LAPORAN PRAKTIKUM

Uji Kualitatif dan Kuantitatif Fitokimia Ekstrak Daun Pandan (Pandanus

amaryllifolius) Secara In Vitro dan Kromatografi Lapis Tipis

Laporan ini diselesaikan guna memenuhi syarat mengikuti praktikum

Mata Kuliah : Fitokimia I
Dosen Pengampu : apt. Kharisma Jayak Pratama, S. Farm., M. Farm.

Disusun Oleh:

1. Iknacia Syahadatun (210209072)

2. Muhammad Aminnulloh (210209080)
3. Muhammad Fathur Rifai (210209081)
4. Mutia Della Citra Anggraeni (210209082)
5. Nashruddin Hanif (210209083)
6. Novita Prasetiani (210209085)

LABORATORIUM BAHAN ALAM

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI
FAKULTAS ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS DUTA BANGSA SURAKARTA
Tahun Ajaran 2022/2023
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Hipertensi merupakan salah satu faktor resiko utama untuk penyakit
jantung koroner, kejadian stroke, gagal ginjal kronik, dan gagal jantung kongestif
(Supari, 2003). Menurut pengamatan WHO selama 10 tahun terakhir, terlihat
bahwa jumlah penderita hipertensi yang dirawat di berbagai rumah sakit
meningkat lebih dari 10 kali lipat (Kodim, 2001). Gejala yang sering ditemukan
pada peninggian tekanan darah adalah sakit kepala, epistaksis, marah, telinga
berdengung, rasa berat di tengkuk, sukar tidur, mata berkunangkunang, dan
pusing (Mansjoer dkk., 2001).
Tujuan pengobatan hipertensi adalah untuk mencegah terjadinya
morbiditas dan mortalitas akibat tekanan darah tinggi dengan menurunkan
tekanan darah serendah mungkin sampai tidak mengganggu fungsi ginjal, otak,
jantung, maupun kualitas hidup, sambil dilakukan pengendalian faktor-faktor
resiko kardiovaskuler lainnya (Setiawati dan Bustami, 1995). Penyakit hipertensi
juga merupakan penyakit degenerative yang perlu obat seumur hidup sampai
masyarakat bosan menggunakan obat kimia sehingga sekarang masyarakat mulai
beralih ke terapi herbal (back to nature). Indonesia memiliki keanekaragaman
hayati yang melimpah dan beraneka ragam terutama dalam bidang pertanian salah
satunya adalah tanaman daun pandan wangi (Pandanus amarylifolius Roxb).
Dalam lingkungan masyarakat saat ini daun pandan hanya dimanfaatkan sebagai
bahan untuk pengaroma dan pewarna makanan, kebanyakan masyarakat hanya
memanfaatkan daun pandan untuk bahan makanan saja akan tetapi setelah
ditemukan hasil penelitian fitokimia dari daun pandan memiliki kandungan
flavonoid yang dapat berkhasiat sebagai antihipertensi, selain kandungan senyawa
metabolit sekunder flavonoid terdapat juga kandungansenyawa metabolit
sekunder yang lain diantaranya alkaloid, tanin dan saponin masing- masing dari
semua metabolit sekunder tersebut mempunyai khasiat ataupun kegunaan sebagai
obat sehingga bisa digunakan untuk pengobatanherbal dalam lingkungan
masyarakat. Tanaman daun pandan wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb)
termasuk famili Pandanaceae genus Pandanus. Daun pandan wangi tumbuh di
daerah tropis dan merupakan tanaman perdu tahunan dengan tinggi 1-2 m. Batang
bulat dengan bekas duduk daun, bercabang, menjalar, akar tunjang keluar di
sekitar pangkal batang dan cabang. Daun tunggal, duduk dengan pangkal
memeluk batang, tersusun berbaris tiga dalam garis spiral. Helai daun berbentuk
pita tipis, licin, ujung runcing, tepi rata. Daun pandan wangi banyak digunakan
sebagai pemberi cita rasa dan zat pewarna pada makanan dan minuman
tradisional. Komponen penyusun aroma daun pandan wangi berwarna kuning
sebagai hasil oksidasi pigmen karotenoid. Masyarakat India menggunakan ekstrak
daunnya sebagai perasa makanan sementara ekstrak akar daun pandan digunakan
untuk menyembuhkan masalah tiroid. Orang Taiwan selalu menggunakan
tanaman daun pandan untuk menghilangkan demam. Terlebih itu, Geneva based
International Standards Organization.

