Skripsi Fixx I Gusti Agung Ayu Made Ratih Mahadewi.

SKRIPSI
AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL

96% DAUN TUMBUHAN ANYANG-ANYANG
(Elaeocarpus grandiflorus Sm.) TERHADAP BAKTERI
Pseudomonas aeruginosa SECARA IN VITRO
I GUSTI AGUNG AYU MADE RATIH MAHADEWI
NIM.171700017
PROGRAM SARJANA
PROGRAM STUDI TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIK
FAKULTAS ILMU-ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS BALI INTERNASIONAL
2021
AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL 96% DAUN
TUMBUHAN ANYANG-ANYANG (Elaeocarpus grandiflorus
Sm.) TERHADAP BAKTERI Pseudomonas aeruginosa SECARA
IN VITRO
Skripsi ini diajukan sebagai

salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIK
Oleh:
I Gusti Agung Ayu Made Ratih Mahadewi
NIM. 171700017
PROGRAM SARJANA
PROGRAM STUDI TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIK
FAKULTAS ILMU-ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS BALI INTERNASIONAL
2021
ii
iii
iv
v
UCAPAN TERIMA KASIH
Puji dan syukur kehadirat Ida Sang Hyang Widhi Wasa/Tuhan Yang Maha
Esa atas segala rahmat dan karunia yang telah dilimpahkan-Nya kepada penulis
sehingga skripsi yang berjudul “Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol 96% Daun
Tumbuhan Anyang-Anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.) Terhadap Bakteri
Pseudomonas aeruginosa Secara In Vitro” selesai tepat pada waktunya. Skripsi
ini disusun untuk memenuhi salah satu persyaratan akademik dalam meraih gelar
Sarjana Kesehatan.
Dalam proses penyusunan skripsi ini, penulis banyak mendapatkan
bimbingan serta saran dari berbagai pihak. Maka dari itu, dalam kesempatan ini
penulis menyampaikan rasa hormat dan terimakasih kepada:
1. Dr.dr. I Made Bakta Sp.PD (KHOM). selaku Rektor Universitas Bali
Internasional atas kesempatan dan fasilitas yang diberikan kepada penulis
untuk mengikuti dan menyelesaikan pendidikan Program Sarjana
Universitas Bali Intemasional.
2. Ners, I Gusti Ngurah Made Yudhi Saputra S.kep., MM. selaku Dekan
Fakultas Ilmu - Ilmu Kesehatan Universitas Bali Interasional atas
kesempatan dan fasilitas yang diberikan kepada penulis untuk mengikuti
dan menyelesaikan pendidikan Program Sarjana S1 di Universitas Bali
Intemasional.
3. Desak Putu Risky Vidika A., S.Si., M.Si. selaku Koordinator Program
Studi Teknologi Laboratorium Medik Fakultas Ilmu-Ilmu Kesehatan
vi
Universitas Bali Internasional serta penguji ujian skripsi bimbingan,
saran, nasihat, motivasi, dan berbagai pengalaman yang berharga kepada
penulis.
4. Ni Putu Rahayu Artini S.Si., M.Si. selaku Dosen Pembimbing I yang
banyak memberikan bimbingan, saran, nasihat, motivasi, dan berbagai
pengalaman yang berharga kepada penulis.
5. Ni Putu Widayanti, S.Si., M.Si. selaku Dosen Pembimbing II yang
banyak memberikan bimbingan, saran, semangat, motivasi, dan berbagai
pengalaman yang berharga kepada penulis.
6. Apt. Dhiancinatyan Windydaca B P, S.Farm., M. Farm. selaku Ka UPT
Laboratorium Kesehatan Universitas Bali Internasional yang telah
memberikan izin kepada saya untuk melaksanakan penelitian skripsi.
7. I Gusti Ngurah Edy Dama Darmika, S.ST. selaku Laboran Laboratorium
Mikrobiologi Klinik Universitas Bali Internasional yang telah
mengizinkan dan membantu saya dalam melaksanakan penelitian skripsi.
8. Segenap civitas akademika Program Studi Teknologi Laboratorium
Medik Universitas Bali Interasional terutama seluruh dosen, terima kasih
atas segala ilmu dan bimbingannya.
9. I Gusti Made Dwija dan Ni Wayan Suratmi sebagai orangtua tercinta
yang telah mencurahkan cinta kasih, doa, bimbingan dan motivasi hingga
selesainya skripsi ini.
10. Seluruh teman - teman di Program Studi Teknologi Laboratorium
Medik Fakultas Ilmu-Ilmu Kesehatan Universitas Bali Intemasional yang
vii
telah membantu selama kegiatan penelitian baik moril maupun materil
sehingga selesainya skripsi ini.
11. Last but not least, I wanna thank me, I wanna thank me for believing
in me, I wanna thank me for doing all this hard work, I wanna thank me
for having no days off, I wanna thank me for never quitting, for just
being me at all times.
Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dalam penulisan
skripsi ini. Untuk itu, saran dan kritik yang bersifat membangun sangat
diharapkan dari para pembaca untuk menyempurnakan dan semoga skripsi ini
dapat bermanfaat bagi pembaca.
Denpasar, Juli 2021
Penulis
viii
ABSTRAK

TUMBUHAN ANYANG-ANYANG (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)
TERHADAP BAKTERI Pseudomonas aeruginosa SECARA IN VITRO
Penyakit infeksi merupakan masalah di bidang kesehatan yang terus
berkembang dari waktu ke waktu. Pseudomonas aeruginosa adalah bakteri Gram
negatif yang banyak mengalami resistensi terhadap berbagai antibiotik. Salah satu
alternatif untuk menemukan antibakteri baru dari bahan alam dengan
memanfaatkan tumbuhan anyang-anyang. Penelitian ini merupakan penelitian
eksperimental, ekstrak yang diperoleh dengan menggunakan metode maserasi
pelarut etanol 96%. Ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang (Elaeocarpus
grandiflorus Sm.) diformulasikan menjadi ekstrak kental dengan konsentrasi 20%,
40%, 60%, dan 80%. Uji aktivitas antibakteri dilakukan menggunakan metode
cakram (disk). Hasil penelitian menunjukkan ekstrak etanol 96% daun anyang-
anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.) mengandung senyawa metabolit sekunder
jenis saponin, flavonoid, polifenol, tannin, dan triterpenoid. Aktivitas antibakteri
yang dihasilkan tergolong kategori kuat dengan diameter zona hambat terbesar
yaitu pada konsentrasi 80% sebesar 16,64 ± 0,35 mm terhadap bakteri
Pseudomonas aeruginosa.
Kata kunci: Antibakteri, Metabolit Sekunder, Pseudomonas aeruginosa, Elaeocarpus

grandiflorus Sm.
ix
ABSTRACT
ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF ETHANOL EXTRACT 96%

LEAVES ON ANYANG-ANYANG PLANTS (Elaeocarpus grandiflorus
Sm.) AGAINST Pseudomonas aeruginosa BACTERIA IN VITRO
Infectious disease refers to a problem in the health sector that continues to

grow from time to time. Pseudomonas aeruginosa is bacteria with a lot of
resistance to various antibiotics. One alternative to finding new antibacterials
from natural ingredients is by utilizing anyang-anyang plants. This research was
an experimental study, the extract obtained by using 96% ethanol solvent
maceration method. Anyang-anyang leaf 96% ethanol extract was formulated into
a thick extract with concentrations of 20%, 40%, 60%, and 80%. Antibacterial
activity test was carried out using the disc method. The antibacterial activity was
classified as strong category with the largest inhibition zone diameter at 80%
concentration of 16.64 ± 0.35 mm against Pseudomonas aeruginosa bacteria.
Keywords: Antibacterial, Secondary Metabolites, Pseudomonas aeruginosa,

Elaeocarpus grandiflorus Sm.
x
RINGKASAN

TUMBUHAN ANYANG-ANYANG (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)
TERHADAP BAKTERI Pseudomonas aeruginosa SECARA IN VITRO
Penyakit infeksi merupakan masalah di bidang kesehatan yang terus

berkembang dari waktu ke waktu. Pseudomonas aeruginosa adalah bakteri Gram
negatif yang banyak mengalami resistensi terhadap berbagai antibiotik. Salah satu
alternatif untuk menemukan antibakteri baru dari bahan alam yakni dengan
memanfaatkan tumbuhan anyang-anyang. Savitri (2019) dalam penelitiannya
menyebutkan bahwa ekstrak metanol kasar daun anyang-anyang memiliki potensi
menghambat pertumbuhan bakteri E. coli dengan IC50 yang paling rendah yakni
sebesar 360,969±10,542 µg/ml dan hasil skrining fitokimia menunjukkan sampel
dan fraksi positif mengandung polifenol.
Penelitian ini menggunakan metode eksperimental. Metode penelitian
yang digunakan meliputi determinasi tanaman, pengumpulan sampel, sortasi dan
pencucian sampel, ekstraksi sampel dengan cara maserasi, uji fitokimia, dan uji
aktivitas antibakteri dari daun anyang-anyang terhadap bakteri Pseudomonas
aeruginosa dengan menggunakan metode difusi agar untuk mengukur zona
hambat dan analisis data pada penelitian ini menggunakan rata-rata (mean) dan
standar deviasi (SD). Dalam penelitian ini dilakukan uji antibakteri ekstrak etanol
96% daun tumbuhan anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.) terhadap
bakteri Pseudomonas aeruginosa secara in vitro. Hasil penelitian menunjukkan
ekstrak etanol 96% daun tumbuhan anyang-anyang mengandung senyawa
metabolit sekunder jenis tannin, saponin, flavonoid, polifenol, triterpenoid, dan
steroid. Pada uji antibakteri ekstrak etanol 96% daun tumbuhan anyang-anyang
(Elaeocarpus grandiflorus Sm.) dengan konsentrasi 20%, 40%, 60%, dan 80%
menunjukkan aktivitas antibakteri kategori kuat dengan diameter zona hambat
terbesar adalah pada konsentrasi 80% sebesar 16,64 ± 0,35 mm terhadap bakteri
Pseudomonas aeruginosa
xi
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL...............................................................................................ii
PERNYATAAN PERSETUJUAN.........................................................................iii
HALAMAN PENGESAHAN..................................................................................v
UCAPAN TERIMA KASIH...................................................................................vi
ABSTRAK..............................................................................................................ix
ABSTRACT.............................................................................................................x
RINGKASAN.....................................................................................................xviii
DAFTAR ISI.........................................................................................................xvi
DAFTAR GAMBAR..........................................................................................xviii
DAFTAR TABEL................................................................................................xvii
DAFTAR LAMPIRAN......................................................................................xviii
DAFTAR SINGKATAN......................................................................................xix
BAB I PENDAHULUAN........................................................................................1
1.1 Latar Belakang.........................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah....................................................................................4
1.3 Tujuan Penelitian.....................................................................................4
1.3.1 Tujuan umum....................................................................................4
1.3.2 Tujuan Khusus...................................................................................5
1.4 Manfaat Penulisan....................................................................................5
1.4.1 Manfaat Teoritis................................................................................5
1.4.2 Manfaat Praktis..................................................................................5
BAB II KAJIAN PUSTAKA...................................................................................6
2.1 Tumbuhan Anyang-Anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.).................6
2.1.2 Morfologi tumbuhan anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus
Sm.)....................................................................................................6
xii
2.1.3 Habitat tumbuhan anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.). 7
2.1.4 Manfaat tumbuhan anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)8
2.1.5 Kandungan kimia..............................................................................9
2.2 Bakteri Pseudomonas aeruginosa..........................................................11
2.2.1 Taksonomi.......................................................................................12
2.2.2 Morfologi dan identifikasi Pseudomonas aeruginosa.....................12
2.2.3 Patogenesis......................................................................................13
2.3 Antibakteri.............................................................................................14
2.4 Simplisia.................................................................................................18
2.5 Ekstraksi Dengan Metode Maserasi.......................................................20
2.6 Skrining Fitokimia.................................................................................22
2.7 Evaluasi Ekstrak Daun Anyang-anyang................................................24
2.8 Uji Aktivitas Antibakteri Dengan Metode Difusi..................................25
2.9 Diameter Zona Hambat..........................................................................27
BAB III KERANGKA BERPIKIR, KONSEP, DAN HIPOTESIS PENELITIAN
...............................................................................................................28
3.1 Kerangka Berpikir..................................................................................28
3.2 Kerangka Konsep...................................................................................30
3.3 Hipotesis.................................................................................................31
BAB IV METODE PENELITIAN........................................................................32
4.1 Rancangan Penelitian.............................................................................32
4.2 Lokasi dan Waktu Penelitian.................................................................33
4.3 Ruang Lingkup Penelitian......................................................................33
4.4 Penentuan Sumber Data.........................................................................34
4.5 Variabel Penelitian.................................................................................34
4.5.1 Variabel bebas (Independent)..........................................................34
4.5.2 Variabel terikat (Dependent)...........................................................34
4.5.3 Variabel terkendali..........................................................................34
4.5.4 Definisi operasional.........................................................................35
xiii
4.6 Instrumen Penelitian..............................................................................35
4.7 Bahan Penelitian....................................................................................36
4.8 Prosedur Penelitian................................................................................37
4.8.1 Determinasi tumbuhan....................................................................37
4.8.2 Persiapan simplisia..........................................................................37
4.8.3 Proses ekstraksi daun anyang-anyang.............................................37
4.8.4 Persentase rendemen ekstrak daun anyang-anyang.........................38
4.8 5 Uji kadar air ekstrak daun anyang-anyang......................................38
4.8.6 Skrining fitokimia............................................................................39
4.8.7 Uji aktivitas antibakteri ekstrak daun anyang-anyang (Elaeocarpus
grandiflorus Sm.)..............................................................................40
4.9 Metode Analisis Data.............................................................................46
4.10 Alur Penelitian......................................................................................47
BAB V HASIL PENELITIAN..............................................................................48
5.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan Anyang-Anyang (Elaeocarpus
grandiflorus Sm.)...................................................................................48
5.2 Hasil Ekstraksi Daun Anyang-Anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)
……………………………………………………………………48
5.3 Evaluasi Ekstrak Daun Anyang-Anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)
……………………………………………………………………49
5.3.1 Pemeriksaan organoleptik...............................................................49
5.3.2 Uji kadar air ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang (Elaeocarpus
grandiflorus Sm.)................................................................................50
5.4 Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol 96% Daun Anyang-Anyang
(Elaeocarpus grandiflorus Sm.)............................................................50
5.5 Identifikasi Bakteri Pseudomonas aeruginosa.......................................51
5.6 Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Anyang-Anyang
BAB VI PEMBAHASAN......................................................................................54
6.1 Ekstrak Etanol 96% Daun Anyang-Anyang (Elaeocarpus grandiflorus
Sm.)........................................................................................................54
xiv
6.4 Identifikasi Bakteri Pseudomonas aeruginosa...............................................60
6.5 Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol 96% Daun Tumbuhan Anyang-
Anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)...............................................63
6.6 Keterbatasan Penelitian..........................................................................66
BAB VII SIMPULAN DAN SARAN...................................................................68
7.1 Simpulan................................................................................................68
7.2 Saran.......................................................................................................68
DAFTAR RUJUKAN............................................................................................70
LAMPIRAN...........................................................................................................77
DAFTAR GAMBAR
Halaman
xv
Gambar 2. 1 Tumbuhan dan daun anyang-anyang (Rahayu, 2017).........................7
Gambar 2. 2 Pseudomonas aeruginosa (Brooks et al.,2013).................................12
Gambar 3. 1 Kerangka konsep...............................................................................30
Gambar 4. 1 Rancangan penelitian........................................................................32
Gambar 4. 2 Metode cakram disk..........................................................................45
Gambar 4. 3 Alur Penelitian..................................................................................47
Gambar 5. 1 Hasil uji antibakteri ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang
terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa........................................53
DAFTAR TABEL
Halaman
xvi
Tabel 2. 1 Diameter zona hambat..........................................................................26
Tabel 5. 1 Nilai persen rendemen ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang........49
Tabel 5. 2 Pemeriksaan organoleptik ekstrak etanol daun anyang-anyang...........49
Tabel 5. 3 Penetapan Uji Kadar Air Ekstrak Etanol 96% Daun Anyang-anyang
Tabel 5. 4 Skrining fitokimia ekstrak etanol daun anyang-anyang........................51
Tabel 5. 5 Hasil identifikasi bakteri Pseudomonas aeruginosa.............................52
Tabel 5. 6 Pengukuran Zona Hambat.....................................................................53
DAFTAR LAMPIRAN
xvii
Halaman
Lampiran 1 Identifikasi Tumbuhan Anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus

Sm.).....................................................................................................77
Lampiran 2 Diagram Alir Pembuatan Ekstrak Daun Anyang-Anyang
(Elaeocarpus grandiflorus Sm.).........................................................79
Lampiran 3 Dokumentasi Pembuatan Ekstrak Etanol 96% Daun Anyang-Anyang
Lampiran 4 Perhitungan Bobot Dan Rendemen Daun Anyang-Anyang
Lampiran 5 Hasil Uji Kadar Air Ekstrak Etanol 96% Daun Anyang-Anyang
Lampiran 6 Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Ayang-Anyang (Elaeocarpus
grandiflorus Sm.)................................................................................84
Lampiran 7 Hasil Identifikasi Bakteri Pseudomonas aeruginosa.........................85
Lampiran 8 Pembuatan Media MHA.....................................................................87
Lampiran 9 Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol 96% Daun Anyang-
Anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)............................................86
DAFTAR SINGKATAN
cm : Centimeter
xviii
CFU : Colony Forming Units
DNA : Deoxyribonucleic Acid
DMSO : Dimetil sulfoksida
HIV : Human Immunodeficiency Virus
IC : Inhibitor Concentration
Kg : Kilogram
MHA : Muller Hinton Agar
mm : Milimeter
mg : Miligram
mL : Mililiter
MIC : Minimum Inhibitor Concentration
PABA : Para-aminobenzoic Acid
RNA : Ribonucleic Acid
WHO : World Health Organization

