INSTRUKSI KERJA

Pembuatan Sediaan

Bahan : Sputum ( dahak )

Alat dan Reagensia :

1. Kaca sediaan yang baru dan bersih ( frosted end slide )

2. Pinsil 2 B
3. Lidi runcing
4. Pinset
5. Lampu Brand Spiritus
6. Spiritus
7. Wadah pembuangan lidi bekas
8. Desinfektan ( Lisol 5%, Hipoclorid 0,5% )

Cara Kerja :

a. Tuliskan identitas pada bagian frosted ( buram) kaca sediaan

b. Ambil sampel dahak sebesar biji kacang hijau pada bagian yang purulen atau muko
purulen
c. Sebarkan secara spiral kecil-kecil dahak pada permukaan kaca sediaan dengan ukuran
2x3 cm
d. Keringkan sediaan pada temperatur kamar, jangan terkena sinar matahari langsung atau
jangan dikeringkan di atas api
e. Dengan pinset sediaan kaca dijepit dan fiksasi 2-3 kali di atas api spiritus
f. Pastikan apusan menghadap ke atas.
 INSTRUKSI KERJA

Pewarnaan Sediaan ( Metode Ziehl Neelsen )

Bahan : Sediaan yang telah difiksasi

Alat dan Reagensia:

1. Rak pewarnaan
2. Pinset/ penjepit kayu
3. Air mengalir/ botol semprot air
4. Lampu spiritus/ suluh api
5. Rak pengering
6. Pengatur waktu
7. Larutan Carbol Fuchsin 0,3%
8. Larutan HCl alkohol 3%
9. Larutan Methylen Blue 0,3%

Cara kerja :

1. Atur sediaan di atas rak jangan terlalu rapat, buat jarak ( 1 jari )
2. Tuang Carbol Fuchsin 0,3% hingga menutupi seluruh permukaan sediaan
3. Panaskan sediaan dengan api sampai keluar uap ( jangan sampai mendidih ), dinginkan
selama minimal 5 menits
4. Buang Carbol Fuchsin perlahan-lahan satu persatu
5. Bilas dengan air mengalir mulai dari frosted
6. Tuangkan HCl alkohol 3% sampai tidak tampak warna merah
7. Bilas dengan air mengalir
8. Tuangkan Methyln Blue 0,3% hingga menutupi seluruh permukaan sediaan dan biarkan
10-20 detik
9. Buang Methylen Blue satu persatu dari sediaan
10.Bilas dengan air mengalir
11.Keringkan sediaan pada rak pengering
 INSTRUKSI KERJA

Pembacaan Sediaan Dahak

Bahan : Sediaan yang telah diwarnai

Alat dan Reagensia :

1. Mikroskop binokuler
2. Minyak imersi
3. Ether alkohol ( 3:7) / kertas lensa

Cara kerja :

1. Letakkan sediaan di atas meja mikroskop

2. Gunakan lensa obyektif 10x untuk menentukan fokus
3. Teteskan minyak imersi 1 tetes
4. Putar lensa obyektif 100x
5. Pembacaan mulai dari ujung kiri ke ujung kanan minimal 100 lapang pandang, pada
garis horizontal terpanjang

6. Pelaporan hasil pemeriksaan menggunakan Skala IUATLD

Negatif : Tidak ditemukan BTA minimal dalam 100 lapang pandang
Scanty : 1-9 BTA dalam 100 lapang pandang
( Tuliskan jumlah BTA yang ditemukan )
1+ : 10-99 BTA dalam 100 lapang pandang
2+ : 1-10 BTA dalam 100 lapang [andang
( Periksa minimal 50 lapang pandang )
3+ : 10 BTA dalam 100 lapang pandang
( Periksa minimal 20 lapang pandang )
7. Kaca sediaan diletakkan secara terbalik di atas kertas tissu beberapa lapis
8. Hilangkan minyak imersi dengan cara menempelkan permukaan yang berisi minyak
dengan ether alkohol atau tissu lensa
 INSTRUKSI KERJA

Pengolahan Limbah

Prinsip K3 Lab :
Sebuah pendekatan konprenhensif untuk melindungi petugas, masyarakat dan lingkungan
dari bahan infeksius .
Bahan infeksius harus dikelola supaya tidak menjadi sumber pencemaran lingkungan.

Tujuan :
Melindungi petugas laboratorium dan keluarga dari bahaya penyakit infeksi yang didapat
dari laboratorium.
Mencegah kontaminasi terhadap lingkungan.

Pengelolaan Limbah:

Limbah infeksius dan non infeksius harus dikumpulkan pada tempat terpisah dalam
wadahyang tidak bocor
Limbah padat dan limbah cair dipisahkan
Wadah untuk limbah tajam harus kuat terhadap tusukan
Pengelolaan Limbah Infeksius :
Preparasi bahan dan alat yang dibutuhkan untuk pemeriksaan
Proses dekontaminasi limbah sebelum dibuang atau dicuci :
Direndam dalam desinfektan, misalnya : lisol selama 12 jam
Direbus sampai mendidih selama 10 menit
Dibakar sampai hangus
 INSTRUKSI KERJA

Penggunaan Mikroskop :

