Pencucian Eritrosit Terhadap Derajat Aglutinasi Pada Pemeriksaan Golongan

Darah Metode Tabung

Rani Handriani1, Herna Kania Sumarna2, Opik Taufiqurohman3

1,2,3
Sekolah Tinggi Analis Bakti Asih
Jl. Padasuka atas no.233, telp/fax dari tempat bekerja

e-mail : ranihandriani@gmail.com

Abstrak

Golongan darah adalah hasil dari pengelompokkan darah berdasarkan substansi antigen pada permukaan
eritrosit. Pemeriksaan golongan darah metode tabung dilakukan dengan menggunakan suspensi eritrosit yang
terlebih dahulu harus dicuci dengan larutan NaCl 0,9% sebanyak 3 kali dengan tujuan untuk menghilangkan
protein yang tidak spesifik pada permukaaan eritrosit yang dapat mempengaruhi hasil. Pada penelitian ini
dilakukan eritrosit tanpa pencucian, pencucian eritrosit 1 kali, 2 kali dan 3 kali dan kemudian dibandingkan
hasil derajat aglutinasi diantara variasi frekuensi pencucian eritrosit tersebut. Penelitian ini bersifat
eksperimen dengan sampel golongan darah A, B, AB dan O. Pengamatan diamati secara makroskopis dengan
cara melihat aglutinasi yang terbentuk sebagai hasil reaksi antara antigen dan antibodi, dengan parameter
yang mengacu pada derajat aglutinasi. Data hasil penelitian diuji dengan menggunakan perhitungan statistik
Kruskal Wallis. Kesimpulan dari penelitian ini adalah variasi frekuensi pencucian eritrosit dan tanpa
pencucian pada metode tabung, dalam menentukan derajat aglutinasi pada golongan darah A, B, AB dan O
tidak terdapat perbedaan yang signifikan. Dalam kondisi tertentu pada saat pemeriksaan golongan darah
metode tabung memerlukan waktu yang cepat dan terdesak dapat dilakukan pencucian eritrosit kurang dari
tiga kali.

Kata kunci : Derajat Aglutinasi, Golongan Darah, Suspensi Eritrosit.

Abstract
Blood type is the result of the classification of blood based of antigenic substances on the surface of
erythrocytes. Blood type tube method is done by using a suspension of red cells must first be washed with
0.9% NaCl solution 3 times with the goal of eliminating non specific proteins on the surface erythrocytes,
that can influence result. In this research, erythrocytes without washing, washing erythrocytes 1 times, 2
times and 3 times in order to compare the results between the degree of agglutination of the erythrocytes
washing frequency variation. This research is an experiment with a sample of blood groups A, B, AB and O.
Observation is macroscopically by looking agglutination formed as a reaction between antigens and
antibodies, with a parameter which refers to the degree of agglutination. Data were tested using Kruskal
Wallis statistical calculations. The conclusion of this study is the frequency variations of erythrocyte washing
and without washing the tube method, in determining the degree of agglutination of the blood group A, B, AB
and O are not a significant difference. Under certain conditions when the blood type tube method requires a
fast time and forced to do the washing erythrocytes less than three times.

Key words : degree of agglutination, blood group, erythrocytes suspension.