0
C : Derajat celcius
μg : Mikro gram
KLT : Kromatografi Lapis Tipis
TSIA : Triple Sugar Iron Agar
SIM : Sulphide Indole Motility
HCl : Asam Klorida
xix
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Infeksi bakteri selalu menjadi salah satu penyebab utama kematian dalam
sejarah manusia. Kematian akibat infeksi bakteri terjadi ribuan tahun yang lalu
hingga saat ini (Walsh, 2002). Menurut WHO tahun 2018, lebih dari sembilan juta
orang meninggal akibat infeksi setiap tahunnya. Penyakit infeksi merupakan
masalah di bidang kesehatan yang terus berkembang dari waktu ke waktu. Bakteri
patogen yang berbahaya dan menyebabkan infeksi baik secara sporadik
maupun endemik, antara lain Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan
Pseudomonas aeruginosa (Djide & Sartini, 2008).
Pseudomonas aeruginosa adalah sejumlah kecil flora normal usus dan
kulit manusia. Pseudomonas aeruginosa merupakan bakteri gram negatif, dan
merupakan bakteri patogen nosokomial paling terisolasi keempat dari semua
infeksi yang didapat dari rumah sakit (Nugroho, 2010). Bakteri gram-negatif
merupakan bakteri yang banyak mengalami resistensi terhadap berbagai
antibiotik. Hal tersebut disebabkan oleh rendahnya permeabilitas dari dinding sel
bakteri gram negatif sehingga menyebabkan antibiotik susah untuk
terpenetrasi (Berdy, 2005). Bakteri patogen oportunistik ini menyebabkan
infeksi pada mata, telinga (otitis eksternal), kulit, tulang, sistem saraf pusat,
saluran pencernaan, sistem pernafasan, saluran kemih, dan sistem peredaran
darah (bacteremia dan septicemia) (Milada et al., 2014).
1
2
Pengobatan yang paling cocok untuk infeksi bakteri adalah antibiotik. Saat
ini antibiotik sudah menjadi obat yang sering digunakan tidak hanya pada
manusia tetapi juga pada dunia peternakan dan pertanian. Antibiotik diproduksi
oleh bakteri dan eukariota (termasuk tumbuhan). Berdasarkan penelitian Bisht et
al. (2009) diketahui bahwa resistensi bakteri terhadap agen antibakteri
menjadi masalah besar di banyak negara. Masalah ini tidak akan dapat
diselesaikan selama belum ada agen antimikroba baru yang ditemukan. Bahan
alam, khususnya tumbuhan menjadi kandidat yang potensial untuk menyelesaikan
masalah ini. Penggunaan antibiotik yang tidak tepat dapat menimbulkan berbagai
masalah, seperti pengobatan yang tidak efektif, peningkatan risiko keselamatan
pasien, resistensi bakteri terhadap antibiotik, dan biaya pengobatan yang lebih
tinggi (Kementrian Kesehatan Republik Indonesia, 2011). Peningkatan resistensi
bakteri terhadap antibiotik memberikan peluang besar untuk mendapatkan
senyawa antibakteri dengan memanfaatkan senyawa bioaktif dari kekayaan
dan keanekaragaman hayati.
Saat ini telah banyak dilakukan penelitian terkait aktivitas antibakteri
tumbuhan terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa. Obat tradisional tumbuhan
liar selalu menarik perhatian para peneliti dalam mencari molekul obat baru (Gul
et al., 2017). Penggunaan bahan alami sebagai obat akan meningkat dengan
kembali ke pola pikir alami (back to nature) dan umumnya dianggap lebih aman
karena memiliki efek samping yang lebih sedikit dibandingkan dengan
pengobatan modern (Ardani et al., 2010). Selama ini, industri obat tradisional
banyak memanfaatkan tumbuhan yang hidup di alam liar atau yang ditanam dalam
3
skala kecil di lingkungan sekitar rumah sebagai bahan bakunya (Swari, 2015).
Untuk itu, pengobatan berbasis herbal dapat digunakan sebagai alternatif terapi
antibiotik. Salah satu alternatif untuk menemukan antibakteri baru dari bahan
alam yakni dengan memanfaatkan tumbuhan anyang-anyang.
Tumbuhan anyang-anyang merupakan pohon yang hijau sepanjang tahun
dan dapat tumbuh hingga mencapai 25 meter. Anyang-anyang tersebar di
Myanmar dan Indonesia, China, Thailand, Semenanjung Malaysia, Singapura, dan
Filipina. Di Indonesia, anyang-anyang banyak terdapat di Sumatera, Jawa, Bali,
dan Kalimantan. Penggunaan anyang-anyang telah lama dikenal sebagai obat
terutama di daerah Jawa. Di Jawa Timur, kulit batang anyang-anyang dihancurkan
dan digunakan sebagai obat radang usus akut (poulticing ulkus persisten). Di Jawa
Tengah, rebusan daun anyang-anyang diminum sebagai obat untuk penderita sakit
empedu (Sagala, 2018).
Anyang-anyang ini diperhitungkan memiliki sifat diuretik ringan dan
dimasukkan dalam resep untuk meringankan batu kandung kemih dan sulit buang
air kecil (Sagala, 2018). Hampir semua bagian atau organ tumbuhan anyang-
anyang mengandung senyawa bioaktif. Penelitian Shah (2011) berhasil
mengisolasi tannin, geranin dan 3, 4, 5-trimethoxy geranin dari daun anyang-
anyang. Warung Informasi dan Teknologi Kementrian Riset (2014) dalam
penelitiannya menyebutkan bahwa daun anyang-anyang mengandung saponin,
flavonoid, polifenol dan tannin. Buahnya mengandung saponin, flavonoid, dan
tannin. Sedangkan kulit batangnya mengandung saponin, flavonoid, dan polifenol.
Savitri (2019) dalam penelitiannya menyebutkan bahwa ekstrak metanol kasar

4
daun anyang-anyang memiliki potensi menghambat pertumbuhan bakteri E. coli
dengan IC50 yang paling rendah yakni sebesar 360,969±10,542 µg/ml dan hasil
skrining fitokimia menunjukkan sampel dan fraksi positif mengandung polifenol.
Senyawa polifenol merupakan metabolit sekunder yang diketahui memiliki
aktivitas antibakteri melalui pendenaturasian protein sel bakteri yang berakibat
pada rusaknya permeabilitas dinding sel bakteri (Cushnie & Lamb, 2005).
Berdasarkan hal tersebut, penulis tertarik melakukan penelitian untuk mengetahui
aktivitas antibakteri ekstrak daun tumbuhan anyang-anyang terhadap bakteri gram
negatif Pseudomonas aeruginosa.
1.2 Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang di atas maka didapatkan rumusan masalah
penelitian yaitu:
1. Senyawa metabolit sekunder apakah yang terdapat pada daun tumbuhan
anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)?
2. Apakah ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus
Sm.) memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa?
1.3 Tujuan Penelitian
1.3.1 Tujuan umum
Berdasarkan rumusan masalah di atas, tujuan dari penelitian ini adalah
untuk mengetahui ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang (Elaeocarpus
grandiflorus Sm.) memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Pseudomonas
aeruginosa secara in vitro.

5
1.3.2 Tujuan Khusus
1. Untuk mengetahui senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada daun
anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.).
2. Untuk mengetahui ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang (Elaeocarpus
grandiflorus Sm.) memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri
Pseudomonas aeruginosa secara in vitro.
1.4 Manfaat Penulisan
1.4.1 Manfaat Teoritis
Menambah wawasan dan informasi mengenai aktivitas antibakteri daun
tumbuhan anyang-anyang terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa.
1.4.2 Manfaat Praktis
1. Bagi penulis
Dengan dilakukannya penelitian ini diharapkan penulis dapat menambah
pengetahuan dan pengalaman tentang pemanfaatan tumbuhan anyang-anyang
sebagai antibakteri alami dan lebih memahami bidang kesehatan khususnya
mengenai obat herbal sebagai antibakteri.
2. Bagi instansi pendidikan
Hasil penelitian ini dapat digunakan sebagai referensi atau pedoman untuk
melakukan penelitian lanjutan tumbuhan anyang-anyang untuk bioaktivitas lain.
3. Bagi masyarakat
Masyarakat setempat mampu memperoleh bahan antibakteri alami dengan
memanfaatkan tumbuhan yang ada lingkungan sekitar, khususnya tumbuhan
anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.).

BAB II
KAJIAN PUSTAKA
2.1 Tumbuhan Anyang-Anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)
2.1.1 Taksonomi tumbuhan anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)
Taksonomi tumbuhan Elaeocarpus grandiflorus Sm. (Savitri, 2019) adalah
sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Filum : Tracheophyta
Kelas : Magnoliopsida
Ordo : Oxalidales
Famili : Elaeocarpaceae
Genus : Elaeocarpus
Spesies : Elaeocarpus grandiflorus Sm.
2.1.2 Morfologi tumbuhan anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)
Elaeocarpus grandiflorus Sm. atau biasa dikenal dengan anyang-anyang,
dijumpai sebagai pohon hijau dengan tinggi mencapai 25 meter. Batangnya tegak
dan memiliki banyak akar sebagai penyangga. Buah anyang-anyang berwarna
hijau berisi biji dengan punggung tipis yang memanjang ke belakang. Buahnya
berbiji elipsoid dengan ukuran 2,5-4 cm x 1,5-2 cm, dan biji buah ditutupi dengan
duri yang bengkok (Rahayu et al.,2017)
6
7
Gambar 2.1 Tumbuhan dan daun anyang-anyang (Rahayu, 2017).
Anyang-anyang memiliki daun berbentuk lanset, dan tumbuh berkumpul
di ujung ranting. Ukuran daun berkisar antara 4,5-20 cm x 1,2-5 cm dengan
panjang tangkai daun 0,2-4 cm. Bunga anyang-anyang tumbuh dari ujung tiap
cabang. Bunganya tergantung, bergerombol, dengan sepal merah muda kemerahan
dan kelopak putih di tepinya. Bunga terbentuk segugusan di antara daun,
berjumbai dengan panjang 2-10 cm. Satu gugus bunga berjumlah 4-6 bunga
dengan panjang tangkai bunga 2,5 cm. Sepal berbentuk lanset dengan panjang
1,2-2,5 cm x 0,2 cm berwarna merah cerah. Kelopak berukuran 2-2,5 cm x 1 cm
berwarna murni putih. Di dalam kelopak terdapat 25–60 benang sari, dengan
panjang filamen 2-4 mm dan panjang kepala sari 2,5-6 mm (Sagala, 2018).
2.1.3 Habitat tumbuhan anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)
Anyang-anyang tersebar di Myanmar, Indonesia, China, Thailand,
Semenanjung Malaysia, Singapura, dan Filipina. Di Indonesia, anyang-anyang
banyak terdapat di Sumatera, Jawa, Bali, dan Kalimantan. Habitat aslinya ialah di
hutan hujan. Tumbuhan ini banyak tumbuh di iklim tropis dan subtropis.
8
Tumbuhan ini mampu bertahan hidup dengan baik di tanah kering dengan nutrisi
rendah. Perbanyakan anyang-anyang dilakukan melalui stek dan biji. Tumbuhan
ini membutuhkan tempat dengan banyak sinar matahari atau sedikit teduh (Sagala,
2018).
2.1.4 Manfaat tumbuhan anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)
Penggunaan anyang-anyang sudah lama disebut sebagai obat, khususnya
di Jawa. Di Jawa Timur, kulitnya dihaluskan dan digunakan untuk mengobati
radang usus akut. Di Jawa Tengah, rebusan daun anyang-anyang merupakan obat
yang umum dan sering digunakan untuk penderita sakit empedu. Anyang-Anyang
dianggap memiliki efek diuretik ringan, dan biasanya sudah termasuk dalam resep
untuk meredakan batu kandung kemih dan nyeri saat buang air kecil (Sagala,
2018).
Ekstrak tumbuhan anyang-anyang dengan diklorometana memiliki
aktivitas anti jamur dalam melawan Scleretonium rolfsii dan Aspergillus
fumigatus, ekstrak metanol nya memiliki aktivitas melawan jamur Phytium
ultimum, dan ekstrak bunga anyang-anyang dalam metanol maupun air memiliki
aktivitas sebagai anti-HIV-1 protease dengan IC50 sebesar 100 μg/mL (Keller &
Nugraha, 2011).
Persentase penghambatan ekstrak buah anyang-anyang terhadap HIV-1
protease adalah 53,8% (konsentrasi ekstrak 250 µg/mL) dan 23% (konsentrasi
ekstrak 25 µg/mL). Fraksi tak larut n-heksan daun anyang-anyang memiliki
aktivitas antimikroba melawan Staphylococcus aureus dan Candida albicans
dengan MIC 62,5 µg/mL dan 25 µg/mL. Dalam farmakologi Cina dan pengobatan
9
tradisional lain disebutkan bahwa tanaman ini memilikki sifat rasa pahit, sejuk,
bersifat antipiretik dan anti inflamasi. Penelitian-penelitian di bidang kesehatan
menunjukkan bahwa anyang-anyang memiliki kemampuan sebagai antibakteri,
diuretik, dan anti-infektif (Nugraha & Keller, 2011; Dachich et al., 2013).
2.1.5 Kandungan kimia
Dalam penelitian Warung Informasi dan Teknologi Kementrian Riset
(2014) disebutkan bahwa daun anyang-anyang mengandung saponin, flavonoid,
polifenol dan tannin. Buah anyang-anyang mengandung saponin, flavonoid dan
tannin. Kulit kayunya mengandung saponin, flavonoid dan polifenol. Umumnya
polifenol memiliki manfaat kesehatan bagi manusia. Namun, sifat defensif
sebagian tannin adalah karena toksisitasnya, umumnya dikaitkan dengan
kemampuannya untuk mengikat protein nonspesifik. Senyawa fenolik dapat
diperoleh dari lintasan skimat dan lintasan malonat (Taiz & Zeiger, 2002).
Berdasarkan penelitian Savitri (2019) dikatakan bahwa ekstrak metanol
kasar daun anyang-anyang memiliki potensi menghambat pertumbuhan bakteri E.
coli dengan IC50 yang paling rendah yakni sebesar 360,969±10,542 µg/mL.
Ekstrak metanol daun anyang-anyang mengandung senyawa golongan alkaloid,
flavonoid, polifenol, dan triterpedoid. Hasil skrining fitokimia fraksi daun anyang-
anyang menunjukkan bahwa fraksi n-heksan mengandung senyawa golongan
polifenol dan triterpedoid, fraksi diklorometana mengandung senyawa golongan
alkaloid, polifenol, dan triterpedoid, fraksi etil asetat mengandung senyawa
golongan polifenol, dan residu mengandung senyawa golongan flavonoid dan
polifenol (Savitri, 2019).

10
Saponin adalah jenis senyawa kimia yang berlimpah dalam berbagai
spesies tumbuhan. Senyawa ini merupakan glikosida amfipatik yang dapat
mengeluarkan busa jika dikocok dengan kencang di dalam larutan (Taiz & Zeiger,
2002). Pada tanaman, saponin tersebar merata dalam bagian-bagiannya seperti
akar, batang, umbi, daun, bijian dan buah (Vincken et al., 2007). Khasiat dari
saponin yaitu memiliki aktivitas sebagai antimikroba atau antibakteri, anti fungi,
dan anti peradangan sehingga dapat menyembuhkan penyakit diare, disentri,
sariawan, keputihan, serta bisul. Senyawa saponin bekerja dengan struktur
detergen yang dapat berikatan dengan molekul hidrofilik dan non polar lipofilik
sehingga mampu merusk membran sitoplasma dan membunuh bakteri (Taiz &
Zeiger, 2002).
Alkaloid merupakan kelompok senyawa dengan berat molekul yang
rendah, umunya berasal dari asam amino dan ditemukan pada 20% dari seluruh
spesies tanaman. Sebagai metabolit sekunder, alkaloid telah digunakan sebagai
obat-obatan, stimulant, narkotik dan racun (Croizer et al., 2006).
Tannin merupakan salah satu komponen zat organik yang berasal dari
polimer glikosida yang banyak ditemukan pada tumbuhan. Senyawa tannin
terdapat pada banyak spesies tumbuhan, dan dapat digunakan sebagai pestisida
serta berperan dalam mengatur pertumbuhan tanaman. Tannin dapat membentuk
senyawa kompleks dengan protein melalui ikatan hidrogen yang jika terbentuk
ikatan hydrogen diantara senyawa tannin dengan protein bakteri maka protein
bakteri akan terdenaturasi sehingga dapat mengganggu metabolisme bakteri.
(Linggawati, 2002).
11
Triterpenoid merupakan senyawa kristalin tidak berwarna, biasanya
dengan titik leleh dan aktivitas optik yang lebih tinggi, serta dapat dibedakan
menjadi senyawa steroid. Uji kualitatif yang paling banyak digunakan adalah
reaksi Liebermann-Burchard, warna sebagian besar triterpenoid dan steroid adalah
biru-hijau (Tarziah, 2013).
Fenol atau polifenol merupakan senyawa organik yang mempunyai
gugus hidroksil yang terikat pada cincin benzena. Senyawa fenol memiliki
beberapa nama lain seperti asam karbolik, fenat monohidroksibenzena, asam
fenat, asam fenilat, fenil hidroksida, oksibenzena, benzenol, monofenol, fenil
hidrat, fenilat alkohol, dan fenol alkohol (Nair et al, 2008). Fenol termasuk
dalam senyawa yang bersifat toksik dan korosif terhadap kulit (iritasi) dan
pada konsentrasi tertentu dapat menyebabkan gangguan kesehatan manusia
hingga kematian pada organisme. Senyawa fenol memiliki efek antibakteri
yang dapat merusak membran sitoplasma dan mengganggu ion-ion dalam kalium
sel. Tingkat toksisitas fenol beragam tergantung dari jumlah atom atau
molekul yang melekat pada rantai benzenanya (Poerwono, 2012).
2.2. Bakteri Pseudomonas aeruginosa
Pseudomonas aeruginosa merupakan bakteri patogen oportunistik yang
dapat menyebabkan keadaan yang invasif pada pasien dengan penyakit kritis
maupun pasien yang memiliki tingkat imunitas yang sangat rendah.
Umumnya bakteri ini sering ditemukan sebagai penyebab infeksi nosokomial di
rumah sakit khususnya di Intensive Care Unit (ICU) (Putri & Rasyid, 2014).
2.2.1 Taksonomi
12
Klasifikasi bakteri Pseudomonas aeruginosa menurut penamaan binomial
(Siegrist, 2010) adalah sebagai berikut:
Kingdom : Bacteria
Phylum : Proteobacteria
Class : Gamma Proteobacteria
Order : Pseudomonadales
Family : Pseudomonadadaceae
Genus : Pseudomonas
Species : Pseudomonas aeruginosa.
2.2.2 Morfologi dan identifikasi Pseudomonas aeruginosa
Pseudomonas aeruginosa merupakan bakteri berbentuk batang dengan
ukuran kurang lebih 0,6 x 2 mikron. Bakteri ini merupakan bakteri gram negatif
yang muncul sebagai bentuk tunggal, berpasangan, dan terkadang berantai
pendek, serta dapat bergerak (berpindah) karena adanya flagela tunggal. Bakteri
ini dapat bertahan hidup dan berkembang biak tanpa oksigen (Nugroho, 2010;
Soekiman, 2016).
Gambar 2.2 Pseudomonas aeruginosa (Brooks et al.,2013).