1.2. Rumusan Masalah

Adapun beberapa rumusan masalah pada praktikum ini:
a. Apa yang dimaksud dengan ekstraksi?
b. Bagaimana kita dapat mengetahui tanaman daun pandan memiliki
senyawa metabolit sekunder?
c. Bagaimana kita dapat memastikan jika suatu senyawa metabolit sekunder
ada pada tanaman daun pandan?
d. Apa yang akan kalian lakukan setelah mengetahui kandungan senyawa
metabolit sekunder dari daun pandan?

1.3. Tujuan
Adapun tujuan dari praktikum ini:
a. Untuk mengetahui proses dari ekstraksi dengan menggunakan metode
infundasi
b. Untuk mengetahui kandungan senyawa metabolit sekunder yang ada pada
daun pandan menggunakan uji kualitatif fitokimia
c. Untuk memastikan suatu senyawa metabolit sekunder tersebut benar-
benar ada pada tanaman daun pandan menggunakan uji kromatografi lapis
tipis
d. Untuk mengetahui khasiat dari senyawa metabolit sekunder yang
didapatkan dari ekstrak daun pandan

1.4. Manfaat
Adapun manfaat yang akan didapatkan dari praktikum ini:
a. Mahasiswa dapat mengetahui cara ekstraksi dengan metode infundasi
b. Mahasiswa dapat mengetahui cara melihat kandungan senyawa metabolit
sekunder pada suatu tanaman
c. Mahasiswa dapat mengetahui dengan pasti bahwa senyawa metabolit
sekunder yang diinginkan itu ada pada tanaman yang digunakan
d. Mahasiswa dapat mengetahui khasiat dari senyawa metabolit sekunder
yang terdapat pada suatu tanaman dengan melakukan penelitian
selanjutnya
 BAB II
LANDASAN TEORI

