- 1341 -
untuk penggunaan indikator biologi dan pengukuran
yang sesuai sebelumnya untuk digunakan dalam
aktivitas validasi sterilisasi.
Perolehan Kembali
Setelah melengkapi prosedur sterilisasi Indikator
Biologi untuk Sterilisasi Panas Kering dengan Pembawa
Kertas dan Indikator Biologi untuk Sterilisasi Etilen
Oksida, dengan Pembawa Kertas; atau Indikator Biologi
untuk Sterilisasi Uap dengan Pembawa Kertas yang
dapat diterapkan dan dalam catatan waktu tidak lebih
dari 4 jam, buka secara aseptik dan tambahkan tiap strip
ke dalam media sesuai (lihat Media di bawah Uji
Sterilitas <71>) untuk merendam indikator biologi
dalam tabung yang sesuai. Untuk tiap Indikator Biologi
untuk Sterilisasi Uap Basah, Self-Contained spesimen,
strip kertas direndam dalam media self-contained
menurut petunjuk pabrik, dalam catatan waktu tidak
lebih dari 4 jam. Inkubasi tiap tabung pada suhu rekoveri
optimal yang ditetapkan pabrik. Amati tiap tabung berisi
media yang diinokulasi pada interval yang cukup untuk
total 7 hari setelah inokulasi. (Bila terjadi pertumbuhan
pada saat pengamatan maka inkubasi tidak perlu
dilanjutkan). Catat jumlah spesimen yang tidak tumbuh
pada tiap waktu.
Untuk Indikator Biologi untuk Sterilisasi Uap Basah,
Pemanasan Kering, dan Sterilisasi Gas, Pembawa
Bukan kertas, rekoveri spora dari pembawa indikator
biologi akan mengikuti prosedur yang dijelaskan dalam
prosedur Angka Total Spora Hidup. Metode penetapan
nilai-D indikator biologi dengan pembawa kertas dapat
digunakan untuk menghitung nilai-D untuk pembawa
bukan kertas. Kondisi inkubasi mikroba yang akan
digunakan untuk indikator biologi dengan pembawa
bukan kertas dijelaskan dalam bab Angka Total Spora
Hidup.
Untuk Indikator Biologi untuk Sterilisasi Uap Basah,
Pemanasan Kering, dan Gas, Suspensi Spora Cair,
metode rekoveri setelah kondisi pemaparan sterilisasi
adalah metode yang dijelaskan dalam bab Angka Total
Spora Hidup suspensi spora cair, dan jika penetapan
nilai-D pemanasan kering dibuat dari suspensi B.
atrophaeus, prosedur rekoveri sama seperti dijelaskan
dalam Indikator Biologi untuk Sterilisasi Uap Basah
dengan Pembawa Kertas.
Ketika digunakan Clostridium sporogenes sebagai
indikator biologi, metode persiapan, inokulasi, metode
rekoveri dan media harus diadaptasikan untuk dapat
mengakomodasi penggunaan pembentukan spora
anaerob.
Penghitungan
Penetapan nilai-D indikator biologi dapat dilakukan
menggunakan Metode Spearman-Karber Terbatas,
Kurva Survival atau prosedur Sumbu-Murphy-Cochran.
Lebih baik menggunakan metode sama dengan yang
ditetapkan oleh pabrik indikator biologi untuk
menetapkan nilai-D. Penggunaan metode berbeda akan
memberikan hasil berbeda lebih kepada sebagai alat dari
pada variasi kinerja indikator biologi.
Gunakan dua kelompok, masing-masing terdiri dari
10 indikator biologi yang relevan, dalam wadah asli.
Tempatkan spesimen tiap kelompok dalam rak spesimen
yang memungkinkan tiap spesimen terpapar kondisi
sterilisasi pada lokasi khusus dalam bejana REIB.
Lakukan pemaparan spesimen untuk
yang disyaratkan, masukkan ke dalam bejana, dan
pisahkan wadah yang berisi 10 spesimen. Ulangi
prosedur di atas segera, atau panaskan sebelumnya bila
selang waktu yang cukup telah dilampaui, sehingga
wadah yang berisi 10 spesimen kedua diperlakukan
sama seperti yang pertama kecuali untuk persyaratan
.
dan untuk seluruh
monografi indikator biologi dijelaskan dalam masing-
masing monografi.
UJI STERILITAS <71>
Prosedur farmakope ini didesain bukan untuk menjamin
bahwa satu bets produk adalah steril atau telah
disterilkan. Hal ini terutama harus disertai dengan
validasi proses sterilisasi atau prosedur proses aseptik.
Pengujian digunakan untuk bahan, sediaan, alat sesuai
dengan farmakope yang dipersyaratkan harus steril.
Hasil yang diterima menunjukkan bahwa tidak ada
kontaminasi mikroba ditemukan dalam sampel di bawah
kondisi pengujian.
TINDAKAN PENCEGAHAN TERHADAP
KONTAMINASI MIKROBA
Pengujian sterilitas dilaksanakan pada kondisi
aseptik. Untuk mencapai kondisi tersebut, lingkungan
pengujian harus dibuat sama seperti ketika uji sterilitas
dilakukan. Tindakan pencegahan untuk mencegah
kontaminasi tidak boleh mempengaruhi mikroba yang
ada dalam pengujian. Kondisi pengerjaan, ketika uji
dilakukan dimonitor secara berkala dengan melakukan
sampling yang sesuai pada area kerja dan kontrol yang
sesuai.
MEDIA DAN SUHU INKUBASI
Media untuk pengujian dapat dibuat seperti tertera di
bawah ini atau setara dengan media komersil yang
memenuhi syarat Uji Fertilitas Aerob, Anaerob dan
Kapang.
Media berikut adalah media yang sesuai untuk uji
sterilitas. Media Cair Tioglikolat terutama digunakan
untuk pertumbuhan bakteri anaerob, termasuk juga
Soybean-Casein Digest
sesuai untuk pertumbuhan kapang dan bakteri
aerob.
 - 1342 -
Media Cair Tioglikolat Soybean-Casein Digest Medium

