ISOLASI KURKUMIN DARI RIMPANG KUNYIT (Curcuma Domestica Valet)

DISUSUN OLEH:

FATHUR ROHMAN YUSUP FIAN SHAIBIR RAHMAN KHARINA SEPTI LESTARI LINGGA PRANATA MERIANI SIMANGUNSONG NOVI NURAINY FAUZI NUR OLIS NURUL KHOIRIYAH LUTFI

21111071 21111072 21111081 21111082 21111086 21111087 21111088 21111089

PROGRAM SARJANA FARMASI LABORATORIUM FITOKIMIA SEKOLAH TINGGI FARMASI BANDUNG 2014

I.

TINJAUAN PUSTAKA

A. Tinjauan Botani a. Klasifikasi Rimpang Kunyit Kerajaan Divisi Subdivisi Kelas Ordo Famili Genus Spesies : Plantae : Spermatophyta : Angiospermae : Monocotyledonae : Zingeberales : Zingebreaceae : Curcuma : Curcuma Domestica Valet

b. Morfologi Tanaman kunyit tumbuh bercabang dengan tinggi 40-100 cm. Batang merupakan batang semu, tegak, bulat, membentuk rimpang dengan warna hijau kekuningan dan tersusun dari pelepah daun (agak lunak). Daun tunggal, bentuk bulat telur (lanset) memanjang hingga 1040 cm, lebar 8-12,5 cm dan pertulangan menyirip dengan warna hijau pucat. Berbunga majemuk yang berambut dan bersisik dari pucuk batang semu, panjang 10-15 cm dengan mahkota sekitar 3 cm dan lebar 1,5 cm, berwarna putih/kekuningan. Ujung dan pangkal daun runcing, tepi daun yang rata. Kulit luar rimpang berwarna jingga kecoklatan, daging buah merah jingga kekuning-kuningan.

B. Tinjauan Kimia a. Tinjauan Kimia dalam tanaman Kunyit mengandung senyawa yang berkhasiat obat, yang disebut kurkuminoid yang terdiri dari kurkumin , desmetoksikumin sebanyak 10% dan bisdesmetoksikurkumin sebanyak 1-5% dan zat- zat bermanfaat lainnya seperti minyak atsiri yang terdiri dari Keton sesquiterpen, turmeron, tumeon 60%, Zingiberen 25%, felandren , sabinen , borneol dan sineil. Kunyit juga mengandung Lemak sebanyak 1 -3%, Karbohidrat sebanyak 3%, Protein 30%, Pati 8%, Vitamin C 4555%, dan garam-garam mineral, yaitu zat besi, fosfor, dan kalsium.

b. Tinjauan kimia Khusus Kurkumin merupakan senyawa polifenol yang dapat ditemukan pada temulawak, temugiring dan kunyit. Kurkumin (diferuloylmethane) adalah senyawa aktif yang ditemukan pada kunir, berupa polifenol dengan rumus kimia C21H20O6. Kurkumin memiliki dua bentuk tautomer: keton dan enol. Struktur keton lebih dominan dalam bentuk padat, sedangkan struktur enol ditemukan dalam bentuk cairan. Senyawa turunan kurkumin disebut kurkuminoid, yang hanya terdapat dua macam, yaitu desmetoksikurkumin dan bis-desmetoksikurkumin, sedangkan in vivo, kurkumin akan berubah menjadi senyawametabolit berupa dihidrokurkumin atau tetrahidrokurkumin sebelum kemudian dikonversi menjadi senyawa konjugasimonoglukoronida (Aggarwal dan Shishodia, 2006).

Gambar 2.4 Struktur curcumin (Katsuyama et al., 2007)

C. Sifat-sifat kestabilan kimia Kurkuminoid dikenal sebagai zat warna kuning yang terkandung dalam rimpang. Kenyataan menunjukkan bahwa kurkumin yang diperoleh dari rimpang kunyit selalu tercampur dengan dengan senyawa analognya yaitu demetoksi kurkumin dan BIS demetoksi kurkumin. Campuran ketiga senyawa tersebut dikenal dengan

kurkuminoid. Kurkumin mempunyai rumus molekul C23H2006 dengan BM 368,37 serta titik lebur 183C, tidak larut dalam air dan eter, larut dalam etil asetat, metanol, etanol, benzena, asam asetat glasial, aseton dan alkali hidroksida (Kiko, 1983) Kurkumin merupakan senyawa yang peka terhadap lingkungan terutama karena pengaruh ph dan suhu, cahaya serta radikal-radikal.