Ekstraksi adalah pemisahan satu atau beberapa bahan dari suatu padatan
atau cairan dengan bantuan pelarut. Ekstraksi juga merupakan proses pemisahan
satu atau lebih komponen dari suatu campuran homogen menggunakan pelarutcair
(solven) sebagai separating agen. Pemisahan terjadi atas dasar kemampuan larut
yang berbeda dari komponen-komponen dalam campuran. Komponen-komponen
kimia yang terkandung di dalam bahan organik seperti yang terdapat di dalam
tumbuh-tumbuhan sangat dibutuhkan oleh keperluan hidup manusia, baik
komponen senyawa tersebut digunakan untuk keperluan industri maupun untuk
bahan obat-obatan. Komponentersebut dapat diperoleh denganmetode ekstraksi
dimana ekstraksi merupakan proses pelarutan komponen kimia yang sering
digunakan dalam senyawa organik untuk melarutkan senyawa tersebut dengan
menggunakan suatu pelarut. (Muhiedin, 2008). Infudasi adalah proses penyarian
yang digunakan untuk menyari zat kandungan aktif yang larut dalam air dari
bahan-bahan nabati. Prinsip infundasi yaitu ekstraksi dengan pelarut air pada
temperature penangan air (bejna infusa tercelup dalam penangan air mendidih,
temperature terukur 96-98oC) selama waktu 15-20 menit.
Fitokimia atau fitonutrien merupakan komponen-komponen pada
tumbuhan (buah dan sayuran) yang tidak termasuk kedalam zat gizi, tetapi
mempunyai peranan yang sangat penting bagi kesehatan (Sirait, 2007). Pengujian
fitokimia dilakukan untuk menentukan ciri senyawa aktif penyebab efek racun
ataupun efek yang bermanfaat, dimana ditunjukkan oleh ekstrak tumbuhan kasar
yang diuji dengan sistem biologis (Robinson, 1991).
Kromatografi lapis tipis (Thin-layer chromatography/TLC) merupakan
teknik kromatografi yang berguna untuk memisahkan senyawa organik. Karena
kesederhanaan dan kecepatan TLC, sering digunakan untuk memantau kemajuan
reaksi organik dan untuk memeriksa kemurnian produk. Kromatografi Lapis Tipis
(KLT) dalam penelitian pada umumnya dan dalam fitokimia khususnya.
Kromatografi lapis tipis adalah teknik kromatografi planar sederhana, hemat
biaya, dan mudah dioperasikan yang telah digunakan di laboratorium kimia umum
selama beberapa dekade untuk memisahkan senyawa kimia dan biokimia secara
rutin. Secara tradisional, metode kimia dan optik digunakan untuk
memvisualisasikan bintik analit pada pelat TLC. Juga memiliki aplikasi luas
dalam mengidentifikasi kotoran atau ketidakmurnian dalam senyawa. Studi
menyoroti ulasan tentang KLT dan penerapan estimasi kualitatif dan kuantitatif
senyawa bioaktif dari tanaman obat.
Daun pandan mengandung senyawa metabolik skunder yaitu, alkaloida,
steroid atau triterpenoid, flavonoida, saponin, dan fenol hidrokuinon yang
merupakan senyawa kimia pertahanan yang dihasilkan oleh tumbuhan di dalam
jaringan tumbuhannya, senyawa tersebut bersifat toksik dan berfungsi sebagai alat
perlindungan diri dari gangguan hama (Dalimartha, 2009).
Tujuan dari percobaan ini adalah untuk mengetahui ada tidaknya
komponen bioaktif pada sampel uji. Prinsip pada percobaan ini yaitu mengetahui
ada atau tidaknya komponen bioaktif pada sampel uji. Sampel uji yang digunakan
berupa daun pandan segar yang telah dikeringkan dan dihaluskan. Uji yang
dilakukan bersifat kualitatif dan kuantitatif, sehingga data yang dihasilkan juga
bersifat kualitatif dan kuantitatif. Metode yang digunakan yaitu skrining fitokimia.
Uji kualitatif yang digunakan pada percobaan ini adalah uji alkaloid, steroid atau
triterpenoid, saponin, dan fenol hidrokuinon. Lalu uji kuantitatif yang digunakan
pada percobaan ini yaitu kromatografi lapis tipis.
 BAB III
METODOLOGI PERCOBAAN

3.1. Alat
1. Panci Infus (1) 11. Rak Tabung Reaksi (1)
2. Termometer (1) 12. Pipet tetes (2)
3. Kompor Listrik (1) 13. Bunsen (1)
4. Corong (1) 14. Penjepit Tabung Reaksi (1)
5. Beaker glass Iwaki 100ml (1) 15. Chamber KLT (1)
6. Kain Flanel (1) 16. Pinset (1)
7. Batang Pengaduk (1) 17. Plat KLT (1)
8. Botol wadah (1) 18. Pipa Kapiler (1)
9. Tabung Reaksi (6) 19. Mesin Biosensor UV (1)
10. Gelas Ukur Iwaki 10ml (2) 20. Penggaris (1)

3.2. Bahan
1. Serbuk Daun Pandan 8. Asam Sulfat Pekat
2. Aquadest 9. Asam Klorida 2N
3. Asam Sulfat 2N 10. Etanol 70%
4. Pereaksi Meyer 11. FeCl3 5%
5. Pereaksi Wagner 12. Quarsetin
6. Kloroform 13. Methanol
7. Anhidrida Asetat

