Halaman 2
2364
J. Ekberg dkk. / Jurnal Internasional Biokimia & Biologi Sel 40 (2008) 2363-2368
subtipe VGSC spesifik Ada kemungkinan bahwa subtipe-
modulator VGSC selektif dapat ditemukan di antara
keragaman yang kaya dari conotoxins: kecil, disulfida kaya pep-
pasang surut terisolasi dari racun kerucut laut predator
Siput yang telah berevolusi ke membran spesifik target
reseptor, saluran ion dan transporter. Ulasan ini
menggambarkan struktur, fungsi, subtipe-spesifisitas dan
aplikasi terapeutik potensial dari tiga kelas
conopeptides yang bekerja pada VGSCs: μ-conotoxins,
yang secara fisik menutup pori-pori untuk menghambat Na +
konduktansi, δ-conotoxin, yang memperlambat atau menghambat
inaktivasi, dan μO-conotoxin, yang menghambat Na +
konduktansi independen dari situs pengikatan TTX melalui a
mekanisme yang tidak diketahui ( Gambar 1 ) . Kelas keempat conopep-
pasang surut yang menargetkan VGSCs dan menginduksi tindakan berulang
Potensi akson syaraf motor amfibi baru-baru ini
telah dilaporkan Buczek et al., 2005; Jimenez dkk., 2003 ).
Conopeptida rangsang ini, iota-conotoxin (mis
-RXIA, sebelumnya r11a), awalnya diidentifikasi dari ikan-
Bekicot bekicot Conus radiatus , mengandung 46 asam amino, 4
ikatan disulfida dan isomerisasi pasca translasi
asam L-amino (L-Phe44) ke asam D-amino (D-Phe44).
-RXIA bertindak dengan menggeser ketergantungan voltase akti-
vation TTX-sensitif (TTX-S) Na v 1,6 saluran ke
Potensi lebih hiperpolisiasi ( Buczek dkk ., 2007 ).
2. Ekspresi dan aktivasi conotoxins
Racun siput kerucut, yang terbagi menjadi
kelompok tergantung pada mangsa utama mereka, yaitu ikan-,
siput cacing atau moluska, terdiri dari campuran
sekitar 100 peptida yang berbeda. Masing-masing dikodekan
oleh gen individu dan awalnya dinyatakan sebagai pra-
peptida kursor pada sel sekretori duktus racun di
kerucut siput Setelah sekresi ke dalam saluran, prekursor
dibelah oleh protease, menghasilkan conotoxins aktif
yang disuntikkan ke dalam mangsa oleh appa seperti harpa
ratus. Conotoxins sering mengalami post-translational
Gambar 1. Aktivitas dan lokasi pengikatan conotoxins memodulasi VGSCs. (A) Modulasi
subtipe VGSC rekombinan dengan μ-, μO- dan δ-conotoxins.
(i) Penghambatan rNa 1,2 oleh μ-conotoxin PIIIA. (ii) Penghambatan hNa 1,8 oleh μO-
v v
Xenopus oocytes. (iii) Modulasi rNa 1.4 dinyatakan dalam sel HEK293 oleh δ-SVIE
v
Halaman 3
J. Ekberg dkk. / Jurnal Internasional Biokimia & Biologi Sel 40 (2008) 2363-2368
2365
Gambar 2. Struktur conotoxins terpilih yang memodulasi VGSCs. μ-, δ- dan μO-conotoxins
semuanya mengandung tiga ikatan disulfida. μ-Conotoxins adalah
relatif hidrofilik dan menghambat konduktansi VGSC dengan menutup pori-pori saluran. δ-
Conotoxins, yang bertindak dengan menunda atau menghambat
Inaktivasi VGSC, dan μO-conotoxins, yang menghambat konduktansi VGSC oleh
mekanisme yang tidak diketahui, secara struktural homolog dan sangat
hidrofobik. Residu bermuatan positif berwarna biru, residu negatif residu merah dan
hidrofobik hijau. Residu bermuatan yang dipilih adalah
ditunjukkan dengan posisi sekuensial mereka dalam rantai peptida. Model pengisian ruang di
dua baris yang lebih rendah diputar 180 sehubungan dengan masing-masing
◦
lain untuk menunjukkan kedua sisi molekul. Posisi termal N dan C ditandai pada struktur di
baris atas.
modifikasi seperti hidroksilasi, karboksilasi, sul-
fation, bromination dan amidation, dan diklasifikasikan
berdasarkan pola disulfida dan farmakologisnya
aktivitas (ditinjau oleh Craik & Adams, 2007 ) . Semua cono-
toksin yang memodulasi VGSCs yang dijelaskan dalam ulasan ini
mengandung tiga jembatan disulfida ( Gambar 2 ).
