PENENTUANKONDISIOPTIMUMPROSESFERMENTASIBAKTERIENDOFITBACILLUSSUBTILIS

PENENTUAN KONDISI OPTIMUM PROSES
FERMENTASI BAKTERI ENDOFIT Bacillus subtilis

UAAC 21622 MENGGUNAKAN AIR TEBU, AMPAS
TEBU DAN MOLASE SEBAGAI SUMBER KARBON
DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERINYA
SKRIPSI SARJANA FARMASI
Oleh:
NESLY ARISTI
No. BP 1411012063
Prof. Dr. H. Akmal Djamaan, MS, Apt

Prof. Dr. H. Harrizul Rivai, MS
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS ANDALAS
PADANG
2018
PERNYATAAN ORISINILITAS DAN PENYERAHAN HAK CIPTA
Saya yang bertanda tangan dibawah ini:
Nama : Nesly Aristi
No. Bp : 1411012063
Judul Skripsi : Penetuan Kondisi Optimum Proses Fermentasi Bakteri Endofit
Bacillus subtilis UAAC 21622 Menggunakan Air Tebu, Ampas
Tebu dan Molase sebagai Sumber Karbon dan Uji Aktivitas
Antibakterinya
Dengan ini menyatakan bahwa:
1. Skripsi yang saya tulis merupakan hasil karya sendiri, terhindar dari unsur
plagiarisme, dan data beserta seluruh isi skripsi tersebut adalah benar adanya.
2. Saya menyerahkan hak cipta dari skripsi tersebut kepada Fakultas Farmasi
Universitas Andalas untuk dapat dimanfaatkan dalam kepentingan akademis.
Padang, Juli 2018
Nesly Aristi
KATA PENGANTAR
Bismillahirahmaanirrahim
Alhamdulillahirabbil’alamin, segala puji dan syukur penulis ucapkan
kehadirat Allah SWT, karena berkat rahmat dan karunia-Nya penulis dapat
menyelesaikan penelitian dan penulisan skripsi dengan judul “Penetuan Kondisi
Optimum Proses Fermentasi Bakteri Endofit Bacillus subtilis UAAC 21622
Menggunakan Air Tebu, Ampas Tebu dan Molase sebagai Sumber Karbon
dan Uji Aktivitas Antibakterinya”. Skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat
untuk menyelesaikan program pendidikan Strata Satu pada Fakultas Farmasi
Universitas Andalas Padang.
Selesainya penulisan skripsi ini tidak lepas dari dorongan do’a dan semangat
yang diberikan kepada penulis. Skripsi ini merupakan persembahan penulis untuk
semua pihak yang telah membantu selama proses penelitian baik secara moril
maupun materil. Pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan ucapan terima
kasih yang sebesar-besarnya kepada:
1. Bapak Prof. Dr. H. Akmal Djamaan, MS, Apt selaku pembimbing I dan Bapak
Prof. Dr. H. Harrizul Rivai, MS selaku pembimbing II yang telah banyak
meluangkan waktu, memberikan petunjuk, saran, nasehat serta bimbingan
selama pelaksanaan penelitian dan penulisan skripsi ini.
2. Ibu Fithriani Armin, S.Si, M.Si, Apt selaku penasehat akademik yang telah
meluangkan waktu, memberi nasehat, ilmu dan bimbingan selama masa
perkuliahan dan penyusunan skripsi ini.

v
3. Kedua orang tua, adik dan keluarga yang sangat dicintai yang senantiasa
mendoakan, memberikan kasih sayang, dan selalu memberikan semangat serta
dukungan kepada penulis secara moril maupun materil hingga skripsi ini dapat
selesai.
4. Bapak dan Ibu staf pengajar Fakultas Farmasi Universitas Andalas yang
selama ini telah memberikan ilmu pengetahuan yang sangat bermanfaat bagi
penulis, serta karyawan-karyawati dan analis laboratorium Fakultas Farmasi
Universitas Andalas yang turut membantu kelancaran selama penelitian dan
penulisan skripsi ini.
5. Syalalaers (Rice, Winda, Atika, Ani, Lili, Faradilla, Afifah, Anggun, Dianda),
Riva dan Puji teman senasib seperjuangan, teman-teman kos tercinta (Yopa,
Fadilla, Ranny, Kak Uty, Winda), Anes kembaranku, Keluarga Lab-Biotek
UNAND, Keluarga Besar Mahasiswa Farmasi Universitas Andalas (KBMF)
khususnya Farmasi 2014 (INCENDIO) yang telah memberikan dukungan,
motivasi dan bantuan selama penelitian dan penyusunan skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini jauh dari kesempurnaan. Segala kritik dan
saran sangat diharapkan untuk membantu dalam kesempurnaan skripsi ini. Semoga
skripsi ini bermanfaat untuk kita semua dan untuk perkembangan ilmu pengetahuan
yang akan datang.
Padang, Juli 2018
Penulis
vi
PENENTUAN KONDISI OPTIMUM PROSES FERMENTASI BAKTERI
ENDOFIT Bacillus subtilis UAAC 21622 MENGGUNAKAN AIR TEBU,
AMPAS TEBU DAN MOLASE SEBAGAI SUMBER KARBON DAN UJI
AKTIVITAS ANTIBAKTERINYA
ABSTRAK
Bakteri endofit memiliki peranan penting bagi kehidupan yang mampu

menghasilkan senyawa bioaktif salah satunya sebagai antibakteri. Telah dilakukan
isolasi bakteri endofit dari tumbuhan Citrus aurantifolia dan diperoleh 4 isolat
bakteri salah satunya Bacillus subtilis UAAC 21622. Untuk mendapatkan senyawa
bioaktif yang berpotensi sebagai antibakteri ini, maka perlu dilakukan proses
fermentasi. Penelitian ini bertujuan untuk mencari kondisi optimum proses
fermentasi bakteri endofit Bacillus subtilis UAAC 21622 yang memberikan
aktivitas antibakteri tertinggi pada bakteri uji yang patogen terhadap manusia. Air
tebu, ampas tebu dan molase dapat dimanfaatkan sebagai nutrisi pada proses
fermentasi karena dapat berperan sebagai sumber karbon yang memiliki kandungan
sukrosa yang tinggi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa waktu inkubasi optimum
pada proses fermentasi yaitu pada jam ke-42 dengan menggunakan molase sebagai
sumber karbon yang memberikan aktivitas antibakteri dengan diameter hambat
tertinggi pada bakteri uji Escherichia coli sebesar 12 mm, konsentrasi molase
optimum pada proses fermentasi yaitu pada konsentrasi 20% yang memberikan
aktivitas antibakteri dengan diameter hambat tertinggi pada bakteri uji
Staphylococcus aureus dan Streptococcus mutan sebesar 14 mm, pH optimum pada
proses fermentasi yaitu pada pH 7 yang memberikan aktivitas antibakteri dengan
diameter hambat tertinggi pada bakteri uji Staphylococcus aureus dan
Streptococcus mutan sebesar 15 mm, dan suhu optimum pada proses fermentasi
yaitu pada suhu 36°C yang memberikan aktivitas antibakteri dengan diameter
hambat tertinggi pada bakteri uji Streptococcus mutan sebesar 17 mm.
Kata kunci: bakteri endofit, Bacillus subtilis UAAC 21622, antibakteri, fermentasi
vii
DETERMINATION OF OPTIMUM CONDITION OF FERMENTATION
PROCESS ENDOPHYTIC BACTERIA Bacillus subtilis UAAC 21622 USING
SUGARCANE JUICE, BAGASSE AND MOLASSES AS CARBON
SOURCE AND ANTIMICROBIAL ACTIVITY TEST
ABSTRACT
Endophytic bacteria have an important role for life that is able to produce
bioactive components such as antibacterial. Endophytic bacteria had isolation from
Citrus aurantifolia and 4 bacterial isolates was obtained, one of them is Bacillus
subtilis UAAC 21622. Bioactive components of this endophytic bacteria can be
obtained through the fermentation process. The aim of this research was to
determine the optimum condition of fermentation process of Bacillus subtilis
UAAC 21622 which provides antibacterial activity againts pathogenic microbes.
Sugarcane juice, bagasse and molasses can be used as a nutrient in the fermentation
process because its has a high content of sucrose that can be used as carbon source.
The results showed that the incubation time of the optimum fermentation process
was at 42 hours using molasses as carbon source which gave antibacterial activity
with the inhibitory diameter of Escherichia coli is 12 mm, the optimum
concentration of molasses was at concentration 20% which gave antibacterial
activity with the inhibitory diameter of Staphylococcus aureus and Streptococcus
mutan is 14 mm, the optimum pH of the fermentation process is at pH 7 which gives
antibacterial activity with inhibitory diameter of Staphylococcus aureus and
Streptococcus mutan is 15 mm, and optimum temperature of the fermentation
process is at 36°C which gives antibacterial activity with an inhibitory diameter of
Streptococcus mutan is 17 mm.
Keywords: Endophytic bacteria, Bacillus subtilis UAAC 21622, antibacterial,