JAB – STABA | VOL.02 NO.02 | Agustus 2018 27

1. Pendahuluan
Transfusi merupakan pemindahan darah dari orang
yang sehat (donor) kepada orang yang memerlukan
(resipien). Sebelum dilakukan transfusi, sangat perlu
melakukan pencocokan darah dengan cara melakukan
Seleksi sel darah merah sebelum transfusi dan ini
merupakan hal yang paling penting dilakukan sebagai
pencegahan reaksi transfusi. Proses seleksi sel darah
merah dilakukan melalui 2 tahapan. Tahap pertama
yaitu pengelompokkan darah, dengan melakukan
penentuan golongan darah ABO dan Rhesus (Rh) pada
spesimen darah donor dan pasien. Tahap kedua
dilakukan uji crossmatch secara invitro untuk
menentukan apakah sel darah donor cocok dengan
plasma pasien atau tidak.[1]
Penentuan golongan darah berdasarkan
pengelompokkan darah, ada atau tidaknya substansi
antigen pada permukaan sel darah merah. Identifikasi
pemeriksaan golongan darah ABO dapat dilakukan
dengan metode tabung dan metode slide, baik penentuan
antigen pada permukaan eritrosit (forward Grouping)
dan penentuan antibodi dalam plasma (reverse typing).
Interpretasi hasil forward dan reverse typing harus
selalu sesuai, bila tidak, maka akan terjadi
ketidakcocokan golongan darah yang dapat
menyebabkan reaksi transfusi. menurut Standar World
Health Oganization (WHO) pemeriksaan golongan
darah yang sensitif yaitu dengan metode tabung,
dikarenakan pada reaksi aglutinasi lemah masih dapat
dibaca.[2]
Teknik pemeriksaan golongan darah ABO metode
tabung yaitu dengan melakukan pencucian sel darah
merah dan sentrifugasi, sehingga reaksi aglutinasi
tampak kuat dan nyata. Sel darah merah yang tidak
beraglutinasi dapat kembali membentuk suspensi yang
mudah tercampur ketika dilakukan pengocokan,
sementara sel darah merah yang beraglutinasi akan
membentuk gumpalan yang kuat dan tidak akan
tersuspensi walaupun mengalami pengocokan.[3]
Terjadinya hasil positif palsu bisa dihindari karena
reaksinya dilakukan dalam sebuah tabung sehingga
penguapan bisa diperkecil dan mudah untuk pembacaan
derajat aglutinasi yaitu penggumpalan eritrosit oleh
antibodi dapat dilihat dari kekuatan aglutinasinya.
Reaksi antigen-antibodi diukur secara kualitatif dan
dideteksi dengan melihat aglutinasi sel darah merah
(hemaglutinasi).Derajat aglutinasi dipengaruhi oleh
antigen sites. Antigen sites merupakan antigen yang
berada di permukaan eritrosit sebagai tempat
perlekatannya molekul antigen dengan antibodinya
sendiri
Pencucian sel darah merah terlebih dahulu dengan
larutan NaCl 0,9% dianjurkan sekurang-kurangnya 1
kali untuk menghilangkan faktor protein yang terdapat
di dalam plasma. Apabila protein tersebut tidak dibuang
akan mengakibatkan hasil pemeriksaan golongan darah
28
menjadi kurang baik, karena akan terjadi netralisasi
sehingga hasil pemeriksaan dapat keliru .[4]
2. Metode Penelitian
Penelitian ini bersifat Eksperimen yaitu suatu penelitian
dengan melakukan kegiatan percobaan, dengan
melakukan suatu perlakuan beberapa kali proses
pencucian sel darah merah sebelum dilakukan
pemeriksaan yang bertujuan untuk mengetahui
pengaruh yang timbul, sebagai akibat dari adanya
perlakuan tertentu.
Adapun variable bebas dari penelitian ini yaitu variasi
jumlah pencucian sel darah merah dan sebagai variable
terikatnya yaitu hasil derajat aglutinasi
Kriteria inklusi Responden dengan golongan darah
ABO.
Kriteria eksklusi : responden tidak sedang
mengkonsumsi obat-obatan
\Spesimen :Darah EDTA( darah vena yang
ditambahkan antikoagulan Na. EDTA) dari sampel
responden golongan darah A, B, AB dan O masing-
masing sebanyak 5 ml ( 3 mL digunakan untuk eritrosit
yang dicuci, 2 mL untuk eritrosit yang tidak dicuci,
Reagen : suspensi eritrosit 10% golongan darah A, B,
dan O, serum /plasma, antisera (Anti-A, Anti-B, Anti
AB) , NaCl 0,9%, aquadest dan Na.EDTA 10%.
Persiapan Sampel
Diambil darah vena sebanyak 5 mL dimasukan kedalam
tabung yang telah berisi antikoagulan Na.EDTA 10%
sebanyak 50 µL,kemudian darah dihomogenkan
Pencucian Eritrosit
1) Diambil darah EDTA sebanyak ±5 ml.
2) Dimasukkan ke dalam tabung sentrifus,
kemudian dilakukan sentrifus selama 15 menit
dengan kecepatan 3000 rpm.
3) Diambil plasmanya dan dimasukkan ke dalam
tempat yang terpisah.
4) Sisa eritrosit diambil sebanyak 3 mL untuk
dilakukan pencucian ( sisa darah 2ml eritrosit
tidak dicuci)
5) Darah yang akan dicuci ditambahkan dengan
NaCl 0,9% dicampur dan dilakukan sentrifus
dengan kecepatan 3000 rpm selama 1 menit.
6) Dibuang supernatan (cairan bagian atas) dan
ditambahkan NaCl 0,9%.
7) Setelah cairan NaCl 0.9% dibuang, maka sisa
sel darah merahnya merupakan eritrosit
100%.(pencucian sesuai dengan varibel
penelitian yaitu 1 kali, 2 kali, 3 kali).
JAB – STABA | VOL.02 NO.02 | Agustus 2018
Pembuatan suspensi eritrosit 100%. signifikan atau tidak pada golongan darah A, B, AB dan
Dari Eritrosit yang sudah dilakukan pencucian dan O dengan metode tabung.
sudah terpisah dari plasma (eitrosit 100%) Diambil 1
bagian sel 100% + 9 bagian NaCl 0,9%.
Tabel 1. Data Hasil Penelitian Golongan Darah A
Pemeriksaan Golongan Darah
1) Disiapkan 7 buah tabung serologi.
2) Dibuat suspensi eritrosit 10% dari sampel
darah yang akan diperiksa kemudian
dipisahkan bagian plasma.
3) Diteteskan masing-masing 1 tetes sebagai
berikut : Tabel 2.Data Hasil Penelitian Golongan darah B
4) Tabung 1 : Anti A + Suspensi Eritrosit 10%
responden
5) Tabung 2 : Anti B + Suspensi Eritrosit 10%
responden
6) Tabung 3 : Anti AB + Suspensi Eritrosit 10%
responden
7) Tabung 4 : Suspensi Eri A 10% + plasma Tabel 3. Data Hasil Penelitian Golongan Darah AB
responden
8) Tabung 5 : Suspensi Eri B 10% + plasma
responden
9) Tabung 6 : Suspensi Eri O 10% + plasma
responden
10) Tabung 7 : Suspensi Eritrosit responden 10% +
plasma responden
11) Dihomogenkan dan dibiarkan selama 5 menit Tabel 4. Data Hasil Penelitian Golongan Darah O
pada suhu kamar.
12) Disentrifugasi dengan kecepatan 1000 rpm
selama 1 menit.
13) Digoyangkan tabung dengan hati-hati dan
perhatikan adanya aglutinasi dengan
mikroskop (perbesaran objektif 10x)

