ANALISIS KANDUNGAN KADAR SENYAWA FLAVONOID PADA

KOMBINASI DAUN BELUNTAS (Pluchea indica L.) DAN DAUN SIRSAK

(Annona muricata L.) MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETER UV-VIS

PROPOSAL SKRIPSI

HILMATUN NI’MAH
NIM. 190720204720100002

PROGRAM STUDI KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT SAINS DAN TEKNOLOGI ANNUQAYAH
2023
 ANALISIS KANDUNGAN KADAR SENYAWA FLAVONOID PADA
KOMBINASI DAUN BELUNTAS (Pluchea indica L.) DAN DAUN SIRSAK
(Annona muricata L.) MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETER UV-VIS

PROPOSAL SKRIPSI

Oleh:
HILMATUN NI’MAH
NIM. 190720204720100002

diajukan Kepada:
Program Studi Kimia
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Institut Sains dan Teknologi Annuqayah
untuk Memenuhi Salah Satu Persyaratan dalam Memperoleh Gelar
Sarjana Sains (S. Si)

PROGRAM STUDI KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT SAINS DAN TEKNOLOGI ANNUQAYAH
2023

i
 ANALISIS KANDUNGAN KADAR SENYAWA FLAVONOID PADA
KOMBINASI DAUN BELUNTAS (Pluchea indica L.) DAN DAUN SIRSAK
(Annona muricata L.) MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETER UV-VIS

PROPOSAL SKRIPSI

Oleh:
HILMATUN NI’MAH
NIM. 190720204720100002

telah diperiksa dan disetujui untuk diuji tanggal: 03 Mei 2023

Pembimbing I Pembimbing II

Ulfatun Hasanah, M. Si Nurul Inayah, M. Si

NIDN. 0718099301 NIDN. 2129059001

Mengesahkan,
Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Mahrus Ali, M. Si
NIDN. 0725069002

ii
 ANALISIS KANDUNGAN KADAR SENYAWA FLAVONOID PADA
KOMBINASI DAUN BELUNTAS (Pluchea indica L.) DAN DAUN SIRSAK
(Annona muricata L.) MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETER UV-VIS

PROPOSAL SKRIPSI

Oleh:
HILMATUN NI’MAH
NIM. 190720204720100002

telah dipertahankan
di depan Dewan Penguji Proposal Skripsi dan dinyatakan diterima sebagai salah satu
persyaratan untuk memperoleh gelar Sarjana Sains (S. Si) tanggal :

Ketua Dewan Penguji : Ach. Kholish, S. Si., M. Sc ( )

NIDN. 0703108802

Anggota Dewan Penguji : Ulfatun Hasanah, M. Si ( )

NIDN. 0718099301

Mengesahkan,
Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Mahrus Ali, M. Si
NIDN. 0725069002

iii
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ................................................................................................ i

HALAMAN PERSETUJUAN ................................................................................ ii
HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................ iii
DAFTAR ISI .......................................................................................................... iv
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. vi
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... vii

BAB I. PENDAHULUAN ..................................................................................... 1

1.1 Latar Belakang .................................................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ............................................................................................. 5
1.3 Tujuan Penelitian .............................................................................................. 5
1.4 Manfaat Penelitian ............................................................................................ 5
1.5 Batasan Masalah ............................................................................................... 6

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA.......................................................................... 7

2.1 Tumbuhan Beluntas .......................................................................................... 7
2.2 Tumbuhan Sirsak .............................................................................................. 8
2.3 Ekstraksi.......................................................................................................... 10
2.4 Metabolit Sekunder ........................................................................................ 12
2.5 Kuersetin ......................................................................................................... 15
2.6 Spektrofotometer UV-Vis ............................................................................... 16

BAB III. METODE PENELITIAN ................................................................... 18

3.1 Rancangan Penelitian ...................................................................................... 18
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian ......................................................................... 18
3.3 Alat dan Bahan................................................................................................ 18
3.3.1. Alat............................................................................................................ 18
3.3.2. Bahan ........................................................................................................ 18
3.4 Prosedur Penelitian ......................................................................................... 19
3.4.1. Preparasi Sampel ....................................................................................... 19
3.4.2. Ekstraksi Maserasi .................................................................................... 19
3.4.3. Uji Fitokimia Flavonoid ............................................................................ 19

iv
 3.4.4. Analisis Senyawa Flavonoid dengan Spektrofotometer UV-Vis .............. 20
3.5 Analisis Data ................................................................................................... 21

DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 22

LAMPIRAN ......................................................................................................... 28

v
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2. 1 Daun Beluntas ............................................................................................. 7

Gambar 2. 2 Daun Sirsak ................................................................................................. 8
Gambar 2. 3 Struktur Dasar Flavonoid ............................................................................ 13
Gambar 2. 4 Biosintesis Flavonoid .................................................................................. 14
Gambar 2. 5 Struktur Kuersetin ....................................................................................... 15

vi
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Ekstraksi Sampel Masing-masing Daun ...................................................... 28

Lampiran 2. Uji Reagent .................................................................................................. 29
Lampiran 3. Analisis Spektrofotometer UV-Vis ............................................................. 30
Lampiran 4. Perhitungan .................................................................................................. 33

vii
 BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang

Radikal bebas merupakan salah satu faktor penyebab penyakit. Senyawa

radikal bebas yang menyerang tubuh dapat menjadi perantara awal terjadinya

kerusakan di dalam tubuh (Sopiah et al., 2019). Penyakit yang sering dihubungkan

dengan radikal bebas seperti jantung koroner, arterosklerosis, penuaan dini,

diabetes mellitus, neurodegenerative disorders (parkinson, alzheimers, dan multiple

sclerosis), katarak, dan berbagai jenis kanker lainnya. Menurut (Berawi &

Agverianti, 2017) radikal bebas dapat memungkinkan terjadinya stres oksidatif.

Stres oksidatif diakibatkan dari adanya ketidakseimbangan antara jumlah radikal

bebas dengan antioksidan, di mana jumlah radikal bebas lebih besar daripada

jumlah antioksidan. Selain itu, sinar UV, asap rokok, dan polutan juga dapat

menyebabkan adanya radikal bebas. Radikal bebas ini dapat dicegah melalui

senyawa antioksidan (Fakriah dkk, 2019; Indra & Kusmiati, 2019)

Antioksidan merupakan suatu zat yang dapat menetralisir adanya radikal

bebas yang memiliki kontribusi dalam pencegahan penyakit. Antioksidan

dikelompokkan menjadi dua kelompok, yaitu antioksidan sintetik dan antioksidan

alami (Mentari, 2018). Tumbuhan merupakan bahan alami yang memiliki

kandungan sebagai antioksidan yang dapat berfungsi sebagai teraupetik yang

keberadaannya sudah banyak dimanfaatkan oleh masyarakat. Beberapa tumbuhan

yang berpotensi memiliki senyawa antioksidan adalah daun beluntas dan daun

sirsak (Harningsih & Wimpy, 2018; Yulia & Ranova, 2019; Rudiana &

Indriatmoko, 2021).

