasitas antioksidan plasma pada
setara atau bahkan lebih unggul dari anggur merah dengan manusia. J Nutr. 1998;128(6):1003–1007.
kandungan flavonoid/anthocyanin bioaktif yang sebanding. [9] Cawello W. Parameter untuk Farmakokinetik Bebas
Berlawanan dengan pendapat sebelumnya, antosianin Kompartemen. Aachen: Pengocok Verlag; 1999.
antioksidan kuat jelas lebih baik diserap dari jus anggur daripada [10] Ghiselli A, Serafini M, Maiani G, Azzini E, Ferro Luzzi A.
dari anggur. Akibatnya, kapasitas antioksidan plasma (TRAP Metode berbasis fluoresensi untuk mengukur kemampuan
assay) pada manusia lebih kuat meningkat setelah konsumsi antioksidan plasma total. Free Radic Biol Med.
jus anggur dibandingkan dengan anggur. Akhirnya, dari hasil 1995;18(1):29–36.
tersebut dihipotesiskan bahwa penyerapan antosianin dapat [11] Matsumoto H, Inaba H, Kishi M, Tominaga S, Hirayama M,
ditingkatkan dengan kandungan glukosa dari jus anggur; efek Tsuda T. Delphinidin-3-rutinoside dan cyanidin-3-rutinoside
alkohol potensial pada penyerapan usus dan metabolisme masih yang diberikan secara oral langsung diserap pada tikus
harus dijelaskan. Namun demikian, komponen lebih lanjut yang dan manusia dan muncul dalam darah sebagai bentuk
berkembang selama pemrosesan anggur dapat mengganggu utuh . Kimia Makanan J Agric. 2001;49(3):1546–1551.
penyerapan antosianin. Dalam studi masa depan,
[12] Cao G, Muccitelli HU, Sanchez-Moreno C, Sebelumnya RL. [27] Ferrari RP. Regulasi diet dan perkembangan transportasi gula
Antosianin diserap dalam bentuk terglikasi pada wanita lanjut usus. Biochem J. 2001;360(pt 2):265–276.
usia: studi farmakokinetik. Am J Clin Nutr. 2001;73(5):920–926.
[13] Tsuda T, Horio F, Osawa T. Penyerapan dan metabolisme

cyanidin-3-O-beta-D-glucoside pada tikus. FEB Lett.
Email: roland.bitsch@uni-jena.de Faks:
1999;449(2-3):179–182.
+49 3641 949632; Telp: +49 3641 949630
[14] Murkovic M, Adam U, Pfannhauser W. Analisis glikosida antosian
dalam serum manusia. Fresenius J Anal Kimia. 2000;366(4):379–
381.
[15] Renaud S, de Lorgeril M. Anggur, alkohol, trombosit, dan
paradoks Prancis untuk penyakit jantung koroner.
Lanset. 1992;339(8808):1523–1526.
[16] Netzel M, Strass G, Carle E, dkk. Jus blackcurrant = makanan
fungsional? kimia makanan. 2000;54:84-85.
¨
[17] Mulleder U, Murkovic M, Pfannhauser W. Ekskresi glikosida
cyanidin melalui urin. Metode J Biochem Biophys. 2002;53(1–
3):61–66.
anthocyanin pada wanita lanjut usia setelah konsumsi elderberry
atau blueberry. J Nutr. 2002;132 (7):1865–1871.
¨
[19] Murkovic M, Mulleder U, Adam U, Pfannhauser W.
Deteksi anthocyanin dari jus elderberry dalam urin manusia.
Pertanian Pangan J Sci. 2001;81(9):934–937.
[20] Bub A, Watzl B, Heeb D, Rechkemmer G, Briviba K.
Ketersediaan hayati Malvidin-3-glukosida pada manusia
setelah konsumsi anggur merah, anggur merah yang di-
dealkoholisasi, dan jus anggur merah. Eur J Nutr. 2001;40(3):113–120.
[21] Lapidot T, Harel S, Granit R, Kanner J. Ketersediaan hayati
anthocyanin anggur merah seperti yang terdeteksi dalam urin
manusia. Kimia Makanan J Agric. 1998;46(10):4297–4302.
[22] Levanon D, Goss B, Chen JDZ. Efek penghambatan anggur putih
pada aktivitas myoelectrical lambung dan peran tonus vagal.
Gali Dis Sci. 2002;47(11):2500–
2505.
[23] Gee JM, DuPont MS, Day AJ, Plumb GW, Williamson G, Johnson
IT. Transportasi usus glikosida quercetin pada tikus melibatkan
deglikosilasi dan interaksi dengan jalur transportasi heksosa. J
Nutr. 2000;130(11):2765–2771.
[24] Holman PCH. Bukti manfaat kesehatan dari fenol tanaman: efek
lokal atau sistemik? Pertanian Pangan J Sci. 2001;81(9):842–
852.
[25] Hari AJ, FJ Kanada, Diaz JC, dkk. Flavonoid makanan dan
glikosida isoflavon dihidrolisis oleh situs lac tase dari laktase
phlorizin hidrolase. FEB Lett. 2000;468(2-3):166–170.
´
[26] Nemeth K, Plumb GW, Berrin JG, dkk. Deglikosilasi oleh sel
epitel usus kecil ÿ-glukosidase merupakan langkah penting
dalam penyerapan dan metabolisme glikosida flavonoid diet
pada manusia. Eur J Nutr. 2003;42(1):29–42.
ARTIKEL TINJAUAN MINI
Keluarga Baru Pyranoanthocyanin Kebiruan
Nuno Mateus,ÿ Joana Oliveira, Mafalda Haettich-Motta, and Victor de Freitas
Pusat Penelitian Kimia, Departemen Kimia, Fakultas Sains, Universitas Porto, Rua do Campo Alegre 687,
4169-007 Porto, Portugal
Diterima 2 April 2004; direvisi 10 Mei 2004; diterima 19 Mei 2004
Penggunaan antosianin telah diteliti untuk pembuatan pewarna alami makanan dan minuman karena tampaknya tidak memiliki efek
toksik. Dalam konteks ini, vinylpyranoanthocyanins baru-baru ini ditemukan secara alami terjadi pada anggur merah yang menua.
Keluarga baru pigmen turunan antosianin ini dapat diperoleh secara langsung melalui reaksi antara turunan antosianin dengan senyawa lain.
Beberapa dari pigmen yang baru terbentuk ini ditemukan berwarna kebiruan pada pH asam. Pembentukan pigmen kebiruan diperoleh
melalui reaksi antara adisi antosianin-asam piruvat dan flavanol dengan adanya asetaldehid. Pembentukan pigmen kebiruan serupa
dicoba menggunakan prekursor lain yang berbeda. Fitur kromatik dari jenis pigmen ini membawa harapan yang menjanjikan mengenai
penggunaan pigmen biru alami ini dalam industri makanan.
VITIS VINIFERA ANTHOCYANIN DAN DERIVATIF senyawa baru-baru ini dibuktikan dalam anggur merah Port tua
PIGMEN DALAM ANGGUR MERAH [22, 23, 24] (lihat Tabel 1 dan Gambar 2).
Sangat menarik untuk dicatat bahwa pigmen katekin
Anthocyanin adalah kelompok terpenting dari pigmen antosianin mengungkapkan ÿmax yang sama dengan turunan
tumbuhan yang larut dalam air yang terlihat oleh mata manusia. piruvat, yang secara hipsokromik bergeser dari antosianin asli.
Pigmen ini bertanggung jawab untuk berbagai macam warna Yang mengejutkan, pigmen 9 dan 13 yang mengandung unit
dari beberapa buah, sayuran, dan tumbuhan. Warna anggur dimer procyanidin dalam strukturnya mengungkapkan
merah yang jantan karena adanya senyawa polyphe nolic yang pergeseran batokromik yang penting (9 nm) dari rekan-rekan
diekstraksi dari buah anggur selama proses pembuatan anggur. mereka dengan satu unit monomer flavanol ((+)-catechin atau
Struktur umum antosianidin monoglukosida Vi tis vinifera (ÿ)-epicatechin). Hasil ini menyoroti pentingnya jenis bagian
ditunjukkan pada Gambar 1. Senyawa ini berbeda dalam pola flavanol pada karakteristik warna pigmen (dan ini menunjukkan
hidroksilasi dan metoksilasi cincin B yang menghasilkan bahwa beberapa jenis kopipigmentasi intramolekul antara
berbagai warna dari jingga-merah hingga ungu pada pH yang residu flavanol dan flavylium chrom mophore entah bagaimana
sangat asam [1]. Moitas glukosil yang terhubung pada posisi 3- dapat terjadi).
O cincin C juga dapat diasilasi dengan asam asetat, asam
koumarat, atau asam caffeic.
Senyawa ini mengalami transformasi kimia selama penuaan PORTISIN—KELOMPOK BARU

anggur menghasilkan pigmen baru yang bertanggung jawab VINYL PYRANOANTOSIANIN
atas perubahan warna dan umur panjangnya [2]. TERDETEKSI DI PORT WINE
Pigmen baru ini pertama kali diduga dihasilkan terutama dari
reaksi kondensasi antara antosianin dan flavanol secara Baru-baru ini, dua pigmen baru dengan fitur spek troskopik
langsung atau dimediasi oleh asetaldehida [3, 4, 5, 6, 7, 8, 9]. unik yang menunjukkan warna kebiruan dalam larutan asam
Namun demikian, selama dekade terakhir, reaksi yang ditemukan terjadi pada anggur merah Port tua [25] (lihat
melibatkan antosianin dengan senyawa lain seperti asam Gambar 3, pigmen 22 dan 23). Memang, kedua pigmen ini
piruvat [10, 11, 12, 13, 14, 15], vinilfenol [16, 17], vinilkatekkol dengan penyerapan maksimum di daerah yang terlihat pada
[18], asam ÿ-ketoglutarat [19] , aseton [19, 20, 21], dan 4- 583 nm terdeteksi oleh HPLC dalam sampel anggur Port
vinylguaiacol [21] telah didemonstrasikan menghasilkan famili berusia dua tahun. Struktur pigmen yang baru terbentuk ini di
baru dari pigmen turunan antosianin, yaitu, piranoantosianin, mana antosianin dihubungkan dengan flavanol oleh ikatan vinil
dengan fitur spektroskopi yang entah bagaimana dapat disebut sebagai portisin. Demikian juga, pigmen serupa yang
berkontribusi pada warna merah jingga. Keluarga muncul dari anthocyanin dan flavanol yang berbeda sepuluh
pyranoanthocyanin ini telah diselidiki secara ekstensif selama kali terdeteksi oleh LC-DAD-MS dalam sampel anggur Port
beberapa tahun terakhir dan beberapa (Tabel 2).

300 Nuno Mateus dkk 2004:5 (2004)
R1
Antosianidin R1 R2
OH Delphinidin OH OH
Sianidin OH H
+ DAN
KE HAI Petunia OCH3 OH

R2 Peonidin H
OCH3
SEBUAH C
3 Malvidin OCH3 OCH3
Oÿglukosa
OH
Gambar 1. Struktur V vinifera anthocyanidin monoglucosides (bentuk flavylium).
Tabel 1. Pyranoanthocyanin dan terdeteksi pada fraksi Port wine. (Mv = malvidin; Dp = delphinidin; Pt = petunidin; Pn = peonidin; py = turunan asam
piruvat; gluc = glukosida; cat = (+)-catechin atau (ÿ)-epicatechin; PC = dimer procyanidin.)
Pigmen Pyranoanthocyanin ÿmaks (nm) Penjelasan struktural

1 Mv 3-gluc-py 511 NMR, MS, UV-Vis
2 Pt 3-(asetil)gluk-py NONA
3 Mv 3-(asetil)gluk-py 511 NMR, MS, UV-Vis

4 Pt 3-(coumaroyl)gluc-py NONA
5 Mv 3-(kumaroil)gluk-py 511 NMR, MS, UV-Vis

6 Pn 3-(kumaroil)gluk-py NONA
7 Dp 3-gluc-py NONA
8 Dp 3-acetylgluc-py NONA
9 Mv 3-gluc-vinyl-(+)-kucing-(+)-kucing 520 NMR, MS, UV-Vis

10 Dimer Mv 3-(asetil)gluk-vinil-PC NONA
11 Mv 3-gluc-vinyl-(+)-cat 511 NMR, MS, UV-Vis

12 Mv 3-(asetil)gluk-vinil-kucing NONA
13 Mv 3-(coumaroyl)gluc-vinyl-(ÿ)-epi-(+)-cat 520 NMR, MS, UV-Vis

14 Mv 3-gluc-vinyl-(ÿ)-epi 511 NMR, MS, UV-Vis
15 Mv 3-(coumaroyl)gluc-vinyl-(+)-cat 511 NMR, MS, UV-Vis
16 Mv 3-(kumaroil)gluk-vinil-(ÿ)-epi 511 NMR, MS, UV-Vis
17 Mv 3-gluc-vinylphenol NONA
18 Mv 3-(caffeoyl)gluc-vinylphenol NONA
19 Pn 3-(kumaroil)gluk-vinilfenol NONA
20 Mv 3-(kumaroil)gluk-vinilfenol NONA
21 Mv 3-(asetil)gluk-vinilfenol NONA
Selain itu, portisin dengan gugus fenol menggantikan bagian dan senyawa lain seperti flavanol (misalnya, katekin, prosianidin)
flavanol (pigmen 26) juga baru-baru ini ditemukan terjadi pada atau phloroglucinol dengan adanya ac etaldehyde (Gambar 5)
anggur Port tua (Tabel 2) (N. Mateus et al, data tidak [26], atau langsung melalui reaksi dengan p vinilfenol. Langkah
dipublikasikan). Namun, penyerapan maksimum pigmen ini di terakhir dari pembentukannya diperkirakan mencakup
daerah yang terlihat (538 nm) ditemukan cukup bergeser secara dekarboksilasi, dehidrasi, dan oksidasi yang menghasilkan
hipsokromik dari portisin dengan gugus flavanol (Gambar 4). struktur dengan konjugasi elektron ÿ yang diperpanjang , yang
Pola hidroksilasi kecil dari cincin fenol mungkin berkontribusi kemungkinan memberikan stabilitas molekul yang lebih tinggi
terhadap pergeseran hipsokromik ini lebih signifikan dibandingkan dan mungkin merupakan asal mula warna birunya.
dengan cincin phloroglucinol dari flavanol. Secara efektif, pigmen Vinylpyranoanthocyanins serupa sebelumnya telah disintesis
serupa dengan bagian phloroglucinol menggantikan gugus fenol menggunakan bahan kimia awal yang tidak ditemukan dalam
yang dihasilkan dari reaksi antara malvidin 3-O-glucoside dan anggur atau ragi [27].
phloroglucinol dengan adanya ac etaldehyde terbukti memiliki
ÿmax 565 nm (data tidak dipublikasikan). BUNGA DAN APLIKASI YANG MUNGKIN
DARI PORTISIN DALAM INDUSTRI MAKANAN
Mengenai pembentukannya, kelas baru pigmen turunan Fitur kromatik dari jenis pigmen ini membawa harapan yang
antosianin ini dapat diperoleh melalui reaksi antara aduk menjanjikan mengenai penggunaan pigmen biru alami ini dalam
antosianin-asam piruvat. industri makanan.
2004:5 (2004) Keluarga Baru Pyranoanthocyanin Kebiruan 301
R1 R4
Pigmen R1 R2 R3
OH 1 Ome Ome COOH H
2 OM OH COOH Asetil
+
KE HAI 3 Ome Ome COOH Asetil
R2
4 OM OH COOH Coumaroil
KE
OH 5 Ome Ome COOH Coumaroil
HAI
OH
6 OMH COOH Coumaroil
HAI
HAI
H 7 OH OH COOH H
HAI R4
8 OH OH COOH Asetil
R3
9 OMe OMe Vinyl-(+)-kucing-(+)-kucing H
10 OMe OMe Vinyl-PC dimer Asetil
11 OMe OMe Vinyl-(+)-kucing H
12 OMe OMe Vinyl-(+)-kucing Asetil
13 OMe OMe Vinyl-(+)-epi-(+)-cat Coumaroyl
14 OMe OMe Vinyl-(+)-epi H
15 OMe OMe Vinyl-(+)-kucing Coumaroil
16 OMe OMe Vinyl-(+)-epi Coumaroil
17 OMe OMe Vinylphenol H
18 OMe OMe Vinylphenol Caffeoyl
19 OMe H Vinylfenol Coumaroil
20 OMe OMe Vinylphenol Coumaroil
21 OMe OMe Vinylphenol Asetil
Gambar 2. Struktur Pyranoanthocyanin terdeteksi dalam fraksi anggur (Tabel 1); kucing = katekin; epi = epikatekin.
R1
Pigmen R1 R2 R3 R4
OH 22 Ome Ome Glukosa PC
+ 23 OMe OMe Coumaroylglucose PC
KE HAI
R2
24 Ome Ome Glukosa Kucing
25 OMe OMe Coumaroylglucose Kucing

26 Ome Ome Glukosa Fenol
O-R3
27 OMe OH Glukosa Kucing
HAI
28 OMe H Glukosa Kucing
29 OMe OMe Asetilglukosa Kucing
R4
Gambar 3. Struktur portisin yang terdeteksi pada fraksi anggur merah Port (Tabel 2); kucing = katekin; PC = dimer prosianidin.
Memang, meskipun palet warna yang luas tersedia di alam, minuman) dengan warna kebiruan. Mengingat hal ini,
pigmen yang menunjukkan warna biru sangat langka. produksi pigmen kebiruan dicoba di laboratorium
Misalnya, warna biru yang ditampilkan oleh beberapa bunga menggunakan prekursor yang berbeda. Pertama,
terutama disebabkan oleh fenomena kopigmentasi [28, 29, pembentukan pigmen tersebut membutuhkan antosianin,
30, 31, 32]. Selain itu, warna kebiruan dapat diperoleh yang dapat diperoleh dengan menggunakan beberapa
dengan adanya bentuk quinonoidal anthocyanin dalam ekstrak buah merah. Ekstrak sweet cherry, bilberry, apel
media pH tinggi [33, 34]. merah, plum, blackberry, dan el derberry digunakan sebagai
Oleh karena itu, industri makanan telah mencari cara sumber antosianin untuk sintesis pigmen turunan antosianin.
alternatif baru untuk menghasilkan produk (bahan makanan dan Mengikuti ini, pembentukan asam antosianin-piruvat
302 Nuno Mateus dkk 2004:5 (2004)
Tabel 2. Portisin yang terdeteksi pada fraksi Port wine. (Mv = malvidin; Pn = peonidin; Pt = petunidin; gluk = glukosida; kucing = katekin; PC = dimer
prosianidin.)
Pigmen saya porting ÿmaks (nm) Penjelasan struktural

22 VinylpyranoMv-3-gluc-PC 583 NMR, MS, UV-Vis
23 VinylpyranoMv-3-coumaroylgluc-PC 583 NMR, MS, UV-Vis
24 VinylpyranoMv-3-gluc-cat 572 MS, NMR, UV-Vis
25 VinylpyranoMv-3-coumaroylgluc-cat 577 NMR, MS, UV-Vis
26 VinylpyranoMv-3-fenol 538 MS, NMR, UV-Vis
27 VinylpyranoPt-3-gluc-cat 570 NONA
28 VinylpyranoPn-3-gluc-cat 569 NONA
29 VinylpyranoMv-3-acetylgluc-cat 577 NONA
Tabel 3. Beberapa antosianin masing-masing adisi asam piruvat dan portisin yang diperoleh dari ekstrak buah merah yang berbeda. (Cy = cyanidin; Mv =
malvidin; py = turunan asam piruvat; gluc = glukosida; samb = sambubiose; ara = arabinose; rut = rutinose; cat = catechin.)
Sumber Antosianin ÿmaks (nm) Adisi asam piruvat ÿmaks (nm) Portisin ÿmaks (nm)
Blackberry Cy-3-gluc 516 Cy-3-gluc-py 505 VinylpyranoCy-3-gluc-cat 567
Ceri manis Cy-3-rut 516 Cy-3-rut-py 505 VinylpyranoCy-3-rut-cat 567
Elderberry Cy-3-sam 516 Cy-3-sam-py 505 VinylpyranoCy-3-samb-kucing 567
Apel merah Cy-3-gal 516 Cy-3-gal-py 505 VinylpyranoCy-3-gal-kucing 567

Bilberry Cy-3-ara 516 Cy-3-ara-py 505 VinylpyranoCy-3-ara-kucing 567
Bilberry mv-3-ara 528 mv-3-ara-py 511 VinylpyranoMv-3-ara-kucing 572
Bilberry Mv-3-gluk 528 Mv-3-gluc-py 511 VinylpyranoMv-3-gluc-cat 572
VinylpyranoMv-3-
Buah anggur Mv-3-coumaroylgluc 532 Mv-3-coumaroylgluc-py 516 578
coumaroylgluc-cat
adisi dicapai melalui reaksi dengan asam piruvat, seperti yang

sebelumnya dikembangkan untuk adisi anggur malvidin 3-O-
glukosida-asam piruvat. Anthocyanin yang berbeda dari ekstrak
buah merah menghasilkan adisi asam piruvat dengan ÿmax
hypsochromically bergeser dari anthocyanin asli, beberapa di serap
Daya
antaranya ditunjukkan pada Tabel 3. Akibatnya, warna semua

ekstrak berubah menjadi rona seperti oranye. Adisi asam
antosianin-piruvat ini digunakan sebagai prekursor untuk
pembentukan portisin, yang dicoba menggunakan (+)-katekin
dengan adanya asetaldehida.
200 300 400 500 600 700
Sebagai contoh, Gambar 6 menunjukkan profil antosianin Panjang gelombang (nm)
dari ekstrak elderberry (Sambucus nigra) setelah dua hari
ÿmaks = 538 nm
reaksi dengan asam piruvat. Anthocyanin dari elderberry adalah
ÿmaks = 528 nm
dua cyanidin monoglucosides (2) (cyani din 3-O-glucoside dan ÿmaks = 565 nm
cyanidin 3-O-sambubioside) dan cyanidin 3,5-diglucoside (1) (3-
O-sambubioside, 5-O glucoside) . Yang terakhir ini tidak mungkin
Gambar 4. (a) Spektra UV-Vis malvidin 3-O-glukosida (padat), (b)
bereaksi dengan asam piruvat karena posisi 5-O antosianin
vinilpiranoMv-3-gluk-fenol (putus-putus), dan (c) vinilpiranoMv-3-gluk-
harus bebas dari substitusi apa pun. Oleh karena itu, hanya dua phloroglucinol (putus-putus) terekam dari detektor array dioda HPLC (pH =
pigmen yang terbentuk adalah adisi asam piruvat dari 1,5).
monoglukosida cyanidin ((3) dan (4)), seperti yang terlihat dari
kromatogram HPLC masing-masing yang direkam pada 520 nm
(Gambar 6a).
Selain itu, kromatogram HPLC yang direkam pada 570 nm dari vinylpyranoanthocyanins dari cyanidin 3-O-glucoside (5) dan
ekstrak piruvat murni yang selanjutnya diolah dengan cate chin cyanidin 3-O-sambubioside (6), sebagaimana dikonfirmasi oleh
dengan adanya asetaldehida ditunjukkan pada Gambar 6b. LC-DAD-MS (data tidak ditampilkan).
Profil portisin dari ekstrak elderberry diperoleh ketika hampir Secara keseluruhan, malvidin monoglukosida dan
semua turunan asam piruvat telah bereaksi. Dua portisin yang turunannya merupakan antosianin dengan ÿmax tertinggi pada
diperoleh sesuai dengan spektrum UV-Vis jika dibandingkan dengan cyanidin.
R1
OH R1
+ OH
KE HAI HAI
R2 +
KE HAI
R2
R3
(1) ÿH2O R3
HAI
(2) ÿHCOOH
HAI
(3) Oksidasi
COOH
+
R4
R4
Gambar 5. Reaksi pembentukan portisin. R1 dan R2 adalah H, OH, atau OMe, R3 adalah gugus (-O-glikosil) yang disubstitusi dengan satu
atau lebih gugus asil, dan R4 adalah aril.
mono- atau diglukosida, seperti yang terlihat dari Tabel 3. Jenis (1)
bagian gula dan keberadaan mono- atau disakarida dalam struktur
antosianin tampaknya tidak menimbulkan pengaruh apapun pada (2)
ÿmaksnya. Perilaku ini juga diamati sehubungan dengan aduk
Abs
520
nm
antosianin-asam piruvat dan masing-masing portisin.

(4)
Selain itu, asilasi bagian gula dari mal vidin monoglucosides (3)
dengan asam p-coumaric menghasilkan ÿmax lebih tinggi daripada

pasangannya yang tidak diasilasi. Telah dilaporkan bahwa, dalam
4 8 12 16 20 24
kasus antosianin, asilasi bagian gula dengan asam hidroksisinamat
menginduksi pergeseran batokromik, serta intensifikasi dan stabilisasi
warna, mungkin melalui fenomena kopigmentasi intramolekul, seperti
(sebuah)
yang dilaporkan di tempat lain . 35]. Pergeseran batokromik yang

timbul dari asilasi bagian gula juga diamati untuk portisin yang
dilaporkan dalam anggur merah Port yang sudah tua (Tabel 3).
(6)
Abs
570
nm
(5)
KESIMPULAN
Pencarian pewarna makanan alami baru telah menarik minat

beberapa produsen selama beberapa tahun terakhir. Dari sudut
pandang organoleptik dan mempertimbangkan warna yang tersedia 4 8 12 16 20 24
tersebar luas di alam, terlihat bahwa pigmen biru langka. Oleh karena
itu, produksi pewarna biru alami baru untuk industri makanan
tampaknya menjadi prioritas. Mengenai kualitas dan keamanan (b)
makanan, pewarna alami memberikan manfaat yang signifikan
dibandingkan dengan pewarna sintetis, meskipun mungkin karena
kekhawatiran psikologis konsumen. Faktanya, pigmen yang berasal Gambar 6. Kromatogram HPLC dari ekstrak elderberry. (a)
antosianin setelah 2 hari reaksi dengan asam piruvat: Cy-3-
dari alam mudah diterima sebagai sehat dan dengan demikian
(samb)-5-gluc (1), Cy-3-samb + Cy-3-gluc (2), Cy-3-samb-py (3),
menjadi masalah utama bagi industri makanan.
Cy-3-gluc-py (4); (b) portisin: vinylpyranoCy-3-samb (5),
vinylpyranoCy-3-gluc (6).
UCAPAN TERIMA KASIH ´

POCTI/40124/QUI/2001 dan dari Ministerio da Agriculture PO AGRO
Para penulis berterima kasih kepada Program Portugal-Spanyol 386. Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada Prof. AMS
“Acciones integradas” atas dukungan finansial kepada mobilitas para Silva, Prof. C. Santos-Buelga, Prof. J. Rivas Gonzalo, dan Prof. A.
peneliti (ref. HP01-24 dan E-23/02). Pekerjaan ini juga didanai oleh Gonzalez -Paramas untuk partisipasi mereka sebagai rekan penulis
Research Project Grant dari Fundaçao para a Ci encia e Tecnologia dalam makalah terkait dengan hasil yang disajikan di sini.
˜ ˆ
(FCT)
304 Nuno Mateus dkk 2004:5 (2004)
REFERENSI [17] Fulcrand H, Cameira dos Santos PJ, Sarni Manchado P,

Cheynier V, Favre-Bonvin J. Struktur pigmen anggur turunan
[1] Harborne JB, Williams CA. Anthocyanin dan flavonoid lainnya.
antosianin baru. J Chem Soc Perkin Trans. 1996;1:735–739.
Nat Prod Rep.2001;18(3):310–333.
[2] Brouillard R, Chassaing S, Fougerousse A. Mengapa [18] Schwarz M, Wabnitz TC, Winterhalter P. Jalan menuju
antosianin anggur/anggur segar begitu sederhana dan
pembentukan adduct vinilfenol antosianin dan pigmen
mengapa warna anggur merah bertahan begitu lama?
terkait dalam anggur merah. Kimia Makanan J Agric.
Fitokimia. 2003;64(7):1179–1186.
2003;51(12):3682–3687.
[3] Somers TC. Sifat polimer pigmen anggur. [19] Benabdeljalil C, Cheynier V, Fulcrand H, Hakiki A, Mosaddak
´
Fitokimia. 1971;10:2175–2186. M, Moutounet M. Demonstrasi pigmen baru yang dibentuk
´ ´
[4] Jurd L. Tinjauan reaksi kondensasi polifenol dan kemungkinan oleh reaksi antosianin dengan metabolit ragi.
´
terjadinya dalam penuaan anggur. Makanan
Am J Enol Vitic. 1969;20:191–195. Sains. 2000;20:203–220.
[5] Liao H, Cai Y, Haslam E. Interaksi polifenol. [20] Lu Y, Foo LY. Reaksi antosianin yang tidak biasa dengan
Antosianin: kopigmentasi dan perubahan warna pada anggur aseton menyebabkan pembentukan piranoantosianin.
merah. Pertanian Pangan J Sci. 1992;59:299–305. Lett tetrahedron. 2001;42(7):1371–1373.
[6] Remy S, Fulcrand H, Labarbe B, Cheynier V, Moutounet M. [21] Hayasaka Y, Asenstorfer RE. Skrining untuk pigmen potensial
Konfirmasi pertama dalam produk anggur merah yang yang berasal dari anthocyanin dalam anggur merah
dihasilkan dari reaksi antosianin-tanin langsung. Pertanian menggunakan spektrometri massa tandem nanoelectrospray.
Pangan J Sci. 2000;80:745–751. Kimia Makanan J Agric. 2002;50(4):756–761.
[7] Bakker J, Picinelli A, Bridle P. Model larutan anggur: perubahan [22] Mateus N, Carvalho E, Carvalho ARF, dkk. Isolasi dan
warna dan komposisi selama penuaan. Begitu. 1993;32:111– karakterisasi struktural pigmen antosianin-vinil-flavanol
118. terasilasi baru yang terjadi pada anggur merah yang menua.
[8] Rivas-Gonzalo JC, Bravo-Haro S, Santos-Buelga C. Kimia Makanan J Agric. 2003;51(1):277– 282.
Deteksi senyawa yang terbentuk melalui reaksi malvidin-3-
monoglucoside dan katekin dengan adanya asetaldehida. [23] Mateus N, Silva AMS, Santos-Buelga C, Rivas Gonzalo JC,
Kimia Makanan J Agric. 1995;43:1444–1449. de Freitas V. Identifikasi pigmen antosianin-flavanol dalam
anggur merah dengan NMR dan spektrometri massa. Kimia
[9] Timberlake CF, Bridle P. Interaksi antara thocyanin, senyawa Makanan J Agric. 2002;50(7):2110–2116.
fenolat dan asetaldehida, dan signifikansinya dalam anggur
merah. Am J Enol Vitic. 1976;27:97–105. [24] Mateus N, de Pascual-Teresa S, Rivas-Gonzalo JC, Santos-
Buelga C, de Freitas V. Keanekaragaman struktural pigmen
[10] Bakker J, Bridle P, Honda T, dkk. Identifikasi antosianin yang turunan antosianin dalam anggur Port. Makanan Kimia.
terjadi di beberapa anggur merah. Kimia fito. 1997;44(7):1375– 2002;76:335–342.
1382. [25] Mateus N, Silva AMS, Rivas-Gonzalo JC, Santos Buelga C,
[11] Bakker J, Timberlake CF. Isolasi, identifikasi, dan karakterisasi de Freitas V. Kelas baru pigmen turunan antosianin biru
anthocyanin stabil warna baru yang terjadi pada beberapa yang diisolasi dari anggur merah. Kimia Makanan J Agric.
anggur merah. Kimia Makanan J Agric. 1997;45(1):35–43. 2003;51(7):1919–1923.
[26] Mateus N, Oliveira J, Santos-Buelga C, dkk. Karakterisasi
[12] Fulcrand H, Benabdeljalil C, Rigaud J, Cheynier V, Moutounet struktur NMR dari pigmen vinylpyrano anthocyanin-catechin
M. Kelas baru pigmen anggur yang dihasilkan oleh reaksi baru (a portisin). Tetrahe dron Lett. Dalam pers.
antara asam piruvat dan anggur an thocyanin. Fitokimia.
1998;47(7):1401–1407. [27] Roehri-Stoeckel C, Gonzalez E, Fougerousse A, Brouillard R.
[13] Romero C, Bakker J. Interaksi antara antosianin anggur dan Pewarna sintetik: cara sederhana dan orisinil untuk garam
asam piruvat, dengan pengaruh pH dan konsentrasi asam flavylium tersubstitusi 4 dan turunan vitisin yang merespons
pada komposisi dan warna antosianin dalam larutan model. kor. Jurnal Kimia Kanada. 2001;79(7):1173–1178.
[28] Brouillard R. Ekspresi in vivo warna antosianin pada tanaman.
[14] Mateus N, Silva AMS, Vercauteren J, de Freitas V. Fitokimia. 1983; 22:1311– 1323.
Terjadinya pigmen turunan antosianin dalam anggur merah.
Kimia Makanan J Agric. 2001;49(10):4836–4840. [29] Brouillard R, Mazza G, Saad Z, Albrecht-Gary AM, Cheminat
[15] Mateus N, de Freitas VAP. Evolusi dan stabilitas pigmen A. Reaksi kopigmentasi anthocyanin: sebuah microprobe
turunan antosianin selama Port wine ag ing. Kimia Makanan untuk studi struktural larutan berair. J Am Chem Soc.
J Agric. 2001;49(11):5217–5222. 1989;111(7):2604–2610.
[16] Cameira dos Santos PJ, Brillouet JM, Cheynier V, dkk. Deteksi
dan karakterisasi parsial pigmen turunan antosianin baru [30] Mazza G, Brouillard R. Mekanisme copig mentation
dalam anggur. Pertanian Pangan J Sci. 1996;70:204–208. anthocyanin dalam larutan berair.
Fitokimia. 1990;29:1097–1102.
[31] Goto T. Struktur, stabilitas dan variasi warna antosianin

alami. Prog Chem Org Nat Prod. 1987;52:113–158.
[32] Mistry TV, Cai Y, Lilley TH, Haslam E. Interaksi polifenol.