fermentation
viii
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL i
PERNYATAAN ORISINILITAS DAN PENYERAHAN HAK ii
CIPTA
PENGESAHAN iii
PERTAHANAN SKRIPSI iv
KATA PENGANTAR v
ABSTRAK vii
ABSTRACT viii
DAFTAR ISI ix
DAFTAR LAMPIRAN xii
DAFTAR GAMBAR xiii
DAFTAR TABEL xvi
I. PENDAHULUAN 1
II. TINJAUAN PUSTAKA 4
2.1 Tanaman Tebu 4
2.1.1 Klasifikasi Tanaman Tebu 4
2.1.2 Kandungan Tanaman Tebu 5
2.2 Mikroba Endofit 6
2.2.1 Pengertian Mikroba Endofit 6
2.2.2 Peranan Mikroba Endofit 7
2.3 Bakteri 9
2.3.1 Pengertian 9
2.3.2 Penggolongan Bakteri 10
2.4 Bacillus subtilis UAAC 21622 13
2.5 Antibiotik 14
2.5.1 Pengertian 14
2.5.2 Penggolongan Antibiotik Berdasarkan Struktur Kimia 14
ix
2.5.3 Penggolongan Antibiotik Berdasarkan Cara Kerja 16
2.6 Fermentasi 18
2.6.1 Pengertian 18
2.6.2 Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Fermentasi 19
2.7 Pengujian Aktivitas Antibiotik 22
2.8 Mikroorganisme Uji 23
2.8.1 Pseudomonas aeruginosa 23
2.8.2 Escherichia coli 24
2.8.3 Streptococcus mutan 24
2.8.4 Staphylococcus aureus 24
III. PELAKSANAAN PENELITIAN 26
3.1 Waktu dan Tempat Penelitian 26
3.2 Alat dan Bahan 26
3.2.1 Alat 26
3.2.2 Bahan 26
3.3 Prosedur Penelitian 27
3.3.1 Sterilisasi Alat 27
3.3.2 Pembuatan Media Nutrient Agar 27
3.3.3 Peremajaan bakteri Bacillus subtilis UAAC 21622 28
3.3.4 Pembuatan Suspensi Bakteri Bacillus subtilis 28
UAAC 21622
3.3.5 Penyiapan Medium Pertumbuhan Bakteri 28
3.3.6 Pemilihan Waktu Inkubasi dan Sumber Karbon 28
Optimum
3.3.7 Pemilihan Konsentrasi Sumber Karbon Optimum 29
3.3.8 Pemilihan pH Optimum 29
3.3.9 Pemilihan Suhu Optimum 30
3.3.10 Pengujian Aktivitas Antibakteri 30
3.3.11 Analisis Data 31
x
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN 32
4.1 Hasil 32
4.2 Pembahasan 34
4.2.1 Penetapan Waktu Inkubasi Optimum 36
4.2.2 Penetapan Konsentrasi Sumber Karbon Optimum 39
4.2.3 Penetapan pH Optimum 41
4.2.4 Penetapan Suhu Optimum 42
V. KESIMPULAN DAN SARAN 45
5.1 Kesimpulan 45
5.2 Saran 45
DAFTAR PUSTAKA 46
LAMPIRAN 50
xi
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1. Skema Kerja 50
2. Data Hasil Penelitian 51
3. Dokumentasi Hasil Penelitian 61
xii
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1. Kurva Hubungan Waktu Inkubasi dengan Biomassa 54
2. Kurva Hubungan Diameter Hambat dengan Konsentrasi 55
pada Penetapan Konsentrasi Optimum menggunakan Air
Tebu
3. Kurva Hubungan Diameter Hambat dengan Konsentrasi 56
pada Penetapan Konsentrasi Optimum menggunakan
Molase
4. Kurva Hubungan Diameter Hambat dengan pH pada 57
Penetapan pH Optimum menggunakan Air Tebu
5. Kurva Hubungan Diameter Hambat dengan pH pada 58
Penetapan pH Optimum menggunakan Molase
6. Kurva Hubungan Diameter Hambat dengan Suhu pada 59
Penetapan Konsentrasi Optimum menggunakan Air
Tebu
7. Kurva Hubungan Diameter Hambat dengan Suhu pada 60
Penetapan Suhu Optimum menggunakan Molase
8. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap P. aeruginosa 61
(Penetapan Waktu Inkubasi Menggunaan Sumber
Karbon Air Tebu)
9. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap S. aureus 61
Karbon Air Tebu)
10. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap S. mutan 62
Karbon Air Tebu)
11. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap E. coli 62
Karbon Air Tebu)
xiii
Karbon Ampas Tebu)
Karbon Ampas Tebu)
Karbon Ampas Tebu)
Karbon Ampas Tebu)
Karbon Molase)
Karbon Molase)
Karbon Molase)
Karbon Molase)
(Penetapan Konsentrasi Air Tebu)
(Penetapan Konsentrasi Molase)
(Penetapan pH Menggunakan Sumber Karbon Air Tebu
xiv
20%)
(Penetapan pH Menggunakan Sumber Karbon Molase
20%)
20%)
20%)
20%)
(Penetapan Suhu Menggunakan Sumber Karbon Air
Tebu 20%)
(Penetapan Suhu Menggunakan Sumber Karbon Molase
20%)
20%)
20%)
20%)
xv
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
1. Urutan 16S rRNA Bacillus subtilis UAAC 21622 13
2. Hasil Skrining Uji Aktivitas Antibakteri dan Biomassa 51
Bacillus subtilis UAAC 21622 pada Penentuan Waktu
Inkubasi Optimum Menggunakan Air Tebu sebagai Sumber
Karbon
Inkubasi Optimum Menggunakan Ampas Tebu sebagai
Sumber Karbon
Inkubasi Optimum Menggunakan Molase sebagai Sumber
Karbon
5. Hasil Skrining Uji Aktivitas Antibakteri Bacillus subtilis 55
UAAC 21622 pada Penentuan Konsentrasi Optimum
Menggunakan Air Tebu sebagai Sumber Karbon
UAAC 21622 pada Penentuan Konsentrasi Optimum
Menggunakan Molase sebagai Sumber Karbon
UAAC 21622 pada Penentuan pH Optimum Menggunakan
Air Tebu 20%
UAAC 21622 pada Penentuan pH Optimum Menggunakan
Molase 20%
UAAC 21622 pada Penentuan Suhu Optimum Menggunakan
Air Tebu 20% dan pH 7
UAAC 21622 pada Penentuan Suhu Optimum Menggunakan
Molase 20% dan pH 7
xvi
BAB I
PENDAHULUAN
Berbagai macam penyakit yang ditimbulkan oleh mikroba banyak ditemukan
di negara-negara beriklim tropis termasuk Indonesia. Salah satu penyebab penyakit
infeksi adalah bakteri. Timbulnya berbagai penyakit infeksi yang disebabkan oleh
bakteri mendorong untuk terus dilakukannya penelitian yang mampu menghasilkan
senyawa bioaktif dari bahan alam yang memiliki aktivitas sebagai antibakteri yang
dapat menghambat pertumbuhan bakteri patogen penyebab infeksi (Radji, 2010).
Salah satu sumber senyawa bioaktif adalah bakteri endofit. Bakteri endofit
dapat menghasilkan senyawa-senyawa bioaktif yang sangat potensial untuk
dikembangkan salah satunya sebagai antibakteri (Djamaan, 2014). Bakteri endofit
hidup di dalam jaringan vaskular tumbuhan tanpa menyebabkan efek negatif
terhadap tumbuhan tersebut (Schulz & Boyle, 2006). Penelitian terhadap pencarian
sumber senyawa bioaktif dari bakteri endofit telah banyak dilakukan, salah satunya
telah dilakukan oleh Zam et al (2016) yang mengisolasi bakteri endofit dari
tanaman Citrus aurantifolia dan diperoleh 4 isolat bakteri salah satunya yaitu
Bacillus subtilis UAAC 21622 yang berpotensi sebagai antibakteri.
Bacillus subtilis merupakan bakteri gram positif yang berbentuk batang
panjang, soliter ataupun membentuk koloni bergandengan yang memanjang.
Secara alami sering ditemukan di tanah, air, udara dan materi tumbuhan yang
terdekomposisi. Basitrasin merupakan antibiotik yang dihasilkan oleh Bacillus
1
subtilis. Basitrasin membunuh sel targetnya dengan menyisip pada membran target
dan mengakibatkan fungsi membran sel menjadi tidak stabil sehingga
menyebabkan sel lisis (Brooks et al., 2005).
Untuk mendapatkan senyawa bioaktif dari bakteri endofit, maka perlu
dilakukan proses fermentasi. Proses fermentasi senyawa bioaktif yang dihasilkan
oleh bakteri endofit umumnya dilakukan dengan metode fermentasi cair. Untuk
meningkatkan aktivitas antibakteri, perlu dilakukannya penentuan kondisi
optimum pada proses fermentasi bakteri endofit tersebut. Hal ini didukung oleh
Brooks et al. (2005) yang menyebutkan bahwa pertumbuhan mikroorganisme dapat
dipengaruhi oleh beberapa faktor penting diantaranya waktu inkubasi, nutrisi, pH
dan suhu.
Waktu inkubasi adalah proses pemeliharaan kultur mikroba selama jangka
waktu tertentu untuk memantau pertumbuhan bakteri. Setiap bakteri memiliki
waktu inkubasi tertentu untuk mencapai pertumbuhan yang optimal. Nutrisi juga
dibutuhkan untuk proses fermentasi bakteri endofit. Salah satu nutrisi yang
dibutuhkan yaitu sumber karbon. Sumber karbon berfungsi sebagai sumber energi
oleh bakteri endofit yang berasal dari gula-gula organik seperti sukrosa (Brooks et
al., 2005). Sukrosa banyak ditemukan di dalam tanaman di Indonesia salah satunya
yaitu pada tanaman tebu.
Tanaman tebu dapat dimanfaatkan sebagai sumber karbon untuk media
pertumbuhan bakteri karena kandungan sukrosa yang tinggi didalam tebu tersebut,
selain itu pemanfaatan tebu ini dapat dilakukan karena ketersediaannya yang tinggi
2
dan harganya yang murah. Kandungan sukrosa yang terdapat didalam air tebu
adalah 11-16% (Loto et al., 2012). Selain itu, molase dan ampas tebu yang juga
berasal dari tanaman tebu juga mengandung sukrosa. Molase mengandung sukrosa
yang cukup tinggi yaitu 55% (Yusma, 1999). Sementara itu, ampas tebu
mengandung sukrosa sekitar 3,3% (Lavarack et al., 2002). Karena kandungan
sukrosa yang terdapat dalam tanaman tebu ini, maka tebu dapat dimanfaatkan
sebagai media fermentasi bakteri.
Faktor lain yang mempengaruhi proses fermentasi bakteri yaitu pH. Pada
umumnya bakteri bekerja optimum pada rentang pH 6-8, tetapi beberapa jenis
bakteri dapat hidup pada pH yang lebih rendah ataupun pada pH yang lebih tinggi
(Willey et al., 2008). Suhu juga dapat mempengaruhi proses fermentasi bakteri.
Bakteri endofit merupakan bakteri mesofilik yang dapat tumbuh optimal pada suhu
20-45°C (Hogg, 2005). Oleh karena itu, peneliti tertarik untuk melakukan
penelitian mengenai penentuan kondisi optimum proses fermentasi bakteri endofit
Bacillus subtilis UAAC 21622 dengan menggunakan sumber karbon air tebu,
ampas tebu dan molase dan uji aktivitas antibakterinya untuk dapat melawan
bakteri patogen.
3
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tanaman Tebu

Tanaman tebu (Saccharum officinarum) merupakan tanaman semusim yang
mempunyai sifat tersendiri karena dalam batangnya terdapat zat gula. Tebu adalah
komoditas perkebunan penting di Indonesia. Perkebunan tebu berkaitan erat
dengan industri gula dan produk derivate tebu (hilir). Kondisi hulu perkebunan tebu
merupakan hal penting dalam mewujudkan tujuan swasembada gula nasional.
Tanaman tebu biasanya tumbuh baik pada daerah yang beriklim panas dengan
kelembaban untuk pertumbuhan adalah > 70%. Suhu udara berkisar antara
28-34°C. Tanah yang baik bagi pertumbuhan tebu adalah tanah subur dan cukup air
tetapi tidak tergenang. Fase pertumbuhan tanaman tebu jatuh pada umur 3 sampai 8
bulan dan fase pemasakan pada umur 9 sampai 12 bulan yang ditandai dengan tebu
mengeras dan berubah warna menjadi kuning pucat. Pengolahan tanah untuk
penanaman tebu di lahan kering pada umumnya dilakukan pada musim kemarau
sampai akhir musim hujan, sedangkan penanaman dilakukan di awal musim
kemarau sampai menjelang musim hujan (Fitriani et al., 2013).
2.1.1 Klasifikasi Tanaman Tebu
Klasifikasi tanaman tebu adalah sebagai berikut (Steenis, 2006):
Kingdom : Plantae
Sub Kingdom : Tracheobionta
Super Divisi : Spermatophyta

4
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Liliopsida
Sub Kelas : Commelinidae
Ordo : Poales
Famili : Graminae atau Poaceae
Genus : Saccharum
Spesies : Saccharum officinarum Linn.
2.1.2 Kandungan Tanaman Tebu
a. Air Tebu
Air tebu mengandung air sebanyak 70-75%, sukrosa 11-16%, gula reduksi
0,4-2% (Loto et al, 2012). Air tebu juga mengandung senyawa organik
seperti asam laktat, asam suksinat, dan asam glukonat sebanyak 0,5-1%,
senyawa anorganik seperti Fe2O3, Al2O3, MgO, CaO, K2O, SO3, dan H2SO4
sebanyak 0,2-0,6% (Legaz et al, 2008).
b. Molase
Molase atau tetes tebu merupakan hasil samping industri gula. Molase
mengandung senyawa nitrogen, unsur mikro, dan kandungan gula yang
cukup tinggi terutama kandungan sukrosa 55% (Yusma, 1999). Selain itu,
molase juga mengandung glukosa 4-9%, dan fruktosa 5-12% (Hidayat et al.,
2006).
5
c. Ampas Tebu
Ampas tebu adalah suatu residu atau limbah dari proses penggilingan
tanaman tebu (Saccharum officinarum) setelah diekstrak atau dikeluarkan
niranya pada industri pembuatan gula, limbah berserat yang biasa disebut
sebagai ampas tebu (bagasse). Bagasse mengandung air 48-52%, gula
rata-rata 3,3%, dan serat rata-rata 47,7%. Serat bagasse sebagian besar terdiri
dari selulosa, hemiselulosa dan lignin dan tidak dapat larut dalam air
(Lavarack et al., 2002).
2.2 Mikroba Endofit
2.2.1 Pengertian Mikroba Endofit
Mikroba endofit adalah mikroba yang hidup didalam jaringan vaskular
tumbuhan tanpa menyebabkan efek negatif terhadap tumbuhan tersebut (Schulz &
Boyle, 2006). Mekanisme invasi mikroba endofit ke dalam jaringan tanaman dapat
dilakukan dengan beberapa cara, antara lain masuk melalui stomata, lentisel,
trachoma yang rusak, titik tumbuh akar lateral, radikula yang sedang tumbuh,
jaringan akar meristematik yang tidak terdiferensiasi dan melalui enzimatik
degradasi ikatan polisakarisa dinding sel. Jalan alternatif lainnya diduga mikroba
masuk melalui penyerapan unsur hara tanaman secara pasif akibat transpirasi
tanaman (Sturz & Nowak, 2000).
Kemampuan mikroba endofit memproduksi senyawa metabolit sekunder
sesuai dengan tanaman inangnya merupakan peluang yang sangat besar dan dapat
diandalkan untuk memproduksi metabolit sekunder dari mikroba endofit yang

6
diisolasi dari tanaman inangnya tersebut. Dari sekitar 300.000 jenis tanaman yang
tersebar di muka bumi ini, masing-masing tanaman mengandung satu atau lebih
mikroba endofit yang terdiri dari bakteri dan jamur (Strobel & Daisy, 2003).
2.2.2 Peranan Mikroba Endofit
a. Mikroba endofit sebagai antibiotika dan antijamur
Cryptocandin adalah antifungi yang dihasilkan oleh mikroba endofit
Cryptosporiopsis quercina yang berhasil diisolasi dari tanaman obat
Tripterigeum wilfordii dan berkhasiat sebagai antijamur yang patogen terhadap
manusia yaitu Candida albicans dan Trichopyton spp. (Strobel et al., 1999).
Phomopsichalasin merupakan antibakteri Bacillus subtilis, Salmonella
enterica, Staphylococcos aureus dan juga dapat menghambat pertumbuhan
jamur Candida tropicalis (Horn et al., 1995).
b. Mikroba endofit sebagai antivirus
Jamur endofit Cytonaema sp dapat menghasilkan metabolit cytonic acid A
dan B, struktur molekulnya merupakan isomer p-tridepside, berkhasiat sebagai
antivirus. Cytonic acid A dan B ini merupakan protease inhibitor dan dapat
menghambat pertumbuhan cytomegalovirus manusia (Guo et al., 2000).
c. Mikroba endofit sebagai antikanker
Paclitaxel dan derivatnya merupakan zat yang berkhasiat sebagai antikanker
yang pertama kali ditemukan yang diproduksi oleh mikroba endofit. Paclitaxel
merupakan senyawa diterpenoid yang didapatkan dalam tanaman Taxus. Saat
7
ini beberapa jenis endofit lainnya telah dapat diisolasi dari berbagai jenis
Taxus dan didapatkan berbagai senyawa yang berkhasiat sebagai antitumor
(Strobel et al., 2002).
d. Mikroba endofit sebagai antimalaria
Colletotrichum sp merupakan endofit yang diisolasi dari tanaman Artemisia
annua yang menghasilkan metabolit artemisinin yang sangat potensial sebagai
antimalaria (Lu et al., 2000). Disamping itu beberapa mikroba endofit yang
diisolasi dari tanaman Cinchona spp, juga mampu menghasilkan alkaloid
cinchona yang dapat dikembangkan sebagai sumber bahan baku obat
antimalaria (Simanjuntak et al,. 2002).
e. Mikroba endofit sebagai antioksidan
Pestacin dan isopestacin merupakan metabolit sekunder yang dihasilkan
oleh endofit Pestalotiopsis microspora. Endofit ini berhasil diisolasi dari
tanaman Terminalia morobensis yang tumbuh di Papua New Guinea. Baik
pestacin ataupun isopestacin berkhasiat sebagai antioksidan, dimana aktivitas
ini diduga karena struktur molekulnya mirip dengan flavonoid (Strobel et al.,
2002).
f. Mikroba endofit sebagai antidiabetes
Endofit Pseudomassaria sp yang diisolasi dari hutan lindung, menghasilkan
metabolit sekunder yang bekerja seperti insulin. Senyawa ini sangat
menjanjikan karena tidak sebagaimana insulin, senyawa ini tidak rusak jika
8
diberikan peroral. Dalam uji praklinik terhadap binatang coba membuktikan
bahwa aktivitasnya sangat baik dalam menurunkan glukosa darah tikus yang
diabetes. Hasil tersebut diperkirakan dapat menjadi awal dari era terapi baru
untuk mengatasi diabetes dimasa mendatang (Zhang et al., 1999).
g. Mikroba endofit sebagai imunosupresif
Obat-obat imunosupresif merupakan obat yang digunakan untuk pasien
yang akan dilakukan tindakan transplantasi organ. Selain itu imunosupresif
juga dapat digunakan untuk mengatasi penyakit autoimun seperti reumatoid
artritis dan insulin dependent diabetes. Senyawa subglutinol A dan B yang
dihasilkan oleh endofit Fusarium subglutinans yang diisolasi dari tanaman
Tripterygium wilfordii, merupakan senyawa imunosupresif yang sangat poten
(Lee et al., 1995).
2.3 Bakteri
2.3.1 Pengertian
Bakteri adalah salah satu golongan organisme prokariotik yaitu tidak
memiliki selubung inti. Bakteri sebagai makhluk hidup tentu memiliki informasi
genetik berupa DNA, tapi tidak terlokalisasi pada nukleus dan tidak mempunyai
membran inti. DNA pada bakteri berbentuk sirkuler panjang yang disebut nukleoid.
DNA bakteri tidak mempunyai intron dan hanya tersusun atas ekson. Bakteri juga
memiliki DNA kromosomal yang tergabung menjadi plasmid yang berbentuk kecil
dan sirkuler (Brooks et al., 2005).