Bentuk koloni Pseudomonas aeruginosa besar, halus dengan permukaan
datar dan meninggi, koloni kecil dan berlendir, biasanya diperoleh dari sekresi
13
saluran pernafasan dan saluran kemih (Todar, 2012). Bakteri ini juga sering
menghasilkan pigmen kebiru-biruan, dan dapat berdifusi dalam agar. Banyak
strain Pseudomonas aeruginosa juga menghasilkan pigmen fluoresen pioverdin,
yang membuat media agar menjadi berwarna hijau. Beberapa strain menghasilkan
pigmen pirorubin merah tua atau pigmen piomelanin hitam (Brooks et al., 2013).
Pseudomonas aeruginosa pada biakan dapat membentuk berbagai jenis koloni.
Tiap jenis koloni dapat mempunyai aktivitas biokimia dan enzimatik berbeda
serta pola kepekaan antibakteri yang berbeda (Sinulingga, 2015).
Pseudomonas aeruginosa dapat beradaptasi dengan kondisi oksigen dan
nutrisi yang rendah. Bakteri tersebut juga dapat tumbuh pada kisaran suhu 4–
42oC. Pseudomonas aeruginosa dapat hidup di peralatan medis dan bagian lain
rumah sakit, sehingga rentan menginfeksi pasien dengan imunitas yang berkurang
(Dharmayanti & Sukarma, 2019). Bakteri ini bersifat oksidase positif dan tidak
akan memfermentasi laktosa. Identifikasi biasanya didasarkan pada morfologi
koloni, karakteristik oksidase-positif, dan keberadaan pigmen yang khas (Kasper
et al., 2015).
2.2.3 Patogenesis
Pseudomonas aeruginosa merupakan bakteri patogen nosokomial paling
terisolasi keempat dari semua infeksi yang didapat dari rumah sakit.
Pseudomonas aeruginosa tersebar luas di alam dan biasanya ditemukan di
lingkungan rumah sakit yang lembab. Koloni yang dibentuk oleh bakteri ini
bersifat saprofit pada orang sehat, tetapi dapat menyebabkan penyakit jika
pertahanan tubuh sedang melemah. Pseudomonas aeruginosa merupakan bakteri

14
patogen nosokomial paling terisolasi keempat dari semua infeksi yang didapat
dari rumah sakit (Nugroho, 2010).
Infeksi oleh Pseudomonas kebanyakan bersifat invasif dan toksinogenik.
Infeksi Pseudomonas yang paling utama terjadi dalam tiga fase berbeda, yaitu
perlekatan bakteri dan kolonisasi, invasi lokal, dan penyebaran penyakit
sistemik. Faktor penentu patogenitas sangat berperan dalam fase-fase ini dan
juga memberikan pengaruh utama pada sindroma-sindroma khas yang
muncul bersama dengan penyakit yang timbul (Todar, 2012).
2.3 Antibakteri
Antibakteri adalah senyawa yang diproduksi oleh mikroorganisme dan
dalam konsentrasi kecil mampu menghambat bahkan membunuh proses
kehidupan mikroorganisme khususnya mikroba yang merugikan manusia
berdasarkan sifat toksisitas selektif. Agen antibakteri sering disebut dengan
antibiotik. Banyak antibiotik memiliki aktivitas yang luas dan dapat secara efektif
mengobati infeksi yang disebabkan oleh bakteri gram positif dan gram negatif,
sedangkan antibiotik lain hanya dapat secara efektif mengobati infeksi yang
disebabkan oleh bakteri gram positif (Singh et al., 2017).
Menurut Waluyo (2004) beberapa sifat yang perlu dimiliki oleh zat
antimikroba adalah sebagai berikut.
1. Menghambat atau membunuh mikroba patogen tanpa merusak hospes/inang,
yaitu antimikroba dapat mengakibatkan terhambatnya pertumbuhan mikroba
bahkan menghentikan pertumbuhan bakteri/membunuh namun tidak
berpengaruh atau merusak pada hospes.

15
2. Bersifat bakterisidal dan bukan bakteriostatik, yaitu antimikroba baiknya
bersifat bakterisidal atau bersifat menghentikan laju pertumbuhan atau
membunuh mikroba bukan bakteriostatik yang hanya menghambat laju
pertumbuhan mikroba.
3. Tidak menyebabkan resistensi pada kuman atau mikorba, yaitu antimikroba
tidak akan menimbulkan kekebalan kepada mikroba sehingga antimikorba
tidak dapat digunakan untuk menghentikan pertumbuhan mikroba patogen lagi.
4. Berspektrum luas, yaitu antimikroba efektif digunakan untuk berbagai spesies
bakteri, baik bakteri coccus, basil, dan spiral.
5. Tidak menimbulkan alergenik atau menimbulkan efek samping bila digunakan
dalam jangka waktu lama, yaitu antimikroba yang digunakan sebagai obat
tidak menimbulkan efek samping kepada pemakai jika digunakan dalam jangka
waktu lama.
6. Zat antimikroba tetap aktif dalam plasma, cairan tubuh atau eskudat,
antimikroba yang berada dalam plasma atau cairan tubuh tetap bersifat aktif
dan tidak dalam keadaan berhenti tumbuh atau dormansi.
7. Zat antimikroba dapat larut dalam air dan stabil, antimikroba dapat larut dan
menyatu dalam air.
Sebagian besar antibiotik yang digunakan secara klinis saat ini tidak
memiliki spektrum yang luas dan tidak dapat mengobati infeksi yang disebabkan
oleh semua infeksi bakteri Gram-positif dan Gram-negatif (Singh et al., 2012).
Mekanisme kerja antibakteri dalam menekan pertumbuhan bakteri dapat di
klasifikasikan menjadi lima yaitu:

16
a. Antibakteri dapat menghambat sintesis sel mikroba
Mekanisme kerusakan dinding sel dapat disebabkan oleh adanya
akumulasi komponen lipofilik yang terdapat pada dinding sel atau membran sel
sehingga menyebabkan perubahan komposisi penyusun dinding sel.
Mekanismenya yaitu dengan merusak lapisan peptidoglikan dengan cara
menghambat pembentukan atau menguhanya setelah selesai terbentuk. Kerusakan
dinding sel bakteri akan menyebabkan terjadinya lisis (Suryaku, 2017).
b. Antibakteri yang dapat mengganggu membran sel
Adanya tekanan osmotic dalam sel bakteri akan menyebabkan terjadinya
lisis yang merupakan dasar efek bakterisidal pada bakteri yang peka. Membran sel
merupakan penghalang yang selektif dalam meloloskan beberapa zat yang terlarut
dan menahan zat-zat yang terlarut lainnya (Suryaku, 2017).
c. Antibakteri yang dapat menghambat sintesis dari asam nukleat
Rifampisin dan golongan kuinolon merupakan contoh antibiotic yang
bekerja dengan menghambat sintesis asam nukleat sel mikroba. Rifamfisin
berikatan dengan enzim polymerase RNA kemudian menghambat sintesis RNA
dan DNA sel mikroba, selain itu golongan kuinolon juga menhambat enzim DNA
girase pada bakteri yang berfungsi membentuk kromosom yang sangat panjang
menjadi bentuk spiral hingga bisa memuat sel kuman yang kecil (Suryaku, 2017).
d. Antibakteri yang dapat menghambat sintesis protein

17
Hidup suatu sel bergantung padaa terpeliharanya molekul-molekul protein
dan asam nukleat dalam keadaan ilmiah. Suatu kondisi yang dapat merubah
keadaan ini yaitu dengan mendenturasi protein dan asam-asam nukleat yang dapat
merusak sel tanpa di perbaiki kembali (Suryaku, 2017).
e. Antibakteri yang dapat menghambat metabolisme sel bakteri
Mikroba membutuhkan asam folat untuk kelangsungan hidupnya. Bakteri
pathogen harus mensitesis sendiri asam folat dari Para Amino Benzoat (PABA)
untuk kelangsungan hidupnya. Senyawa antibakteri dapat menghambat
pertumbuhan atau membunuh mikroorganisme dengan cara mengganggu aktivitas
enzim-enzim metabolik. Antibakteri akan bersaing dengan PABA dalam
pembentukan asam folat, maka akan terbentuk analog asam folat non fungsional
yang menyebabkan kebutuhan asam folat tidak terpenuhi dan hal ini bisa
menyebbkan bakteri menjadi mati (Suryaku, 2017).
Menurut Clinical and Laboratory Standard Institute (2012) antibiotik yang
dapat digunakan untuk Pseudomonas aeruginosa adalah Ciprofloxacin, Ofloxacin
dan Gentamicin. Gentamicin merupakan suatu antibiotika golongan
aminoglikosida yang efektif untuk menghambat kuman-kuman penyebab infeksi
kulit primer maupun sekunder. Antibiotik gentamicin bekerja dengan cara
penghambatan dinding sel. Sel peptidoglikan yang dimiliki dinding sel bakteri
akan mempertahankan bentuk sel dan tekanan osmotic didalam sel bakteri dan
mengakibatkan kematian pada bakteri.
Ciprofloxacin adalah antibakteri golongan fluorokuinolon dengan
spectrum luas. Ciprofloxacin secara invitro melawan bakteri gram negatif

18
termasuk bekerja sebagai bakterisid terhadap enterobakteriaceae, Pseudomonas
aeruginosa, Haemophylus, Neisseria.sp dan juga terhadap bakteri Staphylococcus
dan beberapa bakteri gram positif lainnya. Antibiotik golongan fluorokuinolon
memiliki peran dalam menghambat kerja enzim DNA girase pada bakteri, dan
bersifat bakterisidal, sehingga menyebabkan kematian pada bakteri (Endriani et
al., 2007).
Ofloxacin adalah senyawa antibiotik sintetik dari golongan kuinolon dan
bersifat bakterisid. Aktivitas Ofloxacin dalam membunuh bakteri dengan jalan
menghambat DNA girase, suatu enzim essensial yang merupakan katalis penting
dalam duplikasi dan transkripsi DNA bakteri (Koster et al., 2001).
2.4 Simplisia
a. Definisi simplisia
Simplisia adalah bahan alam yang digunakan sebagai obat yang
belum mengalami pengolahan apapun juga dan kecuali dinyatakan lain
simplisia merupakan bahan yang dikeringkan. Simplisia dapat berupa
simplisia nabati, simplisia hewani, dan simplisia pelikan atau mineral (Kurnia,
2011).
b. Pengambilan simplisia
Pengumpulan bahan baku adalah tahapan penting dalam menentukan
kualitas bahan baku. Dalam tahap ini faktor yang berperan penting adalah waktu
panen. Waktu panen yang tepat adalah ketika bagian tanaman yang digunakan
mengandung senyawa aktif dalam jumlah yang maksimal karena waktu panen
19
simplisia sangat berkaitan dengan senyawa aktif yang terkandung didalam bagian
tanaman yang akan dipanen (Utami & Widiawati, 2013).
c. Perajangan
Perajangan bahan simplisia bertujuan untuk mempermudah proses
pengeringan. sebelum dirajang tanaman yang sudah dipanen, terlebih dahulu
dijemur dalam keadaan utuh selama 1 hari. Perajangan dapat dilakukan
dengan pisau, gunting atau mesin perajang khusus sehingga diperoleh irisan
tipis atau potongan dengan ukuran tertentu (Nurviana, 2016).
d. Pengeringan simplisia
Pengeringan bertujuan mendapatkan simplisia yang tidak mudah rusak
sehingga dapat disimpan dalam waktu yang lebih lama. Dengan penurunan kadar
air, dapat menghentikan reaksi enzimatik sehingga dapat dicegah terjadinya
penurunan mutu atau perusakan simplisia. Air yang masih tersisa dalam simplisia
dalam keadaan tertentu dapat menjadi media pertumbuhan kapang dan jasad renik
lainnya. Simplisia dapat dinilai cukup aman apabila mempunyai kadar air kurang
dari 10% (Suryaku, 2017).
Suhu pengeringan bergantung pada simplisia dan cara
pengeringan. Pengeringan dapat dilakukan antara suhu 300C - 900C (terbaik 600C).
Jika simplisia mengandung bahan aktif tidak tahan panas atau mudah
menguap, pengeringan dilakukan pada suhu serendah mungkin, yaitu 30 0C -
450C atau dengan cara pengeringan vakum (Astari, 2008).
e. Penghalusan simplisia
20
Daun yang terlah kering kemudian dihaluskan dengan blender dan diayak
dengan menggunakan pengayakan, selanjutnya dilakukan perhitungan bobot
kering terhadap bobot basah sampel. Tujuan dari penyerbukan adalah
meningkatkan luas permukaan dari bahan, sehingga senyawa kimia dalam
tumbuhan dapat ditarik secara optimal (Suryaku, 2017).
2.5 Ekstraksi Dengan Metode Maserasi
Ekstraksi merupakan pemisahan senyawa dari kompleks matriks biologis
yang berasal dari tumbuhan atau hewan menggunakan pelarut yang cocok dan
dapat melibatkan atau tidak melibatkan energi panas (Mandal et al., 2015). Secara
umum proses ekstraksi meliputi beberapa tahapan antara lain, pengecilan ukuran
partikel, ekstraksi, filtrasi, pemekatan, dan pengeringan. Semakin halus serbuk
simplisia, maka proses ekstraksi yang terjadi semakin efektif, namun semakin
halus serbuk simplisia yang diekstraksi menyebabkan semakin sulitnya proses
penyarian yang diperlukan (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2000).
Pemilihan pelarut yang sesuai merupakan faktor penting dalam proses
ekstraksi. Pelarut yang digunakan adalah pelarut yang dapat menyaring sebagian
besar metabolit sekunder yang terdapat dalam simplisia (Departemen Kesehatan
Republik Indonesia, 2008). Ekstraksi pelarut melibatkan distribusi zat terlarut
antara dua fase larutan yang tidak bercampur (Simanjuntak, 2008).
Produk yang diperoleh dari proses ekstraksi dapat berupa cairan, semi
padat atau bubuk yang digunakan baik secara oral maupun sebagai obat luar
(Handa et al, 2008). Adapun beberapa metode ekstraksi yang umum digunakan
yaitu perkolasi, sokletasi dan maserasi. Metode ekstraksi dipilih berdasarkan

21
beberapa faktor seperti sifat bahan mentah obat, daya penyesuaian tiap macam
metode ekstraksi dan kepentingan dalam memperoleh ekstrak yang sempurna atau
mendekati sempurna (Suryaku, 2017). Dalam penelitian ini menggunakan
ekstraksi dengan metode maserasi.
Maserasi adalah proses ekstraksi dengan merendam serbuk simplisia
dalam pelarut pada temperatur ruang setidaknya selama tiga hari dengan
pengocokan pada interval waktu tertentu hingga senyawa-senyawa yang dapat
larut akan terlarut (Handa et al., 2008). Maserasi merupakan metode ekstraksi
yang paling sederhana. Proses maserasi dimulai dari dihaluskannya simplisia
sesuai dengan syarat farmakope yaitu dipotong-potong atau berupa serbuk halus
kemudian disatukan dengan bahan pengekstrak, selanjutnya rendaman
disimpan agar terlindung dari sinar matahari langsung, hal ini bertujuan
untuk mencegah reaksi yang dihidrolisis oleh cahaya atau perubahan warna.
Waktu perendaman berbeda-beda berkisar antara 4-10 hari. Hasil ekstraksi juga
dipengaruhi oleh perbandingan sampel dengan pelarut. Semakin besar
perbandingan antara sampel dengan pelarut semakin besar hasil yang diperoleh
(Khopkar, 2003).
Metode maserasi ini mempunyai keuntungan yaitu alat yang
digunakan sederhana dan prosesnya mudah dilakukan. Metode maserasi tidak
memerlukan pemanasan sehingga kecil kemungkinan bahan alam menjadi
rusak atau terurai (Senja, 2014). Pemilihan pelarut berdasarkan kelarutan dan
polaritasnya memudahkan pemisahan bahan alam dalam sampel. Pengerjaan

22
metode maserasi yang lama dan dalam keadaan diam selama maserasi
memungkinkan banyak senyawa yang akan terekstraksi (Istiqomah, 2013).
2.6 Skrining Fitokimia
Skrining fitokimia merupakan uji pendahuluan yang sederhana, cepat dan
sangat selektif yang dapat digunakan untuk mengidentifikasi gugus senyawa dan
menentukan keberadaan senyawa aktif biologis yang terdistribusi dalam jaringan
tumbuhan (Sani et al., 2014). Uji ini sangat bermanfaat untuk memberikan
informasi jenis senyawa kimia yang terdapat pada tumbuhan. Metode skrining
fitokimia dilakukan dengan mengamati reaksi uji warna menggunakan reagen
pewarna (Rafi, 2003; Kristianti et al., 2008).
Pada skrining fitokimia menggunakan serbuk simplisia atau sampel dalam
keadaan basah. Pemeriksaan senyawa metabolit sekunder pada penelitian ini yaitu
senyawa alkaloid, fenol, flavonoid, tannin, saponin, dan triterpenoid/steroid.
a. Senyawa alkaloid
Alkaloid merupakan senyawa metabolit sekunder yang banyak di temukan
di dalam jaringan tumbuhan dan hewan. Hampir semua alkaloid berasal dari
tumbuh-tumbuhan yang tersebar luas dan kebanyakan termasuk ke dalam
tumbuhan tingkat tinggi. Lebih dari 20% spesies angiosperm mengandung
alkaloid. Secara kimia alkaloid termasuk basa organik yang mengandung satu atau
lebih atom nitrogen. Alkaloid bebas dapat larut dalam pelarut organik seperti
klorofom, sedangkan garam-garam organik larut dalam air (Kristanti, 2019).

