STUDI JURNAL PENELITIAN UJI AKTIFITAS HAYATI BAHAN ALAM

KANDUNGAN FLAVONOID DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN

DARI SAYURAN ASAL INDONESIA

Tugas Makalah Kimia Organik Bahan Alam

Kelompok 16 / 3A

Bimo Sukma Wibawa (1617)

Pratiwindya Nafisha Sulaeman (1617683)

Refa Hafidza Esem (1617696)

KEMENTERIAN PERINDUSTRIAN REPUBLIK INDONESIA

BADAN PENGEMBANGAN SUMBER DAYA MANUSIA INDUSTRI

POLITEKNIK AKA

BOGOR

2018
 KATA PENGANTAR

Puji syukur kehadirat Allah SWT atas segala limpahan rahmat, nikmat, dan
karunia-Nya sehingga dengan ridha-Nya penulis dapat menyelesaikan penyusunan
makalah kimia organik bahan alam dari jurnal internasional dengan judul “Kandungan
Flavonoid dan Aktivitas Antioksidan dari Sayuran di Indonesia”. Makalah ini disusun
untuk memenuhi tugas mata kuliah Kimia Organik Bahan Alam.

Makalah ini berisi tentang penjelasan salah satu jurnal kimia organik bahan alam
terkait uji aktifitas bahan organik alam golongan flavanoid. Dalam penyusunnya, penulis
menggunakan data dalam buku, jurnal, daring, dan media elekronik yang dapat
dipertangungjawabkan sebagai sumber referensi.
Penulis ucapkan terima kasih kepada segenap dosen pengampu mata kuliah Kimia
Organik Bahan Alam (KOBA) yang telah membagikan ilmunya yang berguna sebagai
bekal dalam penyusunan makalah ini, dan juga pihak-pihak lain yang telah membantu
dalam penyelesaian makalah ini.
Penulis menyadari bahwa makalah ini masih jauh dari sempurna, oleh karena itu,
saran yang konstruktif sangat kami harapkan untuk perbaikan di masa mendatang.

Bogor, November 2018

Penulis

i
 DAFTAR ISI

Hal
KATA PENGANTAR ......................................................................................................... i
DAFTAR ISI....................................................................................................................... ii
DAFTAR TABEL...............................................................................................................iv
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................................... v
PENDAHULUAN .............................................................................................................. 1
TINJAUAN PUSTAKA ..................................................................................................... 2
Flavonoid ....................................................................................................................... 2
Antioksidan.................................................................................................................... 3
Daun Katuk (Sauropus androgynus) ........................................................................... 3
Kenikir (Cosmos caudatus H.B.K) ............................................................................... 4
Kedondong Cina (Polyscias pinnata) ........................................................................... 4
Antanan (Centella asiatica)........................................................................................... 5
Kemangi (Ocimum americanum L.) ............................................................................. 6
Beluntas (Pluchea indica Less.) .................................................................................... 7
Mangkokan (Nothopanax scutellarius(Burm.f.) Merr) ............................................... 8
Daun Ginseng (Talinum triangulare (Jacq.)Willd.)..................................................... 8
Pohpohan (Pilea melastomoides (Poir.) Bl.) ................................................................ 9
Kecombrang ( Etlingera elatior Jack R. M. Sm ) ...................................................... 10
HPLC (High Performance Liquid Chromatography) ................................................ 11
PERCOBAAN .................................................................................................................. 13
Alat dan Bahan............................................................................................................ 13
Alat ........................................................................................................................... 13
Bahan ....................................................................................................................... 13
Metode Penelitian........................................................................................................ 15
Persiapan Sampel .................................................................................................... 15
Analisis Kelembaban .............................................................................................. 15
Total Fenol ............................................................................................................... 15
DPPH Scavenging ................................................................................................... 16
ABTS Trolox Equivalent Antioxidant Capacity (TEAC) .................................... 16
Kekuatan Mereduksi Besi ...................................................................................... 16

ii
 Penghambatan Oksidasi Lipid............................................................................... 17
Analisis Flavonoid ................................................................................................... 17
Analisis Statistik ...................................................................................................... 18
PEMBAHASAN ............................................................................................................... 19
Jumlah fenol ................................................................................................................ 19
Aktivitas antioksidan dari ekstrak ............................................................................ 19
Korelasi ........................................................................................................................ 20
Kandungan flavonoid ................................................................................................. 20
SIMPULAN ...................................................................................................................... 22
DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................................... 23
LAMPIRAN...................................................................................................................... 25

iii
 DAFTAR TABEL

Hal

Tabel 1. Nama dan kegunaan tradisional dari sayuran asal Jawa Barat, Indonesia ......................... 14
Tabel 2. Total fenol dan aktivitas antioksidan ekstrak dari sayuran asal Indonesia. ....................... 25
Tabel 3. Kandungan flavonoid dari ekstrak dari sayuran asal Indonesia ditentukan oleh analisis
HPLC. ............................................................................................................................................. 25

iv
 DAFTAR GAMBAR

Hal

Gambar 1. Daun Katuk (Sauropus androgynus) ................................................................................ 3

Gambar 2. Tanaman Kenikir (Cosmos caudatus H.B.K) .................................................................. 4
Gambar 3.Daun Kedondong Cina (Polyscias pinnata) ..................................................................... 5
Gambar 4. Tanaman Antanan (Centella asiatica) .............................................................................. 6
Gambar 5.Tanaman Kemangi (Ocimum americanum L.) ................................................................. 6
Gambar 6. Tanaman Beluntas (Pluchea indica Less.) ...................................................................... 7
Gambar 7. Daun Mangkokan (Nothopanax scutellarius (Burm.f.) Merr) ......................................... 8
Gambar 8. Daun Gingseng (Talinum triangulare (Jacq.) Willd) .................................................... 9
Gambar 9. Daun Pohpohan (Pilea melastomoides (Poir.) Bl.) .......................................................... 9
Gambar 10. Kecombrang (Etlingera elatior Jack R. M. Sm)........................................................... 10
Gambar 11. Krokot (Portulaca oleracea) ......................................................................................... 11