9
Nama bakteri berasal dari kata bahasa yunani “bakterion” yang berarti
tongkat atau batang. Bakteri rata-rata memiliki panjang hingga 10 mikron dan lebar
0,5-1 mikron. Bakteri umumnya hidup secara saprofit (hidup dari bahan organk
yang mati) yang terdapat di air dan tanah. Bakteri berperan penting menguraikan
molekul organik kompleks dari hewan dan tumbuhan yang telah mati menjadi
molekul-molekul organik sederhana. Molekul ini mengalami daur ulang selama
proses metabolisme oleh organisme hidup (Gould & Brooker, 2003).
2.3.2 Penggolongan Bakteri
2.3.2.1 Kelompok Utama Bakteri
Menurut Brooks, et al (2005), terdapat dua kelompok berbeda dari
organisme prokariota, diantaranya adalah:
a. Eubakteria Gram Negatif yang Memiliki Dinding Sel
Bakteri jenis ini memiliki selubung sel yang kompleks (tipe gram negatif) yang
terdiri dari membran luar, membran dalam dan lapisan peptidoglikan tipis (yang
memiliki asam muramik dan terdapat hampir pada semua organisme, hanya
beberapa mikroorganisme saja yang telah kehilangan bagian dari selubung sel ini)
dan membran sitoplasma merupakan kelompok yang sangat heterogen. Sel
berbentuk bulat, lonjong, batang lurus atau lengkung, heliks, dan filamen.
Perkembangbiakan dengan cara pembelahan ganda, tetapi beberapa kelompok
berkembangbiak dengan cara tunas.
10
b. Eubakteria Gram Positif yang Memiliki Dinding Sel
Bakteri ini memiliki profil dinding sel tipe gram positif, sel-sel umumnya
diwarnai dengan pewarnaan gram positif. Sel berbentuk sferis, batang atau
filamen bercabang maupun tidak bercabang. Reproduksi umumnya dengan
pembelahan biner. Beberapa bakteri pada kategori ini memproduksi spora sebagai
bentuk dormannya (endospora).
c. Eubakteria Tanpa Dinding Sel
Mikroorganisme yang tidak memiliki dinding sel sering disebut mikoplasma dan
tidak dapat mensintesis prekusor peptidoglikan. Mikoplasma diselubungi dengan
sebuah unit membran, yaitu membran plasma. Reproduksi dengan tunas,
fragmentasi atau pembelahan biner, tunggal ataupun kombinasi. Kebanyakan
spesies ini membutuhkan medium kompleks untuk pertumbuhan dan menyebar
dalam bentuk koloni pada medium padat.
d. Archaebakteria
Organisme prokariota ini merupakan penghuni yang mendominasi daerah
teristerial ekstrim dan lingkungan akuatik (kadar garam tinggi, temperatur tinggi,
anaerobik), beberapa organisme bersimbiosis pada saluran pencernaan binatang.
Archaebakteria terdiri dari aerobik, anaerobik, aerobik fakultatif yang merupakan
khemolitotrof, heterotrof, atau heterotrof fakultatif. Perkembangbiakan dengan
cara pembelahan biner, tunas, penggabungan, fragmentasi, atau dengan mekanisme
lain yang belum diketahui.

