METODA SPESIFIK DLM

PELABELAN

DEDI NOFIANDI, M.Farm, Apt

Dlm Kedokteran Nuklir, rudionuklida yg sering dipakai sbg
RADIOFARMASETIKA :
- 99mTc : 80%
- 131 I : 15%
-Sisanya : 5%
IODINASI
Proses Iodinasi telah digunakan sec ekstensif sbg pelabelan utama dr
senyawa obat dan biologik.
Iodin adalah elemen metal milik grup Halogen VIIA.
Nomor atom 53 dan hanya stabil sbg Isotop ¹²⁷I.
123
I isotop cocok utk prosedur diagnostik IN VIVO krn mempunyai Half Life
yang baik 13 jam dan energi Foton 159 keV dg menggunakan dosis rendah
shg tak membahayakan. Hanya krn Isotop dibuat dg Siklotron, menjadi
mahal.
• Isotop 125I umumnya digunakan utk membuat Antigen
RIA dan seny lain utk prosedur IN VITRO, memp Half
Life panjang 60 hari dan tidak mengeluarkan partikel.
Tetapi mengeluarkan foton dg energi rendah, 27-35 keV,
shg tidak cocok utk pencitraan.
• Isotop 131 I adl yg banyak dipakai sec luas dlm klinik,
khusus utk studi In Vivo, Half Life 8 hari, dan Foton 364
keV., mengeluarkan partikel β, shg memberi radiasi yg
lebih besar dibanding 123I.
• Isotop 132 I memp HL pendek 2-3 jam dan mengeluarkan
sinar gama maka digunakan sangat terbatas.(hanya
untuk studi klinis)
METODA IODINASI
Terdapat 5 metoda Iodinasi :
1. TRIIODIDA
2. MONOKLORIDA IODIN
3. KLORAMIN T.
4. ELEKTROLITIK
5. ENZIMATIK.
• Iodinasi Molekul: dilakukan oleh sifat oksidasi dr I.
Dlm btk teroksidasi, Iod berikatan sec kuat dg mol
aromatik. Dlm bentuk tereduksi, Iod tak berikatan dg
kuat. PH utk Iodinasi antara 6-9, tetapi utk Iodinasi dg
protein pd pH alkali. Temperatur dan lama proses
Iodinasi tergantung pd tipe senyawa yg akan direaksikan
dan metoda yg dipakai
METODA TRIIODIDA

• Metoda ini tdr dr penambahan radioiodin kpd senyawa

yg dilabel dlm campuran Iodin dan KI:

I₂ + KI + I¹³¹ + R --- ¹³¹I R + ¹³¹IK + RI

R adl seny organik yg dilabel. Pelabelan protein

dg cara ini akan terjadi Denaturasi minimum,
tetapi hasil rendah hanya 10-30%.
Dengan adanya Iod yg dingin maka spes aktiv
dr produk rendah.
MONOKLORIDA IODIN

• Pertama kali RadioIodin diekulibrasi (diseimbangkan) dg

127I Monoklorida dlm HCl encer, campuran itu langsung

ditambahkan pd seny yg akan dilabel, pd pH dan Temp

yg spesifik.
• Hasilnya 50-80%.
• Namun Iod dingin dan Iod Monoklorida dpt berekasi dg
molekul, berakibat merendahkan Spesifik Aktiv dr Seny
Label, shg hasilnya menjadi tak dpt diperkirakan krn
tergantung pd jumlah Iod Monoklorida yg ditambahkan.
KLORAMIN T
• Kloramin T adl garam Na dari Na.monokloro Toluen
sulfonamida, suatu seny pengoksidasi sedang.
• Pertama seny yg akan dilabel dan Kloramin T
ditambahkan larutan ¹³¹I-NaI. Kloramin –T mengoksidasi
Iod menjadi I yg reaktif, yg kemudian melabeli senyawa.
• Oleh krn tak ada Iod dingin, maka seny produk
mempunyai Akt Spes yg tinggi, efisiensi pelabelan sangat
tinggi, hampir 100%.
• Namun Kloramin T sangat reaktif dan dpt menyebabkan
Denaturasi Protein.
• Kadang Oksidan sedang yg lain dpt menggantikan
Kloramin T spt: NATRIUM NITRIT dan NA HIPOKLORIT.
• Metoda Monoklorida Iod dan Kloramin T sering dipakai pd
berbagai Iodinasi.
METODA ELEKTROLITIK

