Hati merupakan organ metabolisme terpenting yang berperan besar dalam fungsi metabolisme,

detoksifikasi, penyimpanan, dan sekresi dalam tubuh

Pada akhirnya kerusakan hati menyebabkan fibrosis bilier dan sirosis dan stadium akhir penyakit hati
yang membutuhkan transplantasi hati (El-Sisi et al., 2013). Kolestasis adalah pengurangan aliran
empedu yang mengarah pada akumulasi asam empedu intrahepatik dan senyawa toksik lainnya
dengan perkembangan patologi hati, termasuk cedera hepatoseluler dan fibrosis (Chen et al., 2016).
Secara umum, kolestasis diklasifikasikan sebagai ekstrahepatik dan intrahepatik (Jüngst et al., 2013).

Kolestasis intrahepatik terbukti berkembang selama pengobatan dengan obat medis yang berbeda
sebagai efek samping toksik (Krell et al., 1982). Model eksperimental kolestasis intrahepatik yang
paling umum adalah kolestasis yang diinduksi estrogen, diinduksi endotoksin, dan diinduksi obat
(Rodriguez-Garay, 2003). Alpha-naphthylisothiocyanate (ANIT) adalah bahan kimia yang banyak
digunakan untuk menginduksi kolestasis intrahepatik pada hewan percobaan (Xu et al., 2004). Dalam
pengobatan eksperimental, ANIT telah banyak digunakan untuk menggambarkan perubahan
kolestatik dan mekanisme kompensasinya (Korolenko et al., 2012).

Stres oksidatif telah terlibat dalam proses fibrogenesis hati (Liu et al., 2013). Fibrosis hati kolestatik
dikaitkan dengan stres oksidatif yang diinduksi asam empedu dan peroksidasi lipid (Han et al., 2012).
Selanjutnya, stres oksidatif memperburuk fibrosis hati melalui aktivasi sel bintang (SvegliatiBaroni et
al., 1998). Selain itu, garam empedu sebagian bertanggung jawab atas kerusakan membran plasma
yang menyebabkan stres oksidatif lebih lanjut (Sokolovic et al., 2013).

Alpha-naphthylisothiocyanate (ANIT)

Ursofalk (ursodeoxycholic acid) (UDCA)

Kit untuk semua serum parameter biokimia, dan penyangga Tris-HCl (pH 7,4)

Lima puluh bulu babi (Paracentrotus lividus) dikumpulkan dari pantai Mediterania Alexandria
(Mesir). Sampel dicuci bersih dengan air laut untuk menghilangkan pasir dan diangkut ke
laboratorium yang dikemas dalam es. Spesimen yang dikumpulkan segera dikeringkan dan
diidentifikasi menurut panduan taksonomi

Pigmen Echinochrome (Ech) pada gonad, cangkang, dan duri 50 Paracentrotus lividus diisolasi
dengan metode Amarowicz dengan beberapa modifikasi. Lalu. Cangkang, duri, dan gonad dicuci
dengan aliran air dingin dan dikeringkan dengan udara pada suhu 4 °C selama 2 hari dalam gelap.
Sampel kering digiling dan diperoleh bubuk sebanyak 5 gr yang dilarutkan dalam 10 ml 6 M HCl.
Pigmen dalam larutan diekstraksi 3 kali dengan volume dietil eter yang sama. Lapisan eter yang
terkumpul dicuci dengan NaCl 5% sampai asam hampir hilang. Pigmen yang tersuspensi dalam
larutan eter dikeringkan dengan natrium sulfat anhidrat dan pelarutnya diuapkan menggunakan alat
penguap putar. Jumlah total pigmen (320,987 mg) disimpan pada -30 °C dalam gelap.
Tikus Wistar (Rattus norvegicus) jantan dengan berat
150-160 g digunakan dalam penelitian. Hewan-
hewan itu diperoleh dari Pusat Penelitian Nasional
(NRC, Dokki, Giza). Hewan dipelihara di kandang
hewan Departemen Zoologi, Fakultas Sains,
Universitas Kairo yang berventilasi baik dalam
lingkungan yang bersahabat dengan waktu 12 jam.
/12 jam. siklus terang-gelap pada suhu kamar (22 °C
- 25 °C). Hewan dikelompokkan dan ditampung
dalam kandang poliakrilik (enam ekor/kandang) dan
diberi makan dan minum ad libitum. Tikus
diaklimatisasi dengan kondisi laboratorium selama 7
hari sebelum dimulainya percobaan
Tiga puluh enam tikus Wistar jantan dibagi menjadi dua kelompok utama. Kelompok kontrol (6
ekor/kelompok) dan kelompok ANIT (30 ekor/kelompok).

Hewan dari kelompok 1 menerima larutan DMSO 5% secara oral setiap hari selama 72 jam.

Kelompok kedua dibagi menjadi 5 subkelompok (6 tikus/subkelompok)

Tikus dari subkelompok ini dirawat secara oral setiap hari selama 48 jam dengan larutan DMSO 5%
(subkelompok 1);

Ech (dilarutkan dalam larutan DMSO 5%) dengan dosis 1, 5, dan 10 mg/kg berat badan (masing-
masing subkelompok 2, 3 & 4)

UDCA (dilarutkan dalam larutan DMSO 5%) , 80mg/kg berat badan (subkelompok5)
Setelah 24 jam. dari dosis terakhir, tikus dari subkelompok ini akan dipuasakan selama 15 jam. dan
menerima injeksi ANIT intraperitoneal (ip) tunggal (dilarutkan dalam minyak zaitun), dengan dosis 75
mg / kg berat badan untuk menginduksi kolestasis intrahepatik seperti yang dijelaskan sebelumnya

Bulu babi atau landak laut merupakan hewan echinodermata berbentuk bulat, kecil, runcing

Echinochrome (Ech), atau 7 (2) -ethyl-2, 3, 5, 6, 8-pentahydroxy-1, 4-naphthoquinone, adalah salah

satu dari beberapa spinokrom yang muncul sebagai pigmen pada cangkang dan gonad bulu babi

Dilaporkan bahwa penggunaan cangkang bulu babi memberikan keuntungan tertentu yang
bermanfaat, termasuk efek antioksidan dan efek farmakologinya.

