Hasil evaluasi kadar flavonoid (TFC) dinyatakan dalam

μg quercetin setara/mg ekstrak. Semua data diolah dan bersifat statistik

analisis dilakukan dengan menggunakan Genstat versi 14. Nilai disajikan dalam

Tabel 1 dinyatakan dalam standar deviasi rata-rata. Surat-surat mencerminkan

perbedaan yang signifikan antara nilai-nilai.

Data TFC ekstrak yang berbeda pada tabel adalah 134,23; 147,55 dan

270,4 μg ekstrak EQ/mg dalam ekstrak DCM, etil asetat, dan metanol

masing-masing. Dari analisis nilai tersebut, kita dapat mengatakan bahwa metanol

adalah pelarut yang baik untuk ekstraksi flavonoid dalam jumlah besar lebih baik daripada

etil asetat dan DCM. Hasil ini dikonfirmasi oleh penelitian lain

(Bationo et al., 2017aBationo et al., 2017b; Eruygur et al., 2018). Itu

evaluasi kandungan flavonoid sesuai dengan data sebelumnya

(Bationo et al., 2017aBationo et al., 2017b). Pengulangan pekerjaan ini

menegaskan bahwa ekstrak metanol daun C. giganteus mengandung

TFC yang lebih tinggi. Data ini memotivasi kami sekali lagi untuk melanjutkan penyelidikan untuk
mengisolasi dan mengkarakterisasi flavonoid utama dalam ekstrak ini.

Penentuan struktur senyawa dalam ekstrak metanol

Penentuan struktur senyawa dalam metanol

ekstrak dilakukan dalam dua langkah. Tahap pertama adalah mengidentifikasi senyawa dalam
ekstrak metanol menggunakan kromatografi lapis tipis dan

penggabungan metode kromatografi-fisik. Setelah dilakukan identifikasi,

senyawa mayoritas diisolasi dan dikarakterisasi menggunakan analitik

dan metode kromatografi persiapan (CCM, HPLC, HPLC-UV dan

CC) dan metode spektral (MS, IR, UV dan NMR)

Profil KLT ekstrak kasar (Gambar 1) memberikan lima (05) bercak, tiga (03).

yang merupakan tempat mayoritas. Di antara tiga titik utama, dua berwarna kuning

fluoresensi (spot 3 dan 4) dan satu, kuning-oranye (spot 1) di bawah UV 365

nm setelah menyemprotkan reagen Neu. Bintik-bintik ini, menurut literatur,

sesuai dengan turunan flavonol glikosilasi (Wagner dan Bladt, 1996).

Profil KLT ekstrak kasar dibandingkan dengan standar yaitu orientin

dan luteolin (Tabel 2). Bintik 3 (Rf ¼ 0,68) dan 4 (Rf ¼ 0,7) bisa jadi

turunan murni. Spot 1 dan 2 bisa berupa diglukosida atau triglukosida

turunan dari quercetin atau myricetin (Wagner dan Bladt, 1996). Memang, di

literatur, turunan glikosilasi dari quercetin dan myricetin memiliki

fluoresensi oranye-kuning di bawah UV 365 nm setelah penyemprotan reagen Neu (Wagner dan
Bladt, 1996)

NB: flavonol glikosilasi adalah flavonoid yang mengalami glikosilasi ( pada hidroksil gula atau fenol)
atau mengalami asilasi ( pada hidroksil gula) . asilasi (secara formal, tetapi jarang digunakan:
alkanoilasi) adalah proses adisi gugus asil ke sebuah senyawa. istilah asil atau
gugus asil adalah sebuah gugus fungsional yang didapat dari sebuah asam dengan membuang
gugus hidroksil.