• Banyak asam amino dan protein dpt diradioiodinasi dg

cara ini.
Cara : Elektrolisis dr campuran Radioiodida dan material
yg akan dilabel.
• Dlm sel elektrolitik, ruang katoda dan anoda dipisahkan
oleh Kantung Dialisis yg berisi katoda dlm rendaman
garam, sebaliknya anoda dlm ruangan berisi campuran
elektrolit.
• Elektrolisis membebaskan Iod yg reaktif, yg akan
melabel senyawa. Perlahan tapi pasti, pembebasan Iod
menyebabkan Iodinasi seny yg seragam, krn bebas dr
Iod pembawa maka hasil pelabelan hampir 80%.
METODA ENZIMATIK

• Enzim dipakai biasanya LAKTOPEROKSIDASE,

KLOROPEROKSIDASE, dan H2O2 dlm jumlah sangat
kecil (nanomolar), ditambahkan pd campuran Iodinasi
yang tdr dari radioiodine dan seny yg akan dilabel.
• H2O2 akan mengoksidasi Iod membentuk Iod yg reaktif,
kemudian meiodinasi senyawa.
• Denaturasi Protein atau perubahan molekul organik
minimal, krn hanya dipakai H2O2 yg sangat sedikit.
• Hasil antara 60-85% dg Spes Aktiv yg tinggi.
• Cara ini bagus dipakai utk melabel Protein dan
Hormon2.
PASCA RADIOIODINASI
Pembersihan Iod bebas dilakukan dg :
- Ekstraksi dg CCl4
- Presipitasi
- Pertukaran Ion.
- Filtrasi Gel
- Dialisis.
• Pemilihan tergantung pd seny yg dilabel.
• Sterilisasi bisa dg Autoclave, tetapi untuk Protein hanya dg cara
Filtrasi Milipor.
• Pd umumnya Iod berikatan dg seny aromatik dg kuat, sebaliknya dg
seny alifatik agak tidak stabil. Pd protein Iod mengikat gugus
TIROSIL kemudian cincin IMIDAZOL dr HISTIDIN, selain itu juga
Iod mengikat as. Amino dan ggs Sulfhidril tetapi reaksinya
reversibel. Sebagian Alifatik tak jenuh, asam lemak dan lemak
netral spt: a. oleat dan triolein, dpt dilabel dg radioiodin, hanya
Iodinasi akan memecah ikatan rangkap mol, shg mengubah sf kimia
dan biologi.
SENYAWA YG DILABEL RADIOIOD

• Human Albumin Serum (HAS), fibrinogen, insulin,

globulin, hormon, enzim.
• HAS untuk tumor otak, penumpukan darah.
• Rose Bengal: pencitraan liver.
• MAA (MAKRO AGREGAT ALBUMIN): paru-paru
• Fibrinogen: deteksi trombus.
PELABELAN DG 99mTc
Sifat-sifat Tc.:
• Hampir 80% seny RF adl seny yg dilabel 99mTc.
• Dipakai krn memp sft fisik dan radiasi yg khas.
• Half Life fisik selama 6 jam, bebas radiasi β, shg dg
milicuri Tc radioaktif aman utk pasien.
• Memberikan citra yg bagus dg monokromatik foton 140
keV.
• Tersedia dlm keadaan: steril, bebas pirogen dr
Generator 99Mo99mTc.
• Tc adl metal transisi dr Grup VIIB (Mn, Tc, Re), no atom
43, di alam ada Tc yg tak stabil, Yang stabil bervalensi
7+ dan 4+, sebaliknya valensi 2+, 3+, 5+, dan 6+ tak
stabil.
REDUKSI TEKNISIUM

• Dibuat di generator Moly, menggunakan 99mTc-NaTcO4.

• Sec kimia 99mTcO4- adalah non reaktif, tak dapat
melabeli seny dg penambahan langsung.
• Cara utk mereduksi, menurunkan 7+ menjadi 3+, 4+
atau 5+.
• Metoda/Sistem utk reduksi :
1- SnCl2.2H2O, A. Askorbat, Feriklorida, HCl pekat,
NaBH4, Fero sulfat.
2- Elektrolisis campuran antara Na perteknetat, seny yg
akan dilabel, dg anoda dr Zirkonium.
REAKSI KIMIA
3 Sn 2+ ---- 3Sn 4+ + 6e -
2 99m TcO4- + 16 H+ + 6e- - 2 99mTc 4+ + 8H2O
——————————————————————————-----
2 99mTcO4- + 16H+ + 3Sn 2+  2 99mTc 4+ + 3 Sn 4+ + 8H2O