11
2.3.2.2 Berdasarkan Pewarnaan Gram
Bakteri dapat digolongkan berdasarkan pewarnaan Gram. Pewarnaan Gram
berguna untuk mendeteksi dan mengidentifikasi bakteri. Pewarnaan Gram
ditemukan oleh H.C.J. Gram, seorang histologis berkebangsaan Denmark pada
tahun 1884 (Jawetz et al., 2005).
a. Bakteri Gram Negatif
Golongan ini memiliki lapisan peptidoglikan yang tipis (5-10 nm) dengan
komposisi utama lipoprotein, membran luar dan lipopolisakarida. Lipoprotein
merupakan komponen yang mendominasi dinding sel gram negatif dan berfungsi
menjaga stabilitas membran luar dan tempat perlekatan pada lapisan peptidoglikan
(Jawetz et al., 2005). Bakteri gram negatif merupakan bakteri yang tidak mampu
mempertahankan warna kristal violet pada dinding selnya saat perwarnaan gram
dilakukan, pewarnaan gram sangat penting untuk mengetahui klasifikasi bakteri
dan mengetahui identifikasinya (Radji, 2010).
b. Bakteri Gram Positif
Golongan bakteri ini memiliki peptidoglikan setebal 20-80 nm dengan
komposisi terbesar teikhoat, asam teikhuroni, dan berbagai macam polisakarida.
Bakteri gram positif adalah bakteri yang mempertahankan zat warna kristal violet
sewaktu proses pewarnaan gram sehingga akan berwarna ungu di bawah
mikroskop, perbedaan keduanya didasarkan pada perbedaan struktur dinding sel
12
yang berbeda dan dapat dinyatakan oleh prosedur pewarnaan gram yang
merupakan prosedur penting dalam klasifikasi bakteri (Jawetz et al., 2005).
2.4 Bacillus subtilis UAAC 21622
Bacillus subtilis UAAC 21622 merupakan mikroba endofit yang diisolasi dari
daun tumbuhan Citrus aurantifolia. Bakteri ini merupakan bakteri gram positif dan
mempunyai spora, berbentuk batang, bersifat fakultatif anaerob, dapat bergerak
dengan flagella yang peritrika. Mikroorganisme ini sering sebagai indikator
terhadap kontaminasi karena ketahananya dalam mempertahankan diri dengan
terbungkus oleh spora tadi (Zam et al, 2016).
Adapun urutan 16S rRNA dari mikroba endofit Bacillus subtilis UAAC
21622 adalah sebagai berikut:
Tabel 1. urutan 16S rRNA Bacillus subtilis UAAC 21622 (Zam et al., 2016)
13
2.5 Antibiotika
2.5.1 Pengertian
Antibiotika adalah zat yang dihasilkan oleh suatu mikroba yang dapat
menghambat dan membunuh mikroba jenis lainnya. Antibiotik sebagai obat yang
digunakan untuk membunuh mikroba penyebab infeksi pada manusia harus
memiliki sifat toksisitas selektif setinggi mungkin. Artinya, obat tersebut haruslah
bersifat sangat toksik untuk mikroba, tetapi relatif tidak toksik terhadap
penggunanya (Gunawan, 2007).
2.5.2 Penggolongan Antibiotik Berdasarkan Struktur Kimia
Penggolongan antibiotika berdasarkan struktur kimia menurut Mandal et al
(2004) terbagi menjadi:
a. Golongan beta laktam
Beta laktam mengikat dan menonaktifkan ikatan penisilin dan protein
(PBP) yang terlibat pada proses transpeptidasi untuk sintesis dinding sel bakteri.
Kelompok antibiotik beta-laktam yakni penisilin, sefalosporin, monobaktam
dan karbapenem. Beta-laktam yang paling aktif terhadap P. aeruginosa adalah
piperasillin dan tikarsilin (penisilin), seftazidime (sefalosporin generasi ketiga),
sefepime (sefalosporin generasi keempat), aztreonam (monobaktam), imipenem,
meropenem dan doripenem (karbapenem).
14
b. Golongan aminoglikosida
Aminoglikosida terikat pada subunit 30S ribosom, sehingga menghambat
sintesis protein bakteri. Obat utama yaitu gentamisin, tobramisin, amikasin,
dan netilmisin. Mempunyai spektrum gram negatif yang sangat baik, termasuk
terhadap P. Aeroginosa. Berguna bila terdapat infeksi bermakna terhadap
kuinolon dan beta laktam. Sinergis dengan penisilin dalam melawan
enterokokus dan streptokokus, dan dengan ampisilin dalam melawan listeria.
Tidak memiliki aktivitas anaerobik.
c. Golongan kuinolon
Kuinolon bekerja dengan menghambat replikasi DNA dengan
mempengaruhi enzim yang terlibat dalam proses coiling. Obat utama yaitu
siprofloksasin, ofloksasin, norfloksasin, dan levofloksasin. Spektrum gram
negatif sangat baik sedangkan aktivitas gram positif terbatas. Kuinolon
generasi baru (misalnya moksifloksasin) mempunyai aktivitas terhadap gram
positif yang lebih baik.
d. Golongan makrolida
Terikat pada subunit 50S ribosom, sehingga menghambat sintesis protein.
Obat utama yaitu eritromisin, azitromisin, dan klaritomisin. Memiliki aktivitas
yang baik terhadap gram positif dan sedikit aktivitas terhadap bakteri anaerob
dan enterokokus.
15
e. Golongan tetrasiklin
Mencegah ikatan tRNA ke ribosom sehingga menghambat sintesis protein.
Obat utama yaitu tetrasiklin, oksitetrasiklin, minosiklin, dan doksisiklin.
f. Lain-Lain
a. Sulfonamida dan trimetoprim: menghambat sintesis asam folat dari asam
para-aminobenzoat. Contoh sulfametoksazol dengan trimetoprim,
sulfadoksin dengan pirimetamin.
b. Gilkopeptida: menghambat sintesis dinding sel peptidoglikan. Contoh
vankomisin
c. Kloramfenikol: mencegah ikatan tRNA ke ribosom sehingga menghambat
sintesis protein, spektrum luas termasuk bakteri anaerob
d. Rifampisin: menghambat sintesis DNA. Termasuk obat lini pertama untuk
tuberkolosis. Spektrum gram positif sangat baik tetapi aktivitas gram
negatif terbatas
e. Nitroimidazol: Menghambat replikasi DNA. Contoh metronidazol,
tinidazol
f. Linkosamida: terikat pada subunit 50S ribosom sehingga menghambat
sintesis protein. Contoh klindamisin dan linkomisin.
2.5.3 Penggolongan Antibiotik Berdasarkan Cara Kerja
Klasifikasi antibiotik berdasarkan cara kerjanya menurut Shaikh et al. (2014)
terbagi menjadi:
16
1. Mengganggu sintesis dinding sel
Antibiotik beta laktam seperti penisilin dan sefalosporin menghambat
enzim yang bertanggung jawab untuk pembentukan lapisan peptidoglikan.
2. Menghambat sintesis protein
Tetrasiklin mengganggu sintesis protein dengan mengikat sub unit 30S
dari ribosom, sehingga melemahkan interaksi ribosom tRNA. Makrolida
mengikat ribosom sub unit 50S dan menghambat pemanjangan rantai
polipeptida yang baru. Kloramfenikol berikatan dengan ribosom sub unit
50S memblokir reaksi peptidil transferase. Aminoglikosida menghambat
inisiasi sintesis protein dan mengikat ribosom sub unit 30S.
3. Mengganggu sintesis asam nukleat
Rifampisin mengganggu dengan cara pengaturan DNA oleh RNA
polimerase. Kuinolon menghambat sintesis DNA dengan gangguan tipe II
topoisomerase, DNA girase dan tipe IV topoisomerase selama siklus
replikasi menyebabkan untai ganda berhenti.
4. Menghambat jalur metabolisme
Sulfonamid (misalnya sulfametoksazol) dan trimetoprim memblokir
setiap langkah penting dalam sintesis folat yang merupakan kofaktor
dalam biosintesis nukleotida dan memblok pembentukan DNA dan RNA.
5. Mengganggu membran sel
Mengganggu membran sitoplasma bakteri gram positif, atau membran
dalam bakteri Gram negatif. Polimiksin berefek penghambatan dengan
17
meningkatkan permeabilitas membran bakteri yang menyebabkan
kebocoran pada bakteri.
2.6 Fermentasi
2.6.1 Pengertian
Fermentasi berasal dari bahasa Latin fermentum. Fermentasi dapat
didefinisikan sebagai proses yang mengakibatkan terjadinya perubahan kimia
substrat organik sebagai hasil kerja enzim mikroba, baik secara aerobik maupun
anaerobik. Produk yang dihasilkan dari fermentasi oleh mikroba dapat berbentuk
makanan, bahan kimia industri dan farmasi. Produk bahan kimia industri dapat
berbentuk senayawa bioaktif seperti antibakteri. Proses produksi senyawa bioaktif
tersebut dapat dilakukan melalui beberapa metode fermentasi antara lain fermentasi
padat, fermentasi semi padat dan fermentasi cair. Proses fermentasi senyawa
bioaktif oleh bakteri umumnya dilakukan menggunakan metode fermentasi cair
(Chojnacka, 2010).
Pembentukan ATP pada fermentasi tidak berpasangan dengan perpindahan
elektron-elektron. Fermentasi ditandai oleh fosforilasi substrat, suatu proses
enzimatik dimana ikatan pirofosfat diberikan langsung ke ADP oleh intermediate
metabolik bergugus P. Intermediate bergugus P dibentuk dari penyusunan kembali
secara metabolik dari substrat yang fermentabel seperti glukosa, laktosa atau
arginin. Karena dari substrat fermentabel, komposisi bahan produk fermentasi
harus identik dengan substrat tersebut (Brooks et al, 2005).
18
2.6.2 Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Fermentasi
1. Nutrisi
a. Sumber Karbon
Tumbuh-tumbuhan dan beberapa bakteri mampu menggunakan energi
fotosintesik untuk mereduksi karbondioksida pada penggunaan air.
Organisme ini termasuk kelompok autotrof, makhluk hidup yang tidak
membutuhkan nutrien organik untuk pertumbuhannya. Khemolitotrof
termasuk kelompok autotrof, organisme yang menggunakan substrat
anorganik seperti hidrogen atau tiosulfat sebagai reduktan dan
karbonsioksida sebagai sumber karbon. Karbondioksida dibutuhkan pada
sejumlah reaksi biosintesis. Banyak organisme respiratif menghasilkan
lebih banyak karbondioksida untuk memenuhi kebutuhannya, tetapi
organisme lain membutuhkan sumber karbondioksida pada medium
pertumbuhannya. Contoh dari sumber karbon yaitu glukosa, fruktosa,
sukrosa, laktosa, maltosa, pati (Brooks et al., 2005)
b. Sumber Nitrogen
Nitrogen adalah salah satu unsur yang dibutuhkan oleh semua jasad
hidup untuk sintesis protein asam nukleat dan senyawa-senyawa lain yang
mengandung nitrogen. Selama adanya pertumbuhan, mikroorganisme
membebaskan enzim proteolitik yang dapat merombak senyawa-senyawa
protein menjadi asam amino. Sejumlah nitrogen sangat dibutuhkan dalam
19
pertumbuhan, karena nitrogen tersebut terkandung didalam protein dan
asam nukleat. Dalam hal memperoleh nitrogen setiap organisme
berbeda-beda, diantaranya yaitu dengan menggunakan gas nitrogen dari
udara dan ada juga yang menggunakan sumber nitrogen anorganik seperti
gara-garam amonium, tetapi ada juga dengan menggunakan sumber
nitrogen organik seperti glutamik dan asparagin. Contoh dari sumber
nitrogen yaitu pepton, beef ekstrak, tripton, yeast ekstrak, kedelai, urea,
NH4Cl, NaNO3 (Ekenstierna, 2008).
c. Sumber Belerang
Belerang adalah komponen dari banyak substansi organik sel. Belerang
membentuk bagian struktur beberapa koenzim dan ditemukan dalam rantai
samping sisteinil dan merionil protein. Belerang dalam bentuk asalnya tidak
dapat digunakan oleh tumbuhan dan hewan (Brooks et al., 2005).
d. Sumber Phospor
Fosfat dibutuhkan sebagai komponen ATP, asam nukleat dan sejumlah
koenzim seperti NAD, NADP, dan flavin. Fosfat selalu diasimilasi sebagai
fosfat anorganik bebas (Brooks et al., 2005).
2. Kadar Air
Semua sel membutuhkan air termasuk mikroorganisme. Air merupakan
komponen utama dalam kehidupan bakteri karena 70-80% dari berat
20
protoplasma terdiri dari air. Air bertindak sebagai media transformasi makanan
dan hasil metabolisme sel, serta diperlukan juga pada proses enzimatis (Pelczar
dan Chan, 2006).
3. pH
Pada umumnya bakteri bekerja optimum pada rentang pH 6-8, tetapi
beberapa jenis mikroba dapat hidup pada pH yang lebih rendah yang dikenal
dengan istilah acidhophiles ataupun pada pH yang lebih tinggi yng dikenal
dengan istilah alkalophiles. Secara umum, kelompok mikroba yang berbeda
memiliki pH karakteristik. Kebanyak bakteri adalah neutrofil. Meskipun
bakteri sering tumbuh dari kisaran pH yang luas dan jauh dari optimum (Willey
et al., 2008).
4. Suhu
Sebagian besar pertumbuhan bakteri mencapai optimal pada suhu sekitar
20-45°C yang disebut bakteri mesofilik. Lain halnya dengan bakteri termofilik
yang membutuhkan suhu yang tinggi untuk pertumbuhannya. Bakteri
termofilik akan mampu tumbuh dalam rentang suhu 40-80°C, dengan
pertumbuhan optimal pada kisaran suhu 50-65°C (Stuart, 2005).
5. Tekanan Osmotik
Pada umumnya bakteri dapat hidup pada daerah dengan kandungan garam
yang encer. Tekanan osmotik tergantung pada bahan terlarut, dimana bakteri
21
pada umumnya dapat tumbuh pada rentang tekanan osmotik yang cukup besar
karena adanya enzim permease sehingga konsentrasi garam dalam sel dapat
diatur. Akan tetapi bila konsentrasi ini cukup tinggi, maka air akan keluar dari
sel sehingga pertumbuhan bakteri akan terhenti (Pelczar dan Chan, 2006).
2.7 Pengujian Aktivitas Antibiotik
Penggolongan metode pengujian antibiotik menurut Choma dan Grzelak
(2010) diantaranya adalah:
a. Metode Difusi
Metode ini sering digunakan untuk uji antimikroba yang rentan terhadap
senyawa murni, baik senyawa polar maupun non polar. Metode ini menggunakan
kertas filter cakram (diameter 6 mm) yang berisi senyawa uji yang ditempatkan
pada permukaan yang sebelumya telah diinokulasi dengan mikroba uji. Agen
antimikroba akan berdifusi kedalam agar dan akan menghambat pertumbuhan dari
mikroba uji. Cawan petri sebelumnya diinkubasi lalu zona hambatan diukur.
b. Metode Dilusi
Metode dilusi merupakan metode yang paling sederhana dibandingkan metode
pengujian aktivitas antibakteri lainnya. Sampel uji dicampur dengan medium cair
yang telah diinokulasikan dengan bakteri uji. Prinsip metode ini adalah sampel
diencerkan hingga diperoleh beberapa macam konsentrasi, lalu masing-masing
konsentrasi ditambah suspensi bakteri kedalam media. Setelah diinkubasi, diamati
22
ada atau tidaknya bakteri dengan melihat kekeruhan dari masing-masing
konsentrasi sampel dibandingkan dengan kontrol, konsentrasi sampel terendah
yang menghambat pertumbuhan bakteri ditunjukkan dengan tidak adanya
kekeruhan, disebut juga dengan konsentrasi hambat minimum (KHM).
c. Metode Bioautografi
Metode bioautografi hampir sama dengan metode difusi. Perbedaannya
terletak pada senyawa uji berdifusi ke medium agar dari kromatografi yang
mengandung adsorben atau kertas. Pada bioautografi, plat kromatografi lapis tipis
atau kertas diletakkan pada permukaan agar yang telah diinokulasi dengan mikroba
uji beberapa menit atau beberapa jam agar berdifusi. Kemudian plat dikeluarkan
dan lapisan agar diinkubasi, lalu zona hambat diukur.
2.8 Mikroorganisme Uji
2.8.1 Pseudomonas aeruginosa
Pseudomonas aeruginosa merupakan bakteri gram negatif, motil, dan
aerobik. Bakteri ini bersifat invasif dan toksigenik yang mengakibatkan infeksi
pada pasien dengan penurunan daya tahan tubuh dan merupakan patogen
nosokomial yang penting. Pseudomonas aeruginosa tumbuh baik pada suhu
37-42°C, beberapa galur Pseudomonas aeruginosa menghasilkan pigmen fluoresen
pioverdin yang memberi warna kehijauan pada agar. Bakteri ini menjadi patogenik
hanya jika berada pada tempat dengan daya tahan yang tidak normal, misalnya di
23
selaput lendir dan kulit yang rusak akibat kerusakan lingkungan (Brooks et al.,
2005).
2.8.2 Escherichia coli
Escherichia coli merupakan bakteri gram negatif berbentuk batang. Bakteri
ini merupakan flora normal yang terdapat dalam usus. Bakteri ini menjadi patogen
ketika mencapai jaringan diluar intestinal normal atau tempat flora normal yang
kurang umum. Kebanyakan tempat yang sering mengalami infeksi klinis adalah
pada saluran kemih, sistem billiary dan tempat lain dalam rongga perut (Brooks et
al., 2005).
2.8.3 Streptococcus mutans
Streptococcus mutans merupakan bakteri gram positif berbentuk bulat,
spesies fakultatif anaerob yang mempunyai karakteristik dapat membentuk
pasangan atau rantai selama masa pertumbuhannya. Bakteri ini biasanya ditemukan
pada rongga gigi manusia yang luka dan menjadi bakteri yang paling kondusif
menyebabkan karies untuk email gigi (Brooks et al., 2005).
2.8.4 Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus merupakan bakteri gram positif yang biasanya
berbentuk seperti anggur. Bakteri ini tumbuh dengan cepat pada beberapa tipe
media dan dengan aktif melakukan metabolisme. Bakteri ini biasanya membentuk
koloni abu-abu hingga kuning emas. Infeksi Staphylococcus aureus dapat juga
24
berasal dari kontaminasi langsung dari luka. Bakteri ini dapat menyebabkan
berbagai macam penyakit seperti inflamasi pada kulit, infeksi pernapasan, mastitis,
sepsis, dan sindroma syok toksik (Brooks et al., 2005).
25
BAB III
PELAKSANAAN PENELITIAN
3.1 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan April-Juni 2018 di Laboratorium Biota
Sumatera Universitas Andalas.
3.2 Alat dan Bahan
3.2.1 Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah tabung reaksi (Pyrex®),
cawan Petri (Pyrex®), beaker glass (Pyrex®), gelas ukur (Pyrex®), Erlenmeyer
(Pyrex®), batang pengaduk, pipet mikro (Thermo Scientific), jarum ose, lampu
spiritus, timbangan digital (Dragon®), pinset, pipet tetes, spatel, inkubator
(Gallenkamp®), autoklaf (All American®), laminar air flow (Innotech®), vortex
(Etech®), hot plate (Cima rec®), oven (Memert®), tabung appendorf, Magnetic
stirer hotplate, pH meter, Rotary shaker incubator (Bigger Digital), lemari es
(National), kamera digital dan alat-alat kecil lainnya.
3.2.2 Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah bakteri endofit Bacillus
subtilis UAAC 21622, Nutrient Agar (Merck®), air tebu, molase, ampas tebu,
Amonium Klorida (Merck®), kalium dihidrogen fosfat (Merck®), Magnesium
Sulfat (Merck®), NaCl fisiologis, Mc. Farland, alkohol 70%, spiritus, aquadest,
26
kertas cakram, Natrium hidroksida (Merck®), Asam klorida (Merck®), bakteri uji
(Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Escherichia coli ATCC 25922,
Streptococcus mutan ATCC 25175, Staphylococcus aureus ATCC 25923) yang
didapatkan dari Laboratorium Biota Sumatera Universitas Andalas.
3.3 Prosedur Penelitian
3.3.1 Sterilisasi Alat
Alat-alat yang akan disterilkan terlebih dahulu dicuci bersih dan dikeringkan,
cawan petri dibungkus dengan kertas perkamen. Alat-alat gelas (tabung reaksi,
gelas ukur, erlenmeyer) ditutup mulutnya dengan kapas steril yang dibalut dengan
kain kasa steril lalu dibungkus dengan kertas perkamen, kemudian disterilkan
didalam autoclave pada suhu 1210 C selama 15 menit. Pinset dan jarum ose
disterilkan dengan cara flambier. Laminar air flow (LAF) disterilkan dengan
menyalakan lampu UV selama 5 menit. Lemari aseptis dibersihkan dari debu lalu
disemprot dengan alkohol 70%, dan dibiarkan selama 15 menit (Brooks et al.,
2005).
3.3.2 Pembuatan Media Nutrient Agar (NA)(Merck®)
Ditimbang 20 gram NA dilarutkan ke dalam 1 liter aquades, kemudian
dipanaskan hingga homogen. Disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121oC dengan
tekanan 15 lbs selama 15 menit.
27
3.3.3 Peremajaan bakteri Bacillus subtilis UAAC 21622
Isolat bakteri Bacillus subtilis UAAC 21622 diinokulasikan sebanyak 1 ose
pada Nutrien Agar dengan cara digoreskan secara aseptik, kemudian diinkubasi
selama 24 jam pada suhu 370C (Widyana et al., 2014).
3.3.4 Pembuatan Suspensi Bakteri Bacillus subtilis UAAC 21622
Sebanyak 1-2 ose koloni bakteri diinokulasi kemudian disuspensikan ke
dalam 10 mL larutan NaCl 0,9% dalam tabung reaksi steril kemudian divortex.
Kekeruhan suspensi bakteri dibandingkan dengan standar Mc. Farland . Larutan
standar Mc. Farland dibuat dengan cara sebanyak 99,5 mL larutan H2SO4 0,36 N
dicampurkan dengan larutan BaCl2.2H2O 1,175% sebanyak 0,5 mL di dalam
erlenmeyer, kemudian dikocok sampai terbentuk larutan yang keruh. Kekeruhan ini
dipakai sebagai standar kekeruhan suspensi bakteri (Paju et al., 2013).
3.3.5 Penyiapan Medium Pertumbuhan Bakteri
Medium pertumbuhan bakteri terdiri dari tebu (air tebu, ampas tebu, molase);
NH4Cl 0,6%; KH2PO4 0,1%; dan MgSO4 0,01%. Selanjutnya media disterilkan
dengan menggunakan autoklaf pada suhu 121°C tekanan 15 lbs selama 15 menit
(Todorova et al., 2015).
3.3.6 Pemilihan Waktu Inkubasi dan Sumber Karbon Optimum terhadap