v
 PENDAHULUAN

Kandungan Flavonoid pada beberapa makanan barat dilaporkan dan diarsipkan

dalam database Flavonoid USDA (USDA, 2007). Namun, sedikit diketahui mengenai
kandungan Flavonoid dan Non-Gizi Bioaktvitas pada makanan dari negara-negara
berkembang, termasuk Indonesia. Sejumlah sayuran di Jawa Barat digunakan untuk
makanan dan juga obat tradisional. Untuk makanan, tanaman ini dimakan mentah atau
direbus. Secara medis, mereka bisa digunakan dengan cara di rebus, atau digunakan sebagai
tapal. Beberapa tanaman asal Indonesia disaring karena adanya antiradang dan aktivitas
antioksida (CHOI & HWANG, 2005). Sedikit diketahui, konstituen mereka yang dapat
berkontribusi pada fungsi medis mereka. Informasi ini dibutuhkan untuk validasi
keamanan, penggunaan tradisional, serta untuk standarisasi persiapan dari tanaman
tersebut. Selanjutnya, informasi ini dapat digunakan untuk menetapkan database Flavonoid
dari Indonesia atau negara Asia Tenggara lainnya.

Karakterisasi Aktivitas Antioksidan dari sayuran, mungkin juga memberikan

wawasan untuk fungsi dari sayuran tersebut. Salah satunya antioksidan makanan yang
diperlukan ntuk mengatasi spesies oksidan reaktif yang dapat merusak DNA, RNA,
memodifikasi Protein, dan menyebabkan lipid peroksida dari target seluler Antioksidan
dapat menghambat inisiasi atau propagasi oksidasi (VELIOGLU, MAZAA, GAO, &
OOMAH, 1998). Ekstrak Sayuran dengan aktivasi antioksidan tinggi juga berguna untuk
pengawetan makanan. Oleh karena itu, tujuan dari penelitian ini adalah untuk menghitung
dan mengidentifikasi senyawa Flavonoid dari 11 sayuran berdaun hijau dari Jawa barat,
Indonesia. Serta untuk menyaring aktivitas antioksidan dan jumlah fenol.

1
 TINJAUAN PUSTAKA

Flavonoid

Senyawa flavonoid adalah senyawa polifenol yang mempunyai 15 atom karbon

yang tersusun dalam konfigurasi C6-C3-C6, yaitu dua cincin aromatik yang dihubungkan
oleh 3 atom karbon yang dapat atau tidak dapat membentuk cincin ketiga. Flavonoid
terdapat dalam semua tumbuhan hijau sehingga dapat ditemukan pada setiap ekstrak
tumbuhan (MARKHAM, 1988). Golongan flavonoid dapat digambarkan sebagai deretan
senyawa C6-C3-C6, artinya kerangka karbonnya terdiri atas dua gugus C6 (cincin benzena
tersubstitusi) disambungkan oleh rantai alifatik tiga karbon (ROBINSON, 1995).

Tumbuhan yang mengandung flavonoid banyak dipakai dalam pengobatan

tradisional. Hal tersebut disebabkan flavonoid mempunyai berbagai macam aktivitas
terhadap macam-macam organisme (ROBINSON, 1995). Penelitian farmakologi terhadap
senyawa flavonoid menunjukkan bahwa beberapa senyawa golongan flavonoid
memperlihatkan aktivitas seperti antifungi, diuretik, antihistamin, antihipertensi,
insektisida, bakterisida, antivirus dan menghambat kerja enzim (GEISSMAN, 1962).

Flavonoid merupakan kandungan khas tumbuhan hijau dan salah satu senyawa
aktif yang menjadi penelitian peneliti dalam mengembangkan obat tradisional Indonesia.
Hal penting dari penyebaran flavonoid dalam tumbuhan adalah adanya kecenderungan kuat
bahwa tumbuhan yang secara taksonomi berkaitan akan menghasilkan flavonoid yang
jenisnya serupa. Jadi informasi tumbuhan yang diteliti seringkali didapatkan dengan
melihat pustaka mengenai flavonoid terdahulu dalam tumbuhan yang berkaitan, misalnya
dari marga atau suku yang sama (MARKHAM, 1988).

2
 Antioksidan

Antioksidan dinyatakan sebagai senyawa secara nyata dapat memperlambat

oksidasi, walaupun dengan konsentrasi yang lebih rendah sekalipun dibandingkan dengan
substrat yang dapat dioksidasi. Antioksidan berperan penting untuk mempertahankan mutu
produk pangan. Berbagai kerusakan seperti ketengikan, perubahan nilai gizi, perubahan
warna dan aroma, serta kerusakan fisik lain pada produk pangan karena oksidasi dapat
dihambat oleh antioksidan. Berdasarkan sumbernya antioksidan dibagi dalam dua
kelompok, yaitu antioksidan sintetik (antioksidan yang diperoleh dari hasil sintesa reaksi
kimia) dan antioksidan hasil ekstraksi bahan alami (WIDJAYA, 2003).

Daun Katuk (Sauropus androgynus)

Katuk (Sauropus androgynus) merupakan tumbuhan sayuran yang banyak terdapat

di Asia Tenggara. Ciri-ciri tanaman katuk adalah cabang-cabang agak lunak, daun tersusun
selang-seling pada satu tangkai, berbentuk lonjong sampai bundar dengan panjang 2,5 cm,
dan lebar 1,25-3 cm. Katuk (Sauropus androgynus) merupakan tanaman obat-obatan
tradisionil yang mempunyai zat gizi tinggi, sebagai antibakteri, dan mengandung beta
karoten sebagai zat aktif warna karkas. Senyawa fitokimia yang terkandung di dalamnya
adalah : saponin, flavonoid, dan tanin, isoflavonoid yang menyerupai estrogen ternyata
mampu memperlambat berkurangnya massa tulang (osteomalasia), sedangkan saponin
terbukti berkhasiat sebagai antikanker, antimikroba,dan meningkatkan sistem imun dalam
tubuh (SANTOSO, 2009). Gambar daun katuk dapat dilihat pada gambar 1.