1
 2

Daun beluntas (Pluchea indica L.) oleh sebagian masyarakat hanya dikenal

sebagai tanaman pagar yang digunakan sebagai pelengkap makanan dengan

pengolahan yang begitu sederhana. Di samping itu, beluntas juga digunakan

sebagai obat tradisional pada berbagai masalah kesehatan seperti diare, bau badan,

reumatik, peluruh demam, mengatasi keputihan dan haid yang tidak teratur, kurang

nafsu makan, gangguan pencernaan pada anak, antibakteri, nyeri tulang dan sakit

pinggang, serta anti-inflamasi (Wanita, 2018; Donowarti & Fidhiani, 2020). Tidak

berbeda jauh dengan daun beluntas, daun sirsak (Annona muricata L.) juga

dimanfaatkan sebagai obat tradisional yang dikenal masyarakat sebagai

antimikroba, antitumor, antiparasit, antihipertensi, antikanker, asma, pengobatan

sakit pinggang dan bisul, serta diabetes (Adri dkk, 2013; Wicaksono & Ulfah,

2017).

Kandungan senyawa metabolit sekunder daun beluntas terdiri dari alkaloid,

fenolik, flavonoid, tannin, sterol, hidrokuinon, saponin, dan kardiak glikosida

(Widyawati et al., 2018). Sedangkan kandungan senyawa pada daun sirsak antara

lain terpenoid/steroid, fenolik, flavonoid, tannin, alkaloid, dan kumarin (Adri dkk,

2013). Kedua daun tersebut sama-sama mengandung senyawa metabolit sekunder

berupa fenolik dan flavonoid yang memiliki aktivitas sebagai antioksidan

(Wismayani & Minarsih, 2022).

Secara spesifik, suatu senyawa dapat dikategorikan sebagai antioksidan

sangat kuat apabila nilai IC50 kurang dari 50 ppm, kuat dengan nilai IC50 antara 50-

100 ppm, sedang dengan nilai IC50 antara 101-150 ppm, dan lemah dengan nilai
 3

IC50 lebih besar dari 150 ppm (Fidrianny et al, 2014). Hasil penelitian Asbanu dkk

(2019) menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat dan metanol daun sirsak memiliki

nilai IC50 masing-masing sebesar 56,894 dan 24,895 ppm. Sedangkan ekstrak etanol

daun beluntas mempunyai nilai IC50 sebesar 37,25 ppm (Wanita, 2018), dan ekstrak

etanol daun beluntas serta daun sirsak dengan nilai IC50 masing-masing sebesar

57,922 ppm dan 51,310 ppm (Hasanah, 2022).

Kombinasi dari dua atau lebih jenis tumbuhan dimungkinkan dapat

meningkatkan potensi aktivitas antioksidan. Menurut Shobah dkk (2021), Senyawa

bioaktif yang terdapat dalam tumbuhan dengan kandungan fitokimia yang hampir

sama, diharapkan mampu memiliki aktivitas antioksidan yang semakin baik.

Kombinasi dari dua atau lebih tumbuhan dengan kandungan antioksidan yang

dimilikinya dapat menghasilkan potensi aktivitas antioksidan yang lebih besar

dibandingkan dengan bentuk tunggalnya, seperti kombinasi ekstrak daun kersen

dan daun sirsak dengan nilai IC50 sebesar 6,9126 ppm, ekstrak etanol daun sirsak

dan daun jambu biji memiliki nilai IC50 sebesar 9,009 ppm, serta daun salam dan

daun kelor dengan nilai IC50 sebesar 28,55 ppm (Wicaksono & Ulfah, 2017;

Harningsih & Wimpy, 2018; Rudiana & Indriatmoko, 2021). Hasil penelitian

Hasanah (2022) menunjukkan bahwa nilai IC50 untuk ekstrak kombinasi daun

beluntas dan daun sirsak (1:1) sebesar 57,173 ppm, nilai IC50 ekstrak kombinasi

(1:2) sebesar 61,420 ppm, dan nilai IC50 ekstrak kombinasi (2:1) sebesar 50,628

ppm.
 4

Senyawa flavonoid merupakan senyawa metabolit sekunder yang banyak

ditemukan di alam, terutama pada tumbuhan. Flavonoid termasuk ke dalam

golongan polifenol yang mempunyai efek farmakologis berupa antioksidan,

antiinflamasi, antivirus, dan sebagainya (Mukhriani dkk, 2015; Widyawati et al.,

2018). Menurut Nur dkk (2019) senyawa fenolik atau flavonoid mempunyai

peranan penting terhadap aktivitas antioksidannya, semakin besar kandungan

senyawa fenol, maka semakin besar pula aktivitas antioksidan yang dihasilkan.

Penentuan kadar senyawa flavonoid pada tumbuhan dapat dianalisis dengan

menggunakan spektrofotometer UV-Vis.

Berdasarkan hasil penelitian Wahyuni dkk (2018), menyatakan bahwa

kadar flavonoid total ekstrak etanol sirsak adalah sebesar 1,78 mg ekuivalen

kuersetin/g sampel. Sedangkan Yuliantari dkk (2017), mengatakan bahwa total

flavonoid dari daun sirsak adalah 903.90 mg ekuivalen kuersetin/g sampel. Hal ini

dikarenakan perolehan total flavonoid dipengaruhi oleh adanya perlakuan suhu dan

waktu ekstraksi 450C selama 20 menit.

Spektrofotometer UV-Vis merupakan metode pengukuran yang digunakan

untuk mengidentifikasi struktur dari suatu senyawa. Pemakaian kuersetin dalam

spektrofotometer UV-Vis adalah sebagai larutan pembanding dikarenakan

kuersetin merupakan senyawa yang penyebarannya paling luas dalam tumbuhan.

Instrumen ini digunakan untuk menguji sejumlah cahaya yang diabsorpsi pada

setiap panjang gelombang di daerah yang tampak (Haeria & Andi, 2016).
 5

Berdasarkan uraian di atas, peneliti tertarik untuk melakukan penelitian

mengenai “Analisis Kandungan Kadar Senyawa Flavonoid pada Kombinasi Daun

Beluntas (Pluchea indica L.) dan Daun Sirsak (Annona muricata L.) Menggunakan

Spektrofotometer UV-Vis” untuk mengetahui kadar flavonoid yang terkandung

dalam kombinasi dua daun, yaitu daun beluntas dan daun sirsak.