Pengujian Aktivitas Antibakteri dari Isolat Bakteri Bacillus subtilis
UAAC 21622
Pemilihan waktu inkubasi dan sumber karbon dilakukan dengan cara
membuat inokulum sebanyak 5% (v/v) dengan jumlah sel bakteri sebanyak 1,5x108
28
(dibandingkan terlebih dahulu dengan larutan Mc. Farland 0,5) dan diinokulasikan
ke dalam medium fermentasi bakteri dengan konsentrasi air tebu, ampas tebu dan
molase masing-masing 10% dan diinkubasi selama 72 jam dengan agitasi 120 rpm
dan pH 6 sebagai pH awal. Setiap interval 6 jam dilakukan pengambilan sampel
untuk pengujian aktivitas antibakteri serta penentuan biomassa untuk kurva
pertumbuhan bakteri.
Penentuan biomassa dilakukan dengan cara sebanyak 95 mL sampel
disentrifus pada kecepatan 3000 rpm selama 20 menit sehingga terpisah antara
lapisan bening supernatan dengan endapan biomassa. Sel biomassa lalu
dikeringkan dengan oven pada suhu 60°C hingga didapatkan berat kering
biomassa.
3.3.7 Pemilihan Konsentrasi Sumber Karbon Optimum terhadap Pengujian

Aktivitas Antibakteri dari Isolat Bakteri Bacillus subtilis UAAC 21622
Disiapkan medium fermentasi bakteri dengan variasi konsentrasi sumber
karbon terpilih sebesar 10%, 20% dan 30%. Pengkulturan dilakukan dalam rotary
shaker incubator pada putaran 120 rpm dan pH 6 sebagai pH awal. Kemudian
dilakukan pengujian aktivitas antibakteri.
3.3.8 Pemilihan pH Optimum terhadap Pengujian Aktivitas Antibakteri dari

Isolat Bakteri Bacillus subtilis UAAC 21622
Disiapkan medium fermentasi bakteri dengan variasi pH yang berbeda yakni
6; 6,5; 7; 7,5; 8. Pembuatan medium fermentasi bakteri dengan pH berbeda
dilakukan dengan penambahan NaOH atau HCl. Pengkulturan dilakukan dalam
29
rotary shaker incubator pada putaran 120 rpm. Kemudian dilakukan pengujian
aktivitas antibakteri.
3.3.9 Pemilihan Suhu Optimum terhadap Pengujian Aktivitas Antibakteri

dari Isolat Bakteri Bacillus subtilis UAAC 21622
Disiapkan medium fermentasi bakteri dengan variasi suhu yang berbeda
yakni 25, 28, 36 dan 45°C. Pengkulturan dilakukan dalam rotary shaker incubator
pada putaran 120 rpm. Kemudian dilakukan pengujian aktivitas antibakteri.
3.3.10 Pengujian Aktivitas Antibakteri
a. Peremajaan Bakteri Uji
Bakteri uji yang digunakan pada penelitian ini adalah Pseudomonas aeruginosa,
Escherichia coli, Streptococcus mutan dan Staphylococcus aureus. Sebanyak 1 ose
bakteri diinokulasikan pada media agar miring NA dalam tabung reaksi dengan
cara digoreskan secara aseptik, kemudian diinkubasikan selama 24 jam pada suhu
370C (Widyana et al., 2014).
b. Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Pembuatan suspensi bakteri uji dibuat dengan cara menggoreskan 1-2 ose koloni
bakteri kemudian disuspensikan kedalam 10 mL larutan NaCl 0,9% dalam tabung
reaksi steril kemudian divortex. Kekeruhan suspensi bakteri dibandingkan dengan
standar Mc. Farland (Paju et al., 2013).
c. Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode difusi agar. Alat dan
bahan disterilisasi terlebih dahulu menggunakan autoklaf pada suhu 121°C pada
30
tekanan 15 lbs selama 15 menit. Selanjutnya medium NA dimasukkan ke dalam
cawan Petri. Sebanyak 100 µL suspensi bakteri uji dimasukkan ke dalam cawan
Petri menggunakan mikropipet. Selanjutnya sebanyak 10 µL larutan uji dipipet ke
kertas cakram steril, lalu diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C. Kemudian
diamati pertumbuhan mikroba dan diukur diameter hambatnya. Sebagai kontrol
negatif digunakan pelarut air suling dan sebagai kontrol positif digunakan
kloramfenikol 3 mg/ml (Chen et al., 2008).
3.3.11 Analisis Data
Data yang didapatkan dari penelitian disajikan dengan grafik dan tabel,
selanjutnya data yang didapatkan dianalisa secara deskriptif.
31
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil
1. Waktu optimum pada proses fermentasi Bacillus subtilis UAAC 21622
yang memberikan aktivitas antibakteri adalah pada jam ke-42 dan sumber
karbon optimum yaitu molase, dengan diameter hambat yang dihasilkan
untuk melawan bakteri P. aeruginosa sebesar 9 mm; S. aureus sebesar 11
mm; S. mutan sebesar 10 mm; E. coli sebesar 12 mm dengan nilai
biomassa sebesar 0,036 g (Lampiran 2, Tabel 4). Sedangkan pada sumber
karbon air tebu memberikan daya hambat yang lebih kecil yaitu pada jam
ke-36 dengan diameter hambat yang dihasilkan untuk melawan bakteri P.
aeruginosa sebesar 8 mm; S. aureus sebesar 8 mm; S. mutan sebesar 7
mm; E. coli sebesar 7 mm dengan nilai biomassa sebesar 0,078 g
(Lampiran 2, Tabel 2). Dan pada sumber karbon ampas tebu tidak
memberikan daya hambat sama sekali (Lampiran 2, Tabel 3).
2. Konsentrasi molase optimum pada proses fermentasi Bacillus subtilis
UAAC 21622 yang memberikan aktivitas antibakteri adalah 20%, dengan
diameter hambat yang dihasilkan untuk melawan bakteri P. aeruginosa
sebesar 13 mm; S. aureus sebesar 14 mm; S. mutan sebesar 14 mm; E.
coli sebesar 13 mm (Lampiran 2, Tabel 6). Sedangkan pada sumber
karbon air tebu, memberikan daya hambat yang lebih kecil, dengan
32
diameter hambat yang dihasilkan untuk melawan bakteri P. aeruginosa
sebesar 9 mm dan S. mutan sebesar 7 mm (Lampiran 2, Tabel 5).
3. pH optimum pada proses fermentasi Bacillus subtilis UAAC 21622
menggunakan sumber karbon molase yang memberikan aktivitas
antibakteri adalah pada pH 7. Dengan diameter hambat yang dihasilkan
untuk melawan bakteri P. aeruginosa sebesar 16 mm; S. aureus sebesar 17
mm; S. mutan sebesar 15 mm; E. coli sebesar 16 mm (Lampiran 2, Tabel
8). Sedangkan pada sumber karbon air tebu memberikan daya hambat
yang lebih kecil, dengan diameter hambat yang dihasilkan untuk melawan
bakteri P. aeruginosa sebesar 10 mm dan S. mutan sebesar 7 mm
(Lampiran 2, Tabel 7).
4. Suhu optimum pada proses fermentasi Bacillus subtilis UAAC 21622
menggunakan sumber karbon molase yang memberikan aktivitas
antibakteri adalah pada suhu 36°C. Dengan diameter hambat yang
dihasilkan untuk melawan bakteri P. aeruginosa sebesar 16 mm; S. aureus
sebesar 16 mm; S. mutan sebesar 14 mm; E. coli sebesar 17 mm (Lampiran
2, Tabel 10). Sedangkan pada sumber karbon air tebu memberikan daya
hambat yang lebih kecil, dengan diameter hambat yang dihasilkan untuk
melawan bakteri P. aeruginosa sebesar 11 mm dan S. mutan sebesar 8 mm
(Lampiran 2, Tabel 9).
33
4.2 Pembahasan
Pada penelitian sebelumnya, telah dilakukan isolasi bakteri endofit dari
tumbuhan Citrus aurantifolia. Bakteri endofit ini diisolasi oleh Zam et al. (2016)
dan diperoleh 4 isolat bakteri salah satunya yaitu Bacillus subtilis UAAC 21622.
Bakteri endofit ini memiliki aktivitas sebagai antibakteri karena senyawa bioaktif
yang dihasilkan oleh bakteri endofit memiliki potensi yang tinggi untuk melawan
bakteri patogen yang menyebabkan penyakit (Djamaan et al., 2014).
Untuk mendapatkan senyawa bioaktif dari bakteri endofit Bacillus subtilis
UAAC 21622 untuk melawan bakteri patogen ini, maka diperlukan proses
fermentasi. Proses fermentasi ini dipengaruhi oleh medium pertumbuhan yang
menyediakan nutrien yang dibutuhkan oleh mikroba untuk memperoleh energi
untuk pertumbuhan yang diperlukan untuk membentuk sel dan biosintesa
produk-produk metabolit (Brooks et al, 2005). Untuk mendapatkan kondisi yang
optimal, maka perlu dilakukan penetapan waktu inkubasi, jenis sumber karbon,
konsentrasi sumber karbon, pH dan suhu optimum dalam proses fermentasi
tersebut. Setelah didapatkan kondisi optimum proses fermentasi, kemudian
dilakukan pengujian aktivitas antibakteri terhadap mikroba patogen.
Metode yang digunakan dalam pengujian aktivitas antibakteri adalah metode
difusi agar, metode ini dipilih karena pengerjaannya sederhana, pengukuran hasil
yang didapat juga cukup mudah dengan cara mengukur diameter (mm) daerah
bening di sekeliling cakram yang merupakan daerah hambatan pertumbuhan
bakteri. Zona bening dihasilkan karena adanya aktivitas antibakteri dari senyawa
34
yang terdapat pada cakram, senyawa tersebut akan berdifusi ke media yang telah
diinokulasikan bakteri dan menghambat pertumbuhan bakteri sehingga
terbentuknya zona bening disekitar cakram (Choma & Grzelak, 2010).
Kontrol positif yang digunakan untuk pengujian aktivitas antibakteri yaitu
kloramfenikol. Sedangkan kontrol negatif yang digunakan yaitu air suling.
Kloramfenikol digunakan sebagai kontrol positif karena kloramfenikol termasuk
antibiotik spektrum luas yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri Gram
positif maupun bakteri Gram negatif (Katzung et al., 2004). Kontrol positif ini
digunakan untuk mengetahui mikroorganisme patogen yang diuji dapat dihambat
pertumbuhannya dengan membentuk zona bening atau diameter hambat .dan juga
digunakan untuk membandingkan diameter hambat yang terbentuk. Sebaliknya, air
suling digunakan sebagai kontrol negatif karena pelarut yang digunakan untuk
media pertumbuhan bakteri adalah air suling. Selain itu air suling juga tidak
memberikan daya hambat terhadap pertumbuhan mikroba. Kontrol negatif
berfungsi untuk mengetahui ada atau tidaknya pengaruh pelarut terhadap
pertumbuhan bakteri sehingga dapat diketahui bahwa yang mempunyai aktivitas
antibakteri adalah zat uji bukan pelarut (Nuria et al., 2009).
Bakteri uji yang digunakan untuk pengujian aktivitas antibakteri ini adalah P.
aeruginosa, S. aureus, S. mutan dan E. coli. P. aeruginosa merupakan bakteri
Gram negatif yang dapat menyebabkan infeksi pada saluran kemih, kuku, mata,
kulit, dan infeksi nosokomial serta pneumonia (Tekur, 2007). S. aureus merupakan
bakteri Gram positif yang dapat menyebabkan berbagai jenis penyakit seperti
35
inflamasi pada kulit, infeksi pernapasan, mastitis, sepsis dan sindroma syok toksik
(Bhatia & Zahoor, 2007; Montville & Matthews, 2008). S. mutan merupakan
bakteri Gram positif yang sering ditemukan di dalam rongga mulut manusia dan
merupakan penyebab siginifikan terhadap karies gigi (Kim et al., 2008). Dan E. coli
merupakan bakteri Gram negatif dapat menyebabkan infeksi saluran pencernaan
dan infeksi saluran kemih (Tekur, 2007). Keempat bakteri ini digunakan karena
mewakili kelompok bakteri Gram positif dan Gram negatif. Selain itu, keempat
bakteri ini sering menyebabkan infeksi pada manusia dan memiliki kasus resistensi
yang tinggi.
Konsentrasi bakteri uji yang digunakan dalam pengujian aktivitas antibakteri
ditentukan dengan membandingkan suspensi bakteri uji dengan kekeruhan 0,5 Mc
Farland. Pembanding 0,5 Mc Farland digunakan untuk menentukan
kekeruhan/turbiditas dari suspensi bakteri. Kekeruhan 0,5 Mc Farland setara
dengan densitas sel 1,5x108 cfu/mL. Tujuan membandingkan suspensi bakteri uji
dengan kekeruhan Mc Farland 0,5 adalah agar disetiap pengerjaan jumlah sel
bakteri yang digunakan selalu sama.
4.2.1 Penetapan Waktu Inkubasi Optimum
a. Air Tebu
Pada penetapan waktu inkubasi proses fermentasi Bacillus subtilis UAAC
21622 menggunakan sumber karbon air tebu, menunjukkan adanya aktivitas
antibakteri pada jam ke-30, 36, 42 dan 48, sedangkan pada jam ke-6, 12, 18,
24, 54, 60, 66 dan 72 tidak memberikan diameter hambat terhadap aktivitas
36
antibakteri. Bakteri uji P. aeruginosa dapat dihambat pertumbuhannya pada
jam ke-30 dengan diameter sebesar 7 mm, pada jam ke-36 sebesar 8 mm,
pada jam ke-42 sebesar 7 mm dan pada jam ke-48 sebesar 7 mm (Lampiran
3, Gambar 1). Bakteri uji S. aureus dapat dihambat prtumbuhannya pada jam
ke-36 dengan diameter sebesar 7 mm dan pada jam ke-48 dengan diameter
sebesar 7 mm (Lampiran 3, Gambar 2). Bakteri uji S. mutan dapat dihambat
pertumbuhannya pada jam ke-36 dengan diameter sebesar 7 mm dan pada
jam ke-42 dengan diameter 7 mm (Lampiran 3, Gambar 3). Dan bakteri uji E.
coli dapat dihambat pertumbuhannya pada jam ke-36 dengan diameter
sebesar 7 mm dan pada jam ke-48 sebesar 7 mm (Lampiran 3, Gambar 4).
Dari data tersebut dapat dilihat bahwa aktivitas antibakteri yang baik
ditunjukkan pada jam ke-36 dalam menghambat bakteri uji P. aeruginosa
dengan diameter sebesar 8 mm dan biomassa sebesar 0,036 g (Lampiran 3,
Tabel 2, Gambar 28).
b. Ampas Tebu
21622 menggunakan sumber karbon ampas tebu, menunjukkan tidak adanya
aktivitas antibakteri baik pada waktu inkubasi jam ke-6, 12, 18, 24, 30, 36,
42, 48, 54, 60, 66 maupun 72 (Lampiran 2, Tabel 3). Sehingga ampas tebu
tidak bisa digunakan sebagai sumber karbon pada media fermentasi bakteri
endofit Bacillus subtilis UAAC 21622.
37
c. Molase
21622 menggunakan sumber karbon molase, menunjukkan adanya diameter
hambat terhadap aktivitas antibakteri pada jam ke-18, 24, 30, 36, 42 dan 48,
sedangkan pada jam ke-6, 12, 54, 60, 66 dan 72 tidak menunjukkan diameter
hambat terhadap aktivitas antibakteri. Bakteri uji P. aeruginosa dapat
dihambat pertumbuhannya pada jam ke-18 dengan diameter sebesar 8 mm,
pada jam ke-24 sebesar 7 mm, pada jam ke-30 sebesar 9 mm, pada jam ke-36
sebesar 8 mm, pada jam ke-42 sebesar 9 mm dan pada jam ke-48 sebesar 7
mm (Lampiran 3, Gambar 9). Bakteri uji S. aureus dapat dihambat
pertumbuhannya pada jam ke-24 dengan diameter sebesar 8 mm, pada jam
ke-36 sebesar 10 mm, pada jam ke-42 sebesar 11 mm, pada jam ke-48 sebesar
8 mm (Lampiran 3, Gambar 10). Bakteri uji S. mutan dapat dihambat
ke-24 sebesar 8 mm, pada jam ke-30 sebesar 8 mm dan pada jam ke-42
sebesar 10 mm (Lampiran 3, Gambar 11). Bakteri uji E. coli dapat dihambat
ke-24 sebesar 7 mm, pada jam ke-36 sebesar 10 mm, pada jam ke-42 sebesar
12 mm dan pada jam ke-48 sebesar 8 mm (Lampiran 3, Gambar 12). Dari
data tersebut menunjukkan bahwa jam ke-42 memberikan diameter hambat
yang lebih besar dalam menghambat pertumbuhan bakteri uji dengan
biomassa sebesar 0,078 g (Lampiran 3, Gambar 28, Tabel 7).
38
4.2.2 Penetapan Konsentrasi Sumber Karbon
a. Air tebu
Pada penetapan konsentrasi air tebu pada proses fermentasi Bacillus
subtilis UAAC 21622, menunjukkan adanya aktivitas antibakteri pada
konsentrasi 20%, yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri uji P.
aeruginosa dengan diameter sebesar 9 mm (Lampiran 3, Gambar 13) dan
bakteri uji S. mutan sebesar 7 mm. Sedangkan pada konsentrasi 10% dan 30%
tidak menghasilkan daya hambat terhadap bakteri uji.
b. Molase
Pada penetapan konsentrasi molase pada proses fermentasi Bacillus
subtilis UAAC 21622, menunjukkan adanya aktivitas antibakteri pada semua
konsentrasi. Bakteri uji P. aeruginosa dapat dihambat pertumbuhannya pada
konsentrasi 10% dengan diameter sebesar 12 mm, pada konsentrasi 20%
sebesar 13 mm dan pada konsentrasi 30% sebesar 10 mm (Lampiran 3,
Gambar 14). Bakteri uji S. aureus dapat dihambat pertumbuhannya pada
sebesar 14 mm dan pada konsentrasi 30% sebesar 11 mm (Lampiran 3,
Gambar 15). Bakteri uji S. mutan dapat dihambat pertumbuhannya pada
dengan diameter sebesar 14 mm dan pada konsentrasi 30% dengan diameter
sebesar 11 mm (Lampiran 3, Gambar 16). Bakteri uji E. coli dapat dihambat
pertumbuhannya pada konsentrasi 10% dengan diameter sebesar 12 mm,

