RESUME PRATIKUM MIKROBIOLOGI

P6
UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA DENGAN
METODE DIFUSI

NAMA : Azizah Zahratus Salimah

NIM : 2100023167
KELAS : 1C
GOLONGAN :I
KELOMPOK : IV
DOSEN : apt. Dr. Laela Hayu Nurani, M.Si.

LABORATORIUM BIOLOGI FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS AHMAD DAHLAN
YOGYAKARTA
2021
 UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA DENGAN METODE DIFUSI

A. Metode Kirby Bauer

Uji aktivitas antimikroba dengan metode Kirby Bauer digunakan untuk menentukan potensi
aktivitas antimikroba suatu sampel obat atau bahan alam dengan parameter berupa diameter
zona hambat. Metode ini dapat digunakan juga untuk mengetahui adanya resistensi mikroba
terhadap satu atau lebih antibiotik.
Alat dan Bahan :
1. Stok bakteri
2. Larutan NaCl 0,9%
3. Standar Mc. Farland
4. Media cair
5. Media padat
6. Sampel obat
7. Pipet mikro
8. Bluetip dan yellowtip
9. Cotton bud
10. Cork borer (pelubang gabus)
11. Paper disk
12. Tabung reaksi
13. Petri
14. Lampu spiritus
15. Ose
16. Inkubator
Cara uji aktivitas antimikroba dengan metode Kirby Bauer :
a) Penyiapan suspensi mikroba uji
1. Pengembakbiakan (sub kultur) mikroba uji ke media baru. Bakteri diinkubasi pada
suhu 37°C selama 18-24 jam.
2. Mengkondisikan mikroba mencapai fase eksponensial. Misalnya mengambil 100 μL
hasil inkubasi, dimasukkan ke dalam 1 ml media baru, lalu diinkubasi lag pada suhu
37°C selama 3-5 jam.
3. Membuat suspensi bakteri 106 CFU/ml. Mengambil sejumlah volume biakan hasil
inkubasi (misalnya 100 μL), lalu diencerkan dengan NaCl 0,9% hingga kekeruhan
sama dengan kekeruhan 0,5x standar Mc. Farland (=106 CFU/ml). Setelah kekeruhan
sudah sama, lalu diencerkan lagi 100x dengan NaCl 0,9%.

b) Penyiapan larutan sampel obat atau bahan yang diuji

Contoh pembuatan larutan sampel obat 2%, 1%, 0,5%, dan 0,25% b/v masing-masing
sebanyak 1 ml. Penyiapan larutan sampel dilakukan dengan cara sebagai berikut.
1. Isi 2 ml sampel ke tabung 1 (obat 2%).
2. Isi 1 ml pelarut (aquades) ke tabung 2-4 (obat 1%, obat 0,5%, dan obat 0,25%).
3. Pindahkan 1 ml larutan secara berturut-turut dari tabung 1 ke 2, lalu dihomogenkan.
Selanjutnya dari tabung 2 ke tabung 3, hingga tabung 3 ke tabung 4.
c) Menanam mikroba pada permukaan media padat

d) Meneteskan larutan sampel pada kertas cakram (paper disk) dan menempelkan disk pada
permukaan media yang sudah ditanami mikroba uji. Menempel disk antibiotik sebagai
kontrol positif, kemudian diinkubasi.

B. Metode Sumuran
Cara uji aktivitas antimikroba metode sumuran hampir sama dengan metode Kirby Bauer.
Perbedaannya adalah terletak pada penempatan sampel. Pada metode Kirby Bauer sampel
diteteskan pada disk, sedangkan pada metode sumuran sampel diteteskan pada sumuran/lubang
yang dibuat pada media padat dengan menggunakan cork borer.

C. Cara Mengukur Diameter Zona Hambat

Cara mengukur diameter zona hambat yaitu dengan menggunakan penggaris. Diameter
tersebut diukur dari satu sisi ke sisi yang lainnya.