Bagian 5. Ko-pigmentasi antosianin.
J Chem Soc Perkin Trans. 1991;2:1287–1296.
[33] Cabrita L, Fossen T, Andersen ØM. Warna dan stabilitas
enam antosianidin 3-glukosida umum dalam larutan air.
Makanan Kimia. 2000;68(1):101– 107.
[34] Fossen T, Cabrita L, Andersen ØM. Warna dan stabilitas

antosianin murni dipengaruhi oleh pH termasuk daerah
basa. Makanan Kimia. 1998;63(4):435– 440.
[35] Dangles O, Saito N, Brouillard R. Efek kopigmen

intramolekul antosianin. Fitokimia. 1993;34:119–124.

Email: nbmateus@fc.up.pt
Faks: +351 22 608 2959; Telp: +351 22 608 2862
Jurnal Biomedik dan Bioteknologi • 2004:5 (2004) 306–313 • PII. S111072430440401X • http://jbb.hindawi.com
ARTIKEL TINJAUAN MINI
Antosianin dan Kesehatan Manusia: In Vitro

Pendekatan Investigasi
Mary Ann Lilaÿ
Departemen Sumber Daya Alam & Ilmu Lingkungan, Sekolah Tinggi Konsumen Pertanian dan Ilmu Lingkungan,
Universitas Illinois, Urbana, IL 61801, AS
Diterima 2 April 2004; direvisi 10 Mei 2004; diterima 12 Mei 2004
Pigmen antosianin dan flavonoid yang terkait telah menunjukkan kemampuan untuk melindungi dari segudang penyakit manusia, namun
sangat sulit untuk dipelajari sehubungan dengan kesehatan manusia. Antosianin sering berinteraksi dengan fitokimia lain untuk
mempotensiasi efek biologis, sehingga kontribusi dari masing-masing komponen sulit diuraikan. Struktur senyawa yang kompleks dan
multikomponen dalam campuran bioaktif dan degradasi flavonoid selama prosedur ekstraksi yang keras mengaburkan penentuan
bioaktivitas yang tepat untuk masing-masing pigmen. Kerusakan metabolisme yang luas setelah konsumsi mempersulit pelacakan
antosianin untuk menilai penyerapan, bioavailabilitas, dan akumulasi di berbagai organ. Pigmen antosianin dan flavonoid lain yang
diproduksi secara seragam dan dapat diprediksi dalam sistem kultur sel tumbuhan yang dikontrol secara ketat dapat menjadi keuntungan
besar bagi penelitian kesehatan dan nutrisi karena mereka cepat, mudah diisolasi, tidak memiliki gangguan yang ditemukan pada buah
utuh, dapat ditimbulkan untuk memprovokasi cepat dan akumulasi produktif, dan setuju untuk biolabeling sehingga nasib metabolik dapat diselidiki setelah ko
ANTOSIANIN DAN SIFAT BIOMEDISINAL menunjukkan bahwa mekanisme aksi lain juga bertanggung
jawab atas manfaat kesehatan yang diamati [2, 3, 4, 5]. Isolat
Antosianin adalah anggota kelompok fitokimia flavonoid, antosianin dan campuran bioflavonoid yang kaya antosianin
kelompok yang dominan dalam teh, madu, anggur, buah- dapat memberikan perlindungan dari pembelahan DNA,
buahan, sayuran, kacang-kacangan, minyak zaitun, kakao, dan sereal.aktivitas estrogenik (mengubah perkembangan gejala penyakit
Flavonoid, mungkin kelompok fenolik tunggal yang paling yang bergantung pada hormon), penghambatan enzim,
penting dalam makanan, terdiri dari lebih dari 4000 C15 meningkatkan produksi sitokin (sehingga mengatur respons
senyawa tanaman aromatik dengan beberapa pola substitusi imun), aktivitas antiinflamasi, lipid peroksidasi, penurunan
(www.nal.usda.gov/fnic/foodcomp/index.html). permeabilitas dan kerapuhan kapiler, dan penguatan membran
Para pemain utama dalam kelompok ini termasuk an thocyanin [6, 7, 8, 9, 10]. Struktur kimia (posisi, jumlah, dan jenis
(misalnya cyanidin, pelargonidin, petunidin), flavonol (quercetin, substitusi) dari masing-masing molekul antosianin juga
kaempferol), flavon (luteolin, apigenin), flavanon (myricetin, berpengaruh pada sejauh mana antosianin menggunakan sifat
naringin, hesperetin, naringenin), flavan-3- ols (catechin, bioaktifnya [11, 12] dan hubungan struktur/fungsi juga
epicatechin, gallocat echin), dan, meskipun terkadang mempengaruhi intraseluler. lokalisasi pigmen [7]. Literatur
diklasifikasikan secara terpisah, isoflavon (genistein, daidzein). antosianin mencakup beberapa kontroversi mengenai kontribusi
Fitokimia dalam kelas ini sering disebut sebagai bioflavonoid relatif dari thosianin glikosilasi versus aglikon dalam hal
karena perannya yang beragam dalam pemeliharaan kesehatan bioavailabilitas dan potensi bioaktif [7, 13, 14, 15, 16]. Awalnya,
manusia, dan antosianin dalam makanan biasanya dicerna diasumsikan bahwa hanya aglikon yang dapat memasuki sirkuit
sebagai komponen campuran kompleks komponen flavonoid. sirkulasi, namun, penyerapan dan metabolisme glikosida
tosianin kini telah dibuktikan. Sifat konjugat gula dan aglikon
Asupan harian diperkirakan dari 500 mg hingga 1 g, tetapi bisa merupakan penentu penting dari penyerapan antosianin dan
beberapa g/hari jika seseorang mengonsumsi suplemen ekskresi pada manusia dan tikus [15].
flavonoid (ekstrak biji anggur, ginkgo biloba, atau pycnogenol;
lihat, misalnya, [1]).
Antosianin berwarna-warni adalah anggota fitokimia
bioflavonoid yang paling dikenal dan terlihat. Pemulungan Peran pigmen antosianin sebagai agen obat telah diterima
radikal bebas dan kapasitas antioksidan dari pigmen thocyanin dengan baik sebagai dogma dalam pengobatan tradisional di
adalah modus operandi yang paling banyak dipublikasikan seluruh dunia, dan faktanya, pigmen ini terkait dengan berbagai
yang digunakan oleh pigmen ini untuk mengintervensi target manfaat kesehatan yang luar biasa luas. Misalnya, anthocyanin
dari Hibiscus sp
terapeutik manusia, tetapi, pada kenyataannya, penelitian dengan jelas

2004:5 (2004) Antosianin dan Kesehatan: Pendekatan In Vitro 307
secara historis telah digunakan dalam pengobatan untuk lemma dan sitosol sel endotel untuk secara langsung
disfungsi hati dan hipertensi; dan bilberry (Vaccinium) memeriksa peran protektif [34]. Tes-tes ini menunjukkan tidak
anthocyanin memiliki anekdot sejarah penggunaan untuk hanya bahwa antosianin dapat secara langsung dimasukkan
gangguan penglihatan, infeksi mikroba, diare, dan beragam ke dalam sel endotel, tetapi hasilnya adalah perlindungan
gangguan kesehatan lainnya [17, 18, 19]. Tetapi sementara stres oksidatif yang signifikan. Delphinidin, tetapi bukan
penggunaan antosianin untuk tujuan terapeutik telah lama malvidin atau cyanidin, memberikan vasorelaksasi yang
didukung oleh bukti anekdotal dan epidemiologis, hanya bergantung pada endotelium pada aorta tikus, memberikan
dalam beberapa tahun terakhir beberapa sifat farmakologis manfaat farmakologis yang sebanding dengan polifenol anggur merah [35].
spesifik dan terukur dari pigmen antosianin terisolasi telah Pada model tikus, sedikit pengaruh pemberian antosianin
diverifikasi secara meyakinkan oleh kontrol in vitro yang murni (sianidin 3-O-glukosida) atau ekstrak kaya antosianin
ketat. , in vivo, atau percobaan penelitian klinis [4]. Dalam dari elderberry atau blackcurrant dapat dideteksi pada kadar
banyak kasus lain, peran pasti antosianin dalam pemeliharaan kolesterol atau pola asam lemak di hati, tetapi pigmennya
kesehatan manusia versus fitokimia lain dalam campuran mampu bertahan. vitamin E [36]. Ekstrak antosianin mentah
kompleks dari ekstrak buah atau makanan utuh belum dari bilberry telah diberikan baik secara oral maupun melalui
sepenuhnya disortir. Bahkan, beberapa laporan menunjukkan injeksi untuk mengurangi permeabilitas kapiler [13]. Dalam
bahwa aktivitas antosianin berpotensiasi ketika disampaikan penelitian lain terkait gangguan kardiovaskular, peran pigmen
dalam campuran [20, 21, 22]. antosianin versus flavonoid lain yang terkandung dalam
Sebagai contoh, ketajaman visual dapat ditingkatkan ekstrak fitokimia belum sepenuhnya dipilah. Perlindungan
secara nyata melalui pemberian pigmen antosianin pada dari serangan jantung melalui pemberian jus anggur atau
subjek hewan dan manusia, dan peran pigmen ini dalam anggur sangat terkait dengan kemampuan produk kaya
meningkatkan penglihatan pada malam hari atau penglihatan antosianin untuk mengurangi peradangan dan meningkatkan
keseluruhan telah didokumentasikan dengan sangat baik [23]. kekuatan dan permeabilitas kapiler, dan untuk menghambat
Asupan sisi anthocyano dari blackcurrant secara oral pembentukan trombosit dan meningkatkan pelepasan oksida
menghasilkan adaptasi night vision yang terbukti secara nitrat (NO) [37] . Demikian pula, pemberian konsentrat kismis
signifikan pada subjek manusia [24], dan manfaat serupa hitam dengan kandungan antosianin yang kuat menyebabkan
diperoleh setelah pemberian anthocyanin dari bilberry [25]. relaksasi va yang bergantung pada endotelium pada cincin
Tiga anthocyanin dari blackcurrant merangsang regenerasi aorta tikus in vitro [38]. Mekanisme vasorelaksasi dikaitkan
rhodopsin (reseptor G-protein-coupled yang terlokalisasi di dengan peningkatan produksi NO, tetapi senyawa aktif dalam
retina mata), dan pembentukan perantara regenerasi konsentrat tidak diisolasi. Ketika tikus diberi perlakuan awal
dipercepat oleh cyanidin 3-rutinoside [26]. Studi-studi ini untuk meningkatkan kerentanan terhadap kerusakan oksidatif,
sangat menyarankan bahwa peningkatan generasi rhodopsin kemudian diberi makan ekstrak yang kaya antosianin, terjadi
setidaknya satu mekanisme dimana anthocyanin meningkatkan penurunan yang signifikan pada dadu peroksidasi lipid dan
ketajaman visual. kerusakan DNA [9].
Baik dalam uji coba penelitian in vitro dan in vivo, antho Menelan ekstrak ini, yang mengandung campuran delphinidin,
cyanin telah menunjukkan kemampuan yang nyata untuk cyanidin, petunidin, peonidin, dan malvidin dalam bentuk 3-
mengurangi proliferasi sel kanker dan menghambat glukopiranosida, juga meningkatkan kapasitas antioksidan
pembentukan tumor [27, 28, 29, 30]. Kapasitas pigmen plasma.
antosianin untuk mengganggu proses karsinogenesis Tsuda et al [4] baru-baru ini memberikan bukti bahwa
tampaknya terkait dengan berbagai mekanisme aksi potensial thocyanin yang diekstraksi dari jagung ungu, ketika diberikan
termasuk penghambatan enzim siklooksigenase dan potensi kepada tikus bersama-sama dengan diet tinggi lemak, secara
antioksidan kuat. Hou et al [20] mengungkapkan bahwa efektif menghambat peningkatan berat badan dan jaringan
anthocyanin menghambat tumorigenesis dengan memblokir adiposa. Gejala khas hiperglikemia, hiperinsulinemia, dan
aktivasi jalur protein kinase yang diaktifkan-mitogen. Laporan hiperleptinemia yang dipicu oleh diet tinggi lemak tidak terjadi
ini memberikan indikasi pertama tentang dasar molekul ketika mencit juga menelan anthocyanin yang diisolasi.
mengapa antosianin menunjukkan sifat antikarsinogenik. Eksperimen menunjukkan bahwa antosianin, sebagai
Dalam penelitian lain, ekstrak buah dengan konsentrasi komponen makanan fungsional, dapat membantu pencegahan
antosianin yang signifikan terbukti efektif melawan berbagai obesitas dan diabetes.
tahap karsinogenesis [18, 28, 31, 32], tetapi peran individu Anthocyanin telah dikreditkan dengan kapasitas untuk
antosianin versus komponen lain tidak ditentukan, sebagian memodulasi fungsi kognitif dan motorik, untuk meningkatkan
karena antosianin terlalu mudah terdegradasi selama bioassay memori, dan memiliki peran dalam mencegah penurunan
jika dipisahkan dari stabilisasi kofaktor seperti konstituen terkait usia dalam fungsi saraf. Cho et al [39] melaporkan
fenolik lainnya [33]. bahwa pemberian anthocyanin semipurifikasi terisolasi dari
ubi jalar ungu meningkatkan kinerja kognitif sebagaimana
Peran anthocyanin dalam perlindungan penyakit dinilai dengan tes penghindaran pasif pada tikus yang diberi
kardiovaskular sangat terkait dengan perlindungan stres oksidatif. etanol, dan juga secara efektif menghambat peroksidasi lipid
Karena disfungsi endotel terlibat dalam inisiasi dan pada jaringan otak tikus. Dengan memberikan ekstrak
perkembangan penyakit vaskular, empat antosianin yang blueberry dengan kandungan anthocyanin yang signifikan
diisolasi dari elderberry dimasukkan ke dalam plasma. (tetapi bukan pigmen yang dimurnikan), dicatat bahwa suplemen blueberry
308 Mary Ann Lila 2004:5 (2004)
diet menyebabkan pembalikan yang efektif dari defisit terkait berbagai strategi dan berbagai serangan untuk mencapai fungsi-
usia dalam berbagai parameter saraf dan perilaku (memori dan fungsi ini, daripada senyawa tunggal yang patogen atau predator
fungsi motorik) [40]. Investigasi lebih lanjut oleh tim laboratorium dapat menjadi kebal.
ini menunjukkan bahwa anthocyanin (khususnya, cyanidin-3- Keragaman yang sama dalam sintesis fitokimia bioaktif ini juga
sambubioside-5-glucoside dan cyanidin 3, 5-diglucoside) sangat merupakan bonus bagi hewan dan manusia yang mengonsumsi
tersedia secara biologis dalam sel endotel, yang terkait dengan donor bahan tanaman, dan mendapat manfaat dari interaksi
peran mereka dalam pencegahan aterosklerosis dan gangguan flavonoid dengan target terapeutik. Ketika interaksi antara fitokimia
neurodegeneratif [34, 41]. yang terjadi bersamaan positif (misalnya, efek aditif atau sinergi),
Antosianin memberikan banyak efek perlindungan terhadap interaksi tersebut disebut interaksi potensiasi. Dalam kasus lain,
radang selaput dada pada model tikus dan mampu mengurangi komponen dalam tanaman donor benar-benar dapat menghambat
peradangan. Perawatan antosianin juga menurunkan ekspresi bioaktivitas senyawa flavonoid (misalnya, interferensi pektin
enzim yang terlibat dalam peradangan di paru-paru [10]. Aktivitas dengan kapasitas antioksidan dalam uji in vitro), dan dalam kasus
antimikroba dari thocyanin secara umum telah ditetapkan dengan lain, senyawa bersamaan yang bukan bioaktif sendiri dapat
baik, termasuk penghambatan biosintesis aflatoksin yang signifikan bekerja sama. dengan bioflavonoid untuk meningkatkan
[42]. Bukti eksperimental yang menunjukkan manfaat antosianin bioavailabilitas atau penyerapan. Sinergi antara flavonoid termasuk
cocok untuk diabetes dan gangguan pankreas juga telah anthocyanin telah dikutip bertanggung jawab untuk aktivitas
terakumulasi dalam beberapa tahun terakhir, dan sekali lagi antiplatelet anggur merah dan jus anggur, dengan interaksi yang
kemanjurannya dikaitkan dengan beberapa efek biologis simultan kuat antara komponen kulit anggur dan biji anggur diperlukan
yang disebabkan oleh pigmen ini di dalam tubuh, termasuk untuk mempotensiasi aktivitas antiplatelet dalam sistem manusia
pencegahan pembentukan radikal bebas. penurunan peroksidasi dan hewan [45]. Flavonoid co-terjadi bekerja secara sinergis untuk
lipid, pengurangan pembengkakan pankreas, dan penurunan memusuhi pembentukan hidrogen peroksida yang paling efektif
konsentrasi gula darah dalam urin dan serum darah [43, 44]. dalam menekan fungsi trombosit [46]. Pendekatan bioprospeksi
tradisional, yang mencari senyawa tunggal turunan tumbuhan
yang dimurnikan sebagai sarana penemuan obat, tidak akan
ENIGMA ANTOSIANIN menangkap potensi penuh dari ekstrak tumbuhan ketika berbagai
interaksi potensiasi bertanggung jawab atas bioaktivitas.
Enigma didefinisikan sebagai segala sesuatu yang
membingungkan karena tidak dapat dijelaskan, tersembunyi, atau
tidak jelas; sesuatu yang berfungsi sebagai teka-teki untuk Cacat lain yang dikenal baik oleh para ilmuwan yang
dipecahkan. Seluruh bidang konsumsi thocyanin dan kesehatan mengeksplorasi sifat bioaktif flavonoid, dan bagian kedua dari
manusia cocok dengan definisi ini, karena beberapa aspek peran teka-teki antosianin, adalah fakta bahwa fitokimia ini dapat bersifat
farmakologis anthocyanin tetap sulit dipahami oleh para ilmuwan. cepat berlalu [33]. Kerentanan antosianin terhadap oksidasi dan
Dalam sebagian besar intervensi anthocyanin dalam kesehatan degradasi merupakan salah satu perhatian pengolah makanan
manusia, rincian tentang mekanisme aksi bioaktivitas, penyerapan, yang ingin memaksimalkan umur simpan produk yang ditingkatkan
penyerapan, bioavailabilitas, distribusi seluruh tubuh, dan lokalisasi dengan warna pigmen alami. Secara khusus, banyak metode
jaringan masih belum sepenuhnya dijelaskan. fitokimia klasik (termasuk kromatografi kolom), yang digunakan
Setidaknya ada empat kendala utama yang menghambat untuk mengekstraksi dari jaringan tumbuhan dan komponen
perumusan, oleh para profesional medis, pedoman diet atau fraksinasi dari ekstrak mentah, dapat menurunkan antosianin dan/
preskriptif yang kuat tentang konsumsi antosianin. atau menonaktifkannya selama tahap pemurnian.
Mungkin potongan teka-teki yang paling rumit adalah, dalam Akibatnya, penelitian yang bertujuan untuk mengidentifikasi entitas
hal aktivitas biologis dalam tubuh manusia, pigmen antosianin bioaktif dan mengukur potensi ekstrak dapat dengan mudah gagal
(hampir) tidak pernah bertindak sendiri-sendiri. Biasanya, menilai sumber aktual aktivitas biologis in situ.
anthocyanin dan komponen flavonoid lainnya, atau anthocyanin Perhatian yang ketat terhadap sifat fana dari beberapa
dan phytochemical nonflavonoid lainnya, berinteraksi bersama konstituen flavonoid dalam buah beri (terutama selama urutan
untuk memberikan potensi penuh. Interaksi antara fitokimia dalam traksi/fraksinasi) menyebabkan adaptasi teknik kromatografi
tanaman merupakan kunci strategi evolusi untuk tanaman inang. vakum di laboratorium kami, yang dirancang untuk (sebanyak
mungkin) menjaga integritas senyawa. dan pertahankan campuran
Ada lebih dari 4000 flavonoid yang dideskripsikan, dengan pola alami sampai pemisahan akhir untuk tujuan identifikasi [32, 47].
substitusi ganda dan seringkali struktur kompleks besar dalam Dengan menggunakan buah beri utuh yang dibekukan dengan
campuran. Bioflavonoid seperti antosianin terjadi dalam campuran cepat sebagai titik awal, buah diekstraksi dalam blender Waring
dalam makanan yang dapat dimakan dan dicerna dalam campuran. dengan 70% aseton encer (ÿ2L pelarut kgÿ1 buah) kemudian
Tanaman apa pun yang mengandung anthocyanin termasuk disaring melalui kain tipis. Aseton dihilangkan dari filtrat di bawah
koktail fitokimia yang kompleks. Anthocyanin dan flavonoid terkait vakum dalam penangas air 40ÿC , dan air kemudian dihilangkan
adalah produk sekunder yang biasanya diproduksi oleh tanaman dengan liofilisasi, menghasilkan bubuk berwarna ungu gelap.
sebagai agen pertahanan, pelindung, atau penarik, dan masuk Sebagian dari ekstrak kering mentah kemudian
akal secara evolusioner bagi tanaman untuk menggunakan
dilarutkan kembali dalam air dan dituangkan di atas kolom polimer meningkatnya minat di bidang produk alami dan pemeliharaan
resin Toyopearl untuk kromatografi vakum. Kromatografi vakum kesehatan, ada kekurangan informasi tentang penyerapan,
pada Toyopearl dengan serangkaian pelarut (air, 50% MeOH, 100% biodistribusi, dan metabolisme thocyanin dan flavonoid yang
MeOH, 100% aseton, dan 50% aseton) mengelusi 5 fraksi TP yang berinteraksi. Berbagai produk tanaman sekunder telah terlibat dalam
kemudian dipekatkan di bawah vakum, dan air dihilangkan dengan promosi kesehatan yang baik atau pencegahan penyakit pada
liofilisasi. Gula dihilangkan dengan sangat cepat dan efisien pada manusia, tetapi sedikit yang diketahui tentang cara mereka diserap
fraksi pertama, yang sangat menyederhanakan penanganan dan di usus, atau di jaringan mana mereka disimpan di seluruh tubuh.
analisis fraksi yang tersisa. Sementara masalah ini dapat dipelajari jika phytochemical diberi
label isotop, menghasilkan molekul berlabel sering bermasalah
Setelah fraksi bioaktif diidentifikasi, putaran pemisahan kedua, karena banyak senyawa yang menarik hanya dapat disintesis di
ketiga, dan selanjutnya dilakukan pada silika gel, juga dengan planta saat ini.
vakum, terkadang kromatografi gravitasi kolom terbuka. Pada setiap
langkah prosedur, campuran hasil isolasi dibandingkan menggunakan
kromatografi lapis tipis silika gel dan 2 reagen semprot (vanillin-HCl SISTEM PRODUKSI ANTOSIANIN IN VITRO
dan reagen dikromat) untuk mengukur komposisi dan jumlah
komponen dalam setiap fraksi. Secara umum, strategi fraksinasi ini Pengembangan dan optimalisasi sistem kultur sel tanaman
memungkinkan pemisahan cepat volume ekstrak yang relatif besar, yang mensintesis thocyanin secara andal dan dapat diprediksi
dengan sedikit paparan terhadap pelarut yang merusak dan mahal, dalam lingkungan yang terkendali telah memberikan model yang
lebih sedikit paparan bahan pendukung kolom dan udara, kerugian unik dan berguna untuk penelitian mendalam tentang thocyanin,
minimal, dan pemisahan flavonoid yang andal. Bersamaan dengan dan telah membantu setidaknya sebagian untuk menghindari
semua fraksinasi adalah urutan bioassay yang konsisten (untuk hambatan yang disajikan dalam keempat kasus “antho cyanin
beberapa tahap karsinogenesis) karena skema fraksinasi dipandu enigma” seperti dijelaskan di atas. Kultur kalus dan suspensi sel
oleh bioaktivitas. Karena fraksi menjadi lebih murni, analisis dengan dari berbagai genera tanaman yang luas dan beragam telah
HPLC, HPLC-MS, dan NMR dapat digunakan untuk menentukan dibudidayakan untuk menghasilkan pigmen antosianin in vitro [48,
asal bioaktivitas secara meyakinkan. 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56]. Dalam sebagian besar laporan
sebelumnya, tujuan keseluruhan dari sistem produksi kultur sel
tumbuhan adalah untuk mengeksplorasi sumber daya alternatif
untuk pigmen tumbuhan alami, untuk kemungkinan digunakan
Bagian ketiga dari teka-teki ini adalah sifat yang dapat diinduksi sebagai pewarna makanan. Baru-baru ini, beberapa spesies
dari banyak flavonoid bioaktif termasuk antosianin. tanaman penghasil antosianin telah dibudidayakan secara in vitro
Seperti kebanyakan produk tanaman sekunder, produksi awal dan secara intensif untuk memanen pigmen bioaktif dan fitokimia terkait
akumulasi fitokimia dipicu oleh pemicu lingkungan mikro fisik atau sebagai senyawa aktif obat [47, 57, 58, 59]. Dengan mengendalikan
kimia, biasanya faktor stres. Gen yang bertanggung jawab untuk lingkungan mikro fisik dan kimia dari kultur sel tanaman, produksi
sintesis flavonoid sangat dapat diinduksi. Dengan demikian, seorang thocyanin dalam banyak kasus dapat ditingkatkan ke konsentrasi
peneliti yang bermaksud memaksimalkan produksi pigmen yang lebih tinggi daripada yang tersedia di tanaman induk in vivo.
antosianin harus mengenali faktor-faktor induksi dan dengan Beberapa sistem produksi kultur sel yang paling intensif diteliti
sengaja memperoleh produksi flavonoid bioaktif dengan memberikan menggunakan seleksi dari genus Vitis (anggur), di mana sistem
rangsangan ini pada bahan tanaman yang diminati. Elisitasi meniru berbasis bioreaktor yang ditingkatkan mendekati produktivitas
tekanan yang memicu pembentukan produk sekunder di alam, dan semikomersial [60, 61]. Sistem kultur sel bisa sangat stabil, dan
mengaktifkan jalur biokimia yang tidak aktif. Pemicu produktivitas banyak yang telah dipilih untuk hasil antosianin yang tinggi dan
ini, tentu saja, sangat sulit dicapai di lapangan, tetapi dapat dicapai kurangnya ketergantungan pada radiasi. Profil antosianin dari kultur
dengan andal dalam fasilitas pertumbuhan yang terkendali. sel tidak harus mencerminkan profil dari tanaman induk, dan isolasi
pigmen dari jaringan kultur sel yang disederhanakan secara
substansial lebih ramping daripada dari jaringan buah atau vegetatif
yang kompleks [47, 53, 58].
Potongan teka-teki terakhir dalam "teka-teki antosianin" adalah
ketidakmampuan ilmuwan atau praktisi pengobatan untuk melacak
kemajuan metabolisme antosianin setelah menelan, karena Kesederhanaan ini dapat menjadi keuntungan khusus untuk
banyaknya produk pemecahan metabolisme yang diproduksi penyelidikan sifat kesehatan bioflavonoid termasuk anthocyanin.
dengan cepat di tempat. Ada minat besar saat ini dalam pencarian
untuk mengikuti pengangkutan bioflavonoid melalui tubuh, untuk Dalam kebanyakan kasus, sistem dimulai dengan bahan
menentukan penyerapan dan bioavailabilitas, dan untuk melihat di tanaman vegetatif (daun, tangkai daun, batang) dan bukan jaringan
mana produk pemecahan menumpuk dan untuk berapa lama. buah. Ex tanaman dari tanaman in vivo didesinfeksi permukaan dan
Namun, karena phytochemical ini sangat dimetabolisme setelah diintroduksi ke dalam kultur sel untuk menghasilkan kalus yang
konsumsi makanan atau suplemen kaya antosianin, pelacakan berkembang biak dengan cepat, kemudian kultur suspensi sel, yang
metabolisme belum dimungkinkan. Meskipun penelitian aktif dan akhirnya diinduksi untuk menghasilkan flavonoid (biasanya dengan
pemicu seperti cahaya, peningkatan karbohidrat, perubahan profil nitrogen,
310 Mary Ann Lila 2004:5 (2004)
atau elisitasi dengan ekstrak jamur atau bahan kimia lainnya). sumber produk fitokimia atau penguraian yang sama. Molekul
besar ini harus disintesis di planta.
Karena sistem produksi antosianin kultur sel terdiri dari Di bidang penelitian yang baru muncul ini, label radiolabel atau
jaringan sederhana yang dapat direkayasa untuk mengakumulasi isotop telah diperkenalkan untuk memetabolisme kultur sel
pigmen secara andal dan dapat diprediksi, sistem ini menggunakan sumber karbohidrat (sukrosa atau glukosa)
menghindari banyak hambatan dalam teka-teki antosianin. atau kursor awal yang jauh lebih jauh di sepanjang jalur
Interaksi antara potensi fitokimia masih berlaku dalam sistem metabolisme menuju sintesis antosianin, seperti fenilalanin.
kultur sel, tetapi karena jaringan lebih mudah diekstraksi, sifat Tingkat penggabungan berkisar antara 15% dan 30%, dan
interaksi fitokimia jauh lebih mudah untuk dipilah dan diuji tingkat yang dicapai sekarang memungkinkan lokalisasi organ
secara kuantitatif. Kultur sel memungkinkan isolasi yang cepat dan saraf dari senyawa berlabel 14C dan pemantauan
dan efisien tanpa banyak senyawa pengganggu (pektin, menggunakan autoradiografi dan penghitungan kilau. Teknologi
kelebihan polisakarida, enzim) yang dapat mempersulit ekstraksi akselerator spektrometri massa (AMS) bahkan akan
atau bioassay dari buah-buahan [18]. Ekstrak air dari garis ubi memungkinkan pemantauan tingkat kecil dalam sistem manusia.
jalar penghasil antosianin menunjukkan potensi yang lebih Dengan inovasi ini, jelas bahwa penggunaan antosianin yang
tinggi (potensi antiproliferatif dan antimutagenik) daripada diproduksi kultur sel secara efektif sekarang dapat menjelaskan
ekstrak dari tanaman yang ditanam di lapangan [58]. peran pigmen antosianin yang sebelumnya tersembunyi dalam
kesehatan dan metabolisme manusia.
Demikian pula, ketika kapasitas antioksidan kultur sel dan REFERENSI
berbagai ekstrak buah dibandingkan secara berdampingan
dalam uji radikal bebas galvinoksil, potensi ekstrak kultur sel [1] Skibola C, Smith M. Potensi dampak kesehatan dari
secara substansial lebih tinggi daripada semua ekstrak buah, asupan flavonoid yang berlebihan. Free Radic Biol Med.
dan hanya proanthocyanidins biji anggur yang menunjukkan 2000;29(3-4):375–383.
lebih tinggi. aktivitas [47]. Karena zat-zat lain ini tidak ada, [2] Tsuda T, Shiga K, Ohshima K, Kawakishi S, Osawa T.
flavonoid jauh lebih mudah diisolasi tanpa degradasi yang Penghambatan peroksidasi lipid dan efek pemulungan
dapat terjadi dengan cepat ketika diisolasi secara perlahan dari radikal oksigen aktif dari pigmen antosianin yang diisolasi
buah atau jaringan vegetatif yang kompleks dan bandel. dari Phaseolus vulgaris L. Biochem Pharmacol.
1996;52(7):1033–1039.
Sementara kandungan flavonoid buah mungkin hanya [3] Tsuda T, Horio F, Osawa T. Cyanidin 3-O-beta-D
terdiri dari 1% atau kurang dari total zat, kultur sel dapat dibuat glukosida menekan produksi oksida nitrat selama
untuk mengakumulasi konsentrasi flavonoid yang jauh lebih pengobatan zymosan pada tikus. J Nutr Sci Vitaminol
tinggi, dalam kisaran 20%–30% volume. Banyak flavonoid, (Tokyo). 2002;48(4):305–310.
khususnya, oligomer proan thocyanidin dengan berat molekul [4] Tsuda T, Horio F, Uchida K, Aoki H, Osawa T.
tinggi atau isomer anthocyanin kompleks, tidak tersedia secara Warna jagung ungu kaya cyanidin 3-O-beta-D-glukosida
komersial atau sangat mahal. Dengan memproduksi fitokimia diet mencegah obesitas dan memperbaiki hiper glikemia
ini dalam volume dalam kultur sel, sumber standar siap tersedia pada tikus. J Nutr. 2003;133(7):2125–2130.
untuk pengujian yang tidak diketahui [32]. [5] Wang S, Jiao H. Kapasitas pemulungan tanaman berry
pada radikal superoksida, hidrogen peroksida, radikal
Kultur sel adalah sistem model yang luar biasa untuk hidroksil, dan oksigen singlet. Kimia Makanan J Agric.
menguji efek elisitasi pada gen bioflavonoid yang dapat 2000;48(11):5677–5684.
diinduksi, yang merupakan cara untuk menyelesaikan aspek [6] Acquaviva R, Russo A, Galvano F, dkk. Cyanidin dan
lain dari teka-teki thocyanin. Faktanya, elisitasi kultur sel cyanidin 3-O-beta-D-glucoside sebagai pelindung
(menggunakan bahan kimia atau pemicu lingkungan untuk pembelahan DNA dan antioksidan. Sel Biol Toksikol.
produksi) adalah cara yang diakui dan efisien untuk 2003;19(4):243–252.
memaksimalkan pigmen antosianin menuju komersialisasi [7] Lazze M, Pizzala R, Savio M, Stivala L, Prosperi E, Bianchi
produk daur ulang [55, 56, 62, 63], dan sejak produksi in vitro L. Anthocyanin melindungi dari kerusakan DNA yang
lingkungan dikontrol dengan ketat, penyelidik memiliki disebabkan oleh tert-butyl-hydroperoxide pada otot polos
kesempatan untuk menguji beberapa pemicu elisitasi tanpa tikus dan sel hepatoma. Mutat Res. 2003;535(1):103–115.
gangguan dari kondisi lingkungan yang tidak terkendali di
pengaturan lapangan. [8] Lefevre M, Howard L, Kebanyakan M, Ju Z, Delany J.
Mungkin keuntungan paling signifikan untuk investigasi Analisis microarray dari efek anggur antho cyanin pada
menggunakan kultur sel pengakumulasi antosianin in vitro ekspresi gen hati pada tikus. FASEB J. 2004;18:A851.
adalah bahwa kultur dapat berfungsi sebagai kendaraan untuk
pengiriman label topik iso (13C atau 14C) ke sel metabolisme [9] Ramirez-Tortosa C, Andersen O, Gardner P, dkk. Ekstrak
sementara pigmen sedang dibiosintesis [59, 64 , 65]. Dengan kaya antosianin menurunkan indeks peroksidasi lipid dan
menggunakan sumber senyawa berlabel radioisotop, fitokimia kerusakan DNA pada tikus yang kekurangan vitamin E.
yang diiklankan dapat dimasukkan ke dalam makanan tertentu Free Radic Biol Med. 2001;31(9):1033– 1037.
dan dapat dibedakan dari bahan endogen yang sudah ada sebelumnya.
[10] Rossi A, Serraino I, Dugo P, dkk. Efek perlindungan [24] Nakaishi H, Matsumoto H, Tominaga S, Hirayama M. Efek
anthocyanin dari blackberry pada model tikus radang paru- asupan anthocyanoside kismis hitam pada adaptasi gelap
paru akut. Radik Bebas Res. 2003;37(8):891–900. dan perubahan refraksi transien akibat kerja VDT pada
manusia sehat. Altern Med Rev. 2000;5(6):553–562.
[11] Sebelumnya R, Cao G, Martin A, dkk. Kapasitas antioksidan
dipengaruhi oleh kandungan total fenolik dan antosianin, [25] Muth ER, Laurent J, Jasper P. Efek suplementasi nutrisi bil
kematangan, dan keragaman spesies Vaccinium . berry pada ketajaman visual malam hari dan sensitivitas
Kimia Makanan J Agric. 1998;46(7):2686–2693. kontras. Altern Med Rev. 2000;5(2):164–173.
[12] Russo A, Acquaviva R, Campisi A, dkk.
Bioflavonoid sebagai antiradikal, antioksidan dan pelindung [26] Matsumoto H, Nakamura Y, Tachibanaki S, Kawa mura S,
pembelahan DNA. Sel Biol Toksikol. 2000;16(2):91– 98. Hirayama M. Efek stimulasi cyani din 3-glikosida pada
regenerasi rhodopsin.
[13] Kong JM, Chia LS, Goh NK, Chia TF, Brouillard R. Analisis Kimia Makanan J Agric. 2003;51(12):3560–3563.
dan aktivitas biologis antosianin. [27] Apa DX. Mekanisme potensial kemoprevensi kanker oleh
Fitokimia. 2003;64(5):923–933. antosianin. Curr Mol Med. 2003;3(2): 149–159.
[14] Matsumoto H, Nakamura Y, Hirayama M, Yoshiki Y, Okubo
K. Aktivitas antioksidan aglikon antosianin kismis hitam dan
[28] Kang S, Seeram N, Nair M, Bourquin L. Tart antosianin ceri
glikosidanya diukur dengan chemiluminescence di daerah
menghambat perkembangan tumor pada tikus Apc(Min)
pH netral dan dalam plasma manusia. Kimia Makanan J dan mengurangi proliferasi sel kanker usus besar manusia.
Agric. 2002;50(18):5034–5037. Surat Kanker. 2003; 194(1):13–19.
[15] McGhie T, Ainge G, Barnett L, Cooney J, Jensen D. Glikosida