1.2 Rumusan Masalah

1. Bagaimana hasil absorbansi senyawa flavonoid menggunakan

spektrofotometer UV-Vis?

2. Bagaimana kandungan kadar flavonoid pada kombinasi daun beluntas dan

daun sirsak menggunakan spektrofotometer UV-Vis?

1.3 Tujuan Penelitian

1. Untuk mengetahui hasil absorbansi senyawa flavonoid menggunakan

spektrofotmeter UV-Vis

2. Untuk mengetahui kandungan kadar flavonoid pada kombinasi daun beluntas

dan daun sirsak menggunakan spektrofotometer UV-Vis

1.4 Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah kepada

kalangan akademisi ataupun masyarakat umumnya mengenai adanya kandungan

kadar senyawa flavonoid dari kombinasi daun beluntas dan daun sirsak

menggunakan spektrofotometer UV-Vis sehingga bisa dimanfaatkan serta

digunakan bagi kesehatan.

 6

1.5 Batasan Masalah

Permasalahan yang perlu dibatasi, yaitu:

1. Bahan utama yang digunakan yaitu daun beluntas dan daun sirsak

2. Metode ekstraksi yang digunakan adalah metode maserasi

3. Pelarut yang digunakan untuk mendapatkan maserat yaitu etanol 96%

4. Perbandingan kombinasi masing-masing daun yaitu 1:1, 1:2, dan 2:1

5. Pembacaan nilai absorbansi dengan analisis spektrofotometer UV-Vis

menggunakan larutan kuersetin.

 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tumbuhan Beluntas

Gambar 2. 1 Daun beluntas

Klasifikasi daun beluntas adalah sebagai berikut (Pujowati, 2006):
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermathophyta
Sub Divisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Famili : Asterales
Ordo : Asteraceae
Genus : Pluchea
Spesies : Pluchea indica Less.
Nama Umum : Beluntas (Sumatra, Malaysia, dan Singapura), Baruntas
(Sunda), Luntas (Jawa Tengah), Baluntas (Madura),
Lamutasa (Makasar), Lenabou (Timor), dan Khlu
(Thailand).

Beluntas (Pluchea indica L.) merupakan salah satu jenis tanaman di

Indonesia yang sifatnya mudah tumbuh. Tumbuhan beluntas termasuk pada famili

Asteraceae yang banyak dimanfaatkan sebagai pangan dan obat, mempunyai

aktivitas antioksidan baik dalam bentuk ekstrak maupun dalam bentuk seduhan

(Widyawati et al., 2012; Widyawati et al., 2018). Beluntas tumbuh secara tegak

dengan tinggi 2 meter atau lebih, memiliki cabang yang banyak, berusuk halus,

daunnya b ertangkai pendek, dan letaknya berseling. Daun beluntas berbentuk

bulat telur, ujungnya melancip, tepi bergerigi, berkelenjar, berwarna hijau terang,

7
 8

dan memiliki aroma harum ketika diremas. Akar beluntas termasuk pada akar

tunggang dan bercabang, perbanyakan pada beluntas dapat dilakukan dengan cara

setek batang yang sudah cukup tua (Maftuhah, 2015).

Beluntas banyak digunakan sebagai tanaman pagar dan dijadikan pembatas

pada perkebunan. Secara tradisional, daun beluntas dijadikan sebagai obat untuk

menghilangkan bau badan, penurun panas, batuk, diare, nyeri reumatik, dan sakit

pada pinggang. Air rebusan daun beluntas juga dapat digunakan sebagai

pengobatan untuk penyakit kulit. Tak jarang pula daun beluntas ditambahkan pada

makanan sebagai lalapan. Ekstrak daun beluntas yang dikonsumsi bersamaan

dengan rumput laut dapat mengobati tuberculosis kelenjar leher (Wijayakusuma,

1994; Winarno & Sundari, 1998)

2.2 Tumbuhan Sirsak

Gambar 2. 2 Daun sirsak

Sirsak diklasifikasikan sebagai berikut (Widyaningrum, 2012):

Kingdom : Plantae
Divisi : Spermathophyta
Sub Divisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Ordo : Polycarpiccae
Famili : Annonaceae
Genus : Annona
 9

Spesies : Annona muricata Linn

Nama Umum : Graviola (Brazil), Soursop (Inggris), Guanabana
(Spanyol), Nangka Sabrang atau Nangka Belanda
(Jawa), Nangka Walanda atau Sirsak (Sunda).

Tanaman sirsak (Annona muricata L.) berasal dari bahasa Belanda, yakni

zuurzak yang berarti kantong asam (Adri dkk, 2013). Sirsak merupakan tumbuhan

dengan berbagai macam manfaat bagi kesehatan baik daging buah, daun maupun

bijinya yang memiliki kandungan kimia yang bermanfaat untuk pengobatan, antara

lain sebagai antibakteri, antivirus, antioksidan, antijamur, antiparasit,

antihipertensi, antistres, dan menyehatkan sistem saraf.

Daging buahnya mengandung serat dan vitamin, kandungan zat gizi

terbanyak dalam buah sirsak adalah karbohidrat. Daunnya mengandung senyawa

steroid/terpenoid, flavonoid, kumarin,tanin, fitosterol, kalsium oksalat, alkaloid

murisin, monotetrahidrofuran asetogenin, seperti anomurisin A dan B,

gigantetrosin A, annonasin-10-one, murikatosin A dan B, annonasin dan

goniotalamisin. Biasanya masyarakat menggunakannya dengan cara merebus

daunnya kemudian hasil rebusan tersebut diminum (Suranto, 2011).

Senyawa flavonoid berfungsi sebagai antioksidan untuk penyakit kanker,

anti mikroba, antivirus, pengatur fotosintetis, dan pengatur tumbuh (Adri dkk, 2013).

Daun sirsak bermanfaat sebagai obat bisul, kejang, peluruh keringat, antikanker,

antidiabetes, antibakteri, antijamur, antiemetik, sedatif, antimutagenik, sitotoksik,

vasodilator, antimalaria, antihepatotoksik, insektisida, antihipertensi, relaksan otot

polos, obat jantung, dan antioksidan (Wicaksono & Ulfah, 2017).

 10

2.3 Ekstraksi

Ekstraksi merupakan salah satu teknik pemisahan kimia yang digunakan

untuk memisahkan atau menarik komponen atau senyawa dari suatu sampel dengan

menggunakan pelarut yang sesuai. Prinsip pemisahan ini didasarkan pada

kemampuan atau daya larut analit dalam pelarut tertentu. Dengan demikian, pelarut

yang digunakan harus mampu menarik komponen analit dari sampel secara

maksimal.

Ekstraksi padat cair atau leaching merupakan proses transfer secara difusi

analit dari sampel yang berwujud padat ke dalam pelarutnya. Ekstraksi dari sampel

padatan dilakukan apabila analit yang diinginkan dapat larut ke dalam pelarut.

