FRAKSINASI SEL

Departemen Biologi Kedokteran

FRAKSINASI SEL
Tujuan : Melakukan Pemisahan komponen sel melalui cara sentrifugasi

FRAKSINASI =

HOMOGENAT HATI TIKUS

Fraksinasi sel
Bahan : Homogenat hepar rat/tikus besar PBS (Phospat Buffer Saline) Methylen blue Janus Green Alat :Mesin centrifugasi Kaca Objek, gelas penutup Pipet transfer Tabung microfuge Mikroskop cahaya

Homogenat sel

Pellet Sel utuh

Sentrifugasi 5000 rpm ,10 menit Supernatan Sentrifugasi 12.000 rpm, 15 menit Supernatan Sentrifugasi 100.000 G, 60 menit Supernatan Sentrifugasi 200.000 G, 3jam Supernatan (Sitosol)

Serpihan debris nukleus Pellet Mitokhondria lisosom Pellet Membran Retikulum endoplasmik Aparatus golgi Pellet Ribosom makromolekul

HOMOGENAT HATI TIKUS DI SENTRIFUS 5000 RPM 15

PELET + 100 uPBS + METYLEN BLUE (1;1) UNTUK MELIHAT INTI (40X) SUPERNATAN (New eppendorf) SENTRIFUSE 12.000 RPM 10 + 12.000 RPM 5

SUPERNATAN DIBUANG

MELIHAT MITOKONDRIA (100X)= PELET + 100 u PBS + 200 ul JANUS GREEN

Pada waktu praktikum, telah disediakan homogenat hepar rat/tikus,yang Dibuat dengan menghancurkan hepar tikus menggunakan homogenizer, Dan sebelumnya telah diberi larutan sukrosa konsentrasi 2 %. Tahap I 1. Ambilah 1,5 ml homogenat pada tabung microfug, Dan putarlah demgam sentrifugasi pada 5000 rpm selama 15 menit. 2. Pisahkan supernatan dan pidahkan ke tabung microfuge yang baru. 3. Encerkan endapan/ pallet dengan menambahkan 200 ul PBS, kemudian tambahkan methylen blue dengan perbandingan 1:1. Teteskan pada kaca objek, dan periksalah di bawah mikroskop dengan pembesaran 40 X 10, perhatikan dan amati komponen sel yang didapat buatlah catatatn maupun gambar dalam buku.

Tahap II 1. Putar kembali supernatan yang dibuat sebelumnya dengan kecepatan 12.000 rpm selama 10 menit dan 5 menit. 2. Pisahkan endapan, dan supernatan dibuang 3. Encerkan kembali endapan/pellet dengan menambahkan 100 ul PBS dan berilah janus green dengan perbandingan 1 :1. Teteskan pada kaca objek, dan periksa dibawah mikroskop dengan pembesaran 10 X 100; perhatikan dan amati organel sel yang di dapat. Buatlah catatan maupun gambar dalam buku.

Debris sel

nukleus mitokondria

mitokondria