1. Hubungkan steker mikroskop kesumber listrik dan nyalakan lampunya

2. Letakkan sediaan pada meja mikroskop.
Pastikan sediaan tidak diletakkan terbalik.
3. Lihat dengan lensa obyektif 10x, fokuskan dengan memutar tombol makrometer satu arah.
Pastikan kondensor dinaikkan maksimal untuk mempertahankan intensitas cahaya.
4. Aturlah jarak antar kedua mata sampai bayangan kanan dan kiri menyatu.
5. Fokuskan bayangan dengan mata kanan melihat pada lensa okuler kanan, putar tombol
mikrometer.
6. Fokuskan bayangan dengan mata kiri melihat pada lensa okuler kiri dengan memutar cincin
diopter.
7. Letakkan setetes minyak imersi pada sediaan.
Fokuskan sediaan dengan memutar tombol mikrometer.
8. Ubah ke obyektif 100x.
Buka iris kondensor sampai diameter lubang 70-80%.
9. Jangan menggerakkan meja mikroskop ke atas sambil melihat melalui lensa okuler.
10.Bila dilakukan, anda dapat membenturkan lensa obyektif dengan sediaan, hal ini akan
merusak sediaan dan lensa obyektif.
11.Hanya lensa obyektif 100x yang memerlukan minyak imersi.
Semua lensa obyektif lainnya digunakan tanpa minyak imersi dan dijaga tetap kering.
 INSTRUKSI KERJA

Pengumpulan Spesimen Dahak

Alat :

1. Pot sputum bersih, diameter 6 cm, tutup berulir.

2. Formulir Permohonan Pemeriksaan Laboratorium
3. Label, pinsil, spidol.

Waktu Pengambilan dahak :

S ( Sewaktu pertama ) :
Dahak dikumpulkan pada saat kunjungan pertama ke Laboratorium
P ( Pagi )
Dahak dikumpulkan pagi segera setelah bangun tidur pada hari ke 2 (dua), dibawa
langsung oleh pasien ke Laboratorium.
S ( Sewaktu kedua ) :
Dahak dikumpulkan di Laboratorium pada hari ke 2 (dua) saat menyerahkan dahak pagi.
Tempat Pengumpulan Dahak :
Ruang terbuka, dengan sinar matahari langsung.
Ruang tertutup, dengan ventilasi yang baik
Jangan Mengumpulkan Dahak di :
Dalam Laboratorium
Kamar kecil/ toilet/ WC
Ruang tunggu
Ruang pendaftaran
Tempat dengan ventilasi yang jelek
Cara Mengeluarkan Dahak Yang Benar :
Kumur dengan air bersih sebelum mengeluarkan dahak
Bila memakai gigi palsu, lepaskan sebelum berkumur
Tari nafas dalam ( 2-3 kali ) dan setiap kali nafas hembuskan dengan kuat
Dekatkan pot yang sudah dibuka ke mulut dan batukkan dengan keras langsung ke dalam
pot dahak
Tutup pot yang berisi dahak dengan rapat
Setelah selesai, anjurkan penderita membersihkan mulut dengan tissu bersih dan mencuci
tangan

jangan berdiri di depan penderita saat pengeluaran dahak

 INSTRUKSI KERJA

Uji Fungsi Reagen Ziehl Neelsen

Tujuan :
Uji fungsi reagen Ziehl Neelsen diperlukan untuk memastikan reagen Ziehl Neelsen yang tersedia dapat
mewarnai M. tuberculosis dengan baik

Pelaksana :
Uji fungsi reagen Ziehl Neelsen dilakukan oleh :
Setiap laboratorium yang melaksanakan pemeriksaan mikroskopis TB, pada saat membuka kit reagen Ziehl
Neelsen yang baru

Alat dan Bahan :

a. Kit Reagen Ziehl Neelsen yang akan diuji
b. Sediaan Kontrol Positif, berupa sediaan 1+ atau 2+ yang sudah difiksasi dan belum
diwarnai
c. Sediaan Kontrol Negatif yang sudah difiksasi dan belum diwarnai

Cara Membuat Sediaan Kontrol Positif dan Negatif :

a. Sediaan kontrol positif
- Pilih sputum yang sudah pasti mempunyai nilai 1+ atau 2+
- Buat 1 seri batch sediaan kontrol positif ( cara pembuatan sediaan sesuai pedoman)
- Beri label dan nomor batch pada sediaan yang dibuat
- Pilih 1 atau beberapa sediaan, kemudian lakukan pewarnaan ZN
- Catat hasil pemeriksaan pada buku laporan
- Sisa sediaan yang belum diwarnai disimpan dalam kotak sediaan khusus dan dapat dipergunakan
dalam waktu maksimal 6 bulan.
b. Sediaan kontrol negatif
- Pembuatan sediaan kontrol negatif dikerjakan sama seperti langkah pembuatan sediaan kontrol positif.

Penilaian :
a. Kriteria penerimaan uji fungsi :
1. Sediaan kontrol positif, BTA berwarna merah terang dengan latar belakang berwarna biru
2. Sediaan kontrol negatif, latar belakang berwarna biru
3. Dekolorisasi sempurna dapat dinilai dengan tidak terlihatnya warna merah pada pemeriksaan secara
makroskopik dan mikroskopik.
b. Pada hasil tidak memuaskan, lakukan uji fungsi ulang dengan mewarnai sediaan kontrol
yang lain dan tetap menjaga agar prosedur dilakukan dengan benar.
c. Bila hasil pewarnaan dinilai baik, maka reagen ZN dapat dipakai.
Sebaliknya bila memberikan hasil pewarnaan yang tidak baik :
1. Endapan/ kristal metilen biru : Reagen ZN harus disaring langsung pada saat melakukan
pewarnaan
2. Decolorisasi yang tidak sempurna : Larutan asam alkohol diganti dengan larutan yang baik

Pencatatan :
Hasil uji fungsi harus dicatat dalam buku khusus yang menuliskan tanggal pelaksanaan uji fungsi, nomor
batch botol reagen ZN dan hasil pewarnaan pada sediaan kontrol positip dan kontrol negatif.