Tc 7+ telah diubah jadi 99mTc 4+

99m

Bentuk tereduksi lain spt 99mTc3+ atau 99mTc5+ mungkin

terbentuk pd kondisi berbeda.
Penelitian menghasilkan bhw:
- Dg milimol 99Tc dengan Sn 2+ dlm bufer sitrat dan pH 7, 99Tc
akan tereduksi menjadi bentuk 5+, yg sec perlahan jadi 4+
- 99Tc tereduksi menjadi 4+ oleh penambahan Sn2+ pd HCl pkt
PELABELAN DG TEKNISIUM

• Jenis 99mTc sangat reaktif dan berkombinasi dg berbagai

macam seny pengkelat (CA). Skema reaksi:
99mTc tereduksi + Chelating agent  99m Tc-

Chelate.
• CA umumnya memberi sepasang elektron bebas untuk
membentuk ikatan kovalen koordinat dg 99mTc.
• Gugus kimia spt -COO-, -NH2, -SH adl donor elektron
kpd DTPA, glukohepton, berbagai Protein.
• Kelat-99mTc mempunyai muatan negativ, akan migrasi ke
Anode pd Elektrolisis.
PENGARUH OKSIGEN

• Adanya O dan seny pengoksidasi, maka 99mTc yang

sudah tereduksi akan mudah teroksidasi.
• Maka seny berlabel 99mTc harus bebas dr O maupun
Seny pengoksidasi.
• Diberi A.Askorbat atau Na Askorbat sbg inhibitor.
HIDROLISIS

• Kemungkinan terjadi adanya Hidrolisis dlm lrt air.

• 99mTc yang sudah tereduksi akan bereaksi dg air
menghasilkan berbagai jenis hidrolisat, tergantung pd
pH, waktu dan senyawa asing misalnya 99mTcO2,
99mTcO2⁺ dan 99mTcOOH⁺.
• Hidrolisis bersaing dg proses terbentuknya kelat, akan
mengurangi jumlah hasil Kelat-99mTc.
• Hasil hidrolisis juga akan mengganggu pd tes diagnostik
terlebih dlm jumlah cukup banyak dlm RF.
 PENGARUH STANUM KLORIDA
Kelemahan penggunaan SnCl2 adalah :
• mengalami hidrolisis dlm pelarut air, pd pH 6-7, membentuk
koloid yg sukar larut.
• Koloid yg terbentuk akan mengikat 99mTc tereduksi shg
bersaing dg seny pengkelat (CA) dlm proses pelabelan.
• Untuk mencegah hal tsb, maka diberi asam utk mencegah
hidrolisis Sn sebelum reduksi Tc jika preparasi memakai
bahan dasar, bukan suatu kit.
• Pengaruh buruk Hidrolisis dan Sn diatasi dg menambahkan
CA yg cukup, yg akan mengikat Sn dan 99mTc tereduksi shg
mencegah Hidrolisis.
• Rasio penambahan CA thd Sn tergantung pd Konstan afinitas.
Bila CA lemah (spt Pospat) jenis hidrolisat pd preparasi cukup
tinggi.Bila koef afin. tinggi spt DTPA, mk hidrolisat minim
BERBAGAI JENIS TEKNISIUM

Pd preparasi Senyawa berlabel 99mTc, ada 3 jenis Tc:

1 99mTc bebas a.l. 99mTcO4- yg tidak direduksi Sn.
2 99mTc yg terhidrolisa a.l. 99mTcO2, yg tak bereaksi dg
Seny pengkelat (CA), termasuk 99mTC yg berikatan dg
Sn2+hidrolisat.
3 Ikatan 99mTc-Kelat, senyawa berlabel yg diinginkan.
• Pada preparasi rutin, fraksi terbanyak adalah no 3.
• No 1 dan 2 tak diinginkan, hrs dibuang agar tak
mengganggu pd tes diagnostik.
• Pengukuran sec Polarografi dan titrasi Iodometri
dipakai utk mengetahui Valensi Tc tereduksi.
PEMAKAIAN DI KEDOKTERAN NUKLIR
Radiofarmasetika (RF) yg memakai 99mTc di
Kedokteran Nuklir a.l.:
• - 99mTc-Na perteknetat
• -99mTc-HAS label
• -99mTc-MAA
• -99mTc-makroagregat Feri Hidroksida
• -99m Tc-difosfonat
• -99mTc-pirofosfat.
• -99mTc-koloid sulfur
• -99mTc – glukoheptonat.
• -99mTc-sel darah merah.
• -99mTc DTPA .
• - 99mTc DMSA
KIT
• Adanya kit akan memudahkan produksi 99mTc –RF di
unit Radiofarmasi.
• Kit mempunyai umur panjang, dpt dibeli dan disimpan utk
preparasi setiap hari, pelabelan dg 99mTc dapat dibuat
hanya dg menambahkan TcO pada kit.
• Kit disiapkan dari Larutan Master yg berisi seny yg akan
dilabel dan larutan asam dr Sn dlm proporsi yang pas.
• pH dibuat pH 5-7 dg NaOH, alikuot lrt dibagikan
(dispens) kedlm vial kit individual. Larutan dilipolisa
(freeze-dried) dan vial disemprot dan diisi Nitrogen steril.
• Lipolisis membuat material kering dlm vial utk mudah larut
dlm air dan membantu proses pelabelan dr kelat.
• Pembuatan dilakukan dg material steril, kondisi aseptik
dlm LFH isi N2 dibawa tekanan positiv.
…..KIT
• Senyawa Sn yang dipakai berbagai pabrik a.l: SnCl2, SnF2, Sn-
sitrat, Sn-tartrat, Sn-pirofosfat.
• SnCl2 yang biasa dipakai.
• Dlm preparasi Kit, Sn dan asam ditambahkan, akan terjadi
Kompleks dg CA:
Sn2+ + Kelat - Sn-Kelat.
• Bila pH dinaikkan, hidrolisis thd Sn tak terjadi krn Sn2+ telah
berikatan dg Kelat dg jumlah seny kelat yg besar.
• Demikian juga dikala 99mTcO4- ditambahkan pd CA yg dilipolisis
dlm vial kit. Jumlah Sn yg ditambahkan ke dlm kit harus lebih dr
cukup agar dpt mereduksi Tc dlm jumlah nanomol. Tetapi Sn tak
boleh berlebihan, bisa hidrolisis. Biasanya CA diberikan sdk
berlebih.
MENGOPTIMALKAN PRODUK SENY BERLABEL
99mTc