Berdasarkan metode yang digunakan, ekstraksi padat cair dibedakan menjadi

maserasi, perkolasi, dan sokletasi (Leba, 2017).

Maserasi merupakan salah satu metode ekstraksi padat cair yang sering

digunakan karena paling sederhana. Proses ekstraksi dengan cara ini dapat

dilakukan dengan cara merendam sampel sehingga analit dapat larut dalam sampel.

Biasanya, sampel direnadam selama 3 x 24 jam sambil sesekali diaduk yang

bertujuan untuk mempercepat proses larutnya analit. Ekstraksi dapat dialukan

secara berulang agar analit yang didapat terekstraksi secara sempurna. Hal ini dapat

ditunjukkan dengan pelarut yang digunakan tidak berwarna. Kelebihan dari

ekstraksi dengan cara maserasi adalah alat dan cara yang digunakan sederhana,

dapat digunakan untuk analit baik tahan terhadap panas maupun yang tidak.
 11

Proses pemilihan jenis pelarut menjadi suatu hal yang sangat penting untuk

dilakukan sebelum proses ekstraksi dimulai. Pelarut yang digunakan harus dapat

melarutkan zat yang diinginkan. Senyawa yang ada dalam tumbuhan dapat

dikategorikan dengan senyawa polar dan non polar sehingga pelarut yang dipilih

harus disesuaikan dengan karakteristik sampel.

Pemisahan senyawa umumnya berdasarkan pada teori like dissolved like,

yaitu suatu senyawa akan mudah larut dalam pelarut yang memiliki tingkat

kepolaran yang sama, seperti senyawa non polar akan larut dalam pelarut non polar

dan senyawa polar akan larut dalam pelarut polar. Terdapat dua pemilihan dalam

memilih jenis pelarut, diantaranya pelarut yang digunakan harus mempunyai daya

larut yang tinggi dan juga tidak berbahaya atau tidak beracun (Guenther, 2006).

Pelarut etanol 96% merupakan senyawa polar yang mudah menguap sehingga

dapat digunakan sebagai pelarut ekstrak dikarenakan semakin tinggi nilai

konsentrasi suatu pelarut, maka akan semakin besar pula kadar yang akan didapat.

Penelitian ini menggunakan etanol karena sampel yang hendak diekstraksi

mengandung senyawa antioksidan dan diharapkan dapat diaplikasikan pada suatu

produk sehingga aman bagi pengguna (Voight, 1994; Do et al., 2014).

Menurut Wicaksono & Ulfah (2017) ekstrak etanol daun sirsak dengan

metode maserasi menghasilkan persen rendemen sebesar 11,73%, juga penelitian

Harningsih & Wimpy (2018) persen rendemen ektrak etanol daun sirsak. yang

dihasilkan sebesar 16%. Sedangkan penelitian Saraswati dkk (2021) rendemen dari

ekstrak etanol daun sirsak berkisar antara 3,19-14,34%.

 12

2.4 Metabolit Sekunder

Metabolit sekunder merupakan proses pemebentukan suatu produk

metabolisme dari molekul yang sederhana hingga molekul kompleks yang terjadi

pada makhluk hidup. Metabolit terdiri dari dua macam, yaitu metabolit primer dan

metabolit sekunder. Metabolit sekunder merupakan senyawa metabolit yang tidak

esensial bagi pertumbuhan organisme. Metabolit sekunder dapat ditemukan dalam

bentuk yang berbeda-beda antara spesies yang satu dengan lainnya.

Fungsi dari metabolit sekunder adalah untuk mempertahankan diri dari

kondisi lingkungan yang kurang menguntungkan, seperti mampu mengatasi hama

dan penyakit, menarik polinator, dan sebagai molekul sinyal. Sedangkan

kandungan metabolit sekunder dari tumbuhan bagi manusia dapat digunakan untuk

mengobati berbagai macam penyakit. Salah satu macam dari metabolit sekunder,

yaitu flavonoid (Puspita, 2012; Mustapa dkk, 2019).

Flavonoid merupakan senyawa fenol di alam yang hampir keseluruhan

terdapat dalam tumbuhan. Senyawa flavonoid merupakan zat dengan warna merah,

ungu, dan biru, serta kuning pada tumbuhan. Flavonoid mempunyai pigmen

tumbuhan dengan warna kuning, kuning jeruk, dan merah pada buah, sayuran,

kacang, biji, batang, bunga, herba, rempah-rempah, produk pangan dan obat dari

tumbuhan (seperti minyak zaitun, teh, coklat, anggur merah, dan obat herbal),

mudah terurai pada temperatur yang tinggi, larut dalam air dan pelarut organik

(Syamsul dkk, 2019; Bangun dkk, 2021).

 13

Flavonoid mempunyai kerangka karbon yang terdiri dari dua cincin benzen

tersubstitusi yang disambungkan oleh rantai alifatik tiga karbon. Senyawa

flavonoid diturunkan dari unit C6-C3 (fenilpropana) yang bersumber dari asam

shikimat dan unit C6 yang diturunkan dari jalur poliketida. Seperti yang ditunjukkan

oleh gambar di bawah ini: (Wahyulianingsih dkk, 2016).

Gambar 2. 3 Struktur dasar flavonoid

Golongan flavonoid yang memiliki aktivitas antioksidan meliputi senyawa

flavon, flavonol, kaateksin, dan kalkon (Ramadhani dkk, 2020). Flavonoid

memiliki ciri khas, yaitu bau yang sangat tajam, sebagian besar berpigmen kuning,

dapat larut dalam air dan pelarut organik, mudah terurai pada temperatur tinggi.

Flavonoid juga dipercaya dapat menurunkan penyakit arterosklerosis dengan cara

menghambat oksidasi LDL (low density lipoprotein) dengan menghambat

pembentukan radikal bebas (Syamsul dkk, 2019).

Flavonoid mengandung sistem aromatis yang terkonjugasi dan mampu

menunjukkan pita serapan yang kuat pada daerah UV-Vis. Sejumlah tanaman obat

yang mempunyai kandungan flavonoid dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan,

antibakteri, antivirus, antiradang, antiinflamasi, antialergi, dan antikanker. Oleh

sebab itu, flavonoid mempunyai efek yang baik bagi kesehatan (Mukhriani dkk,

2015; Sari & Hastuti, 2020).

 14

Biosintesis flavonoid merupakan gabungan dari dua jalur biosintesis yang

utama untuk cincin aromatik, yaitu jalur shikimat dan jalur asetat-malonat. Cincin

A pada struktur flavonoid berasal dari jalur poliketida karena terjadinya kondensasi

dari tiga unit asetat atau malonat. Sedangkan pada cincin B dan rantai propan

berasal dari jalur fenilpropanoid (jalur shikimat). Akibat dari adanya berbagai

perubahan, ketiga atom karbon dari rantai propan akan menghasilkan berbagai

gugus fungsi seperti ikatan rangkap dua, gugus hidroksil, gugus karbonil dan

sebagainya. Hal ini dapat dilihat pada gambar berikut: (Kristanti dkk, 2008).