Gambar 1. Daun Katuk (Sauropus androgynus)

3
 Kenikir (Cosmos caudatus H.B.K)

Kenikir termasuk dalam family Compositae dan genus Cosmos. Kenikir

merupakan tanaman asli dari daerah tropis di Amerika yang kemudian di bawa oleh orang
Spanyol ke Filipina. Kenikir dapat tumbuh liar sebagai gulma di pekarangan rumah.
Menurut SASTRAPRAJA (1979), kenikir juga dapat tumbuh liar di tepi-tepi sawah atau
sungai. Kenikir menyukai sinar matahari yang penuh dengan kelembaban yang tidak terlalu
tinggi serta tanah yang subur. Tumbuh baik pada dataran rendah hingga dataran tinggi
dengan ketinggian 1,600 mdpl. Kenikir umumnya dibudidayakan untuk diambil pucuk
daunnya sebagai sayuran dan dijual di pasar tradisional dengan skala yang kecil. Sayuran
kenikir memang belum banyak ditemukan di pasar. Menurut VAN DEN BERGH (1994),
daun kenikir memiliki rasa dan bau yang kuat akibat kandungan turpentine. Selain sebagai
sayuran, kenikir juga digunakan sebagai tanaman hias. Kenikir yang bermanfaat sebagai
obat tradisional di Malaysia digunakan untuk membersihkan darah dan menguatkan tulang.
Saat ini, kenikir diusulkan sebagai tanaman tambahan dalam pertanian karena dapat
meningkatkan struktur tanah dan menekan pertumbuhan alang-alang. Kenikir juga
memiliki kandungan beberapa bahan aktif seperti fenol yang tinggi. Gambar kenikir dapat
dilihat pada gambar 2.

Gambar 2. Tanaman Kenikir (Cosmos caudatus H.B.K)

Kedondong Cina (Polyscias pinnata)

Kedondong Cina atau biasa disebut kedondong laut termasuk kedalam genus
Araliaceae. Polyscias pinnata termasuk tanaman perdu tahunan yang memiliki batang
tegak berkayu, dengan bentuk batang bulat dan berwarna hijau kekuningan. Batang
tanaman ini dapat mencapai ketinggian ± 6 meter. Daun kedondong cina ini tergolong daun

4
majemuk yang berwarna kekuningan dengan panjang 8-15 cm lebar 3-17 cm dan ujung
daun runcing sedangkan pangkal daun tumpul. Bagian yang dikonsumsi dari kedondong
Cina adalah daun muda. Daun kedondong Cina ini memiliki manfaat sebagai peluruh
kencing, menurunkan panas atau demam, melancarkan sistem pencernaan, dan
mengembalikan stamina tubuh. (ASIAMAYA, 2007) . Gambar kedondong cina dapat
dilihat pada Gambar 3.

Gambar 3.Daun Kedondong Cina (Polyscias pinnata)

Antanan (Centella asiatica)

Antanan atau biasa disebut tanaman pegangan (Centella asiatica (L.) Urban)
merupakan tanaman liar yang mempunyai prospek cukup baik sebagai tanaman obat.
Antanan telah ditetapkan sebagai tanaman obat tradisional sejak tahun 1884. Antanan tidak
terlalu menyebabkan efek samping karena dapat dicerna oleh tubuh dan toksisitasnya
rendah. Antanan mengandung beberapa senyawa bioaktif seperti asiatikosida berupa
glikosida, yang banyak digunakan dalam ramuan obat tradisional atau jamu, baik dalam
bentuk ramuan maupun sebagai bahan tunggal. Asiatikosida berkhasiat meningkatkan
vitalitas dan daya ingat serta mengatasi pikun yang berkaitan erat dengan asam nukleat
(BROTOSISWORO 1979). Gambar antanan dapat dilihat pada gambar 4.

5
 Gambar 4. Tanaman Antanan (Centella asiatica)

Kemangi (Ocimum americanum L.)

Tanaman kemangi merupakan tanaman yang mengandung satu atau lebih bahan
aktif yang dapat digunakan sebagai obat herbal. Tanaman ini salah satu bahan obat
tradisional yang terkenal memiliki banyak manfaat seperti antidiabetik, antibakteri,
antihiperglikemik, juga dilaporkan mempunyai aktivitas sebagai antiinflamatori dan
mempunyai efek aktivitas antioksidan. Gambar tanaman kemangi dapat dilihat pada
gambar 5.

Gambar 5.Tanaman Kemangi (Ocimum americanum L.)

6
 Beluntas (Pluchea indica Less.)

Beluntas merupakan suatu tanaman obat tradisional Indonesia. Tanaman beluntas

memiliki habitat perdu dengan tinggi 1-1,5 m. Memiliki batang berkayu, bulat, tegak,
bercabang, bila masih muda berwarna ungu setelah tua warnanya putih kotor. Memiliki
daun tunggal yang berbentuk bulat telur, tepi rata, ujung runcing, pangkal tumpul, berbulu
halus, panjang 3,8-6,4 cm, lebar 2-4 cm, pertulangan menyirip, warna hijau muda hingga
hijau. Memiliki bunga yang majemuk, mahkota lepas, putik bentuk jarum, panjang ± 6 mm,
berwarna hitam kecoklatan, kepala sari berwarna ungu, memiliki dua kepala putik yang
berwarna putih atau putih kekuningan. Akar beluntas merupakan akar tunggang dan
bercabang (SULISTIYANINGSIH , 2009). Gambar Beluntas dapat dilihat pada gambar
6.

Menurut SYAMSUHIDAYAT DAN HUTAPEA (1991) bahwa klasifikasi

tumbuhan beluntas yaitu

Divisi : Spermathophyta
Sub divisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Bangsa : Asterales
Suku : Asteraceae
Marga : Pluchea
Jenis : Pluchea indica Less.

Gambar 6. Tanaman Beluntas (Pluchea indica Less.)