[29] Koide T, Hashimoto Y, Kamei H, Kojima T, Hasegawa M,
antosianin dari buah berry diserap dan diekskresikan tanpa
Terabe K. Efek antitumor dari fraksi antho cyanin yang
dimetabolisme oleh manusia dan tikus. Kimia Makanan J
diekstraksi dari kedelai merah dan kacang merah secara in
Agric. 2003;51(16): vitro dan in vivo. Farmasi Cancer Biother Radio.
4539–4548.
1997;12(4):277–280.
[16] Miyazawa T, Nakagawa K, Kudo M, Muraishi K, Someya K.
[30] Meiers S, Kemeny M, Weyand U, Gastpar R, von Angerer E,
Penyerapan usus langsung anthocyanin buah merah,
Marko D. Anthocyanidins cyanidin dan delphinidin adalah
cyanidin-3-glucoside dan cyanidin 3,5-diglucoside, pada
penghambat kuat reseptor faktor pertumbuhan epidermal.
tikus dan manusia. Kimia Makanan J Agric. 1999;47(3):1083–
1091.
[17] Beras-Evans C, Packer L, eds. Flavonoid dalam Kesehatan
dan Penyakit. NY: Marcel Dekker; 1998. [31] Bomser J, Madhavi D, Singletary K, Smith MA. Aktivitas
antikanker in vitro ekstrak buah dari spesies Vac cinium .
[18] Smith M, Marley K, Seigler D, Singletary K, Meline B. Sifat
Planta Med. 1996;62(3):212–216.
bioaktif buah blueberry liar. Ilmu Makanan J. 2000;65:352–
356. [32] Kandil F, Lagu L, Pezzuto J, Seigler D, Smith MA.
[19] Wang C, Wang J, Lin W, Chu C, Chou F, Tseng T. Efek Isolasi proanthocyanidins oligomer dari kultur sel penghasil
perlindungan anthocyanin Hibiscus terhadap toksisitas hati flavonoid. In Vitro Cell Dev Biol Plant. 2000;36:492–500.
yang diinduksi tert-butil hidroperoksida pada tikus. Food
Chem Toxicol. 2000;38(5):411–416. [33] Mazza G, Miniati E. Antosianin dalam Buah, Vegeta bles,
[20] Hou DX, Kai K, Li JJ, dkk. Antosianidin menghambat aktivitas dan Biji-bijian. Boca Raton, Fla: CRC Press; 1993.
protein aktivator 1 dan transformasi sel: hubungan struktur- [34] Youdim K, Martin A, Joseph J. Penggabungan anthocyanin
aktivitas dan mekanisme molekuler. Karsinogenesis. elderberry oleh sel endotel dalam perlindungan lipatan
2004;25(1):29–36. terhadap stres oksidatif. Free Radic Biol Med. 2000;29(1):51–
[21] Liu R. Manfaat kesehatan dari buah dan sayuran berasal 60.
dari kombinasi aditif dan sinergis dari phy tochemicals. Am [35] Andriambeloson E, Magnier C, Haan-Archipoff G, dkk.
J Clin Nutr. 2003;78(sup 3):517S– 520S. Senyawa polifenol makanan alami menyebabkan
vasorelaksasi yang bergantung pada endotelium pada aorta
[22] Stintzing F, Stintzing A, Carle R, Frei B, Wrolstad R. Warna tikus tho racic. J Nutr. 1998;128(12):2324–2333.
dan sifat antioksidan dari pigmen antosianin berbasis [36] Frank J, Kamal-Eldin A, Lundh T, Maatta K, Torro nen R,
cyanidin. Kimia Makanan J Agric. 2002;50(21):6172–6181. Vessby B. Efek antosianin makanan pada tokoferol dan
lipid pada tikus. Kimia Makanan J Agric. 2002;50(25):7226–
[23] Matsumoto H, Inaba H, Kishi M, Tominaga S, Hi rayama M, 7230.
Tsuda T. Delphini din 3-rutinoside dan cyanidin 3-rutinoside [37] Folts J. Potensi antitrombotik jus anggur dan anggur merah
yang diberikan secara oral langsung diserap pada tikus untuk mencegah serangan jantung. Farm Biol.
dan manusia dan muncul dalam darah sebagai utuh 1998;36(suppl):21–27.
formulir. Kimia Makanan J Agric. 2001;49(3):1546–1551. [38] Nakamura Y, Matsumoto H, Todoki K. Vasorelaxation yang
bergantung pada endotelium diinduksi oleh warna hitam
312 Mary Ann Lila 2004:5 (2004)
konsentrat kismis di aorta toraks tikus. Jpn J Phar macol. ahara N, Yamakawa O. Pembentukan dan karakteristik
2002;89(1):29–35. garis sel penghasil antosianin dari akar simpanan ubi jalar.
[39] Cho J, Kang J, Long P, Jing J, Back Y, Chung K. Efek Rep Sel Tumbuhan 2000;19:472–477.
antioksidan dan peningkatan memori dari antosianin ubi
´
jalar ungu dan ekstrak jamur Cordyceps . Arch Pharm Res. [53] Meyer J, Pepin MF, Smith M. Produksi antosianin dari
2003;26(10):821–825. Vaccinium pahalae: keterbatasan lingkungan mikro fisik. J
[40] Joseph J, Shukitt-Hale B, Denisova N, dkk. Pembalikan Bioteknol. 2002; 93(1):45–57.
penurunan terkait usia dalam transduksi sinyal saraf,
kognitif, dan defisit perilaku motorik dengan blueberry, [54] Mizukami H. Hibiscus sabdariffa L. (Roselle): Kultur in vitro
bayam, atau suplemen makanan stroberi. J Neurosci. dan produksi antosianin.
1999;19(18):8114–8121. Dalam: Bajaj YPS, ed. Bioteknologi Pertanian dan
[41] Youdim K, McDonald J, Kalt W, Joseph J. Potensi peran diet Kehutanan 24. Tanaman Obat dan Aromatik V. Berlin:
flavonoid dalam mengurangi kerentanan endotelium Springer-Verlag; 1993:218–228.
mikrovaskuler terhadap oksidatif dan meradang penghinaan. [55] Zhong J, Yoshida M, Fujiyama D, Seki T, Yoshida T.
J Nutr Biochem. 2002;13(5):282–288. Peningkatan produksi antosianin oleh sel Perilla frutescens
[42] Norton R. Penghambatan biosintesis aflatoksin B(1) di dalam bioreaktor diaduk dengan iradiasi cahaya internal. J
Aspergillus flavus oleh anthocyanidins dan flavonoid terkait. Fermentasi Bioeng. 1993;75(4):299– 303.
Kimia Makanan J Agric. 1999;47(3):1230– 1235.
¨
[56] Zubko M, Schmeer K, Glaßgen W, Bayer E, Seitz H.
[43] Jankowski A, Jankowska B, Niedworok J. Pengaruh Aronia Pemilihan garis sel kentang yang mengakumulasi antosianin
melanocapra pada pankreatitis eksperimental. Pol (Solanum tuberosum L.) dari kalus yang berasal dari semai
Merkuriusz Lek. 2000;8(48):395–398. yang berkecambah dari biji yang diiradiasi gamma. Rep Sel
[44] Jankowski A, Jankowska B, Niedworok J. Pengaruh pewarna Tumbuhan 1993;12:555–558.
antosianin dari anggur pada diabetes eksperimental. Folia [57] Pezet R, Perret C, Jean-Denis J, Tabacchi R, Gin dro K,
Med Cracow. 2000;41(3–4):5–15. Viret O. Delta-viniferin, resveratrol dehy drodimer: salah
[45] Shanmuganayagam D, Beahm M, Osman H, Krueger C, satu stilben utama yang disintesis oleh daun selentingan
Reed J, Folts J. Biji anggur dan ekstrak kulit anggur yang tertekan. Kimia Makanan J Agric. 2003;51(18):5488–
menghasilkan efek antiplatelet yang lebih besar bila 5492.
digunakan dalam kombinasi daripada bila digunakan secara [58] Konczak-Islam I, Yoshimoto M, Hou D, Terahara N,
terpisah pada anjing dan manusia. J Nutr. 2002;132(12):3592–3598. Yamakawa O. Sifat kemopreventif potensial dari ekstrak air
[46] Pignatelli P, Pulcinelli F, Celestini A, dkk. Flavonoid quercetin kaya antosianin dari jaringan ubi jalar (Ipomoea batatas L.)
dan catechin secara sinergis menghambat fungsi trombosit yang diproduksi secara in vitro.
dengan memusuhi produksi hidrogen peroksida intraseluler. Kimia Makanan J Agric. 2003;51(20):5916–5922.
Am J Clin Nutr. 2000;72(5):1150–1155. [59] Yousef G, Seigler D, Grusak M, dkk. Biosintesis sis dan
karakterisasi fraksi flavonoid yang diperkaya 14C dari kultur
[47] Kandil F, Smith M, Rogers R, dkk. Komposisi fraksi kaya suspensi sel tanaman. Kimia Makanan J Agric.
proanthocyanidin kemopreventif dari buah cranberry yang 2004;52(5):1138–1145.
bertanggung jawab untuk menghambat aktivitas 12-O- [60] Payne G, Bringi V, Pangeran C, Shuler M. Sel Tumbuhan
tetradecanoyl phorbol-13-acetate (TPA)-induced ornithine dan Kultur Jaringan dalam Sistem Cair. NY: Hanser; 1992.
decarboxylase (ODC). Kimia Makanan J Agric. [61] Shuler M, Hirasuna T, Prince C, Bringi V. Pertimbangan
2002;50(5):1063–1069. bioreaktor untuk memproduksi rasa dan pigmen dari kultur
[48] Callebaut A, Declere M, Vandermeren K. Ajuga rep tans jaringan tanaman. Dalam: Schwarzberg H, Rao M, eds.
(Bugle). Produksi in vitro antosianin. Bioproses dan Rekayasa Proses Pangan. New York: Marcel-
Dalam: Bajaj YPS, ed. Bioteknologi Pertanian dan Dekker; 1990:45–66.
Kehutanan 24. Tanaman Obat dan Aromatik V. Berlin: [62] Hirner A, Veit S, Seitz H. Regulasi biosintesis antosianin
Springer-Verlag; 1993:1–22. dalam kultur sel busuk mobil yang diiradiasi UV-A dan
[49] Cormier F, Crevier H, Do C. Pengaruh konsentrasi sukrosa dalam organ tanaman wortel utuh. Tanaman Sci.
pada akumulasi antosianin dalam suspensi sel anggur 2001;161(2):315–322.
(Vitis vinifera L.). Bisakah J Bot. 1990;68:1822–1825. [63] Mori T, Sakurai M, Sakuta M. Efek media terkondisi pada
aktivitas PAL, CHS, DAHP sintase (DS-Co dan DS-Mn)
[50] Ilan A, Dougall D. Efek penghambat pertumbuhan pada dan produksi antosianin dalam kultur suspensi Fragaria
produksi antosianin dalam kultur suspensi sel wortel. Rep ananassa. Tanaman Sci. 2001;160(2):335–360.
Sel Tumbuhan 1992;11(5-6):304–309.
[51] Kobayashi Y, Akita M, Sakamoto K, dkk. Produksi [64] Grusak M, Rogers R, Yousef G, Erdman J Jr, Lila M. Sistem
anthocyanin skala besar oleh kultur suspensi sel Aralia pelabelan ruang tertutup untuk pengayaan fitokimia 14C
cordata . Appl Mikrobiol Bioteknol. 1993;40(2-3):215–218. yang aman dalam kultur suspensi sel tanaman. In Vitro Cell
Dev Biol Plant. 2004;40:80–85.
[52] Konczak-Islam I, Yoshinaga M, Nakatani M, Ter
[65] Vitrac X, Desmouliere A, Brouillaud B, dkk. Distribusi

[14C]-trans-resveratrol, polifenol pencegahan kemo
kanker, pada jaringan tikus setelah pemberian oral.
Sains Kehidupan. 2003;72(20):2219–2233.
ÿ Email: imagemal@uiuc.edu
Fax:+1 217 244 3469; Telp:+1 217 333 5154
MENGULAS ARTIKEL
Pisau Tentara Swiss Alam: Pelindung Beragam

Peran Anthocyanin dalam Daun
Kevin S. Gouldÿ
Sekolah Ilmu Biologi, Universitas Auckland, Tas Pribadi 92019, Auckland, Selandia Baru
Diterima 28 Juni 2004; diterima 15 Juli 2004
Anthocyanin, pigmen yang bertanggung jawab atas penampilan spektakuler vermilion di daun pohon gugur, telah lama dianggap sebagai
pemborosan sumber daya tumbuhan. Penelitian kontemporer, sebaliknya, telah mulai menunjukkan bahwa pigmen dapat secara signifikan
memengaruhi cara daun merespons tekanan lingkungan. Anthocyanin telah terlibat dalam toleransi terhadap stressor yang beragam seperti
kekeringan, UV-B, dan logam berat, serta ketahanan terhadap herbivora dan patogen. Dengan menyerap kuanta berenergi tinggi, vakuola
sel antosianik melindungi kloroplas dari efek fotoinhibitor dan fotooksidatif dari cahaya kuat, dan mencegah katabolisme senyawa pertahanan
fotolabile. Antosianin juga mengurangi cedera fotooksidatif pada daun dengan secara efisien menghilangkan radikal bebas dan spesies
oksigen reaktif. Jauh dari menjadi produk sampingan yang tidak berguna dari jalur flavonoid, pigmen merah ini mungkin dalam beberapa
kasus sangat penting untuk kelangsungan hidup tanaman.
PENGANTAR Untuk sebagian besar tanaman vaskular, pewarnaan merah

pada daun dicapai oleh antosianin, terutama cyanidin-3- O-
Bukan kebetulan bahwa sebagian besar tumbuhan tingkat glukosida, sebagai larutan yang terletak di vakuola sel tanaman.
tinggi berwarna hijau. Klorofil dan pigmen asesoris yang terkait Pigmen lain—terutama betalain, karotenoid tertentu, thiarubrine A,
memungkinkan tanaman untuk memaksimalkan penggunaan beberapa terpenoid, dan 3-deoxyanthocyanin—juga memberikan
spektrum cahaya tampak untuk fotosintesis [1]. Dengan menetapkan warna kemerahan pada berbagai spesies; pigmen ini telah
gradien internal dalam penangkapan cahaya, pigmen hijau dipelajari dengan kurang baik dibandingkan antosianin, tetapi
memungkinkan tanaman untuk merespons dengan cepat setidaknya beberapa dari mereka memiliki fungsi yang sebanding
perubahan lingkungan spektral, serta mengeksploitasi habitat pada daun [12, 13, 14, 15, 16].
khusus. Sama halnya, mereka memberikan perlindungan terhadap Sintesis dan sekuestrasi vakuolar dari molekul antosianin
photoinhibition dan photooxidation, efek merusak dari kelebihan kuanta. mewakili metabolisme yang cukup besar untuk sel tanaman.
Daun hijau direkayasa untuk mengoptimalkan produktivitas. Pertama, ada biaya metabolisme yang terkait dengan produksi
Mengingat manfaat yang jelas bagi mereka yang hijau, lalu dan aktivitas enzim; setidaknya tujuh enzim terlibat dalam
mengapa banyak spesies tanaman menghasilkan daun berpigmen biosintesis cyanidin dari prekursornya, 4-coumaroyl-CoA dan
merah pada satu atau lebih tahap dalam siklus hidup mereka? malonyl-CoA [17]. Lalu ada biaya yang terkait dengan konjugasi
Flora berdaun merah tersebar luas di semua ordo kerajaan setiap molekul cyanidin menjadi molekul monosakarida.
tumbuhan, mulai dari lumut hati basal hingga giosperma yang
paling maju [2]. Mereka muncul di habitat yang beragam seperti Akhirnya, ada biaya yang terkait dengan pengangkutan cyanidin-3-
garis pantai Antartika dan hutan hujan tropis, melimpah di gurun O-glukosida ke dalam vakuola sel melalui pembawa glutathione
gersang seperti di danau air tawar, dan tampak betah di hutan yang membutuhkan tonoplast Mg-ATP [18]. Hal ini menunjukkan
yang kekurangan cahaya seperti di kanopi yang bermandikan sinar bahwa akumulasi anthocyanin dalam sel daun tidak mungkin
matahari. Pada banyak spesies berdaun merah pembuatan pigmen menjadi "pemborosan tanpa fungsi vital" [19]. Juga tidak mungkin
merah bersifat sementara, sering dikaitkan dengan tahap bahwa pigmen merah ini hanyalah produk default dari jalur
perkembangan diskrit seperti pada pertumbuhan flushes pohon biosintetik flavonoid jenuh, karena waktu produksi thocyanin
tropis [3, 4, 5], atau pada dedaunan musim gugur yang menua dari biasanya dikontrol dengan ketat dan sepuluh terjadi pada jaringan
pohon gugur [6 , 7, 8, 9]. yang jauh dari yang terkait dengan flavonoid lainnya [10].
Namun, pada spesies lain tertentu, pigmen merah dapat bertahan Sebaliknya, banyak bukti baru-baru ini, baik empiris maupun
sepanjang masa hidup daun [10], atau mereka diinduksi dan teoretis, menganggap keragaman fungsi antosianin dalam daun
dipertahankan hanya setelah tanaman mengalami stres [11]. sangat mencolok, banyak di antaranya terkait dengan respons
Implikasi fungsional dari pigmen merah ini pada tumbuhan telah stres dan beberapa berpotensi penting bagi kelangsungan hidup
menjadi fokus penelitian signifikan yang dilakukan selama dekade tanaman. Antosianin adalah
terakhir.