23
b. Senyawa fenol
Senyawa fenol merupakan senyawa yang dihasilkan oleh tumbuhan
sebagai respons terhadap stres lingkungan. Senyawa fenolik berfungsi sebagai
pelindung terhadap sinar UV-B dan kematian sel untuk melindungi DNA dari
dimerisasi dan kerusakan. Komponen pada senyawa ini diketahui memiliki
peranan penting sebagai agen pencegah dan pengobatan beberapa gangguan
penyakit seperti arteriosklerosis, disfungsi otak, diabetes dan kanker (Kristanti,
2019).
c. Senyawa flavonoid
Flavonoid adalah metabolit sekunder dari polifenol, ditemukan secara luas
pada tanaman serta makanan dan memiliki berbagai efek bioaktif termasuk anti
virus, anti-inflamasi, kardioprotektif, antidiabetes, anti kanker, anti penuaan,
antioksidan dan lain-lain. Flavonoid terdapat dalam semua tumbuhan hijau
sehingga dapat ditemukan pada setiap ekstrak tumbuhan. Flavonoid adalah kelas
senyawa yang disajikan secara luas di alam. Flavonoid ditemukan pada tanaman,
yang berkontribusi memproduksi pigmen berwarna kuning, merah, oranye, biru,
dan warna ungu dari buah, bunga, dan daun. Flavonoid termasuk dalam famili
polifenol yang larut dalam air (Kristanti, 2019).
d. Senyawa tannin
Tannin merupakan salah satu senyawa metabolit sekunder yang ada di
tanaman dan disintesis oleh tanaman. Senyawa tersebut mengandung gugus
hidroksi fenolik yang memungkinkan membentuk ikatan silang yang efektif
dengan senyawa protein. Tannin merupakan zat yang keberadaanya tersebar luas
24
dalam tanaman, seperti daun, buah yang belum matang, batang, dan kulit kayu.
Kandungan tannin pada buah yang belum matang digunakan sebagai sumber
energi dalam proses metabolisme dalam bentuk oksidasi tannin (Hidayah, 2016).
e. Senyawa saponin
Saponin merupakan senyawa dalam bentuk glikosida yang tersebar luas
pada tanaman tingkat tinggi serta beberapa hewan laut dan merupakan kelompok
senyawa yang beragam dalam struktur, sifat fisikokimia dan efek biologisnya.
Saponin triterpenoid juga telah diketahui memiliki sifat farmakologis yang
menguntungkan (Kristanti, 2019).
f. Senyawa triterpenoid/steroid
Senyawa golongan triterpenoid pada tumbuhan terdapat nilai ekologi
karena senyawa ini bekerja sebagai antifungus, insektisida, antibakteri dan
antivirus (Suryaku, 2017).
2.7 Evaluasi Ekstrak Daun Anyang-anyang
a. Pemeriksaan organoleptis
Pemeriksaan organoleptis pada ekstrak bertujuan untuk mengetahui dan
mendeskripsikan bentuk, bau, dan warna dari simplisia yang akan digunakan pada
penelitian (Suryaku, 2017).
b. Rendemen
Rendemen adalah perbandingan jumlah ekstrak yang dihasilkan dari
ekstraksi tanaman. Rendemen menggunakan satuan persen (%). Semakin tinggi
nilai rendemen yang dihasilkan menandakan nilai ekstrak yang dihasilkan

25
semakin banyak (Sani et al., 2014). Jumlah rendemen yang didapat dihitung
dengan menggunakan rumus sebagai berikut.
……….........................................(1)
c. Uji Susut Pengeringan
Uji susut pengeringan merupakan uji yang dilakukan untuk mengukur sisa
zat setelah pengeringan pada temperatur 105℃ selama 30 menit atau hingga
konstan dinyatakan dalam persen (%). Uji susut pengeringan bertujuan untuk
mengetahui batas maksimal berupa rentang persentasi tentang besarnya senyawa
yang hilang pada proses pengeringan. Nilai susut pengeringan yang baik
dinyatakan kurang dari 10% (Suryaku, 2017).
Rumus uji susut pengeringan sebagai berikut:
x100%..................................(2)
Keterangan :
w1 = Bobot awal
w2 = Bobot akhir
2.8 Uji Aktivitas Antibakteri Dengan Metode Difusi
Metode difusi merupakan metode uji antibakteri yang paling sering
digunakan. Prinsip dari metode difusi adalah kemampuan suatu agen antibakteri
berdifusi dengan media agar yang telah diinokulasikan dengan bakteri uji
(Pratiwi, 2008). Beberapa metode yang sering digunakan untuk uji aktivitas
antibakteri adalah sebagai berikut.
1. Metode disc diffusion atau metode Kirby Baure

26
Metode ini dilakukan dengan menggunakan kertas cakram yang berisi zat
antimikroba diletakkan pada media agar yang telah ditanami bakteri uji dan
diinkubasi pada suhu 370C selama 18-24 jam. Hasil dilihat ada atau tidaknya zona
terang yang terbentuk di sekeliling kertas cakram, jika terbentuk zona terang
menunjukkan adanya zona hambat pada pertumbuhan bakteri tersebut (Sari et al.,
2017).
Berikut merupakan diameter zona hambat terhadap pertumbuhan bakteri
(Wulandari et al., 2014), sebagai berikut:
Tabel 2.1 Diameter zona hambat (Wulandari et al., 2014).

Diameter Zona Hambat Respon Hambatan Pertumbuhan
>20 mm Sangat Kuat
10-20 mm Kuat
5-10 mm Sedang
<5 mm Lemah
0 mm Tidak ada
Kelebihan dari metode disc diffusion adalah metodenya sederhana, tidak
memerlukan peralatan khusus, dan relatif murah. Metode ini juga memiliki
kekurangan yaitu terbentuknya ukuran zona terang tergantung pada kondisi
predisfusi, inkubasi, inokulasi, dan ketebalan medium. Metode disc diffusion ini
tidak dapat dilakukan pada mikroorganisme yang pertumbuhannya lambat dan
mikroorganisme yang bersifat anaerob obligat (Prayoga, 2013).
2. Metode parit (Ditch)
Metode ini menggunakan lempeng agar yang telah dilakukan inokulasi
dengan bakteri uji. Zat antimikroba diletakkan pada parit yang dibuat dengan
cara memotong media agar dalam cawan petri pada bagian tengah secara
membujur dan bakteri uji digoreskan ke arah parit kemudian diinkubasi pada
27
waktu dan suhu optimum yang sesuai dengan bakteri uji. Hasil pengamatan
diperoleh dengan melihat ada atau tidaknya zona hambat yang terbentuk disekitar
parit (Prayoga, 2013).
3. Metode sumuran
Metode ini hampir sama dengan metode disc diffusion namun bedanya
tidak menggunakan kertas. Pada media agar dibuat sumur, dan pada sumur
tersebut diberi zat antimikroba. Hasil pengamatan dilakukan dengan melihat ada
atau tidaknya zona hambat di sekeliling lubang yang telah dibuat (Prayoga, 2013).
2.9 Diameter Zona Hambat
Diameter zona hambat adalah terbentuknya zona bening di sekitar kertas
cakram yang menunjukkan adanya penghambatan pada larutan uji. Pengamatan
dilakukan dengan cara mengukur zona bening yang terbentuk disekitar
kertas cakram menggunakan jangka sorong, sehingga dapat disebut
dengan zona hambat (Prayoga, 2013).
Adapun rumus untuk menghitung zona hambat menurut Warbung et al.
(2014) adalah sebagai berikut:
…………………..…………………..(3)
Keterangan:
t = Zona hambat
d1 = Diameter vertikal zona bening pada media.
d2 = Diameter horizontal zona bening pada media.
X = Diameter disk.
BAB III
KERANGKA BERPIKIR, KONSEP, DAN HIPOTESIS PENELITIAN
3.1 Kerangka Berpikir
Penyakit infeksi bakteri merupakan masalah di bidang kesehatan yang
terus berkembang dari waktu ke waktu. Bakteri patogen yang berbahaya dan dapat
menyebabkan infeksi baik secara sporadik maupun endemik salah satunya
adalah Pseudomonas aeruginosa.
Pengobatan yang paling cocok untuk infeksi bakteri adalah antibiotik.
Penggunaan antibiotik yang tidak tepat dapat menimbulkan berbagai masalah,
seperti pengobatan yang tidak efektif, peningkatan risiko keselamatan pasien,
resistensi bakteri terhadap antibiotik. Peningkatan resistensi bakteri terhadap
antibiotik memberikan peluang besar untuk mendapatkan senyawa
antibakteri dengan memanfaatkan senyawa bioaktif dari kekayaan dan
keanekaragaman hayati.
Salah satu alternatif untuk menemukan antibakteri baru dari bahan alam
yakni dengan memanfaatkan tumbuhan anyang-anyang. Pada bagian daun
anyang-anyang diidentifikasi mengandung senyawa yang dapat menghambat
pertumbuhan bakteri seperti saponin, flavonoid, fenol dan tannin. Senyawa fenol
memiliki efek antibakteri yang dapat merusak membran sitoplasma dan
mengganggu ion-ion dalam kalium sel. Senyawa flavonoid bekerja dengan cara
mendenaturasi protein sel dan mengerutkan protein sel sehingga dapat melisiskan
dinding sel bakteri. Senyawa saponin bekerja dengan struktur detergen yang dapat
28
29
berikatan dengan molekul hidrofilik dan non polar lipofilik sehingga mampu
merusk memberan sitoplasma dan membunuh bakteri. Tannin dapat membentuk
senyawa kompleks dengan protein melalui ikatan hidrogen yang jika terbentuk
ikatan hidrogen di antara senyawa tannin dengan protein bakteri maka protein
bakteri akan terdenaturasi sehingga dapat mengganggu metabolisme bakteri.
Berdasarkan penelitian Savitri (2019) dikatakan bahwa ekstrak metanol
kasar daun anyang-anyang memiliki potensi menghambat pertumbuhan bakteri E.
coli dengan IC50 yang paling rendah yakni sebesar 360,969±10,542 µg/ml dan
hasil skrining fitokimia menunjukkan sampel dan fraksi positif mengandung
polifenol. Metode ekstraksi yang digunakan pada penelitian ini yaitu maserasi
dengan penyari etanol 96%.
Metode maserasi dipilih karena tidak memerlukan pemanasan sehingga
kecil kemungkinan bahan alam menjadi rusak atau terurai. Hasil dari ekstraksi
dengan metode maserasi tersebut dilanjutkan dengan uji aktivitas antibakteri.
Metode uji aktivitas antibakteri yang digunakan pada penelitian ini adalah metode
difusi. Hasil uji aktivitas antibakteri yaitu besar diameter zona hambat yang dilihat
dari zona terang yang terbentuk sebagai ukuran kekuatan daya hambat terhadap
bakteri uji.
30
3.2 Kerangka Konsep
Daun anyang-anyang
1. Mudah tumbuh pada iklim tropis dan sub tropis

2. Mampu bertahan hidup di tanah kering dan nutrisi rendah.
3. Membutuhkan banyak sinar matahari atau sedikit teduh
Esktraksi daun anyang-anyang metode maserasi dengan pelarut

etanol 96%
Ekstrak etanol daun anyang-anyang
Uji skrining fitokimia
Konsentrasi ekstrak daun anyang-anyang 20%,

40%, 60%, dan 80%
Uji aktivitas antibakteri terhadap Pseudomonas

aeruginosa dengan metode disc diffusion
Pengukuran zona hambat
Sangat Kuat Sedang Lemah Tidak

kuat ada
Gambar 3. 1 Kerangka konsep

31
3.3 Hipotesis
Berdasarkan kerangka berpikir dari konsep penelitian dapat dirumuskan
hipotesis penelitian sebagai berikut.
1. Terdapat senyawa saponin, triterpenoid, steroid, flavonoid, fenol dan
tannin pada daun tumbuhan anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus
Sm.).
2. Terdapat aktivitas antibakteri dari ekstrak etanol 96% daun tumbuhan
anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.) terhadap bakteri
Pseudomonas aeruginosa secara in vitro.

BAB IV
METODE PENELITIAN
4.1 Rancangan Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode eksperimental. Rancangan penelitian
eksperimental digunakan untuk memberikan suatu perlakuan terhadap sampel.
Metode penelitian yang digunakan meliputi determinasi tanaman, pengumpulan
sampel, sortasi dan pencucian sampel, ekstraksi sampel dengan cara maserasi, uji
fitokimia, dan uji aktivitas antibakteri dari daun anyang-anyang terhadap bakteri
Pseudomonas aeruginosa dengan menggunakan metode difusi agar untuk
mengukur zona hambat dan analisis data pada penelitian ini menggunakan rata-
rata (mean) dan standar deviasi (SD). Penelitian ini menggunakan model
rancangan post test only control group design dengan menggunakan 6 perlakuan:
P0
Kk Ok
PS
Ks Os
Gambar 4. 1 Rancangan penelitian
P1
P S K1 O1
P2
32 K2 O2
P3
K3 O3
P4
K4 O4
33
Keterangan :
P : Populasi
S : Sampel
Kk : Kelompok Kontrol negatif
Ks : Kelompok Kontrol positif
K1 : Kelompok perlakuan 1
P0 : Perlakuan kontrol negatif (etanol 96%)
PS : Perlakuan kontrol positif (Ciprofloxacin)
P1 : Perlakuan dengan ekstrak daun anyang-anyang konsentrasi 20%
Ok : Observasi pembentukan zona bening jam ke-0 sampai ke-24
Os : Observasi pembentukan zona bening jam ke-0 sampai ke-24
O1 : Observasi pembentukan zona bening jam ke-0 sampai ke-24
4.2 Lokasi dan Waktu Penelitian
Pada penelitian ini sampel yang digunakan adalah daun anyang-anyang
(Elaeocarpus grandiflorus Sm.). Pembuatan ekstrak, uji skrining fitokimia, dan
antimikroba dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi dan Laboratorium Kimia
Universitas Bali Internasional pada bulan Februari – Mei 2021.
4.3 Ruang Lingkup Penelitian
Ruang lingkup pada penelitian ini adalah penelitian teknologi laboratorium
medik bidang teknik isolasi dan identifikasi bahan alam dan mikrobiologi
khususnya pada pembuatan ekstrak dan uji antibakteri.

34
4.4 Penentuan Sumber Data
Sumber data pada penelitian ini adalah daun anyang-anyang (Elaeocarpus
grandiflorus Sm.) yang diidentifikasi untuk mengetahui taksonomi tanaman yang
digunakan dalam penelitian ini sudah benar. Dilakukan determinasi di Lembaga
Ilmu Pengetahuan Indonesia (Indonesian Institute of Science) Balai Konservasi
Tumbuhan Kebun Raya “Eka Karya”, Candikuning, Kecamatan Baturiti,
Kabupaten Tabanan, Bali. Bakteri Pseudomonas aeruginosa yang digunakan
adalah kultur murni yang di peroleh dari Laboratorium Mikrobiologi Fakultas
Kedokteran Universitas Udayana.
4.5 Variabel Penelitian
4.5.1 Variabel bebas (Independent)
Variabel bebas adalah variabel yang menjadi sebab perubahan atau
timbulnya variabel dependen. Variabel bebas pada penelitian ini adalah daun
tumbuhan anyang-anyang pada ekstrak etanol 96% dengan konsentrasi 20%, 40%,
60%, dan 80%.
4.5.2 Variabel terikat (Dependent)
Variabel terikat adalah variabel yang dipengaruhi oleh variabel bebas.
Variabel terikat pada penelitian ini adalah pertumbuhan bakteri Psesudomonas
aeruginosa pada media agar dengan melihat diameter zona hambat.
4.5.3 Variabel terkendali
Variabel terkendali adalah variabel yang dikendalikan atau dibuat konstan
sehingga variabel independent terhadap variabel dependent tidak dipengaruhi oleh
faktor luar yang tidak diteliti. Variabel terkendali pada penelitian ini adalah umur
35
daun anyang-anyang, lama maserasi (7 hari), suhu penguapan (50oC), dan
inkubasi bakteri (24 jam).
4.5.4 Definisi operasional
Definisi operasional dalam penelitian ini sebagai berikut.
1. Daun anyang-anyang adalah daun segar yang sudah dikeringkan dan diambil
dari Desa Timpag, Kabupaten Tabanan, Bali.
2. Serbuk daun anyang-anyang adalah daun anyang-anyang yang dikeringkan,
setelah kering dibuat serbuk dan diayak menggunakan ayakan.
3. Ekstrak adalah hasil ekstraksi daun anyang-anyang dengan larutan penyari
etanol 96% menggunakan metode maserasi kemudian dipekatkan
menggunakan rotary evaporator.
4. Uji fitokimia adalah pengujian kandungan metabolit sekunder yang terdapat
pada daun anyang-anyang seperti alkaloid, fenol, flavonoid, saponin dan
tannin.
5. Bakteri yang digunakan dalam penelitian ini adalah Pseudomonas aeruginosa
yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran
Universitas Udayana.
6. Uji aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi. Metode difusi merupakan
metode yang digunakan untuk mengukur zona hambat pertumbuhan bakteri
yang terbentuk.
4.6 Instrumen Penelitian
Pada penelitian ini alat-alat yang digunakan yaitu gelas ukur (Herma),
beaker glass (Herma), blender, gunting, batang pengaduk, autoklaf (GEA),

36
inkubator (Biobase), cawan petri, jarum ose, erlenmeyer (Herma), hot plate
(Maspion), aluminum foil (Klin pak), tabung reaksi (Iwaki), rak tabung, pipet
mikro (Endo), ayakan, pipet volume (Iwaki), bunsen, lap bersih, kertas cakram
(Oxoid), kertas saring, spatula, jangka sorong, cotton swab (one med), pinset,
tissue, kapas steril (one med), dan buku catatan.
4.7 Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan pada penelitian ini terdiri dari bahan utama, bahan
penyari, bahan uji skrining fitokimia, bahan uji aktivitas antibakteri, dan bakteri
uji antibakteri. Bahan utama yang digunakan pada penelitian ini adalah daun
anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.) yang diambil adalah daun muda
berwarna hijau yang diperoleh dari Desa Timpag, Kecamatan Kerambitan,
Kabupaten Tabanan, Bali. Bahan penyari pada penelitian ini digunakan untuk
mendapatkan ekstrak daun anyang-anyang dengan etanol 96%.
Skrining fitokimia dilakukan secara kualitatif dengan menguji kandungan
flavonoid, fenol, saponin, alkaloid, triterpenoid/steroid dan tannin dengan
menggunakan pereaksi warna (uji tabung). Bahan uji yang digunakan dalam uji
skrining fitokimia pada penelitian ini adalah serbuk magnesium, asam klorida 0,1
N, asam klorida 2 N, metanol, asam klorida pekat, feri klorida, larutan Mayer,
larutan Dragendroff, asam sulfat, kloroform, feri klorida 1%, asetat anhidrid,
larutan pereaksi Lieberman-Burchard. Bahan yang digunakan dalam uji aktivitas
antibakteri pada penelitian ini adalah media Muller Hinton Agar (MHA), kontrol
positif (Ciprofloxacin), kontrol negatif larutan dimetil sulfoksida (DMSO). Pada

37
uji aktivitas antibakteri ekstrak daun anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus
Sm.) menggunakan biakan murni bakteri Pseudomonas aeruginosa.
4.8 Prosedur Penelitian
4.8.1 Determinasi tumbuhan
Determinasi tumbuhan daun anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus
Sm.) dilakukan di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (Indonesian Institute of
Science) Balai Konservasi Tumbuhan Kebun Raya “Eka Karya” Candikuning,
Kecamatan Baturiti, Kabupaten Tabanan, Bali.
4.8.2 Persiapan simplisia
Daun anyang-anyang yang diambil adalah daun muda yang dihitung dari
tangkai dua sampai lima dari pucuk, dipanen dilakukan sortasi kering untuk
memilih bagian daun yang segar, berwarna hijau yang layak digunakan untuk
penelitian ini, setelah itu dicuci bersih dengan air mengalir untuk menghilangkan
pengotor yang menempel pada daun lalu ditiriskan. Daun yang sudah dicuci
digunting kecil-kecil agar mempercepat proses pengeringan. Potongan daun
tersebut diangin-anginkan selama 2 hari sampai layu (kecoklatan) dan kemudian
dilanjutkan pengeringan menggunakan oven pada suhu 400C selama 6 jam.
Setelah daun kering kemudian diblender dan diayak dengan ayakan 60 mesh
untuk mendapatkan serbuk yang lebih halus.
4.8.3 Proses ekstraksi daun anyang-anyang
Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode maserasi.
Tahapan ekstraksi dimulai dari penimbangan simplisia daun anyang-anyang
sebanyak 200 gram. Setiap bagian direndam dalam toples dengan etanol 96%
38
dengan perbandingan 1:10 sejumlah 2000 ml selama tujuh hari dan diremaserasi
selama tujuh hari. Hasil rendaman (filtrat) dievaporasikan dengan rotary
evaporator dan dilakukan penguapan pada suhu 50oC agar pelarut hilang.
4.8.4 Persentase rendemen ekstrak daun anyang-anyang
Perhitungan persentase rendemen dilakukan dengan menimbang berat
awal simplisia sebelum dilakukan ekstraksi, kemudian dilakukan penimbangan
kembali pada hasil ekstraksi yang diperoleh. Setelah mendapatkan hasil berupa
berat hasil ekstraksi simplisia dan berat awal simplisia, besarnya rendemen dapat
di hitung dengan rumus:
……...…….(4)
4.8 5 Uji kadar air ekstrak daun anyang-anyang
Ekstrak ditimbang sebanyak 1 g sampai 2 g , kemudian dimasukkan ke
dalam botol timbang dangkal tertutup yang sebelumnya telah dipanaskan pada
suhu 105ºC selama 30 menit dan telah ditara. Ekstrak diratakan di dalam botol,
dengan cara menggoyangkan botol hingga membentuk lapisan setebal kurang 5
mm sampai 10 mm lalu timbang. Kemudian di masukan ke dalam oven, dan tutup
botol dibuka. Pengeringan dilakukan pada suhu penetapan yaitu 105°C hingga
diperoleh bobot tetap lalu ditimbang. Sebelum setiap pengeringan, botol dibiarkan
dalam keadaan tertutup mendingin dalam deksikator hingga suhu kamar.
Kemudian dilakukan perhitungan kadar air.