L-Sistin P 0,5 g Pancreatic digest of casein 17,0 g

Natrium klorida P 2,5 g Papaic digest of soybean meal 3,0 g
Dekstrosa monohidrat/anhidrat P 5,5/5,0g Natrium klorida P 5,0 g
Agar P 0,75 g Kalium fosfat dibasa P 2,5 g
Yeast extract (larut dalam air) 5,0 g Dekstrosa monohidrat/anhidrat P 2,5/2,3 g
Pancreatic digest of casein 15,0 g Air murni 1000 ml
Natrium tioglikolat P atau 0,5 g
Asam tioglikolat P 0,3 ml
Larutan natrium resazurin P (1 dalam 1,0 ml Larutkan semua bahan padat dalam air murni, hangatkan
1000) dibuat segar hingga larut. Dinginkan larutan hingga suhu ruang, dan
Air murni 1000 ml
0,2 dengan penambahan natrium hidroksida 1N. Jika
perlu saring hingga jernih, bagikan dalam wadah-wadah
Campur dan panaskan hingga larut L-sistin P, natrium yang sesuai dan sterilisasi menggunakan proses yang
klorida P, dekstrosa, yeast extract dan pancreatic digest
of casein dalam air murni. Larutkan natrium tioglikolat dalam wadah steril dan tertutup baik, kecuali jika segera
P atau asam tioglikolat P ke dalam larutan dan atur pH digunakan. Media tidak boleh digunakan lebih lama dari
waktu penyimpanan yang telah tervalidasi.
natrium hidroksida 1 N. Jika diperlukan penyaringan, Soybean Casein Digest Medium
panaskan kembali larutan tanpa mendidih, dan saring
selagi panas melalui kertas saring yang telah dibasahkan. Media untuk Golongan Penisilin dan Sefalosporin
Tambahkan larutan natrium resazurin P, campur dan
tempatkan media dalam tabung yang sesuai, yang Jika media uji sterilitas akan digunakan pada metode
memberikan perbandingan permukaan dengan Inokulasi langsung ke dalam Media Uji seperti tertera
kedalaman media sedemikian rupa sehingga tidak lebih pada Uji Sterilitas Sediaan, modifikasi pembuatan
dari setengah bagian atas media yang mengalami Soybean
perubahan warna sebagai indikasi masuknya oksigen Casein Digest Medium
pada akhir masa inkubasi. Sterilisasi menggunakan
proses yang telah divalidasi. Jika media disimpan, maka laktamase untuk menginaktifkan sejumlah antibiotik

tertutup rapat. Jika lebih dari sepertiga bagian atas media diperlukan untuk menginaktifkan antibiotik
terjadi warna merah muda, media dapat diperbaiki
kembali dengan pemanasan diatas tangas air atau dalam diuji inaktivasi daya hambat dari penisilin atau
uap air yang mengalir bebas hingga warna merah muda sefalosporin.
hilang, dan dinginkan secepatnya, cegah masuknya laktamase dapat juga digunakan untuk pengujian
udara tidak steril ke dalam wadah. Media tidak boleh dengan metode penyaringan membran].
digunakan lebih lama dari waktu penyimpanan yang Sebagai alternatif (Lakukan uji di daerah yang benar-
telah tervalidasi. benar terpisah dari tempat uji sterilitas), tetapkan jumlah