Gambar 2. 4 Biosintesis flavonoid

 15

2.5 Kuersetin

Kuersetin merupakan senyawa kelompok flavonol terbesar. Kuersetin dan

glikosidanya berada dalam jumlah sekitar 60-75% dalam flavonoid dan juga

merupakan salah satu senyawa golongan flavonoid yang dapat bereaksi dengan

AlCl3 membentuk kompleks stabil (Sari & Hastuti, 2020).

Kuersetin digunakan sebagai larutan standar untuk penetapan kadar flavonoid

karena kuersetin ini termasuk pada golongan flavonol yang mempunyai gugus keto

pada atom C-4 dan gugus hidroksil pada atom C-3 dan C-5 yang bertetangga (Indra

& Kusmiati, 2019).

Gambar 2. 5 Struktur kuersetin

Kuersetin ini dimungkinkan dapat mencegah berbagai macam penyakit

degenerative dengan cara mencegah terjadinya proses oksidasi lemak. Pencegahan

proses oksidasi dari low density lipoproteins (LDL), yaitu dengan cara menangkap

radikal bebas dan menghelat ion logam transisi. Ketika kuersetin bereaksi dengan

radikal bebas, kuersetin akan mendonorkan protonnya dan menjadi senyawa yang

radikal, tapi elektron yang tidak berpasangan dihasilkan didelokalisasi oleh

resonansi. Hal inilah yang menjadikan senyawa kuersetin radikal memiliki energi

yang sangat rendah untuk menjadi radikal yang reaktif (Sutir, 2012; Neldawati dkk,

2013).
 16

2.6 Spektrofotometer UV-Vis

Spektrofotometer adalah alat yang digunakan untuk mengukur suatu energi

yang secara relatif apabila energi tersebut ditransmisikan, direfleksikan, dan

diemisikan sebagai fungsi dari spektrum pada panjang gelombang tertentu.

Sedangkan fotometer adalah alat untuk mengukur intensitas cahaya yang

ditransmisikan dan diabsorpsi (Neldawati dkk, 2013; Mukhriani, 2015)

Spektrofotometri UV-Vis atau sinar tampak merupakan suatu instrumen

pengukuran energi cahaya oleh suatu sistem kimia pada panjang gelombang

tertentu (Sari & Hastuti, 2020). Spektrofotometer UV-Vis merupakan alat atau

instrumen yang dipilih dan digunakan untuk mengukur kandungan kadar senyawa

flavonoid pada kombinasi daun beluntas dan daun sirsak. Pemilihan instrumen ini

berdasar pada adanya banyak keuntungan, diantaranya metode ini memberikan cara

sederhana untuk menetapkan kuantitas zat yang sangat kecil, lebih mudah,

pengerjaannya cepat, alatnya sederhana dan spesifik untuk analisis uji. Selain itu,

hasil dari analisis uji yang diperoleh cukup akurat, karena angka yang terbaca akan

langsung dicatat dalam bentuk angka digital maupun grafik yang sudah

diregresikan (Wahyuni dkk, 2018; Sari & Hastuti, 2020; Bangun dkk, 2021).

Sinar ultraviolet (UV) mempunyai panjang gelombang antara 200-400 nm

dan sinar tampak (Visible) mempunyai panjang gelombang antara 400-750 nm.

Pengukuran dengan spektrofotometer ini menggunakan energi yang cukup besar

pada molekul yang dianalisis, sehingga hal inilah yang menyebabkan

 17

spektrofotometer UV-Vis lebih banyak digunakan untuk analisis kuantitatif

dibandingkan dengan kualitatif (Sari & Hastuti, 2020).

Nilai panjang gelombang yang digunakan pada uji flavonoid total ekstrak

daun sirsak adalah 436 nm dengan flavonoid total sebesar 7,3%. Sedangkan

penelitian Nur dkk (2019), penentuan absorbansi flavonoid total daun jati dilakukan

pada panjang gelombang 437 nm.

 BAB III
METODE PENELITIAN

3.1 Rancangan Penelitian

Rancangan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu pengujian

eksperimental di laboratorium. Sampel yang digunakan yaitu 2 macam

tumbuhan, meliputi daun beluntas (Pluchea indica L.) dan daun sirsak (Annona

muricata L.). Pengukuran senyawa flavonoid dianalisis menggunakan

spektrofotometer UV-Vis.

3.2 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini dilakukan pada bulan April hingga bulan Juni. Penelitian

dilakukan di laboratorium kimia IST Annuqayah dan Universitas Trunojoyo

Madura (UTM) Bangkalan.

3.3 Alat dan Bahan

3.3.1. Alat

Alat yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu kertas label, blender,

tabung reaksi dan rak tabung reaksi, spatula, pipet tetes, gelas ukur, gelas

beaker, erlenmeyer, pengaduk kaca, toples maserasi, kertas saring, corong,

timbangan analitik, rotary evaporator, pompa vacum, kuvet,

spektrofotometer UV-Vis.

3.3.2. Bahan

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu daun beluntas, daun

sirsak, etanol 96%, aquades, larutan HCl, serbuk Mg, AlCl3, dan kalium

asetat.

18
 19

3.4 Prosedur Penelitian

3.4.1. Preparasi Sampel

Preparasi sampel dilakukan dengan menimbang maisng-masing daun

sebanyak 100 gr. Sampel diangin-anginkan sampai kering kemudian

dipotong kecil-kecil dan dihaluskan menggunakan blender sehingga

menjadi serbuk.

3.4.2. Ekstraksi Maserasi

Daun beluntas dan sirsak ditimbang dengan perbandingan masing-

masing 50 gr. Lalu ditambahkan etanol 96%, dimasukkan kedua daun yang

telah halus ke dalam toples maserasi, dan dikocok. Ekstrak disimpan

ditempat yang gelap agar dihasilkan maserat yang baik. Setelah itu, maserat

disaring menggunakan kertas saring. Hasil ekstraksi kemudian diuapkan

pada suhu 550C dengan menggunakan rotary evaporator untuk mendapatkan

ekstrak pekat. Ekstrak pekat yang diperoleh kemudian digunakan untuk

pengujian fitokimia.