39
4.8.6 Skrining fitokimia
a. Uji tannin
Dimasukkan ekstrak daun anyang-anyang sebanyak 1 ml ke dalam tabung
reaksi kemudian ditambahkan dengan 1-2 tetes FeCl3, amati perubahan warna.
Hasil positif mengandung tannin akan terbentuk warna biru kehitaman atau hijau
kehitaman (Suryaku, 2017).
b. Uji flavonoid
reaksi kemudian ditambahkan dengan sedikit logam magnesium dan HCl pekat,
amati perubahan warna. Hasil positif mengandung flavonoid berubah warna
menjadi hijau kekuningan, biru, merah (Suryaku, 2017).
c. Uji fenol
reaksi kemudian ditambahkan 5 tetes FeCl3 1%. Terjadi perubahan warna menjadi
warna hijau sampai hitam hal ini menunjukkan adanya senyawa fenol (Suryaku,
2017).
d. Uji alkaloid
reaksi kemudian ditambahkan dengan sedikit larutan asam klorida 0,1 N,
dipanaskan kemudian ditambah dengan larutan Mayer terbentuk endapan
menggumpal berwarna putih atau kuning dan dengan larutan Wagner terbentuk
warna coklat sampai hitam (Suryaku, 2017).

40
e. Uji triterpenoid/Steroid
reaksi kemudian ditambahkan pereaksi Leiberman Burchard. Adanya triterpedoid
ditunjukkan dengan terjadinya warna merah, coklat, jingga atau ungu, sedangkan
adanya steroid ditunjukkan dengan adanya terbentuk warna biru (Suryaku, 2017).
f. Uji Saponin
reaksi kemudian dipanaskan diambil sebanyak 5 ml filtrat, kemudian didinginkan
lalu dikocok kuat-kuat selama 10 menit, apabila terbentuk buih setinggi 1-10 cm
dan ditambah dengan 1 tetes asam klorida 1 N jika buih tidak hilang makanya
hasilnya positif (Suryaku, 2017).
4.8.7 Uji aktivitas antibakteri ekstrak daun anyang-anyang (Elaeocarpus
grandiflorus Sm.)
a. Pembuatan media Muller Hinton Agar (MHA)
Komposisi bahan Muller Hinton Agar (MHA) yang terdapat pada medium
adalah (beef infusion 200 gram, Casamino acid 17,5 gram, agar 17 gram, starch
1,5 gram). Timbang MHA sebanyak sebanyak 38 gram kemudian dimasukkan ke
dalam erlenmeyer 250 ml dan dilarutkan menggunakan akuades 1000 ml dengan
pH 7,3. Panaskan media dengan menggunakan hot plate sambil diaduk sampai
homogen dengan batang pengaduk. Media yang telah homogen akan memiliki
tanda larutan dengan warna kuning bening. Sterilkan larutan MHA selama 15
menit di autoklaf kemudian media dimasukkan ke dalam cawan petri dan
didinginkan hingga padat.

41
b. Pembuatan konsentrasi ekstrak
Variasi konsentrasi ekstrak daun anyang-anyang dibuat sebanyak empat
konsentrasi berbeda yaitu 20%, 40%, 60%, dan 80% yang dibuat dengan
menimbang dan mengencerkan ekstrak daun anyang-anyang dengan pelarut
DMSO (Dimetil Sulfoksida). Pembuatan variasi konsentrasi larutan ekstrak daun
anyang-anyang adalah sebagai berikut:
1. P1 (20 %) (b/v): 1 gram ekstrak etanol 96% + larutan DMSO sebanyak 5 ml.
2. P2 (40 %) (b/v) : 2 gram ekstrak etanol 96% + larutan DMSO sebanyak 5 ml.
c. Pembuatan larutan kontrol positif
Larutan kontrol positif (+) yang digunakan yaitu ciprofloxacin 500 mg.
Larutan ini dibuat dengan cara ciprofloxacin digerus kemudian ditimbang
sehingga memperoleh serbuk ciprofloxacin 500 mg dan dilarutkan dalam 5 ml
akuades dan dilakukan perendaman di beaker glass.
d. Pembuatan larutan kontrol negatif
Larutan kontrol negatif (-) yang digunakan sesuai dengan ekstrak yaitu
larutan DMSO (Dimetil Sulfoksida) sebanyak 5 ml dimasukkan ke dalam
beaker glass dan dilakukan perendaman kertas cakram.
e. Sterilisasi alat
Tujuan dari sterilisasi alat pada penelitian ini yaitu untuk menghindari
senyawa atau mikoorganisme yang dapat mempengaruhi hasil penelitian.

42
Alat-alat yang akan digunakan seperti cawan petri, erlenmeyer, beaker glass,
jarum ose, batang pengaduk harus dilakukan sterilisasi untuk mencegah
terjadinya kontaminasi mikroorganisme. Alat-alat yang akan disterilisasi
selanjutnya dibungkus menggunakan alumunium foil. Sterilisasi dilakukan
dengan sterilisasi kering dan basah. Sterilisasi kering menggunakan oven dengan
suhu 170oC selama 1-2 jam. Sterilisasi basah dengan menggunakan autoklaf
dengan suhu 121oC selama 15 menit.
f. Identifikasi bakteri
1. Pewarnaan gram
Larutan natrium hidroksida 0,85% sebanyak 1 ml dimasukkan ke dalam
tabung steril, diambil natrium hidroksida dengan ose sebanyak 2 kali lalu
diletakkan di atas kaca obyek kemudian ditambahkan 2 ose bakteri, kemudian
dibuat apusan setipis mungkin, difiksasi dengan bunsen. Preparat apusan ditetesi
pewarna kristal violet 2% selama 1 menit, kemudian preparat dicuci dengan
akuades, selanjutnya preparat apusan ditetesi pewarna kedua yaitu lugol selama 30
detik, kemudian cuci dengan akuades. Preparat apusan selanjutnya ditetesi
pewarna ketiga yaitu aseton alkohol selama 30 detik, lalu dicuci dengan akuades.
Preparat apusan kemudian ditetesi dengan pewarna safranin 0,25% selama 1 menit
dan dicuci dengan akuades. Selanjutnya dilakukan pengeringan dan pengamatan
morfologi sel dan warna di bawah miskroskop (Soemarno, 2000).
2. Uji katalase
Hidrogen peroksida 3% diteteskan pada kaca obyek yang bersih dan bebas
lemak, lalu biakan bakteri dioleskan pada gelas obyek menggunakan ose.
43
Suspensi dicampur secara perlahan menggunakan ose, hasil positif ditandai
dengan terbentuknya gelembung udara (Soemarno, 2000).
3. Uji SIM (Sulfide Indol Motility)
SIM (Sulfide Indol Motility) termasuk ke dalam media semi solid
(setengah padat). Kegunaan media ini adalah untuk mengetahui sifat bakteri
dalam memproduksi H2S, indol dan pergerakan atau motilitas. Cara kerjanya yaitu
biakan bakteri diambil menggunakan ose steril lalu ditusuk dengan arah tegak
lurus pada media dan diinkubasi pada suhu 37 oC selama 24 jam. Hasilnya
meliputi produksi H2S yang ditandai dengan media berwarna hitam, produksi
indol dapat dilihat setelah ditetesi dengan reagen kovacs sebanyak 3-5 tetes ke
dalam media, bila indol positif, akan terbentuk cincin merah pada permukaan
media, motilitas dapat dilihat apabila terjadi kekaburan media di tempat tusukan
ose (Radji, 2011).
4. Uji TSIA (Triple Sugar Iron Agar).
Uji TSIA (Triple Sugar Iron Agar) bertujuan untuk membedakan jenis
bakteri berdasarkan kemampuan memecahkan dextrose, laktosa, sukrosa,dan
pembebasan sulfide. Selain itu, uji TSIA berfungsi untuk mengetahui apakah
bakteri tersebut menghasilkan gas H2S atau tidak. Media yang digunakan
mempunyai dua bagian, yaitu slant (miring) dan butt (tusuk) (Kismiyati et al.,
2009). Uji TSIA dilakukan dengan mengambil koloni 1 ose jarum lalu ditusuk
pada media sampai ke dasar tabung, kemudian digoreskan secara zig-zag pada
permukaan media TSIA dan diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam di dalam
inkubator.
44
g. Pembuatan suspensi bakteri Pseudomonas aeruginosa
Kultur murni dari bakteri Pseudomonas aeruginosa dibuat suspensi
dengan cara pembiakan bakteri diambil sebanyak 1-2 ose dan disuspensikan
dalam 5 ml (NaCl/larutan saline) 0,9% kemudian dihomogenkan sampai diperoleh
kekeruhan yang sesuai dengan standar 0,5µ Mc Farland atau sebanding dengan
jumlah bakteri 108 (CFU/mL). Larutan saline steril digunakan untuk pembuatan
suspensi dengan tujuan agar bakteri uji tidak mengalami lisis. Suspensi bakteri
diteteskan sebanyak 20µ, kemudian diratakan pada media MHA (Muller Hinton
Agar) dan didiamkan selama 30 menit (Soemarno, 2000).
h. Pengujian aktivitas antibakteri
Pada pengujian aktivitas antibakteri dari ekstrak daun anyang-anyang
menggunakan difusi cakram disk. Media MHA (Muller Hinton Agar) yang telah
dicairkan kemudian dituangkan ke dalam cawan petri steril dan dibiarkan hingga
memadat. Setelah media padat kemudian tambahkan 50µ suspensi bakteri
disebarkan ke permukaan medium agar secara merata. Cawan petri diinkubasi
pada suhu 37oC selama 24 jam. Zona hambat yang terbentuk akan diukur dengan
menggunakan jangka sorong dan diinterpretasikan kekuatan zona hambatnya
(Soemarno, 2000). Pengukuran zona bening di sekitar cakram menggunakan
jangka sorong dengan rumus sebagai berikut:
…………..……………..(6)
45
Keterangan
d1 : diameter vertikal zona bening
d2 : diameter horizontal zona bening
d3 : diagonal kanan
d4 : diagonal kiri
x : diameter cakram
t : zona hambat
Dalam penelitian ini digunakan sampel berupa ekstrak daun anyang-
anyang dalam berbagai kadar sebanding dengan jumlah kelompok perlakuan
(20%, 40%, 60%, dan 80%) serta kontrol positif ciprofloxacin dan kontrol negatif
DMSO (Dimetil Sulfoksida).
Cakram disk berisi bahan uji
Diameter hambat
Media MHA yang di
inokulasikan bakteri
Gambar 4. 2 Metode cakram disk
Pseudomonas
Menurut Threenesia (2017) untuk menentukan besar pengulangan pada
penelitian ini, maka akan digunakan rumus Federer sebagai berikut :
………………………………. (7)
46
Keterangan:
t = jumlah perlakuan
n = jumlah sampel
Dalam penelitian ini diketahui t = 6 yaitu kontrol positif, kontrol negatif,
kosentrasi ekstrak 20%, 40%, 60% dan 80%. Maka perhitungan besar sampel
dapat dijabarkan sebagai berikut:
(n-1) (k-1) ≥ 15
(n-1) (6-1) ≥ 15
(n-1) 5 ≥ 15
5n-5 ≥ 15
5n >20
n ≥ 4………………………………………………………...….…...........(8)
Keterangan :
n = Banyaknya pengulangan
k = Jumlah kelompok perlakuan
Berdasarkan perhitungan rumus Federer, maka besar sampel yang diperlukan
adalah 4 sampel pengulangan pada tiap kelompok perlakuan dan kelompok
kontrol.
4.9 Metode Analisis Data
Analisis data pada penelitian ini menggunkan rata-rata (mean) dari jumlah
pengukuran masing-masing konsentrasi dan diolah dengan standar deviasi untuk
dilihat validitas hasil pengujian ekstrak daun anyang-anyang (Elaeocarpus
grandiflorus Sm.) terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa secara in vitro.

47
4.10 Alur Penelitian
Daun anyang-anyang
(Elaeocarpus grandiflorus Sm.)
Daun yang sudah dicuci digunting
kecil-kecil
Potongan daun diangin-angikan
(2 hari) sampai layu (kecoklatan).
Dilakukan pengeringan dengan
oven (6 jam).
Setelah daun kering diblender dan
disaring untuk mendapatkan
Simplisia serbuk yang lebih halus.
Maserasi dengan pelarut
etanol 96% dengan
perbandingan 1:10 (tiga
hari).
Hasil penyaringan (filtrat)
dikentalkan
menggunakan rotary
evaporator.
Ekstrak kental 1. Uji skrining fitokimia:

- Alkaloid
- Flavonoid
- Triterpenoid/Steroid
- Saponin
P1 (20 %) : 1 gr ekstrak - Tannin
etanol 96% + 5 ml DMSO. - fenol
Variasi konsentrasi
P2 (40 %) : 2 gr ekstrak (P1), (P2), (P3), (P4)
etanol 96% + 5 ml DMSO. Cakram kertas steril
dimasukkan ke dalam
P3 (60 %) : 3 gr ekstrak masing-masing varian
etanol 96% + 5 ml DMSO. kosentrasi eksktrak
(dibiarkan 15 menit).
P4 (80 %) : 4 gr ekstrak Uji Aktivitas Antibakteri
Suspense bakteri disebarkan
etanol 96% + 5 ml DMSO. ke permukaan medium
agar.
Diinkubasi pada suhu 37oC
selama 24 jam.
Pengukuran daya
hambat
Gambar 4. 3 Alur Penelitian

BAB V
HASIL PENELITIAN
5.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan Anyang-Anyang (Elaeocarpus
grandiflorus Sm.)
Determinasi tumbuhan yang digunakan pada penelitian ini dilakukan di
Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (Indonesian Institute of Science) Balai
Konservasi Tumbuhan Kebun Raya “Eka Karya” Candikuning, Kecamatan Baturiti,
Kabupaten Tabanan, Bali pada bulan Januari tahun 2021. Tumbuhan dalam
keadaan memiliki batang, daun, dan buah. Berdasarkan hasil determinasi,
tumbuhan yang digunakan pada penelitian ini adalah tumbuhan anyang-anyang
jenis Elaeocarpus grandiflorus Sm. Hasil identifikasi tumbuhan anyang-anyang
disajikan pada Lampiran 1.
5.2 Hasil Ekstraksi Daun Anyang-Anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)
Daun anyang-anyang yang digunakan pada penelitian ini diperoleh dari
desa Timpag, Kabupaten Tabanan, Bali. Daun anyang-anyang yang dipergunakan
sebanyak dua kg kemudian dilakukan pengeringan dengan oven pada suhu 50 oC
selama 48 jam. Tahapan ekstraksi dimulai dari penimbangan simplisia daun
anyang-anyang sebanyak 200 gram. Simplisia sebanyak 200 gram dimaserasi
menggunakan pelarut etanol 96% sebanyak 2000 mL selama tujuh hari dan
dilakukan remaserasi selama tujuh hari. Hasil rendaman (filtrat) dipekatkan
dengan rotary evaporator dan dilakukan penguapan pada suhu 50oC agar pelarut
hilang, kemudian ekstrak kental ditimbang dan dihitung nilai % rendemennya.
48
49
Nilai % rendemen yang diperoleh dari ekstrak etanol yaitu 45%. Data persentase
rendemen disajikan pada Tabel 5.1
Tabel 5.1 Nilai persen rendemen ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang
Pelarut Bagian yang Bobot tanaman Bobot Rendemen
digunakan yang diekstraksi ekstrak (%)
(gram) kental (gram)
Etanol 96% Daun 200 90,25 45,12
Berdasarkan Tabel 5.2 nilai persen rendemen yang didapatkan dari ekstrak
etanol 96% daun anyang-anyang sebesar 45,12%. Menurut Departemen
Kesehatan Republik Indonesia tahun 2010, nilai rendemen yang baik adalah tidak
kurang dari 12%. Hasil ekstrak yang didapat pada penelitian ini telah memenuhi
syarat standar karena rendemen yang didapatkan lebih dari 12%.
5.3 Evaluasi Ekstrak Daun Anyang-Anyang (Elaeocarpus grandiflorus
Sm.)
5.3.1 Pemeriksaan organoleptik
Pemeriksaan awal untuk ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang adalah
dengan melakukan pemeriksaan organoleptik yang terdiri dari tekstur, warna, dan
bau. Hasil pemeriksaan organoleptik dari ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang
disajikan pada Tabel 5.2.
Tabel 5.2 Pemeriksaan organoleptik ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang

Sampel Tekstur Organoleptik Bau
warna
Ekstrak daun Ekstrak kental Hijau Kehitaman Khas dan
anyang-anyang menyengat
Berdasarkan hasil pemeriksaan organoleptik pada Tabel 5.2 ekstrak etanol
96% daun anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.) memiliki tekstur

50
ekstrak yang kental, berwarna hijau kehitaman, dan memiliki bau yang khas dan
menyengat.
5.3.2 Uji kadar air ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang (Elaeocarpus
grandiflorus Sm.)
Ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang ditimbang sebanyak 1 gram
dimasukan ke dalam botol timbang bertutup yang sebelumnya telah dipanaskan
pada suhu 105oC selama 30 menit dan telah ditara. Botol timbang dimasukan ke
dalam oven dalam keadaan tutup botol terbuka, keringkan pada suhu 105oC
hingga bobot tetap. Replikasi dilakukan sebanyak empat kali kemudian dihitung
persentasenya. Nilai kadar air yang diperoleh dari ekstrak etanol daun anyang-
anyang disajikan pada Tabel 5.3.
Tabel 5.3 Penetapan Uji Kadar Air Ekstrak Etanol 96% Daun Anyang-anyang
Replikasi Uji Kadar Air (%) Rata-rata (%) SD
1 4,42
2 4,52 4,29 0,22
3 4,20
4 4,01
Berdasarkan Tabel 5.3 hasil evaluasi ekstrak pada uji kadar air ekstrak
etanol 96% daun anyang-anyang adalah sebesar 4,29 ± 0,22 %.
Penentuan metabolit sekunder dalam ekstrak etanol 96% daun anyang-
anyang dilakukan dengan pereaksi warna. Hasil identifikasi senyawa metabolit
sekunder disajikan pada Tabel 5.4.