Untuk sediaan yang mengandung pengawet raksa yang tertera pada Uji kesesuaian metode menggunakan
tidak dapat diuji menggunakan metode Penyaringan Staphylococcus aureus kurang dari 100 koloni (lihat
membran, Media Cair Tioglikolat diinkubasi pada suhu Tabel 1) sebagai bakteri tantang. Amati pertumbuhan
Soybean Casein Digest
yang telah tervalidasi yang tertera pada uji laktamase sudah tepat.
Fertilitas Anaerob, Aerob dan Kapang. Media
Tioglikolat Alternatif dapat digunakan jika sudah Tabel 1 Galur Mikroba Uji yang sesuai untuk
disetujui. Buat campuran menggunakan komposisi sama penggunaan Uji Fertilitas dan Uji kesesuaian metode
seperti Media Cair Tioglikolat tetapi tidak menggunakan
agar P dan larutan natrium resazurin P. Sterilkan sama Bakteri Aerob
Staphylococcus aureus ATCC 6538; CIP 4.83;
dalam tangas air sebelum digunakan dan inkubasi pada NCTC 10788; NCIMB 9518;
NBRC 13276
Bacillus subtilis ATCC 6633; CIP 52.62;
NCIMB 8054; NBRC 3134
Pseudomonas ATCC 9027; NCIMB 8626;
aeruginosa1 IP 82.118; NBRC 13275
 - 1343 -
Bakteri Anaerob
Clostridium sporogenes2 ATCC 19404; CIP 79.3;
NCTC 532 atau ATCC
11437; NBRC 14293
Kapang
Aspergillusbrasiliensis ATCC 16404; IP 1431.83
(Aspergillus niger) MI 149007; NBRC 9455
1. Alternatif untuk Pseudomonas aeruginosa adalah Kocuria
rhizophila (Micrococcus luteus) ATCC 9341
2. Alternatif untuk Clostridium sporogenes, jika diinginkan
mikroba yang bukan pembentuk spora adalah Bacteroides
vulgatus ATCC 8482.
Media yang digunakan sesuai dengan uji di bawah ini.
Pengujian dilakukan sebelum atau bersamaan dengan
pengujian sediaan.
Sterilitas
Inkubasi sebagian dari media pada suhu yang sesuai
selama 14 hari. Tidak boleh ada pertumbuhan mikroba.
Uji Fertilitas untuk Aerob, Anaerob dan Kapang
Lakukan uji fertilitas terhadap tiap lot media siap
pakai dan tiap bets dari media yang dibuat menggunakan
media kering atau dari bahannya. Galur mikroba yang
sesuai dapat dilihat pada Tabel 1.
Inokulasikan sejumlah Media Cair Tioglikolat dengan
sejumlah mikroba berikut (tidak lebih dari 100 koloni),
menggunakan sejumlah media terpisah untuk setiap
spesies mikroba: Clostridium sporogenes, Pseudomonas
aeruginosa, dan Staphylococcus aureus. Inokulasikan
sejumlah Media Tioglikolat Alternatif dengan sejumlah
Clostridium sporogenes (tidak lebih dari 100 koloni).
Soybean Casein Digest
Medium
dari 100 koloni) menggunakan sejumlah media terpisah
untuk setiap spesies mikroba: Aspergillus brasiliensis,
Bacillus subtilis dan Candida albicans. Inkubasi tidak
lebih dari 3 hari untuk bakteri dan tidak lebih dari 5 hari
untuk kapang. Teknik pemeliharaan lot benih kultur
(sistem lot benih) untuk mikroba viabel yang
diinokulasikan tidak lebih dari 5 pasase yang diturunkan
dari lot benih master asli.
Media dapat digunakan jika terlihat pertumbuhan
mikroba dengan jelas.
CAIRAN PENGENCER DAN PEMBILAS
UNTUK PENYARINGAN MEMBRAN
Cairan A
Cara pembuatan Larutkan 1 g peptic digest of animal
tissue dalam air hingga 1 liter, jika perlu saring atau
Bagikan ke dalam wadah-wadah, dan sterilisasi
menggunakan proses yang telah divalidasi.
Cara Pembuatan untuk Penisilin atau Sefalosporin
Jika perlu tambahkan secara aseptik pada larutan diatas,
sejumlah -laktamase steril yang cukup untuk
menginaktifkan aktifitas residu antibiotik pada membran
setelah larutan uji disaring (lihat Media untuk Golongan
Penisilin dan Sefalosporin.).
Cairan D
Untuk setiap liter Cairan A tambahkan 1 ml polisorbat
80 P
wadah-wadah, dan sterilisasi menggunakan proses yang
telah divalidasi. Gunakan cairan ini untuk bahan uji yang
mengandung lesitin atau minyak, atau untuk alat
kesehatan yang beretiket lumen steril.
Cairan K
Larutkan 5,0 g peptic digest of animal tissue; 3,0 g beef
extract dan 10,0 g polisorbat 80 P, dalam air hingga 1
Bagikan ke dalam wadah-wadah, dan sterilisasi
menggunakan proses yang telah divalidasi.
UJI KESESUAIAN METODE
Lakukan uji seperti tertera pada Uji Sterilitas Produk
menggunakan metode yang sama, kecuali untuk
modifikasi berikut ini:
Penyaringan Membran
Setelah isi wadah atau isi beberapa wadah yang diuji
disaring melalui membran, tambahkan inokulum dari
sejumlah kecil mikroba (tidak lebih dari 100
koloni) ke dalam pembilas steril terakhir yang digunakan
untuk membilas penyaring.
Inokulasi langsung
Setelah isi wadah atau isi beberapa wadah yang diuji
(gunakan helaian untuk benang bedah dan alat-alat
bedah yang digunakan dokter hewan) dimasukkan ke
dalam media, tambahkan sejumlah kecil inokulum
mikroba (tidak lebih dari 100 koloni) ke dalam media.
Pada kedua cara diatas, gunakan mikroba yang sama
seperti tertera pada Uji Fertilitas untuk Aerob, Anaerob
dan Kapang. Lakukan uji fertilitas sebagai kontrol
positif. Inkubasi semua wadah yang berisi media selama
tidak lebih dari 5 hari.
Jika setelah masa inkubasi terlihat pertumbuhan mikroba
dengan jelas secara visual dibandingkan dengan tabung
yang tidak berisi sampel, maka sampel tidak mempunyai
sifat antimikroba pada kondisi uji atau aktifitasnya telah
dihilangkan dengan sempurna. Uji sterilitas kemudian
dapat dilakukan tanpa modifikasi lebih lanjut.
Jika tidak terlihat pertumbuhan mikroba dengan jelas
pada tabung yang berisi sampel secara visual,
dibandingkan dengan tabung yang tidak berisi sampel,
maka sampel mempunyai aktifitas antimikroba yang
tidak dapat dihilangkan pada kondisi pengujian.
Modifikasi kondisi ini untuk menghilangkan daya
aktifitas antimikroba dan ulangi Uji Kesesuaian Metode.
 - 1344 -
Uji Kesesuaian Metode dilakukan untuk a) uji sterilitas
pada sediaan baru; b) ada perubahan yang dilakukan pada
kondisi pengujian. Uji Kesesuaian Metode dapat
dilakukan secara simultan dengan Uji Sterilitas Sediaan.
UJI STERILITAS SEDIAAN
Jumlah Bahan yang Diuji
Kecuali dinyatakan lain pada bab ini atau masing-masing
monografi, gunakan jumlah wadah seperti tertera pada
Tabel 3. Jika isi tiap wadah mencukupi (lihat Tabel 2) isi
wadah dapat dibagi sama banyak
dan ditambahkan pada media yang sesuai. [Catatan
Lakukan uji sterilitas menggunakan dua atau lebih media
yang sesuai]. Jika isi wadah tidak cukup untuk masing-
masing media, gunakan jumlah dua kali dari yang tertera
pada Tabel 3.
Pengujian terhadap contoh uji dapat dilakukan
menggunakan teknik Penyaringan Membran atau
Inokulasi Langsung ke dalam Media Uji. Gunakan juga
kontrol negatif yang sesuai. Teknik Penyaringan
Membran digunakan apabila sifat contoh sesuai, yaitu
untuk sediaan yang mengandung air dan dapat disaring,
sediaan yang mengandung alkohol atau minyak, dan
sediaan yang dapat dicampur dengan atau yang larut
dalam pelarut air atau minyak, dengan ketentuan bahwa
pelarut tidak mempunyai efek antimikroba pada kondisi
pengujian.