7
 Mangkokan (Nothopanax scutellarius(Burm.f.) Merr)

Mangkokan atau daun mangkokan (Nothopanax scutellarium Merr.) adalah

tumbuhan hias pekarangan dan tanaman obat yang relatif populer di Nusantara.
Namanya mengacu pada bentuk daunnya yang melengkung serupa mangkok.
Tumbuhan ini sering ditanam sebagai tanaman hias atau tanaman pagar, tumbuhan ini
dapat ditemukan di ladang atau di tepi sungai karna tanaman ini tumbuh liar. Daun
mangkok jarang atau tidak pernah berbunga, tumbuhan ini terdapat ditempat yang
terkena sinar matahari dan tumbuh pada ketinggian 1-200 M. Batang berkayu,
bercabang, berbentuk bulat, panjang dan lurus. Daun tunggal, bertangkai, agak tebal,
bentuknya bulat berlekuk seperti mangkok, pangkal berbentuk jantung, tepi bergerigi,
diameter 6-12 cm, pertulangan menyirip, berwarna hijau tua (BUDIHARTI, 2006).
Gambar mangkokan dapat dilihat pada gambar 7.

Gambar 7. Daun Mangkokan (Nothopanax scutellarius (Burm.f.) Merr)

Daun Ginseng (Talinum triangulare (Jacq.)Willd.)

Daun Gingseng (Talinum triangulare (Jacq.) Willd) merupakan tumbuhan

sukulen dari famili portulacaceae yang berkhasiat obat. Daun dan tajuk tumbuhan ini
dapat dikonsumsi sebagai sayur lalapan yang mengandung gizi tinggi . Tumbuhan ini
juga ditanam sebagai tanaman hias dalam pot atau sebagai tanaman pinggir di kebun-
kebun (RIFAI, 1994). Penduduk Kalimantan Selatan menggunakan daun kolesom

8
sebagai campuran bahan bedak dingin. Gambar daun gingseng dapat dilihat pada Gambar
8.

Gambar 8. Daun Gingseng (Talinum triangulare (Jacq.) Willd)

Pohpohan (Pilea melastomoides (Poir.) Bl.)

Tanaman pohpohan memiliki nama ilmiah Pilea trinervia, Wight., dengan nama
sinonim Pilea melastomoides, (Poir.). Pohpohan yang termasuk dalam suku Urticaceae dan
marga Pilea, merupakan tanaman terna dengan batang tegak dan kuat yang tumbuh 0,5-2
meter, tidak memiliki duri. Daun tumbuh berseberangan dua helai. Helaian daun berbentuk
bulat meruncing atau berbentuk elips, tepi daun bergerigi (serrate), dengan dasar daun
tumpul dan ujung runcing, pertulangan daun melengkung, dan berbau harum. Daun poh
pohan dikonsumsi masyarakat sebagai lalapan dan mengandung banyak kandungan
kalsium dan juga mengandung asam askorbat, senyawa fenol alfa tokoferol, dan beta
karoten yang berfungsi sebagai antioksidan. Gambar daun pohpohan dapat dilihat pada
Gambar 9.

Gambar 9. Daun Pohpohan (Pilea melastomoides (Poir.) Bl.)

9
 Kecombrang ( Etlingera elatior Jack R. M. Sm )

Kecombrang atau asam cekala (Etlingera elatior) merupakan salah satu keluarga
Zingiberacea yang asli tumbuh di Indonesia. Kecombrang atau yang biasa dikenal
masyarakat Sumatera Utara sebagai kencong atau kincung atau honje di kalangan
masyarakat Sunda telah lama dipergunakan sebagai penyedap masakan untuk mendapatkan
rasa asam yang sedap dan menyegarkan.Tanaman ini sendiri adalah tanaman tahunan
berbentuk semak dengan ketinggian 1-3 m dengan batang semu yang tegak dan berpelepah
serta bentuknya menyerupai rimpang. Kandungan kimia yang terdapat di daun, batang,
bunga, dan rimpang kecombrang adalah saponin dan flavonoid. Selain itu, kecombrang
juga mengandung polifenol dan minyak atsiri (NAUFALIN, 2005). Gambar kecombrang
dapat dilihat pada Gambar 10.

Gambar 10. Kecombrang (Etlingera elatior Jack R. M. Sm)

Krokot (Portulaca oleracea)

Krokot (Portulaca oleracea) atau dikenal di beberapa negara barat sebagai

“Purslane” atau cat’s tongue (lidah kucing) atau ada juga yang menyebutnya sebagai weed
purslene atau “rumput purslane”. Tanaman ini bahkan telah dikenal di seluruh dunia
sebagai tanaman yang dapat dimakan sekaligus memiliki manfaat kesehatan. Krokot
memiliki kandungan antioksidan dan vitamin-vitamin penting. Selain itu, Krokot juga
mengandung sejumlah besar protein yang akan memberi Anda cukup energi. Gambar
krokot dapat dilihat pada Gambar 11.

10
 Gambar 11. Krokot (Portulaca oleracea)

HPLC (High Performance Liquid Chromatography)

Prinsip dasar dari HPLC (High PerformanceLiquid Chromatography) , dan semua

metode kromatografi adalah memisahkan setiap komponen dalam sample untuk
selanjutnya diidentifikasi (kualitatif) dan dihitung berapa konsentrasi dari masing-masing
komponen tersebut (kuantitatif). Analisa kualitatif bertujuan untuk mengetahui informasi
tentang identitas kimia dari analat dalam suatu sample. Sedangkan analisa kuantitaif untuk
mengetahui jumlah dan konsentrasi analat tersebut dalam sample (RIYADI, 2009).

Teknik HPLC merupakan satu teknik kromatografi cair- cair yang dapat digunakan
baik untuk keperluan pemisahan maupun analisis kuantitatif. Analisis kuantitatif dengan
teknik HPLC didasarkan kepada pengukuran luas atau area puncak analit dalam
kromatogram, dibandingkan dengan luas atau area larutan standar. Pada prakteknya,
perbandingan kurang menghasilkan data yang akurat bila hanya melibatkan satu standar,
oleh karena itu maka perbandingan dilakukan dengan menggunakan teknik kurva kalibrasi
(CUPRITABU, 2010).

1. Reservoir pelarut : zat pelarut yang dipakai polaritasnya dapat bervariasi

tergantung dari senyawa yang dianalisis, yang perlu diperhatikan adalah bahwa
tempat pelrut tersebut harus memungkinkan untuk proses menghilangkan gas atau
udara yang ada dalam pelarut
2. Pompa : digunakan untuk mengalirkan pelarut sebagai fase mobile dengan
kecepatan dan tekanan yang tetap
3. Injektor : saat sampel diinjeksikan ke dalam kolom, diharapkan agar pelarut tidak
mengganggu masuknya keseluruhan sampel ke dalam kolom. Injeksi dapat
menggunakan syringe.