3.4.3. Uji Fitokimia Flavonoid

Daun beluntas dan sirsak yang telah diekstraksi dimasukkan ke dalam

tabung reaksi masing-masing sebanyak 2 ml. Kemudian ditambahkan

dengan HCl pekat 2 tetes, dan ditambah sedikit serbuk Mg. Hasil akan

menunjukkan positif apabila larutan berwarna merah (Yulia & Ranova,

2019).
 20

3.4.4. Analisis Senyawa Flavonoid dengan Spektrofotometer UV-Vis

1. Pengukuran panjang gelombang maksimum

Pengukuran panjang gelombang maksimum dilakukan dengan

mencampurkan 1 ml larutan kuersetin dengan etanol sampai volume 5 ml

dalam labu ukur. Campuran tersebut diinkubasi pada suhu ruang selama 30

menit. Selanjutnya dilakukan pengukuran absorbansi panjang gelombang

maksimum (nm).

2. Pengukuran kurva standart kuersetin

Larutan kuersetin sebagai pembanding ditimbang sebanyak 10 mg dan

dilarutkan dengan pelarut etanol. Kuersetin diencerkan dengan konsentrasi

20, 30, 40, dan 50 µg/ml. Sebanyak 0,5 ml kuersetin ditambahkan 2,8

aquades, 0,1 ml aluminium (III) klorida, dan 0,1 kalium asetat. Inkubasi

dilakukan selama 30 menit. Nilai absorbansi kuersetin dapat diukur

menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 434-438

nm. Pengukuran masing-masing kuersetin dilakukan sebanyak 3 kali

pengulangan. Setelah nilai absorbansi diperoleh, dibuat kurva kalibrasi dan

akan didapat regresi persamaan linear.

3. Pengukuran kadar flavonoid pada ekstrak masing-masing daun beluntas dan

sirsak

Sebanyak 10 mg ekstrak masing-masing daun beluntas dan sirsak

dilarutkan dengan 100 ml pelarut etanol. Sebanyak 0,5 ml sampel

ditambahkan dengan 2,8 ml aquades, 0,1 ml aluminium (III) klorida, dan

 21

0,1 ml kalium asetat. Inkubasi dilakukan selama 30 menit, nilai absorbansi

sampel diukur dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada

panjang gelombang 434-438 nm.

4. Pengukuran kadar flavonoid pada ekstrak kombinasi daun beluntas dan

sirsak

Sebanyak 10 mg ekstrak kombinasi daun beluntas dan sirsak dilarutkan

dengan 100 ml pelarut etanol sehingga diperoleh konsentrasi 100 ppm.

Sebanyak 0,5 ml sampel ditambahkan dengan 2,8 ml aquades, 0,1 ml

aluminium (III) klorida, dan 0,1 ml kalium asetat. Inkubasi dilakukan

selama 30 menit, nilai absorbansi sampel diukur dengan menggunakan

spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 434-438 nm.

3.5 Analisis Data

Analisis senyawa flavonoid diperoleh dari nilai absorbansi larutan

kuersetin, didapatkan kurva kalibrasi dan diperoleh persamaan regersi linear.

Kadar senyawa flavonoid sampel dihitung dengan memasukkan nilai yang

diperoleh kedalam persamaan regresi linear y = ax + b, yang dihasilkan dari

kurva kalibrasi kuersetin dan hasil tersebut dinyatakan dalam satuan mg dalam

ml.
 DAFTAR PUSTAKA

Adri, D., Hersoelistyorini, W., & Suyanto, A. 2013. Aktivitas Antioksidan dan
Sifat Organoleptik Teh Daun Sirsak (Annona muricata Linn.)
Berdasarkan Variasi Lama Pengeringan. Jurnal Pangan dan gizi. 4(1).

Asbanu, Y. W. A., Wijayati, N., & Kusumo, E. 2019. Identifikasi Senyawa

Kimia Ekstrak Daun Sirsak (Annona muricata L.) dan Uji Aktivitas
Antioksidannya dengan Metode DPPH (2,2-Difenil-1-
Pikrilhidrasil). Indonesian Journal of Chemical Science. 8(3): 153-160.

Bangun, P. P. A., Rahman, A. P., & Syaifiyatul, H. 2021. Analisis Kadar Total
Flavonoid Pada Daun dan Biji Pepaya (Carica papaya L.) Menggunakan
Metode Spektrofotometer UV-Vis. Jurnal Ilmiah Farmasi Attamru
(JIFA). 2(1): 1-5.

Berawi, K. N., & Agverianti, T. 2017. Efek Aktivitas Fisik Pada Proses
Pembentukan Radikal Bebas Sebagai Faktor Risiko
Arterosklerosis. Jurnal Majority. 6(2): 86-91.

Do, Q. D., Angkawijaya, A. E., Tran-Nguyen, P. L., Huynh, L. H., Soetaredjo,

F. E., Ismadji, S., Ju, Y. H. 2014. Effect of Extraction Solvent On Total
Phenol Content, Total Flavonoid Content, and Antioxidant Activity of
Limnophila Aromatica. Journal of Food and Drug Analiys. 22(3): 296-
302.

Donowarti, Idiek., Fidhiani, Dayang Diah. 2020. Pengamatan Hasil Olahan

Daun Beluntas (Pluchea indica L.) Terhadap Sifat Fisika dan Kimianya.
Teknologi pangan. 11(2): 118-134.

Fidrianny, I., Darmawati, A dan Sukrasno. 2014. Antioxidant Capacities From

Different Polarities Extracs of Cucurbitaceae Leaves Using FRAP, DPPH
Assay and Correlation With Phenolic, Flavonoid, Carotenoid Content.
International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 6(2):
858-862.

Haeria, H., & Andi, T. U. 2016. Penentuan Kadar Flavonoid Total Dan
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Bidara (Ziziphus spina-christi
L.). Journal of Pharmaceutical and Medicinal Science. 1(2): 57-61.

Harningsih, T., & Wimpy, W. 2018. Uji Aktivitas Antioksidan Kombinasi

Ekstrak Daun Kersen (Muntingia calabura Linn.) dan Daun Sirsak
(Annona muricata Linn.) Metode DPPH (2, 2-diphenyl-1-
picrilhidrazyl). Biomedika. 11(2): 70-75

22
Indra, I., Nurmalasari, N., & Kusmiati, M. 2019. Fenolik Total, Kandungan
Flavonoid, dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Mareme
(Glochidion arborescense Blume.). Jurnal Sains Farmasi & Klinis. 6(3):
206-212.

Kristanti, A.N., Aminah, N.S., Tanjung, M., Kurniadi, B. 2008. Buku Ajar
Fitokimia. Cetakan pertama. Surabaya: Airlangga University Press.

Leba, M. A. U. 2017. Buku Ajar: Ekstraksi dan Real Kromatografi. Edisi

Satu. Cetakan satu. Yogyakarta: Deepublish.