3. Struktur -, - dan O-conotoxin
μ-Conotoxins adalah peptida dari ~20 asam amino iso-
lated dari racun siput kerang berburu ikan. Untuk
Tanggal, setidaknya 12 berbeda-conotoxins telah char-
acterized (lihat Tabel 1 ) . The-conotoxins, yang
Ada enam tipe yang teridentifikasi, ditemukan dalam racunnya
siput kerucut ikan dan moluska. δ-Conotoxins
terdiri dari ~ 30 asam amino dan mengandung tiga disulfida
jembatan ( Tabel 1 ) , pola ikatan yang tercipta
simpul sistin yang menghambat Craik, Daly, & Waine, 2001 )
yang ditemukan di banyak peptida bioaktif. Meskipun
menunjukkan aktivitas biologis yang sama sekali berbeda
μO-conotoksin secara struktural homolog ke δ-
conotoxins Hanya dua μO-conotoxins sejauh ini
diidentifikasi: MrVIA dan MrVIB dari racun dari
spesies perburuan moluska C. marmoreus . Δ- dan
μO-conotoxins bersifat hidrofobik dan, bersamaan dengan
ω-conotoxins yang menghambat saluran Ca 2+ yang dilapisi voltase,
milik keluarga superfamili dari conotoxins ( Terlau &
Olivera, 2004 ).
4. Fungsi biologis -, - dan
O-conotoxins
μ-Conotoxins menghambat konduktansi Na + secara fisik
termasuk pori ion-melakukan VGSC dan
bersaing dengan TTX dan saxitoxin untuk mengikat ke situs 1
di mulut luar pori-pori VGSC tertentu (lihat
Cestele & Catterall, 2004 ) . Mereka menunjukkan tingkat
subtipe-selektivitas di blok VGSC mereka. Untuk ujian-
Halaman 4
2366
J. Ekberg dkk. / Jurnal Internasional Biokimia & Biologi Sel 40 (2008) 2363-2368
Tabel 1
Urutan asam amino dan kerangka sistein dari μ-, μO- dan δ-conotoxins
biaya Net dihitung pada pH 7,0; Z: pyroglutamate; O: hidroksiprolin.
b TTX-R: tetrodotoxin-resistant; TTX-S: tetrodotoxin-sensitif.
ple, GIIIA, GIIIB dan GIIIC diisolasi dari C. geographus
Semua bloker kuat dari otot skeletal tikus VGSC (r)
Na v 1.4, namun memiliki sedikit atau tidak ada efek pada VGSC neuron
subtipe Cruz et al., 1985 ) . Toksin PIIIA dari C. pur-
Purescens menghambat rNa v 1.4 dan pada tingkat lebih rendah neuronal
TTX-S VGSCs ( Safo et al., 2000 ) , yang menarik dengan a
preferensi untuk arus Na + yang terus-menerus dalam hippocam-
pal CA1 neuron Nielsen et al., 2002 ) . Kami baru-baru ini
menunjukkan bahwa novel μ-conotoxin, TIIIA diidentifikasi dari
C. tulipa , menunjukkan subtipe selektifitas VGSC yang tidak biasa.
Mirip dengan μ-conotoxins lainnya, TIIIA menghambat rNa v 1.4
dengan potensi tinggi, namun mendiskriminasi antara neu-
VGSCs ronal, secara istimewa menghambat rNa v 1.2 ( Lewis
et al., 2007 ) . Tujuh μ-conotoxins menghambat TTX-resistant
(TTX-R) VGSCs di amfibi neuron ( Zhang et al.,
2006 ) , dan baru - baru ini disarankan agar SIIIA masuk
C. striatus dan C. tulipa dapat menghambat mamalia TTX-R
VGSCs ( Wang et al., 2006 ).