Setelah analisis TLC dari ekstrak metanol, noda mayoritas (1, 3 dan 4)

dianalisis dengan spektrometer massa menggunakan antarmuka CAMAG. Gambar 2

menunjukkan spektrum massa bintik mayoritas. Ini menyangkut tempat 1 (Rf ¼

0,37), titik 3 (Rf ¼ 0,67) dan titik 4 (Rf ¼ 0,7). Pada spektrum massa ini

(Gambar 2) elektrospray ionisasi mode positif (ESIþ) kami mengamati karakteristik puncak ion
molekul pada m/z 441 ½M þ Na þ; m/z 471 ½M þ Na þ et

m/z 473 ½M þ Na þ. Puncak molekul ini masing-masing sesuai dengan

massa karakteristik berat molekul dari flavonoid tertentu yang diketahui tercantum dalam

Tabel 3. Dengan demikian, ekstrak metanol dari daun akan menutup turunan monoglikosilasi dari
quercetin dan luteolin.

Tiga (03) kaleng senyawa murni

diisolasi A (TLC spot 5), E (TLC spot 4) dan F (TLC spot 4); Gambar 1) oleh

suksesi kromatografi (kromatografi preparatif dan HPLC semipreparatif). Massa senyawa murni
telah dihitung. Efisiensi isolasi dihitung dan dinyatakan dalam persentase

(%). Nilai-nilai tersebut dikelompokkan dalam Tabel 4.

Analisis hasil menunjukkan bahwa nilainya sangat rendah. Hasil dari

isolasi molekul dalam ekstrak mentah adalah rasio antara massa

molekul terisolasi dan jumlah ekstrak yang digunakan (Tabel 4). Beberapa

faktor-faktor seperti suksesi metode, mempengaruhi hasil ini. Namun,

hasil merupakan indikator penting dari efisiensi dalam aplikasi industri.

Hasil ini memungkinkan untuk mengevaluasi atau menghargai profitabilitas ekonomi

dalam kasus aplikasi skala besar. Struktur molekulnya dulu

dicirikan.

Profil kromatografi lapis tipis senyawa murni. Profil ThinLayer Chromatographic (KLT) dari
senyawa yang diisolasi terlihat

bahwa senyawa E dan F, seperti orientin, tampak kuning di bawah sinar UV

365 nm (Gambar 1B). Juga, senyawa ini memiliki frontal yang sama

referensi sebagai orientin (Tabel 5). Senyawa ini diyakini

turunan orientin (C-glukosida luteolin). Senyawa A tidak berfluoresensi di bawah UV pada 365
nm setelah disemprot dengan reagen Neu (Gambar 1B).

Senyawa A adalah

bubuk coklat kemerahan. Spektrum Infra Red (IR) (Gambar 3) ini

bubuk tidak menunjukkan pita getaran pada 1600 cm 1 karakteristik karbonil

(C¼O). Ada juga pita di sekitar 2900 cm 1 karakteristik metilena (–CH2–) (Anthoni et al., 2010;
Uzan et al., 2011) dan pita di sekitar

1180 cm 1 adalah karakteristik alkohol sekunder (–CHOH–). Melalui

data ini, kami dapat menyarankan bahwa senyawa A adalah flavanol.

Spektrum UV-Visible senyawa A (Gambar 4) menunjukkan dua (02)

pita karakteristik flavonoid. Satu di UV sekitar 210 nm dan

lainnya antara 270 dan 300 nm. Pita antara 280 dan 300 nm adalah a

pita karakteristik inti aromatik flavonoid. Band di sekitar

210 nm merupakan karakteristik inti flavanol (Lhuillier et al., 2007; Michel

et al., 2011). Memang, alkohol sekunder menyerap ke arah 180-210 nm

(Lhuillier et al., 2007 dan T. Michel et al., 2011). Senyawa A adalah

oleh karena itu flavanol

Kromatogram analitik (HPLC) senyawa A, menunjukkan retensi

waktu (Rt¼ 10,8 mnt) sebanding dengan epicatechin yang diambil sebagai standar.

Dalam spektrometri massa (Gambar 5), ion molekuler ½MH pada

289,0714 koheren dengan massa yang dihitung menggunakan rumus C15H14O6.