Saraswati, I. G. A. K. W., Suter, I. K., & Wiadnyani, A. A. I. (2021). Pengaruh

Jenis Pelarut dan Rasio Bahan dengan Pelarut pada Metode Ultrasonikasi
terhadap Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Beluntas. Jurnal Ilmu dan
Teknologi Pangan (ITEPA), 10(1), 24-35.

Senet, M. R. M., Raharja, I G. M. A. P., Darma, I K.T., Prastakarini, K. T.,

Dewi, N. M. A., & Parwata, I M. O. A. 2018. Penentuan Kandungan Total
Flavonoid dan Total Fenol dari Akar Kersen (Mutingia calabura) Serta
Aktivitasnya Sebagai Antioksidan. Jurnal Kimia. 12 (1): 13-18.

Mentari, C. I., Sudarmi, S., & Harun, F. R. 2018. Pemeriksaan Flavonoid dan
Polifenol Serta Uji Aktivitas Antioksidan Teh Daun Sirsak Kemasan
(Annona muricata Linn.) Dengan Metode DPPH. In Talenta Conference
Series: Tropical Medicine (TM). 1(1): 277-283.

Mukhriani, M., Nonci, F. Y., & Munawarah, S. 2015. Analisis Kadar Flavonoid
Total Pada Ekstrak Daun Sirsak (Annona muricata L.) Dengan Metode
Spektrofotometri UV-Vis. Jurnal Farmasi UIN Alauddin Makassar. 3(2):
37-41.

Mustapa, M. A., Taupik, M., & Ramadhan, A. 2019. Analisis Kadar Flavanoid
Total Menggunakan Spektrofotometri UV-Vis Dalam Kulit Buah Salak
(Salacca zalacca V.). Journal Syifa Sciences And Clinical Research
(JSSCR). 1(1): 21-27.

Neldawati, N. 2013. Analisis Nilai Absorbansi Dalam Penentuan Kadar

Flavonoid Untuk Berbagai Jenis Daun Tanaman Obat. Pillar of
Physics. 2(1).

Nur, S., Sami, F. J., Awaluddin, A., & Afsari, M. I. A. 2019. Korelasi Antara
Kadar Total Flavonoid dan Fenolik Dari Ekstrak dan Fraksi Daun Jati
Putih (Gmelina arborea Roxb.) Terhadap Aktivitas Antioksidan. Jurnal

23
 Farmasi Galenika (Galenika Journal of Pharmacy)(e-Journal). 5(1): 33-
42.

Pujowati P. 2006. Pengenalan Ragam Tanaman Lanskap Asteraceae.

Bogor: Institut Pertanian Bogor.

Puspita, S. 2012. Metabolisme Primer dan Sekunder. Surakarta: Universitas

Setia Budi.

Ramadhani, N., Samudra, A. G., & Pratiwi, L. W. I. 2020. Analisis Penetapan

Kadar Flavonoid Sari Jeruk Kalamansi (Citrofortunella microcarpa)
Dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis. Jurnal Mandala Pharmacon
Indonesia. 6(01): 53-58.

Rudiana, T., & Indriatmoko, D. D. 2021. Aktivitas Antioksidan Kombinasi

Ekstrak Etanol Daun Salam (Syzygium polyanthum) dan Daun Kelor
(Moringa oleifera). Majalah Farmasi dan Farmakologi. 25(1): 20-22.

Sari, A. K., & Ayuchecaria, N. (2017). Penetapan Kadar Fenolik Total dan
Flavonoid Total Ekstrak Beras Hitam (Oryza sativa L) dari Kalimantan
Selatan. Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 2(2), 327-335.

Sari, D. K., & Hastuti, S. 2020. Analisis Flavonoid Total Ekstrak Etanol Daun
Seligi (Phyllanthus buxifolius Muell. Arg) Dengan Metode
Spektrofotometri UV-Vis. Indonesian Journal On Medical Science. 7(1).

Suhartati, T. 2017. Dasar-Dasar Spektrofotometri UV-Vis dan

Spektrofotometri Massa untuk Menentukan Senyawa Organik.
Lampung: CV. Anugrah Utama Raharja.

Sutir, F. 2012. Analisis Kandungan Senyawa Flavonoid Total dalam Sediaan

Cair Kasumba Turate (Carthamus tinctorius Linn.) Secara
Spektrofotometri UV-Vis. Makassar: Universitas Hasanudin.

Shobah, A. N., Noviyanto, F., & Kurnia, N. M. 2021. Kombinasi Ekstrak Daun
Kecombrang (Etlingera elatior) dan Daun Beluntas (Pluchea indica)
Sebagai Biolarvasida. Jurnal Kesehatan Perintis. 8(2): 100-109.

Sopiah, B., Muliasari, H., & Yuanita, E. 2019. Skrining Fitokimia dan Potensi
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Hijau dan Daun Merah
Kastuba. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia. 17(1): 27-33.

Syamsul, E. S., Hakim, Y. Y., & Nurhasnawati, H. 2019. Penetapan Kadar

Flavonoid Ekstrak Daun Kelakai (Stenochlaena palustris (burm. F.)

24
 25

Bedd.) Dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis. Jurnal Riset

Kefarmasian Indonesia. 1(1): 11-20.
Voight, R. 1994. Buku Pengantar Teknologi Farmasi. Edisi V. Terjemahan
Soedani, N. Yogyakarta: Universitas Gadjah Mada Press.

Wahyulianingsih, W., Handayani, S., & Malik, A. 2016. Penetapan Kadar

Flavonoid Total Ekstrak Daun Cengkeh (Syzygium aromaticum (L.) Merr
& Perry). Jurnal Fitofarmaka Indonesia. 3(2): 188-193.

Wahyuni, W. T., Pitria, L. K. D., & Rahmat, A. 2018. Analisis Kadar Flavonoid
dan Antioksidan Ekstrak Daun Kenikir (Cosmos caudatus), Rumput
Mutiara (Oldenlandia corymbosa), dan Sirsak (Annona muricata) Dengan
Teknik Spektrometri. Analit: Analytical and Environmental
Chemistry. 3(1).

Wanita, Defitiana. 2018. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun

Beluntas (Pluchea indica L.) Dengan Metode DPPH (2, 2-Difenil-1-
Pikrilhidrazil). Indonesian Chemistry and Application Journal. 2(2): 25-
28.

Wicaksono, I. B., & Ulfah, M. 2017. Uji Aktivitas Antioksidan Kombinasi

Ekstrak Etanol Daun Sirsak (Annona muricata L.) dan Daun Jambu Biji
(Psidium guajava L.) Dengan Metode DPPH (2, 2-difenil-1-
pikrilhidrazil). Jurnal Inovasi Teknik Kimia. 2(1).

Widyaningrum, Herlina. 2012. Sirsak Si Buah Ajaib 10.000x Lebih Hebat

dari Kemoterapi. Yogyakarta: MedPress.