2004:5 (2004) Fungsi Antosianin pada Daun 315
bisa dibilang paling serbaguna dari semua pigmen, peran mereka brosia chamissonis), komposit yang tumbuh di lokasi yang terbuka
yang beragam dalam respons stres tanaman yang berasal dari sifat dan cerah di sepanjang pantai California. Tumbuhan ini mengandung
fisikokimia penyerapan cahaya dan kombinasi unik mereka dari thiarubrine A dalam jumlah besar, senyawa pertahanan kuat yang
ikatan reaktivitas biokimia. Kemajuan terbaru dalam pemahaman beracun bagi serangga, bakteri, dan jamur [35].
kami tentang berbagai fungsi ini adalah subjek dari ulasan ini. Thiarubrine A adalah photolabile; bahkan paparan singkat terhadap
cahaya tampak dan/atau radiasi ultraviolet menjadikannya tidak
aktif [36, 37]. Namun, jaringan pada chamissonis A yang
mengandung thiarubrine A terlindung dari cahaya oleh selubung sel
KONSEKUENSI MENJADI MERAH
yang mengandung campuran dua anthocyanin, cyanidin-3- O-
glucoside dan cyanidin-3-O-(6'-O-malonylglucoside) .
Antosianin in vivo menyerap pita gelombang cahaya hijau dan
Antosianin menyerap kuanta yang jika tidak akan menyebabkan
kuning, umumnya antara 500 dan 600 nm [20, 21, 22, 23, 24, 25].
penghancuran thiarubrine A, dan dengan demikian memberikan
Dedaunan tampak merah karena pengurangan cahaya kuning-hijau
kontribusi yang signifikan terhadap gudang senjata pertahanan tanaman.
dari spektrum cahaya yang dipantulkan dari permukaan daun.
Menariknya, jumlah sinar merah yang dipantulkan dari daun merah
Perlindungan peralatan fotosintesis
seringkali berkorelasi buruk dengan kandungan antosianin [20];
morfologi daun dan jumlah serta distribusi klorofil tampaknya Ketika daun menerima lebih banyak energi cahaya daripada
merupakan penentu yang lebih kuat dari pantulan warna merah. yang dapat digunakan dalam fotokimia, mereka menunjukkan
Sifat anthocyanin untuk menyerap cahaya menyediakan mekanisme karakteristik penurunan efisiensi kuantum fotosintesis, yang disebut
untuk beberapa fungsi penting pada daun. fotoinhibisi [38]. Dalam kondisi parah kloroplas menghasilkan
spesies oksigen reaktif, yang berpotensi menghancurkan membran
tilakoid, merusak DNA, dan mendenaturasi protein yang terkait
dengan transpor elektron fotosintesis. Anthocyanin telah ditunjukkan
Herbivora pada banyak spesies tanaman untuk mengurangi frekuensi dan
keparahan photoinhibition, serta mempercepat pemulihan pho
Warna merah daun antosianik telah diusulkan untuk menarik
tosynthetic [23, 39, 40, 41, 42, 43, 44]. Pada red osier dogwood
dan mengusir berbagai spesies hewan.
(Cornus stolonifera), misalnya, paparan cahaya putih yang kuat
Burns dan Dalen [26] mendalilkan bahwa dedaunan musim gugur
selama 30 menit mengurangi efisiensi kuantum fotosintesis sebesar
merah-oranye dari spesies semak Kanada akan menonjolkan buah-
60% pada daun merah, tetapi hampir 100% pada daun acyanic
buahan berwarna hitam yang mencolok bagi burung. Manipulasi
[23]. Ketika tanaman dikembalikan ke kegelapan, daun merah pulih
eksperimental warna buah dan latar belakang dedaunan
ke potensi maksimalnya hanya setelah 80 menit, namun rekan
menegaskan bahwa kontras hitam-merah memang merupakan
asianik mereka belum mencapai kondisi pretreatment bahkan
peningkat yang efektif dari tingkat penghilangan buah oleh penyebar
setelah enam jam.
unggas. Serangga tertentu, di sisi lain, tampaknya lebih suka
menghindari makan daun berpigmen merah. Kutu daun maple
California, misalnya, dengan mudah mengkolonisasi daun maple
Antosianin melindungi daun dari tekanan fluks cahaya
Jepang berwarna kuning-oranye, namun sebagian besar
penghambat pho dengan menyerap kelebihan photon yang
mengabaikan individu berdaun merah [27]. Demikian pula, semut
seharusnya dicegat oleh klorofil b. Meskipun daun merah menyerap
pemotong daun dari hutan tropis Panama menjelajah secara
lebih banyak cahaya hijau secara total, jaringan fotosintesisnya
signifikan lebih sedikit pada daun merah daripada daun hijau [28].
sebenarnya menerima lebih sedikit kuanta daripada daun asianik
Untuk serangga ini dan lainnya, antosianin dapat berfungsi sebagai
karena energi yang diserap oleh vakuola sel tidak dapat ditransfer
sinyal aposematik dari komitmen defensif terhadap herbivora [29].
ke kloroplas [45]. Akibatnya, di bawah lingkungan yang terbatas
Secara alami, pigmen merah mungkin membuat daun tidak enak.
cahaya, efisiensi fotosintesis daun merah seringkali sedikit lebih
Daun yang kaya klorofil serta antosianin cenderung berwarna coklat
rendah daripada daun asianik [4, 22, 45, 46, 47, 48, 49]. Namun, di
atau bahkan hitam, meniru dedaunan mati atau berfungsi untuk
bawah cahaya yang kuat, antosianin berfungsi sebagai filter optik
menyamarkan daun terhadap tanah terbuka dan serasah lantai
yang berguna, mengalihkan kuanta energi tinggi berlebih dari rantai
hutan [30, 31, 32, 33].
transpor elektron fotosintesis yang sudah terisi. Kloroplast yang
Bahkan daun berwarna merah cerah atau kirmizi dapat tampak
disinari dengan cahaya yang terlebih dahulu melewati filter merah
gelap bagi folivora nonmamalia, yang tidak memiliki reseptor cahaya
telah terbukti menghasilkan lebih sedikit radikal superoksida,
merah [5, 34]. Keuntungan yang didapat dari pencegahan herbivora
sehingga mengurangi kecenderungan kerusakan struktural pada
akan mengimbangi biaya metabolisme tanaman yang terkait dengan
sistem foto [25]. Oleh karena itu anthocyanin jelas merupakan
biosintesis antosianin.
suplemen yang berguna untuk mekanisme pendinginan
nonphotochemical lainnya seperti pigmen siklus xanthophyll. Studi
Perlindungan senyawa pertahanan photolabile
terbaru yang melibatkan mutan Ara bidopsis thaliana menunjukkan
Dengan mencegat kuanta berenergi tinggi, vakuola sel bahwa xanthophylls memiliki peran lebih besar dalam perlindungan
antosianik dapat mencegah molekul fotolabil penting dari degradasi tanaman dari penyakit jangka pendek.
oleh lampu hijau. Contoh elegan dari hal ini dijelaskan baru-baru ini
untuk rumput pantai perak (Am
316 Kevin S. Gould 2004:5 (2004)
stres ringan, antosianin dapat menjadi fotoprotektor yang lebih PENANGKAL RADIKAL BEBAS
efektif dalam jangka panjang [50].
Anthocyanin mengurangi beban oksidatif pada daun hanya
Hipotesis photoprotection berpotensi menjelaskan mengapa
dengan menyaring cahaya kuning-hijau, karena sebagian besar
daun banyak pohon gugur menjadi merah di musim gugur. Saat
oksigen reaktif dalam sel tumbuhan berasal dari eksitasi klorofil.
daun menua, nitrogen yang terkait dengan kloroplasnya diserap
Selain itu, antosianin adalah pemulung radikal bebas yang sangat
ke dalam cabang. Anthocyanin akan melindungi degradasi klorofil
baik. Solusi murni mengais hampir semua spesies oksigen reaktif
dari tingkat cahaya yang merusak, sehingga membatasi
dan nitrogen dengan efisiensi hingga empat kali lebih besar
pembentukan oksigen reaktif yang dapat membahayakan proses
daripada askorbat dan ÿ-tokoferol [72, 73, 74]. Bukti eksperimental
resorptif [2, 8, 9, 23, 51, 52]. Konsisten dengan hipotesis ini,
baru-baru ini menunjukkan bahwa potensi antioksidan ini memang
resorpsi nitrogen baru-baru ini terbukti lebih efisien pada tipe liar
dimanfaatkan oleh sel tumbuhan. Pada Arabidopsis, misalnya,
daripada mutan yang kekurangan antosianin dari tiga spesies
cahaya yang kuat dan suhu rendah menyebabkan lebih banyak
berkayu [53].
lipid per oksidasi pada mutan yang kekurangan antosianin daripada
pada tanaman tipe liar [50]. Demikian pula, pada penyinaran
Perlindungan dari radiasi ultraviolet gamma, hanya tanaman Arabidopsis yang mengandung antosianin
dan asam askorbat yang dapat tumbuh dan berbunga secara
Ketertarikan pada keluarga flavonoid telah meningkat dalam normal [75].
beberapa tahun terakhir setelah pengamatan bahwa senyawa ini
bertindak sebagai tabir surya terhadap radiasi UV-B yang Pemeriksaan mikroskopis kulit daun yang terluka telah
berpotensi merusak. Anthocyanin daun umumnya telah disertakan menunjukkan bahwa sel berpigmen merah menghilangkan H2O2
dengan flavonoid lain dalam peran pelindung UV-B ini. Konsisten secara signifikan lebih cepat daripada sel hijau [76]. Namun, tidak
dengan hipotesis ini, antosianin, terutama ketika diasilasi, jelas, apakah pemulungan terjadi terutama oleh tautomer merah
menyerap dengan kuat di daerah UV [54, 55], diinduksi atau antosianin yang ditemukan di dalam vakuola sel, atau oleh
diregulasi dalam jaringan tanaman sebagai respons terhadap tautomer tak berwarna di sitosol. Kedua bentuk tersebut memiliki
iradiasi UV [56, 57, 58, 59, 60], dan mengurangi kerusakan DNA potensi antioksidan yang mengesankan [77, 78, 79]. Dalam model
dalam kultur sel yang diiradiasi UV-B [61, 62, 63]. Lebih jauh lagi, sistem in vitro, tautomer tak berwarna dari cyani din 3-(6-
beberapa mutan Ara bidopsis yang kekurangan antosianin sangat malonyl)glucoside ditemukan mampu memulung hingga 17%
sensitif terhadap UV-B [64], dan varietas Coleus berdaun merah radikal superoksida yang dihasilkan oleh kloroplas yang diradiasi
mempertahankan efisiensi fotosintesis yang lebih tinggi setelah [25]. Mengingat kedekatannya dengan sumber organel oksigen
iradiasi UV daripada varietas berdaun hijau [49]. reaktif, mungkin anthocyanin cy tosolic, daripada yang ada di
Terlepas dari bukti-bukti ini, sekarang ada keyakinan yang vakuola sel, memberikan kontribusi yang lebih besar untuk
berkembang bahwa anthocyanin daun tidak dapat menjadi pertahanan antioksidan.
perhatian utama dengan perlindungan UV. Berbeda dengan Sejauh mana anthocyanin berkontribusi pada gudang
flavonoid yang tidak berwarna, anthocyanin biasanya terletak di antioksidan berat molekul rendah (LMWA) bervariasi di antara
jaringan mesofil internal daripada di epidermis, situs optimal untuk spesies. Pada daun muda Elatostema rugosum yang berwarna
intersepsi UV [33, 65]. merah, tumbuhan tumbuhan bawah dari Selandia Baru, antosianin
Selain itu, kerentanan UV seringkali hanya berkorelasi buruk merupakan komponen fenolik utama dari kumpulan LMWA [78].
dengan kandungan antosianin. Sebagai contoh, mutan Arabidopsis Sebaliknya, morf berdaun merah dan hijau dari pohon tajuk
dengan peningkatan kepekaan terhadap radiasi UV ditemukan Quintinia serrata sama-sama mengandung asam hidroksisinamat
kekurangan flavonoid tertentu, namun mengandung antosianin sebagai LMWA paling pekat [79]. Perbedaan serupa telah
dalam jumlah normal [66]. Demikian pula, tanggapan mutan dilaporkan pada ekotipe Arabidopsis tipe liar [75].
Brassica rapa terhadap pengobatan UV-B tambahan sebagian
besar tidak bergantung pada kadar antosianin pada daun [67]. Dengan demikian tampaknya biosintesis antosianin dapat
Memang, tanaman petunia (Impatiens) berdaun merah dan beras meningkatkan tetapi biasanya bukan prasyarat untuk perlindungan
semuanya telah diamati memiliki kinerja yang jauh lebih buruk dari stres oksidatif.
daripada tanaman berdaun hijau di bawah lingkungan yang
diperkaya UV [68, 69, 70]. Hada dkk. [71] mencatat bahwa PERBAIKAN RESPON STRES
kerusakan DNA setelah perawatan UV yang berkepanjangan
secara substansial lebih besar pada beras berdaun ungu daripada Induksi anthocyanin daun telah terlibat dalam perolehan
pada garis hijau yang hampir isogenik. Untuk memperbaiki DNA toleransi terhadap berbagai jenis stressor lingkungan [11, 80, 81].
yang rusak akibat sinar UV, tanaman menggunakan photolyase, Antho cyanin, misalnya, dikaitkan dengan peningkatan ketahanan
enzim yang menggunakan sinar biru/UV-A untuk memonomerisasi terhadap efek pendinginan dan pembekuan [82, 83, 84, 85, 86],
ulang dimer pirimidin. Anthocyanin dalam beras ungu mencegah terhadap kontaminasi logam berat [87, 88, 89, 90], hingga
fotoaktivasi photolyase dengan menyerap sebagian sinar biru/UV- pengeringan [91 , 92, 93], dan melukai [76, 94, 95]. Tidak jelas
A pada daun. Dengan demikian, setiap keuntungan jangka pendek pada tahap ini apakah sifat amelioratif yang tampak berasal dari
dari penyerapan UV-B oleh anthocyanin akan diimbangi oleh satu atau lebih jenis mekanisme.
kemampuannya untuk menyerap cahaya tampak dan dengan
demikian membatasi laju perbaikan DNA. Chalker-Scott [11, 80] memberikan kasus yang menarik untuk
peran umum anthocyanin sebagai osmoregulator dalam sel peran protektif rhodoxanthin selama aklimatisasi dingin di
tanaman, karena sebagian besar jenis lingkungan suboptimal Cryptomeria japonica. Lingkungan Sel Tumbuhan.
menginduksi stres air, baik secara langsung maupun tidak 2003;26(5):715–723.
langsung. Yang lain berpendapat bahwa sifat photoprotective [96] [14] Cohen MF, Meziane T, Tsuchiya M, Yamasaki H.
atau antiox idant [97] dari anthocyanin adalah yang terpenting. Feeding deterrence Azolla dalam hubungannya dengan de
Terlepas dari mekanismenya, jelas bahwa anthocyanin menawarkan oxyanthocyanin dan komposisi asam lemak. Botani Perairan.
perlindungan multifaset, serbaguna, dan efektif untuk tanaman di 2002;74(2):181–187.
bawah tekanan. Mereka adalah pisau tentara Swiss dari kerajaan [15] Schutt C, Netzly D. Pengaruh apiforol dan apigenini din pada
tumbuhan. pertumbuhan jamur terpilih. J Chem Ecol. 1991;17:1123–
1125.
REFERENSI [16] Stonecipher LL, Hurley PS, Netzley DH. Efek apigeninidin
pada pertumbuhan bakteri terpilih. J Chem Ecol.
[1] Nishio JN. Mengapa tumbuhan tingkat tinggi berwarna hijau? 1993;19:1021–1027.
Evolusi pelengkap pigmen fotosintesis tumbuhan tingkat [17] Shirley BW. Biosintesis flavonoid: fungsi 'baru' untuk jalur
tinggi. Lingkungan Sel Tumbuhan. 2000;23(6):539–548. 'lama'. Tren Tumbuhan Sci. 1996;1 (11):377–382.
[2] Lee DW. Anthocyanin dalam daun: distribusi, phy logeny dan
pengembangan. Di dalam: Gould KS, Lee DW, eds. [18] Alfenito MR, Souer E, Goodman CD, dkk. Pelengkap
Anthocyanin dalam Daun. vol. 37 Kemajuan dalam Riset fungsional sekuestrasi antosianin dalam vakuola oleh
Botani. Amsterdam, Belanda: Aca demic Press; 2002:37– glutathione S-transferases yang sangat berbeda. Sel
53. tanaman. 1998;10(7):1135–1149.
[3] Lee DW, Brammeier S, Smith AP. Keuntungan selektif [19] Matile P. Biokimia musim panas India: fisiologi pewarnaan
anthocyanin dalam pengembangan daun mangga dan kakao. daun musim gugur. Exp Gerontol. 2000;35(2):145–158.
Biotropika. 1987; 19:40–49.
[4] Tuohy JM, Choinski JS. Fotosintesis komparatif dalam [20] Neill SO, Gould KS. Sifat optik daun dalam hubungannya
mengembangkan daun Brachystegia spiciformis Benth. J dengan konsentrasi dan distribusi antosianin. Bisakah J Bot.
Exp Bot. 1990;41:919–923. 1999;77(12):1777–1782.
[5] Juniper BE. Flamboyant flushes: interpretasi ulang warna [21] Woodall G, Dodd I, Stewart G. Membandingkan perkembangan
flush non-hijau pada daun. Dalam: Buku Tahunan Masyarakat daun dalam genus Syzygium. J Exp Bot. 1998;49(318):79–
Dendrologi Internasional. London, Inggris: Masyarakat 87.
Dendrologi Internasional; 1993:49–57. [22] Pietrini F, Massacci A. Perubahan kandungan antosianin daun
[6] Koike T. Pewarnaan musim gugur, kinerja fotosintesis, dan di Zea mays L tumbuh pada suhu rendah: Signifikansi untuk
perkembangan daun pohon gugur berdaun lebar dalam hubungan antara hasil kuantum PS II dan hasil kuantum
hubungannya dengan suksesi hutan. Fisik Pohon. 1990;7(1– nyata asimilasi CO2. Penelitian Fotosintesis, 1998;58(3):213–
4):21–32. 219.
[7] Lee DW. Antosianin pada penuaan daun musim gugur.
Di dalam: Gould KS, Lee DW, eds. Anthocyanin dalam [23] Feild TS, Lee DW, Holbrook NM. Mengapa daun menjadi
Daun. vol. 37 Kemajuan dalam Penelitian Botani. Bendungan merah di musim gugur Peran anthocyanin dalam penuaan
Amsterdam, Belanda: Pers Akademik; 2002:147– 165. daun dogwood osier merah. Fisik Tumbuhan. 2001;127(2):566–
574.
[8] Lee DW, O'Keefe J, Holbrook NM, Feild TS. Dinamika pigmen [24] Gitelson AA, Merzlyak MN, Chivkunova OB. Sifat optis dan
dan penuaan daun musim gugur di hutan gugur New Eng, estimasi nondestruktif dari kandungan thocyanin dalam
AS bagian timur. Pencarian Rekologi. 2003;18(6):677–694. daun tanaman. Fotochem Foto biol. 2001;74(1):38–45.
[9] Schaberg PG, Van den Berg AK, Murakami PF, Shane JB, [25] Neill SO, Gould KS. Anthocyanin dalam daun: ringan pada
Donnelly JR. Faktor-faktor yang mempengaruhi ekspresi tenuator atau antioksidan? Biologi Tumbuhan Fungsional.
merah pada dedaunan musim gugur pohon maple gula. Fisik 2003;30(8):865–873.
Pohon. 2003;23(5):325–333. [26] Luka bakar KC, Dalen JL. Kontras warna dedaunan dan
[10] Gould KS, Markham KR, Smith RH, Goris JJ. Peran variasi warna buah adaptif dalam komunitas tumbuhan yang
fungsional antosianin pada daun Quintinia serrata A. Cunn. tersebar burung. Baik. 2002;96(3):463–469.
J Exp Bot. 2000;51(347):1107–1115. [27] Preferensi inang Furuta K. dan dinamika populasi dalam
[11] Chalker-Scott L. Signifikansi lingkungan dari thocyanin dalam populasi musim gugur kutu daun maple, Periphyllus
respons stres tanaman. Photochem Pho tobiol. 1999;70(1):1– californiensis Shinji (Homoptera, Aphi didae). Jurnal
9. Entomologi Terapan. 1986;102:93– 100.
[12] Stintzing FC, Carle R. Sifat fungsional dari thocyanin dan
betalain pada tanaman, makanan, dan nutrisi manusia. [28] Coley PD, Ajudan TM. Pewarnaan merah daun muda tropis:
Tren Ilmu & Teknologi Pangan. 2004;15(1):19–38. kemungkinan pertahanan antijamur? Trop Ecol. 1989;5:293–
300.
[13] Han Q, Shinohara K, Kakubari Y, Mukai Y. Foto [29] Hamilton WD, Coklat SP. Warna pohon musim gugur
318 Kevin S. Gould 2004:5 (2004)
sebagai sinyal cacat. Proc R Soc Lond B Biol Sci. [45] Gould KS, Vogelmann TC, Han T, Clearwater MJ. Profil
2001;268(1475):1489–1493. fotosintesis pada daun merah dan hijau Quintinia serrata.
[30] Batu SM. Pewarnaan pelindung daun muda di telapak tangan Tumbuhan Fisiol. 2002;116(1):127–133.
Malaysia tertentu. Biotropika. 1979;11:126.
[31] Blanc P. Biologi tanaman tumbuhan bawah tropis [Tesis PhD]. [46] Manetas Y, Petropoulou Y, Psaras GK, Drinia A. Daun merah
´
Paris, Prancis: Universitas Pierre dan Marie Curie (Paris 6); (anthocyanic) Exposed dari Quercus coccifera menampilkan
1989. karakteristik keteduhan. Biologi Tumbuhan Fungsional.
[32] Givnish TJ. Mottling daun: kaitannya dengan bentuk pertumbuhan 2003;30(3):265–270.
dan fenologi daun serta kemungkinan berperan sebagai kamuflase. [47] Barker DH, Seaton GGR, Robinson SA. Fotoproteksi internal
Ekologi Fungsional. 1990;4(4):463–474. dan eksternal dalam mengembangkan daun tanaman CAM
[33] Lee DW, Collins TH. Pengaruh filogenetik dan ontogenetik Cotyledon orbiculata. Lingkungan Sel Tumbuhan.
terhadap distribusi antosianin dan betasianin pada daun 1997;20(5):617–624.
tanaman tropis. Int J Plant Sci. 2001;162(5):1141–1153. [48] Choinski JS Jr, Johnson JM. Perubahan sintesis foto dan
status air daun berkembang Brachystegia spiciformis Benth.
[34] Dominy NJ, Lucas PW, Ramsden LW, Riba Hernandez P, Fisik Pohon. 1993;13(1):17–27.
Stoner KE, Turner IM. Mengapa daun muda berwarna
merah? Baik. 2002;98(1):163–176. [49] Burger J, Edward GE. Efisiensi fotosintesis, dan kerusakan
[35] Halaman JE, Towers GH. Antosianin melindungi fototoksin foto oleh UV dan radiasi tampak, pada varietas coleus daun
thiarubrine yang sensitif terhadap cahaya. Tanaman. merah versus hijau. Fisiol Sel Tumbuhan. 1996;37:395–399.
2002;215 (3):478–484.
[36] Blok E, Halaman JE, Toscano JP, dkk. Fotokimia thiarubrine [50] Harvaux M, Kloppstech K. Fungsi pelindung pigmen karotenoid
A dan 1,2-dithiins lainnya - pembentukan 2,6- dan flavonoid terhadap radiasi tampak berlebih pada suhu
dithiabicyclo[3.1.0]hex-3-enes. Jurnal Masyarakat Kimia dingin diselidiki dalam mutan Arabidopsis npq dan tt .
Amerika. 1996;118(19):4719– 4720. Tanaman. 2001;213(6):953–966.
[37] Halaman JE, Blok E, Menara GHN. Kimia pho cahaya [51] Garcia-Plazaola JI, Hernandez A, Becerril JM. Komposisi
tampak dan fototoksisitas thiarubrine. Pho tochem Photobiol. antioksidan dan pigmen selama penuaan daun musim
1999;70(2):159–165. gugur pada spesies kayu gugur yang berbeda dalam sifat
[38] SP Panjang, Humphries S, Falkowski PG. Photoinhi bit dari ekologisnya. Biologi Tumbuhan. 2003;5(5):557–566.
fotosintesis di alam. Annu Rev Tanaman Physiol Tanaman
Mol Biol. 1994;45:633–662. [52] Hoch WA, Zeldin EL, McCown BH. Signifikansi fisiologis
[39] Gould KS, Kuhn DN, Lee DW, Oberbauer SF. Mengapa daun anthocyanin selama penuaan daun musim gugur. Fisik
terkadang berwarna merah. Alam. 1995;378(6554) :241–242. Pohon. 2001;21(1):1–8.
¨ [53] Hoch WA, Singsaas EL, McCown BH. Perlindungan resorpsi.
[40] Krol M, Gray GR, VM Cepat, Oquist G, Malek L, Huner NPA. Anthocyanin memfasilitasi pemulihan nutrisi di musim gugur
Cekaman suhu rendah dan periode foto mempengaruhi dengan melindungi daun dari tingkat cahaya yang berpotensi
peningkatan toleransi terhadap penghambatan fotoin pada merusak penuaan. Fisik Tumbuhan. 2003;133(3):1296–
semai Pinus banksiana . Bisakah J Bot. 1995;73:1119–1127. 1305.
[54] Markham KR. Teknik Identifikasi Flavonoid.
[41] Dodd I, Critchley C, Woodall G, Stewart G. Pho toinhibition London, Inggris: Academic Press; 1982.
pada daun remaja berwarna berbeda dari spesies Syzygium . [55] Giusti MM, Rodriguez-Saona LE, Wrolstad RE. Absorptivitas
J Exp Bot. 1998;49(325):1437– 1445. molar dan karakteristik warna antosianin berbasis
pelargonidin terasilasi dan non-asilasi.
[42] Smilie RM, Hetherington SE. Photoabatement oleh anthocyanin Kimia Makanan J Agric. 1999;47(11):4631–4637.
melindungi sistem fotosintesis dari tekanan ringan. [56] Alexieva V, Sergiev I, Mapelli S, Karanov E. Efek kekeringan
fotosintesis. 1999;36(3): 451–463. dan radiasi ultraviolet pada penanda pertumbuhan dan stres
pada kacang polong dan gandum. Tanaman Sel Env besi.
[43] Pietrini F, Ianelli MA, Massacci A. Akumulasi antosianin pada 2001;24(12):1337–1344.
permukaan daun jagung yang diterangi meningkatkan [57] Brandt K, Giannini A, Lercari B. Tanggapan fotomorfogenik
perlindungan dari risiko penghambatan foto pada suhu terhadap radiasi UV.3. Studi perbandingan efek UVB
rendah, tanpa batasan fotosintesis lebih lanjut. Lingkungan terhadap akumulasi antosianin dan flavonoid pada tomat
Sel Tumbuhan. 2002;25(10): 1251–1259. tipe liar dan mutan aurea (Ly copersicon esculentum Mill.).
Photochem Photobiol. 1995;62:1081–1087.
[44] Manetas Y, Drinia A, Petropoulou Y. Kandungan antosianin
yang tinggi pada daun muda berkorelasi dengan kumpulan [58] Mendez M, Gwynn-Jones D, Manetas Y. Peningkatan radiasi
komponen siklus xanthophyll yang rendah dan risiko UV-B di bawah kondisi lapangan meningkatkan thocyanin
photoinhibition yang rendah. fotosintesis ika. 2002;40(3):349– dan mengurangi risiko photoinhibition tetapi tidak
354. mempengaruhi pertumbuhan tanaman karnivora
Pinguicula vulgaris. Phytol Baru. 1999;144(2):275– 1997;2(4):152–159.

282. [74] Wang H, Cao G, Sebelumnya RL. Kapasitas penyerapan
[59] Reddy VS, Goud KV, Sharma R, Reddy AR. radikal oksigen antosianin. Kimia Makanan J Agric.
Produksi antosianin yang responsif terhadap ultraviolet-B 1997;45(2):304–309.
dalam kultivar padi dikaitkan dengan fase spesifik biosintesis [75] Nagata T, Todoriki S, Masumizu T, dkk. Tingkat spesies
amonia lyase fenilalanin. Fisik Tumbuhan. 1994;105(4):1059– oksigen aktif dikendalikan oleh asam askorbat dan antosianin
1066. di Arabidopsis. Kimia Makanan J Agric. 2003;51(10):2992–
[60] Singh A, Selvi M, Sharma R. Sunlight menginduksi 2999.
pigmentasi thocyanin pada jaringan vegetatif jagung. [76] Gould KS, McKelvie J, Markham KR. Apakah antho cyanin
J Exp Bot. 1999;50(339):1619–1625. berfungsi sebagai antioksidan pada daun? Pencitraan H2O2
[61] Takahashi A, Takeda K, Ohnishi T. Antosianin yang diinduksi pada daun merah dan hijau setelah mekanik di juri.
cahaya mengurangi tingkat kerusakan DNA dalam sel Lingkungan Sel Tumbuhan. 2002;25(10):1261–1269.
Centaurea cyanus yang diiradiasi UV dalam kultur. [77] Lapidot T, Harel S, Akiri B, Granit R, Kanner J. bentuk
Fisiol Sel Tumbuhan. 1991;32:541–547. tergantung pH dari antosianin anggur merah sebagai
[62] Kootstra A. Perlindungan dari kerusakan DNA akibat UV-B antioksidan. Kimia Makanan J Agric. 1999;47(1):67–70.
oleh flavonoid. Tanam Mol Biol. 1994;26(2): 771–774. [78] Neill SO, Gould KS, Kilmartin PA, Mitchell KA, Markham KR.
Aktivitas antioksidan daun merah versus hijau di Elatosma
[63] Stapleton AE, Walbot V. Flavonoid dapat melindungi DNA
rugosum. Tanaman Sel Env besi. 2002;25(4):539–547.
jagung dari induksi kerusakan radiasi ultraviolet. Fisik
Tumbuhan. 1994;105(3):881–889.
[79] Neill SO, Gould KS, Kilmartin PA, Mitchell KA, Markham KR.
[64] Li J, Ou-Lee TM, Raba R, Amundson RG, Last RL.
Kapasitas antioksidan daun hijau dan sianik pada spesies
Mutan flavonoid Arabidopsis sangat sensitif terhadap radiasi
matahari, Quintinia serrata.
UV-B. Sel tanaman. 1993;5(2):171–179.
Biologi Tumbuhan Fungsional. 2002;29(12):1437–1443.
[65] Gould KS, Quinn BD. Apakah antosianin melindungi daun
[80] Chalker-Scott L. Apakah anthocyanin berfungsi sebagai os
spesies asli Selandia Baru dari UV-B?
moregulator dalam jaringan daun? Di dalam: Gould KS, Lee
Jurnal Botani Selandia Baru. 1999;37(1):175–178.
DW, eds. Anthocyanin dalam Daun. Amsterdam: Aca demic
[66] Lois R, Buchanan BB. Sensitivitas yang parah terhadap
Press; 2002:103–127. Kemajuan dalam Penelitian Botani;
radiasi ultra violet pada mutan Arabidopsis yang kekurangan
Vol. 37.
akumulasi flavonoid. II. Mekanisme resistensi UV di
[81] Tutup DC, Beadle CL. Ekofisiologi antosianin daun. Bot Rev.
Arabidopsis. Tanaman. 1994;194:504–509.
2003;69(2):149–161.
[67] Klaper R, Frankel S, Berenbaum MR. Kandungan antosianin
dan sensitivitas UVB pada Brassica rapa. Pho tochem [82] Christie PJ, Alfenito MR, Walbot V. Dampak tekanan suhu
Photobiol. 1996;63(6):811–813. rendah pada jalur fenilpropanoid dan antosianin umum:
[68] Ryan KG, Markham KR, Bloor SJ, Bradley JM, Mitchell KA, Peningkatan kelimpahan transkrip dan pigmentasi antosianin
Jordan BR. Radiasi UVB menginduksi peningkatan rasio pada bibit jagung. Tanaman. 1994;194:541–549.
quercetin: kaempferol pada galur Petunia tipe liar dan
transgenik. Fotochem Foto biol. 1998;68(3):323–330. [83] McKown R, Kuroki G, Warren G. Tanggapan dingin mutan
Arabidopsis terganggu dalam toleransi beku.
[69] Dixon P, Weinig C, Schmitt J. Kerentanan terhadap kerusakan J Exp Bot. 1996;47(305):1919–1925.
UV pada Impatiens capensis (Balsaminaceae): pengujian [84] Nozzolillo C, Isabelle P, Andersen OM, Abou-Zaid M.
biaya peluang untuk penghindaran naungan dan diferensiasi Antosianin dari bibit pinus jack (Pinus bankiana) . Bisakah
populasi. Am J Bot. 2001;88(8): 1401–1408. J Bot. 2002;80(7):796–801.
[85] Oberbauer SF, Starr G. Peran anthocyanin untuk fotosintesis
[70] Maekawa M, Sato T, Kumagai T, Noda K. Tanggapan pepohonan Arktik Alaska selama pencairan salju. Di dalam:
diferensial terhadap iradiasi UV-B dari tiga garis isogenik Gould KS, Lee DW, eds. Anthocyanin dalam Daun. vol. 37
dekat yang membawa gen daun ungu berbeda untuk Kemajuan dalam Penelitian Botani.
akumulasi anto sianin dalam beras (Oryza sativa L.). Ilmu Amsterdam: Pers Akademik; 2002:129–145.
Pembiakan. 2001;51:27–32. [86] Solecka D, Kacperska A. Defisiensi Phenylpropanoid
[71] Hada H, Hidema J, Maekawa M, Kumagai T. Jumlah mempengaruhi proses aklimatisasi tanaman menjadi dingin.
anthocyanin dan senyawa penyerap UV yang lebih tinggi Tanaman Phys iol. 2003;119(2):253–262.
secara efektif menurunkan photorepair CPD pada beras [87] Hale KL, McGrath SP, Lombi E, dkk. Sekuestrasi molibdenum
ungu (Oryza sativa L.). Lingkungan Sel Tumbuhan. pada spesies Brassica . Peran untuk antho cyanin? Fisik
2003;26(10):1691–1701. Tumbuhan. 2001;126(4):1391–1402.
[72] Bors W, Michel C, Saran M. Antioksidan flavonoid: konstanta [88] Hale KL, Tufan HA, Pickering IJ, dkk. Anthocyanin
laju untuk reaksi dengan radikal oksigen. memfasilitasi akumulasi tungsten di Brassica. Tumbuhan
Metode dalam Enzimologi. 1994;234:420–429. Fisiol. 2002;116(3):351–358.
[73] Beras-Evans CA, Miller NJ, Paganga G. Sifat antioksidan [89] Krupa Z, Baranowska M, Orzol D. Dapatkah antosianin
dari senyawa fenolik. Tren Tumbuhan Sci. dianggap sebagai indikator stres logam berat di
320 Kevin S. Gould 2004:5 (2004)
tumbuhan tingkat tinggi? Acta Physiol Plantarum. 1996;18:147–

151.
[90] Marrs KA, Ekspresi Walbot V. dan splicing RNA dari gen jagung
glutathione S-transferase Bronze2 diatur oleh kadmium dan
tekanan lainnya. Fisik Tumbuhan. 1997;113(1):93–102.
[91] Farrant JM. Perbandingan mekanisme toleransi kation

pengeringan di antara tiga spesies tanaman kebangkitan
angiosperma. Ekologi Tumbuhan. 2000;151(1):29–39.
[92] Farrant JM, Vander Willigen C, Loffell DA, Bartsch S, Whittaker
A. Investigasi peran cahaya selama pengeringan tiga tumbuhan
kebangkitan angiosperma. Lingkungan Sel Tumbuhan.
2003;26(8):1275–1286.
[93] Sherwin HW, Farrant JM. Mekanisme perlindungan terhadap
cahaya berlebih pada tumbuhan kebangkitan Craterostigma
wilmsii dan Xerophyta viscose. Peraturan Tumbuh Tanaman.
1998;24(3):203–210.
˜ ´
[94] Ferreres F, Gil MI, Castaner M, Tom as-Barber´ an FA.
Metabolit fenolik dalam selada berpigmen merah (Lac tuca
sativa). Perubahan dengan pemrosesan minimal dan
penyimpanan dingin. Kimia Makanan J Agric. 1997;45(11):4249–
4254.
[95] Tamari G, Borochov A, Atzorn R, Weiss D. Methyl jasmonate
menginduksi pigmentasi dan ekspresi gen flavonoid di petunia
corolla: Kemungkinan peran dalam respon luka. Tumbuhan
Fisiol. 1995;94(1):45–50.
[96] Steyn WJ, Wand SJE, Holcroft DM, Jacobs G.
Anthocyanin dalam jaringan vegetatif: fungsi terpadu yang
diusulkan dalam photoprotection. Phytol Baru. 2002;155(3):349–
361.
[97] Gould KS, Neill SO, Vogelmann TC. Penjelasan terpadu untuk
anthocyanin dalam daun? Di dalam: Gould KS, Lee DW, eds.
Anthocyanin dalam Daun. vol. 37 Kemajuan dalam Penelitian
Botani. Amsterdam: Pers Akademik; 2002:167–192.
ÿ Email: k.gould@auckland.ac.nz
Faks: +64 9 3737417; Telp: +64 9 3737599
MENGULAS ARTIKEL
Mekanisme Molekuler Dibalik Kemopreventif