39
pada konsentrasi 20% sebesar 13 mm, pada konsentrasi 30% sebesar 10 mm
(Lampiran 3, Gambar 17). Dari ketiga data tersebut menunjukkan bahwa
konsentrasi 20% memberikan daya hambat yang lebih besar dalam
menghambat pertumbuhan bakteri uji.
Dari pengujian aktivitas antibakteri tersebut dapat dilihat bahwa kebutuhan
sumber karbon pada bakteri Bacillus subtilis UAAC 21622 optimum terdapat pada
konsentrasi molase 20%. Hal ini menunjukkan bahwa konsentrasi molase 20%
tidak kurang maupun tidak melebihi kebutuhan sumber karbon pada pertumbuhan
bakteri Bacillus subtilis UAAC 21622 ini. Sedangkan konsentrasi molase 10%
kebutuhan sumber karbon untuk pertumbuhan bakteri Bacillus subtilis UAAC
21622 ini belum optimal. Lain halnya pada konsentrasi molase 30% yang
mengalami penurunan daya hambat pada pengujian aktivitas antibakteri, hal ini
disebabkan karena sumber karbon untuk pertumbuhan bakteri Bacillus subtilis
UAAC 21622 ini melebihi kebutuhan sumber karbon yang seharusnya didapatkan
sehingga tekanan osmotik di dalam dan di luar sel bakteri tidak seimbang yang
dapat menyebabkan plasmolisis pada sel bakteri dan menyebabkan pertumbuhan
bakteri ini tidak optimal sehingga dapat mempengaruhi aktivitas antibakteri yang
dihasilkan oleh bakteri tersebut (Brooks, et al., 2005).
4.2.3 Penetapan pH Optimum
a. Air Tebu
40
Pada penetapan pH optimum proses fermentasi Bacillus subtilis UAAC
antibakteri pada pH 7, yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri uji P.
aerugiosa dengan diameter sebesar 10 mm (Lampiran 3, Gambar 18) dan
bakteri uji S. mutan sebesar 7 mm. Sedangkan pada pH 6; 6,5; 7,5; 8 tidak
menghasilkan daya hambat terhadap bakteri uji.
b. Molase
Pada penetapan pH optimum proses fermentasi Bacillus subtilis UAAC
21622 dengan sumber karbon molase, menunjukkan adanya aktivitas
antibakteri pada semua variasi pH. Bakteri uji P. aeruginosa dapat dihambat
pertumbuhannya pada pH 6 dengan diameter sebesar 11 mm, pada pH 6,5
sebesar 12 mm, pada pH 7 sebesar 12 mm dan pada pH 7,5 sebesar 12 mm
(Lampiran 3, Gambar 19). Bakteri uji S. aureus dapat dihambat
pertumbuhannya pada pH 6 dengan diameter sebesar 12 mm, pada pH 6,5
sebesar 13 mm, pada pH 7 sebesar 15 mm, pada pH 7,5 sebesar 13 mm dan
pada pH 8 sebesar 10 mm (Lampiran 3, Gambar 20). Bakteri uji S. mutan
dapat dihambat pertumbuhannya pada pH 6 dengan diameter sebesar 12 mm,
pada pH 6,5 sebesar 13 mm, pada pH 7 sebesar 15 mm, pada pH 7,5 sebesar
13 mm dan pada pH 8 sebesar 10 mm (Lampiran 3, Gambar 21). Bakteri uji
E. coli dapat dihambat pertumbuhannya pada pH 6 dengan diameter sebesar
13 mm, pada pH 6,5 sebesar 11 mm, pada pH 7 sebesar 14 mm dan pada pH
7,5 sebesar 12 mm (Lampiran 3, Gambar 22). Dari data tersebut,
41
menunjukkan bahwa pH 7 memberikan diameter hambat yang lebih besar
dalam menghambat pertumbuhan bakteri uji.
Enzim mempunyai pH tertentu untuk dapat bekerja secara efektif, dimana pH
optimal enzim pada bakteri untuk dapat bekerja secara efektif umumnya yaitu pada
pH 7 (Chojnacka, 2010). Dari pengujian aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa
aktivitas antibakteri optimal yaitu pada pH 7, hal ini disebabkan karena enzim
bekerja secara optimal pada pH 7 sehingga kemampuan enzim untuk mengkatalis
reaksi optimal sehingga metabolit sekunder yang dihasilkan oleh bakteri juga
optimal. Lain halnya dengan pH 6; 6,5; 7,5; dan 8 yang menunjukkan aktivitas
antibakteri yang kurang baik, hal ini disebabkan karena enzim dapat terdenaturasi
jika pH terlalu asam atau terlalu basa bagi bakteri sehingga kemampuan enzim
dalam mengkatalis tidak optimal dan produk yang dihasilkan juga tidak optimal.
4.2.4 Penetapan Suhu Optimum
a. Air Tebu
Pada penetapan suhu optimum proses fermentasi Bacillus subtilis UAAC
antibakteri pada suhu 36°C yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri uji
P.aerugiosa dengan diameter sebesar 10 mm (Lampiran 3, Gambar 23) dan
bakteri uji S. mutan sebesar 8 mm. Sedangkan pada suhu 25, 28 dan 45°C
tidak menghasilkan daya hambat terhadap bakteri uji.
b. Molase
42
Pada penetapan suhu optimum proses fermentasi Bacillus subtilis UAAC
21622 dengan sumber karbon molase, menunjukkan adanya aktivitas
antibakteri pada semua variasi suhu. Bakteri uji P. aeruginosa dapat
dihambat pertumbuhannya pada suhu 28°C dengan diameter hambat sebesar
13 mm, pada suhu 36°C sebesar 15 mm dan pada suhu 45°C sebesar 10 mm
(Lampiran 3, Gambar 24). Bakteri uji S. aureus dapat dihambat
pertumbuhannya pada suhu 25°C dengan diameter hambat sebesar 11 mm,
pada suhu 28°C sebesar 11 mm dan pada suhu 36°C sebesar 15 mm
(Lampiran 3, Gambar 25). Bakteri uji S. mutan dapat dihambat
(Lampiran 3, Gambar 26). Bakteri uji E. coli dapat dihambat
(Lampiran 3, Gambar 27). Dari data tersebut, menunjukkan bahwa suhu 36°C
memberikan diameter hambat yang lebih besar dalam menghambat
pertumbuhan bakteri uji.
Setiap enzim dapat bekerja dengan efektif pada suhu tertentu dan aktivitasnya
akan berkurang jika berada pada kondisi di bawah atau di atas titik tersebut.
Sebagian besar enzim mempunyai suhu optimal yang mendekati suhu tubuh yaitu
berkisar antara 35-37°C (Chojnacka, 2010). pada suhu tinggi enzim dapat rusak dan
pada suhu rendah enzim menjadi tidak aktif. Dari data menunjukkan bahwa suhu
43
optimal pada pengujian aktivitas antibakteri yaitu pada suhu 36°C hal ini
disebabkan karena aktivitas enzim bekerja secara optimal sehingga kemampuan
enzim untuk mengkatalis optimal sehingga produk yang dihasilkan juga optimal.
Pada suhu 25°C dan 28°C menunjukkan aktivitas antibakteri kurang optimal, hal
ini disebabkan karena enzim tidak aktif yang menyebabkan kemampuan enzim
dalam mengkatalis juga tidak aktif sehingga reaksi kimia untuk memproduksi
produk berjalan lambat. Pada suhu 45°C menunjukkan bahwa aktivitas antibakteri
kurang optimal, hal ini disebabkan karena enzim mengalami kerusakan atau
mengalami denaturasi yang menyebabkan kemampuan enzim untuk mengkatalis
tidak optimal.
44
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan bahwa:
1. Waktu optimum pada proses fermentasi Bacillus subtilis UAAC 21622
yang memberikan aktivitas antibakteri adalah pada jam ke-42 dan sumber
karbon optimum yaitu molase.
2. Konsentrasi molase optimum pada proses fermentasi Bacillus subtilis
UAAC 21622 yang memberikan aktivitas antibakteri adalah 20%.
3. pH optimum pada proses fermentasi Bacillus subtilis UAAC 21622 yang
memberikan aktivitas antibakteri adalah pada pH 7.
4. Suhu optimum pada proses fermentasi Bacillus subtilis UAAC 21622
yang memberikan aktivitas antibakteri adalah pada suhu 36°C.
5.2 Saran
Adapun saran pada penelitian ini adalah diharapkan agar penelitian ini dapat
dilanjutkan pada tahapan karakterisasi senyawa antibakteri yang dihasilkan oleh
bakteri endofit Bacillus subtilis UAAC 21622 serta optimasi lainnya seperti efek
nitrogen dan trace element.
45
DAFTAR PUSTAKA
Bhatia A, Zahoor S. Staphylococcus aureus Enterotoxins: A Review. Journal