Widyawati, Paini Sri, et al. (2018). Aktivitas Antioksidan Minuman Daun

Beluntas Teh Hitam (Pluchea indica Less-Camelia sinensis). Agritech.
38(2): 200-207.

Widyawati, Paini Sri, et al. 2012. Aktivitas Antioksidan Berbagai Fraksi Dan
Ekstrak Metanolik Daun Beluntas (Pluchea indica Less). Agritech. 32(3):
249-257.

Wijayakusuma, H. 1994. Tanaman Berkhasiat Obat di Indonesia. Jilid I.

Jakarta: Pustaka Kartini.

Winarno, M.W & D. Sundari. 1998. Pemanfaatan Tumbuhan Sebagai Obat

Diare di Indonesia. Cermin dunia kedokteran. 109(): 25-32.

Wismayani, L., Roni, A., & Minarsih, T. 2022. Penentuan Kadar Fenolik dan
Flavonoid Total Ekstrak Daun Renggak (Amomum dealbatum Roxb.) Dari
Berbagai Pelarut Secara Spektrofotometri UV-Vis. Indonesian Journal of
Pharmacy and Natural Product. 5(2): 142-151.

26
Yulia, M., & Ranova, R. 2019. Uji Aktivitas Antioksidan Teh Daun Sirsak
(Annona muricata Linn) Berdasarkan Teknik Pengolahan. Jurnal
Katalisator. 4(2): 84-90.

Yuliantari, N. W. A., Widarta, I. W. R., & Permana, I. D. G. M. 2017. Pengaruh

Suhu Dan Waktu Ekstraksi Terhadap Kandungan Flavonoid dan Aktivitas
Antioksidan Daun Sirsak (Annona muricata L.) Menggunakan
Ultrasonik. Media Ilmiah Teknologi Pangan. 4(1): 35-42.

27
 LAMPIRAN

Lampiran 1. Ekstraksi sampel masing-masing daun

50 gram sampel

Maserasi dengan
etanol 96%

Ampas Ekstrak etanol

96%

Rotary
evaporator

Ekstrak pekat
etanol 96%

28
Lampiran 2. Uji reagent

2 ml ekstrak
pekat

- Dimasukkan ke dalam tabung reaksi

Ditambahkan HCl pekat

2 tetes

Ditambahkan sedikit
bubuk Mg

Positif merah

29
Lampiran 3. Analisis spektrofotometer UV-Vis
1. Preparasi larutan

10 mg kuersetin

Dilarutkan dengan
etanol 96%

20 ppm 30 ppm 40 ppm 50 ppm

Sampel ekstrak
etanol 0,5 ml

AlCl3 0,1 ml

Aquades 2,8 ml

Kalium asetat 0,1 ml

Inkubasi 30 menit

Analisis spektro UV-

Vis 434-438 nm

30
2. Analisis kadar flavonoid ekstrak tunggal daun beluntas dan sirsak

Larutan ekstrak etanol Larutan ekstrak etanol

daun beluntas 100 ml daun sirsak 100 ml

Sampel ekstrak
etanol 0,5 ml

AlCl3 0,1 ml

Aquades 2,8 ml

Kalium asetat 0,1 ml

Inkubasi 30 menit

Analisis spektro UV-

Vis 434-438 nm

31
3. Analisis kadar flavonoid ekstrak kombinasi daun beluntas dan sirsak

Larutan ekstrak kombinasi

etanol sampel 100 ml

Sampel ekstrak
etanol 0,5 ml

AlCl3 0,1 ml

Aquades 2,8 ml

Kalium asetat 0,1 ml

Inkubasi 30 menit

Analisis spektro UV-

Vis 434-438 nm

32
Lampiran 4. Perhitungan
1. Pembuatan larutan induk
Secara umum, 1 ppm (part per million) berarti 1 bagian dari zat terlarut
untuk setiap 106 bagian larutan. Secara matematis, berdasarkan massa
maka:
𝜇𝑔 𝑧𝑎𝑡 𝑡𝑒𝑟𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡 𝑚𝑔 𝑧𝑎𝑡 𝑡𝑒𝑟𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡
𝑝𝑝𝑚 = =
𝑔 𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑎𝑛 𝑘𝑔 𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑎𝑛
Pada konsentrasi larutan yang sangat encer, konsentrasi larutan 1 ppm
sama dengan 1 µg zat terlarut per 1 ml larutan karena untuk pelarut air maka
massa 1 ml larutan sama dengan 1 g (densitas air 1 g ml-1). Dapat dilihat
pada perhitungan di bawah ini dengan konsentrasi 100 ppm:
100 gr 1 gr
=
1.000.000 ml 10.000 ml

1 gr 1000 mg 100 mg 10 mg 1 mg 0,1 mg

= = = = = ⁄
10.000 ml 10.000 ml 1000 ml 100 ml 10 ml ml

2. Pembuatan larutan standar

a. Pembuatan larutan standar dengan konsentrasi 20 ppm dari larutan
induk 100 ppm dalam labu ukur 10 ml.
M 1 V1 = M2V2
100 ppm .V1 = 20 ppm .10 ml
V1 = 20 ppm .10 ml/100 ppm
V1 = 2 ml
V1 = 200 µl
Jumlah yang dipipet sebanyak 200 µl dari larutan induk dan diencerkan
dengan etanol pada labu ukur 10 ml.
b. Pembuatan larutan standar dengan konsentrasi 30 ppm dari larutan
induk 100 ppm dalam labu ukur 10 ml.
M 1 V1 = M2V2
100 ppm .V1 = 30 ppm .10 ml
V1 = 30 ppm .10 ml/100 ppm
V1 = 3 ml
33
 V1 = 300 µl
Jumlah yang dipipet sebanyak 300 µl dari larutan induk dan diencerkan
dengan etanol pada labu ukur 10 ml.
c. Pembuatan larutan standar dengan konsentrasi 40 ppm dari larutan
induk 100 ppm dalam labu ukur 10 ml.
M 1 V1 = M2V2
100 ppm .V1 = 40 ppm .10 ml
V1 = 40 ppm .10 ml/100 ppm
V1 = 4 ml
V1 = 400 µl
Jumlah yang dipipet sebanyak 400 µl dari larutan induk dan diencerkan
dengan etanol pada labu ukur 10 ml.
d. Pembuatan larutan standar dengan konsentrasi 50 ppm dari larutan
induk 100 ppm dalam labu ukur 10 ml
M 1 V1 = M2V2
100 ppm .V1 = 50 ppm .10 ml
V1 = 50 ppm .10 ml/100 ppm
V1 = 5 ml
V1 = 500 µl
Jumlah yang dipipet sebanyak 500 µl dari larutan induk dan diencerkan
dengan etanol pada labu ukur 10 ml.

34