Efek Antosianidin
De-Xing Hou,1ÿ Makoto Fujii,1 Norihiko Terahara,2 dan Makoto Yoshimoto3
1Departemen Sains dan Teknologi Biokimia, Fakultas Pertanian, Universitas Kagoshima,

Korimoto 21-1-24, Kagoshima 890-0065, Jepang
2Departemen Ilmu Pangan untuk Kesehatan, Fakultas Kesehatan dan Gizi, Universitas Minami-Kyushu,
5-1-2 Kirishima, Miyazaki 880-0032, Jepang
3Departemen Penelitian Pertanian Dataran Tinggi, Pusat Penelitian Pertanian Nasional Kyushu Okinawa
Wilayah, Miyazaki, Miyakonojo 885-0091, Jepang
Anthocyanin adalah flavonoid berbasis cincin polifenol, dan tersebar luas dalam buah dan sayuran berwarna merah-biru. Investigasi
epidemiologis dan percobaan hewan telah menunjukkan bahwa antosianin dapat berkontribusi pada kemoprevensi kanker. Studi tentang
mekanisme tersebut telah dilakukan baru-baru ini pada tingkat molekuler. Ulasan ini merangkum basis molekuler terkini untuk antosianidin
pada beberapa langkah kunci yang terlibat dalam kemoprevensi kanker: (i) penghambatan antosianidin dalam transformasi sel melalui
penargetan jalur protein kinase teraktivasi mitogen (MAPK) dan faktor protein aktivator 1 (AP-1); (ii) penekanan antosianidin dalam peradangan
dan karsinogenesis melalui penargetan jalur faktor nuklir kappa B (NF-ÿB) dan gen siklooksigenase 2 (COX-2) ; (iii) induksi apoptosis sel
kanker oleh antosianidin melalui spesies oksigen reaktif (ROS) / c-Jun NH2-terminal kinase (JNK) - aktivasi caspase yang dimediasi. Data ini
memberikan pandangan molekuler pertama tentang antosianidin yang berkontribusi terhadap kemoprevensi kanker.
PENGANTAR penyakit jantung. Studi terbaru menunjukkan bahwa anthocyanin

memiliki aktivitas radikal bebas dan antioksidan yang kuat [7, 8, 9,
Anthocyanin adalah senyawa polifenol alami yang memberi
10, 11, 12, 13], dan menunjukkan efek penghambatan pada
warna intens pada banyak buah dan sayuran seperti beri, anggur
pertumbuhan beberapa sel kanker [14, 15, 16, 17, 18]. Eksperimen
merah, ubi ungu, dan kubis merah [1, 2]. Berbeda dengan flavonoid
pada hewan menunjukkan bahwa asupan oral anthocyanin dari
lainnya, anthocyanin membawa muatan positif dalam struktur
ubi jalar ungu (Ipomoea batatas L.) dan kol merah (Brassica
cincin pusat dan dengan demikian merupakan kation. Pada
oleracea L.) menekan cinogenesis usus besar tikus yang diinduksi
tumbuhan, mereka hadir secara eksklusif sebagai senyawa
oleh 1, 2-dimethylhydrazine dan 2-amino-1-methyl-6 -phenylimidazo-
glikosidik. Jumlah dan sifat gugus gula terlampir yang berbeda
[4,5-b] piridin [19].
bertanggung jawab atas tingginya jumlah antosianin, lebih dari 500
Selain itu, antosianin dapat langsung diserap dan didistribusikan
senyawa [3]. Aglikon (bernama antosianidin) adalah struktur cincin ke darah pada manusia dan tikus setelah konsumsi antosianin diet
polifenol berbasis difenilpropana, dan terbatas pada beberapa
[18, 19, 20, 21, 22, 23, 24]. Fakta-fakta ini menunjukkan bahwa
varian struktur termasuk delphinidin, cyanidin, petunidin,
anthocyanin mungkin berperan dalam kemoprevensi kanker.
pelargonidin, peonidin, dan malvidin (Gambar 1), yang mewakili Dengan demikian, mekanisme di balik efek kemopreventif
aglikon dari sebagian besar antosianin pada tanaman. .
antosianin perlu dipertimbangkan pada tingkat molekuler.
Berdasarkan data komposisi makanan, kami mengonsumsi ANTIKARSINOGENESIS MELALUI PENARGETAN

antosianin dalam jumlah yang cukup besar dari tanaman, buah- JALUR MAPK DAN FAKTOR AP-1
buahan, dan pola makan nabati [4] meskipun kisarannya dari
beberapa miligram hingga beberapa ratus miligram, tergantung AP-1 adalah faktor transkripsi dan telah terbukti memainkan
pada kebiasaan nutrisinya. Peningkatan asupan anthocyanin peran penting dalam mempromosikan karsinogenesis [25, 26].
sekarang meningkat karena ekstrak dengan kandungan thocyanin Pada garis sel epidermal tikus JB6 (+), promotor tumor seperti 12-
yang lebih tinggi dari bilberry atau elderberry tersedia secara O-tetradecanoylphorbol-13-asetat (TPA), faktor pertumbuhan
komersial. Investigasi epidemiologi telah menunjukkan bahwa epidermal (EGF), dan tumor necrosis factor (TNF) alpha dapat
konsumsi moderat anthocyanin melalui asupan produk seperti menginduksi aktivitas AP-1 dan transformasi neoplastik dengan
anggur merah [5] atau ekstrak bil berry [6] dikaitkan dengan risiko mengaktifkan MAPK termasuk extracel lular signal-regulated
penyakit jantung koroner yang lebih rendah. kinase (ERK), JNK, atau p38 kinase

322 De-Xing Hou dkk 2004:5 (2004)
R1 ANTI-INFLAMASI MELALUI PENARGETAN NF-ÿB

3 JALUR DAN GEN COX-2
OH
2 Cyclooxygenase (COX) adalah enzim pembatas laju untuk
4
8 +1 B sintesis eikosanoid dienoat seperti prostaglandin (PG) E2.
HAI
KE 7 9 2 COX ada dalam tiga isoform [31, 32]. COX-1 diekspresikan
1 5 R2
secara konstitutif dalam banyak jenis sel dan bertanggung
C 6
SEBUAH
3
jawab untuk produksi PG dalam kondisi fisiologis. COX-3
6
10
adalah varian COX-1 dan terutama diekspresikan dalam
OH korteks serebral. Obat analgesik/antipiretik seperti
5 4
acetaminophen, phenacetin, antipyrine, dan dipyrone secara
OH
selektif dapat menghambat enzim ini. Dengan demikian,
Delphinidin, R1 = R2 = OH Pelargonidin, R1 = R2 = H penghambatan COX-3 bisa mewakili mekanisme sentral utama
Sianidin, R1 = OH,R2 = H Peonidin, R1 = OCH3, R2 = H dimana obat ini mengurangi rasa sakit dan mungkin demam
Sial, R1 = R2 = OCH3 Petunidin, R1 = OCH3, R2 = OH [31]. COX-2 diinduksi oleh rangsangan proinflamasi, termasuk
mitogen, sitokin, dan bakteri lipopolysac charide (LPS) dalam
Gambar 1. Struktur kimia dasar dari din antosiani sel in vitro dan di tempat yang meradang in vivo [33]. Data
utama. menunjukkan bahwa COX-2 terlibat dalam banyak proses
inflamasi dan diinduksi pada berbagai karsinoma, menunjukkan
bahwa COX-2 memainkan peran kunci dalam tumorigenesis
[34]. Menariknya, beberapa antioksidan dengan efek
pencegahan kemo menghambat ekspresi COX-2 dengan
[27, 28]. Delphinidin, cyanidin, dan petunidin telah terbukti mengganggu mekanisme pensinyalan yang mengatur gen
menghambat aktivitas transkripsi AP-1 yang diinduksi TPA COX-2 [35]. Wang et al [36] menemukan bahwa antho cyanins
dan transformasi sel dalam sel JB6 [29]. Studi aktivitas struktur dan aglikonnya, cyanidin, dari ceri asam dapat menghambat
menunjukkan bahwa struktur orto-dihidroksifenil pada cincin-B aktivitas COX-1 dan COX-2. Seeram et al [37] menemukan
antosianidin tampaknya penting untuk aksi penghambatan bahwa cyanidin menunjukkan penghambatan superior aktivitas
karena pelargonidin, peonidin, dan malvidin, yang tidak siklooksigenase in vitro. Di laboratorium kami, kami
memiliki struktur orto-dihidroksifenil, gagal menunjukkan efek menggunakan garis sel makrofag tikus RAW264 untuk
penghambatan pada kedua aktivitas AP1. dan transformasi mendemonstrasikan mekanisme molekuler anthocyanin dalam
sel. Hasil dari analisis transduksi sinyal menunjukkan bahwa penghambatan gen COX-2 . Kami menemukan bahwa ekstrak
delphinidin memblokir fosforilasi ERK pada waktu awal dan thocyanin dari bilberry atau delphinidin murni menghambat
fosforilasi JNK pada waktu selanjutnya, tetapi tidak pada ekspresi COX-2 yang diinduksi LPS pada tingkat protein dan
fosforilasi p38 kapan saja [29]. Selain itu, delphinidin memblokir transkripsi. Studi pada jalur sinyal menunjukkan bahwa
fosforilasi MAPK/ERK kinase (MEK, ERK ki nase), SAPK/ERK delphinidin setidaknya memblokir degradasi IÿB yang diinduksi
kinase (SEK, JNK kinase), dan c-Jun (target fosforilasi ERK LPS dan kemudian menekan aktivasi NF-ÿB dan ekspresi gen
dan JNK). Data menunjukkan bahwa penghambatan aktivitas COX-2 (Hou et al, data tidak dipublikasikan). Data ini
AP-1 yang diinduksi TPA dan transformasi sel oleh delphinidin menunjukkan bahwa penyumbatan jalur pensinyalan NF-ÿB
melibatkan penyumbatan kaskade pensinyalan ERK dan JNK terlibat dalam penghambatan ekspresi gen COX-2 oleh
(Gambar 2). antosianin (Gambar 2).
Selain itu, penghambatan yang lebih besar diamati pada PROGRESI ANTITUMOR MELALUI
kombinasi superoksida dismutase (SOD) dengan anthocyani APOPTOSIS OKSIDATIF/JNK-MEDIASI
dins yang memiliki struktur orto-dihidroksifenil pada cincin-B.
Analisis model multiplikatif menunjukkan bahwa penghambatan Apoptosis telah dilaporkan memainkan peran penting
yang lebih besar antara SOD dan delphinidin ini bersifat dalam eliminasi sel yang rusak parah atau sel tumor oleh agen
sinergis, bukan aditif [29]. Dengan demikian, efek kemopreventif [38, 39]. Sel-sel yang memiliki apoptosis yang
penghambatan anthocyanidins pada aktivasi AP-1 dan belum hilang biasanya menunjukkan kondensasi kromatin dan
transformasi sel akan sebagian disebabkan oleh aktivitas fragmentasi DNA [40]. Mereka dengan cepat dikenali oleh
pemulungan yang kuat untuk radikal superoksida dan sebagian makrofag sebelum lisis sel, dan kemudian dapat dihilangkan
karena penghambatan MAPK. SOD telah terbukti secara tanpa menyebabkan peradangan [38, 41].
selektif menghambat aktivasi protein kinase Epsilon yang Oleh karena itu, agen penginduksi apoptosis diharapkan
diinduksi TPA dan untuk mencegah aktivasi JNK2 selanjutnya menjadi obat antikanker yang ideal dimana garis sel leukemia
sebagai respons terhadap TPA, sehingga menunda aktivasi promyelocytic manusia (HL-60) menyediakan model yang
AP-1 dan menghambat promosi tumor kulit tikus [30]. Dengan valid untuk menguji senyawa antileukemia atau antitumoral umum [42].
demikian, jalur pensinyalan yang diblokir oleh delphinidin atau Delphinidin, cyanidin, dan petunidin menginduksi apoptosis
SOD mungkin berbeda sebagian walaupun keduanya dianggap sel HL-60 yang terdeteksi oleh perubahan morfologis dan oleh
penting dalam aktivitas pencegahan kanker antosianidin. fragmentasi DNA, sedangkan pelargonidin, peonidin,
2004:5 (2004) Pandangan Molekuler Kemoprevensi Kanker oleh Anthocyanidins 323
Antosianidin
TPA LPS
ROS ROS degradasi Iÿ-B
JNK/ERK JNK NF-ÿB
AP-1 Caspase COX-2
Transformasi sel Apoptosis Peradangan
Antikarsinogenesis Perkembangan antitumor Anti peradangan (sel

(sel JB6 tikus) (sel HL-60 manusia) mouse RAW264)
Gambar 2. Pandangan molekuler skematik kemoprevensi kanker oleh anthocyanidins. Anthocyanidins dapat berkontribusi
pada kemoprevensi kanker melalui penargetan tiga jalur transduksi sinyal yang berbeda dan gen hilir. Singkatan: AP-1,
aktivator protein-1; ERK, kinase yang diatur sinyal ekstraseluler; JNK, c-Jun NH2-terminal kinase; LPS, lipopolisakarida; NF-
ÿB, faktor nuklir ÿB; ROS, spesies oksigen reaktif; TPA, 12-O-tetradecanoylphorbol-13-asetat.
dan malvidin tidak menunjukkan induksi apoptosis [43]. cyanin berasal dari anthocyanidins karena anthocyanidins
Glikosida antosianidin (anthocyanin) yang diekstraksi dari lebih mudah dibuat daripada anthocyanin. Dengan demikian,
bilberry seperti glikosida delphinidin dan glikosida cyanidin belum diketahui apakah anthocyanin yang terjadi secara alami
juga menginduksi apoptosis pada sel HL-60 [44]. juga akan mengaktifkan jalur molekuler ini. Hasil akumulasi
Studi struktur-aktivitas menunjukkan bahwa potensi induksi pada studi struktur-aktivitas telah menunjukkan bahwa aktivitas
apoptosis antosianidin dikaitkan dengan jumlah gugus hidroksil biologis thocyanin tampaknya meningkat dengan penurunan
pada cincin-B, dan struktur orto-dihidroksifenil pada cincin-B jumlah unit gula dan/atau dengan peningkatan jumlah gugus
tampaknya penting untuk aksi apoptosis [43]. Patut dicatat hidroksil pada aglikonnya [7]. Misalnya, aktivitas antioksidan
bahwa antosianidin meningkatkan kadar hidrogen peroksida dan aktivitas penghambatan siklooksigenase glikosida
dalam sel HL-60 dengan hubungan struktur-aktivitas yang cyanidin meningkat dengan penurunan jumlah unit gula.
bergantung pada jumlah gugus hidroksil pada cincin-B [43] Cyanidin-rutinose menunjukkan aktivitas yang lebih baik
dan muncul dalam urutan delphinidin > cyanidin, petunidin > daripada cyanidin-glucosylrutinose, dan cyanidin agly cone
pelargonidin, peonidin, dan malvidin. menunjukkan aktivitas terbaik pada konsentrasi yang jauh
lebih rendah [37]. Di laboratorium kami, kami menemukan
Analisis mekanistik menunjukkan bahwa induksi apoptosis bahwa aglikon dengan struktur orto-dihidroksifenil pada cincin-
oleh delphinidin mungkin melibatkan jalur caspase yang B, seperti delphinidin dan cyanidin [29, 43] dan glikosidanya
dimediasi oleh oksidasi/JNK. Perlakuan Delphinidin (Hou et al, data tidak dipublikasikan), memiliki aktivitas
meningkatkan kadar ROS intraseluler, yang mungkin antikarsinogenesis, anti- peradangan, dan apoptosis dalam
merupakan sensor untuk mengaktifkan JNK. Bersamaan duksi. Struktur orto-dihidroksifenil pada cincin B tampak
dengan apoptosis, aktivasi jalur JNK seperti fosforilasi JNK, penting untuk aksi ini, dan aktivitas aglikon seperti delphinidin
ekspresi gen c-jun , dan aktivasi caspase-3 diamati pada sel dan cyanidin lebih kuat daripada aktivitas glikosidanya.
yang diobati dengan delphinidin [43]. Antioksidan seperti N-
asetil-L-sistein (NAC) dan katalase secara efektif memblokir
fosforilasi JNK yang diinduksi delphinidin, aktivasi cas pase 3,
dan fragmentasi DNA [43]. Dengan demikian, delphinidin KESIMPULAN
dapat memicu program kematian apoptosis dalam sel HL-60
melalui kaskade pensinyalan JNK yang dimediasi stres Mekanisme molekuler antikarsinogenesis, antiinflamasi,
oksidatif (Gambar 2). Sangat menarik bahwa anthocyanidins dan induksi apoptosis sel ganas oleh antosianidin telah
menghasilkan ROS, menunjukkan aktivitas pro-oksidan, untuk dibuktikan pada tingkat molekuler. Data ini memberikan
menginduksi apoptosis pada sel HL-60, bertentangan dengan pandangan molekuler pertama dari efek kemopreventif
aktivitas antioksidan anthocyanidins dalam penghambatan anthocyanidins. Berdasarkan banyak gen yang mungkin
transformasi sel yang diinduksi TPA pada sel JB6 kulit tikus terkait dengan kemoprevensi kanker, analisis gen genome-
[29]. wide dengan menggunakan teknologi microarray akan
Perlu dicatat bahwa anthocyanidins adalah kelemahan diperlukan untuk mendapatkan gambaran menyeluruh tentang
dari anthocyanin alami. Sebagian besar hasil molekuler pada mekanisme molekuler kemoprevensi kanker oleh thocyanidins.
aktivitas biologis antho
324 De-Xing Hou dkk 2004:5 (2004)
PENGAKUAN [16] Meiers S, Kemeny M, Weyand U, Gastpar R, von Angerer

E, Marko D. Anthocyanidins cyanidin dan delphinidin
Pekerjaan ini sebagian didukung oleh Kerjasama Teknologi adalah penghambat kuat reseptor faktor pertumbuhan epi
Inovatif dan Riset Lanjutan di Area Evolusional (CITY AREA). dermal. Kimia Makanan J Agric. 2001;49(2):958–962.
[17] Bomser J, Madhavi DL, Singletary K, Smith MA. Aktivitas

REFERENSI antikanker in vitro ekstrak buah dari spesies Vac cinium.
Planta Med. 1996;62(3):212–216.
[1] Harborne JB, Grayer J. Antosianin. Dalam: Harborne JB, [18] Bomser JA, Singletary KW, Wallig MA, Smith MA.
ed. Flavonoid. London: Chapman dan Hall; 1988:1–20. Penghambatan promosi tumor yang diinduksi TPA pada
epidermis tikus CD 1 oleh fraksi polifenol dari biji anggur.
[2] Mazza G. Antosianin dalam anggur dan produk anggur. Surat Kanker. 1999;135(2):151–157.
Crit Rev Food Sci Nutr. 1995;35(4):341–371. [19] Hagiwara A, Yoshino H, Ichihara T, dkk. Pencegahan
[3] Harborne JB, Baxter H. Buku Pegangan Flavonoid Alami. dengan anthocyanin makanan alami, warna ubi jalar ungu
Vol 2; Chichester: John Wiley & Sons; 1999. dan warna kubis merah, 2-amino-1-methyl 6-
phenylimidazo[4,5-b] pyridine (PhIP)-associated colorectal
[4] Kuhnau J. Flavonoid. Kelas komponen makanan semi- carcinogenesis pada tikus dimulai dengan 1,2-
esensial: perannya dalam nutrisi manusia. dimethylhydrazine . J Toksikol Sci. 2002;27(1):57–68.
Diet Nutr Dunia Rev. 1976; 24:117–191. [20] Tsuda T, Horio F, Osawa T. Penyerapan dan metabolisme
[5] Renaud S, de Lorgeril M. Anggur, alkohol, trombosit, dan cyanidin 3-O-beta-D-glucoside pada tikus. FEB Lett.
paradoks Prancis untuk penyakit jantung koroner. 1999;449(2-3):179–182.
Lanset. 1992;339(8808):1523–1526. [21] Miyazawa T, Nakagawa K, Kudo M, Muraishi K, Someya K.
[6] Muth ER, Laurent JM, Jasper P. Efek suplementasi nutrisi Penyerapan usus langsung anthocyanin buah merah,
bil berry pada ketajaman visual malam hari dan sensitivitas cyanidin-3-glucoside dan cyanidin 3,5-diglucoside, pada
kontras. Altern Med Rev. 2000;5(2):164–173. tikus dan manusia. Kimia Makanan J Agric. 1999;47(3):1083–
1091.
[7] Anda DX. Mekanisme potensial kemoprevensi kanker oleh [22] Matsumoto H, Inaba H, Kishi M, Tominaga S, Hi rayama
antosianin. Curr Mol Med. 2003;3(2): 149–159. M, Tsuda T. Delphini din 3-rutinoside dan cyanidin 3-
rutinoside yang diberikan secara oral langsung diserap
[8] Wang H, Cao G, Sebelumnya RL. Kapasitas penyerapan pada tikus dan manusia dan muncul dalam darah sebagai
radikal oksigen antosianin. Kimia Makanan J Agric. utuh formulir. Kimia Makanan J Agric. 2001;49(3):1546–
1997;45(2):304–309. 1551.
[9] Wang H, Nair MG, GM Strasburg, dkk. Aktivitas antioksidan [23] Suda I, Oki T, Masuda M, dkk. Penyerapan langsung
dan antiinflamasi antosianin dan aglikonnya, cyanidin, dari antosianin terasilasi pada ubi jalar ungu pada tikus. Kimia
ceri asam. J Nat Prod. 1999;62(2):294–296. Makanan J Agric. 2002;50(6):1672–1676.
[24] Cao G, Muccitelli HU, Sanchez-Moreno C, Sebelumnya RL.
[10] Noda Y, Kaneyuki T, Mori A, Packer L. Aktivitas antioksidan Antosianin diserap dalam bentuk terglikasi pada wanita
ekstrak buah delima dan anto cyanidinnya: delphinidin, lanjut usia: studi farmakokinetik. Am J Clin Nutr.
cyanidin, dan pelargonidin. 2001;73(5):920–926.
Kimia Makanan J Agric. 2002;50(1):166–171. [25] Hsu TC, MR Muda, Cmarik J, Colburn NH.
[11] Tsuda T, Horio F, Osawa T. Peran antosianin sebagai Aktivator protein 1 (AP-1)- dan peristiwa transkripsi yang
antioksidan di bawah tekanan oksidatif pada tikus. Faktor bergantung pada faktor nuklir kappaB (NF-kappaB) dalam
biologis. 2000;13(1-4):133–139. karsinogenesis. Free Radic Biol Med. 2000;28(9):1338–
[12] Tsuda T, Shiga K, Ohshima K, Kawakishi S, Osawa T. 1348.
Penghambatan peroksidasi lipid dan efek pemulungan [26] Angel P, Karin M. Peran Jun, Fos dan kompleks AP 1
radikal oksigen aktif dari pigmen antosianin diisolasi dari dalam proliferasi dan transformasi sel.
Phaseolus vulgaris L. Biochem Pharmacol. 1996;52(7):1033– Biochim Biophys Acta. 1991;1072(2-3):129–157.
1039. [27] Dong Z, Birrer MJ, Watts RG, Matrisian LM, Col membakar
[13] Tsuda T, Horio F, Osawa T. Diet cyanidin 3-O beta-D- NH. Pemblokiran aktivitas AP 1 yang diinduksi promotor
glucoside meningkatkan ketahanan oksidasi ex vivo tumor menghambat transformasi yang diinduksi dalam sel
serum pada tikus. Lemak. 1998;33(6):583–588. epidermis tikus JB6. Proc Natl Acad Sci USA.
[14] Kamei H, Kojima T, Hasegawa M, dkk. Penekanan 1994;91(2):609–613.
pertumbuhan sel tumor oleh anthocyanin in vitro. Bisa cer [28] Huang C, Ma WY, MR Muda, Colburn N, Dong Z.
Invest. 1995;13(6):590–594. Kekurangan protein kinase yang diaktifkan-mitogen
[15] Nagase H, Sasaki K, Kito H, Haga A, Sato T. Dalam efek bertanggung jawab atas resistensi terhadap transaktivasi
penghambatan delphinidin dari genus Solanum melon dan transformasi AP-1 dalam sel JB6 tikus. Proc Natl Acad
pada invasi fibrosarcoma HT-1080 manusia secara in vitro. Sci USA. 1998;95(1):156–161.
Tanaman Med. 1998;64(3):216–219. [29] Hou DX, Kai K, Li JJ, dkk. Antosianidin menghambat
2004:5 (2004) Pandangan Molekuler Kemoprevensi Kanker oleh Anthocyanidins 325
aktivitas protein aktivator 1 dan transformasi sel: [44] Katsube N, Iwashita K, Tsushida T, Yamaki K, Kobori M.
hubungan struktur-aktivitas dan mekanisme molekuler. Induksi apoptosis pada sel kanker oleh bilberry (Vaccinium
Karsinogenesis. 2004;25(1):29–36. myrtillus) dan anthocyanin. Kimia Makanan J Agric.
[30] Zhao Y, Xue Y, Oberley TD, dkk. Ekspresi berlebih 2003;51(1):68–75.
mangan superoksida dismutase menekan pembentukan
tumor dengan modulasi pensinyalan aktivator protein-1
dalam model karsinogenesis kulit bertingkat.
Email: hou@chem.agri.kagoshima-u.ac.jp
Kanker Res. 2001;61(16):6082–6088. Faks: +81 99 285 8649; Telepon: +81 99 285 8649
[31] Chandrasekharan NV, Dai H, Roos KL, dkk.
COX-3, varian siklooksigenase-1 yang dihambat oleh
ac etaminophen dan obat analgesik/antipiretik lainnya:
kloning, struktur, dan ekspresi. Proc Natl Acad Sci USA.
2002;99(21):13926–13931.
[32] Warner TD, Mitchell JA. Cyclooxygenase-3 (COX 3):
mengisi celah menuju kontinum COX? Proc Natl Acad
Sci USA. 2002;99(21):13371–13373.
[33] Mitchell JA, Belvisi MG, Akarasereenont P, dkk. Induksi
siklo-oksigenase-2 oleh sitokin dalam sel epitel paru
manusia: regulasi oleh dexametha sone. Br J Pharmacol.
1994;113(3):1008–1014.
[34] Mestre JR, Chan G, Zhang F, dkk. Penghambatan
ekspresi siklooksigenase-2. Sebuah pendekatan untuk
mencegah kanker kepala dan leher. Ann NY Acad Sci.
1999;889:62–71.
[35] Chinery R, Beauchamp RD, Shyr Y, Kirkland SC, Coffey
RJ, Morrow JD. Antioksidan mengurangi ekspresi
siklooksigenase-2, produksi prostaglandin, dan proliferasi
sel kanker kolorektal.
Kanker Res. 1998;58(11):2323–2327.
[36] Wang H, Nair MG, GM Strasburg, dkk. Aktivitas
antioksidan dan antiinflamasi antosianin dan aglikonnya,
cyanidin, dari ceri asam. J Nat Prod. 1999;62(2):294–296.
[37] Seeram NP, Momin RA, Nair MG, Bourquin LD.

Penghambatan siklooksigenase dan antioksidan cyani
din glikosida dalam ceri dan beri. Fitomedisin.
2001;8(5):362–369.
[38] Thompson CB. Apoptosis dalam patogenesis dan
pengobatan penyakit. Sains. 1995;267(5203):1456–
1462.
[39] Galati G, Teng S, Moridani MY, Chan TS, O'Brien PJ.
Mekanisme kemoprevensi kanker dan apoptosis yang
diinduksi oleh polifenol diet. Metabolisme Obat Interaksi
Obat. 2000;17(1-2):311–349.
[40] Kerr JFR, Wyllie AH, Currie AR. Apoptosis: fenomena
biologis dasar dengan implikasi luas dalam kinetika
jaringan. Br J Cancer. 1972;26(4):239– 257.
[41] Steller H. Mekanisme dan gen bunuh diri seluler.

Sains. 1995;267(5203):1445–1449.
[42] Suh N, Luyengi L, Fong HH, Kinghorn AD, Pezzuto JM.
Penemuan agen kemopreventif produk alami
memanfaatkan diferensiasi sel HL-60 sebagai model.
Antikanker Res. 1995;15(2):233–239.
[43] Hou DX, Ose T, Lin S, dkk. Anthocyanidins menginduksi
apoptosis pada sel leukemia promyelocytic manusia:
hubungan struktur-aktivitas dan mekanisme yang terlibat.
Int J Oncol. 2003;23(3):705–712.
ARTIKEL KORESPONDENSI
Kuantifikasi dan Pemurnian Murbei

Antosianin Dengan Resin Makropori
Xueming Liu,ÿ Gengsheng Xiao, Weidong Chen, Yujuan Xu, dan Jijun Wu
Institut Penelitian Serikultur, Akademi Ilmu Pertanian Guangdong, 133 Yihenglu, Dongguanzhuang,
Distrik Tianhe, Guangzhou 510610, Tiongkok
Diterima 3 Maret 2004; direvisi 24 Juni 2004; diterima 18 Juli 2004
Total antosianin dalam kultivar murbei yang berbeda diukur dan proses persiapan industri antosianin murbei sebagai pewarna makanan alami
dipelajari. Pada 31 kultivar murbei, total antosianin, dihitung sebagai cyanidin 3-glukosida, berkisar antara 147,68 hingga 2725,46 mg/L jus.
Mengekstraksi dan memurnikan dengan resin berpori makro ditemukan sebagai metode potensial yang efisien untuk produksi industri antosianin
murbei sebagai pewarna makanan. Dari enam resin yang diuji, X-5 menunjukkan kemampuan adsorben terbaik untuk antosianin murbei (resin
91 mg/mL). Kapasitas adsorpsi resin meningkat dengan luas permukaan dan jari-jari pori. Jus buah murbei yang tersisa setelah ekstraksi
pigmen mempertahankan sebagian besar nutrisinya, kecuali antosianin, dan dapat menyediakan substrat untuk diproses lebih lanjut.
PENGANTAR pemuliaan tanaman murbei difokuskan pada peningkatan

produksi daun melalui pemuliaan heterosis [5]. Buah murbei
Pigmen yang dapat dimakan merupakan bahan tambahan kaya akan antosianin dan dapat dianggap sebagai sumber
pangan penting yang dapat meningkatkan daya terima suatu potensial untuk produksi pewarna makanan merah alami.
produk pangan. Keamanan pigmen sintetik telah dipertanyakan, Anthocyanin utama yang diidentifikasi dalam ekstrak buah
menyebabkan pengurangan jumlah pewarna yang diizinkan [1]. adalah cyanidin 3-glucoside dan cyanidin 3-rutinoside [6].
Karena keterbatasan ini dan kecenderungan dunia untuk Karena ukurannya yang kecil, produksi yang relatif rendah, dan
menghindari konsumsi produk alami, minat terhadap pewarna umur simpan yang pendek, buah ini relatif tidak mendapat
alami telah meningkat secara signifikan [2]. Sebuah thocyanin perhatian. Namun, penerapan teknologi baru dalam pemuliaan
memberikan warna yang menarik seperti oranye, merah, dan dan pengolahan dapat menawarkan produksi antosianin dari
biru. Mereka larut dalam air, yang memfasilitasi buah murbei yang menguntungkan secara komersial.
penggabungannya ke dalam sistem makanan berair. Kualitas Resin adsorben adalah polimer nonpolar atau sedikit
ini membuat antosianin menjadi pewarna makanan alami yang hidrofilik tahan lama yang memiliki kapasitas adsorpsi tinggi
menarik. Di samping atribut warnanya, antosianin telah dengan kemungkinan pemulihan molekul teradsorpsi, biaya
dilaporkan bermanfaat bagi kesehatan sebagai antioksidan relatif rendah, dan regenerasi mudah. Mereka saat ini digunakan
kuat dan untuk meningkatkan ketajaman penglihatan [3]. untuk adsorpsi flavonoid dan komponen lain yang diekstraksi
Mereka juga telah diamati memiliki aktivitas antineoplastik, dari banyak tanaman. Resin styrene divinylbenzene (SDVB)
proteksi radiasi, vasotonik, vasoprotektif, antiinflamasi, kemo nonpolar telah digunakan untuk memulihkan hesperidin dari
dan hepatoprotektif [3]. Literatur memberikan banyak data kulit jeruk atau air limbah yang mengalir dari sentrifugal
tentang sebagian besar spesies tumbuhan yang dianggap pemisahan minyak atsiri (air kuning) [7, 8] dan antosianin dari
sebagai sumber potensial pewarna makanan antosianin. Bridle pencucian pulp jeruk babi [9]. Mereka juga telah digunakan
dan Timberlake [4] menyarankan beberapa sumber termasuk untuk menghilangkan naringin dan limonin dari jus jeruk dan
beberapa pewarna antosianin utama yang tersedia secara untuk memulihkan minyak grapefruit dingin dari air limbah [10].
komersial, yaitu anggur (Vitis sp.), elderberry (Sambu cus Resin merupakan bahan adsorben yang efektif untuk antosianin
nigra), kol merah (Brassica oleracea), rosela (Hibis cus dari berbagai sumber dan telah banyak digunakan dalam
sabdariffa), dan sumber lain termasuk jeruk darah (Citrus penelitian dan produksi antosianin [4, 9, 11, 12, 13].
sinensis), chokeberry hitam (Aronia melanocarpa), dan ubi
jalar (Ipomoea batatas). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi
Di banyak negara, terutama di Cina, daun murbei (Morus kandungan antosianin relatif dalam kultivar murbei yang
spp., Moraceae) digunakan untuk pakan ulat sutera (Bombyx berbeda, dan untuk menyelidiki proses industri potensial untuk
mori L.). Seperti banyak hijauan lainnya ekstraksi antosianin murbei untuk digunakan sebagai obat alami.