Tabel 2 Jumlah Minimum yang Digunakan untuk Tiap Media

Isi per wadah Jumlah minimum yang digunakan

(Kecuali dinyatakan lain)
Larutan
Kurang dari 1ml Seluruh isi tiap wadah

Lebih dari 40 ml, tidak lebih dari 100 ml 20 ml

Lebih dari 100 ml 10% isi wadah, tetapi tidak kurang dari 20 ml
Larutan antibiotik 1 ml
Sediaan larut dalam air lainnya atau dalam isopropil Seluruh isi tiap wadah, sebanding dengan tidak kurang dari
miristat 200 mg
Sediaan yang tidak larut, krim,dan salep, yang tersuspensi Gunakan isi tiap wadah yang sebanding dengan tidak
atau teremulsi kurang dari 200 mg

Zat Padat
Kurang dari 50 mg Seluruh isi tiap wadah
50 mg atau lebih, tetapi kurang dari 300mg Setengah isi tiap wadah, tetapi tidak kurang dari 50 mg

Lebih besar dari 5 g 500 mg

Benang bedah dan peralatan bedahlainnya untuk 3 potongan untuk helai (panjang tiap potong 30 cm)
penggunaan dokter hewan
Pembalut/ kapas/perban (dalam kemasan) 100 mg per kemasan
Benang bedah dan bahan sejenis yang dikemas untuk Seluruh alat
penggunaan sekali pakai
Alat Kesehatan lainnya Seluruh alat, potong kecil kecil atau diuraikan

Tabel 3 Jumlah Minimum Bahan yang diuji sesuai dengan Jumlah Bahan dalam Bets

Jumlah wadah dalam Bets* Jumlah Minimum wadah yang diuji tiap media (Kecuali
dinyatakan lain**)
Sediaan parenteral
Tidak lebih dari 100 wadah 10% atau 4 wadah, diambil yang lebih besar
Lebih dari 100, tetapi tidak lebih dari 500 wadah 10 wadah
Lebih dari 500 wadah 2% atau 20 wadah, diambil yang lebih kecil
Untuk sediaan volume besar 2% atau 10 wadah, diambil yang lebih kecil