Clinical and Diagnostic Research. 2007: 2; 188-197.
Borsari RRJ, Celligoi MAPC, Buzato JB, Silva. Influence of Carbon Source and the
Fermentation Process on Levan Production by Zymomonas Mobilis Analyzed by
the Surface Response Method. Ciênc. Tecnol. Aliment. 2006: 26(3); 604-609.
Brooks GF, Janet SB, Stephen AM. Mikrobiologi Kedokteran. Diterjemahkan oleh
Dripa Sjabana. Jakarta: Salemba Medika; 2005.
Chen IN, Chang CC, Ng CY, Wang YY, Shyu TR. Antioxidant and Antimicrobial
Activity of Zingiberaceae Plants in Taiwan. J. Plant Foods Hum.Ntr. 2008: 63;
15-20.
Chojnacka K. Fermentation Products. Chem Eng Chem Process. 2010; 5.
Choma IM, Grzelak EM. Bioautography Detection in Thin-Layer Chromatography.
Journal of Chromatography. 2010; 12(18): 2684-2691.
Djamaan A, Asia, Wahyuni R. Isolasi Mikroba Endofit dari Kulit Batang, Daun,
dan Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana L.) Pengkulturan serta Uji
Aktivitas Antimikrobanya. Jurnal Farmasi Hiega. 2014; 6(1): 90-97.
Ekenstierna L. Mikrobiologi. Jakarta: Student Literatur; 2008.
Fitriani, Sutari, Irawati L. Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Produksi, Curahan
Kerja dan Konsumsi Petani Tebu Rakyat di Provinsi Lampung. Jurnal Ilmiah Esai.
2013; 7(1): 10
Gunawan SG. Farmakologi dan Terapi Edisi 5. Jakarta: Penerbit Buku FKUI; 2007.
Gould D, Brooker C. Mikrobiologi Terapan untuk Perawat. Penerjemah: M. Ester.
Jakarta: EGC; 2003.
Guo BJ, Dai SN, Huang Y, Leong C, Ong W, Carte BK. Cytonic acid A and B,
Novel Tridepside Inhibitor of hCMV Protease from the Endophytic Fungus
Cytonaena sp. J.Nat.Prod. 2000; 63: 602-604.
Hidayat N, Padaga MC, Suhartini S. Mikrobiologi Industri. Yogyakarta: Penerbit
Andi; 2006.
Hogg S. Essential Microbiology. England: John Wiley & Sons Inc; 2005.
46
Horn WS, Simmonds MSJ, Schartz RE, Blaney WM. Phomopsichalasin, a Novel
Antimicrobial Agent from an Endophytic Phomopsis sp. Tetrahedron. 1995; 14:
3969-3978.
Katzung BG. Farmakologi Dasar dan Klinik Edisi XIII. Diterjemahkan oleh Bagian
Farrmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga. Jakarta: Salemba
Medika; 2004.
Kim JE, Kim HE, Kwang JK, Lee HJ, Kwon HK, Kim BI. Antibacterial
Characteristic of Curcuma xanthorrhiza Extract on Streptococcus mutans. J.
Microbiology. 2008: 46(2); 228-232.
Lavarack BP, Griffin GJ, Rodman D. The Acid Hydrolysis of Sugarcane Bagasse
Hemicellulose to Produce Xylose, Arabinose, Glucose and Other Products.
Biomass Bioenerg. 2002; 23: 367-380.
Lee J, Lobkovsky E, Pliam NB, Strobel GA, Clardy J. Subglutinols A and B:
Immunosuppressive Compounds from the Endophytic Fungus Fusarium
subglutinans. J.Org.Chemistry. 1995; 60: 7076- 7077.
Legaz, Maria E. Binding of soluble glycoproteins from sugarcane juice to cells of
Acetobacter diazotrophicus. J Internatl Microbial. 2000; 3: 177-182
Loto CA, Olofinjana A, Popoola API. Effect of Saccharum officinarum Juice
Extract Additive on the Electrosition of Zinc on Mild Steel in Acid Chloride
Solution. International Journal Electrochem Science. 2012; 7: 9795-9811.
Lu H, Zou WX, Meng JC, Hu J, Tan RX. New Bioactive Metabolites Produced by
Colletotrichum sp. an Endophytic Fungus in Artemisia annua. Plant Science. 2000;
151: 76-73.
Jawetz, Melnick, Adelberg’s. Medical Micobiology 24th Edition. New York:
McGraw Hill Medical; 2005.
Mandal BK, Wilkins EGL, Dunbar EM, Mayon-White RT. Infection Diseases 6th
Edition. Oxford: Blackwell Publishing; 2004.
Moat GA, Foster JW, Spector MP. Microbial Physiology 4th Edition. New York:
John Wiley & Sons Ltd; 2002.
Montville TJ, Matthews KR. Food microbiology: An introduction. Washington
D.C:ASM Press; 2008.
Nuria MC, Arfin F, Sumantri. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Jarak
Pagar terhadap Bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli
ATCC 25922 dan Salmonella thypi ATCC 1408. Mediagro. 2009; 5(2).
47
Paju N, Paulina VYY, Novel K. Uji Efektivitas Salep Ekstrak Daun Binahong
(Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) pada Kelinci (Oryctolagus cuniculus) yang
Terinfeksi Bakteri Staphylococcus aureus. Jurnal Ilmiah Farmasi; 2013. 2(1):
51-61.
Pelczar MJ, Chan ECS. Dasar-Dasar Mikrobiolgi I. Penerjemah: HS Ratna. Jakarta:
Penerbit UI Press; 2006.
Purwanto UMS, Pasaribu FH, Bintang M. Isolasi Bakteri Endofit dari Tanaman
Sirih Hijau (Piper betle L.) dan Potensinya sebagai Penghasil Senyawa Antibakteri.
Curr Biochem. 2014; 1(1): 51-57.
Radji M. Buku Ajar Mikrobiologi: Panduan Mahasiswa Farmasi dan Kedokteran.
Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC; 2010.
Sari WLP, Putra DP, Handayani D. Senyawa Antibiotik Dari Bacillus Sp1 yang
Bersimbiosis pada Spon Laut Haliclona Fascigera. Jurnal Sains Farmasi. 2017;
3(2): 134-140.
Schulz B, Boyle C. What are Endophytes: In Microbial Root Endophytes. Berlin:
Springer-Verlag; 2006.
Shaikh S, Jamale F, Shazi S, Syed MDR, Mohammad AK. Antibiotic Resistance
and Extended Spectrum Beta-Lactamases: Types, Epidemiology and Treatment.
Saudi Journal of Biological Sciences. 2014; 22: 90–101.
Simanjuntak P, Parwati T, Bustanussalam, Prana TK, Wibowo S, Shibuya H.
Isolasi dan Kultivasi Mikroba Endofit Penghasil Senyawa Alkaloid Kinkona dari
Chinchona sp. Journal Mikrobiology Indonesia. 2002; 7(2): 27-30.
Steenis CGJ. Flora untuk Sekolah di Indonesia. Diterjemahkan oleh Moeso
Sarjowinoto. Jakarta: Prodni Paramita; 2006.
Strobel GA, Miller RV, Miller C, Condron M, Teplow DB, Hess WM.
Cryptocandin, a Potent Antimycotic from Endophytic Fungus
Cryptosporiopsisquercina. Microbiology. 1999; 145: 1919-1926.
Strobel GA, Ford E, Woapong J, Harper JK, Arif AM, Grant DM, Fung PCW, Chan
K. Isopestacin, an Isobenzopuranone from Pestalotiopsis microspora, Possessing
Antifungal and Antioxidant Activities. Pytochemistry. 2002; 60(2): 179-183.
Strobel GA, Daisy B. Bioprospecting for Microbial Endophytes and Their Natural
Products. Microbiology and Molecular Biology Review. 2003; 67(4):491-502.
Sturz AV, Nowak J. Endophytic Communities of Rhizobacteria and the Strategies
Required to Create Yield Enhancing Associations with Crops. Applied Soil
Ecology. 2000; 15(2): 183– 190.
48
Sundararaj TS, Anthoniraj S, Kannan N, Muthuharuppan SM. Microbiology.
Chennai: Tamil Nadu Textbook Corporation; 2004.
Syakir ME, Karmawati N, Bermawie B, Prastowo D, Soetopo DS, Effendi E,
Hadipoentyanti, Siswanto R, Sri H, Yusron M. Inovasi Teknologi Perkebunan
Indonesia. 2011.
Tekur U. Pharmacology-Antimicrobial Agents: Antibacterial Drugs. New Delhi:
Departement of Pharmacology Maulana Azad Medical College; 2007.
Todorova S, Stanchev V, Kozhuharova L. Optimization of Complex Culture
Medium for Increase of Bacillus subtilis TS01 Antimicrobial Activity Againts
Phytopathogens. Asian Journal of Microbiology and Enviromental Science. 2015:
17(3); 549-555.
Widyana W, Siti K, Irwan L. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Lumut Octoblepharum
albidium Hedw terhadap Pertumbuhan Staphylococcus Epidermidis dan
Pseudomonas aeruginosa. Jurnal Protobiont. 2014; 3(2) : 166 -170.
Willey JM, Sherwood LM, Woolverton CJ. Microbial Interaction. In: Prescott’s
Microbiology 7th Edition. New York: The McGrawth-Hill Companies; 2008.
Yusma. Pemanfaatan Limbah Molase dalam Pembuatan Etanol Secara Fermentasi.
Media Litbang Kesehatan. 1999; 9(3): 3-7.
Zam SI, Syamsuardi, Agustien A, Jannah M, Aldi Y, Djamaan A. Isolation,
Characterization of Endophytic Bacteria from Citrus aurantifolia Swingle Leaves
and Testing of Antifungal Activity towards Fusarium oxysporum. Journal Der
Pharmachia Lettre. 2016; 8(11): 83-89.
Zhang B, Salituro G, Szalkowski D, Li Z, Zhang Y, Royo I, Vilella D, Dez M,
Pelaes F, Ruby C, Kendall RL, Mao X, Griffin P, Calaycay J, Jzierath JR, Heck JV,
Smith RG, Moller DE. Discovery of Small Molecule Insulin Mimetic with
Antidiabetic Activity in Mice. Science. 1999; 284 (5416): 974-981.
Zulkifli L, Jekti DSD, Mahrus, Lestari N, Rasmi DAC. Isolasi Bakteri Endofit Dari
Sea Grass Yang Tumbuh Di Kawasan Pantai Pulau Lombok Dan Potensinya
Sebagai Sumber Antimikroba Terhadap Bakteri Patogen. Jurnal Biologi Tropis.
2016; 16(2): 80-93.
49
Lampiran 1. Skema Kerja
Peremajaan bakteri Bacillus subtilis UAAC 21622
Pembuatan Suspensi Bakteri Bacillus subtilis UAAC

21622
Penyiapan media pertumbuhan bakteri Bacillus

subtilis UAAC 21622
Pemilihan waktu
Pemilihan sumber Pemilihan waktu:
inkubasi dan
karbon: air tebu, tiap 6 jam selama
sumber karbon
ampas tebu, 72 jam
optimum
molase
Pemilihan
Pemilihan konsentrasi
konsentrasi sumber sumber karbon:
karbon optimum 10%, 20%,30%
Pemilihan pH: 6; Pemilihan pH