3.3. Prosedur kerja

Uji Kualitatif

Skrining
Fitokimia

Uji Steroid atau Uji Fenol

Uji Alkaloid Uji Saponin
Triterpenoid Hidrokuinon

1. Uji Alkaloid
a. Menambahkan 0,5g sampel kedalam 2 tabung reaksi dan dilarutkan
dalam asam sulfat 2N
b. Menambahkan pereaksi Meyer kedalam tabung 1 dan pereaksi Wagner
kedalam tabung 2
 c. Mengamati ada tidaknya endapan berwarna yang terjadi (Reaksi positif
jika pada tabung 1 terdapat endapan putih kekuningan dan tabung 2
terdapat endapan coklat)
2. Uji Steroid atau Triterpenoid
a. Menambahkan 0,5g sampel kedalam tabung reaksi dan dilarutkan
dalam 2ml kloroform
b. Menambahkan 10 tetes anhidrida asetat dan 3 tetes asam sulfat pekat
c. Mengamati perubahan warna yang terjadi (Reaksi positif mengandung
steroid jika larutan berubah warna dari merah menjadi biru atau hijau
dan Reaksi positif mengandung Triterpenoid jika terdapat lapisan
ditengah berwarna coklat)
3. Uji Saponin
a. Menambahkan 0,5g sampel kedalam tabung reaksi dan dilarutkan
dalam asam klorida 2N
b. Memanaskan larutan dalam penangas air selama 30 menit
c. Mengamati ada tidaknya busa yang terbentuk (Reaksi positif jika
terdapat busa yang bertahan ±5 menit)
4. Uji Fenol Hidrokuinon
a. Menambahkan 0,5g sampel kedalam tabung reaksi dan dilarukan
dalam 10ml etanol 70% lalu didiamkan selama 30 menit
b. Mengambil 1ml dari larutan sebelumnya dan memasukkan kedalam
tabung reaksi yang baru
c. Menambahkan 2 tetes FeCl3 5%
d. Mengamati perubahan yang terjadi (Reaksi positif jika larutan berubah
warna menjadi hijau/hijau kebiruan)

Uji Kuantitatif

Kromatografi Lapis Tipis

1. Uji Kromatografi Lapis Tipis

a. Memberi tanda garis pada plat KLT atas dan bawah dengan ukuran
yang sama
b. Membuat fase gerak/eluen dengan mencampurkan kloroform dan
methanol dengan perbandingan (9,5 : 0,5) dalam chamber KLT
c. Memasukkan kertas saring Panjang untuk mengetahui kejenuhan dari
fase gerak/eluen yang dibuat (hasil dikatakan jenuh jika terdapat
kenaikan eluen pada kertas saring)
d. Menotolkan quarsetin (baku flavonoid) pada plat KLT bagian kiri dan
sampel dibagian kanan
e. Jika sudah jenuh, memasukkan plat KLT yang telah diberikan
penotolan kedalam chamber KLT dan tunggu hingga eluen mengalami
kenaikan (proses fase gerak dihentikan jika eluen hampir mencapai
batas atas plat KLT)
f. Setelah itu, melakukan pengecekan noda dibawah sinar UV pada
gelombang 366 nm
g. Mengamati warna dan kenaikan kedua totolan (quarsetin dan sampel)
h. Menandai noda menggunakan pensil dan menghitung nilai Rf nya
untuk mengetahui bahwa sampel tersebut sama dengan baku yang
memiliki senyawa flavonoid
 BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Hasil Percobaan

Tabel hasil skrining fitokimia
Nama Uji Pereaksi Pengamatan Hasil Keterangan
Alkaloid +Asam sulfat Ada endapan (+) Positif
2N, +Meyer, putih mengandung
+Wagner kekuningan senyawa
alkaloid
Ada endapan
coklat
Steroid atau +Kloroform, Ada lapisan (+) Positif
Triterpenoid +Anhidrida warna coklat mengandung
asetat, di antara 2 senyawa
+Asam sulfat fase triterpenoid
pekat
Saponin +Asam Tidak ada (-) Negatif
klorida 2N busa mengandung
saponin
Fenol +Etanol 70%, Tidak terjadi (-) Negatif
Hidrokuinon +FeCl3 5% perubahan mengandung
fenol
hidrokuinon

Hasil Uji Kromatografi Lapis Tipis

Perhitungan nilai Rf quarsetin:
4,4𝑐𝑚
Rf = 4,5𝑐𝑚 = 0,97 nm
Perhitungan nilai Rf sampel daun pandan:
Tidak diketahui (-)