Zat Padat antibiotik

Produk ruahan dalam kemasan <5g 20 wadah
Produk ruahan dalam kemasan >5g 6 wadah
Produk ruahan dan campuran lihat Produk ruahan padat
 - 1345 -
Sediaan mata dan sediaan lain yang tidak disuntikkan
Tidak lebih dari 200 wadah
Lebih dari 200 wadah
Jika sediaan dalam bentuk wadah dosis tunggal,gunakan
skema diatas untuk sediaan parenteral
Benang bedah dan peralatan bedah lainnya untuk
penggunaan dokter hewan
Tidak lebih dari 100 bahan
Lebih dari 100, tetapi tidak lebih dari 500 bahan
Lebih dari 500 bahan
Produk ruahan padat
Sampai 4 wadah
Lebih dari 4 wadah, tetapi tidak lebih dari 50 wadah
Lebih dari 50 wadah
*Jika besarnya bets tidak diketahui, gunakan jumlah maksimum
**Jika isi satu wadah cukup untuk diinokulasikan ke dalam dua media, kolom ini menyatakan jumlah wadah yang diperlukan untuk
kedua media.
Penyaringan Membran
Gunakan penyaring membran dengan porositas tidak
mikroba. Sebagai contoh, penyaring selulosa nitrat
digunakan untuk larutan yang mengandung air, minyak
dan larutan mengandung alkohol berkadar rendah; dan
penyaring selulosa asetat digunakan untuk larutan
mengandung alkohol berkadar tinggi. Penyaring khusus
yang sesuai mungkin diperlukan untuk sediaan tertentu
(misal: untuk antibiotik).
Teknik pengujian di bawah ini menggunakan membran
berdiameter lebih kurang 50 mm. Jika digunakan
penyaring dengan diameter yang berbeda, volume larutan
pengencer dan pembilas harus disesuaikan. Peralatan
penyaring dan membran disterilisasi dengan cara yang
sesuai. Peralatan dirancang hingga larutan uji dapat
dimasukkan dan disaring pada kondisi aseptik, membran
dapat dipindahkan secara aseptik ke dalam media, atau
dapat dilakukan inkubasi setelah media dimasukkan ke
dalam alat penyaring itu sendiri.
LARUTAN DALAM AIR
Jika perlu pindahkan sejumlah kecil pengencer steril yang
sesuai seperti Cairan A ke dalam membran dan saring.
Pengencer dapat mengandung bahan penetral dan/atau
bahan inaktifator yang sesuai, misalnya pada kasus
antibiotik.
Pindahkan isi wadah atau beberapa wadah yang akan
diuji ke dalam satu membran atau beberapa membran,
jika perlu diencerkan dengan pengencer steril yang dipilih
sesuai volume yang digunakan pada Uji Kesesuaian
Metode, tetapi jumlah yang digunakan tidak kurang dari
yang tertera pada Tabel 2 dan Tabel 3. Saring segera. Jika
sediaan mempunyai daya antimikroba, cuci membran
tidak kurang dari tiga kali dengan cara menyaring tiap
kali dengan sejumlah volume pengencer yang digunakan
pada Uji Kesesuaian Metode. Setiap pencucian tidak
lebih dari 5 kali 100 ml per membran, meskipun jika
selama uji kesesuaian metode ditemukan pencucian
5% atau 2 wadah, diambil yang lebih besar
10 wadah
2% atau 5 kemasan, diambil yang lebih besar, sampai total
maksimum 20 kemasan
10% atau 4 bahan,diambil yang lebih besar
10 bahan
2% atau 20 bahan, diambil yang lebih kecil
Tiap wadah
20% atau 4 wadah, diambil yang lebih besar
2% atau 10 wadah, diambil yang lebih besar
tersebut tidak dapat menghilangkan daya antimikroba
secara sempurna.
Pindahkan seluruh membran utuh ke dalam media atau
potong menjadi dua bagian yang sama secara aseptik dan
pindahkan masing-masing bagian ke dalam dua media
yang sesuai. Gunakan volume yang sama pada tiap media
seperti pada Uji Kesesuaian Metode. Sebagai pilihan lain,
pindahkan media ke dalam membran pada alat penyaring.
Inkubasi media selama tidak kurang dari 14 hari.
ZAT PADAT YANG DAPAT LARUT
Gunakan untuk tiap media tidak kurang dari sejumlah
sediaan seperti tertera pada Tabel 2 dan Tabel 3, larutkan
dalam pelarut yang sesuai, air steril untuk injeksi, natrium
klorida steril, atau larutan steril yang sesuai seperti
Cairan A dan lakukan uji seperti tertera pada Larutan
dalam Air menggunakan penyaring membran yang sesuai
untuk pelarut yang telah dipilih.
MINYAK DAN LARUTAN MINYAK
Gunakan untuk tiap media tidak kurang dari sejumlah
sediaan seperti tertera pada Tabel 2 dan Tabel 3. Minyak
dan larutan minyak viskositas rendah dapat disaring
melalui membran kering tanpa pengenceran. Minyak
kental dapat diencerkan dengan pengencer steril seperti
isopropil miristat P yang tidak mempunyai daya
antimikroba pada kondisi pengujian. Biarkan minyak
menembus membran dengan gaya beratnya sendiri,
kemudian saring dengan menggunakan tekanan atau
penghisapan secara bertahap.
Cuci membran tidak kurang dari tiga kali dengan cara
menyaring, tiap kali dengan 100 ml larutan steril yang
sesuai, seperti Cairan A yang mengandung bahan
pengemulsi yang sesuai dengan kadar yang sesuai seperti
pada Uji Kesesuaian Metode, misalnya polisorbat 80 P
dengan kadar 10 g per liter (Cairan K ).
Pindahkan membran atau beberapa membran ke dalam
media seperti tertera pada Larutan dalam Air, dan
inkubasi pada suhu dan waktu yang sama.
 - 1346 -
