JURUSAN TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIS

LAPORAN PRAKTIKUM INSTRUMENTASI II

Kelompok :5

Nama : Hajarani Jauhari

NIM : P27903218013

Judul : Cara pemeriksaan ELISA

Alat : - 96 Well Plate

- Rak Tabung dengan kapasitas 96 tabung

- ELISA Plate set up work sheet

- Mikropipet dan Tip

- Multiterminal Micropipette

- Inkubator

- BioTek 50 TS Microplate Washer

- BioTek 800 TS Absorbance Reader

Bahan :

PPR ID.vet Reagen Kit (Dilution Buffer, Control Positive, Control Negative, Wash Solution, Concentrated
Conjugate, Substrate Solution, Stop Solution)

Cara Kerja :

a) Ke dalam well :
1. Ditambahkan 25 ul Dilution Buffer pada semua sumur yang akan dipakai untuk pemeriksaan
2. Ditambahkan 25 ul Positive Control pada sumur A1 dan B1
3. Ditambahkan 25 ul Negative Control pada sumur C1 dan D1
 4. Ditambahkan 25 ul Sampel yang akan diperiksa pada sumur yang tersisa
b) Tutup well dengan alumunium foil dan Inkubasi well pada suhu 37˚C (incubator) selama 15 menit
c) Keluarkan 96 well plate tadi dari incubator
d) Dicuci setiap sumur 3x dengan 300 ul Wash Solution pada alat Microplate washer
e) Siapkan reagen Conjugate 1x dengan mengencerkan Conjugate 10x : Dilution Buffer = 1 : 9
f) Ke dalam setiap well ditambahkan 100 ul Conjugate 1x
g) Diinkubasi selama 30 menit pada suhu 21˚C pada incubator (well ditutup parafilm)
h) Dicuci setiap sumur 3x dengan 300 ul Wash Solution pada alat Microplate washer
i) Ditambahkan 100 ul Substraste Solution ke dalam setiap sumur
j) Diikubasi selama 15 menit pada suhu 21˚C dalam gelap (Well dibungkus dengan Alumunium foil)
k) Ditambahkan 100 ul Stop Solution ke dalam setiap well untuk menghentikan reaksi
l) Ukur kepadatan Optik pada alat BioTek 800 TS Absorbance Reader dengan panjang gelombang 450 nm

Interpretasi Hasil :

a) Dikatakan Valid apabila :

1) ODNC : > 0,7
2) ODPC : < 0.3
ODNC

b) Competition Percentage (SN)

SN% = ODSampel x100
ODNC

c) Interpretasi :
Result Status
SN% ≤ 50% Positive

50% ≤ SN% ≤ 60% Meragukan

(50% – 60%)

SN ≥ 60% Negative

Daftar Pustaka :

Video via Youtube : https://www.youtube.com/watch?v=05f8A1ucfSI tentang “ELISA | How to do ELISA | step

by step procedure for ELISA”, diakses tanggal 18/10/2020 jam 05.24 WIB