3. Hasil dan Pembahasan
3.1 Hasil Penelitian
Jenis penelitian ini adalah eksperimen yakni dengan
memvariasikan jumlah pencucian eritrosit pada metode
tabung untuk menganalisa derajat aglutinasi yang terjadi
pada golongan darah A, B, AB dan O. Berdasarkan
Pelatihan Transfusi darah (2010) bahwa pada metode
standar dilakukan tiga kali pencucian eritrosit.
Jenis data yang dihasilkan adalah data non parametrik
dengan menggunakan likert scale (skoring) pada derajat
aglutinasi yang terjadi. Variabel independen (bebas)
adalah variasi jumlah pencucian eritrosit pada tujuh
metode tabung pada golongan darah A, B, AB dan O,
sedangkan variabel dependent (tidak bebas) adalah hasil
derajat aglutinasi yang bersifat ordinal dengan lima (5)
kriteria. Kriteria yang digunakan adalah negatif (-), plus
satu (+1), plus dua (+2), plus tiga (+3) dan plus empat
(+4).
Pengolahan data menggunakan uji non parametrik
Kruskal Wallis bertujuan untuk menganalisa apakah
derajat aglutinasi pada setiap proses pencucian berbeda
3.2 Pembahasan
Pengelompokkan darah dengan cara menentukan
antigen pada permukaan sel darah merah. Antigen
tersebut dapat berupa karbohidrat, protein, glikoprotein,
atau glikolipid.Secara teknik, pemeriksaan serologi
golongan darah merupakan teknik yang sangat
sederhana dan tidak memerlukan peralatan yang rumit.
Namun demikian, pemeriksaan serologi golongan darah
memiliki nilai yang tinggi dan diperlukan kehati-hatian
dan ketelitian yang tinggi.[5]
Pada penelitian ini, pengamatan dilihat secara
makroskopis dengan cara melihat aglutinasi yang
terbentuk sebagai hasil reaksi antara antigen dan
antibodi. Penggumpalan sel darah merah oleh antibodi
dilihat dari kekuatan aglutinasinya. Pengamatan diamati
oleh beberapa orang verifikator dengan parameter yang
mengacu pada derajat aglutinasi. Berdasarkan hasil
pengamatan tersebut, terdapat perbedaan derajat
aglutinasi pada variasi frekuensi pencucian eritrosit
pada setiap golongan darah. Namun, pada hasil uji
statistik, hasil derajat aglutinasi pada pemeriksaan
golongan darah A, B, AB dan O tidak terdapat
perbedaan yang signifikan.