D. Ph dan suhu Sifat kurkumin yang menarik adalah perubahan warna akibat perubahan ph lingkungan. Dalam suasana asam kurkumin berwarna kuning atau kuning jingga sedangkan dalam suasana basa berwarna merah. Hal terrsebut dapat terjadi karena adanya sistem tautomeri pada molekulnya. Untuk mendapatkan stabilitas yang optimum dari sediaan kurkumin maka pH nya dipertahankan kurang dari 7. Pada pH lebih dari 7 kurkumin sangat tidak stabil dan mudah mengalami disosiasi (Tonnesen dan Karlsen, 1985) E. Cahaya Sifat kurkumin yang penting adalan sensitivitasnya pada cahaya. Kurkumin akan mengalami dekomposisi jika terkena cahaya. Produk degradasinya yang utama adalah asam ferulat, aldehid ferulat, dehidroksinaftalen, vinilquaikol, vanilin dan asam vanilat.

F. Radikal hidroksil Kurkumin memperlihatkan kepekaan terhadap radikal bebas sebagai contoh kurkumin dapat bereaksi selama atom H dilepas atom radikal hidroksil ditambahkan pada molekul kurkumin. Pengurangan sebuah atom H menghasilkan pembentukan radikal kurkumin yang terdekomposisi atau menjadi stabil dengan sendirinya (Van der Good, 1995)

G. Tinjauan Farmakologi Kurkumin dikenal karena sifat antitumor dan antioksidan yang dimilikinya, selain banyak kegunaan medis seperti; melindungi saraf, mengurangi risiko radang otak vasospasma[3] dan mengembalikan homeostasis energi pada sistem otak yang terganggu akibat terluka atau trauma. menghambat dan mengurangi penumpukan plak amiloid-beta pada penderita Alzheimer. melindungi hati, antara lain dari hemangioendotelioma,

hepatokarsinoma, Hepatitis B. melindungi pankreas dari akibat rasio sitokina yang berlebihan, bahkan setelah transplantasi, serta menurunkan resistansi terhadap insulin dan leptin melindungi sel Leydig dari pengaruh alkohol. menurunkan peradangan pada jaringan adiposa.

selain itu kurkumin juga: menghambat indoleamina 2,3-dioksigenase, sebuah enzim yang berperan dalam degradasi triptofan pada sel dendritik yang distimulasi oleh LPS atau interferon, dan menghambat matangnya sel dendritik. Ekspresi siklo oksigenase-2 yang diinduksi oleh LPS dan produksi prostaglandin E2 akan meningkat, dan mengakibatkan de-ekspresi molekul CD80, CD86 dan MHC I dan menghambat produksi sitokina IL-12 p70 dan TNF-. menghambat angiogenesis. menghambat lintasan COX dan LO pada metabolisme eikosanoid. Kurkumin sangat efektif untuk menghambat pertumbuhan sel kanker, seperti kanker payudara, namun menunjukkan sifat toksik terhadap kultur sel punca. II. METODELOGI

a. Penapisan Fitokimia Analisis fitokimia merupakan uji kualitatif untuk mengetahui keberadaan golongan senyawa-senyawa aktif yang terkandung dalam tanaman kunyit segar. Analisis fitokimia dilakukan berdasarkan metode Harbone (1987). Identifikasi yang dilakukan adalah uji alkaloid, uji tanin, uji flavonoid, uji saponin, uji steroid, dan uji triterpenoid. Uji alkaloid dilakukan dengan cara menggerus satu gram sampel dan ditambahkan 1,5 mL kloroform dan 3 tetes amoniak. Fraksi kloroform dipisahkan dan diasamkan dengan 5 tetes H2SO4 2M. Fraksi asam dibagi menjadi 3 tabung kemudian masing-masing ditambahkan pereaksi Dragendorf, Meyer dan Wagner. Adanya alkaloid ditandai dengan terbentuknya endapan putih pada pereaksi Meyer, endapan merah pada pereaksi Dragendorf, dan endapan coklat pada pereaksi Wagner. Uji flavonoid dilakukan dengan cara menambahkan 0,5 gram sampel dengan metanol sampai terendam lalu dipanaskan. Filtrat

ditambahkan dengan 5 tetes H2SO4 terbentuknya warna merah karena penambahan H2SO4 menunjukkan adanya senyawa

flavonoid.

Uji saponin dilakukan dengan cara mencampurkan 0,5 gram sampel dengan air secukupnya dan dipanaskan selama lima menit. Larutan tersebut didinginkan kemudian selama dikocok timbulnya busa selama 10 menit menunjukkan adanya saponin.