11
4. Kolom krmatografi : kolom yang dipakai memiliki panjang 10 – 25 cm dan
diameter 4,5 – 5 mm yang diisi dengan fase stasioner beukuran 5-10 mikrometer
dan terbuat dari logam atau stainlessteel.
5. Detektor : digunakan untuk mendeteksi sampel. Detektor dibutuhkan untuk
mempunyai sinsitivitas yang tinggi, linear untuk jangka konsentrasi tertentu dan
dapat mendekati eluen tanpa mempengaruhi resolusi kromatografi.

12
 PERCOBAAN

Alat dan Bahan

Alat

Alat yang digunakan dalam penelitian ini, antara lain LC-2040 HPLC
Shimadzu dilengkapi detector UV-Vis Hewlett-Packard Series 1100 Agilent
Technologies dan reverse-phase Develosil ODS-UG-3 column (4.6 mm i.d. x 75
mm) Nomura, IEC Centra-8 Centrifuge Waltham, oven, inkubator, dan cawan
alumunium.

Bahan

Bahan kimia/reagen yang digunakan dalam penelitian ini, antara lain Trolox
(6-hidroksi-2, 5, 7, 8-tetrametillkroman-2-asam karboksilat), DPPH (2, 2-difenil-1-
pikrilhidrazil), Flavonoid, TBHQ (tert-butilhidrokuinon), dan ABTS (2, 2-azino-
bis- (asam 3-etilbenzthiazolin-6-sulfonat)) yang dibeli dari Sigma-Aldrich (St
Louis, MO) serta asetonitril, metanol, etanol, pereaksi Folin-Ciocalteu, asam
klorida (HCl), KH2PO4, asam trikloroasetat (TCA), potasium besi sianida yang
diperoleh dari E-Merck (Darmstadt, Jerman).

Bahan tumbuhan yang digunakan adalah sayuran asli Indonesia, antara lain
daun katuk, daun kenikir, daun kemangi, dan daun pohpohan yang diperoleh dari
pasar lokal di Bogor dan kedondong cina, antanan, beluntas, mangkokan, daun
gingseng, dan krorkot yang diperoleh dari hasil budidaya di tanah sekitar Intitut
Pertanian Bogor. Tumbuhan dan sayuran yang digunakan dalam keadaan segar,
bebas dari noda dan cacat yang jelas.

13
 Tabel 1. Nama dan kegunaan tradisional dari sayuran asal Jawa Barat, Indonesia

Nama
Nama Ilmiah Efek/Kegunaan Tradisional
Indonesia

Sauropus androgynus (L) Mengurangi demam, merangsang laktasi, dan

Katuk
Merr suara serak.

Kenikir Cosmos caudatus H.B.K Meningkatkan sirkulasi, kekuatan tulang.

Untuk sakit kepala, demam, pilek, hidung

Kemangi Ocimum americanum L. tersumbat, sariawan, radang di telinga,
perangsang laktasi, sembelit

Pilea melastomoides
Pohpohan -
(Poir.) Bl.

Kedondong Mengurangi bau badan, obat cuci mata,

Polyscias pinnata
Cina mengurangi nafsu makan, mual

Mengurangi demam, bau mulut, bau badan, nyeri

Beluntas Pluchea indica Less.
otot, haid, nyeri perut bagian bawah, kram perut

Daun
Talinum triangulare Meningkatkan stamina dan imunostimulan
Gingseng (Jacq.) Willd.

Nothopanax scutellarius Untuk bengkak payudara, membantu laktasi,

Mangkokan
(Burm.f.) Merr luka, buang air kecil, rambut rontok

Untuk disentri, diare, peradangan, usus buntu,

Krokot Portulaca oleracea
peradangan payudara, sembelit, wasir, cacing

Dimakan untuk mengurangi perdarahan, penguat

Antanan Centella asiatica untuk wanita pasca-partum, tapal untuk
penyembuhan luka, batuk, demam

Etlingera elatior (Jack) Mengurangi bau ikan, menghambat bakteri

Kecombrang
R.M.Sm patogen dan jamur pada makanan

14
 Metode Penelitian

Persiapan Sampel

Sayuran dipersiapkan dalam keadaan segar dan bebas dari noda atau cacat
yang jelas (Tabel 1) dan dibersihkan kemudian segera disimpan pada suhu -20° C
semalaman. Sampel dilyofilisasi selama 48 jam. Hasilnya sayuran kering hancur
menjadi bubuk 30 mesh kemudian disimpan pada suhu 20° C dalam keadaan
gelap.

Analisis Kelembaban

Kadar air sayuran mentah (segar dan beku-kering) ditentukan menurut

metode yang sebelumnya diterbitkan (AOAC, 1984). Sampel sayuran sebanyak 5 g
dimasukkan ke cangkir aluminium kemudian dikeringkan menggunakan oven pada
suhu 100° C selama 6 jam.

Total Fenol

Sampel sayuran beku-kering 50 mg diekstraksi dengan pengocokan

menggunakan 2,5 mL dari larutan etanol 95%. Selanjutnya disentrifugasi pada 1536
g menggunakan alat IEC Centra-8 Centrifuge Waltham selama 5 menit, aliquot dari
supernatan yang disediakan untuk konten total fenolik dan tes antioksidan.

Metode Folin digunakan untuk menentukan konten fenolik dari ekstrak

sayuran. Total fenol dihitung berdasarkan kurva standar 50-300 mg/L asam galat.
Inter-assay dan intra-assay CV masing-masing adalah 1,8% dan 7,0%.

15
DPPH Scavenging

Aktivitas scavenging DPPH diukur berdasarkan metode Merek-Williams,

Cuvelier, dan Berset (1995). Ekstrak sayuran 100 mg/mL ditambahkan ke 0,5 mL
dari 0,1 M larutan DPPH dalam methanol dan absorbansi diukur pada 517 nm
untuk inkubasi 30 menit pada 27° C. Antioksidan dinyatakan sebagai Trolox
equivalent, atas dasar 0,8 mM Trolox mengais 41% dari radikal DPPH. Inter-assay
dan intra-assay CV masing-masing adalah 2,2% dan 3,5%.