4.2. Pembahasan
Pada percobaan kali ini, kami melakukan uji kualitatif dan
kuantitatif fitokimia dari ekstrak daun pandan yang di ekstrak menggunakan
metode infundasi. Uji kualitatif fitokimia yang kami lakukan meliputi
skrining fitokimia senyawa metabolit sekunder alkaloid, steroid atau
triterpenoid, saponin, dan fenol hidrokuinon. Sedangkan uji kuantitatif yang
kami lakukan meliputi uji kromatografi lapis tipis.
Pada hasil uji kualitatif fitokimia yang meliputi skrining fitokimia
senyawa metabolit sekunder alkaloid, steroid atau triterpenoid, saponin dan
fenol hidrokuinon. Pada hasil uji alkaloid dikatakan positif mengandung
senyawa alkaloid dengan pembuktian saat praktikum yaitu ditandai dengan
adanya endapan putih kekuningan pada tabung yang di isi dengan pereaksi
meyer dan adanya endapan coklat pada tabung yang di isi dengan pereaksi
wagner. Pada hasil uji steroid atau triterpenoid dikatakan positif
mengandung senyawa triterpenoid dengan pembuktian saat praktikum yaitu
ditandai dengan adanya lapisan berwarna coklat diantara 2 fase yang
terbentuk. Pada hasil uji saponin dan fenol hidrokuinon dikatakan negatif
mengandung senyawa saponin dan fenol hidrokuinon karena pada saat
praktikum hasil yang didapatkan yaitu tidak adanya busa yang dihasilkan
saat pemanasan dan tidak terjadi perubahan warna menjadi hijau atau hijau
kebiruan, hal ini kemungkinan terjadi pada uji saponin karena pemanasan
yang dilakukan yaitu menggunakan bunsen dalam kurun waktu yang tidak
lama dan hasil positif mungkin bisa didapatkan jika pemanasan
menggunakan penangas air dalam kurun ±30 menit. Dan kemungkinan hal
yang menyebabkan gagalnya pada uji saponin dan fenol hidrokuinon ini
yaitu pada sampel ekstrak daun pandan yang digunakan, karena pembuatan
ekstrak daun pandan dengan metode infundasi ini dilakukan 2 minggu
sebelum praktikum skrining fitokimia dilaksanakan, maka dari itu bisa
menjadi pemicu gagalnya pada uji saponin dan fenol hidrokuinon ini.
Kemungkinan lain karena rusaknya senyawa saponin dan fenol hidrokuinon
yang ada didalam ekstrak daun pandan yang disebabkan oleh penyimpanan
pada suhu ruang yang tidak menentu suhunya, jadi potensi terjadi kerusakan
pada senyawa metabolit sekunder saponin dan fenol hidrokuinon ini bisa
saja terjadi. Hal ini juga diperkuat dengan literatur dari (Dalimartha, 2009)
yang menyatakan dalam penelitiannya bahwa daun pandan mengandung
senyawa metabolik skunder yaitu, alkaloida, steroid atau triterpenoid,
flavonoida, saponin, dan fenol hidrokuinon yang merupakan senyawa kimia
pertahanan yang dihasilkan oleh tumbuhan di dalam jaringan tumbuhannya,
senyawa tersebut bersifat toksik dan berfungsi sebagai alat perlindungan diri
dari gangguan hama.
Pada hasil uji kuantitatif fitokimia yang meliputi uji kromatografi
lapis tipis dilakukan untuk mengetahui adanya senyawa metabolit sekunder
flavonoid pada ekstrak daun pandan yang digunakan. Pada praktikum
kromatografi lapis tipis ini digunakan sampel bahan quarsetin sebagai
senyawa baku flavonoid pembanding dari sampel uji ekstrak yang
digunakan, hasil positif jika sampel uji memiliki kenaikan yang sama atau
mendekati dengan sampel quasetin. Pada hasil uji kromatografi lapis tipis
ini, dikatakan sampel uji ekstrak daun pandan negatif mengandung senyawa
flavonoid, karena tidak adanya kenaikan noda pada totolan sampel uji
ekstrak daun pandan. Akan tetapi jika dilihat dari warnanya, sampel uji
ekstrak daun pandan ini bisa dikatakan positif mengandung senyawa
flavonoid. Kegagalan kenaikan pada sampel uji ekstrak daun pandan ini,
kemungkinan terjadi karena terlalu cairnya ekstrak yang didapatkan. Oleh
karena itulah yang menjadikan besarnya kemungkinan pada kegagalan uji
kromatografi lapis tipis ini, dan kemungkinan kecil lainnya yaitu karena
rusaknya senyawa flavonoid dalam ekstrak daun pandan yang digunakan,
yang disebabkan oleh lamanya penyimpanan hasil ekstraksi daun pandan
pada suhu ruang yang tidak menentu suhunya. Hasil jika ekstrak daun
pandan seharusnya positif mengandung senyawa flavonoid diperkuat
dengan literatur dari (Misbahul Jannah, et al, 2018) yang menyatakan pada
penelitiannya bahwa hasil dari uji kromatografi lapis tipis memiliki hasil
nilai Rf sebesar 0,89 nm yang menandakan bahwa nilai Rf tersebut
menunjukkan senyawa flavonoid tersebut termasuk kedalam golongan
senyawa flavonoid jenis flavon.
 BAB V
PENUTUP