51
Tabel 5.4 Skrining fitokimia ekstrak etanol daun anyang-anyang

Senyawa Pereaksi Hasil Pengamatan Keterangan
HCl 1 N + Warna kuning kecoklatan -
Alkaloid pereaksi Meyer tanpa ada endapan putih
HCl 1 N + pereaksi Coklat tanpa endapan -
Wagner kuning keemasan
Saponin Air Panas + Busa tetap stabil +
HCl 1 N
Flavonoid Serbuk Mg Warna merah kecoklatan +
Polifenol FeCl3 10% Hitam +
Tannin FeCl3 1% Hijau Tua kehitaman +
Triterpenoid Liberman burchard Warna coklat +
Steroid Liberman burchard Warna kecoklat -
Ket: (+) = Mengandung senyawa yang dimaksud
(-) = Tidak mengandung senyawa yang dimaksud
Berdasarkan hasil uji skrining fitokimia, ekstrak etanol 96% daun anyang-
anyang secara kualitatif yang dilakukan dengan pereaksi warna, diketahui
memiliki senyawa metabolit sekunder yaitu tannin, saponin, flavonoid, polifenol,
dan triterpenoid.
5.5 Identifikasi Bakteri Pseudomonas aeruginosa
Identifikasi bakteri dilakukan dengan pewarnaan gram dan uji biokimia
yaitu uji katalase, uji TSIA (Triple Sugar Iron agar), dan uji SIM (Sulphide
Indole Motility). Bakteri Pseudomonas aeruginosa merupakan bakteri gram
negatif berbentuk sel batang tunggal dan berantai pendek yang memiliki reaksi
biokimia media pada TSIA menghasilkan lereng merah dan dasar merah.
Berdasarkan hasil dari uji identifikasi bakteri Pseudomonas aeruginosa ATCC
9027 terlihat bahwa identifikasi bakteri dinyatakan positif 100% disajikan pada
Tabel 5.5.
52
Tabel 5.5 Hasil identifikasi bakteri Pseudomonas aeruginosa

Identifikasi bakteri Spesifikasi Hasil
Bentuk sel Batang
Uji pewarnaan gram Warna sel Merah
Susunan sel Bentuk tunggal dan berantai pendek
Sifat gram Negatif
Uji katalase Muncul gelembung
Uji biokimia Uji TSIA Lereng merah, dasar merah
Uji SIM Motilitas positif, Indole negatif
Pada uji SIM bakteri Pseudomonas aeruginosa memiliki motilitas positif,
tidak menghasilkan H2S, serta reaksi indol negatif yang ditandai dengan tidak
terbentuknya cincin merah setelah ditetesi reagen kovacs melalui dinding tabung.
5.6 Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Anyang-Anyang
Uji aktivitas antibakteri pada ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang
(Elaeocarpus grandiflorus Sm.) dilakukan dengan metode difusi cakram yang
bertujuan untuk mengetahui besar daya hambat pada masing-masing konsentrasi
ekstrak terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa. Pada penelitian ini
menggunakan kontrol positif ciprofloxacin menunjukkan daya hambat yang
sangat kuat yaitu sebesar 43,13 ± 0,18 dan kontrol negatif menggunakan DMSO
menunjukkan tidak terdapatnya zona hambat. Hasil uji zona hambat ekstrak etanol
96% daun anyang-anyang terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa disajikan
pada Gambar 5.1.

53
Gambar 5. 1 Hasil uji antibakteri ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang

terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa.
Hasil pengukuran diamteter zona hambat ekstrak etanol daun anyang
anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.) terhadap bakteri Pseudomonas
aeruginosa ATCC 9027 dengan konsentrasi 20%, 40%, 60% dan 80%
menunjukkan terdapat zona hambat yang terbentuk di sekitar cakram disk dengan
kategori kuat yang disajikan pada Tabel 5.6.
Tabel 5.6 Pengukuran Zona Hambat

Perlakuan Zona hambat (mm) Keterangan
Kontrol + 43,13 ± 0,18 Sangat kuat
Kontrol - 0 ± 0,00 Tidak ada
Konsentrasi 20% 11,72 ± 0,57 Kuat
Pada ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang dengan konsentrasi 20%
memiliki aktivitas antibakteri yang kuat dengan zona hambat 11,72 ± 0,57 mm,
pada konsentrasi 40% memiliki aktivitas antibakteri yang kuat dengan zona
hambat 12,50 ± 0,50 mm, konsentrasi 60% memiliki aktivitas antibakteri yang
kuat dengan besar zona hambat 13,99 ± 0,50 mm, dan pada konsentrasi 80%
diketahui memiliki diameter zona hambat paling besar yaitu 16,64 ± 0,35 mm.
54
BAB VI
PEMBAHASAN
6.1 Ekstrak Etanol 96% Daun Anyang-Anyang (Elaeocarpus grandiflorus
Sm.)
Ekstrak kental daun anyang-anyang yang didapatkan dilakukan evaluasi
ekstrak secara organoleptis dan nilai uji kadar air. Hasil evaluasi secara
organoleptis didapatkan warna ekstrak hijau kehitaman, tekstur ekstrak kental,
dengan bau yang khas. Berat ekstrak yang didapatkan 90,25 gram, sehingga
rendemen yang didapatkan sebesar 45,12%. Menurut Departemen Kesehatan
Republik Indonesia tahun 2010, nilai rendemen yang baik adalah tidak kurangdari
12%. Hasil ekstrak yang didapat pada penelitian ini memenuhi syarat standar
karena rendemen yang didapatkan lebih dari 12%.
Evaluasi ekstrak dilakukan dengan tujuan untuk mendapatkan ekstrak
yang aman dan teruji stabilitasnya sehingga sediaan yang dihasilkan merupakan
sediaan yang terjamin mutunya. Semakin lama proses ekstraksi maka semakin
tinggi rendemen yang diperoleh, karena kesempatan untuk bereaksi antara bahan
dengan pelarut semakin lama sehingga proses penetrasi ke dalam sel bahan
semakin baik yang menyebabkan semakin banyak senyawa yang terdifusi keluar
sel (Wijaya et al., 2017).
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Susanti et al. (2020)
menyatakan bahwa hasil maserasi berpengaruh terhadap berat ekstrak kental,
dimana pada penelitiannya hasil ekstrak lengkuas merah yang dimaserasi dengan
55
alkohol 96% memiliki massa ekstrak paling tinggi pada maserasi yang dilakukan
selama 11 hari dan menghasilkan berat ekstrak kental sebesar 9,2033 gram. Hal
ini dikarenakan semakin lama waktu maserasi maka semakin banyak zat-zat yang
diserap. Menurut penelitian Kusumaningtyas et al. (2015) pengaruh waktu
perendaman bahan terhadap perolehan rendemen adalah berbanding lurus, dimana
terjadi peningkatan kadar rendemen seiring lama waktu perendaman. Kondisi
operasi optimum untuk perolehan kadar rendemen terjadi pada waktu perendaman
selama 7 hari dengan kadar rendemen sebesar 36,06 % dengan pH 5,86 dari hasil
ekstrak menggunakan pelarut etanol 70%.
Berdasarkan data hasil uji kadar air didapatkan nilai persentase 4,294 ±
0,226 % dilihat dari hasil uji kadar air ekstrak daun anyang-anyang telah
memenuhi persyaratan standarisasi Farmakope Indonesia nilai kadar air yang
kurang dari 10% (Depkes RI, 2010). Nilai kadar air yang kurang dari 10% dapat
mencegah pertumbuhan kapang dan aktivitas enzim sehingga bahan lebih awet
dan kandungan zat aktifnya tidak berkurang. Apabila ekstrak masih mengandung
kadar air lebih dari 10% maka dapat mengakibatkan ekstrak ditumbuhi jamur,
oleh karena itu diperlukan proses pengeringan kembali sebelum digunakan untuk
uji aktivitas bahan alam atau dibuat dalam bentuk sediaan (Ratnani et al., 2015).
Skrining fitokimia dilakukan untuk mengetahui kandungan metabolit
sekunder yang terkandung dalam ekstrak etanol daun anyang-anyang
(Elaeocarpus grandiflorus Sm.) sehingga dapat diketahui senyawa yang

56
berpotensi sebagai antibakteri. Pada penelitian ini dilakukan uji skrining fitokimia
dengan metode reaksi warna dengan menguji senyawa golongan alkaloid,
polifenol, tannin, saponin, flavonoid dan triterpedoid. Penelitian yang dilakukan
oleh Savitri (2019), menyatakan bahwa ekstrak metanol daun anyang-anyang
memiliki senyawa golongan flavonoid, polifenol, triterpedoid, dan alkaloid.
Berdasarkan hasil uji skrining fitokimia pada penelitian ini, ekstrak daun anyang-
anyang menunjukkan hasil positif mengandung saponin, polifenol, tannin,
flavonoid, triterpenoid dan hasil negatif terhadap alkaloid.
Berdasarkan uji alkaloid pada ekstrak daun anyang-anyang pada penelitian
ini menunjukkan hasil negatif hal ini dikarenakan sifat dari senyawa alkaloid
tidak dapat terekstrak dalam pelarut etanol 96%. Pengujian dengan
menggunakan reagen Meyer menunjukkan hasil negatif yang ditandai dengan
tidak terbentuknya endapan berwarna putih. Hasil negatif pada uji alkaloid
dikarenakan sifat dari senyawa alkaloid adalah non polar sedangkan etanol
bersifat polar sehingga senyawa alkaloid tidak dapat terekstrak dalam pelarut
etanol (Sari, 2019).
Menurut penelitian Tjandar et al. (2020), ekstrak buah sirih yang memiliki
kandungan metabolit sekunder jenis alkaloid menunjukkan hasil uji aktivitas
antibakteri ekstrak buah sirih terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis
dengan aktivitas antibakteri kuat yaitu konsentrasi 10% dengan rata-rata sebesar
12,8±1,40 mm yang berarti memiliki aktivitas antibakteri kuat, 20% sebesar
15,03±0,723 mm yang berarti memiliki aktivitas antibakteri kuat, 40% sebesar
21,53±1,530 mm yang berarti memiliki aktivitas antibakteri sangat kuat.

57
Alkaloid memiliki kemampuan sebagai antibakteri dengan mekanisme
mengganggu komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri, sehingga
lapisan dinding sel tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel
tersebut.
Berdasarkan hasil uji polifenol dengan pereaksi FeCl3 1 %, menunjukkan
terjadinya perubahan warna menjadi hitam. Menurut penelitian Puspitasari et al.
(2015), reaksi positif pada pengujian fenol ditunjukan dengan terbentuknya warna
biru tua atau hitam kehijauan. Pada daun anyang-anyang senyawa fenol ini
memiliki efek antibakteri dengan kerja merusak membran mikroba serta
mengganggu ion-ion dalam kalium sel yang dapat merusak membran sitoplasma
(Sari, 2019).
Hasil uji flavonoid dengan pereaksi magnesium dan HCl pekat,
menunjukkan terjadinya perubahan warna ekstrak daun anyang-anyang menjadi
warna merah kecoklatan hal ini terjadi karena reduksi dengan magnesium dan
asam klorida pekat menghasilkan warna merah, kuning atau jingga pada
flavonoid. Menurut penelitian Nugraha et al. (2019), hasil uji antibakteri
menunjukkan bahwa isolat flavonoid daun mangga menghasilkan diameter zona
hambat kategori kuat dengan besar zona hambat 13,7 mm terhadap bakteri
Eschericia coli dan 12,8 mm terhadap Staphylococcus aureus. Hal ini
menunjukkan bahwa flavonoid berperan aktif dalam menghambat pertumbuhan
bakteri. Mekanisme kerja senyawa flavonoid sebagai antibakteri bekerja dengan
cara mendenaturasi protein sel dan mengerutkan protein sel sehingga dapat
melisiskan dinding sel bakteri (Ergina et al, 2014).

58
Hasil uji tannin dengan pereaksi FeCl 3 menunjukkan terjadinya perubahan
warna ekstrak daun anyang-anyang menjadi warna hijau kehitaman. Reaksi positif
pada pengujian tannin ditunjukan dengan terbentuknya warna biru tua, atau hijau
kehitaman. Perubahan warna yang terjadi pada ekstrak karena penambahan FeCl 3
yang bereaksi dengan salah satu gugus hidroksil yang ada pada senyawa tannin
(Sari, 2019). Mekanisme kerja tannin sebagai antibakteri adalah menghambat
enzim reverse transkriptase dan DNA topoisomerase sehingga sel bakteri tidak
dapat terbentuk. Tannin memiliki aktivitas antibakteri yang berhubungan dengan
kemampuannya untuk menginaktifkan adhesin sel mikroba, menginaktifkan
enzim, dan menggangu transport protein pada lapisan dalam sel.
Tannin juga mempunyai target pada polipeptida dinding sel sehingga
pembentukan dinding sel menjadi kurang sempurna. Hal ini menyebabkan sel
bakteri menjadi lisis karena tekanan osmotik maupun fisik sehingga sel bakteri
akan mati. Kompleksasi dari ion besi dengan tannin dapat menjelaskan toksisitas
tannin. Mikroorganisme yang tumbuh di bawah kondisi aerob membutuhkan zat
besi untuk berbagai fungsi, termasuk reduksi dari prekursor ribonukleotida DNA.
Enzim reverse transkriptase dan DNA topoisomerase sel bakteri tidak dapat
terbentuk oleh kapasitas pengikat besi yang kuat oleh tannin (Ergina et al., 2014).
Berdasarkan hasil uji saponin dengan penambahan HCl 1 N menunjukkan
terbentuknya busa yang stabil terlihat selama lima menit dan tidak hilang dengan
penambahan 1 tetes HCl. Timbulnya busa terjadi karena saponin merupakan
senyawa aktif permukaan kuat yang menimbulkan busa jika dikocok dengan air.
Senyawa saponin bekerja dengan struktur detergen yang dapat berikatan dengan
59
molekul hidrofilik dan non polar lipofilik sehingga mampu merusak membran
sitoplasma dan membunuh sel bakteri.
Berdasarkan hasil uji triterpenoid dengan pereaksi reagen Liebermann-
Burchad, hasil positif ditunjukan dengan terbentuknya warna coklat. Hasil yang
didapatkan dalam pemeriksaan senyawa triterpenoid adalah positif mengandung
senyawa triterpenoid yang ditandai dengan adanya perubahan warna menjadi
coklat. Proses terbentuknya warna pada pengujian Liebermann-Burchard yaitu
setelah air terserap oleh anhidrida asetat terjadi pengoksidasian asam oleh asam
sulfat, kemudian gugus hidrogen beserta elektronnya dilepas, akibatnya senyawa
mengalami perpanjangan konjugasi yang memperlihatkan munculnya warna
kecoklatan (Siadi, 2012). Mekanisme triterpenoid sebagai antibakteri adalah
bereaksi dengan porin (protein trans membran) pada membran luar dinding sel
bakteri, membentuk ikatan polimer yang kuat sehingga mengakibatkan rusaknya
porin (Supriatno, 2018).
Hasil uji steroid dengan pereaksi reagen Liebermann-Burchad hasil dari
pengujian senyawa steroid pada masing-masing ekstrak yaitu tidak terdapat
senyawa steroid yang ditandai dengan tidak terbentuknya perubahan warna
menjadi hijau kebiruan. Hasil yang diperoleh disebabkan karena penggunaan
pelarut yang digunakan dalam proses ekstraksi merupakan pelarut yang bersifat
polar. Karena senyawa steroid merupakan senyawa yang bersifat non polar
sehingga senyawa ini tidak dapat terekstrak dengan sempurna pada pelarut
tersebut. Selain itu, pereaksi-pereaksi spesifik yang digunakan kebanyakan
bersifat polar sehingga bisa berinteraksi dengan sampel berdasarkan prinsip like
60
dissolve like, sehingga hanya senyawa-senyawa yang bersifat polar yang dapat
terikat dalam pelarut seperti alkaloid, flavonoid dan tannin. Senyawa steroid
cenderung bersifat nonpolar sehingga hanya dapat terekstrak oleh pelarut nonpolar
(Rachmawati, 2011).
Berdasarkan penelitian Hidayah (2016), isolat steroid telah diisolasi dari
daun getih-getihan berbentuk kristal kecil-kecil berwarna putih. Ekstrak n-heksana
daun getih-getihan dapat menghambat pertumbuhan bakteri pada konsentrasi 1000
ppm dengan zona hambat pada Escherichia coli sebesar 9,85 mm dan
Staphylococcus aureus sebesar 6,50 mm. Mekanisme steroid sebagai antibakteri
berhubungan dengan membran lipid dan sensitivitas terhadap komponen steroid
yang menyebabkan kebocoran pada liposom. Steroid dapat berinteraksi dengan
membran fosfolipid sel yang bersifat permeabel terhadap senyawa-senyawa
lipofilik sehingga menyebabkan integritas membran menurun serta morfologi
membran sel berubah yang menyebabkan sel rapuh dan lisis.
6.3 Identifikasi Bakteri Pseudomonas aeruginosa
Identifikasi bakteri Pseudomonas aeruginosa dapat dilakukan dengan
metode pewarnaan gram dan uji biokimia. Tahapan uji biokimia dibagi menjadi 3
yaitu uji katalase, uji SIM (Sulfide Indole Motility), dan uji TSIA (Triple Sugar
Iron Agar). Pewarnaan Gram bertujuan untuk mengamati morfologi sel
Pseudomonas aeruginosa dan mengetahui kemurnian sel bakteri. Pewarnaan
Gram merupakan salah satu pewarnaan yang paling sering digunakan, yang
dikembangkan oleh Christan Gram dengan NaCl 0,95% yang telah diteteskan
61
pada objek glass, kemudian dibuat preparat apus setipis mungkin, dikeringkan,
dan difiksasi di atas lampu spritus.
Preparat apus ditetesi dengan crystal violet selama 2 menit, lalu dicuci
dengan air, ditetesi lugol selama 1 menit, kemudian dilunturkan dengan alkohol
95% selama 10 detik, selanjutnya alkohol dicuci dengan aquades dan diberi
pewarna kedua dengan larutan safranin selama 30 detik, lalu dicuci dengan air
kemudian preparat dikeringkan dan diamati morfologi sel serta warnanya dibawah
mikroskop (Rahmadian et al., 2018). Hasil pewarnaan gram dari koloni bakteri
memperlihatkan warna merah dengan morfologi berbentuk batang. Hal ini sesuai
dengan ciri-ciri Pseudomonas aeruginosa yang merupakan bakteri gram negatif
berbentuk batang.
Setelah dilakukan pewarnaan gram, kemudian dilanjutkan dengan uji
katalase, uji SIM, dan uji TSIA. Pada uji katalase koloni bakteri yang di uji
menunjukkan hasil positif yaitu dengan munculnya gelembung saat ose diletakkan
pada objek glas yang sudah ditetesi hydrogen peroksida 3%. Terdapatnya
gelembung dikarenakan bakteri memiliki enzim katalase yang dapat memecah
H2O2 menjadi 2 H2O dan O2. Djide dan Sartini (2006), mengatakan uji katalase
merupakan uji untuk mengidentifikasi mikroba yang mampu menghasilkan enzim
katalase, digunakan untuk memecah hidrogen peroksida yang terbentuk dari
proses respirasi aerob dan bersifat toksik terhadap bakteri, menjadi dihidrogen
oksida (H2O) dan oksigen (O2).
Pada penelitian ini uji SIM bakteri Pseudomonas aeruginosa menunjukkan
motilitas positif, serta reaksi indol negatif yang ditandai dengan tidak terjadinya
62
cincin merah setelah ditetesi reagen kovacs melalui dinding tabung. Uji SIM
berfungsi untuk mengetahui gerak (motilitas) dari bakteri uji. Hasil uji motilitas
dapat diketahui negatif (-) ditandai dengan pada bekas tusukan inokulasi saja
terdapat bentukan warna putih sepeti akar yang menyebar. Apabila positif (+)
ditandai dengan di sekitar inokulasi terdapat bentukan warna putih seperti akar
yang menyebar, dapat diartikan bahwa bakteri yang diinokulasi memiliki flagel
sehingga dapat melakukan pergerakan (Handayani et al., 2016).
Uji TSIA berfungsi untuk mengetahui kemampuan bakteri dalam
fermentasi karbohidrat (glukosa, laktosa, dan sukrosa). Hasil uji TSIA terhadap
bakteri Pseudomonas aeruginosa pada penelitian ini menghasilkan warna merah
pada dasar media dan berwarna merah juga pada lereng media. Hal ini terjadi
karena karakteristik bakteri Pseudomonas aeruginosa yang tidak memfermentasi
karbohidrat.
Pada uji TSIA dapat diketahui jika bakteri memfermentasi glukosa
ditandai dengan warna kuning (asam) pada dasar media dan berwarna merah pada
lereng (basa). Apabila bakteri dpaat memfermentasi semua karbohidrat ditandai
dengan warna kuning pada dasar media (asam) dan berwarna kuning juga pada
lereng media (asam). Apabila bakteri tidak dapat memfermentasi semua
karbohidrat ditandai dengan warna merah pada dasar media (basa) dan berwarna
merah juga pada lereng media (basa) (Anggraini et al., 2016).
6.4 Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol 96% Daun Tumbuhan
Anyang-Anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)

