VALIDASI KIT IMMUNORADIOMETRICASSAY (IRMA) CA 15.

3 UNTUK DETEKSI KANKER PAYUDARA

Pada hal kanker payudara adalah salah satu jenis kanker yang dapat dideteksi dini, salah satu
caranya dengan menggunakan kit IRMA CA 15.3. Carbohydrate Antigen 15.3 (CA 15.3) adalah sejenis
gabungan glikoprotein heterogene yang dapat bereaksi dengan monoklonal antibodi anti CA 15.3.
Senyawa CA 15.3 digunakan sebagai tumor marker dan penentuan kadarnya dapat dilakukan dengan
teknik Immunoradiometricassay (IRMA).

Dalam upaya untuk menangani penyakit dan untuk mengetahui tahap stadium, follow up
serta screening pada berbagai kanker secara lebih baik di gunakan suatu tumor marker. Tumor
marker merupakan suatu bio-molekul yang dapat berupa hormon ,protein atau peptide yang
kadarnya lebih tinggi pada kondisi kanker dibanding pada kondisi normal. Salah satu tumor marker
yang penting adalah CA 15.3 sebagai penanda untuk kanker payudara.

Senyawa Carbohydrate Antigen 15.3 (CA 15.3) dengan berat molekul antara 300,000-
450,000 dalton adalah gabungan glycoprotein heterogeneous. Senyawa ini ditemukan dalam serum
individu normal dengan konsentrasi di bawah 35 Ulml, sedangkan pada penderita kanker konsentrasi
senyawa Inl meningkat lebih" tinggi dibadingkan dengan individu"" normal. Senyawa ini dapat
bereaksi dengan monoklonal antibodi CA 15.3. Oleh sebab itu senyawa CA 15.3 dapat digunakan
sebagai tumor marker yang penentuan kadarnya dapat dilakukan dengan teknik
Immunoradiometricassay (IRMA)
Teknik IRMA merupakan salah satu teknik imumonoassay yang menggunakan radioisotop
sebagai perunut agar mudah dideteksi. Teknik ini sangat cocok digunakan dalam penentuan tumor
marker dalam serum yang mempunyai matrik yang komplek dan kadamya yang sangat bervariasi
pada pasien normal dan pasien kanker. Teknik assay ini didasarkan pada reaksi antara antigen (Ag)
yang terdapat pada cuplikan/standar (tumor marker) dengan antibodi bertanda (Ab*) yang berada
dalam jumlah berlebih membentuk kompleks antigen-antibodi (Ab-Ag-Ab*). Dengan demikian
semakin tinggi kadar tumor marker (Ag) yang ada, maka kompleks antigen-antibodi yang terbentuk
juga semakin tinggi sehingga akan memberikan cacahan radioaktivitas yang tinggi.

Tata Kerja
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini diantaranya adalah larutan standar CA 15.3 [7], tabung
reaksi polistiren bersalut monoklonal antibody CA 15.3[7], larutan monoklonal antibodi. bertanda
I125 yang selanjutnya disebut larutan perunut [7], larutan kontrol dengan konsentrasi CA 15.3
rendah yang selanjutnya disebut sebagai QCL (CIAE, China), larutan kontrol dengan konsentrasi CA
15.3 tinggi yang selanjutnya disebut QCH (CIAE, China) dan aqudemin. Alat yang digunakan dalam
penelitian ini diantaranya adalah pencacah Gamma (600 Gammatec II The Nucleus), Gamma
Management System, berbagai ukuran pipet Eppendorf beserta tipnya, pH meter (Fisher Accumet
model 810), pengaduk (Vortex), incubator (Soft Incubator SL 1- 6000), timbangan analitik (Mettler AE
160). Istilah yang digunakan dalam penelitian ini:

%B/T adalah ikatan maksimum spesifik (MB)

NSB adalah ikatan tidak spesifik (Non Specific Binding)
Ab* adalah antibodi bertanda radioisotop I 125
BG adalah back ground (cacah latar)
QCL adalah larutan kontrol dengan konsentrasi CA 15.3 rendah
QCH adalah larutan kontrol dengan konsentrasi CA 15.3 tinggi

Protokol Pengujian
Sepuluh tabung reaksi polistiren bersalut antibodi CA 15.3 (coted tube, CT ) diberi nomor urut (1,2 3,
dst). Sejumlah 100 L larutan CA 15.3 standar 0, 15, 50, 125 dan 250 mIU/mL ditambahkan ke
masing-masing tabung CT secara berurutan. Larutan yang berada didalam tabung CT diaduk
menggunakan alat vortex hingga homogen dan diinkubasi selama dua jam pada suhu 37 oC. Cairan
dibuang dan tabung dicuci dengan 1000 L aquademin sebanyak dua kali. Sejumlah 200 L. larutan
perunut NaI125dengan aktivitas 200.000 cpm ditambahkan ke masing-masing tabung CT, larutan
perunut I125 yang berada didalam tabung CT dihomogenkan dengan alat vortex kemudian
diinkubasi selama 3 jam pada suhu ruangan. Cairan dibuang dan tabung CT dicuci dengan 1000 L
aquademin sebanyak dua kali, kemudian didekantasi dan dikeringkan. Radioaktivitas yang tertinggal
di dalam tabung diukur dengan alat pencacah Gamma selama satu menit [8].

Penandaan monoklonal antibodi CA 15.3 dengan Na 125 I menggunakan metode Chloramine- T

Optimasi penandaan CA 15.3 dilakukan dengan variasi jenis monoklonal yang digunakan (M37552M
dan M37901M). Ke dalam tabung iodinasi yang berisi larutan 3,5 ~L larutan monoklonal anti CA 15.3
ditambahkan 20 ~L dapar fosfat 0,5 M pH 7,4 dan 3,3 ~L Nal2S1 (aktivitas - 900 ~Ci)

Selanjutnya ditambahkan 5 ~L Chloramine-T (I mg dalam 1 mL dapar fosfat 0,25 M pH 7,4).

Campuran kemudian dikocok selama dua menit dengan vortex yang diikuti dengan penambahan 10
~L larutan Na2S20S (1 mg Na2S20s dalam 1 mL dapar fosfat 0,25 M pH 7,4). Selanjutnya campuran
dikocok dengan vortex selama dua menit. Hasil penandaan kemudian dimurnikan dengan
menggunakan kolom PO-I0 yang telah dikondisikan dengan dapar fosfat 0,01 M pH 7,4 dan
dijenuhkan dengan 1 mL larutan BSA 10%. Produk monoklonal anti CA 15.3 bertanda 12S1
(selanjutnya disebut perunut ) dielusi dari kolom PO-IO dengan larutan dapar fosfat 0,0 I M pH 7,4
dan fraksi eluat ditampung per fraksi dalam tabung reaksi masing-masing sebanyak 500 ~L per fraksi
(25 fraksi). Tiap fraksi kemudian diukur radioaktivitasnya dengan alat pencacah Gamma (Gamma
Management System, GMS)