The δ-conotoxins ditemukan saat mayor
komponen dari racun tekstil C. , TxVIA, ditemukan
untuk menginduksi kejang pada bekicot ( Hillyard et al., 1989 ).
Berbeda dengan μ-conotoxins, δ-conotoxins tidak melakukannya
blok konduktansi Na + . Sebaliknya, mereka memperlambat atau menghambat Na +
inaktivasi saluran dengan mengikat yang belum teridentifikasi
situs 6, sehingga perpanjangan aksi poten-
tial Hal ini berakibat pada keadaan yang terkena hyperexcited
neuron, yang akhirnya dapat menyebabkan elektri-
Kal hyperexcitation dari organisme lengkap, seperti yang terlihat
di siput Terlau & Olivera, 2004 ) . Sejak ditemukannya
dari TxVIA, lima lagi δ-conotoxins (GmVIA, PVIA,
NgVIA, SVIE dan EVIA) telah diidentifikasi pada ikan-
dan siput kerucut berburu moluska Tabel 1 ) . TxVIA dan
GmVIA mengikat dengan afinitas tinggi ke otak tikus dan mol-
saluran lusc Na + , namun aktif secara farmakologi dan
toksik hanya untuk moluska Fainzilber, Kofman, Zlotkin, &
Gordon, 1994 ) . PVIA dan SVIE terutama bertindak berdasarkan mam-
malian VGSCs ( Barat, Bulaj, & Yoshikami, 2005 ) dan
EVIA menghambat inaktivasi neuronal tikus Na + chan-
subtipe nel (rNa v 1.2, rNa v 1.3, rNa v 1.6) namun tidak
mempengaruhi kerangka tikus (rNa v 1.4) atau otot jantung manusia
(hNa v 1,5) subtipe Na + saluran ( Barbier et al., 2004 ).
Menariknya, PVIA dan GmVIA menghambat arus Na +
dimediasi oleh rNa v 1.2 dan rNa v 1.4 yang dinyatakan dalam Xenopus
oosit ( Safo et al., 2000 ) , menunjukkan bahwa mereka mungkin juga
bertindak seperti μO-conotoxins (dibahas di bawah).
The μO-conotoxins MrVIA dan MrVIB menghambat mol-
luscan McIntosh et al., 1995 ) , mamalia ( Bulaj et al.,
2006; Daly et al., 2004; Ekberg dkk., 2006; McIntosh
et al., 1995; Safo et al., 2000 ) dan amfibi ( Bulaj
et al., 2006 ) VGSCs neuron. Yang penting, MrVIA dan
MrVIB telah terbukti dapat menghambat TTX-R Na + cur-
sewa dimediasi oleh Na v 1.8 dengan potensi 10 kali lipat lebih tinggi
Halaman 5
J. Ekberg dkk. / Jurnal Internasional Biokimia & Biologi Sel 40 (2008) 2363-2368
2367
daripada arus TTX-S Na + pada neuron DRG tikus ( Daly e t
al., 2004; Ekberg dkk., 2006 ) . Selektivitas untuk manusia
Na v 0,8 dibandingkan subtipe VGSC lain juga telah con
Dengan menggunakan oosit Xenopus yang mengekspresikan berbagai VGSC
subtipe Ekberg dkk ., 2006 ) . Selanjutnya, MrVIB dis-
mengkrimin antara dua TTX-R VGSC subtipe di
neuron sensorik, Na v 1,8 dan Na v 1,9, karena tidak berpengaruh
pada TTX-R Na + arus persisten yang dimediasi oleh Na v 1.9
( Ekberg dkk ., 2006 ) . Sebuah studi baru-baru ini juga menunjukkan hal itu
MrVIB menunjukkan selektivitas untuk tipe otot VGSC
rNa v 1.4 di atas neuronal rNa v 1.2 ( Zorn et al., 2006 ).