JAB – STABA | VOL.02 NO.02 | Agustus 2018 29

 Terdapat kesamaan golongan darah antara eritrosit
tanpa pencucian dengan variasi pencucian ini, tetapi
kesamaan golongan darah ini tidak diikuti dengan
kesamaan derajat aglutinasi. Terjadi perubahan
positivitas derajat aglutinasi eritrosit pada golongan
darah A,B, O dan AB. Perubahan derajat aglutinasi
yang terlihat bervariasi, mulai dari derajat aglutinasi
lemah (+1 dan +2) sampai kuat (+3 dan +4).
Perbedaan grade aglutinasi dipengaruhi oleh antigen
sites. Antigen sites merupakan antigen yang berada di
permukaan eritrosit sebagai tempat perlekatannya
molekul antigen dengan antibodinya sendiri. Biasanya
setiap manusia memiliki jumlah antigen sites yang
berbeda. Semakin banyak jumlah antigen sites maka
aglutinasi akan semakin jelas dan apabila jumlah
antigen sites sedikit maka aglutinasi yang terjadi terlihat
sedikit [6]
Dalam penelitian ini, peneliti menggunakan sampel
plasma pada tahapan serum grouping. Plasma sering
digunakan untuk keperluan transfusi.
Pada suspensi eritrosit yang tidak dilakukan pencucian,
menunjukkan hasil derajat aglutinasinya sama dengan
yang dilakukan pencucian. Hal ini menunjukan bahwa
meskipun tidak dilakukan pencucian, kemungkinan
antibodi yang menempel pada sel darah merah telah
dapat dihilangkan melalui proses sentrifugasi Whole
Blood dan dilakukan pemisahan segera antara sel darah
merah dengan plasmanya. Namun, eritrosit yang
mengalami pencucian memiliki kelebihan yaitu tidak
ada lagi protein pengganggu yang dapat menyebabkan
hasil positif palsu pada proses aglutinasi sel eritrosit
yang diperiksa golongan darahnya sehingga dapat
menyebabkan reaksinya tertutupi oleh antibodi
Analisis data yang digunakan pada penelitian ini
yaitu uji non parametrik Kruskal Wallis. Berdasarkan
hasil pengolahan data dapat diketahui bahwa variasi
frekuensi pencucian eritrosit pada pemeriksaan
golongan darah sistem ABO metode tabung untuk
semua jenis golongan darah tidak berbeda signifikan.
Daftar Pustaka
[1] D. Hoffman, Ronald, Reid, Marion E,
Hematology Basic Principles and Practive,
Fourth Edi. Pensylvania, 2005.
[2] M. Mayank Seth, BVetMed, Karen V. Jackson,
BVSc, and Urs Giger, Dr med vet, “Comparison
of five blood-typing methods for the feline AB
blood group system,” Am J Vet Res, vol. 72, no.
June 2008, pp. 203–209, 2011.
[3] V. K. Mutiawati, “Perbedaan derajat Aglutinasi
Pemeriksaan Golongan Darah antara Eritrosit
Tanpa Pencucian dengan Pencucian Pada
Penderita Talasemia,” J. Kedokt. Syiah Kuala,
vol. 13, no. 2, pp. 65–70, 2013.
[4] Maisura, “Hasil Pemeriksaan Uji Silang Serasi
Metode Tabung Menggunakan Eritrosit
Perbandingan Tidak Dicuci Dengan Variasi
Frekuensi Pencuciaan Di Bank Darah RSUD
Kabupaten Subang. Bandung,” 2014.
[5] N. Agarwal, R. M. Thapliyal, and K. Chatterjee,
“Blood group phenotype frequencies in blood
donors from a tertiary care hospital in north
India,” J. Blood Res, vol. 48, no. 1, pp. 1–4,
2013.
[6] M. H. and M. A. Keith, “Journal of Blood
Group Serology and Molecular Genetics V,” J.
Blood Res, vol. 30, no. 3, 2014.

4. KESIMPULAN
Berdasarkan hasil pemeriksaan golongan darah
metode tabung dengan melakukan variasi frekuensi
pencucian eritrosit dan tidak dilakukan pencucian, dapat
disimpulkan bahwa : Tidak terdapat perbedaan derajat
aglutinasi pada pemeriksaan golongan darah sistem
ABO metode tabung dengan variasi frekuensi pencucian
eritrosit dan tanpa pencucian.
Dalam kondisi tertentu pada saat pemeriksaan
golongan darah metode tabung memerlukan waktu
yang cepat dan terdesak maka dapat dilakukan
pencucian eritrosit kurang dari 3 kali.

30 JAB – STABA | VOL.02 NO.02 | Agustus 2018