ABTS Trolox Equivalent Antioxidant Capacity (TEAC)

Aktivitas scavenging ABTS ditentukan dengan metode TEAC menurut Yen

dan Yen (2003). TEAC assay didasarkan pada kapasitas untuk mengisi ABTS·+
bentuk radikal relative terhadap Trolox. Secara singkat 0,1 mL ekstrak mewakili
0,14-0,51 mg/mL berat kering tanaman diinkubasi selama 45 menit dengan 0,9 mL
larutan ABTS, dan absorbansi ABTS diukur pada 734 nm. Data dinyatakan sebagai
Trolox equivalent, berdasarkan kurva standar 0-0,5 M Trolox. Inter-assay dan intra-
assay CV masing-masing adalah 0,4% dan 3,7%.

Kekuatan Mereduksi Besi

Kekuatan mereduksi ditentukan dengan metode Oyaizu (1986). Potassium

besi sianida ditambahkan ekstrak kering 0-500 mg/mL dalam 2,5 mL buffer fosfat
(0,2 M, pH 6,6) dan diinkubasi pada 50° C selama 20 menit. Setelah inkubasi, TCA
(100 mg/mL, 2,5 mL) dan FeCl2 (10 mg/mL, 0,5 mL) ditambahkan ke campuran
dengan total volume 5,5 mL dan absorbansi dibaca pada 700 nm. Kekuatan
mereduksi diukur atas dasar Trolox setara, dari kurva standar 0-0,5 M Trolox. Inter-
assay dan intra-assay CV masing-masing adalah 1,9% dan 1,0%.

16
Penghambatan Oksidasi Lipid

Kemampuan ekstrak untuk mencegah oksidasi asam linoleat diukur

menggunakan metode TBA (asam 2-tiobarbiturat) seperti yang dijelaskan
sebelumnya (Aqil, Ahmad, & Mehmood 2006). Asam linoleat dioksidasi dengan
pemanasan ekstrak sayuran dalam etanol. Reaksi terdiri dari 4 mg ekstrak kering
dalam 4 mL etanol absolut, asam linoleat 4,1 mL dalam etanol 2,52%, 8 mL buffer
fosfat 0,05 M pada pH 7 dan 3,9 mL air dalam botol tertutup dan diinkubasi pada
40° C oven selama 6 hari. Zat reaktif TBA (TBARs) diukur pada 532 nm. Hasilnya
dinyatakan sebagai penghambatan persen pembentukan TBARs kontrol tanpa
penambahan antioksidan, menggunakan kurva standar tetrametoksipropan 0,5-3,0
µM. Inter-assay dan intra-assay CV masing-masing adalah 0,3% dan 0,5%.

Analisis Flavonoid

Sejak flavonoid terdapat dalam berbagai sayuran, flavonol quercetin,

kaempferol, myricetin dan flavones apigenin dan luteolin dihitung dalam ekstrak
sayuran berdasarkan metode Hertog, Hollman, dan Venema (1992). Sayuran hasil
liofilisasi (0,5 atau 1 g) diekstraksi selama 1 jam pada 50° C dalam 50% larutan
metanol mengandung 1,2 M HCl dan 0,5 g/L TBHQ.
Ekstrak dibiarkan dingin dan larutan dibuat hingga 100 mL dengan metanol.
Sekitar 2 mL disaring melalui 0,45 µm filter dan 20 µL disuntikkan ke sebuah LC-
2040 HPLC (Shimadzu, Kyoto, Jepang) dilengkapi dengan detector UV-Vis
Hewlett-Packard Series 1100 (Agilent Technologies, Inc, Santa Clara, CA) dan
reverse-fase Develosil ODS-UG-3 kolom (4.6 mm id 75 mm) (Nomura Chemikal,
Seto, Jepang), dan dielusi dengan isokratik asetonitril 25% dalam 0,025 M KH2PO4
pada tingkat alir 0,9 mL/menit.
Flavonoid dihitung berdasarkan perbandingan dengan standar di 370 nm.
Batas deteksi (di µg/mL pada kolom) adalah 0,02 untuk quercetin, 0,04 untuk
kaempferol, 0,03 untuk myricetin, 0,19 untuk apigenin, dan 0,04 untuk luteolin.
Standard persamaan regresi kurva Y = 114,2(X) - 25,8 untuk quercetin, Y =
67,60(X) - 17,8 untuk kaempferol, Y = 125,9(X) - 14,5 untuk myricetin, Y =

17
46,19(X) - 8,99 untuk luteolin, dan Y = 16.62(X) - 2,72 untuk apigenin, dimana Y
adalah detektor kembali sponse dan X adalah konsentrasi standar. Untuk persamaan
regresi, dimana nilai R2 ≥0,999. Inter dan intra-assay CV untuk kuantifikasi
masing-masing berkisar 1,9-4,8 dan 3,7-6,5 untuk standar flavonoid.

Analisis Statistik

Data disajikan sebagai rata-rata ± standar deviasi dari penentuan paling

sedikit rangkap tiga. Statistik signifikansi menggunakan ANOVA satu arah dengan
P values ≤0,05 dianggap signifikan. ANOVA dan analisis korelasi Pearson dengan
GraphPad prisma v 5,01 (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA).

18
 PEMBAHASAN

Ekstrak dari 11 sayuran dari Indonesia disaring kandungan flavonoid, fenol total,
dan aktivitas antioksidan sejak itu mereka sering digunakan sebagai obat tradisional dan
sebagai makanan (Tabel 1). Asupan flavonoid murah hati telah terlibat dalam pengurangan
risiko penyakit kronis seperti stroke, penyakit kardiovaskular, dan beberapa jenis kanker.
Misalnya, peningkatan konsumsi brokoli dan bayam, yang kaya kaempferol, dikaitkan
dengan penurunan risiko kanker ovarium (Gates et al., 2007).

Jumlah fenol

Jumlah fenol berkisar antara 0,33 hingga 1,52 mg GAE / g berat segar (fw)
(Tabel 2). Cosmos caudatus H.B.K. dan Sauropus androgynus (L) Merr memiliki
tingkat fenolat terbesar dengan 1,52 dan 1,49 mg GAE / g fw, masing-masing. S.
androgynus (L) Merr dan Centella asiatica memiliki 8,71 dan 5,82 mg GAE / g
berat kering (dw) masing-masing.

