Cara Uji laboratorium bakteri gram

negatif dan Gram Positif

MIKRO BIOLOGI

Disusun Oleh :
Bima Akbar Hidayatullah
1948201014
Dosen Pengampu:
Dra.ARMINI HADRIYATI,M.Kes, Apt
Dengan adanya pewarnaan terutama bakteri yang mempunyai sel
dengan ukuran yang retif kecil akanlebih mudah terlihat di bawah
mikroskop dengan menggunakan lensa objektif minyakimersi yang
mempunyai tingkat pembesaran yang relatif tinggi.
Melihat dan mengamati bakteri dalam keadaan hidup sangat sulit,
kerena selain bakteri itutidak berwarna juga transparan dan sangat
kecil. Selain itu bakteri yang hidup akan kontrasdengan air, dimana
sel-sel bakteri tersebut disuspensikan. Sedangkan, untuk mengatasi
haltersebut maka dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel bakteri,
sehingga sel dapat terlihat jelas dan mudah diamati. Oleh karena itu
teknik pewarnaan sel bakteri ini merupakan salahsatu cara yang
paling utama dalam penelitian-penelitian mikrobiologi. Prinsip dasar
dari pewarnaan ini adalah adanya ikatan ion antara komponen selular
dari bakteri dengan senyawaaktif dari pewarna yang disebut
kromogen. Terjadi ikatan ion karena adanya muatan listrik baik pada
komponen seluler maupun pada pewarna. Berdasarkan adanya
muatan ini makadapat dibedakan pewarna asam dan pewarna basa.
Untuk mengidentifikasi suatu biakan murni bakteri hasil isolasi
mula-mula diamati morfologisel secara mikroskopik melalui
pengecetan atau pewarnaan, salah satunya adalah dengan pewarnaan
gram. Pewarnaan gram merupakan salah satu prosedur yang paling
banyakdigunakan untuk mencirikan banyak bakteri. Dari pewarnaan
gram dapat diketahui morfologisel antara lain sifat gram, bentuk sel,
dan penataan sel. Pewarnaan gram atau metode gramadalah suatu
metode empiris untuk membedakan spesies bakteri menjadi dua
kelompok besar, Gram positif dan gram negatif, berdasarkan sifat
kimia dan fisika dinding sel mereka,metode ini diberi nama
berdasarkan penemunya, ilmuwan denmark hans Christian
gram1884. Pewarnaan Gram dibagi menjadi dua yaitu pewarnaan
majemuk karena menggunakanlebih dari satu macam zat warna. Dan
pewarnaan diferensial karena pewarnaan ini mampu
mengdeferensiasi atau membedakan bakteri, sehingga bakteri dapat
digolongkan menjadi duayaitu Gram negatif dan Gram positif.
Tujuan :
Utuk mengetahui dan memahami teknik pewarnaan mikroba.
Untuk membedakan bakteri gram positif dan gram negatif
Teknik pewarnaan warna pada bakteri dapatdibedakan menjadi tiga
macam yaitu pengecatan sederhana, pengecatandiferensial dan
pengecatan struktural. Pemberian warna pada bakteri atau jasad-
jasad renik lain dengan menggunakan larutan tunggal suatu
pewarnapada lapisan tipis, atau olesan, yang sudah difiksasi,
dinamakan pewarnaansederhana.
Prosedur pewarnaan yang menampilkan perbedaan di antara sel-
selmikroba atau bagian-bagian sel mikroba disebut teknik pewarnaan
diferensial (Pelczar& Chan, 2007).
Bakteri yang diwarnai dengan teknik pewarnaan Gram terbagi dua
golongan,yaitu: Gram positif , bila warna zat pewarna pertama
(karbol gentian violet)tetap bertahan, dengan demikian warna se
bakteri tampak ungu tua; dan Gramnegatif, bila warna zat pewarna
pertama tidak bertahan (luntur) kemudiantercat oleh zat pewarna
tandingannya, misal: air fuchsin, safranin, dan oleh zatpewarna
tandingan lainnya. (Razali, 1987)
struktur dinding sel bakteri Gram positif itu yag menjadi tempat
tertahannyazat pewarna pertama yaitu karbol gentian violet. (Razali,
1987)
Jika warna terletak pada muatanpositif dari zat warna, maka disebut
zat warna basa. Jika warna terdapat padaion negatif, maka disebut zat
warna asam. Contoh zat warna basa adalahmethylen blue, safranin,
netral red, dan lain-lain. Sedangkan anionnya padaumumnya adalah
Cl-, SO4-, CH3COO-, COOHCOO. Zat warna asamumumnya
mempunyai sifat dapat bersenyawa lebih cepat dengan
bagiansitoplasma sel sedangkan zat warna basa mudah bereaksi
dengan bagian-bagianinti sel. Pewarnaan bakteri dipengaruhi oleh
faktor-faktor seperti : fiksasi,peluntur warna, substrat, intensifikasi
pewarnaan dan penggunaan zat warnapenutup (Sutedjo, 1991).
Pewarnaan sederhana menggunakanpewarna tunggal, pewarnaan
diferensial memakai serangkaian larutan pewarnaatau reagen.
Pewarnaan gram merupakan metode pewarnaan yang palingumum
digunakan untuk mewarnai sel bakteri (Umsl, 2008).Zat pewarna
adalah garam yang terdiri atas ion positif dan ion negatif, salahsatu di
antaranya berwarna. Pada zat warna yang bersifat basa, warna
terdapatpada ion positif (zat pewarna+ Cl-) dan pada pewarna asam,
warna akanterdapat pada ion negatif (zat pewarna-Na+).
 Secara garis besar teknik pewarnaan bakteri dapat dikategorikan sebagaiberikut:
pewarnaan sederhana, pewarnaan differensial (pewarnaan gram danpewarnaan
tahan asam), pewarnaan khusus untuk melihat struktur tertentu :pewarnaan flagel,
pewarnaan spora, pewarnaan kapsul, pewarnaan khususuntuk melihat komponen
lain dan bakteri (pewarnaan Neisser (granula volutin),pewarnaan yodium (granula
glikogen) dan pewarnaan negatif (Gozali, 2009)
 ALAT BAHAN
• Jarum Inokulum • Alkohol
• Tabung • Pewarna safranin, iodin, Cristal violet
• Cawan petri • Akuades
• Objek glass
• Mikroskop
• Pipet tetes
• Pembakar bunsen
• Tisue
• Kertas label
Cara Kerja
• Bersihkan object glass dengan tisue