Biomarker serum untuk fungsi hati

Kelompok alfa-naphthylisothiocyanate (ANIT) menunjukkan peningkatan aktivitas serum AST, ALT,

dan total protein (TP) yang signifikan (p<0,05), dan penurunan serum albumin (ALB) dibandingkan
dengan kelompok kontrol yang sesuai ( Tabel 1). Namun, pemberian Ech pada dosis 5 dan 10 mg/kg
berat badan dan UDCA secara signifikan menurunkan (p<0,05) kadar AST, ALT, dan TP serta
meningkatkan kadar ALB serum.

Sedangkan pemberian Ech (1 mg/kg berat badan) tidak menurunkan kadar ALT secara bermakna (p >
0,05).

Hasil yang dicatat dalam tabel 2 menunjukkan bahwa aktivitas serum ALP meningkat secara
signifikan (P<0,05) setelah pemberian ANIT dengan dosis 75 mg/kg berat badan dibandingkan
dengan kelompok kontrol yang sesuai. Selain itu, kadar bilirubin total (TB), bilirubin langsung (DB),
dan bilirubin tidak langsung (IB) meningkat secara signifikan (P <0,05) pada kelompok ANIT
dibandingkan dengan kontrol. Pada kelompok pretreatment Ech, aktivitas serum ALP, TB, DB, dan
tingkat IB menurun secara signifikan (P <0,05) dibandingkan dengan kelompok ANIT. Juga,
pemberian UDCA (80 mg/kg berat badan) disebabkan

menyebabkan penurunan yang signifikan (P <0,05) dalam aktivitas serum ALP,

TB, dan IB dibandingkan dengan kelompok ANIT.

Pada gambar a dan d, MDA dan aktivitas NO ditemukan meningkat secara signifikan (P <0,05) pada
kelompok ANIT dibandingkan dengan kelompok kontrol. Pretreatment dengan semua dosis Ech yang
berbeda 1,5, dan 10 mg/kg berat badan dan UDCA 80 mg/kg berat badan secara signifikan
menurunkan (P <0,05) kadar MDA dan aktivitas NO dibandingkan dengan kelompok ANIT.
Penurunan kadar MDA dan NO yang lebih tinggi tercatat pada subkelompok Ech (10 mg/kg berat
badan). (Gambar 1a dan 1d).
Selain itu, kandungan glutation tereduksi (GSH) hepatik dan aktivitas glutathione-S-transferase (GST)
menunjukkan penurunan yang signifikan (P <0,05) pada kelompok ANIT dibandingkan dengan
kelompok kontrol. Pemberian 5 dan 10 mg Ech dan UDCA secara signifikan (P <0,05) meningkatkan
kadar aktivitas GSH dan GST dibandingkan dengan kelompok ANIT. Sedangkan pemberian Ech
dengan dosis 1 mg/kg berat badan secara signifikan (p < 0,05) meningkatkan aktivitas GST, tetapi
tidak signifikan (p > 0,05) meningkatkan kandungan GSH (Gambar 1b dan 1c)

Penilaian penanda stres oksidatif di hati

Gambar 3 menunjukkan bahwa luas saluran portal tikus kelompok ANIT meningkat secara signifikan
(p<0,05) dibandingkan dengan kelompok kontrol. Namun, luas saluran portal dari semua kelompok
perlakuan menurun secara signifikan dibandingkan dengan kelompok ANIT

aminotransferase (AST dan ALT) sesuai dengan metode kalorimetri , kadar protein total (TP ), dan
serum albumin (ALB)

alkalin fosfatase (ALP), kadar bilirubin total, (TB), bilirubin langsung (DB), dan bilirubin tidak langsung
(IB)

Parameter stres oksidatif ditinjau dari aktivitas tingkat MDA, yakni indeks peroksidasi lipid,
glutathione tereduksi (GSH), glutathione-S-transferase (GST), dan oksida nitrat (NO) yang ditentukan
dalam supernatan homogenat hati

Metode histologi dilakukan dengan cara Irisan hati difiksasi dalam larutan buffer formaldehida 10%.
Sebuah metode rutin dehidrasi dalam seri etanol naik, kliring dengan xylene, dan menanamkan lilin
parafin untuk membentuk blok digunakan. Bagian setebal 5 μm diiris menggunakan mikrotom dan
diwarnai dengan pewarnaan Hematoxylin dan Eosin

Sebagai kesimpulan, penelitian ini mengungkapkan bahwa Ech memiliki efek antioksidan positif
terhadap kolestasis yang diinduksi ANIT pada tikus karena mengurangi perubahan stres oksidatif,
dan meningkatkan status antioksidan melalui aktivasi enzim pemulung radikal bebas, sehingga dapat
direkomendasikan sebagai obat yang baik. terapi baru untuk kolestasis pada manusia. Hasil
dikonfirmasi oleh temuan histopatologi mengungkapkan bahwa pengobatan dengan Ech
memperbaiki efek memburuknya kolestasis intrahepatik yang diinduksi oleh ANIT, menunjukkan
bahwa pengobatan dengan Ech mungkin merupakan strategi baru yang potensial dan efektif untuk
pencegahan gagal hati.