SALEP DAN KRIM
Gunakan untuk tiap media tidak kurang dari sejumlah
sediaan seperti tertera pada Tabel 2 dan Tabel 3. Salep
dengan basis lemak dan emulsi air dalam minyak dapat
diencerkan sampai 1% dalam isopropil miristat P seperti
metode diatas, jika perlu dengan pemanasan tidak lebih
dan lakukan seperti pada Minyak dan Larutan minyak.
ALAT SUNTIK TERISI
Untuk alat suntik terisi tanpa jarum steril, keluarkan isi
dari tiap alat suntik ke dalam satu atau dua tabung
penyaring membran yang terpisah atau ke dalam tabung
pengumpul yang terpisah untuk dipindahkan lagi.
Jika jarum steril menyatu dengan alat suntik, keluarkan
langsung isi tiap alat suntik seperti diatas dan lakukan uji
seperti tertera pada Larutan dalam Air. Uji sterilitas
jarum menggunakan prosedur Inokulasi Langsung seperti
tertera pada Uji Kesesuaian Metode.
ZAT PADAT UNTUK INJEKSI
SELAIN ANTIBIOTIK
Konstitusi bahan uji seperti tertera pada etiket dan
lakukan pengujian seperti tertera pada Larutan dalam Air
atau Larutan Minyak. [Catatan Jika perlu, dapat
ditambahkan pengencer berlebih untuk membantu
konstitusi dan penyaringan].
ZAT PADAT ANTIBIOTIK UNTUK INJEKSI
Produk ruahan yang dikemas <5 g Dari 20 wadah,
pindahkan secara aseptik masing-masing lebih kurang
300 mg zat padat ke dalam labu Erlenmeyer steril 500 ml,
larutkan dalam lebih kurang 200 ml Cairan A; atau
konstitusi masing-masing dari 20 wadah, seperti tertera
pada etiket dan pindahkan sejumlah larutan atau suspensi
setara dengan 300 mg zat padat ke dalam labu
Erlenmeyer steril 500 ml, larutkan dalam lebih kurang
200 ml Cairan A. Lakukan uji seperti tertera pada
Larutan dalam Air atau Minyak dan Larutan Minyak.
Produk ruahan yang dikemas 5 g Dari 6 wadah
pindahkan secara aseptik masing-masing lebih kurang 1 g
zat padat ke dalam labu Erlenmeyer steril 500 ml,
larutkan dalam lebih kurang 200 ml Cairan A dan
campur; atau konstitusi masing-masing dari 6 wadah
seperti tertera pada etiket, pindahkan sejumlah larutan
yang setara dengan lebih kurang 1 g zat padat ke dalam
labu Erlenmeyer steril 500 ml, larutkan dalam lebih
kurang 200 ml Cairan A. Lakukan uji seperti tertera pada
Larutan dalam Air.
ZAT PADAT ANTIBIOTIK, RUAHAN
DAN CAMPURAN
Secara aseptik ambil secukupnya zat padat dari sejumlah
wadah yang sesuai (lihat Tabel 2), campur hingga
diperoleh komposit yang setara dengan lebih kurang 6 g
zat padat, dan pindahkan ke dalam labu Erlenmeyer steril
500 ml, larutkan dalam lebih kurang 200 ml Cairan A.
Lakukan uji seperti tertera pada Larutan Air.
SEDIAAN AEROSOL STERIL
Untuk sediaan cair dalam bentuk aerosol bertekanan,
bekukan wadah dalam campuran etanol P-es kering pada
memungkinkan, biarkan propelan menguap sebelum
wadah dibuka secara aseptik, dan pindahkan isinya ke dalam
labu pengumpul steril, tambahkan 100 ml Cairan D ke
dalam labu pengumpul, dan campur perlahan-lahan.
Lakukan uji seperti tertera pada Larutan dalam Air atau
Minyak dan Larutan Minyak.
ALAT KESEHATAN DENGAN LUMEN
BERETIKET STERIL
Secara aseptik alirkan Cairan D sejumlah tidak kurang
dari 10 kali volume lumen alat yang akan diuji.
Kumpulkan cairan ke dalam labu steril yang sesuai, dan
lakukan uji seperti tertera pada Larutan dalam Air atau
Minyak dan Larutan Minyak.
Pada kasus alat suntik steril kosong, ambil pengencer
steril melalui jarum, jika jarum terpasang pada alat, atau
melalui jarum steril yang khusus dipasangkan untuk
pengujian ini, dan tekan isi ke dalam labu pengumpul
steril. Lakukan uji seperti diatas.
Inokulasi Langsung ke dalam Media
Pindahkan sejumlah sediaan uji seperti tertera pada Tabel
2 dan Tabel 3 langsung ke dalam media hingga volume
sediaan tidak lebih dari 10% volume media, kecuali
dinyatakan lain.
Jika sediaan uji mempunyai aktifitas antimikroba,
lakukan uji setelah dinetralisasi dengan bahan penetral
yang sesuai atau dengan cara mengencerkan dalam
sejumlah media yang cukup. Jika diperlukan penggunaan
volume besar dari sediaan, maka lebih baik digunakan
media yang lebih pekat dan dilakukan pengenceran
bertahap. Jika sesuai, media pekat dapat ditambahkan
langsung ke dalam sediaan dalam wadah.
LARUTAN MINYAK
Gunakan media yang telah ditambahkan bahan
pengemulsi yang sesuai dengan kadar seperti tertera pada
Uji Kesesuaian Metode, misalnya polisorbat 80 P
dengan kadar 10 g per liter.
 - 1347 -
SALEP DAN KRIM
Siapkan dengan mengencerkan lebih kurang 1 dalam 10
dengan bahan pengemulsi yang sudah dipilih ke dalam
pengencer steril yang sesuai, seperti Cairan A. Pindahkan
sediaan yang telah diencerkan ke dalam media yang tidak
mengandung bahan pengemulsi.
Inkubasi media yang telah diinokulasi selama tidak
kurang dari 14 hari. Amati biakan beberapa kali, selama
masa inkubasi. Pada saat pengamatan, kocok secara
perlahan biakan pada sediaan yang mengandung minyak