63
Uji aktivitas antibakteri pada ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang
(Elaeocarpus grandiflorus Sm.) dilakukan dengan metode difusi cakram yang
bertujuan untuk mengetahui daya hambat masing-masing konsentrasi ekstrak yang
memiliki aktivitas antibakteri terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027.
Berdasarkan uji ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang jika dikaitkan
dengan ketentuan daya hambat yang dinyatakan pada penelitian Wulandari
(2014), zona hambat yang terbentuk ≥ 20 mm dianggap memiliki aktivitas daya
hambat yang sangat kuat, 10-20 mm dinyatakan memiliki daya hambat kuat, 5-10
mm dinyatakan memiliki daya hambat sedang dan ≤ 5 mm dinyatakan memiliki
daya hambat yang lemah. Kontrol positif berfungsi sebagai kontrol dari sampel
ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang dengan membandingkan diameter zona
hambat yang terbentuk, kontrol positif yang digunakan dalam penelitian ini adalah
Ciprofloxacin 500mg. Ciprofloxacin adalah antibakteri golongan fluorokuinolon
dengan spectrum luas. Antibiotik golongan fluorokuinolon memiliki peran dalam
menghambat kerja enzim DNA girase pada bakteri, dan bersifat bakterisidal,
sehingga menyebabkan kematian pada bakteri (Endriani et al., 2007). Kontrol
positif yang digunakan pada penelitian ini memiliki aktivitas antibakteri yang
sangat kuat karena zona hambat yang dihasilkan adalah rentang ≥ 20 mm yaitu
43,13 ± 0,18 mm.
Kontrol negatif yang digunakan dalam penelitian ini adalah DMSO.
Natheer et al. (2015), menyebutkan bahwa zat yang digunakan sebagai kontrol
negatif adalah pelarut yang digunakan sebagai pengencer dari senyawa yang diuji.
Dalam penelitian ini pelarut yang digunakan untuk melarutkan ekstrak adalah
64
DMSO, sehingga kontrol negatif yang digunakan adalah DMSO. Tujuannya
adalah sebagai pembanding bahwa pelarut yang digunakan sebagai pengencer
tidak mempengaruhi hasil uji antibakteri dari senyawa yang diuji. Hasil zona
hambat kontrol negatif terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa adalah 0 mm.
hal ini menunjukkan bahwa penggunaan pelarut DMSO tidak mempengaruhi hasil
uji antibakteri dari ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang terhadap bakteri
Pseudomonas aeruginosa
Uji daya hambat ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang terhadap bakteri
Pseudomonas aeruginosa secara in vitro dilakukan dengan menggunakan metode
difusi Kirby Bauer dengan pengulangan sebanyak 4 kali. Hasil yang didapatkan
pada penelitian ini yaitu ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang terbukti
memiliki aktivitas dalam menghambat pertumbuhan bakteri Pseudomonas
aeruginosa secara in vitro pada masing-masing konsentrasi ekstrak etanol 96%
daun anyang-anyang (20%, 40%, 60%, 80%). Hal ini ditandai dengan adanya
zona jernih pada media MHA yang diukur sebagai diameter zona hambat bakteri.
Terbentuknya zona hambat ini terjadi karena adanya kandungan antibakteri yang
terdapat pada daun anyang-anyang.
Pada ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang dengan konsentrasi 20%
memiliki aktivitas antibakteri yang kuat dengan zona hambat 11,72 ± 0,57 mm,
pada konsentrasi 40% memiliki aktivitas antibakteri yang kuat dengan zona
hambat 12,50 ± 0,50 mm, konsentrasi 60% memiliki aktivitas antibakteri yang
kuat dengan besar zona hambat 13,99 ± 0,50 mm, dan pada konsentrasi 80%
diketahui memiliki diameter zona hambat paling besar yaitu 16,64 ± 0,35 mm.
65
Hasil ini didukung oleh penelitian Ningtyas (2010) yang menyatakan bahwa
semakin tinggi konsentrasi ekstrak maka semakin banyak senyawa antibakteri.
Dengan penambahan konsentrasi dapat meningkatkan penetrasi senyawa
antibakteri ke bagian sel bakteri yang akan masuk merusak sistem metabolisme
sel dan dapat mengakibatkan kematian sel bakteri. Pertumbuhan bakteri sebagian
besar akan menurun seiring dengan meningkatnya konsentrasi antibakteri yang
ditambahkan. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian yang menunjukkan perbedaan
besar zona hambat yang terbentuk dari masing-masing konsentrasi karena adanya
perbedaan besar konsentrasi zat aktif antibakteri yang digunakan.
Ada beberapa faktor yang mempengaruhi diameter zona hambat
pertumbuhan bakteri menurut Soemarno (2000), yaitu kekeruhan suspensi bakteri.
Jika suspensi kurang keruh maka diameter zona hambat akan lebih besar, dan
sebaliknya jika suspensi lebih keruh diameter zona hambat akan semakin kecil.
Dalam mengukur kekeruhan suspensi sebaiknya digunakan suatu alat yaitu
nephelometer agar kekeruhan suspensi bakteri lebih akurat saat dibandingkan
dengan kekeruhan Mc Farland 0,5. Namun, pada penelitian ini pengukuran
makroskopis kekeruhan dilakukan hanya secara visual karena keterbatasan alat.
Temperatur inkubasi juga dapat menjadi faktor yang mempengaruhi
diameter zona hambat pertumbuhan bakteri. Untuk memperoleh pertumbuhan
yang optimal, inkubasi dilakukan pada suhu 350C. Suhu yang kurang dari 350 C
dapat menyebabkan diameter zona hambat lebih besar. Hal ini bisa terjadi pada
plate yang ditumpuk-tumpuk lebih dari 2 plate pada saat inkubasinya. Plate yang
ditengah suhunya kurang dari 350C. Inkubasi pada suhu lebih dari 350 C, dapat
66
menyebabkan difusi ekstrak yang kurang baik. Pada penelitian ini suhu yang
digunakan selama inkubasi adalah 370C (Soemarno, 2000).
Selain itu, tebalnya media agar juga dapat menjadi salah satu faktor yang
mempengaruhi diameter zona hambat pertumbuhan bakteri. Ketebalan media agar
yang efektif yaitu sekitar 4 mm. Jika kurang dari 4 mm difusi esktrak akan
menjadi lebih cepat, sedangkan jika lebih dari 4 mm difusi ekstrak akan menjadi
lambat. Pada penelitian ini, tidak dilakukan pengukuran pada media agar-agar
sehingga tidak dapat diketahui secara pasti ketebalan media Muller Hinton Agar
(MHA) yang digunakan (Soemarno, 2000). Adapun dari keempat konsentrasi
ekstrak etanol 96% daun anyang-anyang, yang menghasilkan zona hambat paling
besar adalah konsentrasi 80% dan zona hambat paling kecil adalah konsentrasi
20%.
6.5 Keterbatasan Penelitian
Pada penelitian ini memiliki keterbatasan dalam pelaksanaanya yaitu tidak
adanya uji kuantitatif terhadap skrining fitokimia pada ekstrak etanol 96% daun
anyang-anyang dan hanya menggunakan rata-rata (mean) dari jumlah pengukuran
masing-masing konsentrasi dan diolah dengan standar deviasi untuk melihat
validitas hasil pengujian ekstrak daun anyang-anyang terhadap bakteri
Dalam mengukur kekeruhan suspensi sebaiknya digunakan suatu alat yaitu
nephelometer agar kekeruhan suspensi bakteri lebih akurat saat dibandingkan
dengan kekeruhan Mc Farland 0,5. Namun, pada penelitian ini pengukuran
makroskopis kekeruhan dilakukan hanya secara visual karena keterbatasan alat.

BAB VII
SIMPULAN DAN SARAN
7.1 Simpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan
sebagai berikut:
1. Ekstrak etanol 96% daun tumbuhan anyang-anyang mengandung
senyawa metabolit sekunder jenis tannin, saponin, flavonoid, polifenol,
dan triterpenoid.
2. Ekstrak etanol 96% daun tumbuhan anyang-anyang (Elaeocarpus
grandiflorus Sm.) dengan konsentrasi 20%, 40%, 60%, dan 80%
menunjukkan aktivitas antibakteri kategori kuat dengan diameter zona
hambat terbesar adalah pada konsentrasi 80% sebesar 16,64 ± 0,35 mm
terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa.
7.2 Saran
Adapun saran yang dapat disampaikan adalah sebagai berikut:
1. Perlu dilakukan pengujian kuantitatif skrining fitokimia menggunakan
KLT.
2. Perlu dilakukan analisis data dengan uji statistik untuk melihat
validitas hasil pengujian ekstrak daun anyang-anyang terhadap bakteri
67
68
3. Perlu dilakukan pengukuran kekeruhan suspensi menggunakan alat
nephelometer agar kekeruhan suspensi bakteri lebih akurat saat
dibandingkan dengan kekeruhan Mc Farland 0,5.

DAFTAR RUJUKAN
Ardani, M., Pratiwi, S.U.T., Hertiani T. 2010. Efek campuran minyak atsiri daun
cengkeh dan kulit batang kayu manis sebagai antiplak gigi. Jurnal
Farmasi Indonesia, 3(21): 194.
Astari, E. Y. 2008. Pengaruh Pemberian Decocta Daun Dewa Terhadap

Penurunan Kadar Asam Urat Serum Pada Mencit Putih Jantan Galur Balb-
C Hiperurisemia. (Skripsi). Surakarta: Fakultas Farmasi Universitas
Muhammadiyah Surakarta.
Anggraini, R., Aliza, D., & Mellisa, S. 2016. Identifikasi bakteri Aeromonas
hydrophila dengan uji mikrobiologi pada ikan lele dumbo (Clarias
gariepinus) yang dibudidayakan di Kecamatan Baitussalam Kabupaten
Aceh Besar (Doctoral dissertation) Syiah Kuala University, 3(1): 130-145.
Berdy, J. 2005. Bioactive microbial metabolites. The Journal of Antibiotics,

58(1):1–26.
Bisht R., Katiyar A., Singh R. and Mittal P. 2009. Antibiotic resistance - A global
issue of concern, Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research,
2(2): 34–39.
Brooks, G.F., Carroll K.C, Butel J.S, Morse. 2013. Mikrobiologi Kedokteran Ed.
25. Jakarta: EGC.
CLSI. 2012. M02A11 Performance Standards For Antimicrobial Disk

Susceptibility Tests; Approved Standart-Elevent Edition.Clinical and
Laboratory Standars Institute-NCCLS, 32(1): 11–36.
Cushnie, T. P. T. dan Lamb, A. J. 2005. Antimicrobial activity of flavonoids.

International Journal of Antimicrobial Agents, 26(5):343–356.
Crozier, A., M.N. Clifford, H., Ashihara. 2006. Plant Secondary Metabolites:
Occurrence, Structure and Role in the Human Diet. Blackwell Publishing.
Dadhich, A., Rishi. A., Sharma, G. 2013. Phytochemicals of Elaeocarpus With

Their Therapeutic Value: A Review. Int j pharm bio sci, 4(3): 591 – 598.
Departemen Kesehatan RI, 2010, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan

Obat, Cetakan Pertama., Direktorat Pengawasan Obat Tradisional, 3(11):
17-19.
Departemen kesehatan RI. 2008. Jakarta: Jurnal Farmakope Herbal Indonesia,

4(1): 8-12.
69
70
Djide, M. Natsir dan Sartini. 2008. Analisis Mikrobiologi Farmasi. Universitas

Islam Negeri Alauddin Makasar: Makassar. Jurnal Farmasi Fakultas Ilmu
kedokteran, 3(4): 193-199.
Endriani, R., I. Supardi, and S. Sudigdoadi. 2007. Penentuan Konsentrasi Hambat

Minimal (KHM), Konsentrasi Bunuh Minimal (KBM) Dan Waktu Kontak
Ekstrak Bawang Putih (A. Sativum) Dibandingkan Dengan Eugenol
Terhadap S. Mutans Secara In Vitro. Jurnal Ilmu Kesehatan, 3(2): 133-
138.
Ergina, E., Nuryanti, S., & Pursitasari, I. D. 2014. Uji kualitatif senyawa metabolit
sekunder pada daun palado (Agave angustifolia) yang diekstraksi dengan
pelarut air dan etanol. Jurnal Akademika Kimia, 3(3):165-172.
Gul, R. Hussain, Ali W,et al,. 2017. Polymer-Based Drug Delivery: The Quest
For Local Targeting Of Inflamed Intestinal Mucosa. Journal of Drug
Targeting, ISSN: 1061-186X. Journal homepage:
http://www.tandfonline.com/loi/idrt20.
Handa, Swami, S., Khanuja, S. P. S., Longo, G., Rakesh, D. D. 2008. Extraction
Technologies for Medicinal and Aromatic Plants. Trieste :
International Centre for Science and High Technology, 2(1): 20.
Handayani, R. 2016.Uji Daya Hambat Ekstrak Metanol dan Fraksi Rimpang

Lengkuas Merah (Alipinia purpuruta K Schoum) terhadap Bakteri
Escherichia Coli. Jurnal Surya Medika, 1(2):1-9.
Hidayah, W. W., Kusrini, D., & Fachriyah, E. (2016). Isolasi, identifikasi

senyawa steroid dari daun getih-getihan (Rivina humilis L.) dan uji
aktivitas sebagai antibakteri. Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi, 19(1): 32-
37.
Istiqomah. 2013. Perbandingan Metode Ekstraksi Maserasi Dan Sokletasi
Terhadap Kadar Piperin Buah Cabe Jawa (Piperis retrofracti fructus).
(Skripsi). Jakarta: Jurusan Farmasi UIN Syarif Hidayatullah.
Kasper, S., Van. D. M., Castañeda I.S., Tjallingii. R., Brummer. G.J., Sinninghe
J.S., Schouten, S. 2015. Testing Thealkenone D/H Ratio As A Paleo
Indicator Of Sea Surface Salinity In A Coastal Ocean Margin
(Mozambique Channel),Org. Geochem., 4(78): 62–68.
Kementerian Kesehatan. 2011. Pedoman Umum Penggunaan Antibiotik,

Kementrian Kesehatan RI: Jakarta, 1(1):124-138.
Khopkar. 2003. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta: Universitas Indonesia

Press.
71
Koster, R. D., & Suarez, M. J. 2001. Soil Moisture Memory In Climate Models.
Journal Of Hydrometeorology, 2(6): 558-570.
Kurnia. 2011. Faktor-Faktor Yang Berhubungan Dengan Kejadian Gastritis Pada

Pasien Yang Berobat Jalan Di Puskesmas Gulai Bancah Kota Bukit
Tinggi. (Skripsi). Padang: Fakultas Kedokteran Universitas Andalas.
Kusumaningtyas, E., Widiastuti, R., Kusumaningrum, H. D., & Suhartono, M. T.