Aktivitas antioksidan dari ekstrak

Pluchea indica Kurang. dan C. caudatus H.B.K. ekstrak linoleat yang

dihambat oksidasi asam ke tingkat terbesar dan memiliki yang terbesar DPPH,
ABTS, dan kapasitas antioksidan sianida besi relatif terhadap sayuran lainnya
(Tabel 2). Sementara semua ekstrak memiliki antioksidan aktivitas dalam uji
DPPH, S. androgynus (L) Merr dan Polyscias pinnata termasuk yang paling kuat
dari ekstrak, dengan 7,7 dan 7.1 TE / g fw. Tingkat fenolat yang relatif tinggi
diamati di S. androgynus (L) Merr, sehingga kapasitasnya menurun ke DPPH dan
ABTS radikal memulung, pengurangan besi, dan penghambatan lipid peroksidasi
sangat penting. Portulaca oleracea memiliki antioksidan paling sedikit aktivitas di
ABTS dan besi sianida mengurangi tes. Oleh karena itu, sayuran dalam penelitian
ini dapat berkontribusi asupan antioksidan diet.

19
 Korelasi

Konsisten dengan literatur, nilai total fenol sangat berkorelasi dengan

DPPH, ABTS dan besi sianida yang mengurangi daya antioksidan nilai-nilai
dengan nilai R 0,77, 0,79, 0,85, masing-masing (P <0,01). Kandungan flavonoid
tidak berkorelasi dengan antioksidan aktivitas di DPPH, ABTS, dan mengurangi tes
daya. Flavonoid konten berkorelasi negatif dengan penghambatan oksidasi lipid (R
= 0,78, P = 0,005). Pengaruh ini juga bisa dikaitkan dengan logam atau konstituen
pro-oksidan lainnya dalam ekstrak. ABTS, DPPH, dan langkah-langkah
mengurangi daya antioksidan besi sangat berkorelasi (R> 0,9000, P <0,0001)
dengan satu sama lain, dengan pangkat berbeda pesanan kapasitas antioksidan.
Hasil ini menyoroti kontribusi fenolik untuk aktivitas antioksidan in vitro dari
sayuran dan kebutuhan untuk menganalisis keragaman tes antioksidan untuk
mendapat peringkat aktivitas antioksidan.

Kandungan flavonoid

Kandungan flavonoid dari 11 sayuran dari Jawa Barat, Indonesia bervariasi

dari 0,3 hingga 143 mg / 100 g fw (4,0–832 mg / 100 g dw) (Tabel 3). S. androgynus
(L) Merr, C. caudatus H.B.K., dan P. Pinnata 1,5 kali lipat atau lebih flavonoid
daripada sayuran yang tersisa. Quercetin dan kaempferol terdiri dari 60% atau lebih
flavonoid dalam sayuran yang dianalisis, sedangkan myricetin, luteolin, dan
apigenin kurang berlimpah. Nilai-nilai dalam penelitian ini berada dalam jangkauan
Nilai flavonoid USDA untuk sayuran berdaun hijau barat seperti 312, 6, dan 3 mg
/ 100 g fw untuk peterseli, bayam, dan selada es masing-masing (USDA, 2007).

Penelitian ini rupanya merupakan laporan kuantitatif pertama profil

flavonoid untuk tujuh sayuran, termasuk P. indica Less., T. triangulare (Jacq.)
Willd., Pilea melastomoides (Poir.) Bl., C. Caudatus H.B.K., Nothopanax
scutellarius (Burm.f.) Merr, Etlingera elatior (Jack) R.M.Sm, dan P. pinnata.
Flavonoid dari P. indica Kurang. adalah 81% quercetin, dengan jumlah myricetin
dan kaempferol yang lebih sedikit. T. triangulare (Jacq.) Willd. flavonoid adalah

20
90% kaempferol, dengan lebih rendah jumlah quercetin. P. melastomoides (Poir.)
Bl., N. Scutellarius (Burm.f.) Merr, E. elatior (Jack) R.M.Sm, dan P. indica Kurang.
memiliki flavonoid konten mulai dari 1,18 hingga 6,39 mg / 100 g fw. C. Caudatus
H.B.K. dan P. pinnata dapat berkontribusi secara signifikan terhadap flavonoid diet
Asupan saat dikonsumsi, karena mereka memiliki 50% lebih dari USDA nilai untuk
kale, sayuran barat flavonoid tinggi (USDA, 2007).

Tingkat flavonoid yang dilaporkan di sini adalah dalam kisaran sebelumnya

analisis. Spina dan lain-lain (2008) melaporkan bahwa krokot lliar dan
dibudidayakan memiliki 0,46-0,54 mg quercetin / 100 g dw. Pekerjaan yang sama
juga mendeteksi luteolin pada 1.0-4.3 mg / 100 g dw dalam krokot, meskipun kami
tidak (LOD 0,04 mg / 100 g). Meskipun kami mengamati hampir 10 kali lipat lebih
banyak konten dalam spesies yang sama. Perbedaan ini dapat dikaitkan dengan
perbedaan waktu ekstraksi dan hidrolisis dan suhu (1 jam pada 50◦ C dibandingkan
dengan 2 jam pada 90◦ C), atau preharvest tersebut faktor-faktor seperti iklim,
geografi, atau praktik agronomi.

Ketika dikonsumsi secara teratur, sayuran ini dapat berkontribusi a sejumlah

besar flavonoid untuk diet Indonesia, memasok sekitar 0,08–36 mg untuk porsi 25
g (± 1 cangkir). Isi flavonoid pada sayuran Jawa barat berada di kisaran yang
dengan sayuran berdaun hijau barat, dan semua kecuali tiga sayuran dalam
penelitian ini memiliki kandungan flavonoid lebih tinggi daripada 1– 3 mg
flavonoid / 100 g fw. Asupan flavonoid yang banyak berkorelasi dengan manfaat
kesehatan seperti risiko yang lebih rendah dari kondisi kronis seperti kardiovaskular
penyakit, stroke, dan beberapa kanker (Cutler et al., 2008).