2004:5 (2004) Kuantifikasi dan Pemurnian Antosianin Murbei 327
Tabel 1. Sifat fisika dan kimia resin.

ÿ
Damar Jari-jari pori (A) Luas permukaan (m2/g) Diameter partikel (mm) Polaritas
D3520 85 ÿ 90 480 ÿ 520 0,3 ÿ 1,25 Nonpolar
D4020 100 ÿ 105 540 ÿ 580 0,3 ÿ 1,25 Nonpolar
X-5 290 ÿ 300 500 ÿ 600 0,3 ÿ 1,25 Nonpolar
Ambil-9 155 ÿ 165 250 ÿ 290 0,3 ÿ 1,25 Kutub
AB-8 130 ÿ 140 480 ÿ 520 0,3 ÿ 1,25 kutub rendah
D101A 90–100 500–550 0,3 ÿ 1,25 Nonpolar
pewarna makanan. Enam resin, yang memiliki sifat kimia dan 0,3 mm. Mereka kemudian direndam semalaman dalam 2
fisik yang berbeda, diselidiki untuk adsorpsi antosianin murbei. volume bed (BV) etanol 95%. Setelah direndam, resin
dimasukkan ke dalam kolom kaca dan dibilas dengan 2 BV
etanol 95% lebih lanjut. Selanjutnya mereka dibilas dengan 2
BAHAN DAN METODE BV air suling untuk menghilangkan etanol, 1 BV 4% (b/v)
natrium hidroksida, 2 BV air suling, 1 BV 4% (v/v) asam
Bahan tanaman dan perlakuan sampel klorida, dan terakhir dengan sulingan. air sampai pH eluen
Sampel untuk evaluasi kandungan antosianin menjadi netral.
pada berbagai kultivar
Pemurnian antosianin murbei
Buah murbei diperoleh dari South China Mul berry
Jus murbei mentah disentrifugasi pada 5000g selama 15
Resource Garden di Dafeng Agricultural Experimental Base
menit untuk menghasilkan supernatan terang (tidak keruh).
of the Guangdong Academy of Agricultural Sciences
Volume supernatan yang berbeda dilewatkan melalui kolom
(Guangdong, China). Untuk setiap kultivar, 250–300 g buah
resin tergantung pada kemampuan adsorben masing-masing
murbei matang dipanen dan disimpan pada suhu 4ÿC sampai
resin. Antosianin dan fenolik lainnya diserap ke dalam kolom;
perlakuan lebih lanjut. Semua perlakuan dilakukan pada hari
gula, asam, dan senyawa larut air lainnya dielusi dengan lebih
panen. Setelah ditimbang, buah murbei dicampur dalam
dari 2 BV air suling sampai air pencuci menjadi jernih. Bahan
blender listrik, disaring dengan kain penyaring nilon, dan yang terserap kemudian dielusi dengan etanol yang diasamkan
disentrifugasi pada 5000g selama 15 menit. Supernatan (0,5% (v/v) asam klorida) sampai tidak ada warna pada eluen.
dikumpulkan dan diuji kandungan antosianin, zat padat
Eluen dipekatkan pada rotary evaporator di bawah tekanan
terlarut, dan kandungan asam total.
rendah pada 60ÿC dan konsentrat yang dihasilkan diliofilisasi
untuk membentuk bubuk pigmen.
Sampel untuk evaluasi kapasitas adsorben resin

Buah murbei untuk produksi jus dan pemurnian antosianin Untuk memilih resin terbaik untuk menangkap antosianin
diperoleh dari dua pangkalan murbei: Pangkalan Doumen dan murbei, antosianin dalam eluat diuji secara spektrofotometri
Pangkalan Huadou, masing-masing terletak di Distrik Doumen, sebagai fungsi waktu. Resin dianggap jenuh ketika, selama
Distrik Zhuhai dan Huadou, Guangzhou, Cina. Buah pemuatan kolom, kandungan antosianin jus dan eluennya
dikumpulkan pada tahap matang sepenuhnya. sama.
Untuk menjaga kesegarannya, pabrik jus murbei dibangun di
sekitar pangkalan murbei. Untuk menentukan konsentrasi etanol optimum untuk
Buah murbei dibilas dengan air garam 0,9% kemudian dengan elusi antosianin teradsorpsi, 5 g alikuot resin jenuh dengan
air kran, sebelum diperas. Jus yang dihasilkan disentrifugasi, antosianin ditambahkan ke dalam labu 250 mL dengan
dipasteurisasi, dan disimpan dalam kantong steril pada suhu berbagai konsentrasi etanol diasamkan, dan diinkubasi pada
4ÿC (untuk segera diproses lebih lanjut) atau pada suhu shaker selama 1 jam pada suhu 25ÿC, 125 rpm. Kandungan
ÿ18ÿC (untuk diproses selanjutnya). antosianin dalam eluat ini diukur secara spektrofotometri.
Resin: pretreatment dan aktivasinya Resin

yang diuji adalah D3520, D4020, X-5, NKA-9, D101A, dan Kandungan antosianin total
AB-8 (Perusahaan Industri Kimia yang berafiliasi dengan Kandungan antosianin total ditentukan dengan
Universitas Nankai, Tianjin, China). Semua resin adalah menggunakan metode perbedaan pH [14]. Trofotometer spek
kopolimer polistiren yang terhubung silang. Sifat fisik dan UV F755B (Shanghai, China) dan kuvet sekali pakai dengan
kimianya ditunjukkan pada Tabel 1. panjang jalur 1 cm digunakan untuk pengukuran spektral pada
Resin dipretreatment dan diaktifkan sesuai dengan 420, 538, dan 700 nm. Kandungan pigmen dihitung sebagai
rekomendasi pabrikan. Pertama, mereka dibilas dengan air cyanidin 3-glucoside (cyd 3-glc), menggunakan koefisien
suling dan disaring dengan kain penyaring nilon untuk kepunahan 29 600 L cmÿ1 mgÿ1 dan berat molekul 448,8.
mempertahankan partikel dengan diameter partikel lebih besar dari
328 Xueming Liu dkk 2004:5 (2004)
Penentuan pH, keasaman yang dapat saturasi, dibilas dengan air deionisasi, dan selanjutnya dielusi
dititrasi, dan kandungan padatan terlarut dengan larutan etanol yang diasamkan. Kapasitas adsorpsi resin
dievaluasi berdasarkan pengukuran spec trophotometrical dari
Pengukuran pH dilakukan dengan menggunakan pH meter
tingkat anthocyanin dalam eluat (Gambar 1). Keenam resin
digital (pB-20, Sartorius, Jerman) yang dikalibrasi dengan buffer
tersebut, diberi peringkat berdasarkan kapasitas adsorpsinya
pH 4 dan 7. Keasaman yang dapat dititrasi diukur dengan metode
(tertinggi ke terendah), adalah sebagai berikut:
titrimetri. Keasaman murbei yang dapat dititrasi dinyatakan X-5>AB-8>D4020>D101A>D3520>NKA-9. Pemeringkatan
sebagai % asam sitrat. Kandungan padatan terlarut dinyatakan
tampaknya mencerminkan sifat fisikokimia yang berbeda dari
sebagai indeks bias dan diukur dengan refraktometer 2 WAJ
resin ini.
Abbe (Shanghai, China).
Di antara resin nonpolar yang diuji, kemampuan menyerap
murbei dan thocyanin terutama bergantung pada jari-jari pori
Analisis HPLC antosianin murbei
dan, pada tingkat yang lebih rendah, pada luas permukaan. ÿ
Analisis HPLC anthocyanin dilakukan seperti yang dijelaskan Resin X-5, dengan radius pori terbesar (290ÿ300 A) dan luas
oleh Konczak-Islam et al [15]. Larutan pigmen disaring melalui permukaan (500ÿ600 m2/g), memiliki kemampuan adsorpsi
unit filter yang digerakkan jarum suntik 0,45 µm (Millipore terbaik. Kapasitas adsorpsi totalnya (91 mg/mL resin) lebih dari
Corporation Bedford, Mass). Sistem HPLC terdiri dari dua pompa dua kali lipat dari resin lainnya. Total kapasitas adsorpsi resin
LC-10AD, detektor susunan dioda SPD M10A, oven kolom X-5 yang dievaluasi pada kondisi percobaan ini lebih dari 100
CTO-10AS, degasser DGV-12A, autoinjektor SIL-10AD, dan kali lipat dari yang dilaporkan oleh Di Mauro et al [9]. Demikian
pengontrol sistem SCL-10A (Shimadzu, Jepang) yang dilengkapi pula resin nonpolar D3520, dengan jari-jari pori terkecil (85ÿ90
ÿ
dengan Luna (3 µm Kolom C18(2), 4,6 mm × 100 mm, A), menunjukkan kapasitas adsorpsi terendah kedua dan
Phenomenex, Calif) pada suhu 35ÿC. Pelarut berikut dalam air disarankan bahwa ukuran pori yang terlalu kecil tidak
dengan laju alir 1 mL/menit digunakan: A (1,5% asam fosfat) dan memungkinkan penetrasi antosianin ke dalam retikula resin [9].
B (1,5% asam fosfat, 20% asam asetat, 25% asetonitril). Profil NKA 9, satu-satunya resin polar yang diuji dan dengan luas
elusi adalah elusi gradien linier dengan 25%–85% pelarut B permukaan terkecil (250ÿ290 m2/g), memiliki kapasitas adsorpsi
dalam pelarut A selama 100 menit. Kromatogram dipantau pada antosianin murbei terendah.
530 nm dan dicatat, dan konsentrasi relatif masing-masing
pigmen dihitung dari area puncak. Temuan ini konsisten dengan hasil yang dilaporkan oleh Di
Mauro et al [9] meskipun ada beberapa perbedaan dalam rentang
yang tepat dari jari-jari pori dan luas permukaan yang dipelajari.
Kemanjuran eluen dari berbagai konsentrasi

HASIL DAN DISKUSI etanol yang diasamkan
Total kandungan antosianin pada berbagai Dalam merancang proses produksi industri yang potensial
kultivar murbei untuk antosianin murbei sebagai pewarna yang dapat dimakan,
perlu mempertimbangkan tidak hanya resin, tetapi juga pelarut
Tiga puluh satu kultivar murbei dianalisis berdasarkan berat limbah dan konsentrasinya. Seperti yang ditunjukkan pada
buah, zat padat terlarut (ÿBrix), total asam, dan total antosianin.
Gambar 2, etanol yang diasamkan dapat secara efektif mengelusi
Karakteristik ini bervariasi antar kultivar meskipun semua sampel
antosianin dari resin pada konsentrasi lebih dari 30% (v/v).
dikumpulkan pada tahap matang dan dari tempat yang sama Larutan dengan konsentrasi etanol yang rendah memiliki titik
(Tabel 2). Kandungan total antosianin dari kultivar yang dievaluasi
didih yang lebih tinggi dan karena itu lebih sulit untuk dipekatkan
bervariasi antara 147,68 (kultivar Yuiyou 26) dan 2725,46 mg/L
dibandingkan larutan dengan konsentrasi tinggi. Untuk merancang
nira (kultivar 7403). Kandungan antosianin juga ditemukan
proses penutupan kembali antosianin yang dipercepat,
bergantung pada iklim dan daerah produksi. Diamati bahwa
direkomendasikan konsentrasi etanol yang lebih tinggi.
kandungan antosianin dari kultivar murbei yang sama jauh lebih
tinggi pada hari cerah dibandingkan pada hari hujan (data tidak
ditampilkan). Seperti yang diamati sehubungan dengan Elusi pigmen murbei dengan etanol yang diasamkan
kandungan antosianin, parameter buah murbei lainnya seperti Etanol 80% (v/v) yang diasamkan ternyata mampu mengelusi
berat buah rata-rata, zat padat terlarut, dan asam total bervariasi
sebagian besar antosianin yang diserap oleh resin.
di berbagai kultivar yang dipelajari.
Menggunakan eluen ini, tingkat pemulihan keseluruhan lebih
tinggi dari 99%. Dari total 600 mL eluen, 150 mL pertama hanya
mengandung 1,5% dari total antosianin (karena air pencuci masih
ada dalam resin); 250 mL tengah mengandung 96%, sedangkan
Kemampuan adsorben resin berbeda untuk
200 mL terakhir mengandung 2,5% (Gambar 3). Meskipun
pigmen murbei
konsentrasi etanol yang tinggi dapat secara efektif mengelusi
Jus kekuatan tunggal digunakan sebagai bahan awal untuk pigmen yang diserap oleh resin, produk tidak dapat sepenuhnya
produksi pigmen murbei murni. larut dalam air, menunjukkan adanya beberapa kotoran. Untuk
Kolom diisi dengan jus untuk mendapatkan hasil yang lengkap
Tabel 2. Rata-rata bobot buah, kandungan zat padat terlarut, total asam, dan total antosianin pada buah berbagai kultivar murbei.
Berat buah rata- Kandungan padat Asam yang dapat Total antosianin (mg/L)
Kultivar
rata (g) yang dapat larut (ÿBrix) dititrasi (g/L)
7403 3.49 10.00 7.30 2725.46

7848 4.09 7.75 4.51 1033.79
Pada-1-13 5.34 3.25 1.87 1496.99
Di-2-5 7.20 8.75 5.81 792.13
Pada-2-8 8.64 11.75 5.40 1419.79
Pada-2-17 T/A 6.90 2.97 399.42
Di-3-5 5.02 11.50 2.66 909.60
Da-10 4.83 11.50 4.70 1533.91
Guiyou-10-19 7.68 10.50 3.96 1594.26
Guiyou-15 6.22 8.25 4.84 976.73
Guiyou-46 4.53 6.00 3.46 322.22
Guiyou-70 6.46 6.50 4.57 496.76
Guiyou-75 T/A 7.80 3.71 651.16

Guo-1 4.27 10.00 1.73 594.10
Guo-2 4.98 9.75 1.79 1758.79
Heipisang 7.18 5.75 7.11 1218.40

Miao-66 T/A 9.80 4.33 771.99
Nanjian-6 3.76 10.75 1.07 1379.51
Shangshan-6 4.00 10.25 3.03 1496.99
Tang-10 3.91 10.5 5.13 1382.87

Xuan-27 7.89 9.00 7.36 882.75
Yueyou-18 7.82 9.50 3.25 1319.10
Yueyou-25 4.91 11.50 2.59 1033.79
Yueyou-26 5.72 8.50 3.94 147.68
Yueyou-32 4.77 10.75 3.40 1507.06
Yueyou-34 6.98 7.00 5.44 1084.14
Yueyou-36 T/A 9.70 2.60 1322.45
Yueyou-46 5.86 7.50 2.63 808.91
Yueyou-51 6.26 9.75 2.70 1362.73
Yueyou-87 7.38 9.00 2.21 758.56

Zhan-1432 5.86 7.25 3.52 1060.65
800
700
14
600
12
500
10
400
A538x
Resin
mL
D/
A538x
D
8
300 6
200 4
100 2
0 0
D3520 D4020 X-5 NKA-9 D101A AB-8 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Resin Konsentrasi etanol (v %)
Gambar 1. Kemampuan adsorben pigmen murbei dari berbagai resin (D = Gambar 2. Kemanjuran elusi berbagai konsentrasi etanol diasamkan (D = faktor
faktor pengenceran). pengenceran).
330 Xueming Liu dkk 2004:5 (2004)
350 300
300
A538x
D
250
200
150
100 200
50
0
0 100 200 300 400 500 600
Absorbansi
pada
520
nm
Volume eluen (mL)
Gambar 3. Elusi antosianin dengan etanol 80% (v/v) diasamkan yang

100
diaplikasikan pada pigmen murbei yang teradsorbsi pada resin (D =
faktor pengenceran).
mendapatkan pigmen yang larut dalam air, konsentrasi yang

0
berbeda dari etanol diasamkan (10ÿ80%) (v/v) dievaluasi dan
0 2.557,5 10 12,5 15
eluen yang dihasilkan dipekatkan, dikeringkan, dan kelarutan
dalam air diuji. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pigmen
yang dielusi dengan etanol yang diasamkan kurang dari 30% (sebuah)
(v/v) benar-benar larut dalam air; namun, itu menyumbang

sekitar 80% dari total berat pigmen.
Perbandingan pigmen murbei sebelum dan 600
sesudah pemurnian dengan resin

Jus murbei mentah kaya akan antosianin dan, setelah
dipekatkan, dapat langsung digunakan sebagai pigmen alami.
Namun, konsentrasi antosianin dalam jus tersebut rendah,
dengan nilai warna biasanya kurang dari 4,0. 400
Hal itu disebabkan adanya komponen nonpigmen seperti

mono-, di-, dan polisakarida, mineral, protein, atau asam
organik dalam proporsi yang besar. Alih-alih jus pekat, bubuk Absorbansi
pada
520
nm
pigmen dapat diproduksi dengan pengeringan semprot, tetapi

produk yang dihasilkan sangat higroskopis, menjadi lengket
200
dan sulit larut dalam air. Produk-produk ini memiliki umur
simpan yang relatif singkat (data tidak disajikan).
Berbeda dengan sari murbei mentah, eluen pigmen yang

dimurnikan dengan resin dapat dengan mudah dipekatkan
untuk mendapatkan nilai warna yang tinggi, biasanya lebih dari 0
0 2.557,5 10 12,5 15
100, dan mudah terliofilisasi. Selama pemurnian dengan resin,
sebagian besar kotoran dihilangkan. Penghapusan pengotor
juga dapat menurunkan reaksi enzimatik dan nonenzimatik
(b)
yang menyebabkan pencoklatan pigmen dan dengan demikian
meningkatkan stabilitas pewarna makanan potensial. Gambar 4. Kromatogram HPLC antosianin murbei (a) sebelum
pemurnian (pigmen kasar); dan (b) setelah pemurnian (purified pigment).
Saat diuji dengan HPLC pada kondisi yang sama (520 nm),
profil HPLC dari ekstrak pigmen murni dan kasar adalah identik,
terdiri dari empat puncak (Gambar 4). Hal ini menunjukkan
bahwa pemurnian pigmen menggunakan resin tidak mengubah
komposisi campuran antosianin. pigmen, limbah lingkungan akan dihasilkan. Kami telah
mengevaluasi total gula, total asam, total antosianin, beberapa
vitamin, dan pH sari murbei sebelum dan sesudah pemurnian
Perbandingan jus murbei mentah sebelum dan sesudah dengan resin X-5 di bawah kondisi adsorpsi jenuh (Tabel 3).
ekstraksi pigmen murbei dengan resin
Selain pigmen antosianin, jus murbei mentah juga Hasil penelitian menunjukkan bahwa hampir semua
mengandung komponen lain. Jika dalam pengaturan industri, antosianin teradsorpsi oleh resin, sedangkan total gula, total
jus mentah hanya digunakan untuk produksi asam, dan vitamin (vitamin B1) tetap berada di dalam jus mentah.
Tabel 3. Komponen dalam sari murbei mentah sebelum dan sesudah pemurnian dengan resin X-5.
pH komponen Sebelum Setelah Proporsi yang dipertahankan (%)

4.70 4.65 —
Jumlah asam (g/L) 7.10 5.86 82.5

Total zat terlarut (%) 11.80 11.00 93.2
VB1(mg/L) 27.92 27.45 98.3
Total antosianin (mg/L) 384.07 11.52 3.0
bawah adsorpsi tak jenuh. Oleh karena itu, dapat Pemulihan minyak grapefruit dari pengolahan air limbah
dipertimbangkan setelah penghilangan antosianin, sisa jus menggunakan resin SDVB. Proc Fla State Hort Soc.
difermentasi untuk menghasilkan produk seperti jus, anggur, 1990;103:280–282.
dan saus, yang meningkatkan nilai keseluruhan buah murbei. [11] Fiorini M. Kromatografi cair kinerja tinggi preparatif untuk
pemurnian thocyanin alami. J Chromat A. 1995;692(1-2):213–
Hasil kami menunjukkan bahwa pemanfaatan antosianin 219.
murbei sebagai pewarna makanan alami adalah mungkin dan [12] Schwarz M, Hillebrand S, Habben S, Degenhardt A,
dapat meningkatkan keuntungan keseluruhan tanaman murbei Winterhalter P. Penerapan kromatografi arus balik
dari hanya menjadi sumber dedaunan bagi ulat sutera menjadi berkecepatan tinggi untuk isolasi antosianin skala besar.
sumber pigmen yang menjanjikan untuk aplikasi makanan. Biochem Eng J. 2003;14(3):179– 189.
REFERENSI [13] Tsai PJ, McIntosh J, Pearce P, Camden B, Jor dan BR.
Kapasitas antosianin dan antioksidan dalam ekstrak
[1] Giusti MM, Wrolstad RE. Anthocyanin terasilasi dari sumber rosela (Hibiscus sabdariffa L.). Makanan Res Int.
yang dapat dimakan dan aplikasinya dalam sistem 2002;35(4):351–356.
pangan.˜ Biochem Eng J. 2003;14(3):217–225. [14] Giusti MM, Wrolstad RE. Karakterisasi antosianin lobak
´
[2] Pazmino-Dur an AE, Giusti MM, Wrolstad RE, Gloria MBA. merah. Ilmu Makanan J. 1996;61(2):322–326.
´
Antosianin dari Oxalis triangu laris sebagai
makanan
pewarna [15] Konczak-Islam I, Okuno S, Yoshimoto M, Yamakawa O.
potensial. Makanan Kimia. 2001; 75(2):211–216. Komposisi fenolat dan antosianin dalam kultur suspensi
sel ubi jalar. Biochem Light J. 2003;14(3):155–161.
[3] Mazza G, Miniati E. Antosianin dalam Buah, Vegeta bles,
dan Biji-bijian. Boca Raton, Florida: CRC Press; 1993.

[4] Kekang P, Timberlake CF. Antosianin sebagai pewarna
Email: xuemingliu@21cn.com
makanan alami—aspek terpilih. Makanan Kimia. Faks: +86 20 8723 6354; Telp: +86 20 8723 7279
1997;58(1-2):103–109.
[5] Vijayan K, Chauhan S, Das NK, Chakraborti SP, Roy BN.
Kemampuan daya gabung komponen hasil daun pada
tanaman murbei (Morus spp.) Euphytica. 1997;98(1-2):47–
52.
[6] Suh HJ, Noh DO, Kang CS, Kim JM, Lee SW. Kinetika
termal degradasi warna ekstrak buah murbei. Nahrung/
makanan. 2003;47(2):132–135.
[7] Di Mauro A, Fallico B, Passerini A, Rapisarda P, Maccarone
E. Pemulihan hesperidin dari atau kulit ange dengan
konsentrasi ekstrak pada resin styrene divinylbenzene.
Kimia Makanan J Agric. 1999;47 (10):4391–4397.
[8] Di Mauro A, Fallico B, Passerini A, Maccarone E. Air limbah

dari pengolahan jeruk sebagai sumber hesperidin dengan
konsentrasi pada resin styrene divinylbenzene. Kimia
Makanan J Agric. 2000;48(6): 2291–2295.
[9] Di Mauro A, Arena E, Fallico B, Passerini A, Mac carone

E. Pemulihan anthocyanin dari pencucian pulp jeruk
berpigmen dengan konsentrasi pada resin. Kimia Makanan
J Agric. 2002;50(21):5968–5974.
[10] Ericson AP, Matthews RF, Teixeria AA, Moye HA.
Pengaruh Dua Metode Buah Delima

(Punica granatum L) Ekstraksi Jus pada
Kualitas Selama Penyimpanan pada 4ÿC
Graça Miguel, Susana Dandlen, Dulce Antunes,ÿ Alcinda Neves, and Denise Martins
Kampus Gambelas, Fakultas Teknik Sumber Daya Alam,

Universitas Algarve, 8005-139 Faro, Portugal
Diterima 3 Maret 2004; direvisi 22 Juni 2004; diterima 22 Juni 2004
Pengaruh dua metode ekstraksi jus delima terhadap kualitas dan stabilitasnya dievaluasi. Metode pertama terdiri dari pemisahan biji dari
buah dan sentrifugasi. Metode kedua terdiri dari memeras bagian buah dengan alat pemeras lemon elektrik. Selama periode penyimpanan
dingin 72 jam pada suhu 4ÿC, jus dievaluasi untuk keberadaan gula, asam organik, dan antosianin. Delphinidin 3-glukosida diidentifikasi
sebagai antosianin utama yang terdapat pada kadar 45–69 mg/L.
Di antara asam organik, asam oksalat dan tartarat mendominasi. Gula utama yang terdeteksi dalam jus delima adalah glukosa dan
sukrosa. Tidak ada perbedaan signifikan dalam kandungan gula, asam organik, atau antosianin dalam jus yang diperoleh melalui
penerapan dua metode ekstraksi berbeda yang terdeteksi, kecuali penurunan drastis kadar cyanidin 3, 5-diglukosida dalam jus yang
diperoleh dengan sentrifugasi biji. pH tidak menunjukkan perbedaan antar perlakuan. Keasaman yang dapat dititrasi dan tingkat gula
yang dinyatakan sebagai ÿBrix menurun setelah 32 dan 15 jam setelah ekstraksi, masing-masing, ketika jus diperoleh dengan cara mensentrifugasi benih.
PENGANTAR tion. Namun, mereka juga dapat digunakan untuk produksi jus buah
atau produksi produk olahan seperti selai, jeli, sirup, atau minuman
Senyawa fenolik adalah komponen penting dari banyak buah, bersoda [5]. Saat ini buah yang rusak, dengan retakan, luka, atau
sayuran, dan minuman yang berkontribusi terhadap warna dan sifat memar pada kulitnya, dibuang. Aplikasi mereka untuk produksi
sensoriknya. Studi epidemiologis telah menunjukkan bahwa produk makanan olahan dapat meningkatkan hasil ekonomi dari
komposisi makanan kaya fenol menghambat perkembangan tanaman ini.
arteriosklerosis dan mengurangi kejadian penyakit jantung dengan
mencegah stres oksidatif, yaitu peroksidasi lipid dalam makrofag Komposisi sari buah delima tergantung pada jenis kultivar,
arteri dan lipoprotein [1, 2]. Baru-baru ini, beberapa penulis faktor lingkungan dan pascapanen, serta faktor penyimpanan dan
melaporkan bahwa antosianin menurunkan akumulasi kadmium di pengolahan [2, 6, 7, 8, 9, 10].
hati dan ginjal, konsentrasi bilirubin dan urea dalam serum darah, Meskipun delima Assaria adalah varietas Portugis utama,
dan aktivitas aspartat aminotransferase dan alanin aminotransferase komposisi jusnya belum dipelajari dengan baik.
[3]. Tujuan dari penelitian kami adalah untuk mengevaluasi komposisi
jus delima Assaria yang diperoleh dengan menggunakan dua
metode ekstraksi yang berbeda dan pengaruhnya terhadap kualitas
Jus buah delima merupakan sumber penting senyawa fenolik, jus selama penyimpanan lebih dari 72 jam pada suhu 4ÿC.
dengan antosianin menjadi salah satu yang paling penting, terutama
3-glukosida dan 3,5-diglukosida dari delphinidin, cyanidin, dan BAHAN DAN METODE
pelargonidin [4]. Komponen-komponen ini bersama dengan tanin
Buah-buahan dan perawatan
tipe gallagyl, turunan asam ellagic, dan tanin terhidrolisis lainnya
dapat berkontribusi dalam beberapa cara untuk aktivitas antioksidan Delima manis (Punica granatum cv Assaria) dipanen di kebun
jus delima [2]. komersial di timur Al garve. Buah-buahan diangkut pada hari yang
sama ke laboratorium pidato di Universitas Algarve. Buah yang
Delima “Assaria” adalah varietas Portugis yang dibudidayakan rusak dibuang dan buah sehat dengan ukuran dan penampilan yang
di wilayah selatan negara itu. Bijinya yang dapat dimakan adalah seragam dicuci dan didistribusikan secara acak ke dalam kelompok
makanan ringan favorit karena rasanya yang manis dan lembut, dan 10 buah untuk ekstraksi jus.
buahnya banyak digunakan untuk konsumsi langsung

2004:5 (2004) Metode Ekstraksi Jus Delima 333
Untuk mendapatkan jus, dua metode ekstraksi diterapkan. 100
Metode pertama terdiri dari mengupas buah secara manual,

memisahkan bijinya, dan mengekstrak sarinya dengan alat 80
pemeras jus Phillips Electric. Pada metode kedua, buah
dipotong menjadi dua bagian dan jus segera diekstraksi
60
menggunakan pemeras lemon Phillips Electric. Setiap ekstraksi
Konsentrasi
antosianin
(mg/
L)
dilakukan ulangan sebanyak 4 kali.