2015.Aktivitas antibakteri dan antioksidan hidrolisat hasil hidrolisis
protein susu kambing dengan ekstrak kasar bromelin. Jurnal Teknologi
dan Industri Pangan, 26(2): 179-188.
Kristianti, A.N., Aminah,N.S., Tanjung, M. dan Kurniadi, B., 2008. Buku ajar
fitokimia. Surabaya: Jurusan Kimia FMIPA Universitas Airlangga.
Kristanti, A. N. 2019. Fitokimia. Surabaya: Airlangga University Press.
Mandal, S., Van Treuren, W., White, R. A., Eggesbø, M., Knight, R., & Peddada,
S. D. 2015. Analysis Of Composition Of Microbiomes: A Novel Method
For Studying Microbial Composition. Journal Microbial Ecology In
Health And Disease, 26(1): 27-63.
Milanda T, Lisa K. Dewi, Sri A. F. Kusuma. 2014. Deteksi Gen Resistensi

Kloramfenikol (cat) pada Pseudomonas aeruginosa Isolat Klinik dengan
Metode Polymerase Chain Reaction. Sumedang. Jurnal Farmasi Klinik
Indonesia, 3(4): 141–150.
Ningtyas, R. (2010). Uji antioksidan dan antibakteri ekstrak air daun kecombrang
(Etlingera elatior)(Jack) RM Smith) sebagai pengawet alami terhadap
Escherichia coli dan Staphylococus aureus. (Skripsi). Universitas Islam
Negeri Syarif Hidayatulah.
Nohong. 2009. Skrining Fitokimia Tumbuhan Ophiopogon jaburan Lodd

dari Kabupaten Kolaka Provinsi Sulawesi Tenggara. Jurnal
Pembelajaran Sains, 5(2): 172-178.
Nugraha, A. S. and Keller, P. A. 2011. Revealing Indigenous Indonesian

Traditional Medicine: Anti-Infective Agents. Natural Product
Communications, 6(12): 1953-1966.
Nugroho, T. 2010. Buku Ajar Obstetri. Yogyakarta : Nuha Medika.
Nurviana, V. 2016. Profil Farmakognosi dan Skrining Fitokimia dari Kulit,

Daging, dan Biji Buah Limus (Mangifera Foetida Lour). Jurnal
Kesehatan Bakti Tunas Husada, 16(1): 136-142.
72
Poerwono, M.S. dan R. Hartono. 2012. Kacang Hijau. Jakarta: Penebar Swadaya.
Putri, A. A., R., Rasyid dan Rahmatini. 2014. Perbedaan Sensitivitas Kuman
Pseudomonas Aeruginosa Penyebab Infeksi Nosokomial Terhadap
Beberapa Antibiotika, Jurnal Kesehatan Andalas, 5(3): 327–331.
Puspitasari, M. L., Wulansari, T. V., Widyaningsih, T. D., Maligan, J. M.,

Nugrahini, N. I. P. 2015. Aktivitas Antioksidan Suplemen Herbal Daun
Sirsak (Annona Muricata L.) Dan Kulit Manggis (Garcinia mangostana
L.). Jurnal Pangan dan Agroindustri, 4(1).
Prayoga, E. 2013. Perbandingan Efek Ekstrak Daun Sirih Hijau (Piper betle L.)
Dengan Metode Difusi Disk Dan Sumuran Terhadap Pertumbuhan Bakteri
Staphylococcus aureus (Skripsi). Jakarta: Fakultas Kedokteran Dan Ilmu
Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah.
Pratiwi, Sylvia, T. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta: Penerbit Erlangga.
Rafi, M. 2003. Identifikasi Fisik Dan Senyawa Kimia Pada Tumbuhan Obat
Untuk Diabetes Mellitus. Bogor: Pusat Studi Biofarmaka Lembaga
Penelitian IPR, 3(2): 3-4.
Rahayu, E., Dewi, N., dan Bodijantoro, F. 2017. Profile Of Elaeocarpus

grandiflorus And Ziziphus Mauritiana As Identity Plants Of Salatiga And
Tegal Towns, Central Java Province, Indonesia. Journal of Physics:
Conference Series, 983(1): 121-195.
Rahmadian, C. A., Ismail, I., Abrar, M., Erina, E., Rastina, R., & Fahrimal, Y.
2018. Isolasi Dan Identifikasi Bakteri Pseudomonas Sp Pada Ikan Asin Di
Tempat Pelelangan Ikan Labuhanhaji Aceh Selatan. Jurnal Ilmiah
Mahasiswa Veteriner, 2(4): 493-502.
Rachmawati, S. I., & Ciptati. 2011. Isolasi senyawa antioksidan dari daun sirih
merah (Piper crocatum), 327-333.
Sagala, D. 2018. Deskripsi, Metabolit Sekunder Dan Kegunaan Anyang-anyang

(Elaeocarpus grandiflorus J.E.Smith). INA-
Rxiv.osf.io/preprints/inarxiv/3unv8.
Sani, R.B., Nisa, F.C., Andriani, R.C., Maligan, J.M. 2014. Analisis
Rendemendan Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol
Mikroalgalauttetraselmis Chuii. Malang: Jurnal Pangan dan Agroindustri,
2(2): 121.
73
Sari, R., Muhani, M., & Fajriaty, I. 2017. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol
Daun Gaharu (Aquilaria microcarpa Baill.) Terhadap Bakteri
Staphylococcus aureus dan Proteus mirabilis. Pharmaceutical Sciences &
Research, 4(3):143-154.
Sari, R. P., Nazrun, N., Surtina, S., & Mahardika, R. G. 2019, September. Uji
Fitokimia Dan Aktivitas Antibakteri Pada Air Kelubi (Eleiodoxa conferta)
Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus. In Proceedings Of National
Colloquium Research And Community Service (3):61-63
Savitri, G. 2019. Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak dan
Fraksi Tumbuhan Anyang-Anyang (Elaeocarpus grandiflorus J. E. Smith.)
terhadap Escherichia coli. Journal of Pharmaceutical Science and Clinical
Research, 5(1):22-32
Senja, R. Y., Issusilaningtyas, E., Nugroho, A. K., & Setyowati, E. P. 2014. The
Comparison Of Extraction Method And Solvent Variation On Yield And
Antioxidant Activity Of Brassica Oleracea L. Var. Capitata F. Rubra
Extract. Traditional Medicine Journal, 19(1): 43-48.
Shah, G., P.S. Singh, A.S.Mann, R.Shri. 2011. Scientific Basis for The Chemical
Constituent And Therapeuticuse Of Elaeocarpus Species: A Review.
International Journal of Institutional Pharmacy and Life Sciences, (1): 1.
Siadi, K. 2012. Ekstrak bungkil biji jarak pagar (Jatropha curcas) sebagai
biopestisida yang efektif dengan penambahan larutan NaCl. Indonesian
Journal of Mathematics and Natural Sciences, 35(1).
Singh, R.K., Acharya, S.B., Bhattacharya, S.K. 2000. Pharmacological activity of

Elaeocarpus sphaericus. Journal Phytotherapy Research, 14(1):36-39.
Singh, S., Agarwal, R. K., Tiwari, S. C.,Singh, H. 2012. Antibiotic Resistance

Pattern Among The Salmonella Isolated From Human, Animal And Meat
In India. Trop Anim Health Prod., (44): 665–674.
Sinulingga, Sukaria. 2015. Metodologi Penelitian. Medan. Edisi Ketiga. USU

press.
Simanjuntak, M.R., 2008. Ekstraksi dan Fraksinasi Komponen Ekstrak Daun

Tumbuhan Senduduk (Melastoma malabathricum L.) serta Pengujian Efek
Sediaan Krim Terhadap Penyembuhan Luka Bakar. (Skripsi). Medan:
Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
Siegrist, J., 2010 . Pseudomonas a Communicative Bacteria. Mircrobiology

Focus, 139(1):01,20,42.
74
Soekiman, S. 2016. Infeksi Nosokomial Di Rumah Sakit-Hospital Nososcomial

Infections. Ed: Pertama. Edited by Mariyam. Surabaya: CV.Sagung Seto.
Soemarno. 2000. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Klinik. Edisi Ketiga Akademi.
Analis Kesehatan Yogyakarta. Yogyakarta: Departemen Kesehatan.
Suryaku, N. I. 2017. Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi N-Heksan, Etil Asetat Dan
Air Dari Ekstrak Etanolik Daun Ungu (Graptophyllum Pictum (L.) Griff)
Terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 (Doctoral dissertation),
Surakarta: Universitas Setia Budi.
Supriatno, S., Rini, A. A. 2018. Uji fitokimia dan antibakteri ekstrak etanol buah
kawista (Limonia acidissima L.) pada bakteri Escherichia coli. In
Prosiding Seminar Nasional Pendidikan Biologi 1(1):236-241.
Susanti, L., Wahidah, L. K., & Viogenta, P. 2020. Formulasi Salep Ekstrak Buah
Mengkudu (Morinda citrifolia L.) Kombinasi Zeolit Alam Lampung (Zal)
Sebagai Penstabil Sediaan Antibakteri Staphylococcus aureus. Jurnal
Pharmascience, 7(1): 9-17.
Susanto, D.,Sudrajat., Ruga, R. 2012. Studi Kandungan Bahan Aktif Tumbuhan

Meranti Merah (Shorea leprosula Miq) Sebagai Sumber Senyawa
Antibakteri, 11(2):1-5.
Swari E. 2015. Simplisia Nabati Dan Produk Obat Tradisional Yang

Diperdagangkan Di Kota Magelang, Jawa Tengah (skripsi). Bogor: Institut
Petanian Bogor.
Taiz, L. dan E. Zeiger. 2002. Plant Physiology. Sinauer Associates.
Threenesia, A. 2017. Perbandingan Efek Pemberian Ekstrak Etanol Daun

Kemangi (Ocimum santum L.) Terhadap Daya Hambat Pertumbuhan
Staphylococcus aureus dan Salmonella typhi Secara In Vitro.
Tjandra, R. F., & Datu, O. S. (2020). Analisis Senyawa Alkaloid dan Uji Daya
Hambat Ekstrak Buah Sirih (Piper betle L) terhadap Bakteri
Staphylococcus epidermidis. eBiomedik, 8(2).
Todar, K. 2009. Pseudomonas aeruginosa. University of Wisconsin: Madison

Departemen of Biologi.
Utami, M., Widiawati, Y., Hidayah, H. A. 2013. Keragaman dan pemanfaatan

simplisia nabati yang diperdagangkan di Purwokerto. A Scientific Journal,
30(1): 15-24.
Vincken, J. P., Heng, L., De, G. A., Gruppen, H. 2007. Saponins,
75
classification and occurrence in the plant kingdom. Journal

Phytochemistry, 68(3): 275-297.
Waluyo, L. 2004. Mikrobiologi Umum. Malang: UMM press.
Walsh, C. T. 2002. Magic bullets, lost horizons: The Rise And Fall Of
Antibiotics. Jurnal of Nature Medicine, 3(8):1.
Warung Infornasi Teknologi Kementerian Riset dan Teknologi. 2014.

ElaeocarpusgrandiflorusJ.E.Smith.http://www.warintek.ristek.go.idpangan
_kesehatan/tanaman_obat/depkes/3-011.pdf .
Warbung, Y.Y., Vonny, N. S. W., dan Jimmy. 2014. Daya Hambat

Ekstrak Spons Laut. Pada Sapi Perah. Repository. Malang: Fakultas
Peternakan Universitas Brawijaya, 5(2).
Wijaya, Y., Suprijatna, E., & Kismiati, S. (2017). Penggunaan limbah industri
jamu dan bakteri asam laktat (Lactobacillus sp.) sebagai sinbiotik untuk
aditif pakan terhadap kualitas interior telur ayam ras petelur. Indonesian
Journal of Animal Science, 19(2): 47-54.
Wulandari, M. A. 2014. Potensi Antibakteri Dan Bioautografi Ekstrak Etanol

Daun Bintaro (Carbera Odollam Gaertn.) Terhadap Salmonella Typhi Dan
Staphylococcus Aureus (Doctoral dissertation). Surakarta: Universitas
Muhammadiyah.
WHO 2018. Breast cancer: Early diagnosis and screening. World Health
Organization. http://www.who.int/cancer/prevention/diagnosis-
screening/breast-cancer/en/.
LAMPIRAN
Lampiran 1 Identifikasi Tumbuhan Anyang-anyang (Elaeocarpus
grandiflorus Sm.)
76
77
78
Lampiran 2 Diagram Alir Pembuatan Ekstrak Daun Anyang-Anyang
Daun anyang-anyang
- Dicuci bersih
- Dikeringkan dalam
oven pada suhu 50oC
- Diblender, dan diayak

dengan ayakan No.60
Serbuk daun anyang-anyang
- Maserasi, serbuk daun

anyang-anyang
sebanyak 200 gram +
etanol 96% sebanyak
2000 mL
- Remaserasi, + etanol
96% sebanyak 2000
mL
Filtrat daun anyang-anyang
- Dipekatkan dengan
rotary evaporator pada
suhu 40oC
Ekstrak kental daun anyang-anyang

79
Lampiran 3 Dokumentasi Pembuatan Ekstrak Etanol 96% Daun Anyang-
Anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)
Tumbuhan anyang-anyang Pemotongan dan Proses oven daun anyang-

penjemuran daun anyang- anyang pada suhu 50oC
anyang
Proses blender daun anyang- Pengayakan daun anyang- Serbuk daun anyang-
anyang anyang anyang
80
Proses maserasi selama 7 hari Penyaringan hasil maserasi
Proses remaserasi Proses evaporasi dengan Ekstrak kental daun

rotary evaporator anyang-anyang
81
Lampiran 4 Perhitungan Bobot Dan Rendemen Daun Anyang-Anyang
Pelarut Bagian yang Bobot tanaman Bobot Rendemen

digunakan yang diekstraksi ekstrak (%)
(gram) kental (gram)
Etanol Daun 200 90,25 45,12
%Rendemen = x 100%
%Rendemen = x 100% = 45,12%

82
Lampiran 5 Hasil Uji Kadar Air Ekstrak Etanol 96% Daun Anyang-Anyang
(Elaeocarpus grandiflorus Sm).
botol 1
BOBOT BOTOL
KOSONG SETELAH BOBOT BOTOL +
DIKERINGKAN PEMANASAN EKSTRAK SEBELUM EKSTRAK SELISIH BOBOT HASIL KADAR AIR
23.6664 SEBELUM PEMANASAN 24.7331 1.0667
23.6664 PEMANASAN 1 24.7064 1.0400 0.0267 2.5673
23.6664 PEMANASAN 2 24.6964 1.0300 0.0100 0.9709
23.6664 PEMANASAN 3 24.6900 1.0236 0.0064 0.6252
23.6664 PEMANASAN 4 24.6873 1.0209 0.0027 0.2645
4.4279
botol 2
BOBOT BOTOL
27.0883 PEMANASAN 1 28.1570 1.0687 0.0329 2.9866
27.0883 PEMANASAN 2 28.1421 1.0538 0.0149 1.3942
27.0883 PEMANASAN 3 28.1411 1.0528 0.0010 0.0949
27.0883 PEMANASAN 4 28.1406 1.0523 0.0005 0.0475
4.5232
botol 3
BOBOT BOTOL
26.4510 PEMANASAN 1 27.5361 1.0851 0.0143 1.3007
26.4510 PEMANASAN 2 27.5193 1.0683 0.0168 1.5726
26.4510 PEMANASAN 3 27.5073 1.0563 0.012 1.1360
26.4510 PEMANASAN 4 27.5052 1.0542 0.0021 0.1992
4.2085
botol 4
BOBOT BOTOL
26.9447 PEMANASAN 1 27.9512 1.0065 0.0192 1.8719
26.9447 PEMANASAN 2 27.9433 0.9986 0.0079 0.7911
26.9447 PEMANASAN 3 27.9351 0.9904 0.0082 0.8279
26.9447 PEMANASAN 4 27.9299 0.9852 0.0052 0.5278
4.0188
83
Lampiran 6 Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Ayang-Anyang
Uji Saponin Uji Tannin Uji Triterpenoid/Steroid
Uji Polifenol Uji alkaloid Uji flavonoid

1. Pereaksi Meyer
2. Pereaksi Wagner
84
Lampiran 7 Hasil Identifikasi Bakteri Pseudomonas aeruginosa
Koloni bakteri Uji TSIA Uji SIM
Uji Katalase Pewarnaan gram

85
Lampiran 8 Pembuatan Media MHA (Muller Hinton Agar)
Proses pembuatan media MHA Sterilisasi media MHA
Media MHA setelah dituang ke cawan Media MHA Dibungkus dengan

petri aluminium foil dan di inkubasi pada
incubator dengan suhu 37oC
86
Lampiran 9 Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol 96% Daun
Anyang-Anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.)
Kontrol positif dan negatif

Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Replikasi 4
Hasil Uji Antibakteri

Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Replikasi 4

Skripsi Fixx I Gusti Agung Ayu Made Ratih Mahadewi.

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Skripsi Fixx I Gusti Agung Ayu Made Ratih Mahadewi.

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

SKRIPSI

AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL

I GUSTI AGUNG AYU MADE RATIH MAHADEWI

Skripsi ini diajukan sebagai

Tumbuhan Anyang-Anyang (Elaeocarpus grandiflorus Sm.) Terhadap Bakteri

Pseudomonas aeruginosa Secara In Vitro” selesai tepat pada waktunya. Skripsi

Dalam proses penyusunan skripsi ini, penulis banyak mendapatkan

penulis menyampaikan rasa hormat dan terimakasih kepada:

1. Dr.dr. I Made Bakta Sp.PD (KHOM). selaku Rektor Universitas Bali

Internasional atas kesempatan dan fasilitas yang diberikan kepada penulis

untuk mengikuti dan menyelesaikan pendidikan Program Sarjana

Universitas Bali Intemasional.

Fakultas Ilmu - Ilmu Kesehatan Universitas Bali Interasional atas

kesempatan dan fasilitas yang diberikan kepada penulis untuk mengikuti

dan menyelesaikan pendidikan Program Sarjana S1 di Universitas Bali

Studi Teknologi Laboratorium Medik Fakultas Ilmu-Ilmu Kesehatan

saran, nasihat, motivasi, dan berbagai pengalaman yang berharga kepada

4. Ni Putu Rahayu Artini S.Si., M.Si. selaku Dosen Pembimbing I yang

banyak memberikan bimbingan, saran, nasihat, motivasi, dan berbagai

pengalaman yang berharga kepada penulis.

5. Ni Putu Widayanti, S.Si., M.Si. selaku Dosen Pembimbing II yang

banyak memberikan bimbingan, saran, semangat, motivasi, dan berbagai

pengalaman yang berharga kepada penulis.

6. Apt. Dhiancinatyan Windydaca B P, S.Farm., M. Farm. selaku Ka UPT

Laboratorium Kesehatan Universitas Bali Internasional yang telah

memberikan izin kepada saya untuk melaksanakan penelitian skripsi.

7. I Gusti Ngurah Edy Dama Darmika, S.ST. selaku Laboran Laboratorium

Mikrobiologi Klinik Universitas Bali Internasional yang telah

mengizinkan dan membantu saya dalam melaksanakan penelitian skripsi.

8. Segenap civitas akademika Program Studi Teknologi Laboratorium

Medik Universitas Bali Interasional terutama seluruh dosen, terima kasih

atas segala ilmu dan bimbingannya.

9. I Gusti Made Dwija dan Ni Wayan Suratmi sebagai orangtua tercinta

selesainya skripsi ini.

10. Seluruh teman - teman di Program Studi Teknologi Laboratorium

Medik Fakultas Ilmu-Ilmu Kesehatan Universitas Bali Intemasional yang

sehingga selesainya skripsi ini.

being me at all times.

Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dalam penulisan

dapat bermanfaat bagi pembaca.

Denpasar, Juli 2021

AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL 96% DAUN

Kata kunci: Antibakteri, Metabolit Sekunder, Pseudomonas aeruginosa, Elaeocarpus

ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF ETHANOL EXTRACT 96%

Infectious disease refers to a problem in the health sector that continues to

Keywords: Antibacterial, Secondary Metabolites, Pseudomonas aeruginosa,

AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL 96% DAUN

Penyakit infeksi merupakan masalah di bidang kesehatan yang terus

Lampiran 1 Identifikasi Tumbuhan Anyang-anyang (Elaeocarpus grandiflorus

DNA : Deoxyribonucleic Acid

DMSO : Dimetil sulfoksida

HIV : Human Immunodeficiency Virus

MHA : Muller Hinton Agar

MIC : Minimum Inhibitor Concentration

PABA : Para-aminobenzoic Acid

RNA : Ribonucleic Acid

WHO : World Health Organization

KLT : Kromatografi Lapis Tipis

TSIA : Triple Sugar Iron Agar

SIM : Sulphide Indole Motility

HCl : Asam Klorida

1.1 Latar Belakang

orang meninggal akibat infeksi setiap tahunnya. Penyakit infeksi merupakan