MrVIA dan MrVIB juga telah terbukti menghambat
Saluran Ca 2+ yang terisi voltase di molluscan ( McIntosh e t
al., 1995 ) tapi bukan neuron sensorik mamalia ( Daly
et al., 2004 ) . Mekanisme dimana μO-conotoxin
MrVIA / B menghambat VGSCs tidak didefinisikan, namun deter-
Orang-orang muda untuk spesifisitas subtipe tampaknya terlibat
mengikat loop pori terminal-C di domain III ( Zorn
et al., 2006 ) . MrVIB juga berinteraksi dengan δ-conotoxin
situs pengikat Ekberg dkk ., 2006 ) , yang tidak mengherankan-
Mengingat adanya kesamaan struktur antara μO- dan
δ-conotoxins Sebuah studi baru-baru ini menunjukkan bahwa MrVIA juga
berinteraksi dengan situs mengikat toksin ß-kalajengking yang terlokalisir
di sensor tegangan di domain II ( Leipold et al., 2007 ).
5. Kemungkinan penelitian dan aplikasi medis
Meskipun peran kunci dimainkan oleh VGSCs dengan bersemangat
Sel, penelitian di lapangan telah terhambat oleh
Kurangnya alat farmakologi yang spesifik untuk individu
Subtipe VGSC Sejauh ini, beberapa conotoxins yang dimodulasi
VGSCs dengan berbagai tingkat subtipe-spesifisitas miliki
telah diidentifikasi, termasuk GIIIA-C dan PIIIA, yang mana
secara khusus menghambat Na v 1.4 dan juga MrVIA / B, yang
selektivitas display terhadap hNa v 1.8, memungkinkan selektif
studi tentang subtipe VGSC ini di sel asli. Cono-
Racun juga alat yang sangat berguna untuk mempelajari
aktivitas struktur VGSCs. Secara khusus, penelitian menggunakan
μ-conotoxins dan analog telah menyebabkan peningkatan
pemahaman tentang arsitektur VGSCs (lihat review
oleh French & Terlau, 2004 ).
Peran penting dari berbagai subtipe VGSC dalam rasa sakit
dan keadaan penyakit lainnya menjadi semakin terlihat-
ent, lebih jauh menyoroti peningkatan kebutuhan untuk menemukan
penghambat spesifik subtipe VGSCs sebagai terapi
agen. Na v 1.8 adalah target yang sangat penting, diberikan
yang tampaknya memiliki peran utama dalam sakit kronis
menyatakan namun tidak dalam fungsi lain (ditinjau oleh Ekberg &
Adams, 2006 ) . Selain itu, Na v 1.8 dinyatakan hampir
secara eksklusif di neuron sensorik perifer, dengan demikian pro-
memiliki jalan yang siap untuk perawatan dengan penggunaan
disuntikkan peptida. Dengan demikian, peptida selektif target-
ing Na v 1.8 dapat menghasilkan penghilang rasa sakit tanpa motor
defisit The μO-conotoxins MrVIA dan MrVIB adalah
yang pertama diketahui VGSC modulator yang menampilkan selec-
ke arah Na v 1.8. Yang penting, MrVIB baru saja
menunjukkan untuk meringankan perilaku sakit pada model tikus
Baik nyeri inflamasi maupun neuropatik tanpa motor
efek samping ( Ekberg dkk ., 2006 ) , menunjukkan bahwa MrVIB
adalah kandidat menarik molekul untuk pengembangan-
Obat baru untuk penanganan nyeri kronis
dari kedua asal inflamasi dan neuropati, juga
keadaan sakit lainnya
Diskriminasi antara arus Na + berbeda
jenis neuron SSP oleh μ-conotoxin PIIIA mungkin
menjadi penting dalam pengembangan menuju novel
pengobatan melawan epilepsi dan stroke. PIIIA lebih suka-
Hal ini menghambat arus TTX-S Na + yang terus-menerus dalam hal ini
neuron, yang dianggap dimediasi oleh Na v 1.6,
Na v 1.2 atau Na v 1.3 ( Nielsen et al., 2002 ) . Selektif inhi-
bisi arus Na + yang gigih berpotensi
kontrol kejang tanpa mempengaruhi transien normal
potensi tindakan Arus Na + yang terus-menerus diatur ke atas
di neuron CNS sebagai konsekuensi hipoksia dan oksida-
tive stress, dan dengan demikian selektif menghambat arus ini
mungkin neuroprotektif Nielsen et al., 2002 ).
