 Komponen PCR

Sebelum melakukan PCR, DNA yang akan diperiksa, perlu untuk diisolasi terlebih dahulu. Isolasi ini bisa dilakukan dari darah, akar
rambut, semen, air liur, urin, dan lain sebagainya. Bahan yang biasa digunakan untuk isolasi adalah darah vena. Ekstraksi atau isolasi DNA
dilakukan untuk mendapatkan materi genetik murni. Bahan atau komponen PCR yang digunakan adalah
1) DNA untai ganda yang sudah diisolasi dan mengandung segmen DNA yang akan diamplifikasi (DNA template). Fungsi DNA template
adalah sebagai cetakan untuk pembentukan molekul DNA baru yang sama. Template DNA ini dapat berupa DNA kromosom, DNA
plasmid ataupun fragmen DNA apapun asal di dalam DNA template tersebut mengandung fragmen DNA target yang dipilih.
2) Primer= sepasang primer yang komplementer yang merupakan oligonukleotida(biasanya terdiri dari 18-30 nukleotida). Primer ini
yang akan berikatan scr spesifik pd masing2 sekuens DNA yg akan diamplifikasi.
Berfungsi sebagai pembatas fragmen DNA target yang akan diamplifikasi dan sekaligus menyediakan gugus hidroksi(OH) pada
ujung 3’ yang diperlukan untuk proses ekstensi DNA.
3) dNTPs=campuran yg terdiri dATP,dTTP,dGTP.
Dalam proses PCR Bertindak sebagai building block DNA yang diperlukan dalam proses ekstensi DNA. dNTP akan menempel pada
gugus OH pada ujung 3’ dari primer membentuk untai baru yang komplementer dengan untai DNA template.
4) Buffer
PCR hanya akan berlangsung pd kondisi pH ttt. Berfungsi untuk menjamin pH medium. Biasanya terdiri atas bahan-bahan kimia
untuk mengkondisikan reaksi agar berjalan optimum dan menghasilkan enzim DNA polymerase.
5) Ion Logam
Ion logam bivalen, umumnya Mg++, fungsinya sebagai kofaktor bagi enzim DNA polymerase. MgCl2 akan meningkatkan interaksi
primer dengan template yg membentuk komplek larut dgn dNTP.
6) Taq Polimerase
Adalah DNA polymerase yang diambil dari bakteri thermofilik aquaticus thermus. Dan sering digunakan dalam reaksi PCR
sebagai enzim mampu menahan denaturasi kondisi protein pada suhu tinggi. Suhu optimum untuk bekerjanya 75-80 derajat. Enzim
ini berfungsi sbg katalisis u/ reaksi polimerasasi DNA.
7) ddH2O
Adalah air yang sangat murni lebih dari aqubidest karena telah melalui berbagai macam cara pemurnian.