setiap hari. Jika digunakan Media Cair Tioglikolat untuk
mendeteksi mikroba anaerob, tidak boleh dikocok atau
campur perlahan dengan maksud untuk mempertahankan
kondisi anaerob.
BENANG BEDAH DAN ALAT BEDAH LAIN
UNTUK PENGGUNAAN DOKTER HEWAN
Gunakan untuk tiap media tidak kurang dari sejumlah
sediaan seperti tertera pada Tabel 2 dan Tabel 3. Buka
kemasan tersegel secara aseptik, dan masukkan tiga
bagian helaian pada tiap media, lakukan seperti tertera
pada Larutan dalam Air. Lakukan uji terhadap tiga
bagian, panjang masing-masing 30 cm, yang dipotong
dari awal, tengah dan ujung helaian. Gunakan seluruh
helaian dari kemasan yang baru dibuka.
Pindahkan tiap bagian helaian ke dalam media yang
sesuai. Gunakan media yang cukup untuk bahan yang
diuji (20 - 150 ml).
ZAT PADAT
Ambil sejumlah sediaan dalam bentuk kering padat (atau
yang terlebih dahulu dibuat suspensi dalam pengencer
steril dalam kemasan langsung), sesuai dengan jumlah
yang tertera pada Tabel 2 dan Tabel 3. Pindahkan bahan
yang diperoleh ke dalam 200 ml Media Cair Tioglikolat,
dan campur. Dengan cara sama, pindahkan sejumlah
sama ke dalam 200 ml Soybean Casein Digest Medium,
dan campur. Lakukan uji seperti diatas.
KAPAS MURNI, PERBAN, PEMBALUT BEDAH
DAN BAHAN SEJENISNYA
Dari setiap kemasan kapas, perban gulung, atau pembalut
bedah yang besar, ambil secara aseptik dua bagian atau
lebih masing-masing 100 - 500 mg dari bagian paling
dalam. Untuk bahan dengan kemasan tunggal, ambil
secara aseptik seluruh bahan. Rendam bagian dari bahan
ke dalam tiap media, dan lakukan uji seperti diatas.
ALAT KESEHATAN STERIL
Bahan dapat direndam langsung atau diuraikan. Untuk
menjamin bahwa lumen juga kontak dengan media,
rendam sejumlah unit yang sesuai ke dalam sejumlah
volume media yang cukup untuk merendam alat dengan
sempurna, dan lakukan uji seperti diatas.
Untuk alat kesehatan yang sangat besar, rendam bagian
alat yang kontak langsung dengan pasien ke dalam
sejumlah volume media secukupnya yang dapat
membasahi seluruh bagian tersebut.
Untuk kateter yang mempunyai lumen dan bagian luarnya
harus steril, potong menjadi bagian-bagian sehingga
media dapat kontak dengan keseluruhan lumen atau isi
lumen dengan media, dan kemudian rendam unit yang
utuh.
Pengamatan dan Penafsiran Hasil Uji
Pada interval waktu tertentu dan akhir periode inkubasi,
amati secara visual adanya pertumbuhan mikroba dalam
media. Jika bahan uji menimbulkan kekeruhan pada
media sehingga tidak dapat ditetapkan secara visual ada
atau tidaknya pertumbuhan mikroba, 14 hari sejak mulai
inkubasi, pindahkan sejumlah media (tiap tabung tidak
kurang dari 1 ml) ke dalam media segar yang sama,
kemudian inkubasi bersama-sama tabung awal selama
tidak kurang dari 4 hari.
Jika tidak terjadi pertumbuhan mikroba, maka bahan uji
memenuhi syarat sterilitas. Jika terbukti terjadi
pertumbuhan mikroba, maka bahan uji tidak memenuhi
syarat sterilitas, kecuali dapat ditunjukkan bahwa uji tidak
absah disebabkan oleh hal yang tidak berhubungan
dengan bahan uji. Uji dikatakan tidak absah jika satu atau
lebih kondisi dibawah ini dipenuhi:
a. Data pemantauan mikrobiologi terhadap fasilitas uji
sterilitas menunjukkan ketidaksesuaian
b. Pengkajian prosedur uji yang digunakan selama
pengujian menunjukkan ketidaksesuaian
c. Pertumbuhan mikroba ditemukan pada kontrol negatif
d. Setelah dilakukan identifikasi mikroba yang diisolasi
dari hasil uji, pertumbuhan mikroba (beberapa
mikroba) dapat dianggap berasal dari kesalahan pada
bahan uji, atau teknik pengujian yang digunakan pada
prosedur uji sterilitas.
Jika pengujian dinyatakan tidak absah, lakukan uji ulang
dengan jumlah bahan yang sama dengan uji awal. Jika
tidak terbukti terjadi pertumbuhan mikroba pada uji
ulang, maka contoh memenuhi syarat uji sterilitas. Jika
ditemukan pertumbuhan mikroba pada uji ulang, maka
contoh tidak memenuhi syarat uji sterilitas.
Aplikasi Uji untuk Sediaan Injeksi, Sediaan Obat
Mata, dan Sediaan bukan Injeksi yang Harus
Memenuhi Syarat Uji Sterilitas
Jika menggunakan teknik penyaringan membran, bila
memungkinan gunakan seluruh isi wadah, tetapi tidak
kurang dari sejumlah yang tertera pada Tabel 2, encerkan
jika perlu dengan larutan steril yang sesuai, seperti
Cairan A, hingga lebih kurang 100 ml.
Jika menggunakan teknik Inokulasi Langsung ke dalam
media, gunakan sejumlah seperti tertera pada Tabel 2,
kecuali dinyatakan lain. Uji untuk bakteri dan kapang
pada uji sterilitas dilakukan terhadap sediaan uji yang
sama. Jika volume atau jumlah isi dalam satu wadah tidak
 - 1348 -
cukup untuk pengujian, gunakan isi dari dua atau lebih
wadah untuk diinokulasikan ke dalam media berbeda.
Jumlah Minimum Sediaan Uji
Jumlah minimum sediaan yang diuji yang berhubungan
dengan ukuran satu bets, tertera pada Tabel 3.