Jus yang diperoleh segera disimpan pada suhu 4ÿC dalam 40
gelap. Sampel dikumpulkan pada 0, 5, 15, 32, 48, dan 72 jam

setelah ekstraksi. Pada setiap titik pengambilan sampel, jus
20
dianalisis untuk ÿBrix (yang merupakan persentase berat gula
dalam larutan pada suhu kamar), pH, keasaman titrasi,
0
antosianin, gula, dan asam organik. Perubahan warna dipantau
0 20 40 60 80
menurut Mun sell Color Chart [11].
Waktu (jam)
Dp3, 5 Dp3
Standar dan reagen Cy3, 5 Cy3
Hal 3, 5 Hal3
Delphinidin 3, 5-diglukosida (Dp3, 5), delphinidin 3-glukosida
(Dp3), cyanidin 3, 5-diglukosida (Cy3, 5), cyanidin 3-glukosida
Gambar 1. Evolusi konsentrasi anthocyanin hadir dalam jus
(Cy3), pelargonidin 3, 5-diglukosida (Pg3, 5 ), dan standar
delima diperoleh dengan sentrifugasi benih dan disimpan
pelargonidin 3-glukosida (Pg3) dibeli dari Apin Chemicals Ltd, selama 72 jam pada suhu 4ÿC. Bar mewakili standar deviasi
Inggris. Metanol (tingkat gradien HPLC) dibeli dari Sigma dari 4 ulangan.
Aldrich Quimica, SA (Spanyol). Glukosa asam format, oksalat,
tartarat, piruvat, malat, askorbat, maleat, sitrat, fumarat, dan
sulfur, dan fruktosa dibeli dari Riedel-de-Haen (Jerman). Air
Gula dan asam organik
ultra murni dimurnikan
¨ dengan sistem MilliQ, dari Millipore, USA.
Untuk menentukan kandungan gula dan asam organik
dalam jus, sampel (1 mL) disentrifugasi selama 20 menit pada
13.000 rpm dan disaring melalui filter 0,45 µm (pori Milli).
Keasaman yang dapat dititrasi, Komposisi gula dan asam dideteksi dengan HPLC (Beckman)
pH, dan ÿBrix Keasaman yang dapat dititrasi dihitung yang dilengkapi dengan detektor indeks bias (RI) 1530 Jasco
sebagai persentase asam sitrat dengan mentitrasi 10 mL jus (Jepang). Kolom Polyspher OA HY (30 cm × 0,65 cm id; ukuran
buah delima dengan larutan NaOH (0,1 N) hingga pH 8,1. PH partikel 9 µm) dari Merck digunakan pada suhu 35ÿC. Fase
diukur dengan pengukur pH (Crison micropH 2001—Crison In gerak terdiri dari 0,0025 N H2SO4 diterapkan pada laju alir 0,4
instrument, SA (Spanyol)). Tingkat gula diukur sebagai ÿBrix mL/menit. Volume injeksi adalah 20 ÿL menggunakan injektor
dengan refraktometer digital, model PRI-Atago Co LTD (Jepang). dengan loop 20 ÿL (Rheodyne). Gula dan asam organik yang
berbeda diidentifikasi dengan membandingkan waktu retensinya
dengan standar murni. Konsentrasi senyawa ini dihitung dari
Antosianin kurva standar masing-masing gula dan asam organik.
Sampel jus (1 mL) disentrifugasi selama 2 menit pada 10

000 rpm dan disaring melalui filter 0,45 µm (Milli pori). Identifikasi
anthocyanin dilakukan oleh HPLC dengan System Gold
Programmable Detector Module 166-UV-Vis (Beckman Coulter, HASIL DAN DISKUSI
USA), menggunakan kolom LiChroCART 100 RP-18 ( id 25
cm×0,4 cm; ukuran partikel 5 µm; Merck ( Jerman)). Fase gerak Tingkat anthocyanin utama yang terdeteksi dalam jus
adalah 5% asam format (A) dan metanol (B) dalam gradien delima granat diperoleh melalui dua metode ekstraksi yang
linier dari 15% menjadi 35% B pada 15 menit, diikuti dengan berbeda, sentrifugasi biji atau pemerasan bagian buah dengan
proses isokratik hingga 20 menit. Laju alir adalah 1 mL / menit. pemeras lemon listrik, dan disimpan pada suhu 4ÿC selama 72
Kromatogram direkam pada absorbansi 510 nm. Antosianin jam disajikan pada Gambar 1 dan 2. Tidak signifikan Perbedaan
yang berbeda diidentifikasi dengan membandingkan waktu yang mencolok dalam komposisi antosianin terdeteksi di antara
retensinya dengan standar murni. perlakuan. Dalam kedua kasus, antosianin utama adalah Dp3,
diikuti oleh Dp3, 5, Cy3, 5, dan Cy3. Pg3, 5 dan Pg3 hadir
Konsentrasi antosianin dihitung dari kurva standar Dp3, 5, Dp3, dalam jumlah terendah.
Cy3, 5, Cy3, Pg3, 5, dan Pg3, pada empat konsentrasi (0,01, Antosianin yang terdeteksi dalam analisis kami terhadap jus
0,02, 0,04, 0,08 mg/L). delima Assaria sama seperti yang diidentifikasi pada kultivar
Volume injeksi adalah 20 µL menggunakan injektor dengan lain [12]; Namun, konsentrasi masing-masing pigmen berbeda.
loop 20 µL (Rheodyne, USA).
334 Gracia Miguel dkk 2004:5 (2004)
100 350
300
80
250
60
Konsentrasi
antosianin
(mg/
L)
200
Konsentrasi
organik
asam
(mg/
L)
40
150
20 100
50
0
0 20 40 60 80
0
Waktu (jam) 0 20 40 60 80
Dp3, 5 Dp3 Waktu (jam)

Cy3, 5 Cy3 Asam askorbat
Asam oksalat
Hal 3, 5 Hal3
Asam tartarat Asam maleat
Asam piruvat Asam sitrat

Gambar 2. Evolusi konsentrasi antosianin yang terdapat dalam jus Asam malat Asam fumarat
delima yang diperoleh dengan memeras bagian buah dengan alat
pemeras lemon elektrik dan disimpan selama 72 jam pada suhu
Gambar 3. Evolusi konsentrasi asam organik yang terdapat dalam
4ÿC. Bar mewakili standar deviasi dari 4 ulangan.
sari buah delima diperoleh dengan sentrifugasi biji dan disimpan
selama 72 jam pada suhu 4ÿC. Bar mewakili standar deviasi dari
4 ulangan.
Warna adalah salah satu parameter terpenting saat

membuat evaluasi sensoris kualitas makanan. Tidak ada 350
perbedaan signifikan yang diamati antara warna jus yang
diperoleh melalui berbagai metode ekstraksi. Pada saat 300
ekstraksi, warna jus Assaria dicatat sebagai 53A, menurut
Bagan Warna Munsell. Warna jus tidak berubah selama waktu 250
percobaan.
Warna cerah buah dan jus delima disebabkan oleh 200
antosianin, sehingga stabilitasnya melalui pengolahan jus Konsentrasi

organik
asam
(mg/
L)
menjadi sangat penting. Kandungan antosianin pada kedua 150

metode ekstraksi serupa dengan profil evolusi masing-masing
dari waktu ke waktu. Selama 5 jam pertama penyimpanan 100
pada suhu 4ÿC, terjadi sedikit peningkatan (0,3%–4%) dalam

jumlah masing-masing antosianin, diikuti dengan penurunan 50
dalam sepuluh jam berikutnya dan kemudian terjadi stabilisasi.

Selain itu, jus buah yang diperoleh dengan sentrifugasi benih 0
0 20 40 60 80
menunjukkan penurunan Cy3,5 yang nyata, terutama setelah
Waktu (jam)
48 jam penyimpanan (Gambar 1). Dilaporkan sebelumnya
bahwa dalam jus delima POM Wonderful antosianin diglukosida Asam oksalat Asam askorbat
lebih stabil daripada monoglukosida [8], oleh karena itu Asam tartarat Asam maleat
Asam piruvat Asam sitrat

penurunan Cy3,5 yang tinggi yang diamati dalam percobaan
Asam malat Asam fumarat
kami tidak terduga.
Asam organik utama yang ada dalam jus delima adalah
asam oksalat dan asam tartarat, baik dalam jus yang diperoleh Gambar 4. Evolusi konsentrasi asam organik yang ada dalam jus
delima yang diperoleh dengan memeras bagian buah dengan alat
dengan sentrifugasi biji atau dengan memeras bagian buah
pemeras lemon elektrik dan disimpan selama 72 jam pada suhu
masing-masing (Gambar 3 dan 4). Hasil ini sangat berbeda 4ÿC. Bar mewakili standar deviasi dari 4 ulangan.
dari yang dilaporkan oleh orang lain [6, 13] untuk 11 kultivar
delima Spanyol di mana asam sitrat adalah asam organik
utama, kadang-kadang diikuti oleh asam malat. Asam oksalat asam ric dan asam malat yang dominan di sebagian besar
dan tartarat hanya ada dalam jumlah kecil. Sebaliknya, variasi varietas, tetapi dalam beberapa kultivar sejumlah besar asam
besar dalam komposisi asam organik di antara kultivar delima oksalat dan asam tartarat terdeteksi. Pada varietas tersebut,
Turki telah dilaporkan [14]. Cit hanya satu yang memiliki asam oksalat sebagai asam organik
utama.
2.5 2.5
2
2
1.5
Keasaman
titrasi
1.5
Konsentrasi
gula
(g/
L)
0,5
0,5
0
0 20 40 60 80
Waktu (jam) 0
Fruktosa 0 20 40 60 80
Glukosa
Waktu (jam)
Sentrifugasi
Gambar 5. Evolusi konsentrasi gula pada sari buah delima Tindihan
diperoleh dengan sentrifugasi biji dan disimpan selama 72 jam
pada suhu 4ÿC. Bar mewakili standar deviasi dari 4 ulangan.
Gambar 7. Evolusi keasaman yang dapat dititrasi sebagai
persentase asam sitrat dalam jus delima diperoleh dengan
sentrifugasi biji dan dengan memeras bagian buah dengan
2.5
pemeras lemon listrik dan disimpan selama 72 jam pada suhu
4ÿC. Bar mewakili standar deviasi dari 4 ulangan.
2
1.5 diperoleh dengan memeras buah, dan asam askorbat

diperoleh melalui penerapan kedua metode (Gambar 4).
Konsentrasi
gula
(g/
L)
Konsentrasi asam malat dan asam sitrat mencapai maksimum

1
setelah 15 jam penyimpanan. Tingkat tertinggi asam maleat
diamati setelah ekstraksi jus. Kandungan asam askorbat
0,5 tetap cukup stabil selama periode penyimpanan terlepas dari
penerapan metode.
Karbohidrat utama yang terdeteksi dalam jus buah delima
0
0 20 40 60 80 adalah glukosa dan fruktosa (Gambar 5 dan 6).
Ini mendukung hasil yang dilaporkan sebelumnya untuk
Waktu (jam)
kultivar delima lainnya [6]. Hanya jejak sukrosa yang
Fruktosa
ditemukan dan oleh karena itu sukrosa tidak dipertimbangkan
Glukosa
dalam penelitian ini. Jumlah glukosa dan fruktosa sangat
mirip dalam jus yang diperoleh melalui penerapan kedua
Gambar 6. Evolusi konsentrasi gula pada sari buah delima
metode tersebut. Penurunan nyata kandungan karbohidrat
diperoleh dengan memeras bagian buah dengan pemeras lemon
elektrik dan disimpan selama 72 jam pada suhu 4ÿC. Bar mewakili total sekitar 50% diamati pada jus terlepas dari metode
standar deviasi dari 4 ulangan. ekstraksi setelah 5 jam penyimpanan pada suhu 4ÿC. Dapat
diasumsikan bahwa penurunan kandungan gula dan asam
organik selama 15 jam pertama penyimpanan terjadi karena
sintesis antosianin de novo , yang kadarnya meningkat tepat
Profil evolusi asam organik dari waktu ke waktu dalam pada waktu yang sama dalam jus yang diperoleh melalui
jus yang diperoleh melalui penerapan kedua metode cukup kedua metode tersebut.
mirip, dengan hanya beberapa pengecualian. Penurunan Keasaman yang dapat dititrasi menunjukkan penurunan
setiap asam organik selama 5-15 jam pertama penyimpanan yang jelas setelah 32 jam penyimpanan ketika jus diperoleh
dingin diamati, diikuti dengan peningkatan mencapai nilai dengan cara sentrifugasi biji, yang kurang terlihat pada jus
maksimal setelah 32 jam penyimpanan. Pada titik ini, kadar yang diekstraksi dengan memeras buah (Gambar 7). Tingkat
asam oksalat adalah 292,9 dan 271,1 mg/L dan asam tartarat gula diukur sebagai ÿBrix berubah dari waktu ke waktu tetapi
masing-masing adalah 228,9 dan 228,0 mg/L dalam jus yang fitur utama adalah penurunan tajam setelah 15 jam sampai
diperoleh dengan sentrifugasi biji dan pemerasan bagian akhir percobaan dalam prosedur sentrifugasi benih (Gambar
buah. Pengecualian yang dilaporkan di atas adalah asam 8). Perilaku ini mungkin terkait dengan komposisi kimia jus
malat, maleat, dan sitrat dalam sampel ob yang berbeda karena adanya tanin sebagai hasilnya
15.5 3.5
15 3
pH
14.5 2.5
ÿBrix
2
14
1.5
13.5
0 20 40 60 80
0 20 40 60 80
Waktu (jam)
Waktu (jam)
Sentrifugasi
Sentrifugasi Tindihan
Tindihan
Gambar 9. Evolusi pH jus delima diperoleh dengan

Gambar 8. Evolusi ÿBrix jus delima diperoleh dengan sentrifugasi biji dan dengan memeras bagian buah dengan
sentrifugasi biji dan dengan memeras bagian buah dengan pemeras lemon listrik dan disimpan selama 72 jam pada
pemeras lemon listrik dan disimpan selama 72 jam pada suhu 4ÿC. Bar mewakili standar deviasi dari 4 ulangan.
suhu 4ÿC. Bar mewakili standar deviasi dari 4 ulangan.
REFERENSI
[1] Aviram M, Rosenblat M, Gaitini D, dkk.

kerusakan sel kulit buah selama pemerasan buah. Kehadiran tanin Konsumsi jus delima selama 3 tahun oleh pasien dengan
adalah masalah utama saat jus diekstrak dari buah utuh. Akibatnya, stenosis arteri karotis mengurangi ketebalan intima-media
timbul rasa pahit yang harus diperbaiki dengan pengolahan industri karotis umum, tekanan darah dan oksidasi LDL. Klinik Nutr.
[15]. Dalam percobaan kami, menurut evaluasi panelis terhadap jus 2004;23(3):423–433.
segar, jus yang diperoleh dengan memeras buah menunjukkan rasa [2] Gil MI, Tomas-Barberan FA, Hess-Pierce B, Hol croft DM,
yang lebih pahit dibandingkan dengan rasa manis jus yang diperoleh Kader AA. Aktivitas antioksidan jus delima dan hubungannya
dengan cara sentrifugasi biji. dengan komposisi dan pengolahan fenolik. Kimia Makanan J
Agric. 2000;48(10):4581–4589.
pH menunjukkan sedikit peningkatan dari waktu ke waktu, lebih
terlihat dari 5 hingga 15 jam setelah ekstraksi (Gambar 9). Tidak ada [3] Kowalczyk E, Kopff A, Fijaÿkowski P, dkk. Efek antosianin pada
perbedaan pH terkait dengan metode yang digunakan untuk ekstraksi parameter biokimia terpilih pada tikus yang terpapar kadmium.
jus. Ini sebagian dapat menjelaskan stabilitas relatif antosianin yang Acta Biochim Pol. 2003;50(2):543–548.
ditemukan dalam jus yang diperoleh dengan kedua metode ekstraksi.
[4] Du CT, Wang PL, Francis FJ. Antosianin buah delima, punica
Kedua metode yang digunakan untuk ekstraksi sari buah delima granatum. Ilmu Makanan J. 1975;40 (2):417–418.
tidak mempengaruhi karakteristik kualitas sari buah yang dievaluasi;
´ ´
yaitu kandungan antosianin, warna sari buah, komposisi asam [5] Maestre J, Melgarejo P, Tomas-Barber dan FA, Garcia- Viguera
organik dan gula, serta nilai pH. Memeras bagian buah yang belum C. Produk makanan baru yang berasal dari buah delima.
dikupas adalah metode yang paling ekonomis dan mudah digunakan. Meditasi Opsi. 2000;42:243–245.
´
Jus yang diperoleh dengan metode tersebut lebih stabil dari waktu [6] Melgarejo P, Salazar DM, Artes F. Komposisi asam organik dan
ke waktu seperti yang ditunjukkan oleh keasaman yang dapat dititrasi gula dari buah delima yang dipanen.
dan penentuan ÿBrix. Keuntungan utama dari metode pemerasan Teknologi Res Makanan Eur. 2000;211(3):185–190.
adalah produksi jus dengan rasa pahit jika diterapkan perawatan [7] Heshi AB, Garande VK, Wagh AN, Katore HS. Pengaruh
tambahan. penyemprotan bahan kimia pra panen terhadap mutu buah
Selain itu, rasa pahit bisa diatasi karena trend produksi jus delima (Punica granatum L) cv G-137.
sebenarnya adalah pencampuran beberapa jus buah. Selain itu, Intisari Ilmu Pertanian. 2001;21(1):25–27.
penggunaan buah delima Assaria dalam campuran jus buah akan [8] Holcroft DM, Gil MI, Kader AA. Efek karbon dioksida pada
bermanfaat bagi kesehatan manusia dalam mengurangi risiko anthocyanin, phenylalanine am monia lyase dan
konsumsi asam oksalat [16]. glucosyltransferase di arils
buah delima yang disimpan. J Amer Soc Hort Sci.

1998;123(1):136–140.
[9] Nanda S, Sudhakar Rao DV, Krishnamurthy S.
Pengaruh pembungkusan shrink film dan suhu
penyimpanan terhadap umur simpan dan kualitas buah
delima cv Ganesh. Biol Technol pascapanen. 2001;22
(1):61–69.
[10] Ozkan M. Degradasi antosianin dalam ceri asam dan
jus delima oleh hidrogen perok ide dengan adanya
asam askorbat tambahan. Makanan Kimia.
2002;78(4):499–504.
[11] Munsell Color Co. Buku Warna Munsell. Koleksi Masalah
Selesai. 1976, Baltimore, MD.
´
[12] Gil MI, Garcia-Viguera C, Art as-Barber
an´ FA.´ Perubahan
es F, Tom ´
pigmentasi jus delima selama pematangan. J Sci
Pangan Agri. 1995;68:77–81. ´
[13] Legua P, Melgarejo P, Martnez M, Hernandez F. Evolusi
kandungan gula dan asam organik dalam tiga kultivar
buah delima (Punica granatum L). Pilihan Medit.
2000;42:99–104.
ÿ
[14] Poyrazoglu E, Gokmen V, Artik N. Asam organik dan

senyawa fenolik dalam buah delima (Punica granatum
L) ditanam di Turki. J Food Compos Anal.
2002;15(5):567–575.
ÿ
[15] Vardin H, Fenercioglu H. Kajian perkembangan teknologi

pengolahan sari buah delima: penjernihan sari buah
delima. Nahrung. 2003;47(5):300–303.
[16] Gregus Z, Klaassen CD. Mekanisme toksisitas. Dalam:

Toksikologi Casarett dan Doull: Ilmu Dasar Racun. New
York, NY: McGraw-Hill; 1996:35–74.

Email: mantunes@ualg.pt
Faks: +351 28 981 8419; Telp: +351 28 980 0100
Konsentrasi antosianin dari "Assaria"

Buah Delima Selamanya Berbeda
Kondisi Penyimpanan Dingin
Graça Miguel, Catarina Fontes, Dulce Antunes,ÿ Alcinda Neves, and Denise Martins
Kampus Gambelas, Fakultas Teknik Sumber Daya Alam, Universitas Algarve, 8005-139 Faro, Portugal
Konsentrasi anthocyanin dalam buah delima “Assaria”, kultivar manis Portugis yang biasanya ditanam di Algarve (Portugal selatan), dipantau selama
penyimpanan dalam kondisi yang berbeda. Buah dipaparkan ke cold storage (5ÿC) setelah perlakuan berikut: penyemprotan dengan lilin;
penyemprotan dengan CaCl2 1,5%; penyemprotan dengan lilin dan CaCl2 1,5%; penutup kotak dengan film polietilen densitas rendah setebal 25
µc. Buah yang tidak diberi perlakuan digunakan sebagai kontrol. Tingkat antosianin dikuantifikasi baik dengan perbandingan dengan standar
eksternal cyanidin 3-rutinosida (berdasarkan luas puncak) atau perhitungan individu dari luas puncak berdasarkan kurva standar masing-masing
jenis antosianin. Lama penyimpanan serta perlakuan buah sebelum penyimpanan mempengaruhi kandungan antosianin total. Kadar tertinggi diamati
pada akhir bulan pertama penyimpanan, kecuali pada buah yang diberi perlakuan CaCl2, dimana nilai maksimal dicapai pada akhir bulan kedua.
Metode kuantifikasi antosianin mempengaruhi hasil akhir.
Ketika antosianin total dihitung sebagai jumlah dari masing-masing pigmen yang diukur berdasarkan kurva standar dari masing-masing jenis
antosianin, diperoleh nilai yang lebih rendah.
PENGANTAR produk [3, 5, 7]. Penerapan berbagai metode ekstraksi antosianin

juga mempengaruhi evaluasi aktivitas antioksidan ekstrak [3].
Delima telah dianggap sebagai spesies pohon buah yang
kurang penting, tetapi meningkatnya permintaan konsumen akan Dalam makalah ini, dua metode kuantifikasi antosianin serta
buah-buahan eksotis serta makanan berkualitas tinggi membuka pengaruh kondisi penyimpanan pada kandungan antosianin dalam
perspektif baru untuk konsumsi spesies tradisional tersebut. Biji jus delima “Assaria” dievaluasi.
delima, bagian buah yang dapat dimakan, kaya akan gula, vitamin,
polisakarida, polifenol, dan mineral [1]. Kandungan minyaknya
rendah dan kaya akan asam lemak tak jenuh ganda (n-3). BAHAN DAN METODE
Buah-buahan dan perawatan

Ekstrak biji delima memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi [2].
Kapasitas antioksidan jus delima komersial tiga kali lebih tinggi Delima manis (Punica granatum kultivator “As saria”) dipanen
dibandingkan anggur merah dan teh hijau [3]. Kualitas antioksidan di kebun di Algarve timur (Portugal). Buah-buahan diangkut, pada
jus delima membuatnya menarik untuk produksi suplemen kesehatan hari yang sama, ke laboratorium di Universitas Algarve. Setelah
dan nutraceutical [2]. seleksi (buah yang sakit, memar, dan terluka ditolak), buah sehat
dengan ukuran dan penampilan yang seragam didistribusikan
Aktivitas antioksidan diduga terkait, sebagian, dengan tiga secara domly ke dalam kotak alveolated dan disimpan dalam 4
anthocyanidins utama yang ditemukan dalam ekstrak biji delima [4]. modalitas penutup buah. Buah-buahan mengalami beberapa
Oleh karena itu evaluasi kandungan antosianin pada produk perlakuan; perlakuan 1: kontrol (tanpa penutup); perlakuan 2:
makanan sangat penting. pelapisan lilin dengan menyemprot buah dengan emulsi lilin
Saat ini, berbagai metode untuk kuantifikasi antosianin digunakan Brillaqua (lilin polietilen (3,8%) (b/b), lak (1,5%) (b/b), dan resin kayu
[5]. Pada sari buah delima, kandungan antosianin biasanya (10%) (b/b), dari Bril laqua, Valencia, Spanyol); perlakuan 3:
ditentukan menurut metode yang dikembangkan oleh Gil et al [6]. menutupi kotak dengan film polietilen densitas rendah 25 µc;
Penerapan berbagai metode dapat mempengaruhi hasil akhir. perlakuan 4: penyemprotan buah CaCl2 1,5% ; perlakuan 5: CaCl2
Selain metode kuantifikasi, kandungan antosianin juga bergantung 1,5% dan emulsi lilin Bril laqua (kombinasi perlakuan 2 dan 4).
pada faktor-faktor seperti spesies, varietas, indeks kematangan,
kondisi musim, jenis pengolahan, atau kondisi penyimpanan
makanan. Buah disimpan pada suhu 5ÿC.

2004:5 (2004) Konsentrasi Antosianin Delima “Assaria”. 339
Saat panen dan bulanan, selama 4 bulan, 10 buah dari 500
setiap ulangan dikeluarkan dan konsentrasi thocyanin diukur.

Untuk setiap titik sampling, ada 4 ulangan. 400
Kuantifikasi antosianin Buah 300

delima dikupas secara manual dan bijinya dicairkan Konsentrasi
antosianin
(mg/
L)
dengan tangan. Tegmina dibuang. Sampel jus (1 mL)

200
disentrifugasi (2 menit pada 10.000 rpm) dan disaring melalui
filter 0,45 µm.
Identifikasi antosianin dilakukan dengan HPLC dengan 100
detektor UV-Vis Beckman 166 (USA), menggunakan kolom
Li-Chrochart 100 RP-18 (diameter ner 25 cm×0.4 cm; ukuran
0
partikel 5 µm, Merck (USA) ). Fase gerak adalah 5% asam
012345
format (A) dan metanol (B) dalam gradien linier dimulai
Waktu (bulan)
dengan 15% B hingga mencapai 35% B dalam 15 menit,
kemudian isokratis hingga 20 menit, dengan laju alir 1 mL/ Kontrol CaCl2
menit . Kromatogram direkam pada serapan 510 nm. Volume Benda brillaqua CaCl2 + lilin
Film polietilen
injeksi adalah 20 µL menggunakan injektor dengan loop 20
µL (Rheodyne, California, USA). Gambar 1. Evolusi konsentrasi antosianin total dalam sari
Antosianin diidentifikasi dengan membandingkan waktu buah delima “Assaria”, selama penyimpanan pada suhu
5ÿC, dihitung dengan perbandingan dengan standar
retensinya dengan standar murni.
eksternal cyanidin 3-rutinoside (Apin Chemicals, UK).
Untuk mengukur konsentrasi total antosianin, dua metode Jumlah total antosianin dalam sampel dihitung sebagai
digunakan. Metode 1: konsentrasi thocyanin dihitung dari
jumlah rata-rata pigmen individu.
daerah puncaknya dalam kromatogram dan dibandingkan
dengan standar eksternal cyanidin-3-rutinoside seperti yang
dilaporkan sebelumnya [6].
Metode 2: antosianin diidentifikasi dan dikuantifikasi secara 250
individual berdasarkan kurva standar masing-masing jenis

antosianin: delphinidin 3, 5-diglukosida (Dp3, 5), del pinidin
200
3-glukosida (Dp3), cyanidin 3, 5-diglukosida (Cy3, 5 ),
cyanidin 3-glucoside (Cy3), pelargonidin 3, 5-diglucoside
(Pg3, 5), dan pelargonidin 3-glucoside (Pg3), pada empat 150
konsentrasi (0,01, 0,02, 0,04, dan 0,08 mg/L). Konsentrasi
antosianin
(mg/
L)
Jumlah total antosianin dalam sampel dihitung sebagai

100
jumlah rata-rata pigmen individu.
HASIL 50
Konsentrasi antosianin total dalam jus delima “Assaria”

0
yang ditentukan dengan dua metode kuantitatif yang
012345
berbeda, metode 1 dan metode 2, dipantau selama 4 bulan
Waktu (bulan)
penyimpanan, disajikan pada Gambar 1 dan 2. Penerapan
dua metode kuantifikasi menghasilkan hasil yang berbeda: Kontrol CaCl2
konsentrasi anthocyanin selalu 2 kali lipat lebih tinggi ketika Benda brillaqua CaCl2 + lilin
cyanidin 3-rutinoside, sebagai standar eksternal, digunakan. Film polietilen
Kedua metode menunjukkan bahwa selama bulan pertama Gambar 2. Evolusi konsentrasi antosianin total dalam sari
penyimpanan terjadi peningkatan kadar antosianin total pada buah delima “Assaria”, selama penyimpanan pada suhu
5ÿC, dihitung dari kurva standar Dp3, 5; DP3; Cy3, 5; Cy3,
semua perlakuan, mencapai nilai maksimal pada akhir bulan
Pg3, 5, dan Pg3. Jumlah total antosianin dalam sampel
pertama penyimpanan kecuali buah yang diberi perlakuan dihitung sebagai jumlah rata-rata pigmen individu.
CaCl2.
Konsentrasi tertinggi ditemukan pada buah yang diperlakukan
dengan lilin, terlepas dari metode kuantifikasi yang digunakan
(masing-masing 439,0 mg/L dan 210,9 mg/L untuk metode
1 dan 2). Pada buah yang diperlakukan dengan CaCl2, dan 2, masing-masing). Pada akhir bulan pertama umur
konsentrasi maksimal antosianin diperoleh hanya setelah simpan, buah ini menunjukkan kadar antosianin paling
dua bulan penyimpanan (307,2 dan 155,4 mg/L, untuk metode 1 rendah (masing-masing 236,5 dan 113,3 mg/L).
Selama penyimpanan bulan kedua, ketiga, dan keempat 160
pada semua perlakuan, kecuali perlakuan CaCl2 , terjadi 140

penurunan kadar antosianin yang signifikan. Kecenderungan yang
120
sama diamati dengan perlakuan CaCl2 pada umur simpan bulan
100
ketiga dan keempat. Namun demikian, jumlah antosianin masih
berada di atas nilai awal pada semua perlakuan. Penurunan
Konsentrasi
antosianin
(mg/
L)
80
terbesar diamati pada perawatan lilin. 60
40
Enam antosianin terdeteksi dalam jus delima "Assaria":
20
delphinidin 3-glukosida (Dp3), cyani din 3-glukosida (Cy3),
pelargonidin 3-glukosida (Pg3), delphinidin 3, 5-diglukosida (Dp3, 0
0 12 34 5
5), cyanidin 3, 5-diglukosida (Cy3, 5), dan pelargonidin 3, 5-
diglukosida (Pg3, 5). Jumlah relatif mereka berbeda di antara Waktu (bulan)
Dp3, 5 Dp3
perawatan.
Cy3, 5 Cy3
Gambar 3a dan 3b mewakili perjalanan waktu konsentrasi Hal 3, 5 Hal3
masing-masing antosianin dalam buah kontrol, masing-masing

menggunakan metode kuantitatif 1 dan 2. Penerapan kedua (sebuah)
metode tersebut menunjukkan bahwa kadar Pg3 dan Pg3,5

sangat rendah dibandingkan antosianin yang tersisa. Metode
kuantifikasi mempengaruhi identifikasi antosianin utama. Jadi,
ketika kadar antosianin dihitung berdasarkan cyanidin 3-rutinoside 160
sebagai standar eksternal, Dp3,5 adalah antosianin utama yang 140
ada dalam sampel (Gambar 3a). Ketika kuantifikasi diperoleh dari
120
kurva standar masing-masing pigmen, Dp3 adalah antosianin
yang mendominasi (Gambar 3b). Dalam kedua metode, profil 100
evolusi antosianin yang sama diamati: akumulasi antosianin yang Konsentrasi

antosianin
(mg/
L)
80
lebih tinggi selama bulan penyimpanan pertama diikuti dengan 60
penurunannya pada bulan-bulan berikutnya.
40
20
Agar hasil lebih mudah diinterpretasikan, selanjutnya 0
dilakukan kuantifikasi antosianin dengan membandingkan luas 012 345
puncak masing-masing antosianin dengan yang diperoleh dari Waktu (bulan)
kurva kalibrasi masing-masing larutan stok standar (metode 2).
Dp3, 5 Dp3
Metodologi ini paling memadai karena komposisi standar
Cy3, 5 Cy3
mendekati komposisi sampel, seperti yang dipersyaratkan dalam Hal 3, 5 Hal3
kimia analitik.
Seperti disebutkan sebelumnya, buah-buahan yang (b)
diperlakukan dengan lilin menunjukkan akumulasi antosianin
terbesar setelah satu bulan penyimpanan (Gambar 4). Di antara Gambar 3. Evolusi delphinidin 3, 5-diglucoside (Dp3, 5),
antho cyanin yang dipantau, Dp3 adalah pigmen utama. Nilai
cyanidin 3, 5-diglucoside (Cy3, 5), pelargonidin 3, 5-
diglucoside (Pg3, 5), delphinidin 3-glucoside (Dp3), cyanidin
maksimal yang dicapai setelah bulan pertama penyimpanan
Konsentrasi 3-glukosida (Cy3), dan pelargonidin 3-glukosida
adalah 81,7 mg/L, dan lebih tinggi dari kontrol dengan 66,5 mg/L (Pg3) dalam jus delima “As saria” dari buah kontrol, selama
(Gambar 3b). penyimpanan pada suhu 5ÿC. (a) Anthocyanin individu
Perlakuan film polietilen juga menginduksi akumulasi besar dihitung dengan perbandingan dengan standar eksternal
Dp3 (58,0 mg/L) selama bulan pertama penyimpanan (Gambar cyanidin 3-rutinoside (Apin Chemicals). (b) Konsentrasi
5). Berlawanan dengan perubahan signifikan pada level Dp3, 5, antosianin dihitung dari kurva standar Dp3,5; DP3; Cy3, 5;
Cy3, Pg3, 5, dan Pg3. Bar mewakili standar deviasi dari empat ulangan.
Cy3, 5, dan Cy3, variasi level Cy3, 5 dari waktu ke waktu lebih
rendah.
Buah yang diberi perlakuan CaCl2 menunjukkan jumlah
antosianin paling rendah (Gambar 6). Seperti disebutkan
sebelumnya, konsentrasi tertinggi terdeteksi pada akhir bulan Bertentangan dengan perlakuan yang dijelaskan di atas di
kedua penyimpanan. Sama halnya dengan perlakuan sebelumnya, mana Dp3 adalah pigmen utama setelah satu bulan penyimpanan,
antosianin utama adalah Dp3. Konsentrasi tertinggi pigmen ini, dua pigmen utama terdeteksi pada buah yang diberi CaCl2 plus
diamati pada akhir bulan kedua penyimpanan, adalah 50,5 mg/L. lilin: Cy3, 5 (46,7 mg/L) dan Dp3 (42,8 mg/L)
(Gambar 7).
2004:5 (2004) Konsentrasi Antosianin Delima “Assaria”. 341
120 80
100
60
80
40
Konsentrasi
antosianin
(mg/
L)
60
Konsentrasi
antosianin
(mg/
L)
40
20
20
0 0
012 345 01234 5
Waktu (bulan) Waktu (bulan)
Dp3, 5 Dp3 Dp3, 5 Dp3