6,5; 7; 7,5; 8 optimum
Pemilihan suhu Pemilihan suhu:

optimum 25,28,36,45 °C
Analisis data
50
Lampiran 2. Data Hasil Penelitian
Tabel 2. Hasil Skrining Uji Aktivitas Antibakteri dan Biomassa Bacillus subtilis
UAAC 21622 pada Penentuan Waktu Inkubasi Optimum Menggunakan
Air Tebu sebagai Sumber Karbon
Diameter Hambat (mm)

t Biomassa
P.
S. aureus S. mutans E. coli (g)
(jam) aeruginosa
ATCC ATCC ATCC
ATCC
25923 25175 25922
27853
6 6 6 6 6 0,004
12 6 6 6 6 0,004
18 6 6 6 6 0,018
24 6 6 6 6 0,022
30 7 6 6 6 0,029
36 8 7 7 7 0,036
42 7 6 7 6 0,024
48 7 7 6 7 0,02
54 6 6 6 6 0,014
60 6 6 6 6 0,012
66 6 6 6 6 0,01
72 6 6 6 6 0,01
K+ 32 31 35 30 -
K- - - - - -
51
Lampiran 2. Lanjutan
Ampas Tebu sebagai Sumber Karbon

t Biomassa
P.
(jam) aeruginosa
ATCC ATCC ATCC
ATCC
25923 25175 25922
27853
6 6 6 6 6 0,002
12 6 6 6 6 0,004
18 6 6 6 6 0,006
24 6 6 6 6 0,008
30 6 6 6 6 0,008
36 6 6 6 6 0,01
42 6 6 6 6 0,012
48 6 6 6 6 0,01
54 6 6 6 6 0,009
60 6 6 6 6 0,01
66 6 6 6 6 0,007
72 6 6 6 6 0,008
K+ 31 35 45 31 -
K- - - - - -
52
Molase sebagai Sumber Karbon

t Biomassa
P.
(jam) aeruginosa
ATCC ATCC ATCC
ATCC
25923 25175 25922
27853
6 6 6 6 6 0,02
12 6 6 6 6 0,044
18 8 6 8 7 0,048
24 7 8 8 7 0,056
30 9 6 8 6 0,062
36 8 10 8 10 0,062
42 9 11 10 12 0,078
48 7 8 6 8 0,066
54 6 6 6 6 0,054
60 6 6 6 6 0,044
66 6 6 6 6 0,02
72 6 6 6 6 0,02
K+ 31 32 31 29 -
K- - - - - -
53
0,09
0,08
0,07
0,06
Biomassa
0,05
0,04
0,03
0,02
0,01
0
6 12 18 24 30 36 42 48 54 60 66 72
t (jam)
Air Tebu Ampas Tebu Molase
Gambar 1. Kurva Pertumbuhan Bacillus subtilis UAAC 21622
54
Tabel 5. Hasil Skrining Uji Aktivitas Antibakteri Bacillus subtilis UAAC 21622
pada Penentuan Konsentrasi Optimum Menggunakan Air Tebu sebagai
Sumber Karbon

Konsentrasi P.
S. aureus S. mutans E. coli
aeruginosa
ATCC ATCC ATCC
ATCC
25923 25175 25922
27853
10% 6 6 6 6
20% 9 6 7 6
30% 6 6 6 6
K(+) 31 32 32 32
K(-) - - - -
10
9
8
Diameter Hambat
7
6 PA
5
SA
4
3 SM
2 EC
1
0
10% 20% 30%
Konsentrasi
Gambar 2. Kurva Hubungan Diameter Hambat dengan Konsentrasi pada

Penentuan Konsentrasi Optimum Menggunakan Air Tebu
55
pada Penentuan Konsentrasi Optimum Menggunakan Molase sebagai
Sumber Karbon

Konsentrasi P.
aeruginosa
ATCC ATCC ATCC
ATCC
25923 25175 25922
27853
10% 12 12 12 12
20% 13 14 14 13
30% 10 11 11 10
K(+) 30 33 32 32
K(-) 6 6 6 6
16
14
12
Diameter Hambat
10
PA
8
SA
6 SM
4 EC
0
10% 20% 30%
Konsentrasi

Penentuan Konsentrasi Optimum Menggunakan Molase
56
pada Penentuan pH Optimum Menggunakan Air Tebu 20%

P.
pH S. aureus S. mutans E. coli
aeruginosa
ATCC ATCC ATCC
ATCC
25923 25175 25922
27853
6 6 6 6 6
6,5 6 6 6 6
7 10 6 7 6
7,5 6 6 6 6
8 6 6 6 6
K (+) 30 31 30 31
K (-) - - - -
12
10
Diameter Hambat
8
PA
6
SA
4 SM
EC
2
0
6 6,5 7 7,5 8
pH

Penentuan pH Optimum Menggunakan Air Tebu
57
pada Penentuan pH Optimum Menggunakan Molase 20%

pH P.
aeruginosa
ATCC ATCC ATCC
ATCC
25923 25175 25922
27853
6 11 12 12 13
6,5 12 13 13 11
7 12 15 15 14
7,5 12 13 13 12
8 6 10 10 6
K (+) 30 31 29 34
K (-) - - - -
16
14
12
Diameter Hambat
10
PA
8
SA
6 SM
4 EC
0
6 6,5 7 7,5 8
pH

Penentuan pH Optimum Menggunakan Molase
58
pada Penentuan Suhu Optimum Menggunakan Air Tebu 20% dan pH 7

Suhu (°C) P.
aeruginosa
ATCC ATCC ATCC
ATCC
25923 25175 25922
27853
25 6 6 6 6
28 6 6 6 6
36 11 6 8 6
45 6 6 6 6
K (+) 31 32 30 30
K (-) - - - -
12
10
Diameter Hambat
8
PA
6
SA
4 SM
EC
2
0
25 28 36 45
Suhu

Penentuan Suhu Optimum Menggunakan Air Tebu
59
pada Penentuan Suhu Optimum Menggunakan Molase 20% dan pH 7

Suhu (°C) P.
aeruginosa
ATCC ATCC ATCC
ATCC
25923 25175 25922
27853
25 6 11 6 11
28 13 11 14 11
36 15 15 17 12
45 10 6 13 6
K (+) 32 32 30 32
K (-) - - - -
18
16
14
Diameter Hambat
12
10 PA
8 SA
6 SM
4 EC
2
0
25 28 36 45
Suhu

Penentuan Suhu Optimum Menggunakan Molase
60
Lampiran 3. Dokumentasi Hasil Penelitian
Gambar 8. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap P. aeruginosa (Penetapan

Waktu Inkubasi Menggunaan Sumber Karbon Air Tebu)
Gambar 9. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap S. aureus (Penetapan Waktu

Inkubasi Menggunaan Sumber Karbon Air Tebu)
Keterangan:
- (-) = Kontrol negatif (air suling)
- (+) = Kontrol positif (kloramfenikol 3 mg/ml)
- A = Jam ke-30
- B = Jam ke-36
- C = Jam ke-42
- D = Jam ke-48
61
Gambar 10. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap S. mutan (Penetapan Waktu

Gambar 11. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap E. coli (Penetapan Waktu

Keterangan:
- A = Jam ke-30
- B = Jam ke-36
- C = Jam ke-42
- D = Jam ke-48
62

Waktu Inkubasi Menggunaan Sumber Karbon Ampas Tebu)

Inkubasi Menggunaan Sumber Karbon Ampas Tebu)
Keterangan:
- A = Jam ke-30
- B = Jam ke-36
- C = Jam ke-42
- D = Jam ke-48
63


Keterangan:
- A = Jam ke-30
- B = Jam ke-36
- C = Jam ke-42
- D = Jam ke-48
64

Waktu Inkubasi Menggunaan Sumber Karbon Molase)

Inkubasi Menggunaan Sumber Karbon Molase)
Keterangan:
- A = Jam ke-30
- B = Jam ke-36
- C = Jam ke-42
- D = Jam ke-48
65


Keterangan:
- A = Jam ke-30
- B = Jam ke-36
- C = Jam ke-42
- D = Jam ke-48
66

Konsentrasi Air Tebu)
Keterangan:
- A = Konsentrasi air tebu 10%
- B = Konsentrasi air tebu 20%
- C = Konsentrasi air tebu 30%
67

Konsentrasi Molase)
Gambar 23. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap S. aureus (Penetapan

Konsentrasi Molase)
Keterangan:
- A = Konsentrasi molase 10%
- B = Konsentrasi molase 20%
- C = Konsentrasi molase 30%
68
Gambar 24. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap S. mutan (Penetapan

Konsentrasi Molase)
Gambar 25. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap E. coli (Penetapan

Konsentrasi Molase)
Keterangan:
- A = Konsentrasi molase 10%
- B = Konsentrasi molase 20%
- C = Konsentrasi molase 30%
69

pH Menggunaan Sumber Karbon Air Tebu 20%)
Keterangan:
- A = pH 6
- B = pH 6,5
- C = pH 7
- D = pH 7,5
- E = pH 8
70

pH Menggunakan Sumber Karbon Molase 20%)
Gambar 28. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap S. aureus (Penetapan pH

Menggunakan Sumber Karbon Molase 20%)
Keterangan:
- A = pH 6
- B = pH 6,5
- C = pH 7
- D = pH 7,5
- E = pH 8
71
Gambar 29. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap S. mutan (Penetapan pH

Gambar 30. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap E. coli (Penetapan pH

Keterangan:
- A = pH 6
- B = pH 6,5
- C = pH 7
- D = pH 7,5
- E = pH 8
72

Suhu Menggunaan Sumber Karbon Air Tebu 20%)
Keterangan:
- A = Suhu 20°C
- B = Suhu 28°C
- C = Suhu 36°C
- D = Suhu 45°C
73

Suhu Menggunakan Sumber Karbon Molase 20%)
Gambar 33. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap S. aureus (Penetapan Suhu

Keterangan:
- A = Suhu 20°C
- B = Suhu 28°C
- C = Suhu 36°C
- D = Suhu 45°C
74
Gambar 34. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap S. mutan (Penetapan Suhu

Gambar 35. Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap E. coli (Penetapan Suhu

Keterangan:
- A = Suhu 20°C
- B = Suhu 28°C
- C = Suhu 36°C
- D = Suhu 45°C
75

PENENTUANKONDISIOPTIMUMPROSESFERMENTASIBAKTERIENDOFITBACILLUSSUBTILIS

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

PENENTUANKONDISIOPTIMUMPROSESFERMENTASIBAKTERIENDOFITBACILLUSSUBTILIS

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PENENTUAN KONDISI OPTIMUM PROSES

FERMENTASI BAKTERI ENDOFIT Bacillus subtilis

SKRIPSI SARJANA FARMASI

Prof. Dr. H. Akmal Djamaan, MS, Apt

Saya yang bertanda tangan dibawah ini:

Nama : Nesly Aristi

Judul Skripsi : Penetuan Kondisi Optimum Proses Fermentasi Bakteri Endofit

Bacillus subtilis UAAC 21622 Menggunakan Air Tebu, Ampas

Tebu dan Molase sebagai Sumber Karbon dan Uji Aktivitas

Dengan ini menyatakan bahwa:

Universitas Andalas untuk dapat dimanfaatkan dalam kepentingan akademis.

Padang, Juli 2018

menyelesaikan penelitian dan penulisan skripsi dengan judul “Penetuan Kondisi

Optimum Proses Fermentasi Bakteri Endofit Bacillus subtilis UAAC 21622

untuk menyelesaikan program pendidikan Strata Satu pada Fakultas Farmasi

Universitas Andalas Padang.

kasih yang sebesar-besarnya kepada:

Prof. Dr. H. Harrizul Rivai, MS selaku pembimbing II yang telah banyak

meluangkan waktu, memberikan petunjuk, saran, nasehat serta bimbingan

selama pelaksanaan penelitian dan penulisan skripsi ini.

meluangkan waktu, memberi nasehat, ilmu dan bimbingan selama masa

perkuliahan dan penyusunan skripsi ini.

mendoakan, memberikan kasih sayang, dan selalu memberikan semangat serta

penulis, serta karyawan-karyawati dan analis laboratorium Fakultas Farmasi

Universitas Andalas yang turut membantu kelancaran selama penelitian dan

penulisan skripsi ini.

Fadilla, Ranny, Kak Uty, Winda), Anes kembaranku, Keluarga Lab-Biotek

UNAND, Keluarga Besar Mahasiswa Farmasi Universitas Andalas (KBMF)

khususnya Farmasi 2014 (INCENDIO) yang telah memberikan dukungan,

motivasi dan bantuan selama penelitian dan penyusunan skripsi ini.

yang akan datang.

Padang, Juli 2018

Bakteri endofit memiliki peranan penting bagi kehidupan yang mampu

Keywords: Endophytic bacteria, Bacillus subtilis UAAC 21622, antibacterial,

2. Data Hasil Penelitian 51

3. Dokumentasi Hasil Penelitian 61

Berbagai macam penyakit yang ditimbulkan oleh mikroba banyak ditemukan

di negara-negara beriklim tropis termasuk Indonesia. Salah satu penyebab penyakit

bakteri mendorong untuk terus dilakukannya penelitian yang mampu menghasilkan

dapat menghambat pertumbuhan bakteri patogen penyebab infeksi (Radji, 2010).

dapat menghasilkan senyawa-senyawa bioaktif yang sangat potensial untuk

dikembangkan salah satunya sebagai antibakteri (Djamaan, 2014). Bakteri endofit

hidup di dalam jaringan vaskular tumbuhan tanpa menyebabkan efek negatif

Bacillus subtilis UAAC 21622 yang berpotensi sebagai antibakteri.

Bacillus subtilis merupakan bakteri gram positif yang berbentuk batang

panjang, soliter ataupun membentuk koloni bergandengan yang memanjang.

terdekomposisi. Basitrasin merupakan antibiotik yang dihasilkan oleh Bacillus

dan mengakibatkan fungsi membran sel menjadi tidak stabil sehingga

menyebabkan sel lisis (Brooks et al., 2005).

Untuk mendapatkan senyawa bioaktif dari bakteri endofit, maka perlu

dilakukan proses fermentasi. Proses fermentasi senyawa bioaktif yang dihasilkan

meningkatkan aktivitas antibakteri, perlu dilakukannya penentuan kondisi

Brooks et al. (2005) yang menyebutkan bahwa pertumbuhan mikroorganisme dapat

dipengaruhi oleh beberapa faktor penting diantaranya waktu inkubasi, nutrisi, pH

Waktu inkubasi adalah proses pemeliharaan kultur mikroba selama jangka

waktu tertentu untuk memantau pertumbuhan bakteri. Setiap bakteri memiliki

yaitu pada tanaman tebu.

Tanaman tebu dapat dimanfaatkan sebagai sumber karbon untuk media

mengandung sukrosa sekitar 3,3% (Lavarack et al., 2002). Karena kandungan

sebagai media fermentasi bakteri.

penelitian mengenai penentuan kondisi optimum proses fermentasi bakteri endofit

2.1 Tanaman Tebu

komoditas perkebunan penting di Indonesia. Perkebunan tebu berkaitan erat