Demikian pula, sayuran yang mengandung flavonoid seperti S. androgynus

(L) Merr dan P. indica (Kurang.) kurang memiliki penggunaan antipiretik dalam
tradisional Indonesia obat. Oleh karena itu, analisis potensi asupan flavonoid dan
aktivitas antioksidan dari waran sayuran ini penyelidikan lebih lanjut terhadap
mekanisme tindakan Indonesia penggunaan obat tradisional dari sayuran ini.

21
 SIMPULAN

Kandungan flavonoid dari sayuran yang dipelajari terutama quercetin dan

kaempferol dan berkisar 0,3-1,4 mg / 100 g fw, dengan tingkat tertinggi ditemukan
pada Sauropus androgynus (L) Merr. C. caudatus H.B.K. yang memiliki total fenol
terbesar di antara sayuran yang dianalisis, dengan 1,52 mg GAE / 100 g fw. P.
indica Kurang. dan C. caudatus H.B.K. memiliki aktivitas antioksidan tertinggi
yang diukur dengan kekuatan reduksi sianida besi, DPPH (2,2-difenil-1-
pikrilhidrazil) dan ABTS (2,20-azino-bis- (3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid)
pemulungan, dan penghambatan oksidasi asam linoleat. Oleh karena itu, S. dan
rogynus (L) Merr, C. caudatus HBK, dan P. pinnata diidentifikasi sebagai sumber
kaya berpotensi flavonoid dan antioksidan.

22
 DAFTAR PUSTAKA

ASIAMAYA. 2007. Kandungan nutrisi daun salam.

http://www.asiamaya.com/nutrients/dauns alam.htm. Diakses 24 November 2018,
10.10 WIB.

BROTOSISWORO, S., 1979, Obat Hayati Golongan Glikosida, Yogyakarta, Fakultas

Farmasi Universitas Gajah Mada

CUPRITABU, 2010. Menghitung Kadar Parasetamol dalam Obat dengan HPLC.

http://cuprittrappedonlab.blogspot.com. 24 November 2018.

CUTLER, G. J., NETTELTON, J. A., ROSS, J. A., HARNACK, L. J.,

JACOBS, D. R., Jr., SCRAFFORD, C. G.,et al. (2008). Dietary
flavonoid intake and risk of cancer in postmenopausal women: The Iowa
women’s health study. International Journal of Cancer, 123, 664–671.
GATES, M. A., TWOROGER, S. S., HECHT, J. L., DE VIVO, I., ROSNER,
B., & HANKINSON, S. E. (2007). A prospective study of a dietary
flavonoid intake and incidence of epithelial ovarian cancer. International
Journal of Cancer, 121, 2225–2232.

GEISSMAN, T. A., 1962, The Chemistry of Flavonoid Counpound, Hal 51, Pergamon
Press, Oxford.

HWANG Y.P., CHOI J.H., HAN E.H., KIM H.G., WEE J.H., JUNG K.O., JUNG
K.H., KWON K.I., JEONG T.C., CHUNG Y.C., dan JEONG H.G. 2011.
Nutrition Research 31 : 896–906

MARKHAM, K.R., 1988, Cara Mengidentifikasi Flavonoid, diterjemahkan oleh Kosasih

Padmawinata, 15, Penerbit ITB, Bandung.

NAUFALIN, R. 2005. Kajian sifat Antimikroba Ekstrak Bunga Kecombrang (Nicolaia

speciosa Horan) terhadap Berbagai Mikroba Patogen dan Perusak Pangan.
Disertasi. Sekolah Pasca Sarjana. Institut Pertanian Bogor, Bogor.

RIFAI, MA. 1994. Talinum triangulare (Jacq.) Willd. Di dalam : Plant Resources of
South East Asia 8 : Vegetable. hlm 268.

RIYADI, W. 2009. Identifikasi signal kromatogram

HPLC. http://wahyuriyadi.blogspot.com. 24 November 2018.

ROBINSON, T., 1995, Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi, Edisi VI, Hal 191-216,
Diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, ITB, Bandung.

SANTOSO, S. Kesehatan dan Gizi. Jakarta : Rineka Cipta; 2009

SASTRAPRADJA, S., J.J. AFRIASTINI. (1985). Kerabat Paku. Bogor : Lembaga

Biologi Nasional-LIPI

23
SULISTIYANINGSIH, 2009. Potensi Daun Beluntas (Pluche indica Less.) Sebagai
Inhibitor Terhadap Pseudomonas aeruginosa Multi Resistant dan Methicillin
Resistant Staphylococcus aureus. Laporan Penelitian Mandiri. Fakultas Farmasi
Universitas Padjajaran: Bandung.

SYAMSUHIDAYAT dan HUTAPEA, J.R., 1991, Inventaris Tanaman Obat Indonesia,

305-306, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Badan Penelitian dan
Pengembangan Kesehatan , Jakarata.

UNITED STATES DEPARTMENT OF AGRICULTURE (2007). USDA

database for the flavonoid content of selected foods. Available from
http://www.nal.usda.gov/fnic/ foodcomp/Data/Flav/Flav02-1.pdf.

USDA. (2007). National Nutrient Database for Standard Reference.

http://www.nal.usda.gov/foodcomp/search

VAN DEN BERGH. 1994. Cosmos caudatus Kunth., p. 152-153. In: Siemonsma, J. S. and
K. Piluek (Eds). Plant Resources of South East Asia - No. 8 Vegetables. Prosea.
Bogor. Indonesia.

VELIOGLU, Y. S., G. MAZZA, L. GAO, & B. D. OOMAH. 1998. Antioxidant activity

and total phenolics in selected fruits, vegetables, and grain products. J. Agric. Food
Chem. 46: 4113-4117.

WIDJAYA, C.H. 2003. Peran Antioksidan Terhadap Kesehatan Tubuh, Healthy Choice.
Edisi IV.

24
 LAMPIRAN

Tabel 2. Total fenol dan aktivitas antioksidan ekstrak dari sayuran asal Indonesia.

Tabel 3. Kandungan flavonoid dari ekstrak dari sayuran asal Indonesia ditentukan oleh
analisis HPLC.

25