Cy3, 5 Cy3 Cy3, 5 Cy3
Hal 3, 5 Hal3 Hal 3, 5 Hal3
Gambar 4. Evolusi delphinidin 3, 5-diglucoside (Dp3, 5), cyanidin 3, Gambar 6. Evolusi delphinidin 3, 5-diglucoside (Dp3, 5), cyanidin 3,
5-diglucoside (Cy3, 5), pelargonidin 3, 5-diglucoside (Pg3, 5), 5-diglucoside (Cy3, 5), pelargonidin 3, 5-diglucoside (Pg3, 5),
delphinidin 3-glucoside (Dp3), cyanidin Konsentrasi 3-glukosida delphinidin 3-glucoside (Dp3), cyanidin Konsentrasi 3-glukosida
(Cy3), dan pelargonidin 3-glukosida (Pg3) dalam jus delima “As (Cy3), dan pelargonidin 3-glukosida (Pg3) dalam jus delima “As
saria” dari buah yang diberi lilin Brillaqua, selama penyimpanan saria” dari buah yang diberi perlakuan dengan 1,5% CaCl2, selama
pada suhu 5ÿC. Konsentrasi antosianin dihitung dari kurva standar penyimpanan pada suhu 5ÿC. Konsentrasi antosianin dihitung dari
Dp3,5; DP3; Cy3, 5; Cy3, Pg3, 5, dan Pg3. Bar mewakili standar kurva standar Dp3,5; DP3; Cy3, 5; Cy3, Pg3, 5, dan Pg3. Bar
deviasi dari empat repli mewakili standar deviasi dari empat repli
kucing. kucing.
80 60
60
40
40
Konsentrasi
antosianin
(mg/
L)
Konsentrasi
antosianin
(mg/
L)
20
20
0 0
0 12 34 5 0 12 34 5
Waktu (bulan) Waktu (bulan)
Dp3, 5 Dp3 Dp3, 5 Dp3

Cy3, 5 Cy3 Cy3, 5 Cy3
Hal 3, 5 Hal3 Hal 3, 5 Hal3
Gambar 5. Evolusi delphinidin 3, 5-diglucoside (Dp3, 5), cyanidin 3, Gambar 7. Evolusi delphinidin 3, 5-diglucoside (Dp3, 5), cyanidin 3,
5-diglucoside (Cy3, 5), pelargonidin 3, 5-diglucoside (Pg3, 5), 5-diglucoside (Cy3, 5), pelargonidin 3, 5-diglucoside (Pg3, 5),
delphinidin 3-glucoside (Dp3), cyanidin Konsentrasi 3-glukosida delphinidin 3-glucoside (Dp3), cyanidin Konsentrasi 3-glukosida
(Cy3), dan pelargonidin 3-glukosida (Pg3) dalam sari buah delima (Cy3), dan pelargonidin 3-glukosida (Pg3) dalam jus delima “As
“As saria” dari buah-buahan yang ditutup dengan film polietilen, saria” dari buah-buahan yang diberi perlakuan dengan 1,5% CaCl2
selama penyimpanan pada suhu 5ÿC. Konsentrasi antosianin ditambah lilin Brillaqua, selama penyimpanan pada suhu 5ÿC.
dihitung dari kurva standar Dp3,5; DP3; Cy3, 5; Cy3, Pg3, 5, dan Konsentrasi antosianin dihitung dari kurva standar Dp3,5; DP3; Cy3,
Pg3. Bar mewakili standar deviasi dari empat ulangan. 5; Cy3, Pg3, 5, dan Pg3. Bar mewakili standar deviasi dari empat
ulangan.
DISKUSI Namun demikian, sejumlah besar laboratorium yang

melakukan analisis tersebut menggunakan metode
Profil antosianin dari beberapa produk makanan yang mereka sendiri. Fakta ini membuat perbandingan dan
berasal dari buah merah digunakan untuk memverifikasi validasi metode ini sulit. Metode yang paling disarankan
keaslian dan mengontrol kualitas produk tersebut [5]. untuk analisis kromatografi kuantitatif melibatkan persiapan rangkaian
larutan standar yang mendekati komposisi sampel yang tidak dengan cara yang berbeda, membuat efek pengobatan sulit untuk
diketahui. Hal ini tidak terjadi ketika cyanidin-3-rutinoside digunakan ditafsirkan.
dalam metode yang sering digunakan oleh beberapa penulis untuk Selain perlakuan penyimpanan yang sangat penting untuk
kuantifikasi antosianin dalam jus buah delima [6]. Dalam makalah mempertahankan penampilan luar, menunda penuaan, dan
ini, dianggap bahwa penerapan larutan standar masing-masing mengendalikan pembusukan buah delima, mereka juga dapat
antosianin lebih tepat sebagai sampel daripada larutan standar berkontribusi untuk meningkatkan jumlah antosianin selama bulan
cyanidin-3-rutinosida. pertama penyimpanan.
Oleh karena itu, diperoleh hasil dengan membandingkan luas REFERENSI

puncak dengan yang diperoleh dari larutan standar masing-masing
´
antosianin, mempertahankan kondisi pengujian yang sama. [1] Melgarejo P, Artes F. Kandungan lipid total dan komposisi
Antosianin yang terdapat dalam biji delima kultivator “Assaria” asam lemak dari biji minyak dari klon delima manis yang
sama seperti yang sebelumnya diisolasi dan diidentifikasi untuk kurang dikenal. Pertanian Pangan J Sci. 2000;80(10): 1452–
kultivator “Mollar” [6]. Namun, jumlahnya berbeda. Variasi yang 1454.
besar dari jumlah Dp3, 5, Dp3, dan Cy3 tercatat dari waktu ke [2] Singh RP, Murthy KNC, Jayaprakasha GK. Kajian aktivitas
waktu, terlepas dari apakah level Cy3, 5, lebih stabil. Variasi lebih antioksidan ekstrak kulit dan biji buah delima (Punica
terlihat antara waktu panen dan bulan pertama penyimpanan, granatum) menggunakan model in vitro. Kimia Makanan J
ketika tingkat antosianin meningkat tajam, diikuti penurunan sampai Agric. 2002;50(1):81–86.
akhir penyimpanan. Sebelumnya dilaporkan bahwa Dp3, 5 dan [3] Gil MI, Tomas-Barberan FA, Hess-Pierce B, Holcroft DM, Kader
Dp3 merupakan substrat terbaik untuk mengalami oksidasi AA. Aktivitas antioksidan jus delima dan hubungannya dengan
enzimatis pada kultivar buah delima “Mollar” [8]. komposisi dan pengolahan fenolik. Kimia Makanan J Agric.
2000;48(10): 4581–4589.
Ini sebagian dapat menjelaskan penurunan penting yang terdaftar [4] Noda Y, Kaneyuki T, Mori A, Packer L. Aktivitas antioksidan
dalam jumlah anthocyanin ini dalam jus delima "Assaria". ekstrak buah delima dan anto cyanidinnya: delphinidin,
cyanidin, dan pelargonidin. Kimia Makanan J Agric.
Peningkatan jumlah total antosianin selama bulan pertama 2002;50(1):166–171. [5] da Costa CT, Horton D, Margolis SA.
penyimpanan mungkin disebabkan biosintesis lanjutan senyawa Analisis thocyanin dalam makanan dengan kromatografi cair,
fenolik setelah panen, terkait dengan proses pemasakan. kromatografi cair-spektrometri massa dan elektroforesis
Peningkatan konsentrasi antosianin setelah panen dilaporkan kapiler. J Chromatogr A. 2000;881(1-2):403– 410.
sebelumnya pada buah delima [6, 7] dan itu berkorelasi dengan
aktivitas enzim jalur biosintesis antosianin: fenilalanin amonia lyase
(PAL) dan UDP glukosa: flavonoid-3-O-glucosyltransferase (GT). [6] Gil MI, Garc´ÿa-Viguera C, Artes F, Tomás-Barberán´
Namun demikian, dalam jus buah delima yang disimpan dalam FA. Perubahan pigmentasi jus delima selama pematangan.
atmosfer yang berbeda, Holcroft et al [7] mengamati bahwa Pertanian Pangan J Sci. 1995;68:77–81.
peningkatan jumlah antosianin berkorelasi dengan aktivitas PAL [7] Holcroft DM, Gil MI, Kader AA. Pengaruh karbon dioksida pada
tetapi tidak dengan aktivitas GT. anthocyanin, phenylalanine ammonia lyase dan
glucosyltransferase di aril buah delima yang disimpan. J Am
Soc Hortic Sci. 1998;123(1):136– 140.
Pola variasi kandungan antosianin berbeda antar perlakuan
´
selama masa penyimpanan. Nilai terbesar diamati pada perawatan [8] Artes F, Villaescusa R, Tudela J. Pengemasan atmosfer yang
lilin pada akhir bulan pertama tetapi buah dari perawatan tersebut dimodifikasi dari buah delima. Ilmu Makanan J. 2000;65(7):
menunjukkan kandungan terendah sebulan kemudian. Sebaliknya, 1112–1116.
buah yang diberi perlakuan CaCl2 yang menunjukkan nilai terbesar
pada bulan kedua memiliki kandungan terendah pada bulan
pertama.
Email: mantunes@ualg.pt
Oleh karena itu, dengan perlakuan penyimpanan yang tepat, buah Faks: +351 289 818419; Telp: +351 289 800100
dengan kandungan antosianin tinggi dapat diperoleh hingga dua
bulan setelah panen.
Efek dari perlakuan yang berbeda dapat dikaitkan dengan
perubahan atmosfer internal buah. Holcroft et al [7] menunjukkan
bahwa dalam sari buah delima yang disimpan di udara yang
diperkaya dengan CO2, konsentrasi antosianin meningkat seiring
waktu pada buah yang disimpan di udara dan buah yang disimpan
dalam 10 kPa CO2, tetapi tetap stabil selama empat minggu dan
selanjutnya menurun pada buah disimpan dalam 20 kPa CO2.
Dalam pekerjaan kami, perawatan yang digunakan mempengaruhi
mekanisme biokimia berbeda yang dapat mengubah stabilitas antosianin
Jurnal Biomedis dan Bioteknologi • 2004:5 (2004) 343–345 • PII. S111072430440309X • http://jbb.hindawi.com
Ekskresi Cyanidin Glucosides dan

Glucuronides dalam Urin pada Manusia Sehat
Setelah Menelan Jus Elderberry
Roland Bitsch,1ÿ Michael Netzel,1 Susanne Sonntag,1 Gabriele Strass,1 Thomas Frank,3 and Irmgard Bitsch2
1Institut Ilmu Gizi, Universitas Friedrich-Schiller Jena, Dornburgerstrasse 29, 07743 Jena, Jerman
2Institut Ilmu Gizi, Justus-Liebig-University Giessen, Wilhelmstrasse 20, 35392 Giessen, Jerman
3IMFORM GmbH International Clinical Research, Birkenweg 14, 64295 Darmstadt, Jerman
Dalam studi percontohan dengan 6 perempuan dan 1 laki-laki, metabolisme berbagai glukosida cyanidin setelah pemberian oral jus
elderberry diselidiki. Metabolit antosianin terdeteksi dalam ekskresi urin. Setelah konsumsi jumlah bolus 3,57 g antosianin total dalam
konsentrat jus elderberry 150 mL, 0,053% dari dosis yang diberikan diekskresikan dalam urin sebagai sianidin yang terikat secara
glukosida dalam 5 jam pertama. Hanya 0,003% dari glukosida antosianin yang tertelan diekskresikan sebagai cyanidin glucuronide,
menunjukkan bahwa langkah konversi ini mungkin tidak terlalu penting dalam ekskresi urin.
PENGANTAR EKSTRAKSI SAMPEL DAN ANALISIS HPLC
Antosianin, sebagai konstituen beri dan sayuran berwarna Semua bahan kimia dibeli dari Merck (Darm stadt, Jerman).
yang ada di mana-mana, tersebar luas di tanaman. Banyak Analisis HPLC-DAD dari sampel urin (0-5 jam setelah konsumsi)
perhatian telah diberikan dalam beberapa tahun terakhir pada dilakukan sebelum dan sesudah hidrolisis konjugat glukuronida
aktivitas pemulungan radikal mereka secara in vitro dan in vivo dengan ÿ glukuronidase [3, 4, 5, 6]. Antosianin diekstraksi dengan
dan kemungkinan manfaat kesehatan. Anthocyanin utama yang menggunakan kartrid ekstraksi fase padat (Sep PakVac 12,
dianalisis dalam elderberry adalah berbagai cyani din glukosilasi Waters, Milford, Mass). Kartrid pertama kali dicuci dengan 5 mL
(Gambar 1). Selain glukosa, sambubiose adalah konjugat gula metanol dan diseimbangkan dengan volume yang sama dari
khas dalam elderberry [1, 2]. Tingkat dan tingkat penyerapan, asam format berair 5%. Tujuh mL sampel urin yang diencerkan
metabolisme, dan ekskresi antosianin elderberry sampai saat ini dengan 2 mL asam format diaplikasikan pada cartridge yang
belum sepenuhnya dipahami. Pertama-tama, kontroversial diseimbangkan. Setelah dicuci dengan 5 mL asam format 5%,
dibahas sampai sekarang adalah apakah glukuronida terkonjugasi antosianin dielusi dengan asam format 5% dalam 5 mL metanol.
dari cyanidin juga dibentuk dan diekskresikan secara in vivo. Eluat diuapkan hingga kering dalam evaporator putar vakum pada
suhu 30ÿC dan ekstrak dilarutkan kembali dengan fase gerak 200
µL sebelum analisis HPLC. Kondisi kromatografi yang diadopsi
DESAIN BELAJAR dari Netzel et al [3] terdiri dari pemisahan pada Prontosil Eu
robond RP-18 (5 µm, 250 × 4 mm ID, Bischoff, Leonberg, Jerman),
Protokol penelitian telah disetujui oleh Komite Etika dilindungi oleh kolom pelindung (LiChrospher 100 RP-18, 4×4
Universitas Giessen, Jerman. Setelah puasa semalaman, tujuh mm, Merck, Jerman), dan elusi isokratik dengan air/asam format/
sukarelawan sehat yang tidak merokok (6 perempuan dan 1 laki- asetonitril (v/v/v) = 81/10/9 (laju aliran 0,5 mL/menit) dengan
laki dengan BMI rata-rata 21,5) mengonsumsi sejumlah bolus 150 menggunakan pompa berpresisi tinggi ( model L-6200, Merck-
mL jus elderberry pekat (mengandung 3,57 g total antosianin) Hitachi, Darmstadt, Jerman).
untuk digabungkan dengan roti gulung dan keju. Konsentrat jus
elderberry diperoleh dari Wild (Heidelberg, Jerman).
Glukosida cyanidin terdeteksi pada 520 nm dengan bantuan
Sampel urin dikumpulkan pada awalnya dan dalam interval per detektor UV-VIS (L-4200, Merck-Hitachi).
jam selama 5 jam. Konsentrasi konjugat cyanidin yang Glukosida cyanidin yang diekskresikan diidentifikasi dengan
diekskresikan ditentukan dengan analisis HPLC. menambahkan sampel urin kosong dengan senyawa asli dan
membandingkan waktu retensi dalam analisis HPLC dan

OH
OH
KE O+ Antosianin R1 R2
H Cyanidin 3-sam-5-gluc Sambubiose Glukosa
Cyanidin 3, 5-digluc Glukosa Glukosa
Cyanidin 3-sam Sambubiose H
HAI
Cyanidin 3-gluc Glukosa H
R1
HAI
R2
Gambar 1. Struktur kimia anthocyanin elderberry.
Tabel 1. Ekskresi anthocyanin dalam urin sebagai glukosida dan glukuronida yang tidak berubah setelah konsumsi jus elderberry (berarti ± SD).
Dosis Ekskresi total (glikosida + glukuronida) (mg/5 jam) Ekskresi glukoronida

Antosianin
(mg/subjek) (%)2 (mg/5 jam) (%)2
3, 5-digluc1 3- 215.0 0,313 ± 0,227 0,145 ± 0,105 0,032 ± 0,021 0,015 ± 0,010
sam 3-gluc 2245.8 0,962 ± 0,521 0,043 ± 0,023 0,045 ± 0,024 0,002 ± 0,001
1108.2 0,601 ± 0,321 0,054 ± 0,029 0,038 ± 0,025 0,003 ± 0,002
jumlah 3569.0 1,876 ± 1,063 0,053 ± 0,030 0,116 ± 0,049 0,003 ± 0,001
1Jumlah cya-3-sam-5-gluc dan cya-3, 5-digluc dihitung sebagai cya-3, 5-digluc.

2Dihitung sebagai rasio jumlah yang diekskresikan (dalam 5 jam) terhadap jumlah/dosis yang tertelan.
1400
sianin (glukosida sianidin yang tidak berubah dan konjugat
1200
glu kuronidanya) dalam waktu 5 jam adalah 0,053 ± 0,030%
1000
dari dosis yang diberikan. Hanya 6,2 ± 2,2% dari jumlah yang
800
ekskresi
jam)
Laju
(µg/
diekskresikan terdiri dari glukuronida. Berdasarkan pemulihan

600
ini, persentase glukuronida dalam ekskresi urin adalah 0,003
400
± 0,001% (dihitung sebagai rasio glukuronida antosianin
200 yang diekskresikan dengan glukosida antosianin yang tertelan).
Pola ekskresi anthocyanin total pada Gambar 2 menunjukkan
0 0123456
bahwa tingkat ekskresi maksimal dicapai 1 jam setelah
Waktu (jam)
asupan, diikuti dengan penurunan cepat ke nilai awal sekitar
Antosianin (total) 5 jam setelah asupan, menyerupai kinetika ekskresi orde
Glukuronida pertama.
Gambar 2. Plot perjalanan waktu (rata-rata ± SD) total antosianin (glukosida Konversi metabolik anthocyanin dalam organisme masih
+ glukuronida) dan antosianin glukuronida dalam urin manusia setelah harus dijelaskan. Pada prinsipnya, glucuronidation atau
menelan 150 mL jus elderberry. konjugasi dengan asam sulfat merupakan langkah
metabolisme akhir yang umum untuk memfasilitasi ekskresi urin.
Berbagai produk konversi metabolisme antosianin ditemukan
oleh beberapa penulis. Tsuda et al [7] tidak menemukan
spektrum UV-terlihat. Kurva standar disiapkan untuk
cyanidin glucuronides di hati dan ginjal tikus setelah
kuantifikasi sebelum prosedur persiapan. Batas deteksi (S/N
pemberian cyanidin 3-glikosida secara oral, tetapi cyanidin
ÿ 10) adalah antara 0,13 ng dan 0,60 ng/volume injeksi (100
diubah menjadi peonidin dan asam protocatechuic.
µL). Aliquot dari setiap sampel urin diasamkan dengan asam Situasi yang berbeda tampaknya ada sampai saat ini
format (2 mL/0,2 mL) dan disimpan beku pada suhu -80ÿC
pada manusia. Dalam ekskresi urin wanita lanjut usia,
sampai analisis.
sejumlah kecil glukoronida peonidin dan cyanidin 3-glukosida
dapat dideteksi pada setengah dari sukarelawan selain
HASIL DAN DISKUSI glukosida yang tidak berubah setelah konsumsi elderberry,
yang sesuai dengan hasil kami [2, 5]. Namun, hanya
Konjugat antosianin yang dianalisis dalam urin ditunjukkan glukosida anthocyanin elderberry yang dapat ditemukan
pada Tabel 1. Ekskresi urin total antho dalam plasma dan urin sukarelawan oleh penulis lain [8, 9].
2004:5 (2004) Ekskresi Glukosida Sianidin dan Glukuronida melalui Urin 345
4000 ter konsumsi jus blackcurrant. J Environ Pathol Toxicol Oncol.

3500 2001;20(2):89–95.
3000 [4] Bub A, Watzl B, Heeb D, Rechkemmer G, Briviba K.
Ketersediaan hayati Malvidin-3-glukosida pada manusia
2500
setelah konsumsi anggur merah, anggur merah yang di-
diekskresikan
Jumlah
yang
jam)
(µg/
5
2000
dealkoholisasi, dan jus anggur merah. Eur J Nutr. 2001;40(3):113–120.
1500
1000 anthocyanin pada wanita lanjut usia setelah konsumsi elderberry
500 atau blueberry. J Nutr. 2002;132(7):1865–1871.
0
12 34 5 67 [6] Andlauer W, Stumpf C, Frank K, Furst P. Penyerapan dan
Relawan metabolisme antosianin cyanidin-3-glukosida dalam usus halus
tikus yang diisolasi tidak dipengaruhi oleh etanol. Eur J Nutr.
Antosianin (total)
2003;42(4):217–223.
Glukuronida
[7] Tsuda T, Horio F, Osawa T. Penyerapan dan metabolisme
Gambar 3. Jumlah individu yang diekskresikan dari total
cyanidin 3-O-beta-D-glucoside pada tikus. FEB Lett.
antosianin (glukosida + glukuronida) dan antosianin
1999;449(2-3):179–182.
glukuronida dalam waktu 5 jam setelah menelan 150 mL jus elderberry.
[8] Milbury PE, Cao G, Prior RL, Blumberg J. Kemampuan bioavail
antosianin elderberry. Mech Aging Dev. 2002;123(8):997–1006.
Untuk sepenuhnya memperkirakan tingkat glukuronidasi [9] Mulleder U, Murkovic M, Pfannhauser W. Ekskresi glikosida
antosianin sebagai nasib metabolik, harus dipertimbangkan bahwa cyanidin melalui urin. Metode J Biochem Biophys. 2002;53(1–
selain ekskresi urin, sekresi empedu juga dapat berfungsi sebagai 3):61–66.
cara eliminasi yang mungkin, terutama yang dikenal dengan [10] Bitsch I, Janssen M, Netzel M, Strass G, Frank T. Bioavailabilitas
glukuronida. Studi yang lebih baru, bagaimanapun, mengungkapkan anthocyanidin-3-glikosida setelah konsumsi ekstrak elderberry
bahwa setelah asupan ekstrak elderberry, pola identik glukosilasi dan jus blackcurrant. Int J Clin Pharmacol Ada. 2004;42(5):293–
cyanidin dapat dideteksi dalam plasma seperti dalam urin [10]. Dengan 300.
demikian, hasil kuantifikasi produk ekskresi dalam penelitian ini
menunjukkan bahwa, setidaknya dalam kisaran dosis yang diberikan, [11] Felgines C, Talavera S, Gonthier MP, dkk. Antosianin stroberi
glukuronidasi cyani din jelas menunjukkan langkah konversi yang ditemukan dalam urin sebagai glukuro- dan sulfokonjugat pada
dapat diabaikan dalam metabolisme cyanidin yang tertelan dari manusia. J Nutr. 2003;133(5):1296–1301.
elderberry.
Proporsi konjugat glukuronida tampaknya mewakili proporsi yang [12] Scalbert A, Williamson G. Asupan makanan dan bioavailabilitas
agak konstan tetapi sangat kecil terlepas dari perbedaan antar polifenol. J Nutr. 2000;130(8S suppl):2073S–2085S.
individu dari total ekskresi antosianin (Gambar 3). Ini mungkin
berbeda dengan buah-buahan lain seperti antosianin stroberi, yang
sebagian besar diekskresikan dalam urin sebagai glukuronida selain
sejumlah kecil sulfokonjugat [11]. Tetap menunjukkan sejauh mana
Email: roland.bitsch@uni-jena.de Faks:
tingkat dosis yang diberikan menentukan tempat metabolisme. Ada +49 3641 949632; Telp: +49 3641 949630
beberapa bukti bahwa polifenol dosis besar terutama dimetabolisme
di hati, sedangkan dosis kecil dapat dimetabolisme oleh mukosa usus,
dengan hati memainkan peran sekunder untuk memodifikasi lebih
lanjut konjugat polifenol [12].
REFERENSI
[1] Murkovic M, Toplak H, Adam U, Pfannhauser W.

Analisis antosianin dalam plasma untuk menentukan
bioavailabilitasnya. Jurnal Komposisi dan Analisis Pangan.
2000;13:291–296.
[2] Cao G, Muccitelli HU, Sanchez-Moreno C, Sebelumnya RL.
Antosianin diserap dalam bentuk terglikasi pada wanita lanjut
usia: studi farmakokinetik. Am J Clin Nutr. 2001;73(5):920–926.
[3] Netzel M, Strass G, Janssen M, Bitsch I, Bitsch R.

Antosianin bioaktif terdeteksi dalam urin manusia af

Antosianin-Lebih Dari Warna Alam: Editor Tamu: Izabela Konczak Dan Wei Zhang

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Antosianin-Lebih Dari Warna Alam: Editor Tamu: Izabela Konczak Dan Wei Zhang

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Machine Translated by Google

Jurnal Biomedis dan Bioteknologi

Antosianin—Lebih dari Warna Alam

Jurnal Biomedis dan Bioteknologi

Antosianin—Lebih dari Warna Alam

Jurnal Biomedis dan Bioteknologi

Antosianin—Lebih dari Warna Alam

Hak Cipta © 2004 Hindawi Publishing Corporation. Seluruh hak cipta.

Redaktur Pelaksana Pendiri

Antosianin—Lebih dari Warna Alam, Izabela Konczak dan Wei Zhang

Profiling LC/PDA/ESI-MS dan Aktivitas Pemulungan Radikal Anthocyanin di Berbagai Berries,

Mekanisme Molekuler Di Balik Efek Kemopreventif Anthocyanidins, De-Xing Hou,

Antosianin—Lebih dari Warna Alam

© 2004 Hindawi Publishing Corporation

240 I. Konczak dan W. Zhang 2004:5 (2004)

Izabela Konczak adalah seorang Ilmuwan

Pembuatan Profil LC/PDA/ESI-MS dan Pembersihan Radikal

1Departemen Biologi Molekuler dan Bioteknologi, Sekolah Pascasarjana Ilmu Farmasi,

Diterima 2 April 2004; direvisi 23 Juni 2004; diterima 29 Juni 2004

© 2004 Hindawi Publishing Corporation

242 Jun-ichiro Nakajima dkk 2004:5 (2004)

2004:5 (2004) Anthocyanin dalam Berbagai Berries 243

jam (menit) jam (menit)

244 Jun-ichiro Nakajima dkk 2004:5 (2004)

8 alents per 100 mg bubuk setelah hidrolisis ditentukan sebagai

246 Jun-ichiro Nakajima dkk 2004:5 (2004)

2004:5 (2004) Anthocyanin dalam Berbagai Berries 247

[17] Yamazaki M, Nakajima J, Yamanashi M, dkk.

[21] Wu X, Cao G, Sebelumnya RL. Penyerapan dan metabolisme

[22] Kaack K, Austed T. Interaksi vitamin C dan flavonoid dalam

[23] Yamazaki M, Gong Z, Fukuchi-Mizutani M, dkk.

[25] RL sebelumnya, Cao G, Martin A, dkk. Kapasitas

ÿ Penulis yang sesuai.

Perubahan Total Antosianin pada Blueberry dan

Virachnee Lohachoompol, George Srzednicki,ÿ dan John Craske

Diterima 26 April 2004; direvisi 11 Juni 2004; diterima 29 Juni 2004

PENGANTAR Konsumsi blueberry liar, sumber makanan dengan sifat

© 2004 Hindawi Publishing Corporation

2004:5 (2004) Antosianin dalam Blueberry dan Efek Antioksidannya 249

sifat perbaikan, dan penghambatan karsinogenesis dan 1

mutagenesis [12]. Dengan demikian, tujuan dari penelitian ini 0,8

Sampel 0 260 310 360 410 460 510 560 610

Panjang gelombang (nm)

250 Virachnee Lohachoompol dkk 2004:5 (2004)

Tabel 1. Kandungan antosianin pada sampel yang dievaluasi. 100

Jumlah antosianin mg/g 80

2004:5 (2004) Antosianin dalam Blueberry dan Efek Antioksidannya 251

Tabel 2. Nilai rata-rata kemiringan ekstrak blueberry. REFERENSI

Lerengÿ [1] Pigmen J. Kotor dalam Buah. London: Pers Akademik;

FZ3M ÿ0,0145b [4] Wang H, Cao G, Sebelumnya RL. Kapasitas penyerapan

segar. sel tumor oleh anthocyanin in vitro. Bisa cer Invest.

ekstrak antosianin sampel beku atau kering dengan buah segar.

252 Virachnee Lohachoompol dkk 2004:5 (2004)

[19] Kalt W, McDonald JE, Donner H. Antosianin, fenolik, dan

[20] RL sebelumnya, Cao G, Martin A, dkk. Kapasitas

[23] Sebelumnya RL, Lazarus SA, Cao G, Muccitelli H, Ham

ÿ Penulis yang sesuai.

Sour Cherry (Prunus cerasus L) Antosianin

Federica Blando,1ÿ Carmela Gerardi,1 dan Isabella Nicoletti2

1Institut Ilmu Produksi Pangan, CNR, 73100 Lecce, Italia

Diterima 19 April 2004; direvisi 10 Juni 2004; diterima 15 Juni 2004

© 2004 Hindawi Publishing Corporation

254 Federica Blando dkk 2004:5 (2004)