DESAIN DAN ANALISIS PENETAPAN
HAYATI <81>
Umum
Potensi beberapa obat farmakope harus ditetapkan
dengan uji hayati. Faktor kendali dalam desain pengujian
dan analisis adalah variabilitas sistem uji hayati, yang
respons rata-ratanya dapat bervariasi antar laboratorium
dan dari waktu ke waktu dalam laboratorium yang sama.
Untuk mengendalikan jenis variasi ini, respons obat
farmakope dibandingkan terhadap Baku Pembanding
Farmakope Indonesia atau baku pembanding lain yang
sesuai. Untuk mudahnya, setiap baku pembanding
dengan simbol S dan U.
Setelah variabel terusut dari pembandingan Baku dan
Uji ditiadakan, variansi kesalahan dihitung dari variasi
yang masih ada, yang meskipun tidak terkendali namun
dapat diukur. Variansi kesalahan diperlukan dalam
menghitung interval keyakinan dari potensi yang diuji.
interval keyakinan juga disebut interval fidusial, dihitung
sedemikian sehingga batas tertinggi dan batas terendah
dari 20 pengujian, diharapkan 19 mendekati potensi
sebenarnya sediaan uji. Banyak prosedur pengujian
menetapkan rentang interval keyakinan yang dapat
diterima, dan mungkin diperlukan dua atau lebih
pengujian independen untuk memenuhi batas yang
disyaratkan. Batas keyakinan dari masing-masing
pengujian komponen umumnya tumpang tindih.
Tujuan dari bab ini ialah menyajikan perhitungan yang
ringkas dari prosedur biometri untuk uji hayati
Farmakope Indonesia, dengan berbagai bagiannya saling
berhubungan. Meskipun prosedur dirancang terutama
untuk pengujian sediaan tunggal, persamaan untuk
pengujian gabungan dari beberapa sampel diberikan
dalam bab ini dan disimpulkan dalam bagian akhir. Bukti
bahwa pengujian potensi memenuhi syarat batas
keyakinan, juga dapat didasarkan pada metode biometri
lain yang mempunyai presisi sama dengan metode yang
tertera disini.
Tabel istilah dalam persamaan yang digunakan
diberikan pada akhir bab ini.
Langkah-langkah yang diperlukan
untuk Perhitungan Potensi
Desain untuk memperkecil variansi kesalahan
Variasi respons sedapat mungkin dikurangi dengan
pembatasan bobot badan, umur, penanganan awal,
lingkungan dan faktor-faktor sejenis. Pada sejumlah
pengujian, hewan percobaan atau yang setara
ditempatkan secara acak tetapi dalam jumlah sama untuk
dosis-dosis berbeda dari Baku dan Uji. Hal ini dilakukan
melalui proses acak yang objektif. Penyusunan jumlah
individu yang sama pada tiap perlakuan
menyederhanakan perhitungan-perhitungan berikutnya, dan
umumnya mengarahkan ke interval keyakinan yang
terpendek untuk sejumlah pengamatan yang telah
ditentukan.
Pada beberapa pengujian, respons potensial dapat
dihimpun dalam kelompok homogen di awal perlakuan.
Perbedaan diantara kelompok, kemudian dipisah sehingga
tidak berpengaruh buruk terhadap potensi maupun
interval keyakinan. Satu unit dalam setiap kelompok yang
diambil secara acak mengalami tiap perlakuan. Contoh
kumpulan acak adalah daerah-daerah bening di dalam
satu lempeng pada pengujian antibiotik, dan 4 pembacaan
berpasangan berurutan pada tikus yang sama dalam
pengujian injeksi vasopresin. Dua kelompok diperoleh
jika setiap hewan percobaan digunakan dua kali, seperti
pada penetapan potensi injeksi tubokurarin klorida dan
injeksi insulin. Dalam hal ini baik perbedaan rata-rata di
antara individu maupun urutan perlakuan tidak dapat
menyebabkan penyimpangan potensi atau presisi. Pada
penetapan aktivitas vitamin B12 dan kalsium pantotenat
secara mikrobiologi, tabung replikasi ditempatkan pada
dua atau lebih kelompok lengkap yang terpisah, disusun
secara acak dalam tiap kelompok. Hal ini membatasi
variasi yang disebabkan posisi atau urutan dalam satu
kelompok menjadi perbedaan dalam setiap replikat
lengkap.
Peniadaan data pengamatan yang menyimpang
Respons yang menyimpang karena tidak memenuhi
prosedur selama penetapan, dikeluarkan. Nilai
menyimpang yang lain mungkin ditemukan setelah
respons ditabulasi, tetapi kemudian dapat dihubungkan
dengan ketidakteraturan uji, yang membenarkan
peniadaan nilai tersebut. Peniadaan respons yang tampak
menyimpang dapat menjadi sumber bias. Secara umum,
peniadaan data pengamatan hanya berdasarkan besaran
relatif adalah prosedur yang sebaiknya dihindari. Jika hal
ini tidak dapat dihindarkan, maka tiap respons yang
dicurigai menyimpang dapat diuji dengan salah satu dari
dua kriteria:
1. Kriteria pertama berdasarkan pada variasi di dalam
kelompok tunggal dengan respons yang diduga setara.
Secara umum, satu data pengamatan yang absah dari 25
atau 50 kali percobaan akan ditolak, sepanjang respons
yang identik dalam kelompok relatif sedikit. Mulai
dengan nilai yang diduga menyimpang, susun respons
dalam urutan besaran dari y ke yN, N adalah banyaknya
pengamatan di dalam kelompok. Hitung perbedaan relatif
( y2 y1 )
G1
(yN y1 )
jika N = 3 hingga 7,