6. Kesimpulan
Conotoxins yang mempengaruhi VGSCs merupakan excit-
ing kelas alat neurosains dan obat memimpin itu
baru saja mulai dieksploitasi. Conotoxins
yang menunjukkan subtipe-selektivitas dalam modulasi mereka
VGSCs adalah alat berharga untuk mempelajari peran
Subtipe VGSC di sel asli dan mungkin juga berkontribusi
pengembangan pengobatan baru melawan neurolog-
Penyakit ical berhubungan dengan keadaan neuron yang berubah
sifat dpt dirangsang. Secara khusus, μO-conotoxins, yang
Secara selektif menghambat Na v 1,8 menunjukkan yang paling potensial
Prospek obat prospektif karena telah terbukti
mengurangi rasa sakit tanpa defisit motor pada model hewan.
Sampai saat ini, lebih dari 700 spesies siput kerucut
telah diidentifikasi Mengingat bahwa masing-masing menghasilkan ~ 100 unik
peptida, diharapkan ada ~70.000 bio-
conopeptida aktif secara logika. Kurang dari 0,1% dari jumlah tersebut
telah dicirikan, menunjukkan bahwa sejumlah
VGSC-memodulasi conotoxins dengan subtipe potensial-
Selektifitas tetap harus diidentifikasi.
Ucapan Terima Kasih
Penelitian di laboratorium kami didukung oleh hibah
dari Australian Research Council dan National
Dewan Riset Kesehatan dan Medis Australia.
Halaman 6
2368
J. Ekberg dkk. / Jurnal Internasional Biokimia & Biologi Sel 40 (2008) 2363-2368
Referensi
Barbier, J., Lamthanh, H., Le Gall, F., Favreau, P., Benoit, E., Chen, H.,
et al. (2004). Sebuah δ-conotoxin dari racun Conus ermineus menghambat
inaktivasi pada saluran Na neuronal vertebrata namun tidak dalam skele-
+
Biokimia , 45 , 7404-7414.
Cest`ele, S., & Catterall, W. (2004). Mekanisme molekuler neu-
Tindakan rotoxin pada saluran natrium dengan tekanan voltase. Biochimie , 82 ,
883-892.
Craik, DJ, & Adams, DJ (2007). Modifikasi kimia kono-
toksin untuk meningkatkan stabilitas dan aktivitas. ACS Chemical Biology , 2 ,
457-468.
Craik, DJ, Daly, NL, & Waine, C. (2001). Motif simpul sistin
dalam toksin dan implikasi untuk desain obat. Toxicon , 39 , 43-61.
Cruz, LJ, Gray, WR, Olivera, BM, Zeikus, RD, Kerr, L.,
Yoshikami, D., dkk. (1985). Conus geographus racun yang dis-
mengkriminasi antara saluran neuronal dan saluran natrium otot. Jurnal
Kimia Biologi , 260 , 9280-9288.
Daly, NL, Ekberg, JA, Thomas, L., Adams, DJ, Lewis, RJ,
& Craik, DJ (2004). Struktur μO-conotoxins dari Conus
marmoreus Inhibitor tetrodotoxin (TTX) -ensitif dan TTX-
saluran sodium yang resisten pada neuron sensorik mamalia. Jurnal
Kimia Biologi , 279 , 25774-25782.
Ekberg, J., & Adams, DJ (2006). Natrium dengan voltase neuronal
subtipe saluran: Peran kunci dalam inflamasi dan neuropati
rasa sakit. Jurnal Biokimia dan Biologi Sel Internasional , 38 ,
2005-2010.
Ekberg, J., Jayamanne, A., Vaughan, CW, Aslan, S., Thomas, L.,
Drinkwater, R., dkk. (2006). μO-Conotoxin MrVIB selektif
blok Na 1,8 neuron sensorik saluran natrium tertentu dan
v