• Jika perlu, tuliskan kode atau nama bakteri pada sudut object glass

• Biakan pada cawan petri dipindahkan dengan jarum inokulum, satu ulasan sajakemudian diberi akuades dan
disebarkan supaya sel merata.

• Keringkan ulasan tersebut sambil memfiksasinya dengan api bunsen (lewatkandiatas api 2-3 kali)

• Setelah benar-benar kering dan tersebar selanjutnya ditetesi dengan pewarna(dapat digunakan Methhylen
blue, Safranin, Cristal Violet) dan tunggu kuranglebih 30 detik.

• Cuci dengan akuades kemudian keringkan dengan kertas tissue

• Periksa dengan mikroskop (perbesaran 100x10)

Pewarnaan gram Uji Katalase

Contoh dari bakteri grampositif ialah Clostridium perfringens, Bakteri katalase positif seperti E.Coli bisa menghasilkan gelembung-
Staphylococcus aureus, sedangkan bakteri gramnegative misalnya gelembungoksigen karena adanya pemecahan H2O2(hidrogen
adalah Eschericia Coli. Pada praktikum kali ini akan diamati peroksida) oleh enzim katalase yangdihasilkan oleh bakteri itu
bakterigram negative yaitu Eschericia Coli. sendiri. Komponen H2O2

Yang perlu diperhatikan dalamproses fiksasi adalah bidang yang

mengandung bakteri dijaga agar tidak terkena nyalaapi.

Bakteri negative lapisan peptidoglikogennya tipis(1-3 nm)

.Berdasarkan hasil pengamatan di bawah mikroskop, diidentifikasi

bakteri E.coli yangmempunyai bentuk coccus dan berwarna merah,
bakteri ini digolongkan ke dalambakteri gram negatif, karena
menunjukkan ciri-ciri dari bakteri gram negatif yaitumampu mengikat
warna merah. Bakteri E.Coli struktur sebenarnya berbentuk
basil(batang) tetapi karena bakteri yang dilihat telah terkontaminasi
oleh bakteri lain makabakteri yang dilihat tersebut berbentuk coccus
(bulat)
Kesimpulan
• Untuk mengamati bentuk atau ciri-ciri suatu mikroba • Pewarnaan gram dibagi menjadi dua hasil yaitu gram
menggunakan mikroskop dapatdigunakan dua cara yaitu positif dan gram negative,tergantung dari reaksi dinding sel
mengamati sel mikroba yang masih hidup tanpa terhadap tinta safranin atau Kristal violet.
diwarnaidan mengamati sel mikroba yang telah mati • Perbedaan dasar antara bakteri gram positif dan negatif
dengan diwarnai.
adalah pada komponendinding selnya
• Untuk mengidentifikasi suatu biakan murni bakteri hasil
• Bakteri katalase positif bisa menghasilkan gelembung-
isolasi mula-mula diamatimorfologi sel secara mikroskopik
gelembung oksigen karenaadanya pemecahan
melalui pengecetan atau pewarnaa, salah satunyaadalah
H2O2(hidrogen peroksida) oleh enzim katalase yang
dengan pewarnaan gram.
dihasilkanoleh bakteri itu sendiri
• Pewarnaan bakteri bertujuan untuk memudahkan melihat
• Bakteri katalase negatif tidak menghasilkan gelembung-
bakteri dengan mikroskop,memperjelas ukuran dan bentuk
gelembung.
bakteri, untuk melihat struktur luar dan strukturdalam
bakteri seperti dinding sel dan vakuola, menghasilkan sifat-
sifat fisik dan kimiayang khas daripada bakteri dengan zat
warna, serta meningkatkan kontrasmikroorganisme dengan
sekitarnya.