5.1. Kesimpulan
Pada hasil uji saponin dan fenol hidrokuinon dikatakan negatif
mengandung senyawa saponin dan fenol hidrokuinon karena pada saat
praktikum hasil yang didapatkan yaitu tidak adanya busa yang dihasilkan saat
pemanasan dan tidak terjadi perubahan warna menjadi hijau atau hijau
kebiruan, hal ini kemungkinan terjadi pada uji saponin karena pemanasan
yang dilakukan yaitu menggunakan bunsen dalam kurun waktu yang tidak
lama dan hasil positif mungkin bisa didapatkan jika pemanasan menggunakan
penangas air dalam kurun ±30 menit.
Dan kemungkinan hal yang menyebabkan gagalnya pada uji saponin
dan fenol hidrokuinon ini yaitu pada sampel ekstrak daun pandan yang
digunakan, karena pembuatan ekstrak daun pandan dengan metode infundasi
ini dilakukan 2 minggu sebelum praktikum skrining fitokimia dilaksanakan,
maka dari itu bisa menjadi pemicu gagalnya pada uji saponin dan fenol
hidrokuinon ini.
Pada hasil uji kromatografi lapis tipis dikatakan negatif mengandung
flavonoid, karena tidak adanya kenaikan pada sampel uji ekstrak daun
pandan. Kegagalan kenaikan pada sampel uji ekstrak daun pandan ini,
kemungkinan terjadi karena terlalu cairnya ekstrak yang didapatkan. Oleh
karena itulah yang menjadikan besarnya kemungkinan pada kegagalan uji
kromatografi lapis tipis ini, dan kemungkinan kecil lainnya yaitu karena
rusaknya senyawa flavonoid dalam ekstrak daun pandan yang digunakan,
yang disebabkan oleh lamanya penyimpanan hasil ekstraksi daun pandan
pada suhu ruang yang tidak menentu suhunya.

5.2. Saran
Pada percobaan kali ini ditemukan beberapa kesalahan yang terjadi,
baik dari kondisi sampel uji ekstrak daun pandan maupun prosedur kerja yang
dilakukan. Oleh karena itu, kami menyarankan agar dilakukan percobaan
ulang dengan menggunakan sampel uji ekstrak daun pandan yang baru
didapatkan dan dengan prosedur kerja menurut literatur yang digunakan
dalam laporan ini.
 DAFTAR PUSTAKA

Ferdinan, A., Rizki, F. S., Kurnianto, E. & Kurniawan, 2022. Fraksinasi dan
Identifikasi Senyawa Tanin Dari Ekstrak Pandan Hutan (Freycinetia
sessiliflora Rizki). Journal Borneo, II(2), pp. 93-98.
Jannah, M., Noorjannah & Adelia, N., 2018. Uji Efektivitas Ekstrak Daun Pandan
(Pandanus amaryllifolius Roxb). Dinamika Kesehatan, IX(2), pp. 415-428.
Nius, A. et al., 2021. Uji Kualitatif Fitokimia Daun Pandan. Praktikum Kimia
Organik Dasar, Tuesday January.
 LAMPIRAN

(Gambar. Hasil Uji Alkaloid +Meyer) (Gambar. Hasil Uji Alkaloid +Wagner)

(Gambar. Hasil Uji Triterpenoid) (Gambar. Hasil Uji Saponin)

(Gambar. Hasil Uji Fenol Hidrokuinon) (Gambar. Hasil Uji Kromatografi Lapis
Tipis gelombang 366 nm)