Uji triterpenoid dan steroid dilakukan dengan cara menambahkan satu gram sampel dengan 2 mL etanol lalu dipanaskan dan disaring. Filtratnya diuapkan kemudian ditambahkan dengan eter. Lapisan eter ditambahkan dengan pereaksi Liebermen Burchard (3 tetes asetat anhidrat dan 1 tetes H2SO4 pekat). Warna merah atau ungu yang terbentuk menunjukkan adanya triterpenoid dan warna hijau

menunjukkan adanya steroid. Uji tanin dilakukan dengan cara menambahkan lima gram sampel ditambahkan air kemudian dididihkan selama beberapa menit. Disaring dan filtrat ditambahkan dengan 3 tetes FeCl3. Warna biru tua atau hitam kehijauan yang terbentuk menunjukkan adanya tanin. b. Ekstraksi (Metode 1) dan alasan Metode Pelarut Waktu : Maserasi : Etanol 96% : 24 jam sebanyak 3x pengulangan Proses ekstraksi digunakan metode maserasi dengan bantuan pelarut etanol 96%, alasannya selain etanol 96% sebagai pelarut yang cocok untuk melarutkan senyawa senyawa bahan alam termasuk kurkumin, etanol juga merupakan pelarut universal yang banyak digunakan pada proses ekstraksi, etanol 96% juga digunakan untuk menghambat pertumbuhan bakteri selama proses maserasi, dan kenapa digunakan yang 96% agar kandungan air nya sedikit, karena air merupakan media pertumbuhan bakteri. Setelah didapat ekstrak etanol kemudian di saring dan diuapkan dengan menggunakan evaporator sampai pekat, untuk menghilangkan pelarut etanolnya.

c. Pemantauan Ekstrak Metode Fase diam Fase Gerak : Kromatografi Lapis Tipis : Silika Gel : kloroform:heksan (4:6)

Pemantauan Ekstrak dilakukan dengan membandingkan nilai Rf kurkumin dari ekstrak dengan pembandingnya yang berasal dari literatur hasil penelitian. Metode pemantauannya dengan menggunakan KLT yang menggunakan fase diam silica gel dan fase geraknya kloroform:heksan (4:6). d. Fraksinasi (Metode 1) dan alasan Metode Pelarut Waktu : ECC (Corong pisah) : Methanol : Etil asetat (1:1) : 3x pengulangan Pada fraksinasi pertama ini digunakan metode Ekstraksi Cair-cair dengan bantuan pelarut campur methanol:etil asetat (1:1), sehingga terbentuk 2 fase, fase pertama yang diatas adalah methanol kerana Bj nya (0,791 g/ml) lebih kecil dari pada etil asetat (0.894 g/ml). dari proses ini kurkumin berada pada fase etil asetat.

e. Pemantauan Fraksi Metode Fase diam Fase Gerak : Kromatografi Lapis Tipis : Silika Gel : kloroform:heksan (4:6)

Pemantauan Ekstrak dilakukan dengan membandingkan nilai Rf kurkumin dari ekstrak dengan pembandingnya yang berasal dari literatur hasil penelitian. Metode pemantauannya dengan menggunakan KLT yang menggunakan fase diam silica gel dan fase geraknya kloroform:heksan (4:6).

f.

Fraksinasi (Metode 2) dan alasan Metode Fase diam Fase Gerak : Kromatografi Kolom : Silika Gel : kloroform:heksan (4:6)

Pada fraksinasi kedua ini digunakan metode kromatografi kolom bertujuan untuk mengisolasi komponen kurkumin dari campurannya. Pada kromatografi kolom digunakan kolom dengan adsorben silika gel karna kolom yang dibentuk dengan silika gel memiliki tekstur dan struktur yang lebih kompak dan teratur. Silika gel memadat dalam bentuk

tetrahedral raksasa, sehingga ikatannya kuat dan rapat. Dengan demikian, adsorben silika gel mampu menghasilkan proses pemisahan yang lebih optimal. Silika gel ada 2 macam : GF245, dengan G melambangkan gypsum (CaSO4), F melambangkan floroscene, dan angka 245 menunjukan besarnya panjang gelombang yaitu 245 nm. Silika jenis ini sering digunakan pada kromatografi lapis tipis (TLC). Dengan tanpa adanya gypsum dan floroscene. Silika jenis ini biasa figunakan pada kromatografi kolom. Silika gel dapat membentuk ikatan hidrogen di permukaannya, karna pada permukaannya terikat gugus hidroksil. Oleh karnanya, silika gel sifatnya sangat polar. Sementara itu, fasa gerak yang digunakan (dalam percobaan ini, kloroform:heksan 4:6) sifatnya non polar. Maka pada saat campuran dimasukan, senyawa-senyawa yang semakin polar akan semakin lama tertahan difasa stasioner, dan senyawa-senyawa yang semakin tidak kurang polar akan terbawa keluar kolom lebih cepat Kromatografi kolom dilihat dari jenis fasa diam dan fasa geraknya dapat dibedakan : a. Kromatografi fase normal Kromatografi dengan kolom konvesional dimana fase diamnya normal bersifat polar, misalnya silica gel, sedangkan fasa geraknya bersifat non polar. b. Kromatografi fase terbalik Kromatografi dengan kolom yang fase diamnya bersifat non polar, sedangkan fase geraknya bersifat polar, kebalikannya dari fase normal. Dalam proses pemisahan dengan kromatografi kolom, adsorben silika gel harus senantiasa basah karna, jika dibiarkan kering kolom yang terbentuk dari silika gel bisa reta, sehinga proses pemisahan zat tidak tidak berjalan optimal. Selain itu, kondisi yang senantiasa basah