Memang, struktur dasar flavonoid adalah urutan 15 atom karbon

(Cuyckens dan Claeys, 2004 dan Michel et al., 2010). Sehubungan dengan ini

formula baku yang diusulkan dan formula umum flavonoid, senyawa

A tidak terglikosilasi

Analisis spektra massa LC-MS dan LC-MS/MS (Gambar 5) menunjukkan

ion molekuler dan fragmen yang mirip dengan epikatekin. Dari

analisis ion fragmen yang dikelompokkan pada Tabel 6, tampak bahwa

senyawa dari keluarga flavanol. Ion fragmen yang khas

diamati pada m/z 139.039 dan 123.044 (Gambar 5, Tabel 6) hasil

masing-masing dari hilangnya kelompok C9H10O2 dan C9H10O3 dari sebuah

epikatekin aglikon. Senyawa A mungkin merupakan epicatechin dari

keluarga flavanol. Memang, dalam mode fragmentasi negatif, epicatechin

berbeda dari katekin dengan adanya ion fragmen pada m/z 139,0392

[M-150] dan 123,0443 [M-166]. Ion fragmen spesifik epicatechin ini ada dalam data kami. Jadi,
senyawa A adalah epicatechin.

Data spektrum proton NMR (Gambar 6) dikonfirmasi

struktur kimia senyawa A. Memang, pergeseran kimia antara 6

dan 7 ppm merupakan karakteristik sinyal proton dari cincin aromatik A dan B flavonoid
[Silverstein et al., 1998]. Cincin aromatik A memiliki 3

proton: H-2 (6,75 (s)), H-6 (6,94 (d; 1,86)), H-5 (6,70 (d; 2,93)), dan

cincin aromatik B memiliki 2 proton: H-6 (5,94 (s)), dan H-8 (5,90 (s)). Itu

dua singlet besar memungkinkan pada 4,14 ppm dan 4,56 ppm adalah karakteristik dari

proton CH pada posisi 2 (H-2) dan 3 (H-3) dekat dengan atom oksigen.

Konstanta kopling yang diperoleh antara H2 dan H3 menunjukkan bahwa proton tersebut
berada dalam posisi Cis relatif satu sama lain [Silverstein et al.,

1998 dan Markham dan Ternai, 2005]. Perbedaan antara katekin

dan epicatechin terletak pada konfigurasi ini pada karbon C2 dan C3.

Memang, dalam struktur kimia katekin kami mengamati (2R, 3S) atau (2S, 3R)

konfigurasi sementara di epicatechin itu adalah konfigurasi (2S, 3S) atau (2R, 3R) yang
kami temukan. Konstanta kopling lemah diamati antara
proton H-2 di posisi 2 dan H-3 di posisi 3 (proton vicinal) menunjukkan

bahwa proton ini berada dalam posisi Cis relatif satu sama lain. Senyawa A adalah
epicatechin.

Selanjutnya, sinyal dari dua proton di posisi 4 (2,84 dan

2,72 ppm) membentuk split double dengan konstanta kopling besar J ¼ 16,75

Hz adalah karakteristik kopling Trans (Silverstein et al., 1998 dan

Michel et al., 2011). Jadi, proton dibawa oleh karbon yang sama,

ini adalah kopling geminal. Dengan demikian mereka adalah dua proton yang tidak setara dari a

metilen (–CH2–). Kedua proton berpasangan dengan proton H-3 di

4,14 ppm membentuk doublet dengan konstanta kopling J ¼ 4,5 Hz dan J ¼

3,0 Hz.

Data spektrum karbon, HSQC dan HMBC mengkonfirmasi bahwa A memiliki

lima belas (15) atom karbon. Sinyal pada 4,56 ppm dalam spektrum HSQC

menunjukkan bahwa proton terikat pada karbon yang dekat dengan heterocycle

(BERSAMA-). Ini adalah karbon C2 pada 78,5 ppm. Proton di 4.14 dan 2.84

ppm masing-masing terikat pada karbon pada 66,1 dan 27,6 ppm. Ini

pergeseran kimia masing-masing adalah karbon C–OH (C3) dan CH2

(C4). Selain itu, spektrum HMBC dan HSQC mengkonfirmasi penugasan tersebut
proton cincin A dan B. Memang, spektrum HMBC mengungkapkan karbon kuaterner C10 (130
ppm); C40 (141,5 ppm); C50 (159.1); C7 (156

ppm) dan C9 (157 ppm). Informasi ini (Tabel 1) ditambah dengan data

dari literatur [8-9] menegaskan bahwa senyawa epicatechin A

(Gambar 7).