• PADA SETIAP KIT, JUMLAH AWAL Sn2+ DAN SENY

PENGKELAT ADALAH SANGAT PENTING.
• BILA TERLALU BANYAK tin DIGUNAKAN 
KEMUNGKINAN HIDROLISIS tin MENINGKAT, DAN
tin YG TERHIDROLISIS AKAN BERKOMPETISI DG
99mTc YG TEREDUKSI MEMBENTUK 99mTc-Sn-

KOLOID, SHG AKAN MENURUNKAN HASIL KELAT

BERLABEL.
• TERLALU SEDIKIT tin MENYEBABKAN REDUKSI YG
TIDAK KOMPLET DR 99mTc PD TINGKAT OKSIDASI
YG DIINGINKAN, BERAKIBAT KECILNYA HASIL
KOMPLEKS-99mTc.
 Lanjutan…
• SENY PENGKELAT HARUS CUKUP BANYAK UNTUK
MEMBUAT KOMPLEKS DG tin  MENCEGAH
HIDROLISIS tin DAN Tc PADA pH 6-7 SETELAH
PENAMBAHAN 99mTcO4 PADA KIT, SHG AKAN
MENAIKKAN JUMLAH HASIL 99mTc-KOMPLEKS.
• UNTUK SENY PENGKELAT YG LEMAH, RASIO DG tin
HRS LEBIH BESAR  UNTUK MENCAPAI NILAI
OPTIMUM TIAP KIT HRS DILAKUKAN TRIAL AND
ERROR
PENGGUNAAN KOLOID 99mTc
 PARTIKEL2 KOLOID TAK TERLIHAT DIBAWAH MIKROSKOP
RINGAN TETAPI DPT DIDETEKSI DIBWH ULTRA
MIKROSKOP ATAU MIKROSKOP ELEKTRON. KOLOID
SERING DISEBUT “MIKRO AGREGAT” DG PARTIKEL 0,5 -5
µM.
 KOLOID YG SERING DIPAKAI : KOLOID EMAS 195Au DAN
KOLOID SULFUR 99mTc.
 PARTIKEL INI DLM TUBUH DIBUANG OLEH SEL
RETIKULOENDOTELIAL DAN DPT DIPAKAI UNTUK
PENCITRAAN : liver, spleen, bone marrow.
 KOLOID DG UKURAN LEBIH KECIL SPT KOLOID 99mTc-
ANTIMONI SULFIDA DIPAKAI PD “LIMPOSCINTIGRAFI”.
 PARTIKEL BESAR ATAU MAKROAGREGAT > 1µM, DPT
DILIHAT DIBWH MIKROSK RINGAN. UKURAN DPT
DITENTUKAN DG HEMOSITOMETER DIBWH MIKR RINGAN,
CONTOH : 99mTc-MAA DAN ALBUMIN MIKROSPERE DG
UKURAN 15-100µM.
 PARTIKEL2 TERJERAT (trapped) DLM KAPILER PARU2 DAN
DIPAKAI UTK PENCITRAAN PARU-PARU