berperan untuk memudahkan proses elusi (larutan melewati kolom) dalam kolom. Senyawa kurkumin dapat mengalami penurunan dengan lepasnya gugus OCH3 dalam setiap penurunan. Kurkumin akan mengalami 2 kali penurunan, dimana turunan pertamanya adalah demetoksi

kurkumin dan turunan keduannya adalah bis-dimetoksi kurkumin. Kurkumin akan terelusi paling akhir (berada paling bawah) karna sifatnya yang polar. Perlu diingat bahwa penurunan ini tak mungkin terjadi dengan hanya melakukan kromatografi, tapi ada perlakuan khususnya. Ketika senyawa kurkumin telah mengalami degradasi, akan menjadi senyawa demetoksi kurkumin (terdapat pada bagian tengah) yang lebih polar dari kurkumin. Karna telah kehilangan sebuah gugus OCH3. Senyawa inimerupakan turunan kedua dari senyawa kurkumin. Karna tidak lagi mengandung gugus OCH3, maka senyawa ini merupakan senyawa yang bersifat paling polar dari antara ketiga jenis senyawa kurkumin. Dengan begitu, senyawa ini akan terelusi terlebih dahulu (berada pada lapisan yang paling atas) karna fasa diam yang digunakan (silika gel) bersifat polar. g. Pemantauan Subfraksi Metode Fase diam Fase Gerak : Kromatografi Lapis Tipis : Silika Gel : kloroform:heksan (4:6)

Pemantauan Ekstrak dilakukan dengan membandingkan nilai Rf kurkumin dari ekstrak dengan pembandingnya yang berasal dari literatur hasil penelitian. Metode pemantauannya dengan menggunakan KLT yang menggunakan fase diam silica gel dan fase geraknya kloroform:heksan (4:6). h. Pemurnian dan Uji Kemurnian Metode Fase diam Fase Gerak : Kromatografi Lapis Tipis : Silika Gel : kloroform:etanol:asam asetat (94:5:1)

Uji pemurnian dilakukan dengan cara KLT preparatif .Berdasarkan Chearwae dkk.(2004),analisa KLT ekstrak kasar kurkumonid dengan menggunakan fase gerak kloroform : etanol : asam asetat dengan perbandingan 94: 5 : 1 (v/v/v) juga menghasilkan 3 spot utama berwarna orange . Spot yang pertama kali terelusi ( paling non polar ) yaitu kurkumin,kemudian bisdemetoksikurkumin. demetoksikurkumin dan yang terakhir

Setelah itu dilanjutkan dengan di pantau dengan menggunakan alat spektofotometer UV-Vis (400-700nm).

i.

Karakterisasi dan Identifikasi Kurkumin bersifat tidak stabil terhadap pH pada suasana asam pH 1-7,maka kurkumin akan berwarna kuning cerah akibat gugus

diferuloylmethanes berada dalam bentuk netral.pada pH basa (>7,5) warnanya berubah menjadi warna orens hingga kemerahan. BM 368,37 serta titik lebur 183C.

III.

DAFTAR PUSTAKA Wahyuni.Hardjono,A.Yamrewav PH.2004. Ekstraksi Kurkumin dari Kunyit .Prosiding Seminar Rekayasa Kimia dan Proses..14114216.

Kusmiyati, dkk. 2011. ISOLASI DAN IDENTIFIKASI ZAT AKTIF EKSTRAK METANOL RIMPANG KUNYIT PUTIH (Curcuma mangga Val) FRAKSI ETIL ASETAT. Jurnal Ilmiah Kefarmasian, Vol. 1, No. 2, 2011 : 1 10 Elly Natalina, dkk. 2009. Fotoproteksi Kurkumin terhadap -Karoten pada Berbagai Nisbah Molar serta Aktivitas Antioksidannya. Jurnal Natur Indonesia 12(1), Oktober 2009: 1-8 ISSN 1410-9379,

Shishodia S, Sethi S, Aggarwal BB. 2005. Curcumin: Getting Back to the Roots. Annals New York Academy of Sciences. 1056: 206-217.

Stankovic I. 2004. CURCUMIN. Chemical and Technical Assesment 61st JECFA. FAO

Sirait, Midian, Prof. DR. Apt. 2007, Penuntun fitokimia dalam farmasi, penerbit ITB : Bandung